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Construção de um diagrama de fases para ocomplexo Sso7dC8 + DNA / Construção de um diagrama de fases para ocomplexo Sso7dC8 + DNANascimento, Viviane Valquíria do 21 July 2016 (has links)
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Previous issue date: 2016-07-21 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Minas Gerais / A proposta de estudar o comportamento de polímeros de origem biológica em soluções
fisiológicas é de grande interesse para a física de polímeros devido à sua importância em
seres vivos. Proteínas, polissacarídeos, o ácido desoxirribonucleico - DNA e ácido ribo-
nucleico - RNA, são exemplos de polímeros biológicos de extrema importância. A partir
da necessidade de compreender e ser capaz de manejar tais polímeros, especialmente para
um possível tratamento de doenças ou manipulação genética, a física de polímeros tem fo-
cado intensamente no estudo do DNA e proteínas celulares. Além de um interesse prático,
existe a possibilidade de usar o DNA, que configura um polieletrólito com elevado peso mo-
lecular de estrutura bem conhecida, para estudar física de polímeros pura e simplesmente.
Polímeros que apresentam cadeias ramificadas, por exemplo, tem propriedades singulares
ainda pouco esclarecidas. Neste trabalho é apresentado um estudo do comportamento de
fases de um polímero ramificado em função da densidade de ramificações e da quantidade
de polímero altamente flexível necessária para condensar o polímero ramificado, ocasio-
nando a separação de fases. O DNA complexado com a proteína modificada Sso7d-C8,
configura o polímero ramificado e o polietilenoglicol o polímero altamente flexível utili-
zado. O diagrama de fase para o complexo Sso7dC8 + DNA foi construído para dois pesos
moleculares de polietilenoglicol. A comparação entre a quantidade de polímero flexível de
diferentes pesos moleculares necessária para observar a separação de fases condiz com as
predições teóricas. O comportamento de polímeros em solução depende principalmente
de interações eletrostáticas, de forças de van der Walls e forças de depleção. Devido prin-
cipalmente à assimetria entre os componentes da solução estudada nesta dissertação, a
separação de fases pode ser entendida em termos da interação de depleção, proposta por
Asakura e Oosawa (1954), como manifestação de um efeito entrópico. / The proposal of studying biological polymers behavior in physiological solutions, has
great interest to polymer physics due to its plentiful presence in living organisms. Pro-
teins, lipids, deoxyribonucleic acid (DNA) and ribonucleic acid (RNA), are examples of
biological polymers, completely essentials to life. The need to understand and be able
to manipulate these polymers, especially for a possible diseases treatment, justify the
intensive study of physical properties of biological polymers, mainly the study of DNA
and cellular proteins. In addition to this practical interest, the study of macromulecu-
les like DNA, a high molecular weight polyelectrolyte with a very well known structure,
provides a broad range of information about the physics of polymers itself. Branched
polymers, known as bottle brush polymers, has interesting and singular properties, and
exemplifies a little studied polymer class. In the present work a study of phase behavior
of a branched polymer, as function of side arms density and the amount of highly flexible
polymer necessary to condense the branched polymers, causing the phase segregation, is
shown. The branched polymer is configured by the DNA complexed with the modified
protein Sso7d-C8, the polyethylene glycol was used as the highly flexible polymer. The
phase diagram for the Sso7dC8 + DNA complex was obteined for two diferent polyethy-
lene glycol molecular weights. Comparing the amount of flexible polymer, of different
molecular weights, required to observe the phase separation is consistent with theoretical
predictions. The behavior of non adsorbing polymers in solution depends on double layer
interactions, van der Waals and depletion forces, mainly. Due to the asymmetry between
solution components studied in this work, the phase behavior can be understood as caused
by depletion interaction, first proposed by Asakura and Oosawa (1954), as expression of
an entropic effect.
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Colloidal stability of native and cross-linked casein micelles and their potential use as nanocarrier for cyanidin-3-O-glucoside / Estabilidade coloidal da micela de caseína nativa e reticulada e seu potencial uso como nanocarreador de cianidina-3-O-glicosídeoCasanova, Federico 14 March 2017 (has links)
Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2017-05-25T15:33:13Z
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Previous issue date: 2017-03-14 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Micelas de caseína (MCs) são estruturas supramoleculares naturais presentes no leite. Seu diâmetro hidrodinâmico médio é de 200 nm e apresenta um núcleo hidrofóbico e uma membrana hidrofílica. MCs podem ser usadas como nanocarreadores naturais para liberar várias moléculas de interesse. Apesar das MCs serem bastante estáveis ao calor, sua estrutura é altamente sensível a mudanças iônicas especialmente em pH ácido. Um interessante método para estabilizar a estrutura da caseína consiste na sua reticulação pela união de moléculas de caseínas por meio de ligações covalentes. Neste contexto, o objetivo desse presente trabalho é investigar a estabilidade de MCs reticuladas sob diferentes pHs, agentes dissociadores, temperatura e condições alcóolicas. Assim, verificar o seu potencial como nanocarreador para aprisionar cianidina-3-O- glicosídeo (C3G), um antocianina presente em várias frutas brasileiras que apresenta diversificada propriedade bioativa em condições ácidas. Dois agentes reticuladores foram avaliados: genipina (GP) e transglutaminase (Tgase). Nós apresentamos um estudo comparativo da estabilidade entre MCs nativas e MCs reticuladas com GP ou Tgase em função do pH. A estabilidade em diferentes temperaturas e concentrações de etanol foram investigadas em uma faixa de pH entre 2,0 - 7,0 e os resultados apresentaram que a reação de reticulação estabilizou as MCs sob as condições testadas. No entanto, GP não é reconhecida como GRAS (segura para aplicação em alimentos) a pesquisas adicionais sobre sua toxicidade devem ser requeridas para implementar o seu uso como reticulador em alimentos. Por essa razão, na segunda parte do nosso trabalho, nós restringimos somente nas MCs reticuladas com Tgase com a perspectiva do seu uso em aplicações alimentícias. Primeiramente nós investigamos sobre a possibilidade de interação entre as moléculas de caseína e C3G em condições ácida (pH 2,0) e neutra (pH 7,0). Desta forma, o uso de MCs reticuladas por Tgase como nanocarreadores de C3Ga pH 2,0 e a pH 7,0 foram exploradas. A constante de ligação tão bem quanto as forças dirigentes a diferentes valores de pH foram determinadas por meio de análises termodinâmicas a diferentes temperaturas. A pH 2,0, a associação hidrofóbica dirigiu as interações entre a caseína e C3G, enquanto a pH 7,0, as interações eletrostáticas são as forças dirigentes dominantes. MCs reticulada com Tgase não afeta as interações entre C3G e as caseínas significando que elas podem ser usadas como eficientes nanocarreadores para antocianinas como a C3G em condições ácidas. / Casein micelles (CMs) are natural supramolecular assemblies present in milk. Their average hydrodynamic diameter is about 200nm and they present a hydrophobic core and a hydrophilic shell. CMscan be used as natural nanocarriers to deliver various moleculesof interest. Although CMs are quite stable against heat, their structure is highly sensitive to ionic changes, especially at acid pH. An interesting method to stabilize casein structure consists on itscross-linking, by joining casein molecules through covalent bonds.In this context, the objective of the present work is first to investigate the stability of cross-linked CMs under different pH, dissociating agents, temperature, and ethanol conditions. Then, verify their potential use as nanocarrier for entrapped cyanidine-3-O-glucoside (C3G), an anthocyanin present in several Brazilian’s fruits, that shows diverse bioactive properties in acid conditions. Two cross-linking agents were evaluated: genipin (GP) and transglutaminase (Tgase). We present a comparative study of the stability between native CMs and CMs cross-linked with GP or Tgase as a function of pH. Stabilities at different temperatures and ethanol concentrations were investigated in a pH range between 7.0 – 2.0 and results showed that the cross-linkingreaction stabilized CMs under the conditions tested.However, GP is not recognized as GRAS (safe for food applications) and further researches on toxicity would be required to implement their use as a food-grade cross-linker. For this reason, in the second part of our work, we focalize only on Tgase cross-linked CMswith perspectives of using it for food applications.Firstly we investigated on the possible interaction between casein molecules and C3G under acidic (pH 2.0) and neutral (pH 7.0) conditions. Then, the use of Tgasecross-linked CMs as nanocarrier for C3G at pH 2.0 and at pH 7.0 was explored. Binding constant as well as driving forces at different pH values were determined by thermodynamic analysis at different temperatures. At pH 2.0, hydrophobic association drive the interactions between caseins and C3G, whereas at pH 7.0, electrostatic interactions are the dominant binding forces. CMs Cross-linking by Tgase don’t affect the interactions between C3G and caseins meaning it can be used as efficient nanocarriers for anthocyanins such as C3G under acid conditions.
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Consumo, digestibilidade, produção e composição do leite, produção de proteína microbiana e estimativas das excreções de derivados de purinas e de uréia em vacas lactantes alimentadas com rações contendo diferentes teores de uréia / Intake, digestibility, milk composition and production, microbial protein production and urea and purine derivatives excretion in lactating dairy cows diets with different urea levelsOliveira, Antonia Santos 07 August 2000 (has links)
Submitted by Nathália Faria da Silva (nathaliafsilva.ufv@gmail.com) on 2017-06-07T14:31:34Z
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Previous issue date: 2000-08-07 / Universidade Estadual do Maranhão / Foram utilizadas 16 vacas holandesas em quatro quadrados latinos balanceados 4 × 4, distribuídas de acordo com o período de lactação. Cada período experimental teve duração de 21 dias, sendo sete dias para adaptação e 14 dias para coletas de amostras. As rações experimentais, isoprotéicas, foram formuladas para conter, na base da matéria seca, 60% de silagem de milho, 40% de concentrado e 0; 0,7; 1,4; e 2,1% de uréia, correspondentes aos teores de proteína bruta na forma de compostos nitrogenados não-protéicos (NNP) de 2,22; 4,18; 5,96; e 8,09%. Foi determinado o tempo necessário para a adaptação e medição do consumo e da produção de leite e avaliados a produção e a composição do leite, os consumos e as digestibilidades aparentes de matéria seca (MS), matéria orgânica (MO), fibra em detergente neuto (FDN), extrato etéreo (EE), carboidratos totais (CHOT) e proteína, o consumo de nutrientes digestíveis totais (NDT) e a produção de proteína microbiana, utilizando-se a excreção total de derivados de purina (DP) e as excreções de DP e de uréia obtidas a partir de coletas de urina de 24 horas e spot. As amostras de silagem de milho, concentrado e sobras foram coletadas diariamente e as de fezes, no 15 o e 20 o dia de cada período experimental. As o amostras spot de urina foram obtidas no 15 dia e as amostras de urina de o 24 horas, no 20 dia de cada período experimental. Amostras de sangue foram coletadas no 15 o dia de cada período experimental para avaliar as o concentrações de creatinina e uréia. As amostras de leite, obtidas no 15 e o 20 dia de cada período experimental, foram analisadas para gordura, proteína, alantoína e uréia. Para todos os tratamentos, sete dias foram suficientes para adaptação. Ao se elevarem os níveis de NNP na ração, os consumos de MS, MO, PB, CHOT e NDT diminuíram. Entretanto, as digestibilidades aparentes totais de MS, MO, FDN, EE, PB e CHOT não foram afetadas. A produção de leite corrigida ou não para 3,5% de gordura, as quantidades de gordura e proteína e os teores de proteína no leite tiveram comportamento linear negativo com o aumento dos teores de NNP nas rações; os teores de gordura e a eficiência alimentar não sofreram alterações. As estimativas do volume urinário e das excreções de uréia, alantoína, ácido úrico, purinas totais, purinas absorvidas e N-microbiano não diferiram daquelas obtidas pela coleta de 24 horas. / The experiment was realized in Cataguases, MG, using 16 Holstein cows allotted to four balanced 4 × 4 Latin square design, in accordance with the milking period. Each experimental period have a duration time of 21 days, with seven days of adaptation and 14 days of collection time. The four isoprotein experimental diet were formulated to contain in the dry matter base 60% of corn silage, 40% of concentrate and 0.0; 0.7; 1.4 and 2.1% of urea, corresponding to 2.22, 4.18, 5.96, and 8.09% of crude protein in the non protein nitrogen (NPN) based compounds. The milk composition and production, intake and apparent digestibilities of dry matter (DM), organic matter (OM), neutral detergent fiber (NDF), ether extract (EE), total carbohydrate (CHOT) and protein. The total digestible nutrient (TDN) intake were evaluated. The microbial protein production estimate using the total purine derivatives excretion (PD) and the comparison between the PD excretion and urea obtained from 24h and spot urine collection were also evaluated. Samples of corn silage concentrate and orts were daily collected and the feces samples collection at 15 th and 20 th day xiof the experimental period. The urine spot samples were obtained at 15 th day and the 24 hours urine samples at 20 th day of the experimental period. The th blood samples were collected at 15 of each experimental period to evaluated th the creatinine and urea concentration. The milk samples obtained at 15 and th 20 day of the experimental period were analyzed for fat, protein, allantoin and urea. Seven days of adaptation were reasonable for all treatments. The intake of DM, OM, CP, CHOT and TDN decreased as the NPN increased in the diets. However, the total apparent digestibilities of DM, OM, NDF, EE, CP and CHOT were not influenced by the NPN level in the diets. The 3,5% corrected fat milk production or not, the fat and protein yield and the milk protein content showed a negative linear behavior as the NPN increase in the diets, and the fat content and feed efficiency did not alter. The estimation of urinary volume, excretion of urea, allantoin, uric acid, total and absorved purines and microbial N did not differ from that obtained by the 24 hours urine collection. The plasma and milk urea nitrogen concentration linearly increase as the NPN levels increase in the diets.
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Composição corporal e exigências nutricionais de bovinos F1 Limousin x Nelore alimentados com rações contendo diferentes níveis de concentrado / Body composition and nutritional requirements of F1 Limousin x Nelore bulls fed diets with different concentrate levelsVeloso, Cristina Mattos 05 March 2001 (has links)
Submitted by Nathália Faria da Silva (nathaliafsilva.ufv@gmail.com) on 2017-07-05T19:08:14Z
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Previous issue date: 2001-03-05 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Avaliaram-se os consumos de matéria seca (MS), matéria orgânica (MO), proteína bruta (PB), fibra em detergente neutro (FDN) e nutrientes digestíveis totais (NDT); a composição corporal; as exigências de energia, proteína, Ca, P, Na, K e Mg; a eficiência de utilização da energia metabolizável (EUEM) para mantença e ganho de peso; o conteúdo do trato gastrintestinal (CTGI); e o peso dos órgãos internos e dos compartimentos gastrintestinais. Utilizaram-se 50 bovinos F1 Limousin x Nelore, não-castrados, com idade e peso médios de 14 meses e 330 kg. Cinco foram utilizados como referência, cinco foram alimentados em nível de mantença e os demais foram distribuídos uniformemente em delineamento inteiramente casualizado, em dez tratamentos, contendo 25; 37,5; 50; 62,5; e 75% de concentrado na MS, e duas formas de balanceamento protéico da dieta (uma isoprotéica com 12% de PB e outra variando proteína com energia). O volumoso utilizado foi o feno de capim coast-cross. Os animais foram alimentados à vontade até atingirem o peso de abate (500 kg). A exigência líquida de energia para mantença foi estimada como o anti-log da intercepta da equação obtida pela regressão linear entre o logaritmo da produção de calor e o consumo de energia metabolizável (CEM). Foram ajustadas equações de regressão do logaritmo do conteúdo corporal de proteína, gordura, energia, Ca, P, Na, K ou Mg, em função do logaritmo do peso de corpo vazio (PCVZ) dos animais. Derivando-se as referidas equações, obteve-se a composição do ganho de PCVZ. As EUEM para mantença (k m ) e ganho de peso (k f ) foram estimadas a partir da relação entre os teores de energia líquida, para mantença ou ganho de peso, respectivamente, e a EM da dieta. A kf também foi estimada como o coeficiente da regressão linear entre a energia retida (ER) e o CEM. Foram ajustadas equações de regressão para predição da composição corporal, bem como para a estimativa dos pesos do CTGI, dos órgãos internos e dos compartimentos gastrintestinais, em função dos tratamentos. Os níveis de concentrado (NC) das dietas não influenciaram (P > 0,01) os consumos de MS e MO, que apresentaram valores médios de 7,39 e 7,08 kg/dia, respectivamente. Com o aumento do NC, o consumo de FDN, em kg/dia e % do peso vivo (PV), reduziu linearmente e o de NDT, em kg/dia, aumentou linearmente. Devido à interação entre NC e forma de balanceamento da dieta para o consumo de PB, nas dietas com níveis de proteína variados, o consumo de PB aumentou linearmente, enquanto as dietas isoprotéicas não foram influenciadas pelo NC, apresentando consumo médio de PB de 0,89 kg/dia. O requisito energético para mantença foi de 76,36 Kcal/kgPCVZ 0,75 . Para a estimativa da ER diária, em Mcal, sugere-se utilizar a equação: ER= 0,038 x PCVZ 0,75 x GDPCVZ 0,9896 . Recomenda-se utilizar a seguinte equação para estimativa da proteína retida (PR), em g/dia, em função do ganho de PV em jejum (GPVJ), em kg/dia: PR = 174,14524 x GPVJ. Para conversão das exigências para ganho de PCVZ em exigências para ganho de PV, sugere-se multiplicar o ganho de PCVZ por 1,02. A EUEM estimada para mantença foi de 0,68 e, para ganho de peso, pode-se utilizar a relação entre a energia líquida para ganho (ELg), estimada pela equação: ELg = 49,9277 – 65,6367 EM + 29,0034 EM 2 – 4,20456 EM 3 , e a concentração de EM da dieta. As relações g Ca/100g de PR e g P/100g de PR foram iguais a 8,70 e 3,46, respectivamente. As exigências líquidas de Ca foram maiores do que as preconizadas pelo AFRC (1991) e pelo NRC (1996) e as de P foram semelhantes às do AFRC (1991), mas superiores às do NRC (1996). As exigências dietéticas de Na e Mg foram semelhantes e as de K inferiores às relatadas pelo NRC (1996). O CTGI (8%), o conjunto cabeça-pés-rabo (5,6%) e o couro (9,3%) representaram, aproximadamente, 22,9% do PV de bovinos F1 Limousin x Nelore não-castrados. / Dry matter (DM), organic matter (OM), crude protein (CP), neutral detergent fiber (NDF) and total digestible nutrients (TDN) intakes; body composition, energy, protein, Ca, P, Na, K and Mg requirements; metabolizable energy efficiency of utilization (MEEU) for maintenance and weight gain; gastrointestinal tract content (GITC); and internal organs and gastrointestinal tract weights were evaluated. Fifty F1 Limousin x Nellore bulls, averaging 14 months of age and 330 kg body weight (BW) were used. Five were used as reference bulls, five were fed for maintenance, and the remaining were uniformly allotted to a completely randomized design, with ten treatments with 25, 37.5, 50, 62.5 and 75% of concentrate in DM and two diet balance methods (one isoproteic and the other changing protein as energy of the diet changed). The roughage used was coast-cross grass hay (Cynodon dactylon). The animals were ad libitum fed until reach the slaughter weight (500 kg). The net energy requirement for maintenance was estimated as the intercept anti-log of the equation obtained by linear regression between the logarithm of heat production and the metabolizable energy intake (MEI). Regression equations of the logarithm of protein, fat, energy, Ca, P, Na, Mg or K body content were fitted on the animals logarithm of empty BW (EBW). By deriving these equations, the xiiEBW gain composition was obtained. The MEEU for maintenance (km) and weight gain (kf) were calculated from the relationship between the net energy concentration, for maintenance or gain, respectively, as a function of the ME of the diet and the kf was also calculated as the linear regression coefficient between retained energy (RE) and the ME intake. Regression equations to predict the body composition, as well as the GITC, internal organs and gastrointestinal compartments weights were fitted on the treatments. The concentrate levels (CL) did not influence the DM and OM intakes, which had mean values of 7.39 and 7.08 kg/day, respectively. Increasing the CL, NDF intake, in kg/day and as live weight (LW) percentage, had a linear decrease and TDN intake, in kg/day, increased linearly. Because of the interaction between CL and diet balance method for CP intake, in the diets with variable protein levels, the CP intake increased linearly, while the isoproteic diets were not influenced by the CL, with mean value of 0.89 kg/day. The net energy requirement for maintenance was 76.36 kcal/EBW 0.75 . To estimate the daily RE, in Mcal, it is suggested to use the equation: RE = 0.038 x EBW 0.75 x EBW gain 0.9896 . The following equation is suggested to estimate the retained protein (RP), in g/day, as a function of EBW gain, in kg/day: RP = 174.14524 x EBW gain. To change the EBW gain requirements into LW gain requirements, it is suggested to multiply the EBW gain for 1.02. The MEEU estimated for maintenance was 0.68 and, for weight gain, it can be used the relation among the net energy for gain (ELg), estimated by the equation: ELg = 49.9277 – 65.6367 EM + 29.0034 EM 2 – 4.20456 EM 3 , and the ME concentration of the diet. The relationships g Ca/100g of RP and g P/100g of RP were 8.70 and 3.46, respectively. The net Ca requirements were greater than that stated by AFRC (1991) and by NRC (1996) and the net P requirements were similar to that of the AFRC (1991), but greater than to that of the NRC (1996). The Na and Mg dietetic requirements were similar and that of K were lower than that related by NRC (1996). The GITC (8%), the head-foot-tail group (5,6%) and the leather (9,3%) constituted a significant (22,9%) proportion of F1 Limousin x Nellore bulls BW.
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Digestibilidade de alimentos energéticos e protéicos para cães adultos / Digestibility of energetic and proteic food of adult dogsCavalari, Ana Paula de Melo 30 April 2003 (has links)
Submitted by Nathália Faria da Silva (nathaliafsilva.ufv@gmail.com) on 2017-07-07T19:37:34Z
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Previous issue date: 2003-04-30 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Dois experimentos foram realizados para se obter a digestibilidade aparente da energia bruta, matéria seca e proteína bruta de alimentos utilizados para cães adultos. Foram utilizados quatro cães adultos, dois machos e duas fêmeas, sem raça definida, com peso médio de 13,1 ± 2,0 Kg, na avaliação de cada alimento. Nos experimentos, foram determinados os coeficientes de digestibilidade aparente da energia bruta, matéria seca e proteína bruta de alimentos energéticos (experimento I) e protéicos (experimento II). Os alimentos energéticos utilizados no experimento I foram o milho extrusado, o milho gelatinizado, a gordura de coco (inclusão 12%), o óleo de soja (inclusão 5%), o óleo de soja (inclusão 12%) e a gordura suína (inclusão 12%). Para as dietas com o óleo e as gorduras, utilizou-se o milho gelatinizado como veículo e alimento referência. Os valores obtidos de energia digestível, matéria seca digestível e proteína digestível, na matéria seca foram, respectivamente, 3858 kcal/kg, 73,6 e 6,3% para o milho extrusado e 3841 kcal/kg, 74,5 e 5,6% para o milho gelatinizado. Os valores de energia digestível da gordura de coco (12%), do óleo de soja (5%), do óleo de soja (12%) e da gordura suína (12%) foram, respectivamente, 8580 kcal/kg, 8803 kcal/kg, 9179 kcal/kg e 9009 kcal/kg. Os coeficientes de digestibilidade aparente da energia bruta, matéria seca e proteína bruta foram 85,1, 84,2 e 65,3% para o milho extrusado e 84,4, 84,5 e 65,0% para o milho gelatinizado. Os coeficientes de digestibilidade aparente da energia bruta da gordura de coco (12%), do óleo de soja (5%), do óleo de soja (12%) e da gordura suína (12%) foram, respectivamente, 92,5%, 92,3%, 96,2% e 98,6%. Os alimentos protéicos utilizados no experimento II foram a soja integral extrusada, a farinha de carne, a farinha de carne extrusada, a farinha de vísceras, a farinha de vísceras extrusada, a farinha de pena extrusada e a farinha de peixe extrusada. Na avaliação da soja integral extrusada, da farinha de carne e da farinha de vísceras não extrusadas, utilizaram-se rações testes nas quais cada um desses alimentos foi misturado com o milho gelatinizado na proporção de 50:50. Na avaliação da farinha de carne, farinha de vísceras, farinha de penas e farinha de peixe, extrusadas, utilizaram-se rações testes nas quais cada um desses alimentos foi misturado com o milho extrusado na proporção de 40:60. Os valores de energia digestível, matéria seca digestível e proteína digestível, na matéria seca foram da soja integral extrusada foram 4705 kcal/kg, 66,9 e 42,5%, da farinha de carne, 3577 kcal/kg, 63,1 e 44,7%, da farinha de carne extrusada, 3995 kcal/kg, 80,7 e 65,2%, da farinha de vísceras, 4296 kcal/kg, 78,7 e 56,6%, da farinha de vísceras extrusada, 4381 kcal/kg, 81,8 e 57,8%, da farinha de peixe extrusada, 4075 kcal/kg, 77,6 e 66,9% e da farinha de penas extrusada, 4220 kcal/kg, 69,4 e 69,3%. Os coeficientes de digestibilidade aparente da energia bruta, matéria seca e proteína bruta foram: para soja integral extrusada, 80,0; 80,0 e 83,7%, farinha de carne, 73,3; 68,4 e 74,7%, farinha de carne extrusada, 80,7, 87,8 e 82,3%, farinha de vísceras, 87,6, 85,0 e 86,9%, farinha de vísceras extrusada, 91,2, 88,1 e 89,0%, farinha de peixe extrusada, 91,1, 85,2 e 92,1% e farinha de penas extrusada, 79,8, 76,0 e 82,3%. / Two experiments were carried through to get the apparent digestibility of the gross energy, dry matter and gross protein used in food for adult dogs. Four adult dogs, two males and two females were used, without defined race, with average weight of 13.1 ± 2.0 kg. In the experiments, it was determined the coefficients of apparent digestibility of the gross energy, dry matter and gross protein of energetic ingredients (experiment I) and proteic ingredients (experiment II). The ingredients used in experiment I were the extruded maize, the maize in jelly form, the coconut grease (inclusion 12%), the soy oil (inclusion 5%), the soy oil (inclusion 12%) and the pork grease (inclusion 12%). In diets with oil and grease, the maize in jelly form was used as vehicle and as an ingredient as reference. The values of energy, dry matter and digestible protein, in the dry matter were, respectively, 3858 kcal/kg, 73.6 and 6.3% for the extruded maize and 3841 kcal/kg, 74.5 and 5.6% for the maize in jelly form. The values of digestible energy were, respectively, in the dry matter of the coconut grease (12%), soy oil (5%), soy oil (12%) and pork grease (12%), 8580 kcal/kg; 8803 kcal/kg; 9179 kcal/kg and 9009 kcal/kg. The coefficients of apparent digestibility of the gross energy, dry matter and gross protein were, respectively, 85.1; 84.2 and 65.3% for the extruded maize and 84.4; 84.5; 65.0% for the xmaize in jelly form. The coefficients of apparent digestibility of the gross energy of the coconut grease (12%), soy oil (5%), soy oil (12%) and pork grease (12%), were 92,5%; 92,3%; 96,2% and 98,6%. Proteic ingredients in experiment II were the extruded integral soy, meat flour, extruded meat flour, viscera flour, extruded viscera flour, extruded feather flour and extruded fish flour. The seven diets were: 40% of the ingredient that was being tested (meat flour, viscera flour, feather flour and fish flour) and 60% of extruded maize (extruded together); 50% of the ingredient that was being tested (extruded integral soy, meat flour and viscera flour) and 50% of maize in jelly form. The values of energy, dry matter and digestible protein in dry matter of extruded integral soy were 4705 kcal/kg, 66.9 and 42.5%; meat flour: 3577 kcal/kg; 63.1 and 44.7%; extruded meat flour: 3995 kcal/kg; 80.7 and 65.2%; viscera flour 4296 kcal/kg; 78.7 and 56.6%; extruded viscera flour 4381 kcal/kg; 81.8 and 57.8%; extruded fish flour 4075 kcal/kg; 77.6 and 66.9%; extruded feather flour 4220 kcal/kg; 69.4 and 69.3%. The coefficients of apparent digestibility of the gross energy, dry matter and gross protein of extruded integral soy were, respectively, 80.0; 80.0 and 83.7%; meat flour 73.3; 68.4 and 74.7%; extruded meat flour: 80.7; 87.8 and 82.3%; viscera flour: 87.6; 85.0 and 86.9%; extruded viscera flour: 91.2; 88.1 and 89.0%; extruded fish flour: 91.1; 85.2 and 92.1%; extruded feather flour: 79.8; 76.0 and 82.3%.
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Aplicação do conceito de proteína ideal em dietas com diferentes níveis protéicos para frangos de corte / Use of the concept of ideal protein in diets with different levels of Gross protein for broiler chicksRigueira, Leandro César Milagres 29 August 2005 (has links)
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Previous issue date: 2005-08-29 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Foram conduzidos quatro experimentos nas instalações do setor de avicultura do Departamento de Zootecnia da Universidade Federal de Viçosa, de 16/08/04 a 15/09/04, com o objetivo de avaliar a influência de diferentes níveis de proteína bruta (PB) sobre as características de desempenho (ganho de peso, consumo de ração e conversão alimentar) e de carcaça (rendimento dos cortes no abate e taxa de deposição de gordura abdominal) de frangos de corte, machos e fêmeas, da linhagem Ross, nas fases de crescimento e terminação. No experimento 1 utilizou-se 880 machos, distribuídos em quantidades iguais em cinco tratamentos conforme o nível protéico da dieta: 16%, 17%, 18%, 19% e 20%. Todas as dietas foram formuladas com 3.100 kcal de EM/kg e 1,045% de lisina digestível, sendo que a idade inicial das aves era de 21 dias e final de 35 dias. No experimento 2 utilizou- se 880 fêmeas, distribuídas em quantidades iguais em cinco tratamentos conforme o nível protéico da dieta:15%, 16%, 17%, 18% e 19%. Todas as dietas foram formuladas com 3.100 kcal de EM/kg e 1,0% de lisina digestível, sendo que a idade inicial das aves era de 21 dias e final de 35 dias. No experimento 3 utilizou-se 800 machos, distribuídos em quantidades iguais em cinco tratamentos conforme o nível protéico da dieta:15%, 16%, 17%, 18% e 19%. Todas as dietas foram formuladas com 3.200 kcal de EM/kg e 1,0% de lisina digestível, sendo que a idade inicial das aves era de 37 dias e final de 49 dias. No experimento 4 utilizou-se 800 fêmeas, distribuídas em quantidades iguais em cinco tratamentos conforme o nível protéico da dieta:14%, 15%, 16%, 17% e 18%. Todas estas dietas foram formuladas com 3.200 kcal de EM/kg e 0,950% de lisina digestível, sendo que a idade inicial das aves era de 37 dias e final de 49 dias. Em todos os experimentos, a relação lisina com os aminoácidos metionina + cistina, treonina, triptofano, isoleucina, glicina + serina, arginina e valina foi mantida em: 74%; 65%; 18%; 67%; 158%; 108%; 77%, respectivamente. No experimento 1, os níveis de PB influenciaram linearmente o ganho de peso e a conversão alimentar, mas não influenciou o rendimento de carcaça e a deposição de gordura abdominal. No experimento 2, os níveis não influenciaram as características de desempenho e de rendimento de carcaça, mas influenciaram linearmente a taxa de deposição de gordura abdominal, que diminuiu proporcionalmente ao aumento do nível de PB da dieta. No experimento 3 e 4 os níveis protéicos não tiveram efeito significativo sobre as características de desempenho e de carcaça avaliadas. Desse modo, conclui-se aplicando o conceito de proteína ideal que: os níveis de PB para as dietas de machos e fêmeas em fase de crescimento são de 20% e 15%, respectivamente, e em fase de terminação os níveis de PB para as dietas de machos e fêmeas são de 15% e 14%, respectivamente. / Four experiments were conducted aiming to stabilish the ideal level of gross protein for broilers, in the growing and finishing stage. In the experiment I 880 male broiler chicks of Ross genetic, from 21 to 35 days age, were randonly alloted to one of five dietary tretments based on protein level (16, 17, 18, 19 and 20%) being all of them formulated for 3.100 kcal of EM/kg, and 1,045% of digestible lysine. In the experiment II 880 female broiler chicks of Ross genetic, from 21 to 35 days age, were randonly alloted to one of five dietarytreatments based on protein level (15, 16, 17, 18 and 19%) being all of them formulated for 3.100 kcal of EM/kg, and 1,000% of digestible lysine. In the experiment III 800 male broiler chicks of Ross genetic from 37 to 49 days age were randonly alloted in one of five dietary tretments based on protein level (15, 16, 17, 18 and 19%) being all of them formulated for 3.200 kcal of EM/kg, and 1,000% of digestible lysine. In the experiment IV 800 female broiler chicks Ross xGenetic from 37 to 49 days age were randonly alloted in one of five dietary tretments based on protein level (14, 15, 16, 17 and 18%) being all of them formulated for 3.200 kcal of EM/kg, and 0,950% of digestible lysine. In each of the four experiments the ratio of lysine to methionine plus cystine, treonine, triptophane, isolencine, glicine plus serine, arginine and valine have been manteined contant, taking into account the ideal protein standard. In the experiment I treatment had linear impact on daily gain and feed conversion. Yeld and abdominal fat content were not affected by treatmnt. In the experiment II the tretamnt did not affected daily gain, feed conversion or yeld, but did affected linearly abdominal fat content. In the experiment III and IV protein level did not affected any of the trials measured.in the four experiments protein level did not affected yeld and abdominal fat contet. This study shows that for growing stage , both male and female, crude protein requirement range is from 20 to 15%. For the finishing stage the crude protein requirement range is from 15 to 14%.
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Níveis dietéticos de lisina e proteína bruta para frangos de corte / Dietary lysine and protein levels for broilersCosta, Fernando Guilherme Perazzo 01 August 2000 (has links)
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Previous issue date: 2000-08-01 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Foram conduzidos seis experimentos, sendo três de lisina e três de proteína, com o objetivo de estabelecer a exigência de lisina total e os níveis ideais de proteína bruta para frangos de corte, nas fases inicial, de crescimento e final. No experimento 1 foram utilizados 1.440 pintos de corte Ross, machos e fêmeas, com 22,00% de PB e 3.050 kcal de EM/kg, suplementada com seis níveis de L-lisina, fornecendo 1,03; 1,09; 1,15; 1,21; 1,27; e 1,33% de lisina total às rações, durante o período de 1 a 21 dias de idade. No experimento 2 (22 a 42 dias de idade), utilizou-se a mesma quantidade de animais, mas com uma ração com 20,00% de PB e 3.200 kcal de EM/kg, suplementada com seis níveis de L- lisina, correspondendo aos níveis de 0,92; 0,98; 1,04; 1,10; 1,16; e 1,22% de lisina nas rações. Em relação ao experimento 3 (42 a 54 dias de idade), a quantidade de animais utilizados no experimento foi de 750 aves, sendo a ração basal composta de 18,50% de PB e 3.200 kcal de EM/kg e as rações suplementadas com cinco níveis de L-lisina, correspondendo a 0,80; 0,86; 0,92; 0,98; e 1,04% de lisina total nas rações. Os outros três experimentos foram feitos para se obter o nível ideal de proteína bruta (PB) nas rações, sendo a quantidade de animais idêntica à dos três experimentos citados anteriormente. Na primeira fase de criação, trabalhou-se com diferentes níveis de proteína (20,00; 20,50; 21,00; 21,50; 22,00 e 22,50%) nas rações e com o nível de 1,27% de lisina total. Para a segunda fase, os níveis de proteína que variaram nas rações foram 17,50; 18,00; 18,50; 19,00; e 19,50% com o nível de 1,16% de lisina total. Na última fase, os cinco níveis de proteína bruta foram 16,00; 16,50; 17,00; 17,50; e 18,00%, com 1,00% de lisina total, sendo estes níveis de lisina obtidos em experimentos feitos anteriormente. Em todos estes experimentos, a relação lisina: metionina + cistina, treonina, triptofano e arginina foi mantida para aminoácidos, levando em consideração o perfil de proteína ideal. No experimento 1, os tratamentos influenciaram quadraticamente o ganho de peso (GP) e a conversão alimentar (CA), independentemente do sexo, e linearmente o consumo de ração (CR) dos machos. No experimento 2, os machos apresentaram efeito quadrático para GP e CA, tendo exigência estimada em 1,125% e 1,164% de lisina total, respectivamente. Para os dados de rendimento, os níveis de lisina influenciaram linearmente o rendimento de carcaça (RC), o rendimento de peito (RPT), o rendimento de filé de peito (RFP) e a gordura abdominal (GA) dos machos. Nas fêmeas, observou-se efeito quadrático para CA e linear para CR, não ocorrendo diferença no ganho de peso das aves. Foi observado também um efeito quadrático para RPT e RFP e linear para GA, à medida que se aumentavam os níveis de lisina nas rações. Para o experimento 3, não houve efeito dos níveis de lisina para machos e fêmeas sobre o GP, mas, para a CA, ambos os sexos apresentaram efeito linear. Em relação ao rendimento e à gordura abdominal, as aves não apresentaram nenhum efeito significativo. No experimento referente à obtenção do nível ideal de proteína bruta para a fase inicial, os machos apresentaram-se com exigência estimada de 22,42% de proteína bruta para CA, enquanto as fêmeas tiveram efeito linear em relação a GP e CA. Na fase seguinte, os machos foram influenciados linearmente pelos níveis de proteína para CR, CA, RPT e GA, tendo este resultado melhorado à medida que se aumentavam os níveis de proteína bruta. Para as fêmeas, obteve-se efeito quadrático para GP e efeito linear para CA e gordura abdominal. A última fase foi representada por um efeito quadrático e linear para os machos quanto a GP e CA, não havendo efeito sobre o rendimento das carnes e da gordura abdominal. Nas fêmeas, obteve-se efeito linear em CA e RC a partir do momento em que os níveis de proteína aumentavam. Concluiu-se que as estimativas das exigências de lisina para machos e fêmeas foram: na fase inicial (1-21 dias), os machos apresentaram exigência de 1,27% de lisina total (1,16% de lisina digestível), e as fêmeas, de 1,21% de lisina total (1,10% de lisina digestível); na fase de crescimento (22 a 40 dias), os machos apresentaram 1,16% de lisina total (1,06% de lisina digestível), e as fêmeas, 1,10% de lisina total (1,00% de lisina digestível); e, na fase final (42 a 54 dias), as exigências foram de 1,04% de lisina total (0,96% de lisina digestível) para os machos e 0,98% de lisina total (0,90% de lisina digestível) para as fêmeas. Quanto aos níveis de proteína adequados de acordo com cada fase de criação, pode-se concluir que, para a fase inicial, as aves (machos e fêmeas) apresentaram exigência de 21,5% de PB, 19,00% de PB para a fase de crescimento e 17,50% de PB para a fase final. / Six experiments, three of lysine and three of protein, were carried out to estimate the total lysine requirement and the ideal levels of crude protein (CP) for broilers in the initial, growing and final phases. In the experiment 1, 1440 Ross broilers, males and females, fed diets with 22.00% CP and 3.050 kcal ME/kg and supplemented with six L_lysine levels, 1.03, 1.09, 1.15, 1.21, 1.27 and 1.33% of total lysine, from 1 to 21 days of age. In the experiment 2 (from 22 to 42 days of age), the same number of animals was used, fed a diet with 20.00% CP and 3.200 kcal ME/kg, supplemented with six L-lysine levels, corresponding to 0.92, 0.98, 1.04, 1.10, 1.16 and 1.22% of lysine in the diets. In the experiment 3 (from 42 to 54 days of age), 750 chicks were used and fed a basal diet with 18.50% CP and 3.200 kcal ME/kg and diets supplemented with five L-lysine levels, corresponding to 0.80, 0.86, 0.92, 0.98 and 1.04% of total lysine in the diets. The other three experiments were carried out to obtain the ideal level of crude protein (CP) in the diets, and the number of animals was the same as those used in the three experiments described before. In the first growing phase, different protein levels (20.00, 20.50, 21.00, 21.50, 22.00 and 22.50%) in the diets as the level of 1.27% total lysine were used. For the second phase, the protein levels that changed on the diets were 17.50, 18.00, 18.50, 19.00 and 19.50% at the levels of 1.16% total lysine. In the last phase, the five crude protein levels were 16.00, 16.50, 17.00, 17.50 and 18.00% at 1.00% total lysine and obtained in the experiment previously carried out. In all these experiments, the lysine: methionine + cystine, threonine, tryptophan and arginine ratio was maintained for amino acids considering the ideal protein profile. In the experiment 1, the treatments quadractly affected the weight gain (WG) and the feed:gain ratio (F/G), independent of sex, and linearly affected the feed intake (FI) of males. In the experiment 2, the males showed quadratic effect for WG and F/G and estimated requirement of 1.125% and 1.164% total lysine, respectively. The lysine levels linearly affected the carcass yield (CY), breast yield (BY), breast fillet yield (BFY), and abdominal fat (AF) of males. There was quadratic effect for F/G and linear effect for FI, for females, and no differences of chicks weight gain. Quadratic effect for BY and BFY and linear effect for F/G were observed, as dietary lysine levels incresed. In the experiment 3, there was no effect of lysine levels on the WG, for males and females, but there was linear effect on the F/G, for the both sexes. The chicks showed no significant effect on the abdominal fat and yield. In the experiment to obtain the crude protein ideal level for the initial phase, males showed estimated requirement of 22.42% crude protein for F/G, while the females showed linear effect for WG and F/G. In following phase, the protein levels linearly affected the males FI, F/G, BY and AF, which improves as crude protein levels increased. Females showed quadratic effect for WG and linear effect for F/G and fat abdominal. In the last phase, males showed quadratic and linear effect for F/G, and there was no effect on breast and fillet breast yields and on abdominal fat. Females presented linear effect for F/G and CY as the proteins levels increased. It was concluded that the lysine requirements estimates for males and females were: in the initial phase (from 1 to 21 days), males showed requirement of 1,27% total lysine (1.16% digestible lysine) and females showed requirement of 1.21% total lysine (1.10% digestible lysine), in the growing phase (from 22 to 40 days), males showed requirement of 1.16 total lysine (1.06% digestible lysine) and females showed requirement of 1.10% total lysine (1.00% digestible lysine), and the final phase (from 42 to 54 days), the requirements were of 1.04% total lysine (0.96% digestible lysine) for males and 0.98% total lysine (0.90% digestible lysine) for females. According to the adequate crude protein levels for each phase, it was concluded that, in the initial phase, the chicks (males and females) showed requirement of 21.5% CP, 19.00% CP for the growing phase and 17.50% CP for the final phase.
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Avaliação de suplementos com diferentes teores no rúmen para novilhas pardo-suícas em pastejo Marandu / Evaluation of supplements with different contents of ruminal undegradable protein fed Brown Swiss heifers grazing Brachiaria brizantha cv. MaranduOliveira, Ronaldo Lopes 27 August 2001 (has links)
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Previous issue date: 2001-08-27 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / O objetivo do experimento foi avaliar técnico-economicamente os efeitos de suplementos com diferentes níveis (alto, médio e baixo) de proteína não-degradável no rúmen (PNDR) para novilhas em pastejo rotacionado de Brachiaria brizantha cv. Marandu. Estudaram-se o consumo e a digestibilidade dos nutrientes; as concentrações de N-uréia plasmático; o ganho de peso; a condição corporal; a conversão alimentar; e os custos com suplementação. O trabalho foi realizado no Instituto Melon de Estudos e Pesquisas, localizado na Fazenda Barreiro, município de Silvânia-GO. O experimento durou 90 dias e foram utilizadas 15 novilhas Pardo- Suíças puras (cinco por tratamento), com média de 19,7 meses e 394 kg de peso vivo (PV). A disponibilidade da pastagem foi monitorada para manter a oferta de 6% PV, em matéria seca verde (MSV). Utilizaram-se animais reguladores e avaliaram-se a disponibilidade de matéria seca (MS), MSV e a relação folha/colmo. As novilhas consumiram 2,5 kg/dia de um suplemento concentrado, oferecido duas vezes ao dia (8 e 16h), em cocho individual. Foi coletada extrusa em animais fistulados no esôfago, que receberam 10 g de óxido crômico/dia. Coletaram-se fezes duas vezes ao dia e determinou-se a fibra em detergente (FDN) indigerível nos alimentos e nas fezes para determinação do consumo e da digestibilidade. Os animais foram pesados, a cada 15 dias, no início da manhã, após jejum de 16 horas, obtendo-se o ganho de peso total e médio diário. Juntamente com a pesagem foi avaliado o escore da condição corporal em escala de 1 a 5. Foi avaliada a conversão alimentar da MS, proteína bruta (PB), fibra e carboidratos totais (CT). Não houve efeitos dos suplementos sobre a pastagem, porém houve diferenças entre períodos (meses), pois, com o avanço da estação seca, a disponibilidade de forragem decaiu e a relação folha/colmo e a proporção de material senescente elevaram-se. Não foi observado efeito dos tratamentos sobre o consumo de forragem ou de forragem mais suplemento. A digestibilidade da MS, matéria orgânica (MO) e PB e o teor de nutrientes digestíveis totais (NDT) foram menores para as dietas com alto teor de PNDR. Observou-se interação período:tratamento para a digestibilidade da fibra, em que, nos tratamentos com alta e média PNDR, a digestibilidade decresceu com o avançar da seca e, nos tratamentos com baixa PNDR, a digestibilidade aumentou. Os animais que consumiram alto teor de PNDR apresentaram concentrações plasmáticas médias de N-uréia menores que aqueles alimentados com suplementos contendo teores médios de PNDR, seguidos daqueles alimentados com dietas cotendo baixa PNDR. Os picos máximos de N-uréia foram maiores, quando se diminuiu o teor de PNDR. As novilhas que consumiram o suplemento com alta PNDR obtiveram maior ganho de peso que aquelas submetidas aos tratamentos com média e baixa PNDR. Houve incremento de um ponto, em média, no escore de condição corporal (ECC) durante o experimento, porém não houve efeito dos tratamentos sobre esta variável. A conversão alimentar da MS e da PB foi menor para o tratamento com alta PNDR e não houve efeito sobre a conversão alimentar da fibra e dos CT. A relação custo/benefício foi menor para o tratamento com baixa PNDR. / The objective of this experiment was to evaluate technical-economically the effects of supplements with different levels (high, medium, low) of ruminal undegradable protein (RUP) by heifers grazing Brachiaria brizantha cv. Marandu. The intake and the nutrients digestibility, N-urea plasma concentration, weight gain, body condition (BC), feed:gain ratio and costs with supplementation were evaluated. The experiment was carried out at the Instituto Melon de Estudos e Pesquisas, in the Barreiro Farm, county of Silvânia-GO, and lasted 90 days. Fifteen purebred Brown Swiss heifers (five by treatment), averaging 19.7 months and 394 kg live weight (LW), were used. The pasture availability was monitored to maintain offer of 6% LW, in green dry matter (GDM) basis. The dry matter (DM) availability, GDM and leaf:colm ratio were evaluated. The heifers were fed 2.5 kg/day of concentrate supplement, offered twice a day (8 a.m. and 4 p.m.), in individual bunks. Extrusa was collected in animals fistulated in the esophagus, that received 10 g chromium oxide/day. Feces were collected twice a day and the indigestible neutral detergent fiber (NDF) in the feeds and feces were used to determine the intake and digestibility. The animals were weighed, every 15 days, in the beginning of morning, after fasting of 16 hours, obtaining total and average daily weight gain. xiThe score of body condition (from 1 to 5) and weighing were taken together in the evaluation. DM, crude protein (CP), fiber and total carbohydrate feed:gain ratio was evaluated. There were no effects of supplements on pasture, however there were differences among periods (months), because, as dry season progressed, the forage availability decreased and leaf:colm ratio and the proportion of senescent material increased. There was no effect of treatments on forage intake or forage + supplement. DM, organic matter (OM) and CP digestibility, and total digestible nutrients (TDN) content were lower for the diets with high RUP content. It was observed interaction of period:treatment for the fiber digestibility, where in the treatments with high and medium RUP, the digestibility decreased as the dry season progressed and, in the treatment with low RUP, the digestibility increased. The animals fed supplement with RUP content showed average plasma N-urea concentrations lower than those fed supplement with average RUP contents, followed by those fed diets with low RUP. The maximum peaks of N-urea were higher when RUP content decreased. The heifers fed supplement with PUR showed higher weight gain than those fed diets with medium and low PUR. There was increment of one point, in average, in the BC during the experiment, however there was no effect of treatments on this variable. DM and CP feed:gain ratio was lower for the treatment with high PUR and there was no effect on the fiber and TC feed:gain ratio. The cost:benefit ratio was smaller for the treatment with low PUR.
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Influência da sazonalidade sobre a composição protéica e qualidade seminal de garanhões Mangalarga Marchador / Influence of seasonality over the proteic composition and the seminal quality of Mangalarga Marchador stallionNeves, João Gabriel da Silva 29 April 2011 (has links)
Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2017-08-08T16:17:30Z
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Previous issue date: 2011-04-29 / Este estudo foi realizado com o objetivo de avaliar a influência das estações bioclimáticas da Zona da Mata Mineira sobre a composição bioquímica do plasma seminal de garanhões da raça Mangalarga Marchador. Foram utilizados três garanhões de fertilidade comprovada, dois com 15 anos de idade e outro com sete anos. O sêmen foi coletado a cada 14 dias, durante o período de um ano (abril de 2009 a abril de 2010) totalizando 26 coletas, perfazendo 78 ejaculados. Foi realizada a análise física e morfológica do sêmen. O plasma seminal foi separado para análise da concentração das proteínas solúveis, de glicose e de colesterol para a determinação do perfil das proteínas presentes nos ejaculados ao longo das estações do ano. O perfil das proteínas foi avaliado pelo método de eletroforese bidimensional e as análises foram realizadas no programa IMAGEMASTER, da GE-HEALTCARE. Quanto às características físicas do sêmen, houve um maior volume de sêmen na primavera e no verão (p<0,05) porém, a quantidade de espermatozóides foi a mesma para todas as estações do ano (p>0,05). Com relação aos aspectos físicos do sêmen, a concentração de proteínas no plasma diferiu entre os métodos utilizados (p<0,05) porém, a correlação entre si foi muito alta e positiva (r = 0,73). A concentração protéica no plasma seminal teve correlação positiva apenas com a quantidade de espermatozóides por ejaculado, porém baixa (r=0,36). Não houve correlação entre as concentrações de proteínas e a concentração de testosterona sérica. Um grupo variado de proteínas foi encontrado pelo método de eletroforese bidimensional, sendo que 10 dessas proteínas foram comuns aos três garanhões. No outono, observou-se uma proteína de 18 kDa/pI=9,1; na primavera observou-se duas: de 22 kDa/pI= 6,7 e 35 kDa/pI= 7,2; no verão observou-se três: 20 kDa/pI= 8,2; 27 kDa/pI= 8,0 e 29 kDa/pI= 7,5; uma proteína foi comum às estações de Outono, Inverno e Primavera: 9 kDa/pI= 9,0 e três proteínas foram comuns a todas as estações bioclimáticas: 4 kDa/pI=5,8; 7 kDa/pI=7,0 e 11 kDa/pI=7,5. Além dessas proteínas, uma série de proteínas com peso molecular inferior a 30 kDa foram observadas individualmente. As concentrações de glicose e colesterol no plasma seminal não apresentaram variação sazonal (p>0,05) ou correlação com qualquer característica estudada (p>0,05). Conclui-se no presente estudo que os parâmetros bioquímicos do sêmen sofrem maior variação intrínseca que sazonal, havendo algumas proteínas que são comuns aos garanhões Mangalarga Marchador. / The aim of this study was to evaluate the biochemistry composition of the seminal plasma in Mangalarga Marchador stallions as to evaluate the influence of bioclimatic seasons in the Zona da Mata Mineira over its content. Thus, three stallions with proved fertility were used. Two of then with 15 years old and the other with seven years old. The semen was collected every 14 days, during one year (April 2009 to April 2010) totalizing 26 collects, in a total of 76 samples. The physical and morphological parameters of the spermatozoa were evaluated. A semen sample was taken and the seminal plasma was separated to measure the concentration of soluble proteins, glucoses and cholesterol concentration and to find the protein profile in the ejaculates grouped in each season. The protein profile was done by two-dimensional electrophoresis and analyses were done by IMAGEMASTER program (GE HEALTCARE). About the physical parameters of the semen, there was a bigger volume of semen during Spring and Summer (p<0.05) but the quantity of spermatozoa was the same for all seasons (p>0,05). Protein concentration in seminal plasma differed between methods used (p<0.05) although the correlation between then were high and positive (r = 0.73). The seminal plasma protein concentration had a positive correlation only with the quantity of spermatozoa in the ejaculated and, even so, was weak (r = 0.362). There were no correlation between the protein concentration and the serum testosterone concentration. A diverse group of proteins were found thorough the two-dimensional electrophoresis method. Ten of those proteins were common to all three stallions. In Autumn, was found a 18 kDa/pI 9.1 protein; during Spring, were found two proteins: 22 kDa/pI 6.7 and 35 kDa/pI 7.2; in Summer, were found three: 20 kDa/pI 8.2; 27 kDa/pI 8.0 and 29 kDa/pI 7.5; one protein was common to Autumn, Winter and Spring 9 kDa/pI 9.0 and three proteins were common to all seasons: 4 kDa/pI 5.8 ;7 kDa/pI 7.0 and 11 kDa/pI 7.5. Beyond those proteins, a bunch of other polypeptides with molecular weight less than 30 kDa were found individually. Concentrations of glucose in seminal plasma does not show a seasonal variation (p>0.05) or correlation with any other evaluated parameter. The same occurs to seminal plasma cholesterol concentrations. It is concluded that biochemistry of seminal parameters have greater intrinsic variation than seasonal, showing some proteins that are common to Mangalarga Marchador stallions.
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Produção em Pichia pastoris de uma quitinase de feijão-de-corda com atividade antifúngica / Production in Pichia pastoris of a chitinase from bean-string with antifungal activityLandim, Patrícia Gadelha de Castro January 2011 (has links)
LANDIM, Patrícia Gadelha de Castro. Produção em Pichia pastoris de uma quitinase de feijão-de-corda com atividade antifúngica. 2011. 155 f. Tese (Doutorado em bioquímica)- Universidade Federal do Ceará, Fortaleza-CE, 2011. / Submitted by Elineudson Ribeiro (elineudsonr@gmail.com) on 2016-07-20T19:42:36Z
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Previous issue date: 2011 / Chitinases are enzymes that hydrolyze the β-(1,4) glycosidic bonds present in biopolymers of N-acety-β-D-glucosamine, mainly chitin, a structural polysaccharide which is found in cell walls of several fungi. In plants, chitinases play a role as defense proteins against the attack of pests and pathogens. In this work, a class I chitinase from cowpea (Vigna unguiculata) was expressed in heterologous systems. The recombinant protein (rVuChi) was purified, and characterized biochemically and in relation to its effects on mycelial growth and germination of spores/conidia of filamentous fungi. The DNA coding sequence of the cowpea chitinase was amplified by PCR and the products cloned in the expression vectors pET32a(+) and pPICZαA, for heterologous expression in Escherichia coli and Pichia pastoris, respectively. In E. coli cells, the recombinant fusion protein occurred mainly as inclusion bodies. On the other hand, in six strains of P. pastoris, the recombinant cowpea chitinase was secreted in a soluble form into the culture medium. The highest chitinase activity was detected in the extracellular fraction of KM71H strain, 72 hours after induction. The recombinant VuChi was detected by SDS-PAGE and Invision His-Tag stain kit, which identified two protein bands with apparent molecular masses of 30 and 33 kDa. These two protein bands showed the same N-terminal sequence, and an absence of N-glycosylation. Most recombinant chitinase secreted into the culture medium was recovered in the fraction F0/40, precipitated with ammonium sulfate. The expressed protein was purified to homogeneity by affinity chromatography on chitin matrix (yield of 18.31 mg per liter of culture medium), or by hydrophobic interactions chromatography on a column of Phenyl Sepharose CL-4B (yield = 13.2 mg/L), followed by ultrafiltration in a membrane with exclusion limit of 50 kDa. The purified rVuChi was able to hydrolyze colloidal chitin (in solution) as well as glycol chitin (in SDS-PAGE), although it did not show enzymatic activity against synthetic substrates containing p-nitrophenol. The purified chitinase showed molecular masses of 32 and 33.1 kDa by size exclusion chromatography on columns of Superose 12 HR and Superdex 200, respectively. When submitted to 2D electrophoresis, rVuChi presented a set of six spots with pI values between 4.44 and 5.15. The chitinase was thermostable at temperatures up to 50 ° C and the enzyme activity was highest at pH 5. In general, the presence of metal ions caused a reduction of its enzymatic activity. The chelating agent EDTA (0.5%) stimulated the enzyme activity, whereas in the presence of the detergent SDS (0.5%) the rVuChi activity was completely inhibited. The recombinant chitinase showed 37% of alpha helix and 26% of beta sheet, as determined by circular dichroism spectroscopy. Denaturing of 50% of the rVuChi molecules occurs at 54.41 ° C. The fluorescence spectra showed that the protein produced in P. pastoris was in its fully folded conformation. The recombinant cowpea chitinase was able to completely inhibit the germination of spores of Penicillium herquei, after 48 hours, at a dose of 100 mg, and caused 68% inhibition at doses of 50, 25 and 12.5 mg. At a dose of 150 mg, there was 55% inhibition on conidial germination of Rhizoctonia solani and a slight effect on spore germination of Colletotrichum lindemuthianum and C. musae. There was no effect of rVuChi on spore germination of C. gloeosporioides, Fusarium solani and F. oxysporum. In addition, the recombinant protein delayed the mycelial growth of P. herquei in approximately 50% (at the dose of 100 mg) but had no effect on mycelial growth of the other fungi. Therefore, the cowpea class I chitinase is a protein with anti-fungal activity. / As quitinases são enzimas capazes de hidrolisar as ligações β-(1,4)-glicosídicas presentes em biopolímeros de N-acetil-β-D-glucosamina, principalmente quitina, um polissacarídeo estrutural presente na parede celular de diversos fungos. No presente trabalho, uma quitinase de classe I de feijão-de-corda (Vigna unguiculata) foi expressa em sistemas heterólogos e a proteína recombinante (rVuChi) foi caracterizada bioquimicamente bem como em relação ao seu efeito sobre o crescimento micelial e germinação de esporos/conídios de fungos filamentosos. A seqüência de DNA codificando a proteína foi amplificada por PCR e clonada nos vetores de expressão pET32a(+) e pPICZαA, para expressão heteróloga em Escherichia coli e Pichia pastoris, respectivamente. A expressão de rVuChi em células de E. coli ArticExpress DE3 se deu em corpos de inclusão. Em seis estirpes de P. pastoris a proteína recombinante foi secretada, de forma solúvel, para o meio de cultura. Na fração extracelular da estirpe KM71H foi observada a maior atividade quitinolítica, após 72 horas de indução. A detecção de rVuChi foi feita por SDS-PAGE e com o kit Invision His-Tag stain, onde foram identificadas duas bandas protéicas de massas moleculares aparentes de 30 e 33 kDa. Ambas as bandas apresentaram a mesma sequência N-terminal e a ausência de N-glicosilação foi verificada. A quitinase recombinante estava presente principalmente na fração F0/40 precipitada com sulfato de amônio e foi purificada a homogeneidade tanto por cromatografia de afinidade em matriz de quitina (com rendimento de 18,31 mg por litro de meio de cultura), quanto por cromatografia de interações hidrofóbicas em coluna de Phenyl Sepharose CL-4B (rendimento de 13,2 mg/L), seguidas de ultrafiltração em membrana com limite de exclusão de 50 kDa. A rVuChi apresentou atividades endo e exo-quitinolítica frente a quitina coloidal e hidrolisou glicol-quitina em gel de SDS-PAGE, embora não tenha apresentado atividade contra substratos sintéticos contendo p-nitrofenol. A quitinase purificada apresentou massa molecular de 32 e 33,1 kDa por cromatografia de exclusão molecular em colunas de Superose 12 HR e Superdex 200, respectivamente. Em gel bidimensional, rVuChi apresentou um conjunto de seis ‘spots’ com pI entre 4,44 e 5,15. A quitinase mostrou-se ainda termoestável em temperaturas até 50 °C e sua atividade enzimática máxima ocorreu em pH 5. Em geral, a presença de íons metálicos causou uma redução de sua atividade enzimática. O agente quelante EDTA (0,5%) estimulou a atividade enzimática enquanto que o detergente SDS (0,5%) a inibiu totalmente. A quitinase recombinante apresentou 37% de hélice alfa e 26% de folha beta, como determinado por espectroscopia de dicroísmo circular. A desnaturação de 50% das moléculas de rVuChi ocorreu a 54,41 °C. Os espectros de fluorescência revelaram que a proteína produzida em P. pastoris estava em sua conformação totalmente enovelada. A quitinase recombinante de feijão-de-corda foi capaz de inibir totalmente a germinação de esporos de Penicillium herquei até 48 horas, na dose de 100 μg e causou inibição de 68%, nas doses de 50, 25 e 12,5 μg. Na dose de 150 μg, houve uma inibição de 55% na germinação dos conídios de Rhizoctonia solani e um leve efeito sobre a germinação dos esporos de Colletotrichum lindemuthianum e C. musae. Nenhum efeito da rVuChi foi observado sobre a germinação de esporos dos fungos C. gloeosporioides, Fusarium solani e F. oxysporum. Além disso, a proteína recombinante retardou o crescimento micelial de P. herquei em aproximadamente 50% (100 μg), porém não apresentou efeito sobre o crescimento micelial dos demais fungos. Desta forma, a quitinase classe I de V. unguiculata é uma proteína com atividade antifúngica.
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