Submitted by Dominick Jesus (dominickdejesus@hotmail.com) on 2016-02-11T17:48:37Z No. of bitstreams: 2 Dissertação_Daniel Lúcio Rodrigues Dutra.pdf: 623819 bytes, checksum: e27c559cf8e657f3868f5417b83e9c4d (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-02-11T17:48:37Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação_Daniel Lúcio Rodrigues Dutra.pdf: 623819 bytes, checksum: e27c559cf8e657f3868f5417b83e9c4d (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Previous issue date: 2006-07-11 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do Amazonas - FAPEAM / The main objective of this work was to isolate the ORFs CV0867 (sodB2) e CV2504 (sodB1) of C. violaceum and induce their expression in Escherichia coli cells harboring sod genes, to evaluate the increase in SOD activity in the recombinant cells exposed to oxidative stress conditions. The sodB1 gene was isolated by PCR, using specific primers, and cloned into pGEM ® -T Easy vector. The amplification reaction could not be optimized for the second set of primers, specific for sodB2 gene. In an attempt to obtain a vector suitable for the regulated heterologous expression of SOD, some strategies were proposed for the construction of vectors with expression under the control of a sterically repressed promoter – srp. The sodB1 gene was then subcloned into vectors pCR4-SRP and pUC-SRP, derived from pCR ® 4-TOPO ® e pUC72, respectively, both developed during this project. However, the obtaining of recombinant clones was not possible. Despite the fact that SOD is not a toxic protein for the cell, we tested the hypothesis of the lethality of recombinant clones caused by the overexpression of SOD. Thus, amy and pfu genes were cloned into pUC-SRP, although the clones harboring the gene of interest could not be obtained. We concluded that the expression mechanisms of pUC-SRP and pCR4-SRP vectors may have caused deletery effects to the host cells, and that modifications in their structure should be made for the minimizing of heterologous expression levels, reducing the risk of toxicity for the clones. / O principal objetivo do trabalho foi isolar as regiões estruturais dos genes sod correspondentes às ORFs CV0867 (sodB2) e CV2504 (sodB1) de C. violaceum e expressá- las em células de Escherichia coli portando os genes sod, para avaliar o incremento da atividade de SOD nas células recombinantes submetidas a condições de estresse oxidativo. O gene sodB1 foi isolado via PCR, utilizando iniciadores específicos, e clonado em vetor pGEM ® -T Easy. Para sodB2, não conseguiu-se otimizar a reação de amplificação. Com o intuito de obter um vetor para expressão heteróloga regulada de SOD foram traçadas estratégias para a construção de vetores com expressão controlada por um promotor estericamente regulado - srp. O gene sodB1 foi então subclonado nos vetores pCR4-SRP e pUC-SRP, derivados de pCR ® 4-TOPO ® e pUC72, respectivamente, ambos desenvolvidos a partir deste trabalho. No entanto, não foi possível a obtenção de clones recombinantes. Apesar de SOD não ser uma proteína tóxica para a célula, testou-se a hipótese de que a superexpressão desta proteína seria a causa da letalidade dos clones recombinantes. Assim, foram clonados os genes amy e pfu em pUC-SRP. Porém, mais uma vez não foram obtidos clones portando os genes de interesse. Conclui-se então que os mecanismos de expressão do vetor pUC-SRP, bem como de pCR4-SRP, devem ter ocasionado efeitos deletérios às células hospedeiras, e que alterações na sua estrutura devem ser feitas no sentido de minimizar os níveis de expressão heteróloga, reduzindo assim o risco de produção de toxicidade para os clones.

Submitted by Helena Bejio (helena.bejio@unioeste.br) on 2019-03-28T00:41:04Z No. of bitstreams: 2 Tese André Sanches de Avila versão final.pdf: 1188949 bytes, checksum: c8e87e7ae6a74049292d17bb4a07fe16 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2019-03-28T00:41:04Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Tese André Sanches de Avila versão final.pdf: 1188949 bytes, checksum: c8e87e7ae6a74049292d17bb4a07fe16 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2018-12-06 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Additives use to modify ruminal fermentation is an alternative to improve animal productivity. Among the most used additives, plants extracts, as the condensed tannins that according to the level and source used, it can bring benefits to ruminant production. It was conducted a study to evaluate the use of condensed tannins and its effects on lactating Holstein cows performance. It was used five cows in a Latin square design 5x5, where the treatments were levels of condensed tannins from Acacia mearnsii (0, 5, 10, 15 and 20 g/kg of DM of total diet), periods consisted in 14 days of adaptation and 6 days for sampling. Condensed tannins use did not influence the dry matter intake, however, it was found a quadratic effect of tannins in the digestibility of dry matter and NDF with maximum values in 12,2 and 11,4 g/kg of tannins in DM respectively. It did not occur major effects on blood parameters and microbial protein synthesis and milk production in kg/day, however, there was a reduction in milk production corrected to fat and energy and in casein contents, being an undesirable effect in animals’ performance. In another study carried out it was evaluated tannin levels to feed cannulated jersey steers. The design was a Latin square 5x5 with five animals and treatments were related to the inclusion levels of Acacia mearnsii (0, 5, 10, 15 and 20 g/kg of DM). The inclusion of tannins did not influence the nutrients digestibility except for CP that decreases linearly. There was a linear reduction in ruminal pH values, that is related to tannins pH. Population of ruminal protozoans and gender evaluation in the rumen were not influenced as well as the ruminal NNH3 nitrogen levels were not influenced by tannins. Inclusion of condensed tannins reduces the proportion of acetic acid and did not influence the ruminal protozoa population, however it reduces the apparent crude protein digestibility. / A utilização de aditivos para modificar a fermentação ruminal é uma alternativa muito utilizada para melhorar a produtividade animal. Entre os aditivos utilizados, estão os extratos de plantas como os taninos condensados que, dependendo do nível e a fonte utilizada, podem trazer benefícios para a produção de ruminantes. Foram realizados dois experimentos para avaliar a utilização de taninos condensados e seus efeitos sobre o desempenho de vacas em lactação e também com bovinos jersey fistulados. No experimento com as vacas em lactação, foram utilizadas cinco vacas da raça holandês em um delineamento quadrado latino 5x5 em que os tratamentos foram níveis de extrato de taninos condensados de Acacia mearnsii (0, 5, 10, 15 e 20 g/kg de MS na dieta total). Os períodos consistiram em 14 dias para adaptação e seis dias para coleta. A utilização dos taninos não influenciou a ingestão de MS, porém apresentou efeito quadrático para a digestibilidade da matéria seca e fibra em detergente neutro, com valores máximos estimados com a inclusão de 12,2 e 11,4 g/kg de MS, respectivamente. Os parâmetros sanguíneos, a síntese de proteína microbiana e a produção de leite em kg/dia não foram influenciados pelos taninos condensados. No entanto, ocorreu redução na produção de leite corrigida para gordura e energia e nos teores de caseína, sendo um efeito indesejável sobre o desempenho dos animais. No segundo estudo, avaliou-se a inclusão de taninos condensados na alimentação de bovinos jersey fistulados. O delineamento experimental utilizado foi um quadrado latino 5x5 com diferentes níveis de inclusão de taninos condensados de Acacia mearnsii em 0, 5, 10, 15 e 20 g/kg da MS das dietas. A inclusão de taninos reduziu linearmente a digestibilidade aparente da proteína, no entanto, não influenciou na digestibilidade dos demais nutrientes. Foi observada redução linear no pH ruminal com a inclusão dos níveis de taninos, efeito que pode estar relacionado ao pH do aditivo. A população total de protozoários ruminais e também dos gêneros avaliados não foram alterados, assim como os teores de amônia ruminal não foram influenciados pelo uso de taninos. A inclusão de TC nas dietas reduz as proporções de ácido acético e não influencia na população de protozoários ruminais, porém reduz a digestibilidade aparente da proteína bruta.

Sepse é um importante problema de saúde pública, uma vez que seu tratamento gera altos custos a um sistema de saúde já sobrecarregado. É uma síndrome de alta mortalidade e morbidade que afeta, em geral, pacientes jovens com plena capacidade produtiva. A identificação e o tratamento precoce desta síndrome reduzem a morbimortalidade, assim como o custo. A proteína C reativa (PCR) e a procalcitonina (PCT) são bem estudadas como ferramentas para diagnóstico de infecção bacteriana em imunocompetentes, mas seu uso como ferramenta diagnóstica ainda não está estabelecido em pacientes imunossuprimidos. Portanto, a proposta deste estudo é avaliar a acurácia diagnóstica destes biomarcadores, em pacientes críticos imunossuprimidos (vírus da imunodeficiência adquirida  HIV positivos, portadores de tuberculose (TBC), cirróticos e transplantados). Como o uso da proteína C ainda não está estabelecido, a primeira questão de pesquisa investigou seu potencial diagnóstico quando comparado ao teste padrão (cultural). O segundo artigo comparou a PCR com a PCT. Para isto foram realizados dois artigos de revisão sistemática com metanálise. O primeiro artigo comparou a acurácia em determinar infecção bacteriana em imunossuprimidos da PCR ao teste padrão-ouro (as culturas). A primeira revisão incluiu 1.418 pacientes e demonstrou uma boa acurácia da PCR como biomarcador no diagnóstico de infecção bacteriana, apresentando sensibilidade de 69% e especificidade de 76% com uma área sob a curva (AUC) de 0,77. Os resultados encontrados são similares aos da literatura para imunocompetentes,(3) sensibilidade de 75%, especificidade de 67% e Área Sob a Curva Receiver Operating Characteristic (AUROC) de 0,92. Quando a PCT foi comparada com a PCR, ambos os biomarcadores mostraram acurácia moderada na utilização como ferrramenta de diagnóstico de infecção bacteriana, com um diagnóstico da razão de chances (DOR) de 7,24 (95% CI (2,83-14,60) para PCT e de 5,56 (95% CI (5,21-10,30) para PCR. A PCT e a PCR apresentaram sensibilidade de 69% e 68% e uma especificidade de 75% e 71%, respectivamente. Ambas mostraram resultados semelhantes, podendo ser utilizadas no diagnóstico de sepse em imunossupressos. / Sepsis is a major public health problem, since its treatment generates high costs, a health system already overburdened. A high mortality and morbidity syndrome affects, in general, young patients with full production capacity. The identification and early treatment of this syndrome reduce morbidity and mortality as well as the cost. C-reactive protein (CRP) and procalcitonin (PCT) are well studied as tools for diagnosis of bacterial infection in immunocompetent patients, but its use as a diagnostic tool is not yet established in immunocompromised patients. Therefore, the purpose of this study is to evaluate the diagnostic accuracy of these biomarkers in immunosuppresses critical patients (human immunodeficiency virus, cirrhotic and transplant). As the use of the c protein is not yet established, the first research question investigated their diagnostic potential when compared to the pattern (cultural). The second article compared to CRP and PCT. For this, there were two articles of a systematic review and meta-analysis. The first article compared the accuracy in determining bacterial infection in immunosuppresses of CRP to the gold standard (cultures). Our first review included 1,418 patients and showed good accuracy of CRP as a biomarker for the diagnosis of bacterial infection presenting a sensibility of 69% and 76% specificity with an area under the curve (AUC) 0.77. The results are similar to those found in the literature for immunocompetent,(3) sensitivity 75%, specificity of 67% and Area Under the Receiver Operating Characteristic Curve (AUROC): 0.92. When the PCT was compared with PCR, both biomarkers showed a moderately accurate for use as tool diagnostic bacterial infection with a Odds ratio diagnostic (DOR) 7.24 (95% CI (2.83-14.60) and PCT to 5:56 (95% CI (5.21-10.30) for CRP. the PCT and CRP had a sensitivity of 69% and 68% and a specificity of 75% and 71%, respectively. Both showed similar results may be used in the diagnosis of sepsis in immunosuppression.

O pedestrianismo vem se tornando cada vez mais expressivo na atualidade, principalmente por assegurar condições de bem-estar físico, psicológico e social ao praticante. Partindo-se do pressuposto que deficiências nutricionais prejudicam o desempenho durante a corrida, corredores de longa duração vêm usufruindo da suplementação esportiva com o intuito de otimizar o rendimento. Todavia, faltam evidências científicas quanto aos recursos ergogênicos proporcionados pelos diversos suplementos alimentares comercializados. Sendo assim, o objetivo desta pesquisa foi comparar o desempenho de corredores de longa duração em um protocolo de exercício físico em esteira composto por três situações diferentes de suplementação: placebo, carboidrato e carboidrato associado à proteína hidrolisada. A amostra foi composta por 14 atletas do sexo masculino e o estudo apresentou design cross over com caráter duplo-cego. Inicialmente, foi realizada avaliação cardiorrespiratória e nutricional, sendo que esta última foi composta por antropometria (peso e estatura) e composição corporal (dobras cutâneas). Os indivíduos foram submetidos a um exercício físico em esteira constituído por 60 minutos com velocidade e inclinação correspondente ao Limiar Anaeróbio e posteriormente perduraram a atividade até a exaustão com intensidade 10% acima desta variável. Foi analisado o consumo alimentar por meio drae feinrgeenstetã ao energética diária e da quantidade de macronutrientes ingeridos nas 24 e 2 horas antecedentes aos exercícios. Mensurou-se a glicemia, o lactato sanguíneo, a percepção subjetiva de esforço e a frequência cardíaca durante os três protocolos de suplementação. A glicemia inicial e 5 minutos após a exaustão foi menor para o grupo placebo quando comparada aos outros dois grupos. Houve um aumento na glicemia e no lactato nos três grupos ao comparar momentos antes e durante o exercício (60 minutos) com momentos após o término da atividade (exaustão e 5 minutos após este estágio). Observou-se aumento na percepção subjetiva de esforço e na frequência cardíaca nos três grupos concomitantemente ao aumento da duração e/ou intensidade do exercício. Ao analisar o consumo alimentar e o tempo de exaustão dos atletas não foram constatadas diferenças estatísticas entre os três suplementos utilizados. Diante disto, analisando agudamente, não há justificativa para adicionar proteína ao suplemento de carboidrato durante a realização de exercícios de endurance com características semelhantes ao de nosso estudo. / The pedestrianism is becoming increasingly significant nowadays, mainly for ensuring conditions of physical, psychological and social well-being practitioner. Starting from the assumption that nutritional deficiencies impair performance during the race, long runners come enjoying the sports supplementation in order to optimize performance. However, they lack scientific evidence about the ergogenic resources provided by the various food supplements marketed. Thus, the aim of this study was to compare the performance of long runners in a physical exercise protocol on a treadmill consists of three different situations supplementation: placebo, carbohydrate and carbohydrate associated with hydrolyzed protein. The sample consisted of 14 male athletes and this study was double-blind with crossover design. Initially, individual performed cardiopulmonary and nutritional evaluation and the latter consisted of anthropometry (weight and height) and body composition (skinfold). The subjects underwent a physical exercise on a treadmill consists of 60 minutes with speed and inclination corresponding to Anaerobic Threshold and then endured the activity to exhaustion intensity with respect to 10% higher this variable. Food consumption through daily energy intake and the amount of macronutrients ingested in 24 and 02 hours before the exercise was analyzed. blood glucose, blood lactate, the perceived exertion and heart rat eI td wurainsg m theea stuhrreede supplementary protocols. The initial blood glucose and 5 minutes after the exhaustion was lower in the placebo group compared to the other two groups. There was an increase in blood glucose and lactate in the three groups when comparing time before and during exercise (60 minutes) with moments after the end of the activity (exhaustion and 5 minutes after this stage). There was an increase in perceived exertion and heart rate in the three groups concomitantly with increasing duration and/or intensity of exercise. By analyzing the food consumption and time to exhaustion of athletes were not found statistical differences between the three supplements used. Given this, there would be no acute justification for adding protein to carbohydrate supplement when performing endurance exercise with characteristics similar to our study.

Segundo a Associação Nacional dos Fabricantes de Alimentos para Animais (ANFAL) de 2005, existe atualmente no país cerca de 21 milhões de cães com endereço fixo, a segunda maior população do planeta, atrás apenas dos Estados Unidos. Deste total cerca de 34% recebe alimento industrializado, um indício dos cuidados diferenciados de que são objetos. Assim o presente trabalho tem por objetivo avaliar a palatabilidade de dietas para cães adultos de diferentes tamanhos através do protocolo de palatabilidade. Foram utilizadas 40 fêmeas caninas adultas, sendo: 10 de pequeno, 10 de médio e 20 de grande porte, sem raça definida (SRD). Foram avaliados quatro produtos comerciais identificados por sorteio com as letras (A, B, C e D), formuladas de acordo com as exigências NRC, 1974 e 1985. Assim foram efetuados seis testes de confronto de palatabilidade entre os quatro produtos, ou seja, A x B, C x B, A x C, D x B, D x C e D x A. Ao final do experimento pode-se constatar que em termos de palatabilidade os resultados indicaram a seguinte superioridade dos alimentos (%): 76 x 24, 91 x 09, 33 x 67, 59 x 41, 07 x 93 e 10 x 90 ou seja: (C > A > D > B). / According to the National Association of the Manufacturers of Foods for Animals (ANFAL) of 2005, exists now at the country about 21 million dogs with fixed address, the second largest population of the planet, behind just only of the United States. Of this total about 34% is fed with industrialized diet, an indication of the cares differentiated to they are objects. Like this the present work has for objective to evaluate the palatability of diets for adult dogs of different sizes through the palatability protocol. 40 adult canine females were used, being: 10 of small, 10 of medium and 20 of great size, without defined race. They were appraised four identified commercial products for draw with the letters (A, B, C and D), formulated in agreement with the demands NRC, 1974 and 1985. Like this six tests of palatability confrontation were made among the four products, in other words, A x B, C x B, x C, D x B, D x C and D x A. At the end of the experiment can be verified that in palatability terms the results indicated the following superiority of the diets (%): 76 x 24, 91 x 09, 33 x 67, 59 x 41, 07 x 93 and 10 x 90 or be: (C > A > D > B).

A purificação da proteína VP3 do vírus da anemia das galinhas (CAV), expressada em um sistema de expressão procariótico como uma proteína de fusão com cauda de histidina, está demonstrada neste estudo. Extraiu-se o DNA da partícula do CAV, obtida de fígado de galinha infectado. Amplificou-se o gene da proteína VP3 a partir do DNA extraído pela reação da polimerase em cadeia (PCR), para subseqüentes clonagem e expressão protéica. O produto recombinante da expressão (pTrc-VP3) foi identificado por PCR e sequenciamento. A técnica de Western blotting determinou a expressão da proteína de fusão VP3 com cauda de histidina de peso molecular de aproximadamente 21 KDa. Através da eluição do gel, obteve-se a purificação da proteína VP3 expressada com homogeneidade julgada pelo gel de poliacrilamida e dodecil sulfato de sódio. A proteína VP3 purificada foi reconhecida por anticorpos do CAV no método Western blotting. Este resultado indica que a proteína VP3 recombinante expressada no sistema do vetor pTrcHis2 pode ser utilizada como antígeno para detectar anticorpos contra o CAV. / Purification of chicken anemia virus (CAV) VP3 protein, expressed in a prokaryotic expression system as histidine-tagged fusion protein is demonstrated in the present study. CAV particle was obtained from infected liver of chicken and DNA was extracted. The VP3 protein gene was amplified from the extracted DNA by polymerase chain reaction (PCR) and cloned. The recombinant expression construct (pTrc-VP3) was identified by PCR and sequencing analysis. Expression of VP3 protein with a molecular mass of approximately 21 KDa was confirmed by Western blotting analysis with CAV-specific antibodies. The in vitro expressed VP3 protein was purified to near homogeneity by elution from the gel, as judged by sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis analysis. The purified VP3 protein was recognized by CAV antibodies in a Western blotting assay. This finding indicates that recombinant VP3 expressed in the pTrcHis2 vector system can be used as antigen to detect anti-CAV antibodies.

A pré-eclâmpsia (PE) é causa importante de mortalidade fetal e materna. Existem evidências que a resistência à insulina esteja implicada em sua fisiopatologia. A via Akt/PKB (Akt/ Proteína quinase B) é estimulada pela insulina e exerce várias funções vitais como crescimento, sobrevivência e metabolismo celular. O objetivo do trabalho foi comparar a expressão da Akt/PKB em placentas de pacientes normais e com pré-eclâmpsia estimuladas com insulina. Foram utilizadas amostras de placenta de 12 pacientes normais e de 12 pacientes com PE foram coletadas, estimuladas com insulina e analisadas por Western blot para quantificação da expressão da proteína Akt/PKB basal e fosforilada em serina473. Como resultados, a estimulação das amostras com a insulina foi comprovada quando comparamos grupos estimulados (1,14 ± 0,10) e não estimulados (0,91 ± 0,08), P< 0,001. A atividade da via da Akt/PKB fosforilada em serina473 foi semelhante entre placentas de mulheres normais (1,26 ± 0,16) e com PE (1,01 ± 0,11), P = 0,237. Concluímos que não há diferença de fosforilação na via da Akt/PKB, após estimulação com insulina, em placentas de pacientes com PE e normais. Contudo, não podemos descartar alterações desta via de sinalização na PE sem analisarmos os substratos da Akt/PKB quando estimulados. / Preeclampsia (PE) is an important cause of fetal and maternal mortality around the world and there are evidences that insulin resistance has been implicated in the pathophysiology of preeclampsia. Akt/PKB pathway is stimulated by insulin and performs several vital functions as growth, survival and cellular metabolism. Objective: to investigate stimulates expression of Akt/PKB pathway in the placenta, of normal and preeclampsia parturient. Method: samples were collected from 12 normal patients and 12 PE patients, stimulate and analyzed by Western blot to quantify the proteins expression in signaling of Akt/PKB. Results: stimulation of insulin samples was confirmed when comparing stimulated groups (1.14 ± 0.10) and non-stimulated (0.91 ± 0.08), P <0.001. The Akt/PKB phosphor (Ser473) was not different in placenta of the normal (1.26 ± 0.16) and PE (1.01 ± 0.11) groups, with P = 0.237. Conclusions: there was no difference of phosphorylation in Akt/PKB pathway, after stimulation with insulin, in placentas of normal and PE patients. However, we cannot discard effects in this signaling pathway as pathophysiology of PE, because it is still necessary to analyze the substrates stimulation of this pathway.

A doença de Alzheimer é uma desordem neurodegenerativa cuja patogenia não é completamente elucidada. Atribui-se ao peptídeo beta-amilóide (A ), em sua forma oligomérica ou fibrilada, um importante papel neste processo. Uma vez que a produção e a fibrilação do peptídeo ocorrem ao nível de membrana neural, sua dinâmica e composição lipídica podem modular a cascata amilóide e/ou interferir na extensão do dano gerado pela mesma. Tendo isto em vista e considerando o potencial sinalizatório dos glicoesfingolipídios, o objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito do peptídeo betaamilóide (A 25-35), em sua forma fibrilada ou não-fibrilada, sobre a biossíntese dos gangliosídios em modelo de cultura organotípica de hipocampo. Para tanto, foram utilizados ratos Wistar de 6-8 dias, dos quais o hipocampo foi dissecado, fatiado e submetido à cultura. No 28º dia de cultura foi adicionado A 25- 35 (25μM), em sua forma fibrilada ou não fibrilada; após 24h adicionou-se ao meio D- [1-14C]-galactose para avaliar a biossíntese dos gangliosídios; no 30º dia a morte celular foi analisada com iodeto de propídio. A partir das fatias, os gangliosídios radiomarcados foram extraídos, purificados, analisados por HPTLC, fluorografia e densitometria. Nossos resultados demonstraram uma alteração na biossíntese de gangliosídios induzida pelo peptídeo beta-amilóide A 25-35, um efeito que foi dependente de seu estado de fibrilação. Desta maneira, o A 25-35, em sua forma fibrilada, promoveu um aumento na biossíntese de GM3 e uma redução na biossíntese de GD1b, ao passo que o peptídeo não fibrilado levou a um aumento na síntese do gangliosídio GM1. Uma vez que o GM3 é considerado um gangliosídio apoptótico, quando expresso em neurônios adultos, um aumento em sua síntese pode estar relacionado aos eventos tóxicos desencadeados pelo peptídeo beta-amilóide fibrilado. O GM1, por sua vez, ainda não possui um papel suficientemente claro no desenvolvimento da doença de Alzheimer. Uma série de efeitos neuroprotetores são atribuídos a este gangliosídio enquanto fortes evidências sugerem que o GM1 poderia acelerar o processo de fibrilação do beta-amilóide, e assim influenciar a progressão da doença. A fim de investigar o papel do GM1 no presente modelo, realizamos uma série de experimentos com a finalidade de avaliar uma possível ação neuroprotetora deste gangliosídio. Como resultado, um pré-tratamento das fatias hipocampais com GM1(10μM) foi capaz de prevenir a toxicidade induzida pelo peptídeo beta-amilóide em sua forma fibrilada, como demonstram os resultados da captação de iodeto de propídio. Com o intuito de corroborar sua ação neuroprotetora, bem como investigar o mecanismo pelo qual esta neuroproteção seria mediada, analisamos o efeito de um tratamento com GM1 (1h, 6h, 12h ou 24h) sobre as alterações induzidas pelo peptídeo beta-amilóide no estado de fosforilação (ativação/inativação) da GSK3b. Nossos resultados demonstraram um importante efeito neuroprotetor do GM1 após 24 horas de tratamento, uma vez que nestas circunstâncias este gangliosídio foi capaz de reverter a ativação (defosforilação) da GSK3b, uma via de sinalização associada à morte celular programada. Como conclusão, nossos resultados dão suporte a participação dos gangliosídios em modelos de doença de Alzheimer, e sugerem uma ação neuroprotetora do gangliosídio GM1 frente à toxicidade induzida pelo beta-amilóide, o que, no futuro, pode ser explorado como uma alternativa terapêutica ao tratamento do Alzheimer. / Alzheimer disease (AD) is a neurodegenerative disorder whose pathogenesis is still poorly understood. It is attributed to beta-amyloid peptide, in its fibrillar or nonfibrillar forms, an important role in the disease development and progression. Once the production and fibrillation of beta-amyloid peptide occurs on the neural membrane surface, the lipid dynamic and composition of these membranes could modulate amyloid cascade and/or interfere in the damage triggered by it. Taking this into account, and considering the potential signalling role of glycosphingolipids, the objective of this study was to investigate the effect of fibrillar and non-fibrillar beta-amyloid peptide (Ab25-35) upon ganglioside biosynthesis in a model of organotypic hippocampal culture. In order to do this, we used 6-8 days old Wistar rats, whose hippocampi were dissected, sliced and subjected to culture. On the 28th in vitro day, A 25-35 (25μM) was added to the culture medium, in its fibrillar or non-fibrillar forms. After 24h incubation, D-[1-C14]-galactose was added to the medium with the purpose of labeling ganglioside; on day 30th in vitro day cell death was analyzed by PI uptake. The radiolabeled gangliosides were extracted from the hippocampal slices, purified, and analyzed by HPTLC, fluorography and densitometry. Our results demonstrated an Ab25-35 induced alteration in ganglioside biosynthesis, an effect which seemed to be dependent on the peptide fibrillation state. Furthermore, the fibrillar Ab25-35 caused an increase in GM3 and a reduction in GD1b biosynthesis, whereas the non-fibrillar form of this peptide was able to enhance the synthesis of GM1 ganglioside. Once GM3 is an apoptotic ganglioside, when expressed in adult neurons, an increase in its synthesis could take part of the toxic events triggered by the fibrillar betaamyloid peptide. GM1, in turn, has a still poorly understood participation in Alzheimer development. A sort of neuroprotective effects are attributed to this ganglioside while several evidences suggest that GM1 could accelerate the endogenous fibril formation, and thence influence the disease progression. To further investigate the role of GM1 ganglioside in our model, we have performed some experiments in order to test a possible neuroprotective effect of this gangliosides. As a result, a pre-treatment of the hippocampal slices with 10μM GM1 was able to prevent the toxicity triggered by the fibrillar beta-amyloid peptide, when measured by PI uptake protocol. In order to corroborate its neuroprotective action, as well as to investigate a candidate mechanism by which GM1 could promote neuroprotection, we have analyzed the effect of GM1 treatment (1h, 6h, 12h and 24h) upon the amyloid-induced alterations in GSK3b phosphorylation/dephosphorylation state. Our results demonstrated an important effect of GM1 after 24h incubation, once it was able to reverse the amyloid-induced dephosphorilation (activation) of GSK3b, a signalling pathway involved in apoptosis triggering. Taken together, our results provides new and important support for the ganglioside participation in Alzheimer models, and suggests a protective role of GM1 upon the amyloid induced toxicity, which, in the future, could expand the therapeutic strategy available for Alzheimer disease treatment.

Grãos de soja submetidos a tratamento térmico e/ou químico e farelos de soja de diferentes empresas foram avaliados em dois experimentos. No primeiro, foi verificado que a temperatura e o tempo de exposição do grão de soja ao calor e a adição de lignossulfonato de cálcio diminuiram significativamente a quantidade de amônia liberada in vitro após incubação de 6 horas e a degradabilidade da proteína após incubação ruminai in situ de 16 horas. A correlação entre essas duas variáveis foi alta (r = 0,9667). Houve diferença significativa na digestibilidade enzimática da proteína não degradada no rúmen. No segundo experimento, 21 amostras de farelos de soja oriundas de 5 empresas foram avaliadas quanto à degradabilidade ruminai da proteína bruta in vitro e in situ e foi determinada a digestibilidade enzimática da proteína que escapou da degradação ruminai. Foram verificadas diferenças significativas entre empresas, quanto à quantidade de amônia liberada in vitro, variando de 22,71 a 29,04 (%N-total), quanto à porção de proteína não degradável no rúmen (PNDR), variando de 46,12% a 54,56% e quanto à digestibilidade intestinal desta proteína (Dl), variando de 81,86% a 85,23%. Em conseqüência, houve diferenças entre os farelos quanto à proteína não degradável no rúmen digestível no intestino delgado (PNDRD), variando de 39,13 a 44,72 (3/0 PB) e 195,02 a 223,69 (g/kg MS). Pode-se concluir que há diferenças na degradabilidade ruminai e digestibilidade intestinal da proteína de amostras de farelos de soja produzidos no Rio Grande do Sul. / Heat treated and/or lignosulfonate treated soybeans and soybean meal samples from different producers were evaluated in two experiments. In the first trial the in vitro ammonia production during a six hours incubation period and the in situ rumen degradability were affected significantly due to heat and/or lignosulfonate treatments of cracked soybeans. The correlation between the in vitro ammonia production and the in situ rumen degradability was high (r = 0.9667). There was significant difference in the in vitro pepsinpancreatin digestibility of the protein portion undegraded in the rumen. In the second experiment 21 soybean meal samples from five different origens were submitted to the same procedures as in the first trial. Significant differences were determined as for in vitro ammonia production, ranging from 22.71 to 29,.04 (`)/0 of total N), for rumen undegradable protein, ranging from 46.12 to 54.56 % and for pepsin-pancreatin digestibility, varying from 81.86 to 85.23 %. Consequently ruminally undegraded intestinally available protein ranged from 39.13 to 44.72% of crude protein content and from 195.02 to 223.69 g/kg DM. It can be concluded that soybean samples collected from different producers from Rio Grande do Sul show different ruminai degradabilities and intestinal digestibilities.

Introdução: Nos últimos anos têm-se demonstrado que a vitamina D desempenha um papel crucial em muitas doenças agudas e crônicas, não só afetando as condições ósseas, mas também aumentando o risco de fraturas, doenças auto-imunes e câncer. A influência da vitamina D nas doenças do fígado tem sido amplamente discutida já que esta sofre metabolismo hepático. Indivíduos com doenças hepáticas, e em especial com hepatite C crônica, apresentam maior prevalência de deficiência de vitamina D. Objetivos: Avaliar, em duas amostras distintas, a influência dos níveis séricos de vitamina D e/ou dos polimorfismos envolvidos na sua rota metabólica na progressão da doença hepática crônica causada pelo vírus C. Métodos: A primeira amostra consistiu de um estudo transversal com 132 pacientes com hepatite C crônica genótipo 1 do Hospital de Clínicas de Porto Alegre (HCPA). Foi avaliada a influência de níveis séricos de vitamina D e dos polimorfismos rs7041 e rs4588 do gene GC no grau de fibrose hepática (escore METAVIR). As genotipagens foram feitas com ensaio TaqMan e as análises estatísticas foram realizadas no programa SPSS v.20.0. A segunda amostra consistiu da análise de dados extraídos da plataforma dbGaP. Foram investigados 681 pacientes com hepatite C crônica da coorte americana HALT-C, acompanhados pelo período quatro anos. Avaliou-se a relação de 40 polimorfismos dos genes DHCR7, GC, CYP2R1, CYP24A1, CYP27B1, VDR, SMAD3 e TGFB1 nos seguintes desfechos: piora da fibrose hepática; descompensação hepática (escore Child Pugh-Turcotte>7, ascite, encefalopatia hepática, peritonite bacteriana espontânea e/ou sangramento de varizes gastroesofágicas); desenvolvimento de carcinoma hepatocelular e morte do fígado. Os polimorfismos que não se encontravam disponíveis no banco de dados foram imputados com o programa Mach-Admix 2.0.203 e as análises foram no programa Plink 1.07 e foi realizada correção de Bonferroni. Nesta amostra, resultados com P<0,05 foram considerados 2 como tendência à associação. Resultados: Na amostra do HCPA, níveis diminuídos de vitamina D, bem como a deficiência grave de vitamina D, foram mais frequentes entre pacientes com fibrose intermediária/avançada (METAVIR 3 e 4). Embora os polimorfismos rs7041 e rs4588 e seus haplótipos tenham apresentado relação com os níveis séricos de vitamina D, estes não apresentaram associação com a gravidade da fibrose hepática. Na segunda amostra estudada, onze polimorfismos tiveram tendência à associação (P<0,05) com os desfechos analisados: quatro SNPs no gene DHCR7 com descompensação hepática (rs4944957, rs12800438, rs3829251 e rs4945008); dois no gene GC com piora da fibrose e morte do fígado (rs7041 e rs222020); dois no gene CYP2R1 com ascite ou carcinoma hepatocelular (rs7116978 e rs1562902); dois no gene VDR com sangramento de varizes gastresofágicas e carcinoma hepatocelular (rs4516035 e rs2239186); e um no gene SMAD3 com piora da fibrose e encefalopatia (rs2118610). Apenas um polimorfismo, rs1800469no gene TGFB1, apresentou associação com descompensação hepática após correção de Bonferroni (P<0,05/40). Conclusões: Nossos resultados demonstraram que níveis séricos menores de vitamina D estão associados à progressão da fibrose hepática na hepatite C crônica genótipo 1. Além disso, os onze polimorfismos da rota da vitamina D que apresentaram tendência à associação estatística, indicam que variantes genéticas da rota metabólica da vitamina D possuem fraca ou nenhuma relação com a progressão da hepatite C crônica, merecendo análises futuras. Já o polimorfismo rs1800469, do gene TGFB1, demonstrou potencial utilidade para auxiliar na identificação de pacientes com maior chance de descompensação hepática. / Introduction: In the past years it has been demonstrated that vitamin D plays a crucial role in many acute and chronic diseases, not only affecting bone conditions but increasing the chance of fractures, autoimmune diseases and cancer. Vitamin D influence in liver disease is also widely discussed since it undergoes trough hepatic metabolism. Subjects with liver diseases, especially chronic hepatitis C, present higher rates of vitamin D deficiency. Objectives: Evaluate, in two different samples, the influence of vitamin D serum levels and/or polymorphisms of vitamin D metabolic pathway in liver disease progression in patients with chronic hepatitis C. Methods: The first sample consisted of a transversal study with 132 patients from Hospital de Clínicas de Porto Alegre (HCPA) with chronic hepatitis C genotype 1. We evaluated the influence of serum levels of vitamin D and rs7041 and rs4588 GC polymorphisms over liver fibrosis (METAVIR scoring). Genotyping was performed with TaqMan probes and statistical analyses were conducted using SPSS v.20.0. The second sample was extracted from HALT-C cohort available in dbGap plataform. It included 681 patients with chronic hepatitis C, followed for 4 years. Forty polymorphisms in DHCR7, GC, CYP2R1, CYP24A1, CYP27B1, VDR, SMAD3 and TGFB1 genes were analyzed with the following outcomes: worsening of fibrosis; hepatic decompensation (gastric/esophageal bleeding, CTP > 7, ascites, spontaneous bacterial peritonitis, and/or encephalopathy); development of hepatocellular carcinoma; and liver death. Polymorphisms not available in dbGaP data were imputed using Mach-Admix 2.0.203 software and analyses were performed in Plink v.1.07 and a Bonferroni’s correction was performed. Results with P<0.05 were considered as having tendency towards association. Results: In HCPA sample low serum vitamin D, as well as severe vitamin D deficiency, were more frequent among patients with intermediate/severe fibrosis (METAVIR 3 and 4). Although rs7041 and rs4588 4 polymorphisms and its haplotypes presented association with serum levels of vitamin D, they were not associated with severity of liver fibrosis. In sample two, eleven polymorphisms presented tendency towards association (P<0.05) with the studied outcomes: four SNPs in DHCR7 with hepatic decompensation (rs4944957, rs12800438, rs3829251 and rs4945008); two in GC with worsening of fibrosis and liver death (rs7041 and rs222020); two in CYP2R1 with ascites or hepatocellular carcinoma (rs7116978 and rs1562902); two in VDR with gastric/esophageal bleeding and hepatocellular carcinoma (rs4516035 and rs2239186); and one in SMAD3 with worsening of fibrosis and encephalopathy (rs2118610). Only one polymorphism, rs1800469 in TGFB1, showed statistical significance with hepatic decompensation after Bonferroni’s correction (P<0.05/40). Conclusions: Our results demonstrated that low serum vitamin D has association with fibrosis progression in chronic hepatitis C genotype 1. Also, the eleven polymorphisms with tendency towards association indicate that genetic variants in vitamin D pathway possess weak or none relation with progression of chronic hepatitis C, deserving future analyses. Finally, polymorphism rs1800469 in TGFB1 demonstrated potential utility to help identify patients with higher odds of hepatic decompesantion.