Thesis (MA (Theol.))-University of Pretoria, 2007. / Includes bibliographical references.

Made available in DSpace on 2016-06-02T20:18:16Z (GMT). No. of bitstreams: 1 4115.pdf: 3025208 bytes, checksum: 10c4684cd678fb5d22f0efb47de00306 (MD5) Previous issue date: 2012-02-24 / Universidade Federal de Minas Gerais / The quadriceps muscle weakness is common in subjects with knee osteoarthritis (OA), leading to functional deficits. Some risk factors are causes, such as morphological changes (atrophy and reduced number of muscle fibers), changes in non-contractile proteins of muscle and changes in the level of muscle activation. However, these factors are not well understood, particularly with respect if they are already present in earlier stages of the disease. Therefore, the aim of this study was to verify if men with early degrees of knee OA have functional and morphological impairments and immunohistochemical changes of the quadriceps muscle, as well as investigate if this subjects had compromising of their quality of life . The men (40-65 years) who participated in this study were divided into two groups: Control Group (CG) with healthy subjects and Osteoarthritis Group (OAG) with individuals with knee OA grade I or II. A biopsy of the vastus lateralis (VL) was performed for morphological (through the ATPase reaction) and immunohistochemical analysis(analysis of expression and localization of the receptor for advanced glycation end products - RAGE, and analysis of the expression of collagen type I and III ) . An evaluation of knee extensor torque (KET), concentric and eccentric at 90°/s and 180°/s, was performed simultaneously with an evaluation of the electromyographic activity of the VL (RMS value). Moreover, the WOMAC questionnaire was used. For the intergroup analysis, we used the independent t-test and the Mann-Whitney U test. Spearman s correlation coefficient was used to detect the relationship between the three subscales of WOMAC questionnaire and the average knee extensor peak torque (&#945;<0.05). The collagen was analyzed by semiquantitative analysis. We found lower values for the GOA in eccentric knee extensor peak torque at 90 °/s (p = 0.01) and 180°/s (p = 0.04), and in electromyography activity (RMS) during eccentric contraction, in two angular velocities (p <0.01). Higher values were found for the GOA in the proportion (p = 0.03) and in the relative crosssectional area of type 2b fibers (p = 0.02). It was found a negative correlation between the concentric and eccentric knee extensor torque and the three subscales of the WOMAC questionnaire (p<0.05). In the analysis of RAGE no difference was found between the groups. In semiquantitative analysis of collagen was found increased expression of collagen type I and type III for the GOA. Thus, men with knee OA grades I or II present functional, morphological and immunohistochemical changes of the quadriceps muscle, indicating possible neuromuscular adaptations. Therefore, in the early stages of knee OA, exercises should be recommended in order to minimize or delay the functional deficits resulting from OA. / A fraqueza do músculo quadríceps é comum em sujeitos com osteoartrite (OA) de joelho, levando a déficits funcionais. Alguns fatores são apontados como causas, tais como alterações morfológicas, como atrofia e redução no número de fibras musculares, alterações nas proteínas não contráteis do músculo e alterações no nível de ativação muscular. No entanto, esses fatores ainda não estão bem esclarecidos, principalmente com relação se os mesmos já estão presentes em estágios mais precoces da doença. Diante disso, o objetivo dessa tese foi verificar se homens com graus iniciais de OA de joelho apresentam alterações funcionais, morfológicas e imunohistoquímicas do músculo quadríceps, bem como comprometimento de sua qualidade de vida. Participaram desse estudo homens, com idade entre 40 e 65 anos, divididos em dois grupos: Grupo Controle (GC) com indivíduos saudáveis e Grupo Osteoartrite (GOA) com indivíduos com OA de joelho graus I ou II. Foi realizada biópsia do músculo vasto lateral (VL) para análise morfológica (por meio da reação de ATPase) e imunohistoquímica (análise da expressão e localização dos receptores dos produtos finais da glicosilação RAGE, e análise da expressão dos colágenos tipo I e III). A avaliação do torque extensor do joelho, concêntrico e excêntrico, a 90º/s e 180º/s, foi realizada simultaneamente à avaliação da atividade eletromiográfica do músculo VL (valor de RMS). O questionário WOMAC foi aplicado para análise da qualidade de vida. Na análise intergrupo, foi utilizado o teste T de student para amostras independentes e o teste não-paramétrico U Mann-Whitney. Foi utilizado o coeficiente de correlação de Spearman para analisar a relação entre as três seções do questionário WOMAC e os picos de torque extensor do joelho (&#945;<0.05). Para os colágenos foi feita análise semiquantitativa. Foram encontrados menores valores para o GOA no pico de torque extensor excêntrico a 90º/s (p=0,01) e a 180º/s (p=0,04), e na atividade eletromiográfica (valor RMS), durante contração excêntrica, nas duas velocidades angulares (p<0,01). Maiores valores para o GOA foram encontrados na proporção (p=0,03) e área transversa relativa das fibras tipo 2b (p=0,02). Foi encontrada correlação negativa entre as três seções do questionário WOMAC e os valores de pico de torque para os indivíduos com OA de joelho (p>0,05). Na análise do RAGE não foi encontrada diferença entre os grupos. Na análise semiquantitativa foi encontrada maior expressão dos colágenos tipo I e tipo III para o GOA. Assim, homens com OA de joelho graus I ou II apresentam alterações funcionais, morfológicas e imunohistoquímica do músculo quadríceps, podendo essas alterações serem possíveis adaptações neuromusculares. Dessa forma, desde os graus iniciais de OA de joelho, devem se recomendados exercícios com o objetivo de minimizar ou retardar os déficits funcionais decorrentes da OA.

Les chauves-souris (Chiroptera) sont reconnues comme réservoirs naturels de nombreux microorganismes, dont certains pathogènes, responsables de maladies sévères chez l’homme. À ce jour, plus de 1 300 espèces de chauves-souris, aux habitats et comportements sociaux multiples, ont été décrites. Cette grande diversité d’espèces reflète l’importante diversité des caractéristiques biologiques, de l’histoire évolutive et de la capacité d’adaptation de cet ordre. Les études immunobiologiques laissent à penser que ces animaux présentent des stratégies antimicrobiennes plus efficientes que les autres mammifères, influencées par leurs caractéristiques spécifiques et par les contraintes pathogéniques associées aux environnements. L’objectif de cette thèse était de mieux comprendre, en utilisant la diversité virale et la circulation du virus rabique comme proxy, comment les contraintes bioécologiques, liées à la phylogénie de l’hôte et à son environnement, pouvaient impacter la diversité virale des chauves-souris, et subséquemment, induire une adaptation locale des gènes de l’immunité. L’ensemble des résultats obtenus montre que les composantes environnementales sont des facteurs clés des diversités virales et immunitaires. Associées aux caractéristiques spécifiques, elles jouent un rôle dans le maintien de ces diversités et déterminent les capacités d'adaptation des chauves-souris. Les processus démographiques semblent également contribuer au maintien des virus dans un environnement donné. Ce travail apporte des éléments de compréhension des mécanismes de maintien et de mise en place des diversités virales et immunitaires qui influencent l'adaptation locale des chauves-souris. / Bats belong to the order Chiroptera and are the only mammals capable of true flight. They are recognized as excellent biodiversity indicators. Furthermore, these animals have been described as natural reservoirs and source of infection for several microorganisms, including pathogens responsible for severe human diseases. Currently, more than 1,300 different bat species are described with different habitats and sociality, reflecting a high diversity of bioecological features, life histories and adaptation capacity. Immunobiological studies suggest that bats present more effective anti-microbial strategies highly influenced by their biological traits as well as by the environmental-associated pathogen pressures. The aim of this thesis was to better understand, using viral diversity and circulation of the rabies virus as a proxy, how bioecological constraints related to the phylogeny and the environment where they evolve, could impact the diversity of hosted viral communities and subsequently induce a local adaptation of immune genes. Altogether, the results obtained during this thesis showed that environmental components were key factors of both viral and immune diversities. Associated with species characteristics, environment plays a key role in shaping both diversities and determines the adaptation ability of bats. Nevertheless, demographic processes should not be overshadowed as they seem to contribute to the maintenance of viruses in a given environment. This work sheds light on the mechanisms maintaining and shaping both viral and immune diversities and subsequently influencing the local adaptation of bats

Au Nunavik, la rage du renard arctique demeure endémique et les morsures de chiens représentent une source importante d’exposition humaine. Cependant, nous disposons de peu de données probantes pour guider les stratégies de gestion et de prévention dans ce contexte socio-culturel assez particulier. Dans la présente étude, nous analysons les données de signalements des morsures animales déclarées à la direction de santé publique du Nunavik (DSPN) de 2008 à 2017 en tenant compte du contexte spécifique et global ainsi que des différences entre les enfants et les adultes dans le but d’extraire les informations utiles pour le contrôle, la gestion et la prévention des morsures animales, particulièrement canines, et des expositions à la rage. Sur les dix ans, 320 signalements ont été rapportés avec une augmentation importante dans les déclarations à partir de 2012. Plus de 90% des cas ont impliqué un chien. L’incidence cumulative annuelle a été plus élevée que celle rapportée ailleurs au Canada et aux États-Unis. La distribution spatiale des cas d’exposition humaine potentielle à la rage ainsi que les cas de rage animale étaient variables entre les villages de la baie d’Hudson et ceux de la baie d’Ungava. Deux profils de victimes sont ressortis à travers les analyses, à savoir les enfants de moins de 15 ans qui étaient plus souvent exposés au niveau de la tête et du cou et dans un contexte de jeu et les jeunes adultes de sexe masculin, plus souvent exposés au niveau des extrémités supérieurs et à travers des activités telle que le mushing ou la chasse. Ces différents patrons d’expositions seraient importants à considérer et à cibler dans les stratégies de prévention. Durant la période d’étude, 15 animaux rabiques ont été identifiés. Bien que le taux de positivité ait été plus élevé parmi les animaux sauvages, 60% des expositions humaines confirmées à la rage ont impliqué des chiens. Les résultats de cette étude démontrent l’importance de considérer les morsures canines en tant qu’enjeu prioritaire de santé publique au sein des communautés Inuit du Nunavik et soulignent le besoin d’adopter des approches préventives adaptées au contexte. / In Nunavik, arctic fox rabies is still endemic and dog bites represent a considerable source for human exposure, nevertheless, we are lacking scientific evidence to guide management and prevention strategies in this particular socio-cultural context. In the present study, we analyze cases of declared animal bites that were reported to the Nunavik Regional Health Board (NRHB) from 2008 to 2017, taking into account the specific and global context, as well as the differences between children and adults in order to retrieve accurate, contextual and reliable information to guide future control and prevention strategies. Over the ten year period, 320 cases of animal related injuries were reported with an important increase during the study period. Over 90% of these cases involved dogs. The annual incidence was higher than previously reported in other regions in Canada and the United States (US). The spatial distribution, for potential human exposures to rabies as well as animal rabies cases, was different between the villages of Hudson Bay and Ungava Bay. Two main victim profiles have emerged through the analysis, namely children under 15 years old (y/o) who were most likely to be exposed in the head and neck, mostly during play and young male adults through activities such as mushing and hunting; these differences should be considered and targeted in prevention strategies as risk factors. During the study period, 15 rabid animals were identified. Although positivity rate was higher among wildlife, most confirmed human exposures occurred with a dog (60%). These results sustain the importance of dog bites as a public health issue in Inuit communities of Nunavik and highlight the need for preventive approaches that are adapted to the context.

Les morsures de chien dans les communautés autochtones nordiques sont une préoccupation importante, considérant que la rage du renard est endémique au Québec au nord du 55e parallèle. Cette recherche visait à approfondir la compréhension des risques associés aux morsures de chien, en évaluant l’état actuel des connaissances sur ce sujet, puis en investiguant l’occurrence des morsures et les connaissances, attitudes et pratiques liées aux chiens et aux morsures dans deux communautés autochtones nordiques du Québec. D’abord, une revue de la portée a été réalisée et a montré que 0,61 à 59,6/10 000 habitants des communautés autochtones du nord sont mordus annuellement, et que 27 à 63% ont rapporté avoir subi une morsure de chien au cours de leur vie. Les résultats appuient les inquiétudes concernant un risque plus élevé dans ces communautés que dans le reste du Canada et soulignent le manque de connaissance sur les facteurs de risque contextuels et environnementaux. Puis, une étude a été effectuée dans les communautés Naskapi et Innu au nord du Québec et a montré que 21% des participants avaient subi une morsure de chien au cours de leur vie. L’étude a aussi révélé un manque de connaissance et de sensibilisation au risque de contracter la rage et aux mesures de prévention chez les résidents de ces communautés. Cette étude apporte des connaissances importantes pour développer et prioriser les mesures visant à réduire les risques associés aux morsures de chien et la transmission de la rage qui sont adaptées aux communautés autochtones nordiques. / Dog bites in northern Indigenous communities are a significant concern, considering that fox rabies is endemic north of the 55th parallel in the province of Quebec. This research aimed to deepen the understanding of risks associated with dog bites, by assessing the current state of knowledge on this subject, then by investigating the occurrence of dog bites and the knowledge, attitudes and practices related to dogs and bites in two northern Indigenous communities in Quebec. First, a scoping review was conducted and showed that 0.61 to 59.6/10,000 inhabitants of northern Indigenous communities are bitten annually, and that 27 to 63% reported being bitten by a dog during their lifetime. Results support concerns about a higher risk in these communities than the rest of the Canadian population and highlight the need for more research on the contextual and environmental factors that influence this risk. Second, a study was carried out in the Naskapi and Innu communities in northern Quebec and showed that 21% of participants had suffered a dog bite during their lifetime. The study also revealed a lack of knowledge and awareness on the risk of contracting rabies and on preventive measures among inhabitants of these two communities. This study provides important knowledge for developing and prioritizing measures aimed at reducing the risks associated with dog bites and rabies transmission that are adapted to northern Indigenous communities.

Denna uppsats utforskar förhållandet mellan filmtekniska aspekter av klipptempo och en mors ilska i avsnitt 6 Fishes av TV-serien The Bear. Genom en kvalitativ analys, med en kvantitativ tabell som bas, granskas avsnittet med hjälp av semiotisk teori om symboler och genusteori om mom rage för att upptäcka kopplingar mellan timern som symbol och mammans ilska. Resultaten visar på en medveten användning av tempo och timer för att gestalta mammans stress och ilska. Användningen av tempo och timer i köksscenerna i The Bear bidrar till att skapa en känsla av intensitet och stress som speglar mammans upplevelse av händelserna.  Detta dokument inkluderar även en designdokumentation vid namn Stranger Things - en titelsekvens som var en del av examensarbetet för Visuell kommunikation. Projektet är en animation på hur en titelsekvens till TV-serien Stranger Things hade kunnat se ut. Designdokumentationen börjar från sida 31. / This paper explores the relationship between filmic aspects of editing pace and a mother's anger in Episode 6, Fishes, of the TV series The Bear. Through a qualitative analysis, supported by a quantitative table, the episode is examined using semiotic theory of symbols and gender theory of mom rage to uncover connections between the timer as a symbol and the mother's anger. The findings demonstrate a deliberate use of tempo and timer to portray the mother's stress and anger. The utilization of tempo and timer in the kitchen scenes of The Bear contributes to creating a sense of intensity and stress that mirrors the mother's experience of the events.

Récemment, des études menées chez des patients atteints de la maladie d’Alzheimer (MA) suggèrent un rôle important de la clairance cérébrale des peptides bêta-amyloïde (Abeta) dans la physiopathologie de la MA. Les échanges de peptide Abeta entre le cerveau et le sang peuvent se faire à travers la barrière hémato-encéphalique (BHE). De nombreux transporteurs sont exprimés au niveau de la BHE, telles les protéines ABC (ATP-Binding Casette) et SLC (Solute Carriers). Il a été montré que l’influx du peptide Abeta à travers la BHE était partiellement médié par le récepteur RAGE (Receptor for Advanced Glycation End products) et son efflux par le récepteur LRP-1 (Low density lipoprotein receptor-related protein 1). De plus, l’implication de transporteurs ABC/SLC dans le passage cérébral du peptide Abeta a été suggérée. Il paraît donc important de caractériser les transporteurs ABC et/ou SLC impliqués dans le transport du peptide Abeta à travers la BHE. D’autre part, l’on peut se demander si, dans le cadre de la MA, la BHE subit des modifications, en termes d’étanchéité, d’expression de transporteurs, de mécanismes de transport, et si, dans ce cas, il y a une modification du transport du peptide Abeta à travers la BHE altérée. Nous avons d’abord montré que des transporteurs ABC et SLC étaient respectivement impliqués dans l’efflux et l’influx des peptides Abeta à travers la BHE. Concernant l’efflux, outre l’Abcb1, nous avons montré qu’Abcg2 et Abcg4 étaient impliquées dans la clairance cérébrale des peptides Abeta. Concernant l’influx, nous avons montré qu’Oatp1a4 pourrait jouer un rôle important dans la pénétration cérébrale des peptides Abeta. De plus, Abca1, principal transporteur ABC impliqué dans le transport du cholestérol, régule indirectement les taux cérébraux d’Abeta. En particulier, nous avons identifié la L-thyroxine et la rosuvastatine comme de puissants inhibiteurs respectifs de l’efflux et de l’influx cérébral d’Abeta. L’ensemble de ces transporteurs d’influx et d’efflux fixe ainsi la clairance cérébrale des peptides Abeta à travers la BHE. Or ces transporteurs sont régulés chez les souris 3xTg-AD (modèle de souris triple transgénique pour la MA exprimant à la fois les pathologies amyloïde et tau), dans des phases précoces et/ou tardives de la MA. Précocement, l’expression de Rage et d’Abca1 sont fortement augmentées au niveau de la BHE chez les souris 3xTg-AD. L’augmentation de Rage dès l’âge de 3 mois laisse supposer une augmentation très précoce de l’influx du peptide Abeta à travers la BHE. Mais cet influx semble être contre-balancé par l’augmentation concomitante d’Abcg4. Quant à Abca1, ne transportant pas directement le peptide Abeta, le rôle de son augmentation graduelle au cours du développement de la MA reste à déterminer. L’ensemble de ces régulations n’étant pas suffisantes pour empêcher l’accumulation cérébrale d’Abeta, des régulations plus tardives semblent se mettre en place, avec notamment l’augmentation de l’expression d’Abcb1 et d’Abcg2, et la diminution d’Oatp1a4. Ces mécanismes semblent donc correspondre à des phénomènes compensatoires ayant pour objectif d’augmenter la clairance cérébrale d’Abeta. Enfin, nous avons montré que l’intégrité physique de la BHE n’était pas altérée chez ces souris 3xTg-AD âgées de 3 à 18 mois. De plus, nos résultats ont montré que le volume vasculaire était diminué de manière précoce, notamment au niveau de l’hippocampe, chez les souris 3xTg-AD par rapport à leurs contrôles. Ce phénomène n’a pas été retrouvé chez les souris APP/PS1 n’exprimant que la pathologie amyloïde. Ces résultats suggèrent un rôle causal et précoce de la protéine tau hyperphosphorylée dans la pathologie de la MA. En conclusion, nos résultats soulignent l’importance de la BHE dans la physiopathologie de la MA. Ce travail de thèse ouvre des perspectives thérapeutiques, mais aussi des pistes pour la compréhension des mécanismes conduisant à une régulation de ces systèmes de transport dans la MA. / Recent studies in Alzheimer's disease (AD) patients have suggested an important role of cerebral clearance of Abeta peptide in the pathogenesis of AD. The blood-brain barrier (BBB) represents a major pathway for exchanges of Abeta between the brain and the peripheral circulation. Many transporters are expressed at the BBB, such as the ABC (ATP-Binding Casette) and SLC (Solute Carriers) proteins. It has been shown that the influx of Abeta peptide across the BBB was partially mediated by the receptor RAGE (Receptor for Advanced Glycation End products) and its efflux by the LRP-1 receptor (low density lipoprotein receptor-related protein 1). On the other hand, the involvement of ABC/SLC transporters in the brain efflux/influx of Abeta peptide has been suggested. It was therefore important to characterize the ABC/SLC transporters involved in the transport of Abeta peptide across the BBB. In addition, the disorders of the BBB have always been suggested in neurodegenerative diseases. The question is whether, in the context of AD, the BBB undergoes changes in terms of integrity, expression of transporters, transport mechanisms, and if, in this case, there is a change in the transport of Abeta peptide across the impaired BBB. We first showed that the BBB regulated the exchange of blood-brain Abeta peptides. Thus, the involvement of efflux (ABCG2 and ABCG4) and influx (Oatp1a4) transporters allows this equilibrium of Abeta peptides between the blood and the brain parenchyma. In addition, ABCA1, the main ABC transporter involved in cholesterol transport, regulates indirectly the brain levels of Abeta. We also identified the L-thyroxine and rosuvastatin as potent inhibitors of the efflux and influx transport of brain Abeta, respectively. All these influx and efflux transporters could control the transport of Abeta peptide across the BBB. However, these transporters are regulated in 3xTg-AD mice (triple transgenic mouse model for AD expressing both amyloid and tau pathologies) in the early and/or late stages of AD. Early, the expression of Abca1 and Rage are strongly increased at the BBB in 3xTg-AD mice. The high expression levels of Rage at the age of 3 months suggest an early increase in the influx transport of Abeta peptide across the BBB. But this increase seems to be compensated by the concomitant increase of Abcg4. As Abca1 does not directly mediate the transport of Abeta peptide, the role of its gradual increase in the development of AD remains to be determined. As all these regulations are not sufficient to prevent the accumulation of cerebral Abeta, the late regulations seem to develop, including increased expression of Abcb1 and Abcg2, and decreased expression of Oatp1a4. These mechanisms seem to correspond to compensatory phenomena with the objective to increase the cerebral clearance of Abeta. Finally, we have shown that the physical integrity of the BBB was not altered in 3xTg-AD mice aging from 3 to18 months. In addition, our results showed that the cerebral vascular volume was reduced early, especially in the hippocampus of 3xTg-AD mice compared to their age-matched controls. This phenomenon was not found in APP/PS1 mice expressing only the amyloid pathology. These results suggest a causal and early role of hyperphosphorylated tau in AD pathology.In conclusion, our results show the importance of the BBB and particularly of Abcg2, Abcg4 and Oatp1a4 transporters in the pathophysiology of AD. Knowledge of these transporters not only opens up therapeutic or prophylactic purposes, but also leads to the further understanding of the regulation mechanisms of these transport systems in AD.

Das S100A4-Protein ist für die Manifestierung eines metastatischen Phänotyps bei vielen Tumorarten von enormer Bedeutung. Die Aufklärung der zugrunde liegenden Mechanismen und der Interaktionspartner von S100A4 stellt daher einen vielsprechenden Forschungsansatz dar, um neue Erkenntnisse über das Verhalten von Tumorzellen während des Metastasierungsprozesses zu erhalten. Darauf aufbauend können neue Ansatzpunkte für die Therapie metastasierender Krebserkrankungen gewonnen werden. In dieser Hinsicht ist das bisher einer Behandlung kaum zugängliche maligne Melanom als besonders aggressiver und frühzeitig metastasierender Tumor ein ideales Modell zur Aufklärung der zellulären und molekularen Prozesse, über die S100A4 seine Metastasen-fördernden Wirkungen ausübt. Das Ziel der vorliegenden Arbeit war die biochemische und radiopharmakologische Charakterisierung der S100A4-RAGE-Interaktion sowie die Untersuchung der Beteiligung von S100A4 an Prozessen der Metastasierungskaskade in vitro und in vivo. Dies erforderte die Herstellung von rekombinantem S100A4-Protein und die Generierung von stabil mit S100A4-transfizierten Melanomzellen, die damit eine heraufregulierte S100A4-Proteinbiosynthese aufweisen. Die Gewinnung von rekombinantem S100A4 in biologisch funktioneller Form unter Verwendung eines prokaryotischen Expressionssystems erfolgte mit einem Reinheitsgrad von ca. 92%. Das rekombinante S100A4-Protein wurde mit dem Aktivester N-Succinimidyl-4-[18F]fluorbenzoat radioaktiv markiert und charakterisiert. Es wurde die Interaktion zwischen S100A4 bzw. 18F-markiertem S100A4 und der löslichen RAGE-Isoform sRAGE mit einer moderaten Bindungsaffinität im µM-Bereich nachgewiesen. Des Weiteren erfolgte erstmals die Analyse der radiopharmakologischen Eigenschaften von 18F-S100A4 mittels Untersuchungen zur zellulären Assoziation sowie zur metabolischen Stabilität, Bioverteilung und zu In-vivo-Interaktionen mittels Kleintier-Positronen-Emissions-Tomographie in der Ratte. Die In-vitro-Experimente wurden an Endothelzellen (HAEC) und an stabil mit RAGE-transfizierten A375-, A375-mock bzw. nicht transfizierten A375-Melanomzellen durchgeführt. Die A375-hRAGE-Zellen zeigten eine deutlich heraufregulierte RAGE-Proteinbiosynthese während die Endothelzellen eine vergleichsweise geringe intrazelluläre RAGE-Proteinkonzentration aufwiesen. Bei den Melanomzellen kann aufgrund der höheren Assoziation von 18F-S100A4 an A375-hRAGE-Zellen auf eine selektive Bindung von 18F S100A4 an RAGE-Rezeptoren auf der Zelloberfläche geschlossen werden. Die Assoziation von 18F S100A4 an Endothelzellen war bei 37°C in Gegenwart von nicht markiertem rekombinantem S100A4 signifikant vermindert, dementsprechend findet eine spezifische Interaktion von 18F-S100A4 mit Zelloberflächenrezeptoren der Endothelzellen statt. Dieses Ergebnis und die insgesamt höhere Bindung von 18F S100A4 an Endothelzellen im Vergleich zur Assoziation an Melanomzellen lassen neben RAGE noch andere Rezeptoren wie z. B. internalisierende Scavenger-Rezeptoren vermuten. Die In-vivo-Stabilitätsuntersuchungen verdeutlichen einen proteolytischen Abbau von 18F S100A4, allerdings belegen das Vorhandensein von 67% intaktem 18F-S100A4-Protein nach einer Stunde, die Stabilität von 18F-S100A4 in vivo. Die Bioverteilungs- bzw. PET-Untersuchungen zeigen eine schnelle, innerhalb weniger Minuten stattfindende hohe Akkumulation in den Nieren und verdeutlichen somit die renale Ausscheidung von 18F S100A4. Die maßgeblichen Anreicherungen in Milz, Leber, Blut, Lunge und Nebennieren lassen Interaktionen mit Oberflächenrezeptoren dieser Gewebe erkennen. Die temporäre Retention von 18F-S100A4 in der Lunge, dem Hauptsyntheseorgan von RAGE, und die verminderte 18F-S100A4-Akkumulation in Gegenwart des spezifischen RAGE-Liganden glykLDL ist ein Hinweis dafür, dass S100A4 in vivo in der Lunge an RAGE bindet. Die Aktivitätsanreicherungen in Milz, Leber und Nebenniere deuten aufgrund der geringeren RAGE-Synthese in diesen Organen auf die Interaktion von 18F-S100A4 mit anderen Zelloberflächenrezeptoren z. B. aus der Familie der Scavenger-Rezeptoren hin. Die Beteiligung von S100A4 an Metastasierungsprozessen des malignen Melanoms wurde an stabil mit S100A4-transfizierten A375-Melanomzellen, die eine Heraufregulierung der humanen bzw. murinen S100A4-Proteinbiosynthese im Vergleich zu A375-mock- (Vektor-Kontrolle) und nicht-transfizierten A375-Zellen zeigen, untersucht. Die A375-hS100A4-Zellen sezernierten zudem eine signifikant höhere S100A4-Proteinkonzentration in das umgebende Zellkulturmedium im Vergleich zu den Kontrollen. In dieser Hinsicht konnte bei den A375-hS100A4-Zellen, vermutlich aufgrund der höheren extrazellulären S100A4-Konzentration, eine gesteigerte Proliferations-, Motilitäts-, Migrations- und Invasionsrate gegenüber den A375-mock- und A375-Zellen nachgewiesen werden. In diesem Zusammenhang stehen ebenso die gesteigerte RAGE-Proteinbiosynthese und die signifikant höhere Aktivität des Transkriptionsfaktors NF-κB bei A375-Zellen nach 24-stündiger Inkubation mit Kulturmedium der A375-hS100A4-Zellen. Demnach wirkt vermutlich das extrazelluläre S100A4-Protein als autokriner bzw. parakriner Regulator von RAGE und NF κB. Die subkutane Injektion der A375- und stabil transfizierten A375-Melanomzellen in Nacktmäuse führte zur Entwicklung subkutaner Tumore an der Injektionsstelle. Bereits zwei Wochen nach der Injektion etablierten die A375-hS100A4-Zellen die signifikant größeren Tumore im Vergleich zu den A375-mS100A4-, A375-mock und A375-Zellen. Nach Injektion der Zellen in die Schwanzvene der Nacktmäuse konnte keine Entwicklung von Metastasen im Tierkörper festgestellt werden. IN DER VORLIEGENDEN ARBEIT WURDE NACHGEWIESEN: • RAGE ist ein Rezeptor für das S100A4-Protein. Allerdings gibt es eindeutige Hinweise für weitere S100A4-Zielproteine an der Zelloberfläche. • Die bedeutende Rolle von extrazellulärem S100A4 bei wichtigen zellulären Metastasierungsprozessen sowie bei der Aktivierung von Signalproteinen wie NF-κB und RAGE beim malignen Melanom. Die weitere Aufklärung der S100A4-spezifischen Signalkaskaden und Rezeptoren bei metastasierenden Tumorerkrankungen sowie die Charakterisierung von S100A4 als klinischen Parameter bei Patienten mit malignem Melanom stellen hoch interessante Aspekte in der Krebsforschung dar.

Das S100A4-Protein ist für die Manifestierung eines metastatischen Phänotyps bei vielen Tumorarten von enormer Bedeutung. Die Aufklärung der zugrunde liegenden Mechanismen und der Interaktionspartner von S100A4 stellt daher einen vielsprechenden Forschungsansatz dar, um neue Erkenntnisse über das Verhalten von Tumorzellen während des Metastasierungsprozesses zu erhalten. Darauf aufbauend können neue Ansatzpunkte für die Therapie metastasierender Krebserkrankungen gewonnen werden. In dieser Hinsicht ist das bisher einer Behandlung kaum zugängliche maligne Melanom als besonders aggressiver und frühzeitig metastasierender Tumor ein ideales Modell zur Aufklärung der zellulären und molekularen Prozesse, über die S100A4 seine Metastasen-fördernden Wirkungen ausübt. Das Ziel der vorliegenden Arbeit war die biochemische und radiopharmakologische Charakterisierung der S100A4-RAGE-Interaktion sowie die Untersuchung der Beteiligung von S100A4 an Prozessen der Metastasierungskaskade in vitro und in vivo. Dies erforderte die Herstellung von rekombinantem S100A4-Protein und die Generierung von stabil mit S100A4-transfizierten Melanomzellen, die damit eine heraufregulierte S100A4-Proteinbiosynthese aufweisen. Die Gewinnung von rekombinantem S100A4 in biologisch funktioneller Form unter Verwendung eines prokaryotischen Expressionssystems erfolgte mit einem Reinheitsgrad von ca. 92%. Das rekombinante S100A4-Protein wurde mit dem Aktivester N-Succinimidyl-4-[18F]fluorbenzoat radioaktiv markiert und charakterisiert. Es wurde die Interaktion zwischen S100A4 bzw. 18F-markiertem S100A4 und der löslichen RAGE-Isoform sRAGE mit einer moderaten Bindungsaffinität im µM-Bereich nachgewiesen. Des Weiteren erfolgte erstmals die Analyse der radiopharmakologischen Eigenschaften von 18F-S100A4 mittels Untersuchungen zur zellulären Assoziation sowie zur metabolischen Stabilität, Bioverteilung und zu In-vivo-Interaktionen mittels Kleintier-Positronen-Emissions-Tomographie in der Ratte. Die In-vitro-Experimente wurden an Endothelzellen (HAEC) und an stabil mit RAGE-transfizierten A375-, A375-mock bzw. nicht transfizierten A375-Melanomzellen durchgeführt. Die A375-hRAGE-Zellen zeigten eine deutlich heraufregulierte RAGE-Proteinbiosynthese während die Endothelzellen eine vergleichsweise geringe intrazelluläre RAGE-Proteinkonzentration aufwiesen. Bei den Melanomzellen kann aufgrund der höheren Assoziation von 18F-S100A4 an A375-hRAGE-Zellen auf eine selektive Bindung von 18F S100A4 an RAGE-Rezeptoren auf der Zelloberfläche geschlossen werden. Die Assoziation von 18F S100A4 an Endothelzellen war bei 37°C in Gegenwart von nicht markiertem rekombinantem S100A4 signifikant vermindert, dementsprechend findet eine spezifische Interaktion von 18F-S100A4 mit Zelloberflächenrezeptoren der Endothelzellen statt. Dieses Ergebnis und die insgesamt höhere Bindung von 18F S100A4 an Endothelzellen im Vergleich zur Assoziation an Melanomzellen lassen neben RAGE noch andere Rezeptoren wie z. B. internalisierende Scavenger-Rezeptoren vermuten. Die In-vivo-Stabilitätsuntersuchungen verdeutlichen einen proteolytischen Abbau von 18F S100A4, allerdings belegen das Vorhandensein von 67% intaktem 18F-S100A4-Protein nach einer Stunde, die Stabilität von 18F-S100A4 in vivo. Die Bioverteilungs- bzw. PET-Untersuchungen zeigen eine schnelle, innerhalb weniger Minuten stattfindende hohe Akkumulation in den Nieren und verdeutlichen somit die renale Ausscheidung von 18F S100A4. Die maßgeblichen Anreicherungen in Milz, Leber, Blut, Lunge und Nebennieren lassen Interaktionen mit Oberflächenrezeptoren dieser Gewebe erkennen. Die temporäre Retention von 18F-S100A4 in der Lunge, dem Hauptsyntheseorgan von RAGE, und die verminderte 18F-S100A4-Akkumulation in Gegenwart des spezifischen RAGE-Liganden glykLDL ist ein Hinweis dafür, dass S100A4 in vivo in der Lunge an RAGE bindet. Die Aktivitätsanreicherungen in Milz, Leber und Nebenniere deuten aufgrund der geringeren RAGE-Synthese in diesen Organen auf die Interaktion von 18F-S100A4 mit anderen Zelloberflächenrezeptoren z. B. aus der Familie der Scavenger-Rezeptoren hin. Die Beteiligung von S100A4 an Metastasierungsprozessen des malignen Melanoms wurde an stabil mit S100A4-transfizierten A375-Melanomzellen, die eine Heraufregulierung der humanen bzw. murinen S100A4-Proteinbiosynthese im Vergleich zu A375-mock- (Vektor-Kontrolle) und nicht-transfizierten A375-Zellen zeigen, untersucht. Die A375-hS100A4-Zellen sezernierten zudem eine signifikant höhere S100A4-Proteinkonzentration in das umgebende Zellkulturmedium im Vergleich zu den Kontrollen. In dieser Hinsicht konnte bei den A375-hS100A4-Zellen, vermutlich aufgrund der höheren extrazellulären S100A4-Konzentration, eine gesteigerte Proliferations-, Motilitäts-, Migrations- und Invasionsrate gegenüber den A375-mock- und A375-Zellen nachgewiesen werden. In diesem Zusammenhang stehen ebenso die gesteigerte RAGE-Proteinbiosynthese und die signifikant höhere Aktivität des Transkriptionsfaktors NF-κB bei A375-Zellen nach 24-stündiger Inkubation mit Kulturmedium der A375-hS100A4-Zellen. Demnach wirkt vermutlich das extrazelluläre S100A4-Protein als autokriner bzw. parakriner Regulator von RAGE und NF κB. Die subkutane Injektion der A375- und stabil transfizierten A375-Melanomzellen in Nacktmäuse führte zur Entwicklung subkutaner Tumore an der Injektionsstelle. Bereits zwei Wochen nach der Injektion etablierten die A375-hS100A4-Zellen die signifikant größeren Tumore im Vergleich zu den A375-mS100A4-, A375-mock und A375-Zellen. Nach Injektion der Zellen in die Schwanzvene der Nacktmäuse konnte keine Entwicklung von Metastasen im Tierkörper festgestellt werden. IN DER VORLIEGENDEN ARBEIT WURDE NACHGEWIESEN: • RAGE ist ein Rezeptor für das S100A4-Protein. Allerdings gibt es eindeutige Hinweise für weitere S100A4-Zielproteine an der Zelloberfläche. • Die bedeutende Rolle von extrazellulärem S100A4 bei wichtigen zellulären Metastasierungsprozessen sowie bei der Aktivierung von Signalproteinen wie NF-κB und RAGE beim malignen Melanom. Die weitere Aufklärung der S100A4-spezifischen Signalkaskaden und Rezeptoren bei metastasierenden Tumorerkrankungen sowie die Charakterisierung von S100A4 als klinischen Parameter bei Patienten mit malignem Melanom stellen hoch interessante Aspekte in der Krebsforschung dar.

This thesis operates, unashamedly, from the premise that every act of criticism involves a self-reflexive gesture of one's own concerns and ideological imprintings. For this reason Chapter One establishes the writer's own involvement - both autobiographical and theoretical - in notions of male rage and the 'working through' of these concerns. Chapter Two conducts an overview of male rage and the extant systemic literature on the subject. It sets out the various positions on the subject and posits the importance of gender (over generation) in the praxis of therapy. Furthermore, it explores the possibility that the male is equally, but differently, troubled by the hegemonic forces of patriarchy as is the woman. Without diminishing the legitimacy of the woman's experience in the face of male rage, the argument is forwarded that the male is caught in a similar struggle but without the feminine articulatory resources. This chapter details the lack of male power in the face of his supposed muscular omnipotence. Seminal analytic approaches to the question of gender are raised in Chapter Three. Working through Freud, Klein, Lacan and Masters and Johnson an attempt is made to plot the 'evolution' of the feminine and the masculine. Central to this debate is the bi-polarization of gender relations within the same sex (biology/construction) and without (phallic/vaginal, clitoral, passive/active). What emerges is that femininity is bi-focal and that the woman has more resources at her disposal that hitherto acknowledged. While the woman is always double - as both clitoral and vaginal, as lover and mother- it appears that male sexuality is far more precarious than generally perceived. It is this dis-ease on the part of the male that translates itself into envy and, with it, the need to denigrate and belittle woman as the object of that envy. In Chapter 4 an attempt is made to overlap the seemingly divergent fields of analytic and systemic methodologies via the involvement of the therapist in the eco-system of analysis. The substantial role of the therapist -- and the coercive forces placed on him/her by the couple -- is used to modify Elkaim's model and to introduce the need for a telling of the particular stories that concentrate on the unique narratives of the warring couple rather than the patriarchal regime under which these stories are constrained. Before encountering these narratives an essay is made at establishing a methodology of sorts. Newton's scientific formulations are used in order to question the binary opposition that has been, historically, established between quantitative (male) and qualitative (female) methodologies. In the process of questioning this binary opposition it becomes clear that any form of objectifying approach constitutes a refuge from the messiness that is intrinsic to the therapeutic process. The experimental methodology that is posited is precisely one that engages in the narratives of male violence - four extracts are considered, each exposing different articulations of male violence. The question of female subjectivity (and the attendant power of the sorority) is returned to in light of these stories. Central to this section is the notion that male subjectivity is far more convoluted - perhaps more that the feminine counterpart - than initially conceived. The original identification with the (m)other forever displaces him in that the later identification with the father remains distant and contrived. For the purposes of maintaining the dialogic nature of this work, a feminist appraisal of the rage narratives concludes the thesis. Don Quixote is used, by way of an Epilogue, to offer three representations of male subjectivity and to look towards alternative subject positions for the male under patriarchy. / Psychology / D.Litt. et Phil. (Psychology)