Submitted by Maurílio Figueiredo (maurilioafigueiredo@yahoo.com.br) on 2013-03-05T21:59:32Z No. of bitstreams: 1 TESE_CorrelaçãoAtividadeProteassoma.pdf: 2922794 bytes, checksum: bde4f13f98b7a755e7aadc3b3b3c1f62 (MD5) / Approved for entry into archive by Neide Nativa (neide@sisbin.ufop.br) on 2013-03-12T21:23:14Z (GMT) No. of bitstreams: 1 TESE_CorrelaçãoAtividadeProteassoma.pdf: 2922794 bytes, checksum: bde4f13f98b7a755e7aadc3b3b3c1f62 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-03-12T21:23:14Z (GMT). No. of bitstreams: 1 TESE_CorrelaçãoAtividadeProteassoma.pdf: 2922794 bytes, checksum: bde4f13f98b7a755e7aadc3b3b3c1f62 (MD5) Previous issue date: 2011 / Os inibidores do tipo Bowman-Birk (BBI) são moléculas protéicas contendo dois domínios inibitórios distintos para enzimas semelhantes à tripsina e quimotripsina. O interesse por essa classe de inibidores decorre de estudos que demonstraram o efeito protetor dos BBI no câncer induzido quimicamente. No presente trabalho avaliou-se o efeito dos BBI isolados de Macrotyloma axillare e Glycine max na prevenção de neoplasias colo-retal induzidas por injeções intraperitoneais de dimetilhidrazina (DMH) durante 12 semanas. Os grupos de camundongos controle e testes (tratados com DMH) receberam uma dieta contendo BBI, na dose de 0,1% (p/p) associada (DMHV) ou não às vitaminas A, C e E, durante 24 semanas. Camundongos tratados com DMH apresentaram alterações histopatológicas compatíveis com a formação de pólipos neoplásicos. Em concordância com a histologia, a análise do marcador tumoral CD44, por Western blotting, revelou aumento significativo de expressão nos animais tratados com DMH e DMHV. Os extratos protéicos provenientes desses tecidos apresentaram aumento significativo de atividade proteolítica dependente de proteassoma, em ensaios peptidásicos para as atividades tripsina e quimotripsina símiles. Por outro lado, para o grupo de animais tratados com DMH e BBI observou-se atividade proteassomal comparável àquela dos animais do grupo controle. O tratamento de animais com BBI isoladamente promoveu a redução da atividade proteolítica dependente de proteassoma quando comparada àquela de animais alimentados com dieta normal. Além disso, retenção de enzimas com atividades proteolíticas tripsina e quimotripsina-símile, provenientes das frações lisossomal e solúvel, foi observada utilizando uma coluna de afinidade sepharose-BBI. As atividades dessas enzimas também se mostraram significativamente aumentadas no grupo de animais tratados com DMH. Esses resultados demonstraram que inibições de atividades proteolíticas distintas podem contribuir para o mecanismo protetor dos BBI. Coletivamente os resultados permitiram concluir que o tratamento com BBI foi capaz de prevenir a formação de pólipos intestinais, impedir o estabelecimento de eventos inflamatórios no intestino delgado, cólon e glândula anal, e manter em níveis normais o marcador clássico tumoral CD44. ___________________________________________________________________________________________________________________________________________________ / ABSTRACT: The Bowman-Birk inhibitors (BBI) are protein molecules containing two distinct inhibitory domains for trypsin and chymotrypsin-like enzymes. The interest for this class of inhibitors is based on studies which demonstrated a protective effect promoted by BBI, particularly for chemically-induced cancers. In the present work, we evaluated the effects of BBI isolated from Macrotyloma axillare and Glycine max in the prevention of colon cancers induced by intraperitoneal injections of dimethylhydrazine (DMH) during 12 weeks. Control and DMH-treated animals were fed a diet containing BBI at a dose of 0.1% (p/p) associated (DMHV) or not with the vitamins A, C and E, during 24 weeks. DMH-treated animals exhibited hystopathological alterations compatible with the formation of neoplastic polyps. In agreement with the hystological examinations, analysis of the tumor marker CD44, by Western blotting, revealed a significant increase in its expression for the DMH-treated group. Protein extracts from these tissues also contained increased proteasome-dependent proteolytic activity as judged by peptidase assays for the trypsin and chymotrypsin-like activities. In contrast, for DMH + BBI-treated animals proteasomal activity was comparable to that observed for the control group. In fact, animals given BBI alone, as a diet supplement, exhibited decreased proteasomal activity when compared to that from animals fed a normal diet. In addition, by using a sepharose-BBI affinity column, it was observed retention of enzymes displaying trypsin and chymotrypsin-like activities obtained from the lysosomal and soluble fractions. These proteolytic activities were also shown to be increased for DMH-treated animals. These results suggest that the inhibition of distinct proteolytic activities could account for the protective mechanisms produced by BBI. Collectively our analyses allowed us to conclude that BBI treatment was able to prevent intestine polyp formation, decrease any associated inflammatory processes and keep at basal levels the classic tumor marker CD44.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Agrárias. Programa de Pós-Graduação em Aqüicultura. / Made available in DSpace on 2012-10-26T09:24:34Z (GMT). No. of bitstreams: 1 303659.pdf: 1390086 bytes, checksum: a56cd1ee036e803607488bc446ce9f6b (MD5) / Larvas de jundiá possuem saco vitelínico relativamente grande, quando comparado com outras espécies de peixes nativos, o que sugere que possam digerir alimento inerte desde o início da alimentação. Portanto, avaliou-se o desenvolvimento morfológico e a atividade proteolítica do sistema digestório de larvas de jundiá desde a eclosão até 252 horas após a eclosão (HAE). As atividades das proteinases serínicas variaram ao longo do tempo, sendo observado o maior pico às 12 HAE, quando a tripsina mostrou atividade específica de 296,38 ± 84,20 mU/mg e a quimotripsina de 315,45 ± 42,16 mU/mg. As atividades das proteinases aspárticas aumentaram até o início da transição alimentar ou desmame, oscilaram ao longo do desmame, mas voltaram a crescer constante e acentuadamente durante a alimentação com o alimento inerte, obtendo-se a maior atividade específica às 252 HAE (2,56 ± 0,10 mU/mg). Os ensaios in gel mostraram uma diversidade de formas moleculares, principalmente de proteinases serínicas. As análises histológicas mostraram que às 0 HAE as larvas já apresentam desenvolvimento do trato gastrointestinal, às 4 HAE há o início da abertura bucal e às 16 HAE as larvas apresentam diferenciação no trato digestório, quando é possível diferenciar a cavidade da bucofaringe, esôfago, fígado, pâncreas, estômago e intestino. Às 40 HAE são observados grânulos de zimógenos no pâncreas e às 48 HAE, a presença de glândulas gástricas no estômago e muco no tubo digestório. Os resultados indicam que larvas de jundiá podem receber ração desde o início da alimentação exógena.

Made available in DSpace on 2015-01-26T13:21:25Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2001-06-12Bitstream added on 2015-01-26T13:30:29Z : No. of bitstreams: 1 000134842.pdf: 2303477 bytes, checksum: e0bcdeb6fe2e5b917ac56afb68d49171 (MD5) / A presença de leveduras do gênero candida e staphylococcus na cavidade bucal humana adquire importância, pois pode atuar como microbiota suplementar e, em determinadas situações, ocasiona doença bucal ou sistêmica. O objetivo do presente trabalho foi correlacionar a presença de leveduras do gênero Candida e espécies de Staphylococcus na cavidade bucal humana. Enxágüe bucal foram coletados de setenta indivíduos e, a seguir semeados em ágar Sabouraud dextrose com cloranfenicol e agar Baird-Parker. Após crescimento, os microrganismos foram isolados e identificados através das provas bioquímicas. Os dados foram analisados através de análise de variância (Anova). Leveduras do gênero Candida foram encontradas em 71,42% dos indivíduos examinados, sendo C.albicans a mais frequente. staphylococcus spp. foram isolados em 92,85% das cavidades bucais, sendo 41 cepas coagulase-negativas (63%). Das cepas coagulase positivas, nove eram S.aureus, 11 S.hyicus e quatro S.schleiferi subespécie coagulans. Não ocorreu entretanto correlação entre as quantidades de unidades formadoras de colônia de Candida e Staphylococcus encontradas nos enxágües bucais dos indivíduos examinados / The presence of Candida genus yeasts and staphylococci in the human oral cavity is very important because they can act as supplementary microbiota and in certain situations can cause oral or systemic diseases. The aim of this study was to correlate the presence of Candida genus yeasts and species of staphylococci in the human oral cavity. Oral riinsings were colected from 70 people and the cultived in Sabouraud glucose agar with chloramphenicol and Baird-Parker ágar. After the incubation period, the microrganisms were isolated and identified through biochemical tests. The Candida genus yeasts were found in 71,42% of the examined people, and C.albicans were isolated from 92,85% of the oral cavities. Fourty-one Staphylococcus negative for coagulase (63%) were found. Among the Staphylococcus samples positive for coagulase nine were S.aureus, 11 S.hyicus and four S.schleiferi subspecies coagulans. There was no correlation between the quantities (cfu) of Candida and staphylococci isolated from the oral rinsings of the examined people

Orientador: Antonio Olavo Cardoso Jorge / Banca: Cristiane Yumi Koga lto / Banca: Rosilene Fernandes da Rocha / Resumo: A presença de leveduras do gênero candida e staphylococcus na cavidade bucal humana adquire importância, pois pode atuar como microbiota suplementar e, em determinadas situações, ocasiona doença bucal ou sistêmica. O objetivo do presente trabalho foi correlacionar a presença de leveduras do gênero Candida e espécies de Staphylococcus na cavidade bucal humana. Enxágüe bucal foram coletados de setenta indivíduos e, a seguir semeados em ágar Sabouraud dextrose com cloranfenicol e agar Baird-Parker. Após crescimento, os microrganismos foram isolados e identificados através das provas bioquímicas. Os dados foram analisados através de análise de variância (Anova). Leveduras do gênero Candida foram encontradas em 71,42% dos indivíduos examinados, sendo C.albicans a mais frequente. staphylococcus spp. foram isolados em 92,85% das cavidades bucais, sendo 41 cepas coagulase-negativas (63%). Das cepas coagulase positivas, nove eram S.aureus, 11 S.hyicus e quatro S.schleiferi subespécie coagulans. Não ocorreu entretanto correlação entre as quantidades de unidades formadoras de colônia de Candida e Staphylococcus encontradas nos enxágües bucais dos indivíduos examinados / Abstract: The presence of Candida genus yeasts and staphylococci in the human oral cavity is very important because they can act as supplementary microbiota and in certain situations can cause oral or systemic diseases. The aim of this study was to correlate the presence of Candida genus yeasts and species of staphylococci in the human oral cavity. Oral riinsings were colected from 70 people and the cultived in Sabouraud glucose agar with chloramphenicol and Baird-Parker ágar. After the incubation period, the microrganisms were isolated and identified through biochemical tests. The Candida genus yeasts were found in 71,42% of the examined people, and C.albicans were isolated from 92,85% of the oral cavities. Fourty-one Staphylococcus negative for coagulase (63%) were found. Among the Staphylococcus samples positive for coagulase nine were S.aureus, 11 S.hyicus and four S.schleiferi subspecies coagulans. There was no correlation between the quantities (cfu) of Candida and staphylococci isolated from the oral rinsings of the examined people / Mestre

A cultura algodoeira tem significativa participação na economia mundial. O algodão (Gossypium hirsutum) é predado por uma grande variedade de insetos, entre eles o percevejo manchador Dysdercus peruvianus (Hemiptera: Pyrrhocoridae). O hábito alimentar deste inseto provoca danos nas sementes e fibras depreciando-as para a utilização comercial. Como alternativa para o aumento da resistência das plantas ao ataque de insetos predadores, estratégias biotecnológicas vêm sendo consideradas. A Canavalia ensiformis é fonte de proteínas com atividade inseticida como a urease, a canatoxina e a concanavalina-A. Tanto a canatoxina como a urease exercem efeitos tóxicos em ninfas deste percevejo, causando mortalidade e atraso no desenvolvimento dos insetos sobreviventes. De maneira análoga a outros modelos de insetos já estudados, a toxicidade em D. peruvianus dependeria da ativação proteolítica das proteínas por enzimas digestivas (catepsinas) do inseto e formação de um peptídeo tóxico. Neste trabalho, estudos de hidrólise in vitro na presença de inibidores seguidos por SDS-page e Western-blot confirmaram a ativação proteolítica da urease por enzimas do tipo catepsina-B. O homogeneizado de intestinos de ninfas hidrolisa também substratos típicos para catepsinas, como hemoglobina e Abz-AIAFFSRQ-EDDnp, e a atividade proteolítica é bloqueada por pepstatina-A e E-64, inibidores específicos para aspártico e cisteíno proteinases, respectivamente. Duas cisteíno proteinases (DpQ-NR e DpQ-E) de intestinos de ninfas de D. peruvianus foram parcialmente purificadas e caracterizadas. Ambas apresentaram pH ótimo de atividade proteolítica entre 4,5 e 6,5, na presença de DTT e foram totalmente inibidas por E-64. No entanto o perfil de inibição evidencia a presença de outras enzimas nas frações. Ensaios de especificidade da fração DpQ-NR revelaram a preferência da enzima por substratos contendo resíduo hidrofóbico em P2, enquanto a enzima DpQ-E tem preferência por substratos contendo aminoácidos básicos em P1. Assim, o trabalho desenvolvido sugere a presença de proteinases múltiplas no sistema digestivo de D. peruvianus e o possível envolvimento destas peptidases na ativação proteolítica da urease. / Cotton (Gossypium hirsutum), an important agricultural commodity, is attacked by a number of pests, such as the cotton stainer bug Dysdercus peruvianus (Hemiptera: Pyrrhocoridae) which may cause severe losses in cotton plantations. Bug feeding on the cotton seeds and stains the cotton fibers resulting in damage to the seed, besides being a vector for phytopathogenic bacteria and fungi. Biotechnology strategies focusing on plant defensive molecules are being considered as an alternative to increase host plant resistance against this pest. The jack bean Canavalia ensiformis is the source of proteins displaying insecticidal activity such as urease, canatoxin and concanavalin-A. Canatoxin and urease were shown to cause lethality and severe detrimental effects in surviving insects, delaying the development stages of D. peruvianus. As in other insect models studied previously, this would depend on the proteolytic activation of the protein by insect cathepsin-like digestive enzymes to produced toxic peptides. The in vitro hydrolysis of urease in the presence of inhibitors, followed by SDS-page and Wester-blot confirm the proteolytic activation by insect cathepsin B-like enzymes. A nymphal gut extract hydrolysed typical cathepsin substrates, such as hemoglobin and Abz-AIAFFSRQ-EDDnp, and hydrolysis was blocked by pepstatin-A and E-64, specific inhibitors of aspartic and cysteine proteinases. Two cysteine peptidases (DpQ-NR and DpQ-E) of D. peruvianus nymphs were partially purified and characterized. Both enzymes showed maximum activities at pH 4.5-5.0 and 5.5-6.5 in the presence of dithiotreitol and were totally inhibited by E-64. However, the inhibition profile points out to the presence of other types of proteinases in both fractions. DpQ-NR preferentially hydrolysed substrate with hydrophobic amino acids in P2, while DpQ-E had preference for substrate with basic residues in P1. Therefore, our work suggests the presence of multiple proteinases with distinct biochemical properties in the digestive system of D. peruvianus and the potencial involvement of these peptidases on the proteolytic activation of urease.

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Biologia Celular, 2006. / Submitted by Kathryn Cardim Araujo (kathryn.cardim@gmail.com) on 2009-11-19T10:26:48Z No. of bitstreams: 1 2006_Rodrigo da Rocha Fragoso.pdf: 5736952 bytes, checksum: 13405ab42e898414d9e1cb8e2ec9d4d4 (MD5) / Approved for entry into archive by Carolina Campos(carolinacamposmaia@gmail.com) on 2009-11-25T19:46:48Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2006_Rodrigo da Rocha Fragoso.pdf: 5736952 bytes, checksum: 13405ab42e898414d9e1cb8e2ec9d4d4 (MD5) / Made available in DSpace on 2009-11-25T19:46:48Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2006_Rodrigo da Rocha Fragoso.pdf: 5736952 bytes, checksum: 13405ab42e898414d9e1cb8e2ec9d4d4 (MD5) Previous issue date: 2006-10-11 / O nematóide formador de galhas Meloidogyne incognita ("southern root-knot nematode", SRN) apresenta distribuição mundial, causando grandes perdas em várias culturas. Seu ciclo de vida compreende seis estádios de desenvolvimento (ovo, larva 1-4 e adulto). A larva L2, fase infectiva, penetra na raiz de planta hospedeira por força mecânica e degradação enzimática para, então, estabelecer a interação planta-patógeno. Em condições favoráveis, as larvas L2 se diferenciam em fêmeas adultas apomíticas, que completam o ciclo de vida após a deposição de mais de 2000 ovos. As práticas agrícolas atuais não são eficientes contra os fitonematóides, de modo que uma estratégia poderosa e promissora para o controle de nematóides é a produção de plantas transgênicas expressando moléculas que afetam o parasitismo. Proteinases são importantes alvos para o controle de nematóides e o primeiro capítulo descreve um estudo das ESTs codificadoras de aspártico, serino e cisteíno proteinases disponíveis em banco de dados, além da completa caracterização de cDNAs isolados anteriormente. Parece existir um abundância de ESTs de aspártico proteinases em fase larval, quando comparado com ovos e fêmeas. Apenas em bibliotecas de ovos se encontram ESTs de serino proteinase. Por outro lado, ESTs de cisteíno proteinase são as mais abundantes e são encontradas em todas as fases. O cDNA Mi-asp1 codifica uma catepsina D-tipo com vários ortólogos conhecidos em nematóides. Análises de expressão temporal e espacial mostram que Mi-asp1 seja mais transcrito em ovos, do que larvas L2 ou fêmeas, sugerindo um importante papel na embriogênese do nematóide. Já no segundo capítulo, objetivando a identificação de genes envolvidos na infecção e nos processos vitais, uma biblioteca de cDNAs foi construída a partir de mRNA de larvas L2, usando o "Superscript Plasmid System with Gateway Technology for cDNA Synthesis and Cloning" (Invitrogen). A biblioteca de ESTs apresentou 2.137 seqüências validadas com 17% de redundância, distribuídas em 1.506 singlets e 197 contigs, gerados de 631 ESTs. A anotação gênica foi obtida por comparação dos resultados do BLASTx (GenBank). A análise in silico das seqüências obtidas foi feita para predição funcional, agrupamento filogenético, predição de transferência horizontal gênica e determinação da importância na interação planta-patógeno. A predição da função gênica por classificação em categorias KOG demonstrou que várias seqüências são relacionadas com mecanismos de transdução de sinais (13%) e modificações pós-traducionais, renovação de proteínas, chaperonas (12%). Os trabalhos de validação de genes-alvo estão em andamento e incluem ensaios in vitro, in vivo e in planta. _______________________________________________________________________________ ABSTRACT / The southern root-knot nematode Meloidogyne incognita (SRN) is worldwide distributed, causing great losses in several crops. Its life cycle comprises six developmental stages (egg, four juveniles and adult). The infective stage larva 2 (L2) enters the host root via mechanical force and enzymatic degradation, and establishes the host-pathogen interaction. Under favorable parasitism conditions the L2 differentiates into an apomitic female adult that resumes its life cycle by depositing up to 2000 eggs. Current agronomic traits are not effective against the SRN, so, a powerful and promising strategy to the nematode control is the production of transgenic plants expressing molecules that are able to hinder the infection process. In this way, the promising one is the anti-feeding strategy based upon digestive enzymes inhibition and the first chapter shows an analysis of EST encoding proteinase from the data bank, beyond the complete characterization of isolated cDNAs. Aspartic proteinase ESTs are more abundant in larval stages than eggs or females. Only eggs library showed serine proteinase ESTs. On the other hand, cysteine proteinase ESTs are the most abundant and are found in all life stages. The Mi-asp1 cDNA encodes a cathepsin D-like with several known nematode orthologues. Temporal and spatial expression analysis showed that Mi-asp1 is most transcribed in eggs than larva L2 or female, suggesting an important role during nematode embryogenesis. In the second chapter, in order to identify the genes involved in the infection and other vital processes, a cDNAs library was constructed from L2 mRNAs using the Superscript Plasmid System with Gateway Technology for cDNA Synthesis and Cloning (Invitrogen). Up to the moment, the L2 cDNA library was constructed, in which 2,137 valid sequences with 17% of redundancy, distributed in 1,506 singlets and 197 contigs, generated with 631 sequences. Sequence annotation was obtained by comparing BLASTx results (GenBank). In silico analysis of obtained sequences were performed functional prediction, phylogenetic grouping, horizontal-transferred genes prediction and determination of plant- pathogen interaction. Prediction of gene function by KOG categories classification demonstrated that several sequences are related to signal transduction mechanisms (13%) and postranslational modification, protein turnover, chaperones (12%). Validation works are in test and include in vitro, in vivo and in planta assays.

A cultura algodoeira tem significativa participação na economia mundial. O algodão (Gossypium hirsutum) é predado por uma grande variedade de insetos, entre eles o percevejo manchador Dysdercus peruvianus (Hemiptera: Pyrrhocoridae). O hábito alimentar deste inseto provoca danos nas sementes e fibras depreciando-as para a utilização comercial. Como alternativa para o aumento da resistência das plantas ao ataque de insetos predadores, estratégias biotecnológicas vêm sendo consideradas. A Canavalia ensiformis é fonte de proteínas com atividade inseticida como a urease, a canatoxina e a concanavalina-A. Tanto a canatoxina como a urease exercem efeitos tóxicos em ninfas deste percevejo, causando mortalidade e atraso no desenvolvimento dos insetos sobreviventes. De maneira análoga a outros modelos de insetos já estudados, a toxicidade em D. peruvianus dependeria da ativação proteolítica das proteínas por enzimas digestivas (catepsinas) do inseto e formação de um peptídeo tóxico. Neste trabalho, estudos de hidrólise in vitro na presença de inibidores seguidos por SDS-page e Western-blot confirmaram a ativação proteolítica da urease por enzimas do tipo catepsina-B. O homogeneizado de intestinos de ninfas hidrolisa também substratos típicos para catepsinas, como hemoglobina e Abz-AIAFFSRQ-EDDnp, e a atividade proteolítica é bloqueada por pepstatina-A e E-64, inibidores específicos para aspártico e cisteíno proteinases, respectivamente. Duas cisteíno proteinases (DpQ-NR e DpQ-E) de intestinos de ninfas de D. peruvianus foram parcialmente purificadas e caracterizadas. Ambas apresentaram pH ótimo de atividade proteolítica entre 4,5 e 6,5, na presença de DTT e foram totalmente inibidas por E-64. No entanto o perfil de inibição evidencia a presença de outras enzimas nas frações. Ensaios de especificidade da fração DpQ-NR revelaram a preferência da enzima por substratos contendo resíduo hidrofóbico em P2, enquanto a enzima DpQ-E tem preferência por substratos contendo aminoácidos básicos em P1. Assim, o trabalho desenvolvido sugere a presença de proteinases múltiplas no sistema digestivo de D. peruvianus e o possível envolvimento destas peptidases na ativação proteolítica da urease. / Cotton (Gossypium hirsutum), an important agricultural commodity, is attacked by a number of pests, such as the cotton stainer bug Dysdercus peruvianus (Hemiptera: Pyrrhocoridae) which may cause severe losses in cotton plantations. Bug feeding on the cotton seeds and stains the cotton fibers resulting in damage to the seed, besides being a vector for phytopathogenic bacteria and fungi. Biotechnology strategies focusing on plant defensive molecules are being considered as an alternative to increase host plant resistance against this pest. The jack bean Canavalia ensiformis is the source of proteins displaying insecticidal activity such as urease, canatoxin and concanavalin-A. Canatoxin and urease were shown to cause lethality and severe detrimental effects in surviving insects, delaying the development stages of D. peruvianus. As in other insect models studied previously, this would depend on the proteolytic activation of the protein by insect cathepsin-like digestive enzymes to produced toxic peptides. The in vitro hydrolysis of urease in the presence of inhibitors, followed by SDS-page and Wester-blot confirm the proteolytic activation by insect cathepsin B-like enzymes. A nymphal gut extract hydrolysed typical cathepsin substrates, such as hemoglobin and Abz-AIAFFSRQ-EDDnp, and hydrolysis was blocked by pepstatin-A and E-64, specific inhibitors of aspartic and cysteine proteinases. Two cysteine peptidases (DpQ-NR and DpQ-E) of D. peruvianus nymphs were partially purified and characterized. Both enzymes showed maximum activities at pH 4.5-5.0 and 5.5-6.5 in the presence of dithiotreitol and were totally inhibited by E-64. However, the inhibition profile points out to the presence of other types of proteinases in both fractions. DpQ-NR preferentially hydrolysed substrate with hydrophobic amino acids in P2, while DpQ-E had preference for substrate with basic residues in P1. Therefore, our work suggests the presence of multiple proteinases with distinct biochemical properties in the digestive system of D. peruvianus and the potencial involvement of these peptidases on the proteolytic activation of urease.

Orientador: Sergio Roberto Peres Line / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-07-21T03:06:19Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DellaColetta_Ricardo_M.pdf: 1863333 bytes, checksum: 44c85001fc634c2cd4363b8f4868e6bc (MD5) Previous issue date: 1996 / Resumo: A participação das metaloproteinases durante o desenvolvimento dental ainda não está bem estabelecida. Neste trabalho foram realizados estudos no intuito de caracterizar e detenninar o sítio principal de atuação dos grupos de metaloproteinases associadas ao germe dental' do primeiro molar em desenvolvimento. Verificou-se a presença de enznnas gelatinolíticas e caseinolíticas com comportamento, quanto à ação de inibidores específicos, ação colagenolítica e peso molecular, semelhante ao das enzimas pertencentes. ao grupo das metaloproteinases. A análise nos diversos períodos do desenvolvimento do germe dental mostrou que a maturação dental é acompanhada por um aumento na secreção dessas proteinases. Quando analisado o sítio de atuação dessas metaloproteinases, observou-se maior ação gelatinolítica na. papila dental quando comparado com o órgão do esmalte. A ação caseinolítica foi maior no órgão do esmalte. Estes resultados indicam que enzimas pertencentes ao grupo das metaloproteinases estão associadas ao desenvolvimento e crescimento do órgão dental. A presença de caseínases, principalmente no órgão do esmalte, pode estar relacionada ao processo de mineralização dental / Abstract: The participation of metalloproteinases during the tooth development is not well established. This work was performed in order to determine and characterize the expression of metalloproteinases during the rat first molar development. Gelatinolytic and caseinolytic activities were analyzed by zymography on polyacrylamide gels containing one of the substracts. The maturation of the rat first molar was accompanied by changes in the expression of metalloproteinases. Gelatinolytic activity increased progressively from day O to 15, while caseinolytic activity increased rapidly from day 3 to 10, decreasing on day 15. Mechanical separation of compartments of tooth genn showed that caseinolytic activity was restricted, mainly in the enamel organ whi1e gelatinolytic activity was localized mainly in the papillae. All the enzymes detected were inhibited by 1,10phenanthroline, which is a specific inhibitor for metalloproteinases. These data suggest that matrix metalloproteinases pIay an important role in the developmtmt and maturation of tooth germ / Mestrado / Biologia e Patologia Buco-Dental / Mestre em Ciências

Orientador : Jose Francisco Hofling / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-03T09:01:02Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Mardegan_RitadeCassia_M.pdf: 3327019 bytes, checksum: 4a0cdbba906f141149dbc279b1888678 (MD5) Previous issue date: 2003 / Resumo: Um total de 158 amostras de Candida albicans isoladas da cavidade oral de crianças, com idades entre 24 e 36 meses, divididas em dois grupos: Cárie ativas (104 amostras) e Livres de Cárie ( 54 amostras) foram estudadas. Com base nos dados da literatura, a proposição da presente pesquisa foi: 1) analisar e comparar a produção de proteinases e fosfolipases de Candida albicans, entre os dois grupos; 2) relacionar a diversidade fenotípica quanto à produção dessa enzima com o polimorfismo genético, através da técnica de AP-PCR. As amostras isoladas e identificadas como Cândida albicans, foram processadas para cultivo em meio de cultura Ágar proteinase e Agar fosfolipase e incubadas a 37°C por 7 e 4 dias, respectivamente. Após esse período, foi medida a atividade enzimática das cepas proteinase e fosfolipase positivas, classificando-as com os índices, O (negativa),1 (positiva) e 2 (positiva elevada). Todas as amostras foram submetidas á técnica de AP-PCR, usando o "primer" arbitrário AP-3. As análises enzimáticas revelaram não haver diferenças estatisticamente significativas entre os dois grupos estudados. A técnica de AP-PCR foi eficaz em demonstrar o polimorfismo genético de C. albicans intra indivíduos, revelando maior diversidade clonal em indivíduos cárie ativos em relação aos livres de cárie e a construção de dendogramas de similaridade demonstrou que linhagens clonais semelhantes ocorrem apenas intra indivíduos e não entre indivíduos. Os resultados obtidos permitiram observar que o perfil enzimático independe das características genotipicas das cepas / Abstract: A total of 158 samples of Candida albicans isolated from the oral cavities of healthy children, with ages ranging from 24 to 36 months divided in two groups, caries active and caries free were studied. Based on the literature, the aims of the present study were: 1) to analyze and to compare between the groups, proteinase and phospholipase produced by Candida albicans; 2) to correlate the phenotypic diversity of this enzyme with the genetic polymorphism using the AP-PCR method. The samples isolated and identified as C. albicans were inoculated in proteinase agar and phospholipase agar media and then incubated at 37°C for 7 days and 4 days respectively. After the incubation period, the enzimatic activity of the positive proteinase and phospholipase strains was measured according to the indexes O (zero) 1 (one) and 2 (two). All the samples were subjected to AP-PCR method, using the arbitrary primer AP-3. The enzymatic analysis showed no statistically significant differences between the groups studied. The AP-PCR method was effective to demonstrate the genetic polymorphism in the C. albicans intra individually, revealing a greater clonal diversity in caries actives children in relation to caries free, ones the construction of dendograms of similarity showed clonal lineage intra individual only. The results allowed the observation that the enzimatic profile does not depend on' the genotypic characteristics of the strains / Mestrado / Microbiologia e Imunologia / Mestre em Biologia Buco-Dental

Orientador: Igor Polikarpov / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-03T21:29:22Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Krauchenko_Sandra_D.pdf: 16409460 bytes, checksum: de77214db0609d7859cd4a199cf747a6 (MD5) Previous issue date: 2004 / Doutorado