Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Farmacologia, Florianópolis, 2016. / Made available in DSpace on 2017-06-27T04:07:48Z (GMT). No. of bitstreams: 1 345674.pdf: 1470023 bytes, checksum: 4faf374b020e940956b261f21b7e631d (MD5) Previous issue date: 2016 / O Transtorno de Déficit de Atenção e Hiperatividade (TDAH) é o distúrbio psiquiátrico mais diagnosticado entre crianças e adolescentes, podendo persistir também durante a fase adulta. Atualmente, o modelo animal mais amplamente utilizado nos estudos pré-clínicos deste transtorno é a linhagem isogênica de ratos espontaneamente hipertensos (SHR). Apesar de muito valiosa, esta linhagem apresenta limitações, não sendo capaz de contemplar todas as questões levantadas na pesquisa do TDAH. Assim, no presente estudo, nós avaliamos a linhagem congênica SLA16, com a perspectiva que esta possa ser um modelo genético importante no estudo de endofenótipos do TDAH. No primeiro bloco experimental deste estudo, animais adultos de ambas as linhagens foram submetidos a testes comportamentais para avaliar sua emocionalidade, atividade locomotora, habituação e memória de trabalho e procedimento. Para isso, os animais foram expostos 5 dias consecutivos a: 5 minutos ou 1 hora de Campo Aberto (CA); 1 hora de Caixa de Atividades (CAtiv); 4 tentativas diárias no Labirinto Aquático de Morris (LAM). No segundo bloco experimental partimos para uma abordagem farmacológica, para isso avaliamos os efeitos de um tratamento crônico com cafeína (CAF), durante a fase de adolescência dos animais, sobre atividade locomotora, emocionalidade e memória de trabalho e procedimento, ao fim do tratamento e um mês depois, quando os animais eram jovens adultos. A CAF é a droga psicoativa mais consumida no mundo, sendo consumida por diversas faixas etárias, incluindo crianças e adolescentes. Além disso, já foram relatados importantes efeitos da CAF sobre outros fenótipos relacionados ao TDAH, além do clássico aumento na atenção. Neste bloco, utilizamos novamente o CA (5 minutos, uma vez) e o LAM (4 tentativas diárias, 5 dias), testando os animais 3 dias, ou um mês após o fim do tratamento. O terceiro e último bloco de experimentos foi dedicado a avaliar se o tratamento crônico com CAF durante a adolescência afetaria a resposta a uma dose aguda da mesma na fase adulta. Para isso, testamos os animais, previamente expostos ao tratamento ou não, após uma dose aguda de CAF (10 mg/kg) no CA (5 minutos, uma vez). Os nossos resultados mostraram que os SLA16 exibem menores índices experimentais de emocionalidade, além de apresentarem uma hiperatividade locomotora em relação aos SHR no CA, nosprotocolos de 5 minutos. Ao longo dos 5 dias de protocolo, ambas as linhagens habituaram-se a CAtiv, mas não ao CA. Os resultados do primeiro bloco também demonstraram que as memórias de trabalho e de procedimento de ambas as linhagens é equivalente. No segundo bloco experimental, o tratamento com CAF durante a adolescência pareceu diminuir a hiperatividade locomotora dos SLA16 ao fim do tratamento, e melhorar o desempenho dos SHR no protocolo de memória operacional, 30 dias após o fim tratamento. Estas evidências apontam para uma diferença farmacogenética na resposta à CAF, provavelmente devido à influência do locus diferencial localizado no cromossomo 4 destas duas linhagens. Os resultados do último bloco revelaram um aumento na sensibilidade à CAF da linhagem SLA16, mas não da SHR, quando previamente expostos ao tratamento crônico com a mesma. Estes dados são mais um indício de uma diferença farmacogenética entre as linhagens. Assim, concluímos que a linhagem SLA16 é equivalente à SHR quanto à memória operacional e habituação, e ainda mais hiperativa em situações de novidades ou desafio. O tratamento com CAF durante a adolescência dos animais melhorou certos endofenótipos relacionados ao TDAH, apesar de ter causado também uma sensibilidade aumentada. Por fim, o locus diferencial parece induzir importantes diferenças farmacogenéticas na resposta à CAF.<br> / Abstract : Attention Deficit and Hyperactivity Disorder (ADHD) is the most diagnosed psychiatric disorder among children and adolescents and may persist into adulthood. Currently, the animal model most widely used in preclinical studies of this disorder is the spontaneously hypertensive rats (SHR). Although very valuable, this strain has limitations, not being able to cover all the issues raised in ADHD research. In the present study, we evaluated the congenic strain SLA16, which might be an important genetic model in the study of endophenotypes of ADHD. In the first experimental unit of this study, adult rats of both strains were tested in behavioral paradigms to assess their emotionality, locomotor activity, habituation and working and procedure memory. For this, the animals were exposed 5 consecutive days: 5 minutes or 1 hour to Open Field (OF); 1 hour to Activities Box (AB); 4 daily trials in the Morris Water Maze (MWM). In the second experimental unit, we tried a pharmacologic approach, we evaluated the effect of chronic treatment with caffeine (CAF) during the adolescence stage on locomotor activity, emotionality and working and procedure memory, at the end of treatment and a month later, when the animals were young adults. CAF is the one psychoactive drug most consumed in the world, and it is consumed by all age?s, including children and teenagers. Moreover, it has already been reported that CAF influences ADHD related phenotypes, besides the classic increase of attention. For this second unit, we used the OF again (5 min, once) and MWM (4 trials/day, 5 days), testing the animals 3 days or one month after the end of treatment. The third and last unit of experiments was devoted to evaluate whether chronic treatment with CAF during adolescence affect the response to an acute dose of CAF in adulthood. For this, we test the animals previously exposed to treatment or not, following an acute dose of CAF (10 mg / kg) at the OF (5 minutes, once). Our results showed that SLA16 exhibit lower levels of emotionality and presented a higher activity than SHR in OF, in 5 minutes protocols. During the 5-day protocol, both strains habituate to AB, but not to the CA. The first part of the results also showed that working memory is equivalent in both strains. In the second experimental unit, treatment during adolescence CAF appeared to decrease the locomotor hyperactivity of SLA16 at the end of the treatment and improved the procedure memory of SHR 30 days after the end oftreatment. This evidence suggests a pharmacogenetic difference in response to CAF, probably due to the influence of the differential locus on chromosome 4. The last block of the results revealed that chronic treatment with CAF led to an increased sensitivity on SLA16 strain, but not on SHR. These data are evidence of a pharmacogenetic difference between strains. Thus, we conclude that the SLA16 line is equivalent to SHR as the working and procedure memory and habituation, and even more hyperactive in novelty or challenging situations. The treatment with CAF during adolescence improved endophenotypes related to ADHD, although it also caused increased sensitivity. Finally, the differential locus seems to lead relevant pharmacogenetic differences in response to CAF.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:31:07Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-03-25Bitstream added on 2014-06-13T19:01:26Z : No. of bitstreams: 1 pereira_ccs_dr_araca.pdf: 2797360 bytes, checksum: 8e541aa2583339f19774f548ff235f8c (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / A hipertensão arterial sistêmica é uma condição clínica de etiologia multifatorial, com altos índices de complicações, como doenças cardiovasculares e renais, que tornam essa entidade um dos maiores problemas de saúde pública mundial. Sabe-se que esta patologia altera o padrão de regulação de cálcio induzindo a perda óssea. O objetivo deste estudo foi avaliar comparativamente o processo de reparo alveolar em ratos espontaneamente hipertensos (SHR) e Wistar e o efeito do losartan, droga inibidora dos receptores AT1 da angiotensina II na dinâmica óssea. Um total de 60 ratos foram divididos em 4 grupos com 3 períodos de avaliação: A. Wistar; B. SHR; C. Wistar tratado com losartan (30 mg/kg/dia); D:SHR tratado. Submetidos a exodontia do incisivo superior direito com eutanásia no 7º, 14º e 28º dia de pós-operatório. A análise dos mecanismos biológicos envolvidos no processo de reparo alveolar foi obtida pela histomorfometria e imunoistoquímica por meio da expressão das proteínas OPG, RANKL, TRAP e PECAM envolvidos na dinâmica do metabolismo ósseo. Os resultados foram submetidos a teste não paramétricos de Kruskal Wallis, seguido de Mann Whitney para comparação das amostras nos diferentes períodos. O grupo SHR apresentou atraso na cronologia do reparo alveolar. O losartan influenciou processo de reparo em Wistar e SHR, acarretando maior formação óssea, assim como maior espessura do trabeculado. Além disso, pode-se constatar que as referidas proteínas marcadas participam ativamente da dinâmica óssea, sofrendo ação do medicamento anti-hipertensivo proposto. Assim, sugere-se que o sistema renina-angiotensina interfere no metabolismo ósseo por meio da ação da angiotensina II / Hypertension is a multifactorial clinical condition, with high rates of complications, such as cardiovascular and renal disease, that make this organization one of the greatest public health problems worldwide. It is known that this disease alters the pattern of calcium regulation by inducing bone loss. The aim of this study was to comparatively evaluate the process of alveolar repair in spontaneously hypertensive rats (SHR) and Wistar and the effect of losartan (30 mg / kg / day), a drug inhibiting the angiotensin II AT1 receptors in bone dynamics. A total of 60 rats were divided into 4 groups with 3 evaluation periods: A. Wistar; B. SHR; C. Wistar treated; D: SHR treated. The rats underwent dental extraction of the upper right incisor, was proceeded euthanasia on the 7th, 14th and 28th day after surgery. The analysis of the biological mechanisms involved in alveolar repair was obtained by histomorphometry and immunohistochemistry through the expression of OPG protein, RANKL, TRAP and PECAM dynamics involved in bone metabolism. Results were submitted to nonparametric test of Kruskal Wallis followed by Mann Whitney test for comparison of samples in different periods. The SHR was late in the chronology of alveolar repair. Losartan influenced repair process in Wistar and SHR, resulting in increased bone formation, as well as greater trabecular thickness. Moreover, it can be seen that these tagged proteins actively participate in the dynamic bone, suffering the action of the antihypertensive drug proposed. Thus, it is suggested that losartan and the renin-angiotensin interfere with bone metabolism through the action of angiotensin II

Made available in DSpace on 2015-06-17T19:34:43Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-07-29. Added 1 bitstream(s) on 2015-06-18T12:47:12Z : No. of bitstreams: 1 000831217.pdf: 416876 bytes, checksum: 8613d4f25135ffe9c4661b38ebe09868 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Ratas prenhas normotensas ou hipertensas (SHR) apresentam redução da pressão arterial nos períodos finais da prenhez, associada à redução da atividade simpática perivascular de leitos mesentéricos e redução de respostas vasoconstritoras a alguns agonistas vasoconstritores. O endotélio vascular modula a resposta contrátil estimulada por vasoconstritores e, na prenhez, uma maior modulação do óxido nítrico (NO) sobre a reatividade vascular de aortas tem sido atribuída à maior atividade da sintase de óxido nítrico endotelial (eNOS). No entanto, nenhuma alteração da reatividade de aortas à Acetilcolina, ou a o A23187, foi observada em aortas de ratas prenhas. Foi sugerido que a participação de uma via de sinalização independente de ativação de receptores e menos dependente de cálcio, estaria envolvida na modulação endotelial sobre a vasoconstrição durante a prenhez. A expressão da eNOS fosforilada está aumentada em aorta de ratas prenhas. A eNOS pode ser fosforilada em resíduos de serina e treonina pela via PI3K/AKT. No entanto, a participação da via PI3K/AKT/eNOS na hiporreatividade de aortas de ratas prenhas à fenilefrina ainda não foi demonstrada. O objetivo deste estudo foi avaliar se o Wortmannin, um inibidor da via PI3K/AKT, poderia reverter a hiporreatividade de aortas à fenilefrina associada à prenhez e alterar as concentrações citosólicas de óxido nítrico (NO), cálcio (Ca2+) e de espécies reativas de oxigênio (ERO) em células endoteliais isoladas de aortas de ratas Wistar e SHR prenhas. Inicialmente, avaliamos as possíveis alterações nos parâmetros cardiovasculares e na sensibilidade barorreflexa associadas à prenhez de ratas espontaneamente hipertensas (SHR) por estudos in vivo. O efeito do Wortmannin foi avaliado na reatividade de aortas isoladas à fenilefrina por estudos funcionais e nas concentrações... / Normotensive or hypertensive pregnant rats (SHR) show a significant reduction in blood pressure in the final period of pregnancy, associated with reduced activity of perivascular sympathetic mesenteric beds and reduced vasoconstrictor responses to some vasoconstrictor agonists. The vascular endothelium modulates contractile response stimulated by vasoconstrictors and in pregnancy, an additional modulation of nitric oxide (NO) on vascular reactivity of aortas has been attributed to increased activity of endothelial nitric oxide synthase (eNOS). However, no change in the aortas of reactivity to acetylcholine or A23187 was observed in aortas of pregnant rats. The involvement of a signaling pathway independent of receptor activation and less dependent calcium was suggested. This pathway is involved in the modulation of endothelial vasoconstriction during pregnancy. The expression of phosphorylated eNOS is increased in the aorta of pregnant rats and this enzyme can be phosphorylated on serine and threonine residues of the PI3K/Akt pathway. However, the participation of the PI3K/AKT/eNOS pathway in hyporeactivity in the aortas of pregnant rats to phenylephrine has not been demonstrated. The aim of this study was evaluate if the PI3K/AKT pathway inhibitor (Wortmannin) could reverse the hyporeactivity of aortas to phenylephrine associated with the end of pregnancy and change the cytosolic concentrations of nitric oxide (NO), calcium (Ca2+) and reactive oxygen species (ROS) in isolated endothelial cells from aortas of pregnant Wistar rats and SHR. Initially, we evaluated the possible changes in cardiovascular parameters and baroreflex sensitivity associated with pregnancy in spontaneously hypertensive rats (SHR) by in vivo studies. The effect of Wortmannin was evaluated in the isolated aortas reactivity to phenylephrine and by functional studies through cytosolic concentrations of NO, Ca2+ and ROS... / FAPESP: 12/05746-8

Orientador: Cristina Antoniali Silva / Banca: Lusiane Maria Bendhack / Banca: Andre Sampaio Pupo / Banca: Carlos Renato Tirapelli / Eliana Hiromi Akamine / Resumo: O TERPY promove efeito hipotensor de maior magnitude em ratos hipertensos (SHR e 2R-1C) do que em ratos normotensos (Wistar e 2R). Foi demonstrado anteriormente que o endotélio prejudica o efeito vasodilatador do TERPY em aorta de Wistar. No entanto, observamos que o endotélio melhora os efeitos vasodilatadores do TERPY em aorta de SHR. Vasos sanguíneos de menor calibre, tais como as artérias de resistência, estão associadas ao controle da resitência vascular periférica e da pressão arterial. Nossa hipótese é que o TERPY induz relaxamento nas artérias mesentéricas de resistência em SHR e que as células endoteliais modulam positivamente o efeito do TERPY nestes vasos sanguíneos. Portanto, o nosso objetivo foi avaliar o efeito vasodilatador do TERPY em anéis com e sem endotélio de artéria mesentérica de ratos SHR, o seu mecanismo de relaxamento e a participação da NOS sobre esse efeito. e a Nossos resultados mostraram que o TERPY induziu um efeito vasodilatador dependente da concentração em anéis de artérias mesentéricas (2º e 3º ramos) de SHR e de ratos Wistar. A potência do TERPY foi maior em anéis intactos do que em anéis sem endotélio em artérias mesentéricas de SHR, mas em Wistar o endotélio prejudicou o efeito do TERPY. Nas artérias mesentéricas sem endotélio de SHR, o efeito do TERPY é dependente da atividade da guanilato ciclase solúvel e de canais para potássio. Nas artérias mesentéricas intactas de SHR, o efeito de TERPY depende da atividade de eNOS, mas não é depende... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: TERPY promotes a hypotensive effect with greater magnitude in hypertensive rats (SHR and 2K-1C) than in normotensive rats (Wistar and 2K). Previously, it was demonstrated that endothelium impairs vasodilatory effect of TERPY in Wistar aorta. However, we observed that endothelium improves the vasodilatory effect o f TERPY in SHR aorta. Smaller blood vessels, such as mesenteric arteries, are associa ted with the control of peripheral vascular resistance and blood pressure. We hypothesized that TERPY induces relaxation on mesenteric resistance arteries in SHR and endothelial cells modulate positively the TERPY's eff ect on these blood vessels. Therefore, our goal was to evaluate the vasodilator effect of TERPY in rings with and without endothelium of mesenteric arteries in SHR, the mecha nism of relaxation and the participation of NOS on this effect. Our results show TERPY induced a concentration-dependent vasodilator effect in mesenteric arteries (2 nd and 3 rd branches) rings from SHR and Wistar. The potency of TERPY was higher in intact than in denuded rings from SHR, but in Wistar, endothelium impair the TERP Y's effect. In denuded mesenteric arteries from SHR, the relaxation effect induced by TERPY is dependent of soluble guanylate cyclase and activation of pota ssium channel. However, in intact mesenteric arteries from SHR, TERPY ́s effect is modulated by eNOS activity, but it is not dependent of nNOS, iNOS or cyclooxygenase pathway activities. TERPY promotes eNOS3 Ser 1177 phosphorylation and increases nitric oxide concentration in isolated endothelial cells of mesen teric arteries from SHR. Together, our results showed that soluble guanylate cy clase, potassium channels, and eNOS are involved in the vasodilator effect of TE RPY in mesenteric resistance arteries from SHR. In a second part of this study, we aimed to evaluate the mechanism ...(Complete abstract electronic access below) / Doutor

Orientador: Sandra Helena Penha de Oliveira / Banca: Gustavo Pompermaier Garlet / Banca: Willian Fernando Zambuzzi / Resumo: Células-tronco mesenquimais (CTMs) obtidas a partir da medula óssea são capazes de se diferenciarem, sobretudo, em condrócitos, adipócitos e osteoblastos. Durante a osteogênese in vitro, alguns parâmetros são utilizados para caracterizar este processo, tais como atividade da fosfatase alcalina (FAL), mineralização e expressão de proteínas associadas à osteoblastos. Ratos espontaneamente hipertensos (SHR) são um modelo animal de hipertensão essencial humana e desenvolvem hipertensão após 4 semanas de idade. Esta linhagem apresenta alterações significativas no metabolismo ósseo. O objetivo do presente estudo foi investigar se, o genótipo hipertensivo poderia interferir na diferenciação osteoblástica das CTMs de ratos SHR e qual mecanismo está alterado quando comparadas com a linhagem progenitora, ratos Wistar. Para isso, nós obtivemos CTMs da medula óssea de ratos Wistar e SHR com 4 semanas de idade, sem a hipertensão estabelecida, afim de avaliar somente o possível efeito do genótipo hipertensivo na diferenciação osteogênica in vitro. Nós induzimos, ou não, a diferenciação osteogênica in vitro por meio da utilização dos indutores osteogênicos: ácido ascórbico, β-glicerofosfato e dexametasona. Os resultados demonstraram que, CTMs indiferenciadas de SHR (SHRC) demonstraram taxa de proliferação aumentada em comparação a CTMs, na mesma condição, de Wistar (WC), e após a indução da osteogênica, a taxa de proliferação apresentou uma diminuição acentuada no grupo SHR (SHRMO) do que no grupo Wistar na mesma condição (WMO). Embora não fora observada diferença significativa na atividade da FAL entre SHRMO e WOM no 7° dia, a mineralização e a diferenciação osteoblástica foram menores no grupo SHRMO no mesmo período experimental. Os fatores de transcrição Osterix e β-catenina parecem estar envolvidos na diferenciação reduzida no grupo SHRMO... / Abstract: Mesenchymal stem cells (MSCs) from bone marrow are able to differentiate mainly into chondrocytes, adipocytes and osteoblasts. During in vitro osteogenesis, some parameters are used to characterize this process, such as the activity of alkaline phosphatase (ALP), mineralization and osteoblast-associated proteins expression. Spontaneously hypertensive rats (SHR) is an animal model of human essential hypertension. This animals developing hypertension after 4 weeks of age. This strain shows significant changes in bone metabolism. The aim of this study was to investigate whether the hypertensive genotype could influence the osteoblastic differentiation of MSCs from SHR and which mechanism are altered when compared to the parental strain, Wistar rats. For that, we have obtained bone marrow MSCs from Wistar and SHR rats at 4 weeks of age, without hypertension established in order to evaluate only the possible effect of hypertensive genotype on osteogenic differentiation in vitro. We induced or non-osteogenic differentiation in vitro using osteogenic inducers: ascorbic acid, dexamethasone and β-glycerophosphate. The results demonstrate that undifferentiated MSCs SHR (SHRC) showed increased proliferation rate compared to MSCs, in the same condition Wistar (WC) and after osteogenic induction, proliferation rate showed a marked decrease in SHR (SHRMO) than in Wistar group in the same condition (WMO). Although it was not observed significant difference in ALP activity between WMO and SHRMO on day 7, mineralization and osteoblast differentiation were lower on group SHRMO in the same experimental period. The transcription factors Osterix and β-catenin appear to be involved in reduced differentiation in SHRMO group because they showed lower expression in this experimental group. Furthermore, the decreased... / Mestre

Submitted by MURILO EDUARDO GRATON null (murilo.graton@yahoo.com.br) on 2017-05-30T04:15:45Z No. of bitstreams: 1 Dissertação de Mestrado - Murilo Eduardo Graton - Oficial.pdf: 2455052 bytes, checksum: 9fdb49043c056012a6f5db47564916b4 (MD5) / Approved for entry into archive by Luiz Galeffi (luizgaleffi@gmail.com) on 2017-05-31T17:10:09Z (GMT) No. of bitstreams: 1 graton_me_me_araca.pdf: 2455052 bytes, checksum: 9fdb49043c056012a6f5db47564916b4 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-05-31T17:10:09Z (GMT). No. of bitstreams: 1 graton_me_me_araca.pdf: 2455052 bytes, checksum: 9fdb49043c056012a6f5db47564916b4 (MD5) Previous issue date: 2017-05-12 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / A enzima NAD(P)H oxidase (NOX) é a principal fonte de espécies reativas de oxigênio (ERO) no sistema cardiovascular e sua atividade e expressão podem ser regulada pela angiotensina (Ang) II. Demonstramos previamente que o tratamento crônico com apocinina, um inibidor de NOX, reduziu a pressão arterial e preveniu o desenvolvimento da disfunção endotelial em SHR. Estes efeitos da apocinina foram associados a redução de geração de ERO e ao aumento da biodisponibilidade de óxido nítrico em células endoteliais de SHR. Dados de nosso laboratório mostraram que o tratamento com apocinina, também reduziu o efeito pressor da Ang II em SHR. A associação entre Ang II, via receptores AT1, e o estresse oxidativo tem sido implicada na patogênese da hipertensão. Levantamos a hipótese que a apocinina, ao alterar a sinalização redox, reduz a expressão de receptores AT1 e a resposta vasoconstritora da Ang II em SHR. Neste estudo, avaliamos o efeito do tratamento crônico com apocinina sobre as respostas contráteis à Ang II em vasos sanguíneos de SHR e os mecanismos envolvidos nestes efeitos, utilizando ensaios bioquímicos, biomoleculares e funcionais. SHR foram tratados com apocinina (30 mg/Kg, v.o.) da 4ª a 10ª semana de vida e ratos Wistar foram utilizados como controle normotenso. Analisamos os efeitos da apocinina na capacidade antioxidante plasmática, expressão de NOX, geração de ERO, níveis de nitrato/ nitrito, expressão de receptores AT1 e AT2, e respostas vasoconstritoras à Ang II em artéria mesentérica e aorta. O tratamento de SHR com apocinina aumentou a capacidade antioxidante plasmática, os níveis de nitrato/nitrito, não alterou a expressão de receptores AT1 ou AT2 em artérias mesentéricas, mas aumentou a expressão de AT2, mas não de AT1, em aorta de SHR. Além disto, o tratamento com apocinina diminuiu a expressão de NOX2 e p47phox e a produção de ERO. O tratamento com apocinina aumentou a modulação do endotélio e/ou da atividade da NOS sobre as respostas vasoconstritoras à Ang II em artérias mesentéricas de SHR, mas não alterou a reatividade de aortas de SHR à Ang II. A menor reatividade de artérias de resistência à Ang II levaria a menor resistência vascular periférica e consequentemente a redução da pressão arterial média e do efeito pressor da Ang II em SHR tratados com apocinina, como observado previamente. O mecanismo de ação da apocinina envolvido neste efeito está associado a importantes alterações redox que determinam uma maior modulação endotelial dependente de NOS das respostas vasoconstritoras da Ang II, mas não envolve alterações na expressão de receptores AT1 em vasos de SHR. / NAD(P)H oxidase (NOX) is the major source of reactive oxygen species (ROS) in the cardiovascular system and its activity and expression could be regulated by angiotensin (Ang) II. We previously demonstrated that chronic treatment with apocynin, a NOX inhibitor, reduced blood pressure and prevented the development of endothelial dysfunction in SHR. These effects of apocynin have been associated with reduced generation of ROS and increased bioavailability of nitric oxide in endothelial cells of SHR. Data from our laboratory showed that treatment with apocynin also reduced the pressor effect of Ang II on SHR. The association between Ang II, via AT1 receptors, and oxidative stress has been implicated in the pathogenesis of hypertension. We hypothesized that apocynin, altering redox signaling, could reduce expression of AT1 receptors and Ang II vasoconstrictor response in SHR. In this study, we evaluated the effect of chronic treatment with apocynin on the contractile responses to Ang II in blood vessels of SHR and the mechanisms involved in the effects of these on biochemical, biomolecular and functional assays. SHR were treated with apocynin (30 mg/kg, p.o.) from the 4 th to the 10th week of life and Wistar rats were used as normotensive control. Analysis of the effects of apocynin on plasma antioxidant capacity, NOX expression, ROS generation, nitrate/ nitrite levels, expression of AT1 and AT2 receptors, and vasoconstrictor responses to Ang II on mesenteric and aortic arteries. Treatment of SHR with apocynin increased plasma antioxidant capacity, nitrate/ nitrite levels, did not alter AT1 or AT2 receptor expression in mesenteric arteries, but increased expression of AT2, but not AT1, in SHR aorta. In addition, treatment with apocynin decreased expression of NOX2 and p47phox and ROS generation. Treatment with apocynin increased endothelium modulation and/or NOS activity on Ang II vasoconstrictor responses in mesenteric arteries of SHR, but did not alter the reactivity to Ang II in aortas of SHR. The lower reactivity of Ang II in resistance arteries would lead to lower peripheral vascular resistance and consequently the reduction of mean arterial pressure and Ang II pressor effect in SHR treated with apocynin, as previously observed. The mechanism of action of the apostate involved in this effect is associated with important redox changes that determine a greater NOS-dependent endothelial modulation of the vasoconstrictor responses of Ang II, but does not involve expression in the expression of AT1 receptors in SHR vessels.

Orientador: Cristina Antoniali Silva / Banca: Graziela Scalianti Ceravolo / Banca: Carlos Alan Candido Dias Júnior / Resumo: Ratas prenhas normotensas ou hipertensas (SHR) apresentam redução da pressão arterial nos períodos finais da prenhez, associada à redução da atividade simpática perivascular de leitos mesentéricos e redução de respostas vasoconstritoras a alguns agonistas vasoconstritores. O endotélio vascular modula a resposta contrátil estimulada por vasoconstritores e, na prenhez, uma maior modulação do óxido nítrico (NO) sobre a reatividade vascular de aortas tem sido atribuída à maior atividade da sintase de óxido nítrico endotelial (eNOS). No entanto, nenhuma alteração da reatividade de aortas à Acetilcolina, ou a o A23187, foi observada em aortas de ratas prenhas. Foi sugerido que a participação de uma via de sinalização independente de ativação de receptores e menos dependente de cálcio, estaria envolvida na modulação endotelial sobre a vasoconstrição durante a prenhez. A expressão da eNOS fosforilada está aumentada em aorta de ratas prenhas. A eNOS pode ser fosforilada em resíduos de serina e treonina pela via PI3K/AKT. No entanto, a participação da via PI3K/AKT/eNOS na hiporreatividade de aortas de ratas prenhas à fenilefrina ainda não foi demonstrada. O objetivo deste estudo foi avaliar se o Wortmannin, um inibidor da via PI3K/AKT, poderia reverter a hiporreatividade de aortas à fenilefrina associada à prenhez e alterar as concentrações citosólicas de óxido nítrico (NO), cálcio (Ca2+) e de espécies reativas de oxigênio (ERO) em células endoteliais isoladas de aortas de ratas Wistar e SHR prenhas. Inicialmente, avaliamos as possíveis alterações nos parâmetros cardiovasculares e na sensibilidade barorreflexa associadas à prenhez de ratas espontaneamente hipertensas (SHR) por estudos in vivo. O efeito do Wortmannin foi avaliado na reatividade de aortas isoladas à fenilefrina por estudos funcionais e nas concentrações... / Abstract: Normotensive or hypertensive pregnant rats (SHR) show a significant reduction in blood pressure in the final period of pregnancy, associated with reduced activity of perivascular sympathetic mesenteric beds and reduced vasoconstrictor responses to some vasoconstrictor agonists. The vascular endothelium modulates contractile response stimulated by vasoconstrictors and in pregnancy, an additional modulation of nitric oxide (NO) on vascular reactivity of aortas has been attributed to increased activity of endothelial nitric oxide synthase (eNOS). However, no change in the aortas of reactivity to acetylcholine or A23187 was observed in aortas of pregnant rats. The involvement of a signaling pathway independent of receptor activation and less dependent calcium was suggested. This pathway is involved in the modulation of endothelial vasoconstriction during pregnancy. The expression of phosphorylated eNOS is increased in the aorta of pregnant rats and this enzyme can be phosphorylated on serine and threonine residues of the PI3K/Akt pathway. However, the participation of the PI3K/AKT/eNOS pathway in hyporeactivity in the aortas of pregnant rats to phenylephrine has not been demonstrated. The aim of this study was evaluate if the PI3K/AKT pathway inhibitor (Wortmannin) could reverse the hyporeactivity of aortas to phenylephrine associated with the end of pregnancy and change the cytosolic concentrations of nitric oxide (NO), calcium (Ca2+) and reactive oxygen species (ROS) in isolated endothelial cells from aortas of pregnant Wistar rats and SHR. Initially, we evaluated the possible changes in cardiovascular parameters and baroreflex sensitivity associated with pregnancy in spontaneously hypertensive rats (SHR) by in vivo studies. The effect of Wortmannin was evaluated in the isolated aortas reactivity to phenylephrine and by functional studies through cytosolic concentrations of NO, Ca2+ and ROS... / Mestre

Resumo: A hipertensao arterial representa um fator de risco sistemico e condicao desfavoravel para tratamentos dentarios, especialmente aqueles que necessitam de reparacao ossea. O objetivo deste estudo foi avaliar o reparo alveolar em ratos espontaneamente hipertensos (SHR) e o efeito do atenolol sobre este processo. Wistar e SHR tratados ou nao com 100mg/kg/dia (atenolol), foram submetidos a extracao do dente incisivo superior direito e sacrificados aos 7, 14, 21, 28 e 42 dias apos a cirurgia. As hemi-maxilas foram removidas e as imagens radiograficas foram realizadas. A analise radiografica foi obtida por meio do sistema digital Digora. Analises histologicas, histomorfometricas e reacoes imunoistoquimicas foram feitas em cortes histologicos de 5ƒÊm de espessura, os quais foram corados com hematoxilina-eosina ou submetidos a imunomarcacao para RANK, RANKL, OPG e proteinas MMP-9. A analise histologica foi realizada por microscopia optica e a analise histomorfometrica pelo software RGB / Leica Qwin Color. Os resultados densitometricos e histomorfometricos foram analisados pela Anova two-way. Na analise imunoistoquimica, utilizando um microscopio optico, foram atribuidos scores as imagens. Os resultados foram analisados pelos testes estatisticos Kruskal-Wallis e Mann Whitney. As diferencas entre os resultados foram consideradas significativas quando p<0,05. Reducao da densidade mineral ossea (DMO), menor porcentagem de osso e menor espessura do trabeculado osseo foram observadas nos periodos finais do reparo alveolar em SHR. Aumento da imunomarcacao para RANKL, RANK e MMP-9 foi observado em 28 dias apos a cirurgia no alveolo em SHR. Consistente efeito do atenolol foi observado no reparo alveolar de ratos hipertensos. O atenolol aumentou a DMO observada na maioria dos periodos analisados e aumentou a espessura do trabeculado... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Hypertension represents a systemic risk factor and unfavorable condition for dental treatments, especially treatments that require bone healing. The purpose of this study was to evaluate the alveolar wound healing in spontaneously hypertensive rats (SHR) and the atenolol effect on this process. Normotensive Wistar rats and SHR, untreated or treated with atenolol (100mg/kg/day), were submitted to the extraction of the upper right incisive tooth and sacrificed at 7, 14, 21, 28 and 42 days after surgery. The hemi-jaws were extracted and the radiographic images were obtained. Radiographic analysis was performed by using the digital system Digora. Histological, histomorphometric and immunohistochemical reactions were done in histological sections, 5 μm thick, stained with hematoxylin and eosin or subjected to immunolabeling to RANK, RANKL, OPG and MMP-9 proteins. Histological analysis was performed by light microscopy and histomorphometric analysis by Leica Qwin Color/RGB software. The densitometric and histomorphometric results were also analyzed by two-way ANOVA. In immunohistochemical analysis, using an optical microscopy, scores were assigned to the images. Results were analyzed by Kruskal-Wallis and Mann Whitney statistical tests. Differences between results were considered significant when p <0.05. Reduced bone mineral density (BMD), lower bone percentage and less thickness of trabecular bone was observed in the final periods of alveolar bone healing in SHR. Increased RANKL, RANK and MMP-9 immunolabeling were observed at 28 days after surgery in SHR alveolus. Consistent atenolol effect was observed on alveolar bone healing of hypertensive rats. Atenolol increased the BMD observed in most of the periods analyzed and increased trabecular bone thickness at 28 and 42 days in SHR alveolus. Increased OPG immunolabeling... (Complete abstract click electronic access below) / Orientador: Cristina Antoniali Silva / Coorientador: Roberta Okamoto / Banca: Raquel Fernanda Gerlach / Banca: Sandra Helena Penha de Oliveira / Mestre

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:23:33Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-07-20Bitstream added on 2014-06-13T20:50:30Z : No. of bitstreams: 1 potje_sr_me_araca.pdf: 486426 bytes, checksum: fbbc778d219e6341b4ac4c430b070e73 (MD5) / O efeito hipotensor do TERPY é aumentado em SHR em comparação com ratos normotensos Wistar (WST), mas o seu relaxamento em anéis de aorta sem endotélio não difere entre os grupos. Trabalhamos com a hipótese de que o desacoplamento da óxido nítrico sintase (NOS) ou espécies reativas de oxigênio (EROs) podem prejudicar a biodisponibilidade de óxido nítrico (NO) liberado pelo TERPY e NPS (nitroprussiato de sódio) em seus efeitos hipotensores e vasodilatadores em SHR. Avaliamos o efeito do L-NAME (inibidor da NOS), da APOCININA (bloqueadora da NOX) e do TEMPOL (mimético da superóxido dismutase) na resposta hipotensora e na vasodilatação induzida pelos doadores de NO, TERPY e NPS, em aortas de WST e SHR. L-NAME aumentou o efeito hipotensor do TERPY em WST, mas não em SHR. Este efeito não foi alterado pelo TEMPOL, mas foi aumentado pela APOCININA em ambos os grupos. Essas drogas não alteraram o efeito hipotensor do NPS. A remoção do endotélio ou incubação com L-NAME diminuiu a potência do TERPY na aorta de SHR e aumentou na aorta de WST. TEMPOL e APOCININA aumentaram a potência do TERPY em aortas de WST e de SHR. Estes efeitos são independentes do endotélio em SHR e sensíveis ao endotélio em WST. A presença do endotélio e a incubação com TEMPOL ou APOCININA aumentou a potência do NPS em aortas de WST e SHR. Em conclusão, o efeito hipotensor do TERPY é prejudicado pela NOS em WST e pela NOX em WST e SHR. Por outro lado, o efeito hipotensor do NPS é semelhante em WST e SHR, que é independente da NOS e de EROs. Em aortas, EROs derivadas do endotélio prejudicam o relaxamento do TERPY em anéis de aorta de WST e SHR, e EROs liberadas a partir de células do músculo liso vascular (CMLV) também participam dessa resposta apenas em aortas de SHR / The hypotension of TERPY is increased in SHR compared to Wistar (WST) rats, but its relaxation in denuded aortic rings is not different. We hypothesized that NO-synthase uncoupling or reactive oxygen species (ROS) could impair the NO bioavailability released from TERPY and SNP in their hypotensive and vasorelaxant effects in SHR. We evaluated the effect of the inhibitors L-NAME (NO-synthase) and APOCYNIN (NOX), and TEMPOL (superoxide dismutase mimetic) in the hypotensive effect and aorta vasodilatation induced by NO-donors in WST and SHR. L-NAME increased TERPY's hypotensive effect in WST, but not in SHR. This effect was not altered by TEMPOL, but it was increased by APOCYNIN in both groups. These drugs did not alter the SNP's hypotensive effect. Endothelium removal, or L-NAME, decreased the potency of TERPY in SHR aorta and increased it in WST aorta. TEMPOL and APOCYNIN increased the potency of TERPY in WST and SHR aortas. These effects are endothelium independent in SHR, and endothelium dependent in WST. Endothelium, TEMPOL and APOCYNIN increased the potency of SNP in aortas of WST and SHR. In conclusion, TERPY's hypotensive effect is impaired by NOS in WST and by NOX activity in WST and SHR. Otherwise, the hypotensive effect of SNP is similar in WST and SHR, which is independent of NOS and ROS. In aortas, ROS derived from endothelium impairs the relaxation of TERPY in aortic rings of WST and SHR, but ROS from vascular smooth muscle also participates in this response in SHR aorta

Made available in DSpace on 2016-03-15T14:19:06Z (GMT). No. of bitstreams: 2 bruno_sabino_ioc_dout_2008.pdf: 177162 bytes, checksum: da8f12caaae52be69499e9626f0f4a5b (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2016-01-13 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / Introdução: A elevação crônica da resistência vascular sistêmica pode ser considerada como a principal alteração hemodinâmica na hipertensão arterial primária estabelecida. Investigamos os efeitos do tratamento crônico com os anti-hipertensivos atenolol (ATE), enalapril (ENA), nifedipina (NIF) e losartan (LOS) sobre a densidade capilar funcional média (DCFM) cutânea e muscular esquelética (grácil) e sobre a densidade capilar estrutural muscular esquelética e do ventrículo esquerdo de SHR. Métodos: Ratos SHR machos com 12-14 semanas receberam tratamento oral por gavagem com ATE (50 mg/kg/dia), NIF (20mg/kg/dia), LOS (10 mg/kg/dia) ou veículo (grupo controle) durante quatro semanas. Após o término do tratamento avaliou-se a DCFM através de microscopia intraviral por epi-iluminação com fluorescência. A seguir, foi avaliada a densidade capilar estrutural através de histoquímica em parafina. Resultados: o tratamento reduziu de forma similar a pressão arterial sistólica de SHR tratados com ATE, ENA, NIF ou LOS. A DCFM encontrava-se diminuída em SHR no músculo esquelético (WKY 395±17 e SHR 258±13 capilares/mm2, p<0,01) ou pele (WKY 391±18 e SHR 210±15 capilares/mm2, p<0,01). LOS e NIF reverteram completamente este quadro em ambos os tecidos (434±26e 422±18 capilares/mm2 no músculo esquelético e 397±31 e 391±24 capilares/mm2 na pele, p<0,01, respectivamente), enquanto o ENA aumentou significativamente a DCFM apenas na pele de SHR (283±17, p<0,05 capilares/mm2). O ATE não induziu nenhuma alteração na DCFM de SHR. Foi observada uma relação linear entre a densidade capilar funcional no músculo esquelético e na pele (r=0.654, p<0.0001) Na análise estrutural, foi observada uma relação capilar/fibra significativamente menor no músculo esquelético de SHR (WKY 1,74±0,08 e SHR 1,40±0,06, p<0,01), que foi revertida pelos tratamentos com ENA, NIF e LOS (1,65±0,04; 1,78±0,1 e 1,8±0,07, p<0,01, respectivamente). A razão entre a densidade de volume de capilares e a densidade de volume de fibras (Vv[cap] / Vv[fib]) do ventrículo esquerdo de SHR também foi significativamente reduzida (WKY 0,55±0,09 e SHR 0,42±0,09, p<0,01). Os tratamentos com LOS ou ENA reverteram completamente a rarefação estrutural cardíaca de SHR (0,59±0,03 e 0,59±0,03, p<0,01, respectivamente), enquanto os tratamentos com ATE e NIF não apresentaram nenhum efeito. Discussão: Os resultados obtidos indicam que os efeitos microcirculatórios de diferentes drogas anti-hipertensivas diferem entre as classes farmacológicas e vão além da redução da pressão arterial. Este conceito pode ser útil para guiar o tratamento anti-hipertensivo na tentativa de reduzir ou até mesmo reverter as lesões de órgãos-alvo / ntroduction: It is well known that the major part of the increased vascular resistance in hypertensio n is determined at the microvascular level, resulting ma inly from functional (changes in vascular reactivit y) and/or structural (increased arteriolar wall thickness) ab normalities. We investigated the effects of chronic oral antihypertensive treatment on functional and struct ural capillary rarefaction in spontaneously hyperte nsive rats (SHR). Wistar Kyoto rats (WKY) were used as a normo tensive control group. Methods: Male SHR (12 14 weeks) received oral treatment with the ß blocker a tenolol (ATE) (50 mg/kg/day), angiotensin convertin g enzyme (ACE) inhibitor enalapril ENA (10 mg/kg/day) , the calcium channel blocker nifedipine NIF (20mg/kg/day), the angiotensin II type I receptor ( AT1) receptor antagonist losartan LOS (10mg/kg/day) , or vehicle (control group) during four weeks. At the e nd of the treatment, the functional capillary densi ty (FCD) was evaluated by intravital videomicroscopy with fluore scence. Then, we evaluated the structural capillary density (SCD) by immunohistochemistry embedded in paraffin. Results: In untreated rats, the FCD was lower in S HR skeletal muscle (WKY 395±17 and SHR 258±13 capillar ies/mm2, P<0.01) and ear skin (WKY 391±18 and SHR 210±15 capillaries/mm2, P<0.01). A linear relations hip was seen between skeletal muscle and skin capil lary densities (r=0.654, P<0.0001). Histologic analysis showed that SHR had a lower capillary to fiber rati o in the skeletal muscle (WKY 1.74±0.08 and SHR 1.40±0.06, P <0.01). Capillary volume density to fiber volume density ratio in the left ventricle of SHR was also reduced (WKY 0.55±0.09 and SHR 0.42±0.09, P<0.01). The pharmacological treatment with ENA, LOS, ATE, or NI F, resulted in similar reductions in systolic blood pressure (19.8%, 19.1%, 17.4%, and 18.2%, respectiv ely, P<0.05). ATE did not induce any change in func tional capillary density of SHR. LOS and NIFE completely r eversed functional capillary rarefaction in both mu scle and cutaneous tissues (434±26 and 422±18 capillaries/mm 2 in skeletal muscle and 397±31 and 391±24 capillaries/mm 2 in skin, p<0,01, respectively), whereas ENA signif icantly increased functional capillary density only in the skin. The skeletal muscle capillary to fiber ratio was normalized by ENA, LOS, and NIF (1, 65±0,04; 1,78±0,1 and 1,8±0,07, p<0,01, respectively). Treat ments with ENA or LOS normalized the cardiac struct ural capillary rarefaction of SHRs (0,59±0,03 and 0,59±0 ,03, p<0,01, respectively), whereas ATE and NIF had no effect. Discussion: Our results suggest that differ ent pharmacologic classes of antihypertensive drugs with similar effect on blood pressure differ in terms of their e ffect on the microcirculation. This concept could b e useful to guide the pharmacological treatment of hypertension , in order to reduce or even revert the target orga n damage