Submitted by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2017-08-25T15:36:24Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertação - Renata G. Cunha.pdf: 3040966 bytes, checksum: 03c4fbd180be9d322c4e34f188abad93 (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2017-08-25T15:36:39Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertação - Renata G. Cunha.pdf: 3040966 bytes, checksum: 03c4fbd180be9d322c4e34f188abad93 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-08-25T15:36:39Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertação - Renata G. Cunha.pdf: 3040966 bytes, checksum: 03c4fbd180be9d322c4e34f188abad93 (MD5) Previous issue date: 2016-02-26 / Acute Lymphoblastic Leukemia (ALL) is the most common malignancy in children, especially in males and chemotherapy is generally the treatment for these patients. Minor side effects of therapy have been reported, and mucositis is one of the most common. It has been suggested in the literature that HSV-1 plays an important role in the severity of oral mucositis in patients with onco-hematological diseases. This study quantified HSV-1 in the oral mucosa of pediatric ALL patients undergoing GBTLI ALL-2009 protocol, from the Foundation of Hematology of the Amazon (HEMOAM), correlating viral load to the different stages of treatment and also to the presence and grading of oral mucositis. We evaluated twenty patients by clinical examination of the oral mucosa to identify oral lesions and also collected cells from buccal mucosa in several times and phases of chemotherapy. These samples were submitted to DNA extraction followed by detection and quantification of HSV-1 using Real Time PCR. Data were analyzed using Mann-Whitney and Kruskal Wallis test with a significance level of p ≤ 0.05. Of all patients, half of them were male, between 1 and 6 years (80%) and with ALL Type B low risk (75%). Dry mouth (15%) and oral mucositis (35%) were the oral lesions found. It was detected HSV-1 presence in the oral mucosa of 80% of patients at some stage of chemotherapy with predominance of the virus in the intensification phase only in patients with ALL B high risk, with no differences in viral load of HSV -1 at different stages of treatment in LLA B group of low risk. Higher incidence of mucositis was observed in prefase/induction (75%) with higher levels of the virus in these patients compared to those free of mucositis, but without statistical significance. It is suggested that HSV-1 is frequent in the buccal mucosa of patients with B ALL, and its viral load may be different in subtypes of ALL B. However, the role of HSV-1 at the onset of oral mucositis not it is certain. / Leucemia Linfoblástica Aguda (LLA) é a neoplasia maligna mais comum em crianças, principalmente do sexo masculino, sendo a quimioterapia o tratamento indicado para esses pacientes. Efeitos colaterais secundários decorrentes da terapia têm sido relatados, sendo a mucosite um dos mais comuns. Tem sido sugerido na literatura que o HSV-1 desempenha papel importante na severidade da mucosite bucal em pacientes com doenças onco-hematológicas. Este trabalho quantificou o HSV-1 na mucosa bucal de pacientes pediátricos com LLA submetidos ao protocolo GBTLI LLA-2009, na Fundação de Hematologia e Hemoterapia do Amazonas (HEMOAM), correlacionando sua carga viral com as diferentes fases do tratamento e em relação a presença e graduação da mucosite bucal. Foram avaliados vinte pacientes por meio de exame clínico da mucosa bucal para identificação de lesões bucais, bem como a coleta de células da mucosa jugal em vários momentos das diferentes fases da quimioterapia. Foi realizada extração de DNA dessas amostras para posterior detecção e quantificação da carga viral do HSV-1 por meio da técnica de PCR em Tempo Real. Os dados foram analisados por meio dos testes de Mann Whitney e Kruskal Wallis com nível de significância de p ≤ 0,05. Do total de pacientes, metade era do sexo masculino, a maioria com idade entre 1 e 6 anos (80%) e com LLA do tipo B de baixo risco (75%). Lábios ressecados (15%) e mucosite bucal (35%) foram as manifestações bucais encontradas. Detectou-se a presença do HSV-1 na mucosa bucal de 80% dos pacientes em algum momento do tratamento quimioterápico havendo predominância do vírus na fase de Intensificação somente no grupo de pacientes com LLA B alto risco, não havendo diferenças na carga viral do HSV-1 nas diferentes fases do tratamento no grupo de LLA B de baixo risco. Maior ocorrência de mucosite foi observada na prefase/indução (75%) ocorrendo valores mais altos de carga viral nesses pacientes em relação aos livres de mucosite, porém sem significância estatística. Sugere-se que a presença do HSV-1 na mucosa bucal de pacientes com LLA B é frequente, e sua carga viral pode estar diferenciada nos subtipos de LLA B. No entanto, o papel do HSV-1 no surgimento da mucosite bucal ainda não está claro.

Submitted by Nathália Faria da Silva (nathaliafsilva.ufv@gmail.com) on 2017-06-14T17:48:40Z No. of bitstreams: 1 resumo.pdf: 16108 bytes, checksum: 2cd537f65b91f31ace656e4a54ad1fae (MD5) / Made available in DSpace on 2017-06-14T17:48:40Z (GMT). No. of bitstreams: 1 resumo.pdf: 16108 bytes, checksum: 2cd537f65b91f31ace656e4a54ad1fae (MD5) Previous issue date: 2005-05-16 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Foram avaliados 14 isolados degradadores de petróleo, quanto à diversidade genética e à atividade catabólica dos mesmos e de cinco destes, em consórcio, no meio de cultivo adicionado de petróleo por meio da técnica de RT-PCR. A diversidade genética dos 14 isolados bacterianos foi avaliada por RAPD utilizando 12 oligonucleotídeos. O padrão de bandas amplificado do DNA total dos isolados evidenciou uma alta diversidade genética entre os isolados LBBMA 1, LBBMA 18a, LBBMA 53, LBBMA 88b, LBBMA 161, LBBMA 191, LBBMA 201 e LBBMA ES11, quando comparado ao padrão de bandas obtidos com os isolados LBBMA 58, LBBMA 75, LBBMA 101b, LBBMA 105a, LBBMA 195 e LBBMA 199. A detecção de seqüências genômicas e dos respectivos transcritos dos genes que codificam alcano hidroxilase, naftaleno dioxigenase e tolueno dioxigenase em meio de cultivo adicionado de petróleo evidenciou que os isolados LBBMA 58, LBBMA 75, LBBMA 101b e LBBMA 199 foram promissores para serem utilizados no processo de biorremediação. O consórcio C7 (LBBMA 105a, LBBMA 191, LBBMA 195, LBBMA 199, LBBMA 201) foi selecionado para ser avaliado quanto à atividade catabólica em meio de cultivo adicionado de petróleo, nos tempos: 0,5 hora, 4 horas, 7 horas e viii24 horas. Detectou-se neste consórcio, os transcritos correspondentes aos genes que codificam alcano hidroxilase e naftaleno dioxigenase em todos os tempos avaliados. Estes resultados mostraram que a avaliação da atividade catabólica por meio da detecção dos transcritos indicou o potencial de aplicação deste consórcio no processo de biorremediação. / The present study objectified to evaluate the genetic diversity among 14 Petroleum-degrading bacterial isolates and to verify the catabolic activity of each one separately and in consortium in culture medium with addition of petroleum by RT-PCR technique. Their genetic diversity was evaluated by RAPD using twelve primers. The isolates presented high polymorphism indicating a great genetic diversity among them. The evaluation of the potential and the catabolic activity of the isolates was accomplished using as markers three catabolic genes that encode alkane hydroxylase, naphthalene dioxygenase and toluene dioxygenase. In these isolates different results were observed for the presence of the genomic sequences and their respective transcripts. These results indicated that the isolates LBBMA 58, LBBMA 75, LBBMA 101b and LBBMA 199 are promising for the bioremediation process. The consortium C7 (LBBMA 105a, LBBMA 191, LBBMA 195, LBBMA 199, LBBMA 201) was chosen to have its catabolic activity appraised due to its greater efficiency. In this consortium transcripts corresponding to the genes that encode alkane hydroxylase and naphthalene dioxygenase were detected with 0,5 hour, 4 xhours, 7 hours and 24 hours. These results indicated the potential of this consortium for bioremediation.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:33:28Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2005-10-10Bitstream added on 2014-06-13T18:45:14Z : No. of bitstreams: 1 gomes_sc_dr_arafo.pdf: 850712 bytes, checksum: fa6f8a08cc10e339a029c7d3240d7c5f (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / No presente estudo foi avaliado o efeito do controle de placa bacteriana supragengival sobre parâmetros clínicos e microbiológicos subgengivais, comparando-o em pacientes nunca fumantes (NFU) e fumantes (F). Durante esse ensaio clínico (6 meses), 25 pacientes, de cada grupo, foram examinados clinicamente, por um examinador calibrado, no momento inicial (I) e aos 30, 90 e 180 (exame final F) dias. 45 desses indivíduos contribuíram com amostras para cálculo do volume de fluido e avaliação microbiológica. As médias do percentual de sítios com IPV, ISG e SS e as médias da PS e PI (em milímetros), do volume de fluido (æl) e as médias do número de bactérias totais (Eubactéria, Eu), Porphyromonas gingivalis (Pg), Peptostreptococcus micros (Pm), Dialister pneumosintes (Dp), Actinobacillus actinomycetemcomitans (Aa) foram geradas para o indivíduo e, posteriormente, para os grupos. Dados do exame inicial e final foram comparados (teste Wald, p=0.05). Foi observado que o efeito do controle de placa bacteriano supragengival contribuiu para a redução significante de IPV (NFU- I: 91,1 e F: 8,7; FU- I: 88,5 e F: 6,4), ISG (NFU- I: 83,8 e F: 2,2; FU- I: 76,1 e F: 0,3), SS (NFU- I: 95,0 e F: 21,6; FU- I: 94,4 e F: 25,3), PS (NFU- I: 3,7 e F: 2,6; FU- I: 3,9 e F: 2,8), PI (NFU- I: 3,4 e 3.0; FU- I: 4., e F: 3,7), volume de fluido (NFU- I: 0,59 e F: 0,23; FU- I: 036 e F- 0,16) e número de Eubactérias (NFU- I: 1,09x105; F: 2,3x101; FU- I: 1,9x105; F: 1,9x101); Pg (NFU- I: 1,07x103; F: 7,0x101; FU- I: 1,4x103; F: 9,4x101); Pm (NFU- I: 2,1x105; F: 0,3x105; FU- I: 6,8x105; F: 0,5x105); Aa (NFU- I: 2,5x101; F: 1,0x101; FU- I: 1,7x101; F: 0,76x101) e Dp (NFU- I: 3,7x101; F: 0,72x101; FU- I: 9,6x101; F: 0,83x101). Ao final do estudo, pacientes fumantes apresentaram menor ISG e volume de fluido, maior PI e menor número de baterias totais.... / The present study aimed to investigate the effect of a supragingival plaque control regiment and to compare this effect between never smokers (NS) and smokers (S) periodontitis patients. During the 6 months experimental period 50 patients, 25 in each group, were clinically examined by a singular calibrated examiner in the baseline (I), 30, 90 and 180 days (F). 45 individuals contributed with GCF and microbiological sampling. Mean values of the percentage of sites VPI+, MBI+, BOP, the PPD and CAL measurements (mm), GCF volume (æl) and number of the Eubacteria (Eu); Porphyromonas gingivalis (Pg), Peptostreptococcus micros (Pm), Dialister pneumosintes (Dp), Actinobacillus actinomycetemcomitans (Aa), were calculated for the individual to compose the groups means. Data from baseline and final examinations were compared (test Wald p=0.05). It could be observed that a supragingival plaque control significantly contributed to VPI NSI: 91.1 and F: 8.7; S- I: 88.5 e F: 6.4), MBI (NS- I: 83.8 e F: 2.2; S- I: 76.1 e F: 0.3), BOP (NS- I: 95.0 e F: 21.6; S- I: 94.4 e F: 25.3), PPD (NS- I: 3.7 e F: 2.6; SI: 3.9 e F: 2.8); CAL (NS- I: 3.4 e 3.0; S- I: 4.3 e F: 3.7), GCF (NS- I: 0.59e F: 0.23; S- I: 0.36 e F: 0.16) and number of Tb (NS- I: 1.09x105; F: 2.3x101; S- I: 1.9x105; F: 1.9x101); Pg (NS- I: 1.07x103; F: 7.0x101; S- I: 1.4x103; F: 9.4x101); Pm (NS- I: 2.1x105; F: 0.3x105; S- I: 6.8x105; F: 0.5x105); Aa (NS- I: 2.5x101; F: 1.0x101; S- I: 1.7x101; F: 0.76x101) and Dp (NS- I: 3.7x101; F: 0.72x101; S- I: 9.6x101; F: 0.83x101) reductions. At the end, smokers presented less marginal bleeding, CAL, GCF volume and lower numbers of Eubacteria then never smokers. It can be concluded that both never smokers and smokers periodontitis patients can benefit from a supragingival plaque control regimen, even though 30 smokers presented less marginal bleeding and less number of Eubacteria at the end.

Made available in DSpace on 2015-04-11T13:38:22Z (GMT). No. of bitstreams: 1 francisca.pdf: 878093 bytes, checksum: 251097fdfe9003556935b61ec3a58ab8 (MD5) Previous issue date: 2012-06-27 / The human papillomavirus (HPV) is recognized as a major risk factor related to cervical cancer. The identification of HPV types of high risk can aid in the prevention of malignant lesions of the cervix. This study aims to determine and genotype HPV in women with a cytological result of ASC-US and LSIL. This is a cross-sectional study with an analytical component in women attended the Fundação Alfredo da Matta - FUAM. The patients were selected from the file examination of the Laboratory of Cytology of FUAM from January 2009 to July 2011 and requested to attend the DST clinic through active search in order to make a new collection of material for revaluation cytological, molecular detection and genotyping of HPV. Molecular detection was performed by Nested-PCR targeting the L1 region of the viral capsid. PCR products were analyzed on an agarose gel. Out of 100 patients selected, 70% (70/100) participated in the study, 34 of them had the cytological result of ASC-US and LSIL of 36. After reevaluation cytological 8 (11.4%) patients had cytology within normal limits, 33 (47.2%) inflammatory cytology, 22 (31.4%) ASC-US, 6 (8.6%) LSIL, 1 (1.4%) HSIL. HPV was identified in 28.6% (20/70) of the samples. Of the 20 patients HPV DNA-positive 1 had cytology within normal limits, 6 inflammatory cytology, 10 ASC-US and 2 LSIL and 1 HSIL. After the genotyping were identified the following HPV types 6, 16, 58, 61, 70, 83, 84 and 85. The most prevalent HPV 25% was HPV 58. The presence of HPV high-risk oncogenic stresses the importance of actions aimed at preventing the transmission of this virus and tracking of diseases in the city of Manaus. / O Papillomavírus humano (HPV) é reconhecido como o principal fator de risco relacionado do câncer cervical. A identificação de tipos de HPV de alto risco pode auxiliar na prevenção de lesões malignas do colo do útero. Este estudo tem como objetivo determinar e genotipar o HPV em mulheres com resultado citológico de Lesão Intraepitelial de Baixo grau (LSIL) e Células Escamosas Atípicas Significado Indeterminado (ASC-US). Trata-se de um estudo de corte transversal com componente analítico em mulheres atendidas na Fundação Alfredo da Matta - FUAM. As pacientes foram selecionadas a partir do arquivo de exames do Laboratório de Citologia da FUAM no período de janeiro de 2009 a julho de 2011 e solicitadas a comparecer ao ambulatório de DST por meio de busca ativa, a fim de fazer uma nova coleta de material para reavaliação citológica, detecção molecular e genotipagem do HPV. A detecção molecular foi realizada pela técnica de Nested-PCR tendo como alvo a região L1 do capsídeo viral. Os produtos da PCR foram analisados em gel de agarose. Do total de 100 pacientes selecionadas, 70% (70/100) participaram do estudo, sendo que 34 delas tinham resultado citológico de ASC-US e 36 de LSIL. Após reavaliação citológica 8(11,4%) pacientes apresentaram citologia dentro dos limites da normalidade, 33(47,2%) citologia inflamatória, 22(31,4) ASC-US, 6(8,6%) LSIL, 1(1,4%) HSIL. O HPV foi identificado em 28,6% (20/70) das amostras examinadas. Das 20 pacientes HPV-DNA positivas 1 caso apresentou citologia dentro do limite da normalidade, 6 citologia inflamatória, 10 ASC-US, 2 LSIL e 1 caso apresentou HSIL. Após a genotipagem foram identificados os seguintes tipos de HPV: 6, 16, 58, 61, 70, 83, 84 e 85. O HPV mais prevalente com 5 casos em 20 positivos foi o HPV 58. A presença do HPV de alto risco oncogênico destaca a importância de ações voltadas para a prevenção na transmissão desse vírus e no rastreamento das doenças relacionadas, na cidade de Manaus.

Análise: Estudos recentes têm sugerido que os herpesvírus podem estar envolvidos na ocorrência e progressão de diferentes formas de doença periodontal. Objetivos: O objetivo do presente estudo foi investigar a presença de herpesvírus HHV-6 em biópsias gengivais de pacientes afetados por periodontite crônica e verificar a variabilidade genética das amostras positivas para HHV-6 (HHV-6 A e HHV-6 B). Como controle, biópsias gengivais de sujeitos periodontalmente saudáveis foram analisadas. Materiais e Métodos: Biópsias gengivais foram colhidas de 60 voluntários: 30 casos afetados por periodontite crônica e 30 casos periodontalmente saudáveis. Cada caso contribuiu com 1 biópsia envolvendo o epitélio e tecido conjuntivo da bolsa periodontal contendo profundidade a 5mm e apresentando sangramento à sondagem após o exame clínico; a outra biópsia controle foi concedida de local com profundidade clínica de sondagem a 3mm não apresentando sangramento. Para extração e purificação do DNA viral foi utilizado o kit da Invitrogen® (Charges Switch®g DNA Mini Tissue kit). O DNA extraído foi amplificado utilizando as técnicas de PCR e nested-PCR. Os produtos amplificados foram seqüenciados utilizando o kit Big Dye Terminator (Applied Biosystems). As seqüencias obtidas foram alinhadas com o auxílio do Programa Sequence Navigator e comparadas com amostras padrão do gene bank. Resultados: Após a análise de 60 amostras, seqüências de DNA de HHV-6 foram detectadas em locais periodontalmente saudáveis 4/30 (13,3 %), e em locais com doença periodontal 2/30 (6,7 %); seis produtos positivos da nested-PCR foram seqüenciados e apresentaram homologia para a variante B. Conclusões: O presente estudo demonstrou que o tecido gengival pode agir como reservatório para HHV-6. Nossos dados sugerem que estudos adicionais sejam realizados a fim de consolidar uma associação entre os subtipos de herpesvírus investigados com a doença periodontal destrutiva. / Analysis: Recent studies have suggested that the herpesvirus may be involved in the occurrence and progression of different forms of periodontal disease. Objectives: The purpose of this study was to investigate the HHV-6 herpesvirus presence in gingival biopsies of patients affected by chronic periodontitis and to ascertain the positive samples genetic variability for HHV-6 (HHV-6A and HHV-6B). As a control, biopsies of gingival periodontally healthy subjects were examined. Materials and Methods: gingival biopsies were taken from 60 volunteers: 30 cases affected by chronic periodontitis and 30 cases periodontally healthy. Each case contributed with 1 biopsy involving the epithelium and connective tissue of periodontal pocket depth containing 5mm and stating the bleeding on probing after the clinical examination; the other control biopsy was granted from local with clinical survey depth of 3mm showed no bleeding. For extraction and purification of viral DNA was used the Invitrogen® kit (Charges Switch ® g Mini Tissue DNA kit). The extracted DNA was amplified using the techniques of PCR and nested-PCR. The amplified products were sequenced using the Big Dye Terminator kit (Applied Biosystems). The sequences obtained were aligned with the aid of the Sequence Navigator Program and compared with standard samples of gene bank. Results: After the analysis of 60 samples, DNA sequences of HHV-6 were found in places periodontally healthy 4/30 (13,3%), and in places with periodontal disease 2/30 (6,7%); six positive products of nested-PCR were sequenced and showed homology for variant B. Conclusions: This study has demonstrated that the gingival tissue may act as a reservoir for HHV-6. Our data suggest that additional studies must be conducted to consolidate an association between subtypes of herpesvirus investigated and the destructive periodontal disease.

Este estudo identificou a presença e a viabilidade de Streptococcus spp., Propionibacterium acnes e Enterococcus faecalis antes e após os procedimentos endodônticos, utilizando o método de reação de cadeia de polimerase (PCR) baseado em RNA ribossômico (rRNA) e seus respectivos genes (rDNA). Foram coletadas amostras de 20 dentes com infecção primária antes (S1) e após o preparo químico-cirúrgico (S2), e depois do emprego do Ca(OH)2 como medicação intracanal (S3). DNA e RNA foram extraídos da mesma amostra de canal radicular e utilizados como moldes para reação de PCR com iniciadores específicos para a região 16S rRNA das espécies analisadas. Streptococcus espécies foram detectados em 20% e 25% das amostras S1 utilizando os métodos baseados em rRNA e rDNA, respectivamente; enquanto P. acnes foi detectado apenas pela análise de rRNA, estando presente em 10% das amostras S1. Após o preparo químico-cirúrgico, Streptococcus spp. foram detectado em 10% das amostras S2 quando se utilizou rDNA, porém não foi detectado pelo método baseado em rRNA, indicando ausência de células viáveis. Por outro lado, P. acnes foi detectado por ambos os métodos nas amostras S2, com prevalência de 10% e 5% quando se utilizou rRNA e rDNA como molde para PCR, respectivamente. Nas amostras S3, P. acnes foi a única espécie detectada nos ensaios baseados em rRNA, presente em 10% dos casos, enquanto o método baseado em rDNA falhou em detectar essa espécie. Por sua vez, E. faecalis não foi detectado em nenhuma amostra pelos métodos utilizados. Portanto, concluise que a suscetibilidade bacteriana aos procedimentos endodônticos varia entre as espécies Gram-positivas. Enquanto Streptococcus spp. foram suscetíveis, P. acnes persistiu ativo em canais radiculares após o preparo químico-cirúrgico e medicação intracanal. Esses dados sugerem que há necessidade de novas estratégias para a eliminação de espécies resisitentes ao tratamento endodôntico. / This study identified the presence and viability of Streptococcus spp., Enterococcus faecalis and Propionibacterium acnes before and after endodontic procedures, using the polymerase chain reaction (PCR) based on ribosomal RNA (rRNA) and their genes (rDNA ). Samples of 20 teeth with primary infection were collected before (S1) and after chemical-surgical preparation (S2), and after Ca(OH)2 as temporary dressing (S3). DNA and RNA were extracted from the same root canal sample and used as templates for PCR with specific primers for 16S rRNA region of the analyzed species. Streptococcus species were detected in 20% and 25% of the S1 samples using methods based on rRNA and rDNA, respectively; while P. acnes was only detected by analysis of rRNA, present in 10% of the samples S1. After chemicalsurgical preparation, Streptococcus spp. were detected in 10% of S2 samples when using rDNA as template, but they were not detected by the method based on rRNA, indicating the absence of viable cells. Furthermore, P. acnes was detected by both methods in samples S2, with a prevalence of 10% and 5% when using as template rRNA and rDNA for PCR, respectively. In S3 samples, P. acnes was the only species detected in assays based on rRNA, present in 10% of cases, while the rDNA-based method failed to detect this species. E. faecalis was not detected in any sample by the methods used. Therefore, it is concluded that bacterial susceptibility to endodontic procedures may vary among Gram-positive species. While Streptococcus spp. were susceptible, P. acnes persisted active in root canals after chemicalsurgical preparation and dressing. These data suggest the need for new strategies to eliminate resisitant species to endodontic treatment.

Introdução: O emprego da técnica de RT-PCR na detecção da expressão de genes epiteliais como a CK-19 no sangue periférico de pacientes com câncer de próstata é uma oportunidade para avaliar a progressão tumoral ao nível molecular na ausência de doença clinicamente mensurável. Material e métodos: Inicialmente 10 pacientes com nível sérico de PSA< 2ng/ml e toque retal sugestivo de hiperplasia prostática benigna foram incluídos como grupo controle através de coleta de sangue única para dosagem do transcrito da CK-19. Subsequentemente,foram seguidos de maneira prospectiva 44 pacientes com câncer de próstata (21 com doença localizada e 23 com doença metastática), com coleta de sangue seriada a cada 3 meses por 18 meses. Foi medida a expressão sérica do transcrito da CK-19 por RT-PCR na fração leucocitária do sangue periférico e correlacionada aos níveis séricos de PSA e outras variáveis clinicas e patológicas. Resultados: Nenhum de 10 pacientes controles apresentou expressão do transcrito da CK-19 no sangue periférico. Nos pacientes com câncer de próstata a expressão do transcrito da CK-19 na entrada do estudo não se correlacionou com o escore de Gleason, estádio clínico e os níveis séricos de DHL, Hemoglobina, PSA, Fosfatase alcalina ou Testosterona. A presença de pelo menos uma dosagem positiva de CK-19 durante o seguimento se correlacionou com o tempo para a progressão bioquímica do PSA na amostra como um todo(p=0,049) e no subgrupo com doença metastática(p=0,032). Conclusão: Não houve expressão do transcrito da CK-19 na fração mononuclear do sangue periférico em homens do grupo controle. Nos pacientes com câncer de próstata não houve correlação entre a expressão do transcrito da CK-19 na entrada do estudo e as principais variáveis clínicas e patológicas de prognóstico. Nos pacientes com câncer de próstata, a presença de pelo menos uma dosagem positiva para o transcrito da CK-19 no seguimento se correlacionou com um menor tempo para recidiva bioquímica , especialmente no subgrupo de pacientes com doença metastática tratados com hormonioterapia / Background: The recent introduction of sensitive RT-PCR-based techniques for the detection of epithelial antigen expression, such as CK-19,in the peripheral blood of prostate cancer patients may provide an opportunity to evaluate early tumor progression at the molecular level, even in the absence of measurable disease. Methods: Ten men with PSA <2ng/ml and digital rectal examination suggestive for benign prostatic hyperplasia were included as controls by only one colleted blood sample to measure of CK-19 transcript. We also studied serially collected blood samples of 44 patients with prostate cancer (21 with localized and 23 with metastatic disease) every three months for 18 months. We measured CK-19 transcript expression in the peripheral blood mononuclear fraction (PBMN) of these samples by RT-PCR and correlated it with PSA values and other clinical and pathologic variables. Results: None of the 10 normal control men showed CK-19 transcript expression in their PBMN. In the patients with prostate cancer, CK-19 transcript positivity at entry did not correlate with Gleason score, clinical stage, DHL, hemoglobin level, PSA, alkaline phosphatase or testosterone levels. Having at least one positive CK- 19 result during follow up correlated significantly with time to PSA progression in all coorte (p = 0.049) and in the subgroup of metastatic disease (p = 0.032). Conclusion: There are no expression of CK-19 transcript in the PBMN of control men. In prostate cancer patients there are no correlation between CK-19 at entry and the most important clinical and pathological prognostic variables. Prostate cancer patients that had at least one CK-19 transcript expression in the peripheral blood present lower time to PSA progression, specially metastatic patients receiving hormonal therapy

Este estudo identificou a presença e a viabilidade de Streptococcus spp., Propionibacterium acnes e Enterococcus faecalis antes e após os procedimentos endodônticos, utilizando o método de reação de cadeia de polimerase (PCR) baseado em RNA ribossômico (rRNA) e seus respectivos genes (rDNA). Foram coletadas amostras de 20 dentes com infecção primária antes (S1) e após o preparo químico-cirúrgico (S2), e depois do emprego do Ca(OH)2 como medicação intracanal (S3). DNA e RNA foram extraídos da mesma amostra de canal radicular e utilizados como moldes para reação de PCR com iniciadores específicos para a região 16S rRNA das espécies analisadas. Streptococcus espécies foram detectados em 20% e 25% das amostras S1 utilizando os métodos baseados em rRNA e rDNA, respectivamente; enquanto P. acnes foi detectado apenas pela análise de rRNA, estando presente em 10% das amostras S1. Após o preparo químico-cirúrgico, Streptococcus spp. foram detectado em 10% das amostras S2 quando se utilizou rDNA, porém não foi detectado pelo método baseado em rRNA, indicando ausência de células viáveis. Por outro lado, P. acnes foi detectado por ambos os métodos nas amostras S2, com prevalência de 10% e 5% quando se utilizou rRNA e rDNA como molde para PCR, respectivamente. Nas amostras S3, P. acnes foi a única espécie detectada nos ensaios baseados em rRNA, presente em 10% dos casos, enquanto o método baseado em rDNA falhou em detectar essa espécie. Por sua vez, E. faecalis não foi detectado em nenhuma amostra pelos métodos utilizados. Portanto, concluise que a suscetibilidade bacteriana aos procedimentos endodônticos varia entre as espécies Gram-positivas. Enquanto Streptococcus spp. foram suscetíveis, P. acnes persistiu ativo em canais radiculares após o preparo químico-cirúrgico e medicação intracanal. Esses dados sugerem que há necessidade de novas estratégias para a eliminação de espécies resisitentes ao tratamento endodôntico. / This study identified the presence and viability of Streptococcus spp., Enterococcus faecalis and Propionibacterium acnes before and after endodontic procedures, using the polymerase chain reaction (PCR) based on ribosomal RNA (rRNA) and their genes (rDNA ). Samples of 20 teeth with primary infection were collected before (S1) and after chemical-surgical preparation (S2), and after Ca(OH)2 as temporary dressing (S3). DNA and RNA were extracted from the same root canal sample and used as templates for PCR with specific primers for 16S rRNA region of the analyzed species. Streptococcus species were detected in 20% and 25% of the S1 samples using methods based on rRNA and rDNA, respectively; while P. acnes was only detected by analysis of rRNA, present in 10% of the samples S1. After chemicalsurgical preparation, Streptococcus spp. were detected in 10% of S2 samples when using rDNA as template, but they were not detected by the method based on rRNA, indicating the absence of viable cells. Furthermore, P. acnes was detected by both methods in samples S2, with a prevalence of 10% and 5% when using as template rRNA and rDNA for PCR, respectively. In S3 samples, P. acnes was the only species detected in assays based on rRNA, present in 10% of cases, while the rDNA-based method failed to detect this species. E. faecalis was not detected in any sample by the methods used. Therefore, it is concluded that bacterial susceptibility to endodontic procedures may vary among Gram-positive species. While Streptococcus spp. were susceptible, P. acnes persisted active in root canals after chemicalsurgical preparation and dressing. These data suggest the need for new strategies to eliminate resisitant species to endodontic treatment.

As infecções associadas aos cuidados de saúde constituem um problema grave nas unidades hospitalares bem como nos serviços de atendimento extra-hospitalares. Diferentemente de outros países, no Brasil, existe uma incidência alta dessas infecções causadas por microorganismos Gram-negativos produtores de &#946;-lactamase de espectroestendido (ESBL). Estas enzimas hidrolisam compostos &#946;-lactâmicos e são consideradas mundialmente como de importância clínica, pois a localização de seus genes emelementos móveis facilitam a transmissão cruzada. Este estudo foi realizado com amostras bacterianas isoladas de material clínico e de fezes de pacientes internados em um hospital da rede pública no Rio de Janeiro, Brasil. Estes pacientes estavam internados em duas unidades de terapia intensiva cardiológica, no período de janeiro a dezembro de 2007. O estudo teve por objetivo realizar a caracterização fenotípica e genotípica desses isolados associados à colonização ou infecção dos pacientes. Os testes fenotípicos e genotípicos foram realizados na Universidade do Estado do Rio de Janeiro e incluíram provas bioquímicas, teste de susceptibilidade, teste confirmatório para a expressão da produção da enzima ESBL e Reação de Polimerase em Cadeia (PCR) com iniciadores específicos para cinco genes: blaTEM, blaSHV, CTX-M1, Toho1 e AmpC. As espécies bactérianas mais frequentemente isoladas foram Escherichia coli (25%) e Klebsiella pneumoniae (30,56%), e os genes mais prevalentes foram blaTEM (41,6%), AMPC (41,6%) blaSHV (33,3%), CTX-M1 (25%), e Toho1 (19,44%). Identificamos em 25% das amostras enterobactérias que não eram E. coli, K. pneumoniae ou Proteus sp, com fenótipo para ESBL e a expressão dos mesmos genes, confirmando a necessidade de investigação nestes grupos microbianos. O substrato mais sensível para a expressão da área de sinergismo no Teste de Aproximação foi o ceftriaxone (80%). Identificamos também que 17% das amostras positivas para ESBL apresentaram co-produção para AmpC e 50% apresentaram mais de um gene para os iniciadores testados. A presença da carbapenemase foi avaliada em amostras bacterianas com susceptibilidade intermediária para ertapenem, através do Teste de Hodge modificado. Os achados do presente estudo caracterizaram a co-produção de AmpC e ESBL, bem como sugerem a necessidade da revisão e a ampliação dos métodos para a detecção de outros padrões de resistência na nossa Instituição. / Healthcare-associated infections are a major problem in hospital units as well as in units outside hospital, where procedures are performed. In Brazil, differently from other countries, a large proportion of these infections are caused by extended spectrum beta-lactamase (ESBL) producing Gram-negative microorganisms. These enzymes, which hydrolyse &#946;-lactams, are considered of clinical importance worldwide. Their localization in genes that are located in móbile structures facilitate cross infection. This study was performed with bacterial isolates found in clinical specimens and faeces of patients hospitalized in a public hospital in the city of Rio de Janeiro, Brazil. These patients were in two different cardiological intensive care units from January till December 2007. The goal of the study was the phenotypic and genotypic characterization of the bacterial isolates which were associated with colonization or infection. Phenotypic and genotypic tests were performed in Universidade do Estado do Rio de Janeiro (Rio de Janeiro State University) and included biochemical tests, susceptibility tests, a comfirmatory test for the expression of ESBL, and polymerase chain reaction (PCR) with specific primers for five gentes : blaTEM, blaSHV, CTX-M1, Toho1 and AmpC. The most frequently isolated bactéria were Escherichia coli (25%) and Klebsiella pneumoniae (30,56%), and the most prevalent genes were blaTEM (41,6%), AMPC (41,6%) blaSHV (33,3%), CTX-M1 (25%), and Toho1 (19,44%). In 25% of samples we identified enterobacteria that were not E. coli, K. pneumoniae oor Proteus spp, but with the ESBL phenotype and the expression of the same genes, suggesting these microbes needed investigating. The most sensitive substrate for expressing synergism in the double-disk diffusion test was ceftriaxone (80%). We also identified that 17% of ESBL positive isolates showed co-production of AmpC and 50% showed more than one gene tested by PCR. The presence of carbapenemase was studied in bacterial isolates with intermediate susceptibility to ertapenem, by a modified Hodge test. The findings in the present study characterize the co-production of AmpC and ESBL, and suggest the need for reviewing detection methods used and possibly using other methods for the detection of other resistance patterns in our Institution.

Made available in DSpace on 2015-03-26T13:46:59Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 406137 bytes, checksum: 691c5cada5b56820bfd7b97686fb4cbc (MD5) Previous issue date: 2006-07-27 / In this study, the standard microbiological method, immuno-analysis and polymerase chain reaction - PCR were evaluated using, respectively, 135, 70 and 90 carcass samples, distributed into five different slaughter stages of a poultry slaughterhouse. The comparison of the Salmonella sp. contamination frequency among the different slaughter stages and the comparison of the detection efficiency among the three methods were evaluated, considering the possible use as a monitoring tool for the Hazard Analysis and Critical control Points program (HACCP). The whole three methods were compared by the Qui-Squared test (&#967;2), obtaining a value of 18.51 (p &#8804; 0.01). These methods also were compared two by two, to quantify the Odds Ratio (OR). Was obtained a &#967;2 = 8.72 (p &#8804; 0.01), when were compared the positive results of the immuno-analysis and the Standard Microbiological ones; and the OR calculated was 3.34 (IC: 1.36 8.32). When comparing the positive results of PCR and the standard microbiological ones, were obtained &#967;2 of 18.37 (p &#8804; 0.01) and OR = 4.83 (IC: 2.13 11.15). The same didn t happen when comparing the PCR and immuno-analysis methods. These, comparing to the standard microbiological technique, were considered more efficient e suitable methods for utilization as monitoring tools for HACCP. The slaughter stage localized after the chiller (Point E) shows itself as the most suitable as a critical control point, because it was less contaminated and takes over a strategic position at the end of the slaughter line. / Foram avaliados neste estudo os métodos convencional, imunoanalítico e por reação de polimerase em cadeia PCR para a pesquisa de Salmonella sp. em, respectivamente, 135, 70 e 90 amostras de carcaças de frangos, distribuídas em cinco diferentes etapas de abate em um abatedouro. Procedeu-se a comparação da freqüência de detecção de Salmonella sp. das carcaças nas diferentes etapas de abate, e da eficiência de detecção dos três métodos, visando a indicação de método alternativo para o monitoramento no programa de Análise de Perigos e Pontos Críticos de Controle (APPCC). Os resultados foram comparados pelo teste do Qui-quadrado (&#967;2), obtendo um valor 18,51 (p &#8804; 0,01) na análise conjunta dos três métodos avaliados. Tais métodos também foram comparados, dois à dois, para a quantificação das chances de detecção de cada um pela Razão de Chances ou Odds Ratio (OR). Obteve-se um &#967;2 = 8,72 (p &#8804; 0,01), comparando-se os resultados positivos obtidos pelo sistema imunoanalítico com os do método microbiológico convencional, sendo a OR igual a 3,34 e Intervalo de Confiança (IC) entre 1,36 e 8,32. Também houve diferença estatística com um &#967;2 de 18,37 (p &#8804; 0,01) entre os resultados positivos totais da PCR e do método microbiológico convencional, sendo a OR igual a 4,83 (IC: 2,13 - 11,15). O mesmo não ocorreu entre os métodos PCR e imunoanalítico. Estes dois, quando comparados com a microbiologia convencional, foram considerados mais eficientes e adequados para a utilização em monitoramento no APPCC. A etapa de abate localizada após o pré-resfriamento (ponto E) foi considerada a mais adequada como ponto crítico de controle por apresentar a menor contaminação e por assumir uma posição estratégica no final da linha de abate.