AMARAL, Érico Sucupira. Ánalise do perfil de proteínas salivares de crianças com sobrepeso e obesidade do instituto da primeira infância – Iprede no estado Ceará. 2015. 72 f. Dissertação (Mestrado em Odontologia) - Faculdade de Farmácia, Odontologia e Enfermagem, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2015. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2015-10-20T14:09:35Z No. of bitstreams: 1 2015_dis_ésamaral.pdf: 1288817 bytes, checksum: 24ac6c815487ff8225a8b101493509b6 (MD5) / Approved for entry into archive by denise santos(denise.santos@ufc.br) on 2015-10-20T15:54:54Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2015_dis_ésamaral.pdf: 1288817 bytes, checksum: 24ac6c815487ff8225a8b101493509b6 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-10-20T15:54:54Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2015_dis_ésamaral.pdf: 1288817 bytes, checksum: 24ac6c815487ff8225a8b101493509b6 (MD5) Previous issue date: 2015 / Obesity is a recurring theme in today's scientific literature. This is due to the exponential increase in its prevalence in all layers of society. The popularity of this theme also made matters associat ed with it emerged and gained greater notability in healthcare publications. The use of saliva as a diagnostic method has advanced considerably in recent years. Imbalances in the quantity and quality of saliva can generate both oral diseases as being indic ative of some important systemic change. This research studies the salivary protein profile and total human saliva in patients with overweight and obesity. The sample consisted of sixty patients with obesity and overweight (experimental group) and sixty pa tients with normal weight (control group) and was rated the salivary flow, the diet diary and the protein profile. Unstimulated saliva was collected and stored at - 80 ° C. Subsequently the enzyme inhibitor was added and the samples were centrifuged at 15, 000 rpm for 15 minutes at 4 ° C and the separated supernatant to perform protein dosing. The salivary concentration of total proteins was determined by the bicinchoninic acid method using a curve of bovine serum albumin (BSA). When analyzing the unstimulat ed salivary flow was observed that the study group had a mean less than the control group, and this difference was statistically significant (p = 0.006). The control group had an average total protein concentration greater than the experimental group was s tatistically significant (p = 0.002). The results of this study suggest different patterns in salivary composition between these two groups. / A obesidade é um tema recorrente na literatura científica da atualidade. Isso se deve ao aumento exponencial de sua prevalência em todas as camadas da sociedade. A popularidade deste tema fez também com que assuntos associados a ele emergissem e ganhassem maior notabilidade em publicações da área da saúde. O uso da saliva como método diagnóstico avançou consideravelmente nos últimos anos. Desequilíbrios na quantidade e na qualidade da saliva podem tanto gerar afecções bucais quanto ser indicativo de alguma alteração sistêmica importante. Este trabalho objetivou estudar o perfil de proteínas salivar e saliva total humana em pacientes com sobrepeso e obesidade. A amostra foi constituída por sessenta pacientes com obesidade e sobrepeso (grupo experimental) e sessenta pacientes com peso adequado (grupo controle), tendo sido avaliado o fluxo salivar, o diário de dieta e o perfil proteico. Saliva total não estimulada foi coletada e armazenada a – 80°C. Posteriormente foi adicionado o inibidor enzimático e as amostras foram centrifugadas a 15.000 rpm por 15 minutos a 4°C, sendo o sobrenadante separado para realização da dosagem de proteínas. A concentração de proteínas totais salivares foi determinada pelo método do Ácido Bicinconínico, usando uma curva de albumina sérica bovina (BSA). Ao analisar o fluxo salivar não estimulado foi possível observar que o grupo de estudo apresentou média menor que o grupo controle, sendo essa diferença estatisticamente significante (p=0,006). O grupo controle apresentou uma média de concentração total de proteínas maior que o grupo experimental, sendo essa diferença estatisticamente significante (p=0,002). Os resultados deste estudo sugerem haver padrões diferenciados na composição salivar entre os grupos avaliados.

Programa de Pós-Graduação em Ciências Biológicas. Núcleo de Pesquisas em Ciências Biológicas, Pró-Reitoria de Pesquisa e Pós Graduação, Universidade Federal de Ouro Preto. / Submitted by Oliveira Flávia (flavia@sisbin.ufop.br) on 2015-10-16T21:18:29Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 22190 bytes, checksum: 19e8a2b57ef43c09f4d7071d2153c97d (MD5) DISSERTAÇÃO_InibiçãoEsforçoReprodutivo.pdf: 3315413 bytes, checksum: bdd4f2348d303819ca1d0fc8847a06a8 (MD5) / Approved for entry into archive by Gracilene Carvalho (gracilene@sisbin.ufop.br) on 2015-10-26T11:49:23Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 22190 bytes, checksum: 19e8a2b57ef43c09f4d7071d2153c97d (MD5) DISSERTAÇÃO_InibiçãoEsforçoReprodutivo.pdf: 3315413 bytes, checksum: bdd4f2348d303819ca1d0fc8847a06a8 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-10-26T11:49:23Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 22190 bytes, checksum: 19e8a2b57ef43c09f4d7071d2153c97d (MD5) DISSERTAÇÃO_InibiçãoEsforçoReprodutivo.pdf: 3315413 bytes, checksum: bdd4f2348d303819ca1d0fc8847a06a8 (MD5) Previous issue date: 2014 / SKN-1, fator de transcrição de C. elegans, ortólogo a Nrf1/2/3 em mamíferos, promove resistência contra o estresse oxidativo e longevidade ao ativar enzimas de detoxificação de Fase II e proteínas antioxidantes. Além disso, SKN-1 também contribui para a homeostase proteica, ativando genes relacionados à degradação ou enovelamento de proteínas em resposta à inibição de fatores de iniciação e elongação da tradução de proteínas. Análises conduzidas em animais transgênicos que expressam repetições anormais de poliglutamina (PoliQ), fundidas a uma proteína fluorescente amarela (YFP), demonstraram que o knockdown de skn-1 aumenta a formação de agregados PoliQ em células musculares do C. elegans, enquanto diminui a agregação em células intestinais. Há também um aumento progressivo de agregados PoliQ de acordo com a idade do animal. No entanto, o número de agregados nas células intestinais diminui em animais adultos de 8 dias, idade que caracteriza o fim do período reprodutivo do animal. Nesse trabalho, nós buscamos caracterizar a correlação entre o esforço reprodutivo e de SKN-1 com a homeostase de proteínas. Para investigar as possíveis interações do esforço reprodutivo no padrão de agregação de proteínas, animais com expressão PoliQ direcionada para o intestino foram tratados com 5-fluoro-2’-deoxiuridina (FUdR), uma droga que induz esterilidade parental. Também analisamos a expressão de genes relacionados à degradação proteica e a atividade proteassômica em animais knockdown (RNAi) contra skn-1. Nós observamos que todas as linhagens transgênicas tratadas com FUdR mostraram uma redução significativa no número de agregados PoliQ em todas as idades analisadas. A análise dos dados de expressão gênica de animais no estádio larval L4 demonstra que genes que codificam para subunidades proteassômicas e para a fumarilacetoacetase tiveram sua expressão significativamente reduzida em animais skn-1(RNAi). Além disso, a atividade proteassômica da quimiotripsina, medida in vitro através da utilização de um peptídeo fluorescente de animais skn-1(RNAi) também se mostrou reduzida no estádio L4. Além disso, nós investigamos os efeitos da inibição de duas das principas vias de degradação proteica – proteassomal e lisossomal - na formação de agregados PoliQ em animais que expressam 82 repetições poliglutamínicas nas células intestinais, adultos de 8 dias, tratados com skn-1(RNAi). Nós verificamos que tanto a inibição proteassômica por MG-132 quanto a inibição lisossômica por cloroquina fez com que o número de agregados PoliQ aumentasse em relação aos grupos não tratados. O knockdown simultâneo de skn-1 e daf-16, uma outra via que participa na remoção de agregados proteicos aumentou o número de agregados no intestino dos animais. Estes dados sugerem que a inibição da reprodução e de skn-1 é capaz de diminuir a taxa de formação de agregados proteicos no intestino do C. elegans. __________________________________________________________________________________ / ABSTRACT: is also a progressive increase of polyQ aggregates according to the age of the animal. However, the number of aggregates decrease in the intestine of 8 day-old adult animals, an age which the animal reaches the end of its reproductive period. In this work, decided to further investigate the correlation between the reproductive effort and SKN-1 with protein homeostasis. To investigate possible interactions between reproduction and protein degradation, animals with polyglutamine expression in the intestine were treated with 5-fluoro-2’-deoxyuridin (FUdR), a drug that induces parental sterility. We also assessed the expression of genes related to protein degradation and the proteasomal activity in skn-1 knockdown animals. We observed that all transgenic lines treated with FUdR showed a significant reduction in the number of PolyQ aggregates in all analyzed ages. The analysis of gene expression data of animals in the L4 larval stage shows that genes related to proteasomal subunits and fumarilacetoacetasis had their expressions significantly reduced in skn-1(RNAi) animals. Besides that, the proteasomal activity, measured in vitro, was also decreased in skn-1(RNAi) animals in the L4 stage. We also investigated the effects of the inhibition of two major pathways of protein degradation – proteasome and lysosome – in the aggregation pattern of 8 day-old animals that express 82 polyQ repeats in the intestine treated with skn-1(RNAi). We observed that both the proteasome and lysosome inhibition increased the number of polyQ aggregates, when compared to control animals. These data suggest that the inhibition of both the reproduction and skn-1 can decrease the polyQ aggregation ratio in the intestine of C. elegans.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:26:03Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-02-19Bitstream added on 2014-06-13T20:33:39Z : No. of bitstreams: 1 perez_am_me_botib.pdf: 10680809 bytes, checksum: b87b752e56e77d065385e0c67b7da6a0 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O presente trabalho teve por objetivo mapear os domínios de interação da proteína LaRbp38 (RNA binding protein 38 KD) de Leishmania amazonensis com ácidos nucléicos e a identificação de proteínas parceiras que formassem possíveis complexos com ela nos telômeros do parasita. LaRbp38 é uma proteína exclusiva de protozoários tripanosomatídeos, entre os quais estão os agentes etiológicos da leishmaniose, uma doença endêmica presente em diversas regiões do Brasil. Novos casos da doença vêm aumentando progressivamente, principalmente entre indivíduos imunocomprometidos e por isso a Organização Mundial da Saúde tem incentivado a busca de novos alvos para desenvolver drogas que eliminem eficazmente o parasita. LaRbp38 é uma proteína codificada por um gene nuclear, que parece exercer diferentes funções nas maquinarias de replicação nuclear e mitocondrial. Foi primeiramente descrita como proteína estabilizadora de RNA mitocondrial e parece estar envolvida com a replicação de DNA mitocondrial. Em Leishmania, LaRbp38 também interage in vivo com DNA mitocondrial, com seqüências ricas em GT e com DNA telomérico simples e dupla fita. A análise estrutural da proteína não indica a presença de nenhum domínio canônico de interação a ácidos nucléicos. Para dar inicio aos experimentos, a primeira estratégia foi desenhar mutantes delecionais da proteína de L. amazonensis (LaRbp38) de forma que cada um representa uma sobreposição do outro. Cada mutante, nomeados mut1, mut2, mut3, mut4 e mut5, foram subclonados em vetor de expressão bacteriano para produção de polipeptídios recombinantes. Em seguida os polipeptídios foram purificados e testados em western blotting, que mostra tanto LaRbp38 quantos os 5 mutantes sendo reconhecidas pelo soro antLLaRbp38. Ensaios in vitro de interação proteína-DNA (EMSA), usando DNA telomérico simples fita Te11, dupla fita... / Recent results demonstrated that Rbp38 is a protein exclusively expressed in trypanosomatid parasites, which includes the genus Leishmania. Rbp38 is a multifunctional protein exerting functions in the kinetoplast, such as the stabilization of mitochondrial RNAs and in the nucleus, as a protein that binds in vivo kDNA, the double-stranded (LaTel) and the G-rich telomeric DNAs (Tel1). The trypanosomatid Rbp38 does not share sequénce or functional/structural similarities with any other protein deposited in the public data bank. The present work has the aim of mapping the boundaries of the DNA-binding domain of LaRBP38, since using the available in silico tools, we were not able to define any known nucleic acid binding domain in this protein. Therefore, we constructed truncated overlapping mutants of LaRbp38 in order to map the boundaries of its DNA binding domain. These mutant proteins were expressed in a bacterial system and were produced in high amounts as shown by SDS-PAGE and Western blotting analyses. Electrophoretic mobility shift assays (EMSA) were done in order to test the ability of each mutant to bind in vitro the G-rich telomeric DNA, double-stranded telomeric DNA and kDNA. EMSA and competition assays confirmed that LaRbp38 has at least one DNA binding domain (DBD), centrally located, between amino acid residues 141 and 235. This DBD, interacts with distinct affinities with ali DNAs tested. Our results suggested that this binding domain has at least two extensions one towards the N-terminus of mut2 (aa 95 and 141), which showed binding affinity to LaTel and kDNA and other towards the C-terminus of mut3 (aa 235 to283) that strongly interacted with kDNA. However, we can not discard that others parts of the protein may also contribute to these interactions. Other controversial point about LaRbp38 is whether this protein has nuclear and mitochrondrial subcelular localization... (Completo abstract click electronic access below)

Orientadora : Profª Drª Adriana Frohlich Mercadante / Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Ciencias Biológicas (Microbiologia, Parasitologia e Patologia Básica). Defesa: Curitiba, 10/03/2017 / Inclui referências / Área de concentração / Resumo: A proteína prion celular (PrPC) e uma glicoproteina extracelular, ancorada na membrana plasmática por uma molécula de glicofosfatidilinositol (GPI). A conversão de PrPC em uma isoforma patologica (PrPSc), a partir de modificações estruturais, e responsável pelo desenvolvimento das encefalopatias espongiformes transmissíveis (TSEs) ou doenças periódicas. Vários trabalhos indicam que formas citosólicas de PrP podem ser formadas durante erros na sua biossintese. Os príons citosólicos (CytPrP) são gerados por meio de duas vias: ERAD (ER-associated Degradation) e ineficiência do peptídeo sinal. Alguns estudos demonstram que estas formas de príons citosólicos exercem função neurotoxica, contribuindo para a manifestação das doenças periódicas. Trabalhos anteriores do nosso grupo, foram capazes de identificar uma interação entre PrPC e CHIP/Stub1. CHIP/Stub1 e uma proteína citoplasmática o qual funciona como um co-chaperona molecular e apresenta atividade ubiquitina E3- ligase, participando do controle de qualidade das proteínas desde o dobramento ate a fase de degradação. Ainda, CHIP/Stub1 e homologa a proteína STI1/Hop, uma cochaperona e um ligante bem estabelecido de PrPC. O objetivo desse trabalho foi avaliar em diferentes linhagens celulares se o efeito neurotoxico de PrP citosólico, ja descrito para algumas células, era capaz de ser modulado através dessas co-chaperonas. Em nossos resultados mostramos por diferentes ensaios de viabilidade celular, tais como MTT, vermelho neutro, que CytPrP reduziu de 30-50% a viabilidade celular de três linhagens neuronais testadas: N2a, SH-SY5Y e CF10. Esse mesmo efeito nao foi observado para linhagem renal HEK293T. A expressão das co-chaperonas CHIP e STI-1 foi capaz de reverter a toxicidade do CytPrP em todas linhagens neuronais. Nossos resultados ainda mostraram que mutantes de CHIP e STI-1 com domínios deletados também foram capazes de reverter o efeito neurotoxico causado pela CytPrP. Ensaios utilizando o inibidor MG132 e hidroxicloroquina sugerem que essa reversao do efeito neurotoxico de CytPrP por CHIP e STI-1 parece não ser dependente da via de degradação por proteossomo, nem por lisossoma. Assim, um mecanismo através do qual as co-chaperonas exercem seu efeito de proteção da neuroxicidade ainda esta sendo investigado. Os dados obtidos nesse trabalho poderão contribuir para elucidar os possíveis mecanismos da neurotoxicidade de prions, permitindo um auxilio futuro no desenvolvimento de alvos terapêuticos relacionadas a doenças prionicas. Palavras-chave: PrP citosólico. Neurotoxicidade. CHIP/Stub1. STI1. Prion. / Abstract: The cellular prion protein (PrPC) is an extracellular glycoprotein, anchored to the plasma membrane by a glycophosphatidylinositol (GPI) molecule. The conversion of PrPC to a pathological isoform (PrPSc), through structural modifications, is responsible for the development of transmissible spongiform encephalopathies (TSEs) or prion diseases. Several data indicate that cytosolic forms of PrP can be formed during errors in its biosynthesis. Cytosolic prions (CytPrP) are generated by two pathways: ERAD (ER-associated Degradation) and signal peptide inefficiency. Some studies have shown that these forms of cytosolic prions exert neurotoxic function, contributing to the manifestation of prion diseases. Previous work by our group was able to identify an interaction between PrPC and CHIP/Stub1. CHIP/Stub1 is a cytoplasmic protein, identified as a co- chaperone with E3 ligase activity, participating in the quality control of proteins, from folding to the degradation phase. Still, CHIP/Stub1 is homologous to STI1 (stress - inducible protein 1 ), a co-chaperone and a well-established PrPC bind protein. The objective of this work was to evaluate in different cell lines whether the neurotoxic effect of cytosolic PrP, already described for some cells, was able to be modulated through these co-chaperones. In our results we showed by different cell viability assays, such as MTT, neutral red, that CytPrP reduced from 30% to 50% the cell viability of three tested neuronal lines: N2a, SH-SY5Y and CF10. This same effect was not observed for HEK293T renal lineage. Our results also show that CHIP and STI-1 mutants with deleted domains were also capable of reversing the neurotoxic effect caused by CytPrP in all neuronal lines. Assays using the proteasome inhibitor MG132 and Hydroxychloroquine suggest that this reversal of the neurotoxic effect does not appear to be dependent of the proteosome or lysosomal degradation pathways. Thus, a mechanism through which co-chaperones exert their protective effect of CytPrP neuroxicity is still being investigated. The data obtained in this work may contribute to elucidate possible mechanisms of neurotoxicity of prions, allowing future aid in the development of therapeutic targets related to prion diseases. Keywords: cytosolic PrP. Neurotoxicity. CHIP/Stub1. STI1. Prion

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:35:11Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2006-03-15Bitstream added on 2014-06-13T19:24:35Z : No. of bitstreams: 1 castro_elc_dr_jabo.pdf: 458441 bytes, checksum: ea8d6d3919ec4a9e692914323b80803d (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Três grupos de 8 touros, sendo cada grupo formado por 4 animais da raça Simental (Bos taurus taurus) e 4 da raça Nelore (Bos taurus indicus), perfazendo um total de 24 touros com idade aproximada de 30 meses foram submetidos a dietas isoenergéticas com diferentes níveis de proteína degradável no rúmen e água ad libitum. As rações foram constituídas basicamente de feno de Tifton 85, farelo de soja, milho e uréia (Nitrogênio Não Protéico) e formuladas individualmente para cada touro de acordo com a análise bromatológica dos ingredientes, peso e ingestão dos animais. Na dieta do grupo controle (C) foram seguidas as normas do NRC (1996) para nutrição de touros em reprodução. Na dieta do grupo gradual (G) foram acrescidas 30% e, após quatro semanas, 75% de proteína degradável em relação à dieta controle, através do aumento na quantidade fornecida de uréia (NNP). Na dieta do grupo Choque o nível de proteína degradável foi 110% superior à ração do grupo controle durante todo o período experimental. Os touros permaneceram em baias individuais e após o período de adaptação de 21 dias foram submetidos semanalmente a colheitas de sêmen. O sêmen dos animais foram obtidos por eletroejaculação e avaliados quanto aos exames físicos do sêmen (turbilhonamento, motilidade, vigor e concentração) e morfologia espermática durante o período experimental de 15 semanas. Foram realizadas colheitas semanais de sangue 2 horas após a alimentação dos animais com a finalidade de mensurar os níveis plasmáticos de amônia e uréia durante seu pico de produção. Os ejaculados dos touros dos grupos tratados (Cq e G) apresentaram menor turbilhonamento, motilidade, vigor e concentração em relação ao grupo controle (C) a partir da décima terceira semana de experimento (P<0,01). / Three experimental groups, each containing eight bulls, were given isoenergetic diets with different levels of ruminal-degradable protein and ad libitum water. Each group was constituted by four Fleckvieh (Bos taurus taurus) and four Nellore (Bos taurus indicus) bulls, in a total of 24 animals with mean age of 30 months. Diets were composed basically of Tifton 85 hay, soy bran, corn and urea (non-proteic nitrogen; NPN) and formulated for each animal individually, according to ingredients' bromatologic analysis, animal's weight and uptake capacity. For the Control-group (C-group) diet, NRC (1996) nutrition recommendations for bulls on reproduction were followed. In the Gradual-group (G-group) diet, 30% more ruminal-degradable protein (compared to the C-group) was added, and after four weeks, the level increased to 75% through the addition of urea (NPN). For the Choque-group (Cq-group), degradable protein level was 110% higher than in Cgroup during all experimental period. Bulls were maintained in individual boxes and after an adaptation period of 21 days, semen samples were collected. Semen was obtained through electroejaculation and analysed for physical (whirl movement, motility, vigour and concentration) and morphological characteristics during the period of 15 weeks. Blood sampling was performed weekly two hours after feeding in order to measure ammonia and ureal levels during its peak production. Treatment groups (Cq-group and G-group) presented lower whirl movement, motility, vigor and concentration than the C-group after the 13th week (P<0,01). Spermatic morphology showed increased levels of greater spermatic defects for taurines (P<0,05) during all experimental period, but no significant differences were observed among treatments for these characteristics. Significant differences in plasmatic urea (P<0,01) occurred.

Made available in DSpace on 2015-06-17T19:33:57Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-12-19. Added 1 bitstream(s) on 2015-06-18T12:47:47Z : No. of bitstreams: 1 000830769.pdf: 1005277 bytes, checksum: e3ffa947a5be2ea93e697193dae38e25 (MD5) / Por muito tempo Mazama nemorivaga foi considerado sinonímia de Mazama gouazoubira. Atualmente são consideradas espécies distintas conhecidas como Mazama cinzas brasileiros. Apesar de serem morfologicamente identificados como Mazama, há indícios genéticos que estas duas espécies devam ser separadas em dois novos gêneros. Uma forma de contribuir para resolução desta complexidade taxonômica é caracterizar e descrever detalhadamente cada uma das espécies no intuito de auxiliar os estudos filogenéticos, fundamentais para discutir esse problema. Assim, utilizamos dados sobre as características espermáticas para fazer comparações entre as espécies. Através de análises multivariadas discriminantes, de dados de morfometria espermática, identificamos as principais diferenças entre os espermatozoides das duas espécies. Utilizando as técnicas de eletroforese SDS-PAGE bidimensional e espectrometria de massa ESI-Q Tof, comparamos a constituição de proteínas do plasma seminal. Neste trabalho observamos que existem diferenças importantes na dimensão e no formato da cabeça dos espermatozoides das duas espécies, sendo a área e a largura as principais variáveis que as diferenciam. Através das análises discriminantes conseguinos separá-los adequadamente entre os dois grupos de espécies, M. gouazoubira e M. nemorivaga. Ao compararmos o perfil de proteínas totais do plasma seminal, observamos diferenças na distribuição dos spots no gel de poliacrilamida. Além disso, grupos distintos de proteínas foram identificadas no plasma seminal de cada uma das espécies. Esses resultados demonstraram que M. gouazoubira e M. nemorivaga possuem diferenças significativas nas características seminais, o que reforça a hipótese de que dois novos gêneros devem ser criados para cada uma das espécies estudadas / Brazilian gray deers are represent by two species: Gray brocket deer (Mazama gouazoubira) and Amazonian brocket deer (Mazama nemorivaga). They belong to genus Mazama, but there are genetic evidence to separate them into two different genera. To contribute to this discution about Mazama taxonomic complexity, we decide to characterize and describe the seminal plasma, of these species, in detail. We performed multivariate analisis to compare sperm morphometry data and identify the main differences between two species. We also used two-dimensional electrophoresis SDS-PAGE techniques and mass spectrometry ESI-Q TOF to compare the constitution of seminal plasma. As result, we found important differences on dimension and shape of the head sperm, being area and width the main variables that differentiate them. Using discriminant analysis, we properly separate them into two groups of species, M. gouazoubira and M. nemorivaga. Comparing the protein profile of the seminal plasma, we observed differences in the distribution of spots, and were identified different groups of proteins in seminal plasma of the distinct species. These results demonstrated that M. gouazoubira and M. nemorivaga have significant differences in the semen characteristics that reinforce the hypothesis that these two species may be separated into two new genera

Memoria para optar el título de Bioquímico / No autorizada por el autor para ser publicada a texto completo en el Portal de Tesis Electrónicas / En el sistema nervioso, la transmisión del impulso nervioso entre neuronas se efectúa a través de la sinapsis. Éstas pueden ser de dos tipo, eléctricas y químicas. En estas últimas existen diversas proteínas que se asocian a los receptores de neurotransmisores, las que intervienen en su biosíntesis, transporte, anclaje y modulación de su actividad. Este trabajo se centró en el estudio de una nueva proteína llama Marlin-2, identificada a través de análisis comparativos entre la estructura primaria de la proteína Marlin-1 y las secuencias depositadas en las bases de datos. Marlin-1 (multiplt alpahelices and RNA linker protein), es una proteína que se asocia directamente a la subunidad R1 del receptor de neurotransmisores GABAB e intervendría en su expresión y función. La hipótesis planteada en este trabajo es la siguiente: la homología entre Marli-1 y Marlin-2 define la relación de esta última con compartimientos subcelulares, dominios neuronales y su interacción con el receptor de GABAB. Para verificar esta hipótesis elegimos una combinación de técnicas bioquímicas y microscópicas en modelos de líneas celulares mamíferas y neuronas de cultivo primario de ratas. Nuestros resultados indican que Marlin-2 y Marlin-1 poseen un alto porcentaje de identidad en sus estructuras primarias y que sus dominios estructurales se encuentran altamente conservados, especialmente los involucrados en interacciones proteicas. Además demostramos que en líneas celulares Marlin-2 se distribuye en núcleo y citoplasma y que presentan un patrón granular, predominantemente citoplasmático. Por otra parte, en neuronas transfectadas con Marlin-2, esta proteína se distribuye en el soma y dendritas proximales, presentado un patrón granular, similar al de Marlin-1 endógena. También hemos demostrado la interacción entre Marlin-1 y Marlin-2 mediante análisis de bioimagen y co-inmunoprecipitación en líneas celulares. En base a estos resultados y a las herramientas desarrolladas en este trabajo, en el futuro se logrará conocer en mayor profundidad el rol de esta proteína en el sistema nervioso

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Química, Programa de Pós-Graduação em Tecnologias Química e Biológica, 2017. / Submitted by Albânia Cézar de Melo (albania@bce.unb.br) on 2017-04-27T13:39:57Z No. of bitstreams: 1 2017_RenanStefaniniLopes.pdf: 2635553 bytes, checksum: b79eac9d49882d16ea362d40610975fc (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana(raquelviana@bce.unb.br) on 2017-04-27T22:08:52Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2017_RenanStefaniniLopes.pdf: 2635553 bytes, checksum: b79eac9d49882d16ea362d40610975fc (MD5) / Made available in DSpace on 2017-04-27T22:08:52Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2017_RenanStefaniniLopes.pdf: 2635553 bytes, checksum: b79eac9d49882d16ea362d40610975fc (MD5) / O Brasil apresenta-se como um lugar favorável para a implementação de uma economia onde as principais fontes de energia e matérias-primas sejam de origem de processos renováveis. Para isso é necessário o melhor aproveitamento do chamado material lignocelulósico, que consiste na maior parte do material das plantas e que não é utilizado para a produção de alimento. A produção industrial de combustíveis vindo desse material tem se demonstrado um desafio por conta da estrutura complexa do material lignocelulósico. Nesse contexto as enzimas acessórias, como as expansinas, tem demonstrado grande potencial por apresentarem sinergismo com as enzimas celulases usadas na conversão da celulose e hemicelulose em açúcares simples. Este trabalho tem como intuito o estudo da produção da proteína expansina de origem bacteriana BsEXLX1 usando o organismo hospedeiro Komagataella pastoris em biorreator de bancada. Inicialmente foram realizados experimentos com a Pichia para estudar o comportamento da levedura em um sistema fechado de biorreator, e observou-se os efeitos que a agitação, quantidade de inóculo e pH têm sobre o consumo de glicose e produção de biomassa e etanol. Com esse estudo ficou claro a relação do pH mais ácido com a alta produção de etanol e alto consumo de glicose, a relação entre a quantidade de inóculo e a produção de etanol mostrou-se diretamente proporcional. Com base nesses resultados foram elaborados dois planejamentos fatoriais completos 25 em Erlenmeyers com Komagataella pastoris para a produção da proteína expansina BsEXLX1. Mediu-se as quantidades de proteínas solúveis produzidas, assim como as taxas de crescimento em variadas concentrações de glicose, glicerol e metanol.Concluiu-se que a condição que promove a maior areação em glicerol, com baixas concentrações de inoculo e metanol foram as ideais para a maior produção da proteína, chegando a 36% acima da média da produção. / Brazil is a favorable place for the implementation of an economy where its main energy and feedstock source originates from renewable sources. For this to be accomplished it needs to make better use of lignocellulosic materials that makes up most of plant matter and it is not used as food production. The industrial production of fuel that comes from this feedstock has been a challenge due to the complex structure of the lignocellulosic material. In this scenario, the accessory enzymes, such as expansins, have shown great potential for having synergism with cellulase enzymes used for the conversion of cellulose and hemicellulose into simple sugars. The goal of this dissertation in to study the production of the bacterial expansin protein BsEXLX1 using as host organism Komagataella pastoris in a benchtop bioreactor. Initially it was performed experiments with Pichia to study the behavior of the yeast in a closed bioreactor system, and it was monitored the effects of agitation, inoculum concentration and pH in the consumption of glucose, and production of biomass and ethanol. This study shows a connection between the higher acidic conditions and higher ethanol production. It also shows the connection between the amount of inoculum and the production of ethanol, which demonstrated to be directly proportional. From this data, two 25 complete factorial analysis were performed in Erlenmeyers with K. pastoris for the production of expansin protein BsEXLX1. The soluble proteins concentrations were measured alongside with yeast growth in various concentrations of glucose, glycerol and methanol. It was concluded that the condition with most aeration in glycerol, with low methanol and inoculum concentrations were the ideal for greater protein productions, reaching up to 36% higher production than the average.

Resumo não disponível

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, Programa de Pós-Graduação em Patologia Molecular, 2017. / Submitted by Raquel Almeida (raquel.df13@gmail.com) on 2017-08-10T16:13:17Z No. of bitstreams: 1 2017_WanessaFelixCabral.pdf: 3821764 bytes, checksum: c37c36b987640585747add58dc37e633 (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana (raquelviana@bce.unb.br) on 2017-10-05T12:52:50Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2017_WanessaFelixCabral.pdf: 3821764 bytes, checksum: c37c36b987640585747add58dc37e633 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-10-05T12:52:50Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2017_WanessaFelixCabral.pdf: 3821764 bytes, checksum: c37c36b987640585747add58dc37e633 (MD5) Previous issue date: 2017-10-05 / A cromatina é um complexo macromolecular formado por unidades repetitivas básicas, o nucleossomo. Este, por sua vez, é constituído por DNA e histonas. As Proteínas Ligantes de Nucleossomo (NBPs) são capazes de controlar a dinâmica de abertura e fechamento da cromatina e, dessa forma, regulam a expressão gênica e a manutenção do genoma. Acredita-se, com isso, que moléculas que se ligam à superfície nucleossomal possam ter profundo impacto na estrutura da cromatina. Uma classe de peptídeos, conhecida como stapled, é descrita por ter maior estabilidade que os peptídeos nativos frente à ação de proteases, bem como o aumento da sua penetrabilidade celular. Diante disso, esta pesquisa tem como objetivo o desenho e a síntese química de peptídeos miméticos ligantes de nucleossomo, e estabelecer a melhor metodologia de síntese em fase sólida no laboratório de pesquisa. Foram desenhados peptídeos stapled, baseados em estruturas atômicas e cristalográficas de NBPs, em especial a proteína RCC1 complexada ao nucleossomo, contendo uma restrição conformacional, um crosslink formado por hidrocarbonetos. Os peptídeos compostos por 19 aminoácidos foram sintetizados em fase sólida (SPPS) pela inserção de aminoácidos α,α-dissubstituídos. A reação de metátese (RCM) foi escolhida para a formação do macrociclo utilizando catalisadores de Grubbs contendo rutênio. Além disso, alguns desses peptídeos foram purificados com sucesso e analisados por dicroísmo circular. / The chromatin is a macromolecular complex formed by basic repeating units, the nucleosome, which is composed of DNA and histones. Nucleosome Binding Proteins (NBPs) are able to control the opening and closing dynamics of chromatin, and thus regulate gene expression and genome maintenance. It is plausible to believe that molecules that bind to the nucleosomal surface can have a profound impact on the clinical outcome. A class of peptides known as stapled is described by increasing the stability of their native peptides to the action of proteases, as well as increasing their cellular penetrability. The present work aims at the design and chemical synthesis of nucleosome binding mimetic peptides, optimizing solid phase synthesis methodology in the research laboratory. Stapled peptides were designed based on atomic and crystallographic structures of NBPs, in particular protein RCC1 complexed to the nucleosome, containing a conformational constraint, a crosslink formed by hydrocarbons. Peptides composed of 19 amino acids were synthesized in solid phase (SPPS) by the insertion of α,α-disubstituted amino acids. The metathesis reaction (RCM) was chosen for macrocycle formation using ruthenium-containing Grubbs catalysts. In addition, some of these peptides were successfully purified and analyzed by circular dichroism.