O câncer de esôfago é a sexta neoplasia maligna mais comum no mundo. No Rio Grande do Sul, Brasil, o carcinoma epidermóide de esôfago apresenta coeficientes de mortalidade elevados e com tendência ascendente com, pelo menos, o dobro dos coeficientes padronizados de mortalidade encontrados em outros estados brasileiros ou em países do cone sul da América latina. O diagnóstico tardio parece ser o principal responsável pelo mau prognóstico. Nos últimos anos, diversos estudos têm demonstrado a possibilidade de identificação das lesões precursoras do câncer esofágico, mas sem repercussão no prognóstico, até o momento. Considera-se, atualmente, que a carcinogênese esofágica está relacionada a uma interação entre fatores ambientais e anormalidades genéticas Recentemente, estudos em biologia molecular têm demonstrado a influência dos fatores reguladores do ciclo celular no prognóstico de diversas moléstias, inclusive o câncer. O Rb é um gene supressor tumoral envolvido no mecanismo de controle do ciclo celular, cuja expressão tem sido demonstrada no câncer do esôfago. O objetivo deste estudo foi determinar a prevalência da perda da expressão da proteína pRb na mucosa esofágica de indivíduos sob risco para o carcinoma epidermóide de esôfago, bem como relacionar esta expressão com o consumo de tabaco, álcool e chimarrão, achados histopatológicos e cromoscopia com lugol. Foram estudados 170 casos e 20 controles através de reação imunohistoquímica utilizando anticorpo monoclonal anti-pRb em amostras teciduais fixadas em formalina e armazenadas em parafina. Um total de 33 casos demonstrou perda da expressão imunohistoquímica da proteína pRb, determinando uma prevalência de 19,4% na amostra estudada. Não houve associação estatisticamente significativa entre a perda da expressão da proteína pRb e as variáveis idade, raça, exposição ao fumo, álcool e chimarrão, bem como a cromoendoscopia com lugol. Foi demonstrada uma associação significativa entre a perda da expressão da pRb com a história de câncer na família. Da mesma forma, foi demonstrada uma associação linear significativa entre a perda da pRb e o grau histopatológico das lesões. Estes resultados demonstraram uma influência da proteína pRb na evolução da carcinogênese esofágica e permitem sugerir que os indivíduos expostos aos fatores de risco estudados sejam candidatos a uma maior vigilância.

Tese de Doutorado apresentada ao Programa de Pós-Graduação em Ciências da Saúde da Universidade do Extremo Sul Catarinense – UNESC, para obtenção do título de Doutora em Ciências da Saúde. / The present study aimed to evaluate neurochemical and behavioral parameters in early and late phases in male Wistar rats (60 days old, 250-300g) subjected to an animal model of sepsis induced by cecal ligation and perforation. This work was divided in 3 steps: in the Experiment I, the animals were divided into groups Sham (control), Sepsis 30 days or Sepsis 60 days, with n=12. After, were dissected the prefrontal cortex, hippocampus, striatum and cortex in order to evaluate thiobarbituric acid reactive substances (TBARS) levels; carbonyl groups; activities of complexes I, II, II-III and IV of the mitochondrial respiratory chain and creatine kinase (CK). The cerebrospinal fluid was collected for quantification of TNF-, IL-1 and IL-6 cytokines, with n=5. In the Experiment II, the animals were divided into groups Sham, Sepsis and Sepsis+Sodium butyrate (SB), for (24 hours and 10 days), with n=12. SB or artificial cerebrospinal fluid were injected in the lateral ventricle in the brain of animals. After 24 hours or 10 days were dissected prefrontal cortex, hippocampus, striatum and cortex for histone deacetylase (HDAC) activity analysis. The inhibitory avoidance test was performed after 10 days of sepsis induction. In Experiment III, the animals were subjected to sham or sepsis 24 hours and 10 days, with n=5. After, the hippocampus was dissected for quantification of the phosphorylation levels of proteins ERK1/2, JNK1/2 and p38MAPK by Western blotting. The results of Experiment I showed increased levels of IL-6 in the sepsis group (30 days); increased levels of TNF- in the sepsis group (60 days); increased levels of TBARS in the prefrontal cortex and decreased in the hippocampus, striatum and cortex in the sepsis group (30 days); decreased carbonyl groups in the prefrontal cortex and the striatum and increased in the sepsis group (30 days); decreased levels of TBARS in the hippocampus in the sepsis group (60 days); increased carbonyl groups in the striatum in sepsis group (60 days); increased complex IV activity in the hippocampus in the sepsis group (30 days); decreased complex I activity in the prefrontal cortex, hippocampus and striatum in the sepsis group (60 days) and no statistical difference of CK activity in all analyzed brain structures. All data were analyzed by comparing the sepsis group (30 and 60 days) with the sham group. The results of Experiment II showed a decrease in latency in the animals of sepsis group (10 days) in the inhibitory avoidance test and the administration of SB reversed the cognitive damage observed in these animals. There was also an increase in HDACs activity in hippocampus and cortex in the sepsis group (24 hours) and prefrontal cortex and hippocampus in sepsis group (10 days). Moreover, the administration of SB inhibited HDAC activity in the prefrontal cortex and hippocampus of animals from sepsis group (10 days). All data were analyzed by comparing the sepsis group (24 hours and 10 days) with the sham group. The results of Experiment III showed no statistical difference between the sham and sepsis groups on the levels of phosphorylation of proteins ERK1/2, JNK1/2 and p38MAPK in 24 hours and 10 days after sepsis induction. Taken together, the results of the present study may contribute for comprehending the cognitive damage observed in sepsis survivor rats, providing new insights that might have clinical relevance. / O objetivo deste estudo foi avaliar parâmetros neuroquímicos e comportamentais em fases iniciais e tardias em ratos submetidos ao modelo animal de sepse induzido por ligação e perfuração cecal. No experimento I, ratos Wistar machos (60 dias, 250-300g) foram divididos entre os grupos Sham (controle), Sepse 30 dias e Sepse 60 dias, com n=12. Após, foram retirados o córtex pré-frontal, hipocampo, estriado e córtex para análises dos níveis de substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico (TBARS); conteúdo de grupos carbonila; atividade dos complexos I, II, II-III e IV da cadeia respiratória mitocondrial e da enzima creatina quinase (CK). O fluido cerebrospinal foi coletado para quantificação das citocinas TNF-, IL-1 e IL-6, com n=5. No experimento II, os animais foram divididos entre os grupos Sham, Sepse e Sepse+Butirato de sódio (SB) (24 horas e 10 dias), com n=12. Por meio de cirurgia estereotáxica, SB ou fluido cerebroespinal artificial foram injetados no ventrículo lateral cerebral dos animais. Em 24 horas e 10 dias após, foram retirados o córtex pré-frontal, hipocampo, estriado e córtex, para análise da atividade de histonas desacetilases (HDAC). O teste de esquiva inibitória foi realizado 10 dias após a indução de sepse. No experimento III, os animais foram divididos entre os grupos sham e sepse 24 horas e 10 dias, com n=5. Após, o hipocampo foi retirado para quantificação dos níveis de fosforilação das proteínas ERK1/2, JNK1/2 e p38MAPK por Western blotting. Os resultados do Experimento I mostraram um aumento nos níveis de IL-6 no grupo sepse (30 dias); aumento nos níveis de TNF- no grupo sepse (60 dias); um aumento nos níveis de TBARS em córtex pré-frontal e uma diminuição destes níveis em hipocampo, estriado e córtex no grupo sepse (30 dias); uma diminuição do conteúdo de grupos carbonila em córtex pré-frontal e um aumento em estriado no grupo sepse (30 dias); uma diminuição nos níveis de TBARS em hipocampo no grupo sepse (60 dias); aumento do conteúdo de grupos carbonila em estriado no grupo sepse (60 dias). Também houve um aumento na atividade do complexo IV em hipocampo no grupo sepse (30 dias); uma diminuição na atividade do complexo I em córtex pré-frontal, hipocampo e estriado no grupo sepse (60 dias) e nenhuma diferença estatística na atividade da CK entre as estruturas cerebrais analisadas. Todos os dados foram analisados comparando o grupo sepse (30 e 60 dias) com o grupo sham. Já os resultados do Experimento II mostraram uma diminuição no tempo de latência nos animais do grupo sepse (10 dias) no teste de esquiva inibitória e a administração de SB reverteu o dano cognitivo observado nestes animais. Também foi observado um aumento na atividade de HDACs em hipocampo e córtex no grupo sepse (24 horas) e em córtex pré-frontal e hipocampo no grupo sepse (10 dias). Além disso, a administração de SB inibiu a atividade de HDACs em córtex pré-frontal e hipocampo dos animais do grupo sepse (10 dias). Todos os dados foram analisados comparando o grupo sepse (24 horas e 10 dias) com o grupo sham. Por fim, os resultados do Experimento III mostraram que não houve diferença significativa entre os grupos sham e sepse nos níveis de fosforilação das proteínas ERK1/2, JNK1/2 e p38MAPK em 24 horas e 10 dias após a sepse. Tomados em seu conjunto, os dados deste estudo podem contribuir para a compreensão do dano cognitivo observado em ratos sobreviventes à sepse, proporcionando novos conhecimentos que possam ter relevância clínica.

Dissertação de Mestrado apresentada ao Programa de Pós Graduação em Ciências da Saúde, da Universidade do Extremo Sul Catarinense – UNESC, para obtenção do título de Mestre em Ciências da Saúde. / O hábito de fumar induz diversas alterações ao sistema cardíaco e isso pode estar relacionado, pelo menos em parte, à excessiva formação de espécies reativas de oxigênio. Evidência recente demonstra que o acúmulo de espécies reativas está envolvido em vários processos importantes, um deles é a autofagia. Uma das moléculas envolvidas na regulação da autofagia é a AMPK. A AMPK estimula a ULK e consequentemente outras proteínas relacionadas a autofagia. No entanto, o conhecimento sobre esse processo carece de maiores investigações. Diante disso, o presente estudo avaliou o envolvimento das espécies reativas de oxigênio no processo autofágico no músculo cardíaco de camundongos expostos à fumaça de cigarro. Foram utilizados camundongos Swiss expostos à 4 cigarros comerciais com filtro por sessão, 3 sessões/dia, todos os dias da semana por 7, 15, 30 e 45 dias (n=10) e o grupo controle. Os animais sofreram eutanásia, o tecido cardíaco foi removido e realizado análises moleculares e bioquímicas. Nos grupos expostos à fumaça de cigarro por 30 e 45 dias, observou-se maiores alterações no processo autofágico no tecido cardíaco; o tempo de 30 dias de exposição foi utilizado para os experimentos posteriores (suplementação com N-acetilcisteína e cessação da fumaça de cigarro por 30 dias). Após protocolo de exposição, suplementação e cessação da fumaça de cigarro por 30 dias os animais sofreram eutanásia, o tecido cardíaco foi removido e realizado análises bioquímicas e moleculares. Os resultados demonstraram que a exposição à fumaça de cigarro por diferentes dias aumentou a produção de espécies reativas de oxigênio, fosforilação de AMPK e ULKser317, níveis proteicos de sestrina 2, Atg5 e LC3 II e diminuiu a fosforilação de mTOR. Após o uso de antioxidante e a cessação da fumaça de cigarro por 30 dias, a produção de espécies reativas de oxigênio foi significamente menor nos grupos suplementados e cessados por 30 dias em relação aos animais expostos por 30 dias. Em adição, a fosforilação de AMPK e ULKser317 e os níveis proteicos de sestrina 2, Atg5 e LC3 II foram menores nesses grupos. Além disso, a fosforilação de mTOR foi aumentada nos grupos suplementados com n-acetilcisteína e no grupo com cessação da fumaça. Os resultados demonstraram que a exposição da fumaça de cigarro aumenta a autofagia mediada pelas espécies reativas de oxigênio no tecido cardíaco de camundongos Swiss.

Grado de magíster en ciencias biológicas / La resistencia a la insulina (RI) es una condición metabólica frecuente, en la que hay una acción deficiente de esta hormona en los distintos tejidos en relación a un aumento de la glicemia. Es un factor de riesgo para el desarrollo de diabetes mellitus tipo 2 (DM2), dislipidemia, hipertensión arterial y otras enfermedades crónicas no transmisibles. La proteína C reactiva (PCR) es un marcador de inflamación sistémica observándose un aumento de baja magnitud en obesos, proporcional a la masa grasa corporal. La inflamación de bajo grado se ha relacionado con desarrollo de RI y DM2. Algunos estudios han demostrado asociación entre esta inflamación (medida por PCR) con RI, sin embargo, esta asociación no se ha analizado, a nivel poblacional, en población adulta joven Chilena. Hipótesis: La inflamación, determinada a través de PCR-us, se asocia con un aumento de la insulina y el HOMA, encontrándose también una gradiente de asociación directa, entre valores altos de PCR-us con insulina y HOMA elevados. Estas asociaciones serán más marcadas en mujeres. Objetivo: estimar la asociación de PCR con insulina y HOMA en adultos jóvenes. Metodología: Estudio de corte transversal de personas nacidas en la V Región, entre los años 1988 y 1992, entrevistadas entre 2014 y 2017 (n = 687) y que cuentan con las variables de interés: insulina, glicemia y PCR-us, además de antropometría, escolaridad, actividad física y tabaquismo. Se buscó la asociación de inflamación medida con PCR-us, con insulina y HOMA mediante regresiones lineales y logísticas. Resultados: Un 41% (IC: 37.3-45) de la población presenta HOMA elevado, 7% (IC: 5.1-8.9) insulina elevada y 38% (IC: 33-44) PCR-us elevada. Se encontró una asociación directa entre PCR-us con insulina (β: 0.3, IC: 0.09-0.5; p=0.005) y HOMA (β: 0.1, IC: 0.04-0.16; p=0.003). También entre inflamación (moderada) con insulina (β: 2.7, IC: 0.9-3.1; p=0.004) e inflamación (moderada y alta) con HOMA (β: 0.81 y 0.92, IC: 0.27-1.34 y 0.05-1.83; p=0.003 y 0.049 respectivamente) luego de ajustar por sexo, edad, escolaridad, tabaquismo, actividad física y obesidad. Conclusión: existe una asociación directa entre PCR con insulina y HOMA y entre PCR elevada con HOMA elevado.

Submitted by Alessandra Portugal (alessandradf@ioc.fiocruz.br) on 2013-09-24T19:58:00Z No. of bitstreams: 1 Eduardo_regis_tese_doutorado_FINAL_total.pdf: 9624685 bytes, checksum: ea18ab165120397862060c5181e22f91 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-09-24T19:58:00Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Eduardo_regis_tese_doutorado_FINAL_total.pdf: 9624685 bytes, checksum: ea18ab165120397862060c5181e22f91 (MD5) Previous issue date: 2012 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / Os parasitos do gênero Leishmania são protozoários que se replicam em macrófagos após a infecção do hospedeiro vertebrado pelo vetor flebotomíneo. O controle da infecção depende basicamente do desenvolvimento de uma robusta resposta do tipo Th1 específica contra o parasito, e a IL-27 já foi descrita como uma citocina capaz de participar nos estágios inciais do comprometimento para Th1. Nesta tese, investigamos a função direta de IL-27 na interação macrófago/L.amazonensis, e observamos que esta citocina é expressa por macrófagos infectados pela L.amazonensis de maneira depentende de PKR e interferons do tipo I. Curiosamente, pacientes infectados por diversas espécies de Leishmania apresentam níveis menores de IL-27 no soro/plasma quando comparados aos controles. Ainda, a IL-27 promove a replicação de L.amazonensis tanto em macrófagos humanos quanto murinos. Buscando mapear as vias de sinalização envolvidas no aumento parasitário mediado pela IL-27, demonstramos que a IL-27 é capaz de induzir a ativação/fosforilação de PKR em macrófagos, e que o bloqueio desta enzima e até a deleção gênica, anulam o crescimento intracelular da Leishmania promovido pela IL-27. Ainda, demonstramos que a indução de IL-10 pela IL-27 é fortemente regulada pela PKR. Bloqueamos o receptor de IL-10 na superfície de macrófagos infectados pela Leishmania e observamos que esta citocina é a mediadora do aumento de L.amazonensis promovido pela IL-27. Finalmente, como IL-27 diminui a replicação do HIV-1, nós analisamos o papel desta citocina na co-infecção HIV-1/Leishmania através da exposição de macrófagos albergando estes patógenos à IL-27. Nós encontramos que esta interleucina não parece modular o crescimento parasitário neste modelo. Em conclusão, demonstramos que a IL-27 é um fator indutor do crescimento de L.amazonensis em macrófagos e parece contribuir significativamente na biologia deste parasito. / Leishmania is a protozoan parasite that replicates within macrophages after vertebrate infection by the sandfly vector. The infection control basically depends on the robust development of a specific Th1 response against the parasite, and Interleukin (IL)- 27 has been described as a cytokine able to participate in the early steps of Th1 commitment. Here, we addressed the function of IL-27 on the interplay between macrophages and L. amazonensis, and we observed that this cytokine is expressed by macrohpages infected by L.amazonensis and that expression is dependent on PKR and type I interferons. Curiously, patients harboring a variety of Leishmania species present lower levels of IL-27 in plasma/serum when compared to healthy individuals.Trying to map the signaling pathway involved in the IL-27-mediated Leishmania growth enhancement, we demonstrated that IL-27 is able to induce Protein Kinase R (PKR) activation/phosphorilation in macrophages, and that enzyme blockage, or even gene deletion, abrogates the intracellular Leishmania enhancement driven by IL-27. In addition, we showed that IL-10-induction by IL-27 is strongly regulated by PKR. We blocked IL-10 receptor on the surface of Leishmania-infected macrophages and we described that IL-10 is the critical mediator of IL-27-mediated L. amazonensis augmentation. To finish, IL-27 is known to diminish HIV-1 replication, thus, in order to investigate the role of this cytokine in HIV-1/Leishmania co-infection, we exposed macrophages harboring both pathogens to IL-27 and found that this interleukin does not seem to modulate parasite growth in this model. In conclusion, we found that IL-27 is an inducer of L.amazonensis growth inside macrophages and contributes with this parasite biology.

A seleção de animais mais produtivos e a melhoria da qualidade do leite são os principais objetivos dos caprinocultores. Desta forma, o presente estudo, sob a hipótese de que o estresse pode intensificar o processo de apoptose durante a lactação, propõe estudar o efeito do estresse (via administração de ACTH) em animais estressados pontualmente (durante toda a lactação) e submetidos a estresse prolongado (durante três dias seguidos), sobre os níveis de cortisol, quantidade e qualidade do leite produzido e taxa de apoptose das células mamárias. Durante o experimento foram utilizadas 12 cabras primíparas da raça Saanen, subdivididas em 2 grupos e submetidas a aplicação de ACTH/Placebo bimensalmente. Ao longo de todo experimento foram realizadas coletas de sangue pontuais e durante os desafios, além de coletas de leite para mensurar os componentes e a Contagem de Células Somáticas (CCS). Não houve diferenças entre os grupos na produção leiteira e dos componentes do leite (proteína, gordura, lactose e CCS). Nos dias de desafio, animais que receberam ACTH obtiveram picos de produção de cortisol, diferentemente das fêmeas que receberam Placebo. Portanto conclui-se que mesmo produzindo cortisol, as fêmeas não obtiveram queda na qualidade tampouco na quantidade de leite produzido, o estresse de curta duração não traz prejuízos produtivos ao animal. / The selection of productive animals and milk quality improvement are the main goals of goat breeders. According to the hypothesis that stress can intensify the apoptosis process during lactation, the purpose of this research is to study stress effect through ACTH administration in animals stressed during lactation and submitted to a three day stress period. Twelve first-rate pregnancy Saanen goats were subdivided in two groups and submitted to ACTH and Placebo treatment once every two months. During the experiment, blood and milk samples were collected to measure Somatic Cell Count (SCC), protein, fat and lactose. Cortisol levels, quantity and quality of produced milk and mammary cells apoptosis rate were analyzed. As a result, there were no differences in milk production, protein, fat, lactose and SCC levels between both groups. On the other hand, animals who received ACTH obtained cortisol peaks, differently than those who received Placebo. Despite cortisol production, the quality and quantity of produced milk did not changed. Concluding, a short stress period does not impact on the goat milk production.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:22Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-07-11Bitstream added on 2014-06-13T19:35:20Z : No. of bitstreams: 1 silva_n_me_jabo.pdf: 388385 bytes, checksum: d63f1e8443ba711c0afd71f2f0445af1 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Como alternativa ao controle químico, principal método de controle de pragas agrícolas, a bactéria entomopatogênica Bacillus thuringiensis (Bt) é um agente de controle com características tóxicas e ambientais que permitem o controle de insetos-praga de acordo com as premissas do MIP. Com o objetivo de buscar novas linhagens potencialmente tóxicas para Sitophilus oryzae (L., 1763) (Coleóptera, Curculinidae), caracterizou-se molecularmente 1.073 isolados de B. thuringiensis de diferentes partes do Brasil quanto ao conteúdo do gene cry35Ba. O material genético foi extraído através do kit InstaGene Matrix, utilizado para a amplificação das seqüências através da técnica de PCR, sendo os resultados visualizados em gel de agarose 1,5%. A classe do gene cry35Ba foi representada por 60 isolados (5,6%) de Bt, os quais foram submetidos ao bioensaio com larvas de S. oryzae. Dentre os isolados estudados, quatro causaram mortalidade acima de 50% nos testes de patogenicidade, e os isolados 544 e 622 foram os mais virulentos, conforme determinado pela estimativa da CL50. Nos quatro isolados que demonstraram toxicidade, foi detectado através da microscopia eletrônica a presença de cristais esféricos, e um isolado apresentou cristais bipiramidais e cubóides e pôde-se verificar proteínas com 44 kDa, referentes aos genes cry35Ba por SDS-Page. Esses dados demonstram o potencial de Bt no manejo de S. oryzae e estudos são necessários para determinar a melhor forma de utilização desta tecnologia no manejo dessa praga. / An alternative to chemical control, which is the major agricultural pest control method, the entomopathogenic bacterium Bacillus thuringiensis is a control agent with toxic and environmental characteristics that allows the control of pest insects according to the IPM precepts. In order to find new strains, potentially toxic to Sitophilus oryzae Lineu, 1763 (Coleoptera: Curculinidae), 1073 strains of B. thuringiensis from different parts of Brazil were characterized molecularly for the cry35Ba gene. Genetic material was extracted with InstaGene Matrix kit, used for the amplification of sequences in PCR, and viewed in 1,5% agarose gel. The gene cry35Ba class was represented by 60 B. thuringiensis isolates (5.6%), which were then subjected to bioassays with S. oryzae larvae. Among the isolates studied, four caused more than 50% mortality in the pathogenicity tests, and the isolates 544 and 622 were the most virulent, as determined by CL50 estimates. The four isolates the were toxic showed in the electron microscopy the presence of spherical, and isolates one presented crystals bipyramidal and cuboid crystals, and a 44-kDa protein was found in SDS-Page, which correspond to the product of cry35Ba genes. These data demonstrate the potential of B. thuringiensis for the management of S. oryzae larvae. More studies are required to determine the best use of these isolates for pest management.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:28:03Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-02-02Bitstream added on 2014-06-13T19:57:22Z : No. of bitstreams: 1 bassan_jc_me_arafcf_parcial.pdf: 63703 bytes, checksum: 8b9bc74a9baab69ea2ec520e84ab90dc (MD5) Bitstreams deleted on 2015-03-12T12:02:45Z: bassan_jc_me_arafcf_parcial.pdf,Bitstream added on 2015-03-12T12:03:14Z : No. of bitstreams: 1 000682632.pdf: 939229 bytes, checksum: 4f9b453ce3606382c9d71aaba154fcb5 (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Universidade Estadual Paulista (UNESP) / O leite de búfala representa 12% da produção mundial de leite, com maiores teores de proteínas e gorduras que o de vaca. O soro de leite é o co-produto da indústria queijeira que vem sendo, muitas vezes, descartado no meio ambiente, causando grande impacto ambiental em função de sua constituição rica em proteínas e lactose. Hidrólise enzimática é um avanço tecnológico importante por melhorar propriedades físicas, químicas e funcionais dessas proteínas. O objetivo do trabalho foi produzir hidrolisados protéicos a partir das proteínas presentes no soro do leite de búfala e simular a digestão in vitro pelo método da dialisabilidade. O soro lácteo bubalino foi dialisado para retirada de lactose e pequenos peptídeos e aminoácidos, e tratado com caulim para adsorção da gordura. Os produtos de médio e alto grau de hidrólise foram obtidos por ação da pepsina, tripsina, quimotripsina e carboxipeptidase A em pHs e temperaturas específicos, adicionados ao soro conjuntamente e em separado, em diferentes tempos de hidrólise. A determinação quantitativa de proteínas, aminoácidos, lactose e gordura foram realizadas segundo os métodos Bradford (1976), cromatografia líquida de alta eficiência, Miller (1959) e Gerber, respectivamente. A caracterização qualitativa das proteínas e produtos de hidrólise fez-se por eletroforese não-desnaturante (PAGE) e desnaturante (SDS-PAGE). Os ensaios de biodisponibilidade dos produtos de hidrólise foram realizados pelo método in vitro da dialisabilidade segundo metodologia descrita por Luten et al. 1996. Os resultados encontrados para o soro deslactosado e desengordurado foram 6,53g prot.L -1 , redução de 99% de lactose e < 0,10 % de gordura. Bandas protéicas... / Buffalo milk represents 12% of world production of milk, with high protein and fat content of the cow. The whey is the co-product of cheese industry that has been often discarded into the environment, causing great environmental impact due to its rich protein and lactose constitution. Enzymatic hydrolysis is an important technological advance to improve the physical, chemical and functional properties of these proteins. The objective of this research was to produce protein hydrolysates from whey proteins present in buffalo milk and to simulate the digestion in vitro by the method of dialyzability. The whey was dialyzed to remove lactose and small peptides and amino acids, and treated with kaolin for fat adsorption. The partial and total hydrolysates were obtained by the action of pepsin, trypsin, chymotrypsin and carboxypeptidase A in specific pH and temperature, added to the whey together or separately at different times of hydrolysis. Quantitation of proteins, amino acids, lactose and fat were performed according to Bradford (1976), HPLC, Miller (1959) and Gerber respectively. The qualitative characterization of proteins and hydrolysis products was made by PAGE and SDS-PAGE. Tests of absorption of hydrolysis products were performed in vitro by dialyzability. The results for dialyzed and defatted whey was 6.53 g prot L -1 , reduction of 99% lactose and <0.10% fat. Protein bands... (Complete abstract click electronic access below)

Submitted by RAFAELA SPERANZA BAPTISTA null (rafa.baptista@terra.com.br) on 2016-12-21T10:55:12Z No. of bitstreams: 1 DISSERTAÇÃO RAFAELA SPERANZA BAPTISTA.pdf: 2858885 bytes, checksum: 10670fa21899fbde7f86a510301fcf2d (MD5) / Approved for entry into archive by Felipe Augusto Arakaki (arakaki@reitoria.unesp.br) on 2016-12-22T12:48:47Z (GMT) No. of bitstreams: 1 baptista_rs_me_araca.pdf: 2858885 bytes, checksum: 10670fa21899fbde7f86a510301fcf2d (MD5) / Made available in DSpace on 2016-12-22T12:48:47Z (GMT). No. of bitstreams: 1 baptista_rs_me_araca.pdf: 2858885 bytes, checksum: 10670fa21899fbde7f86a510301fcf2d (MD5) Previous issue date: 2016-12-09 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Ao final da gestação o neonato deve estar preparado, por meio de modificações funcionais e estruturais de órgãos e sistemas para dar início à vida extra-uterina. Os animais prematuros nascem antes deste processo estar completo, apresentando falhas na maturação. O objetivo deste estudo foi tentar identificar por meio da técnica de eletroforese em gel de poliacrilamida em dodecil sulfato de sódio (SDS-PAGE) proteínas de fase aguda, dentre elas, albumina, ceruloplasmina, transferrina, haptoglobina, glicoproteína ácida e imunoglobulinas A e G, que possam indicar a maturação no neonato prematuro. Os cordeiros foram divididos em seis grupos experimentais (parto normal, cesárea a termo, cesárea prematura, cesárea prematura com administração pré-parto materna de dexametasona, cesárea com administração de surfactante nos prematuros e cesárea prematura com administração pré-parto materna de dexametasona e surfactante ao neonato). Os resultados indicaram que após a administração de colostro, independente do tratamento, os valores séricos de proteína total e imunoglobulinas G aumentaram, indicando que há transferência de imunidade passiva através do trato gastrointestinal. A transferrina tem seus teores superiores em animais com idade gestacional superior, demonstrando potencial para ser utilizado como marcador de maturação neonatal. / At the end of gestation the neonate should be prepared, with functional and structural modifications of organs and systems to initiate extrauterine life. Premature animals are born before this process is complete, presenting maturation failures. The aim of this study was to identify an acute phase protein, such as albumin, ceruloplasmin, transferrin, haptoglobin, acid glycoprotein and immunoglobulins A and G, that demonstrates that different treatments indicate a maturation in the premature neonate using sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis technique (SDS-PAGE). The lambs were divided into six experimental groups (normal birth, full-term cesarean section at normal time of gestation, premature cesarean section, premature cesarean section whose mothers received prepartum dexamethasone, cesarean section giving surfactante to the prematures and premature cesarean giving prepartum dexamethasone to the mothers and surfactant to the neonate). The results indicated that after administration of colostrum, regardless of treatment, total serum protein and immunoglobulins increased, showing the transfer of passive immunity through the gastrointestinal tract. Transferrin has higher levels in animals with higher gestational age, demonstrating potential as a marker of neonatal maturation. / FAPESP: 2011/18810-3

Submitted by CLEITON SILVA MARQUES null (biocleitond2@yahoo.com.br) on 2017-06-14T16:42:05Z No. of bitstreams: 1 MS 201513939-9 Dissertação Cleiton Silva Marques.pdf: 1951878 bytes, checksum: 324f65b41f0660609ec022c77b81f85e (MD5) / Approved for entry into archive by Luiz Galeffi (luizgaleffi@gmail.com) on 2017-06-19T13:53:05Z (GMT) No. of bitstreams: 1 marques_cs_me_bot.pdf: 1951878 bytes, checksum: 324f65b41f0660609ec022c77b81f85e (MD5) / Made available in DSpace on 2017-06-19T13:53:05Z (GMT). No. of bitstreams: 1 marques_cs_me_bot.pdf: 1951878 bytes, checksum: 324f65b41f0660609ec022c77b81f85e (MD5) Previous issue date: 2017-05-15 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Presente em aproximadamente 95% da população mundial o Vírus de Esptein-Barr (Epstein-Barr Virus - EBV) está relacionado com 1,5% dos casos de câncer no mundo com destaque para o carcinoma de nasofaringe (Nasopharyngeal Carcinoma – NPC) o qual segundo a Organização Mundial da Saúde, 90% dos carcinomas indiferenciados estão associados ao EBV. Expresso durante o ciclo de latência III e II a proteína latente de membrana 1 (Latent Membrane Protein 1, LMP1), um dos principais produtos oncogênicos do EBV mimetiza o receptor CD40 e mantém-se constitutivamente ativa na célula. Com papel importantíssimo no desenvolvimento do carcinoma de nasofaringe, LMP1 atua na imortalização e proliferação de linfócitos B por meio da deflagração de vias de sinalização intracelular como NFkB e PI3K/AKT. Atualmente são conhecidas sete variantes do gene BNLF1 que codifica LMP1 e apresentam diferenças nas sequências nucleotídicas e aminoacídicas, ambas consideradas oncogênicas por conservarem os domínios CTARs. Essas diferenças encontradas nas variantes de LMP1 podem estar relacionadas à agressividade dos tumores. Entre as variantes de LMP1 foram avaliadas no presente estudo as variantes B95.8 e M81, ambas associadas ao desenvolvimento de NPC. As propriedades transformantes dessas variantes de LMP1 foram analisadas frente ao programa biológico transição epitelial- mesenquimal (Epithelial-Mesenckymal Transition – EMT) que está diretamente relacionado com a progressão dos carcinomas. A avaliação das variantes de LMP1 foi feito por meio de transfecção transiente de células HEK293 e NP69. Células expressando as variantes de LMP1 apresentaram maior capacidade de migração e invasão em relação ao grupo controle. Ainda, células expressando as variantes de LMP1 demonstraram alteração para alguns genes relacionados ao processo de EMT. No entanto, as variantes de LMP1 não apresentam diferenças significativas na regulação do programa de EMT. / FAPESP: 2015/13939-9