Se realizó un estudio Ecológico, cuya unidad de análisis fueron los barrios (agregaciones geográficas). Se calculo la Razón de Morbilidad Estandarizada (RME) para Fiebre del Dengue y Dengue Hemorrágico. Tras la obtención de los patrones geográficos se realizó un Análisis de Correspondencias, el cual nos permitió obtener una percepción general de los barrios, sintetizando y visualizando la información mediante representaciones gráficas, extrayendo las tendencias más notables y jerarquizarlas. La realización del Análisis de correspondencias, se realizó mediante el paquete estadístico SPAD v 4.5.Una vez obtenidas las asociaciones multivariantes más significativas, se analizaron a partir de esta información, que riesgos se asociaban a las mismas para discriminar entre barrios de exceso de riesgo (RME>1) y barrios con riesgo cero o deficitario (RME<1). Los resultados de este estudio han permitido detectar el nivel de heterogeneidad espacial o patrón de la Fiebre del Dengue y el Dengue Hemorrágico en los barrios del municipio de Girardot, identificar estratos de interés para la Fiebre del Dengue de acuerdo a sus factores de riesgo asociados, permitiendo clasificar a los barrios en función de su riesgo. De importancia se observa que en los barrios pertenecientes a la clase 1, reúnen las características de tener condiciones socio-económicas malas, en los cuales la recolección de basura se hace una vez en la semana, pertenecen a un estrato bajo, la calidad de vivienda es inadecuada y casi un 70% tienen un exceso de riesgo para Fiebre del Dengue. Se describieron un total de 7 variables relacionadas con el riesgo de transmisión de la Fiebre del Dengue en el municipio de Girardot entre las que se encuentran: Riesgo de Fiebre del Dengue por barrio, Calidad de la vivienda, Regularidad en la prestación de servicios de recogida de basuras, Regularidad en la prestación del Servicio de Acueducto, Hacinamiento, Estrato Socio-Económico e Índices Vectoriales. Se seleccionaron las variables que podrían presentar diferencias y se observó que aumenta el riesgo de presentar Fiebre del Dengue, cuando la calidad de la vivienda es inadecuada y el índice vectorial es alto. / Study whose unit of analysis was the districts (geographical aggregations). We calculate the Rate of Mobility Standardized (RME) for Dengue Fever ( DF) and Dengue hemorrhagic fever (DHF). Adequate epidemiological surveillance could serve as a basis to begin to stratify urban communities and identify the areas in then where control efforts should be focused.In this study we stratified Girardot, Colombia, a city with hyperendemic Dengue and Dengue Hemorrhagic, using a Analysis de Correspondences, system and analysing the perception general of the districts, synthesizing and visualizing information by means of graphics representations, extracting tendencies. Realization of the Analysis of correspondences, realize statistic package SPAD v 4.5.. Once obtained multivariate associations more significant, they analysed from this information, that risks were associated to the same ones to discriminate between districts of excess of risk (RME>1) and districts with risk zero or deficit one (RME<1). The results of this study have allowed to detect the level of space heterogeneity or patron of the Dengue Fever and Dengue hemorrhagic fever in the districts of the city of Girardot, to identify focus for the Fever of the Dengue according to its associated factors of risk, allowing to classify to the districts in strata of its risk. Was described a total of seven variables related to the risk of transmission of the DF and DHF in the city of Girardot between which they are: Risk of DF and DHF by district, Quality of the house, Regularity of the services of collection of sweepings, Regularity of the Service of Aqueduct, Ae. Aegypti infestation rate, layer Socio-Economics. Some conclusions that can be drawn from this study are as follows: Quality of the house is inadequate and Ae. Aegypti infestation rate is high can is increased the risk of the DF.

OBJECTIU: Determinar el rendiment diagnòstic de l'automesura de la pressió arterial domiciliària (AMPAd) en el diagnòstic de la hipertensió clínica aïllada (HCA) utilitzant un programa de tres dies de lectures.MATERIAL I MÈTODES: Es va incloure a cent noranta pacients diagnosticats recentment d'hipertensió lleugera-moderada no tractats, seleccionats consecutivament a 4 centres d'atenció primària de la ciutat de Barcelona. Cada pacient va realitzar lectures de AMPAd per triplicat pel matí i per la nit durant 3 dies consecutius, seguidament se'ls practicà una monitorització ambulatòria de la pressió arterial (MAPA) de 24 hores. El punt de tall de normalitat per a l'AMPAd i la MAPA diurna era de 135/85 mmHg.RESULTATS: Seixanta-tres pacients van ser diagnosticats d'HCA amb AMPAd (34.8 %; IC95%: 27.9-42.2) i 74 amb MAPA (41.6%; IC95%: 33.7-48.4). No es varen observar diferències estadísticament significatives entre els valors d'AMPAd i els de la MAPA diurna (137.4 [14.3]/82.1[8.3] mmHg vs 134.8 [11.3]/81.3[9.5] mmHg). Els paràmetres de rendiment diagnòstic de l'AMPAd van ser: S 50.0% (IC95%: 38.3-61.7), E 75.7% (IC95%: 66.3-83.2), VPP i VPN 58.7%(IC95%: 45.6-70.8) i 68.6% (IC95%: 59.4-76.7), respectivament, i CPP i CPN 2.05 i 0.66 respectivament.L'anàlisi mitjançant una corba ROC (receiver operating characteristic) dels diferents punts de tall de normalitat no va suposar l'obtenció de millores significatives en el rendiment diagnòstic de l'AMPAd.CONCLUSIONS: Un programa de 3 dies de lectures d'AMPAd en el diagnòstic de l'HCA ha obtingut una escasa precisió diagnòstica. La MAPA continúa sent la prova d'elecció en aquesta indicació. / OBJECTIVE: To determine the diagnostic performance of home blood pressure self-monitoring (hBPSM) in white-coat hypertension (WCH) using a 3-day reading program.MATERIAL and METHODS: One hundred and ninety non-treated patients recently diagnosed of mild-moderate hypertension, selected consecutively at 4 primary health-care centers in the city of Barcelona, were included. Each patient underwent morning and night hBPSM with readings in triplicate for 3 consecutive days, followed by 24-hour ambulatory blood pressure monitoring (ABPM). The normality cut-off point value for hBPSM and daytime ABPM was 135/85 mmHg.RESULTS: Sixty-three patients were diagnosed of WCH with hBPSM (34.8 %; CI95%: 27.9-42.2) and 74 with ABPM (41.6%; CI95%: 33.7-48.4). No statistically-significant differences were observed between hBPSM values and those of diurnal ABPM (137.4 [14.3]/82.1[8.3] mmHg vs 134.8 [11.3]/81.3[9.5] mmHg). hBPSM diagnostic performance parameters were: sensitivity 50.0% (CI95%: 38.3-61.7), specificity 75.7% (CI95%: 66.3-83.2), positive and negative predictive values 58.7%(CI95%: 45.6-70.8) and 68.6% (CI95%: 59.4-76.7), respectively, and positive and negative probability coefficients 2.05 and 0.66 respectively. Analysis of different normality cut-off points using a ROC curve (receiver operating characteristic) failed to produce significant improvement in the diagnostic performance of hBPSM.CONCLUSIONS: The diagnostic accuracy of a 3-day hBPSM reading program in WCH was poor. ABPM continues to be the test of choice for this indication.

INTRODUCCIÓN: La pubarquia precoz idiopática en niñas (aparición de vello púbico antes de los 8 años) se ha asociado a manifestaciones de síndrome metabólico en edad prepuberal (hiperinsulinismo, obesidad central y dislipemia), se ha relacionado con la secuencia: bajo peso al nacer, recuperación pondoestatural exagerada, desarrollo de pubarquia precoz y pubertad avanzada rápidamente progresiva y por último, se ha visto una mayor prevalencia de hiperandrogenismo ovárico (45%) en la edad adulta. La hipótesis de estudio fue que las mujeres con PP presentan manifestaciones comunes de hiperandrogenismo ovárico y síndrome metabólico en la edad adulta, siendo mayor la incidencia en las mujeres con antecedente de bajo peso al nacer y en las que no fueron tratadas con metformina en la adolescencia.METODOLOGÍA: Estudio retrospectivo, longitudinal (20 años) n= 20 mujeres (29,6 ± 3,3 años), diagnosticadas de pubarquia precoz idiopática entre 1980 y 1986, (se descartó la presencia de PP secundaria a hiperplasia suprarrenal congénita, síndrome de Cushing o tumores virilizantes) y seguidas analítica y ecográficamente hasta pasados 2 años de la menarquia, con una valoración en la edad adulta en la cual se realizó anamnesis, examen físico (peso, talla, IMC, cociente cintura/cadera), analítica (cociente neutrófilos/leucocitos, perfil lipídico, andrógenos, leptina y test de tolerancia oral a la glucosa), Ecografía pélvica (Doppler), Ecografía carotídea (Doppler) y densitometría ósea (DXA). Se realizó el estudio estadístico mediante SPSS, con significación estadística con p<0,05)RESULTADOS: 1) la prevalencia de hiperandrogenismo ovárico (criterios de Rótterdam) en las pacientes con PP fue del 35% y de síndrome metabólico del 20% (International Diabetes Federation). 2) La prevalencia de hiperandrogenismo ovárico fue mayor en la adolescencia que en la edad adulta (70% vs 35%). 3) La prevalencia de manifestaciones comunes al síndrome metabólico e hiperandrogenismo ovárico fue la siguiente: elevación del cociente neutrófilo/linfocito 70%, elevación de leptina y alteración en el metabolismo glucídico 45%, obesidad 40%, disfunción endotelial 35%, dislipemia 20% e hipertensión arterial 5%. 4) Las pacientes con pubarquia precoz presentaron mayor engrosamiento de la íntima carotídea en relación a un grupo control (n=16) de similares características con respecto a edad e IMC (0,51 ± 0,1 Vs 0,38 ± 0,07mm respectivamente) (p:0,005). 5) las pacientes con bajo peso (n=4) y peso adecuado al nacer al nacer (n=16) presentaron una prevalencia similar de hiperandrogenismo ovárico y síndrome metabólico. 6) Las pacientes que recibieron tratamiento con metformina y flutamida, iniciado durante la adolescencia y con una duración de 2 a 3 años, tuvieron una prevalencia de hiperandrogenismo ovárico menor que las pacientes que no lo tomaron (11% vs 64% respectivamente), no hubo diferencia en la prevalencia de síndrome metabólico (22% y 18%, respectivamente).CONCLUSIONES: Las pacientes con pubarquia precoz presentan alteraciones comunes al síndrome metabólico y al hiperandrogenismo ovárico en la edad adulta. Dichas alteraciones parecen ser independientes del peso al nacer, sin embargo se requiere una muestra de pacientes mayor para sacar conclusiones. El tratamiento con metformina y flutamida durante la adolescencia disminuye la incidencia de hiperandrogenismo ovárico en la edad adulta. Las pacientes con PP precisan un seguimiento clínico y analítico en la adolescencia y un control posterior en la edad adulta. / Background: Precocious pubarche in girls (PP, appearance of pubic hair before 8 yr) is associated with prepuberal hyperinsulinemia and dyslipemia, and with increased incidence of hyperinsulinemic ovarian hyperandrogenism -so called polycystic ovary syndrome (PCOS)-, at adolescence, which has been associated with endothelial dysfunction -specially with increased carotid intima-media thickness (IMT)-, and subsequent risk for cardiovascular disease and type 2 diabetes. 2) Aim and hypothesis: We hypothesized that young women with a history of PP show an increased prevalence of common manifestations for PCOS and metabolic syndrome (MS) (hyperglycaemia y/o hyperinsulinemia, dyslipemia, central adiposity, endothelial dysfunction and hypertension); PP patients small for gestational age (SGA) show a higher prevalence of PCOS and metabolic syndrome than those with adequate weight for gestational age (AGA); and women who received metformin and flutamide treatment at adolescence, have less prevalence of common manifestations of PCOS and MS at adulthood.3) Methods: A case-control study was conducted on 20 young women [age 29,6 &#61617; 3,3 yr; body mass index (BMI): 25,2 &#61617; 4,6] with a history of PP. In all cases, PP had been attributed to an amplified adrenarche, based on high circulating levels of dehydroepiandrosterona sulphate and/or androstenedione for chronological age at diagnosis. Endocrine-metabolic variables, body composition (by dual-energy X-ray absorptiometry), carotid IMT and ovarian morphology by transvaginal ultrasonography were assessed in all women.4) Results: 1) PP patients showed a 35% prevalence of PCOS (Rotterdam criteria) and a 20% prevalence of MS (International Diabetes Federation). 2) Prevalence of PCOS was higher at adolescence than at adulthood (70% vs 35%). 3) Prevalence of common manifestations for both pathologies was as follows: 45% insulin resistance and/or impaired glucose tolerance; 40% obesity, 35% endothelial dysfunction; 20% dyslipemia and 5% hypertension. 4) PP patients showed a higher carotid IMT in relation to a control group (n=16) of similar characteristics in terms of age and BMI (0,51 ± 0,1 and 0,38 ± 0,07mm, respectively) (p:0,005). 5) Patients SGA (n=4) and AGA (n=16) showed similar prevalence of PCOS and MS. 6) Patients who received metformin and flutamide treatment at adolescence (2-3 years), showed a lower prevalence of PCOS than patients who did not receive this treatment (11% and 64%, respectively), whereas the incidence of MS did not show a significant difference (22% and 18%, respectively).5) Conclusions: At adulthood, PP patients show alterations that are usually associated to MS and PCOS, independent of the weight at birth. Treatment with metformin and flutamide at adolescence decreases the incidence of PCOS at adulthood. PP patients require clinical and analytical follow-up during adolescence and a later control when they reach adulthood.

El Virus de Inmunodeficiencia Humana Tipo-1 (VIH-1) es el agente etiológico responsable del Síndrome de Inmunodeficiencia Adquirida (SIDA). Esta enfermedad se caracteriza por una pérdida sostenida de linfocitos T CD4+, provocando una alteración global del sistema inmunitario, y dejando al individuo expuesto a infecciones oportunistas y al desarrollo de ciertas neoplasias.Desde la introducción de la zidovudina en el año 1986 hasta la implantación a partir del año 1996 de las Terapias Antirretrovirales de Gran Actividad o TARGA (combinaciones de al menos tres compuestos antirretrovirales) se han aprobado un total de 19 nuevos fármacos para el tratamiento de la infección por el VIH-1. En su conjunto, la quimioterapia contra la infección por el VIH-1 incrementa la esperanza de vida de los individuos infectados. Sin embargo, complicaciones surgidas por el uso de estas terapias (p.e una adherencia subóptima, alteraciones en el perfil fármaco-cinético de algunos pacientes o la falta de potencia de los tratamientos) propician la selección de mutaciones de resistencia frente a los fármacos antirretrovirales. La aparición de estas mutaciones en el genoma del VIH-1 constituye una barrera al éxito duradero de las terapias antirretrovirales.Nuestras investigaciones parten del interés por el estudio de la variación en la eficacia biológica o "fitness" del VIH-1 debido a la adquisición de mutaciones de resistencia. La relación entre el mantenimiento de cepas virales con bajo "fitness" y elevada resistencia con un posible beneficio clínico constituye uno de los ejes centrales en los estudios aplicados de "fitness" viral. A lo largo de este trabajo resumiré el conocimiento acumulado en los últimos años en el estudio del VIH-1: su estructura básica y aspectos más relacionados con esta tesis, como son los fenómenos de resistencia a antirretrovirales y sus consecuencias en la modulación del "fitness" del VIH-1. / Human Immunodeficiency Virus Tipo-1 (HIV-1) is the agent responsible of Acquired Immunodeficiency Syndrome (AIDS). This illness is characterized by a long-term loss of CD4+T cells producing a global alteration of the immune system leading to the dead of the individual.From the introduction of Zidovudine in 1986 to Highly Active Antiretroviral Therapies (HAART) (combinations of at least 3 antiretroviral drugs), in 1996 it has been approved a total of 19 new drugs against HIV. These regimens have contributed to decrease mortality and morbidity among HIV-1 infected patients. However, in the course of treatment drug resistant HIV-1 variants often emerge as a result of impotent regimens, suboptimal adherence, pharmacological hurdles or ineffectively treated compartments, which has been a major factor contributing to treatment failure. Our research begins for the interest in study changes in HIV-1 replicative capacity or viral fitness associated with the acquisition of resistance mutations. The relationship between the maintenance of viral strains with low viral fitness and high resistance with a better clinical outcome is one of the mains objectives in the studies of viral fitness. In this thesis we will resume the knowledge from the last years in the studies of HIV-1: its basic structure and aspect associated this thesis, the processes of resistance and their consequences in changes of viral fitness.

Introducción: El virus de la hepatitis C (VHC) que afecta al 3% de la población mundial produce hepatitis crónica C (HCC) que en muchos casos evoluciona a cirrosis hepática y carcinoma hepatocelular. El tratamiento actual de la HCC con interferón pegilado (PegIFN) y ribavirina (RBV) puede inducir ansiedad y depresión.Objetivos: Conocer la incidencia de depresión y ansiedad inducida por el tratamiento con PegIFN y RBV, sus factores de riesgo basales, incluidos los rasgos de la personalidad y la asociación de dichos trastornos con la adherencia al tratamiento y su eficacia.Método: Dos estudios longitudinales de cohortes de pacientes con HCC tributarios de tratamiento con PegIFN y RBV. Procedimiento: Evaluación basal, y a las 4, 12, 24 y 48 semanas de tratamiento. Valoración del grado de adherencia al tratamiento y de la respuesta virológica sostenida (RVS). Variable dependiente: depresión y/o ansiedad inducida (Patient Health Questionnaire/entrevista estructurada SCID-DSM-IV). Variables independientes basales: datos sociodemográficos y biológicos, antecedentes personales (SCID-DSM-IV) y familiares, escala hospitalaria de depresión y ansiedad e inventario de temperamento y carácter de Cloninger. Análisis de supervivencia (Kaplan-Meier y Cox) y de regresión logística.Resultados: Estudio 1: Cohorte de 176 pacientes. Incidencia de depresión y/o ansiedad inducida del 36% durante 24 semanas. Variables predictivas: sintomatología depresiva(OR=27,8; IC95%=2,8-333; p=0,006), estudios primarios (OR=3,1; IC95%= 1,4-7,0; p=0,01) y ser inmigrante (OR=3,2; IC95%=1,1-9,5; p=0,03). La aparición de depresión y/o ansiedad inducida se asocia a una baja adherencia (79% vs. 91%; p=0,04), sin diferencias significativas en la RVS. Estudio 2: Cohorte de 204 pacientes. Incidencia de depresión inducida del 42% durante 48 semanas. Variables predictivas: sintomatología depresiva (HR=1,1; IC95%=1,0-1,2; p=0,013), antecedentes del estado de animo (HR=0,4; IC95%=0,2-0,6; p<0,001), baja "autodirección" (HR=0,6; IC95%=0,4-0,9; p=0,009), "malos hábitos" (HR=2,9; IC95%=1,4-6,1; p=0,04), alta "fatigabilidad" (HR=0,4; IC95%=0,2-0,7; p=0,01) y "desorden" (HR=0,4; IC95%=0,2-0,8; p=0,08).Conclusiones: Se confirma la alta incidencia de depresión y ansiedad inducida durante el tratamiento de la HCC con PegIFN y RBV. Un bajo nivel de estudios, ser inmigrante y tener sintomatología depresiva basal predicen la depresión/ansiedad inducida a las 24 semanas. Tener antecedentes de trastorno del estado de ánimo, sintomatología depresiva basal y rasgos de la personalidad relacionados con la falta de recursos para afrontar los efectos secundarios del tratamiento y la disminución de la calidad de vida predicen la depresión inducida a las 48 semanas. La aparición de estos trastornos psiquiátricos disminuye la adherencia, aunque su detección precoz y su manejo con un abordaje multidisciplinar mejoran la posibilidad de conseguir la RVS. / Background: Hepatitis C virus (HCV), that affects 3% of the world population, develops chronic hepatitis C (CHC) and liver cirrhosis and hepatocellular carcinoma after 15 to 25 years. The current treatment of HCC is pegylated interferon (PegIFN) and ribavirin (RBV) and can induce depression and anxiety.Aim: To study the incidence of induced depression and anxiety disorders by PegIFN and RBV treatment, their risk factors at baseline, included the personality traits and the association with these psychiatric disorders with treatment adherence and efficacy.Methods: Two cohort and longitudinal studies with CHC received PegIFN and RBV treatment. Procedure: Assessment at baseline and 4, 12, 24 and 48 weeks of treatment. We assessed the percentage of adherence and the sustained virologic response (SVR). Dependent variable: Depression and/or anxiety induced disorders (Patient Health Questionnaire/ Structured interview SCID-DSM-IV). Independent variables at baseline: sociodemographic and biological variables, history of personal SCID-DSM-IV and familiar psychiatric disorders, Hospital Anxiety and Depression Scale and Temperament and Character Inventory- Revised Version. Statistical analysis: Survival (Kaplan-Meier and Cox) and logistic regression.Results: Study 1: A cohort of 176 patients. The incidence of induced depression and/or anxiety disorders during 24 weeks of treatment was 36%. Independent predictive variables: depression-subscale score (OR=27.8; IC95%=2.8-333; p=0.006), primary educational level (OR=3.1; IC95%= 1.4-7.0; p=0.01) and being an immigrant (OR=3.2; IC95%=1.1-9.5; p=0.03). The incidence of induced depression and/or anxiety disorders is associated with lower adherence (79% vs. 91%; p=0.04), no significant differences at the SVR. Study 2: A cohort of 204 patients. The incidence of induced depression during 48 weeks of treatment was 42%. Independent predictive variables: depression-subscale score (HR=1.1; IC95%=1.0-1.2; p=0.013), history of mood disorders (HR=0.4; IC95%=0.2-0.6; p<0.001), low self-directedness (HR=0.6; IC95%=0.4-0.9; p=0.009), enlightened second nature (HR=2.9; IC95%=1.4- 6.1; p=0.04), fatigability (HR=0.4; IC95%=0.2-0.7; p=0.01) and disorderliness (HR=0.4; IC95%=0.2-0.8; p=0.08).Conclusion: There is high incidence of induced depression and anxiety disorders during the PegIFN and RBV treatment in patients with CHC. Primary educational level, being an immigrant and depression-subscale score predicts induced depression/anxiety disorders during 24 weeks of treatment. History of mood disorders, depression-subscale score and personality traits related to lack of resources and cleverness to cope with a high number of adverse effects and impairment of quality of life predict induced depression during 48 weeks of treatment. These induced psychiatric disorders reduce the adherence, but the early detection and treatment with multidisciplinary interventions can keep the SVR.

La inmunomodulación se define como la modificación de la respuesta inmune por medio de la administración de sustancias que poseen la capacidad de regular el sistema inmunitario. INMD es un inmunomodulador compuesto por una combinación de LPS detoxificado de E. coli y células inactivadas de Propionibacterium granulosum, que ha demostrado tener un efecto modulador sobre el sistema inmune del cerdo. En el presente trabajo hemos realizado diversos ensayos in vitro e in vivo con el objetivo de evaluar los efectos que produce este compuesto sobre el sistema inmune del porcino.Se realizaron ensayos in vitro para determinar la acción de INMD o sus componentes por separado sobre la producción o expresión de citoquinas en macrófagos alveolares y células mononucleares de sangre periférica, la activación de la fagocitosis en neutrófilos polimorfonucleares, la activación de linfocitos a través del estudio del receptor para IL-2 (CD25) y la expresión del complejo mayor de histocompatibilidad tipo-II (MHC-II) en macrófagos alveolares. Observamos que los macrófagos alveolares expresaron IL-1, IL6, IL-12 y produjeron TNF-a, pero no se detectó IL-10, mientras las células mononucleares de sangre periférica expresaron IL-1, IL-2, IL-4, IL-6, IL-10, IL-12 y produjeron INF-g. En la fagocitosis, observamos incremento del número de células que se activaron y fagocitaron. Este efecto estuvo correlacionado con P. granulosum. Observamos que INMD y sus componentes por separado indujeron la expresión de MHC-II en macrófagos alveolares, tanto en aquellos infectados con el virus de la enfermedad de Aujeszky como en las células que no infectadas. Para CD25, observamos que INMD y sus componentes por separado fueron capaces de inducir la expresión de esta molécula que nos indica que se produjo la activación de las células mononucleares de sangre periférica. En este caso, la máxima expresión de CD25 se observó con INMD tanto en células infectadas con el virus de la enfermedad de Aujeszky como en aquellas no infectadas.Se realizaron dos pruebas in vivo. En la primera de ellas se evaluó el efecto de la administración de INMD utilizado como coadyuvante a la vacunación contra el virus de la enfermedad de Aujeszky. Se utilizaron 85 cerdos convencionales divididos en dos grupos (grupo A= 43 y grupo B= 42), que fueron vacunados dos veces contra el virus de la enfermedad de Aujeszky. El grupo B recibió simultáneamente con la primera dosis vacunal, una dosis intramuscular de INMD (20 mg/ml de LPS y 250 mg/ml de P. granulosum). Se realizaron tres sangrados, antes de la primera vacunación y la revacunación, y cinco semanas posteriores a esta. Los sueros se analizaron para anticuerpos frente a gE y gB del virus de la enfermedad de Aujeszky, inmunoglobulinas totales (IgG1, IgG2), inmunoglobulinas especificas (IgA, IgG1, IgG2) para el virus de la enfermedad de Aujeszky, linfoproliferación y títulos neutralizantes frente al virus de la enfermedad de Aujeszky. Al inicio del estudio, el 97,6% de los animales del grupo A y 100% del grupo B, presentaban anticuerpos frente gB, mientras que el 11,6% y 19% de los animales de los grupo A y B, respectivamente, presentaban anticuerpos frente a gE, todos de origen maternal. Al final del ensayo, el 96,4% de los cerdos del grupo A y el 87,1% del grupo B eran gB+ y ninguno presentó anticuerpos frente a gE. Tras la primera vacunación y la aplicación de INMD, los animales del grupo B presentaron niveles totales de IgG1 e IgG2 superiores que los animales del grupo A (p<0,01), diferencias que desaparecieron tras la revacunación. Si bien entre estos isotipos se observó la misma tendencia en los anticuerpos específicos frente al virus de la enfermedad de Aujeszky, esta diferencia no fue significativa. Con relación a las IgA, se observó que tras la revacunación el 38,48% de los animales del grupo B presentaban títulos £1:40, mientras que en el grupo A se observaron estos títulos en el 14,81% de los cerdos (p<0,01). En los ensayos de linfoproliferación no se observaron diferencias significativas entre grupos. En cuanto a los títulos de anticuerpos neutralizantes, se observó una respuesta humoral primaria superior en el grupo B con respecto al grupo A (p<0,005), diferencia que desapareció tras la revacunación. Así mismo, en la respuesta primaria el 56,7% de los cerdos del grupo A presentaban títulos £1:4, mientras que entre el grupo B el 25,6% de los animales presentaban este comportamiento (p<0,05). En un segundo ensayo realizado in vivo, se evaluaron los efectos adversos que pudieran ocasionar la aplicación de INMD a una dosis superior a la recomendada. Se utilizaron ocho cerdos de alta sanidad que se dividieron en tres grupos: Grupo A: INMD (1,2 mg/kg P.V. de LPS y 16 mg/kg P.V. de P. granulosum), Grupo B: INMD (2,6 mg/kg P.V. de LPS y 33 mg/kg P.V. de P. granulosum), Grupo C: solución salina estéril. A los tiempos 0, 1, 2, 4, 6 y 24 horas se realizó el sangrado, para determinar los niveles de TNF-a, la medición de la temperatura corporal y evaluación clínica Ninguno de los animales presentó signos clínicos relacionados con la aplicación de LPS y la liberación de niveles altos de citoquinas.De estos resultados podemos concluir que INMD ejerce su acción sobre el sistema inmunitario induciendo la expresión de citoquinas, incrementando la capacidad fagocítica de los PMN y estimulando la expresión de MHC-II y CD25. Estos efectos pueden contribuir sustancialmente al mejoramiento del proceso de respuesta inmune del cerdo en enfermedades y vacunaciones. / Immunomodulation is defined as the modification of the immune response by means of the administration of substances that possess the ability to regulate the immune system. INMD is an immunomodulator composed by a combination of a detoxified LPS of E. coli and inactivated cells of Propionibacterium granulosum that has demonstrated to have a modulatory effect on the immune system of the pig. In the present study we have done several in vitro and in vivo assays with the objective of evaluate the effects that this compound produces in some components of the immune system in pigs. In vitro assays were made to determine the action of INMD and their components on the cytokine production or expression in alveolar macrophages and peripheral blood mononuclear cells, the activation of phagocytosis in polymorphonuclear neutrophiles, the activation of lymphocytes through the study of the IL- 2 receptor (CD25) and the expression of the major histocompatibility complex class-II (MHC-II) in alveolar macrophages. Regarding the cytokine expression, it could be observed that alveolar macrophages expressed IL-1, IL-6, IL-12 and produced TNF-a, but not IL-10, while the peripheral blood mononuclear cells expressed IL-1, IL-2, IL-4, IL-6, IL-10, IL-12 and produced INF-g in response to INMD stimulation.When the effect of INMD on the phagocytosis exerted by PMN was studied, we observed that the phagocytosis capability of these cells increased. This phenomenon was attributable more to an increase in the number of activated cells than to an increase of individual phagocytic ability. This effect was correlated with P. granulosum. Likewise, we observed that INMD and its separated components induced the expression of MHC-II in alveolar macrophages. Thus as well in cells infected with Aujeszky's disease virus as in those that were not. Regarding CD25, we observed that INMD and its components by themselves alone were able to induce the expression of this molecule, a fact indicates the activation of the peripheral blood mononuclear cells. In this case, the maximum expression of CD25 was observed with INMD both in Aujeszky's disease virus infected cells as well as in uninfected ones.Two in vivo experiments were made. The first one of them the effect of the administration of INMD was evaluated using this product as a coadjuvant to the vaccination against the Aujeszky's disease virus. With this purpose, eighty-five 8-10-weeks-old crossbred conventional pigs were randomly distributed in two groups (group A = 43 and group B = 42), that were vaccinated two times against the Aujeszky's disease virus. Group B animals received simultaneously with the first vaccine dose, an intramuscular dose of INMD equal to 20 mg/ml of LPS and 250 mg/ml of P. granulosum. Blood was collected from all 85 animals before the first vaccination, before the booster and five weeks after the booster. Sera were analysed to determine the presence of Aujeszky's disease virus anti-gE and anti-gB antibodies, total immunoglobulin load (IgG1, IgG2) and Aujeszky's disease virus specific immunoglobulins (IgA, IgG1, IgG2). Lymphoproliferation assays and virus seroneutralization test for Aujeszky's disease virus were also done. Before the first vaccination, 97.6% of pigs in group A and 100% in group B presented anti-gB antibodies, while 11.6% and 19% were seropositive against gE respectively. At the end of the trial, 96.4 % of group A pigs and 87.1% of the animal in group B were gB+ and none of them had anti-gE antibodies. Regarding levels of total immnunoglobulins, after the first vaccination group B pigs had higher levels of IgG1 and IgG2 (p<0,01) but these differences disappeared after the second vaccination. When evaluated Aujeszky's disease virus specific antibodies, were not different between groups, except for IgA. In this case, we observed that after the revaccination, 38.48% of animals in group B presented titres £1:40, while in group A this was observed in the 14.81% of the pigs (p<0.01). In lymphoproliferation assays, significant differences between groups were not observed. Regarding the virus-neutralizing antibodies, we observed higher titres in the group B animals after de first vaccination (p<0.005), differences that disappeared after the booster. Thus after the first vaccination, 56.7% of pigs in group A had titres £1:4, while thus was observed only in 25.6% of the animals in group B (p<0.05). In a second in vivo assay, the adverse effects that could cause the application of INMD were evaluated. With this aim, eight pigs were distributed in three groups. Animals of group A were injected intramuscularly with a dose of INMD corresponding to 1.2 mg/kg of body weight of LPS and 16 mg/ml of body weight of P. granulosum, while those in group B received 2.6 mg/kg of body weight of LPS and 33 mg/kg of body weight of P. granulosum. Animals in group C received similar volume of sterile saline solution. All the animals were bled to determine the levels of TNF-a to the 0, 1, 2, 4, 6 and 24 hours, taking in each one of these times the body temperature. None of the animals had evident adverse effects for LPS or produced by high levels of cytokine. From those results it could conclude that INMD exerts its action on the immune system at least indicating cytokine expression, enhancing phagocytosis capabilities of PMNS and enhancing also the expression on MHC-II and CD25. These effects can contribute substantially improvement of the immune response of pigs in disease state or in vaccination.

Desde su aparición en 1987, el Síndrome Reproductivo y Respiratorio Porcino (PRRS) ha provocado un enorme impacto en la producción porcina mundial. Estudios recientes estiman que sólo en Estados Unidos las pérdidas por costes directos ascienden a 560 millones de dólares anuales. Los resultados obtenidos con las vacunas que se comercializan arrojan ciertas dudas sobre su eficacia. Una de las razones por la que no se han podido desarrollar vacunas más eficientes es la falta de un conocimiento profundo de la respuesta inmune (RI) que ocurre tras la infección.El agente etiológico de esta enfermedad es conocido como virus del PRRS (PRRSV) o arterivirus porcino. Se han descrito dos genotipos, el americano y el europeo. Existe, además, una elevada variabilidad genética dentro de cada genotipo. Hasta la fecha, la mayoría de estudios sobre la RI tras la infección o tras la vacunación con este virus han sido realizados usando cepas americanas. El objetivo de esta tesis doctoral es caracterizar la RI del cerdo frente a cepas del PRRSV del genotipo europeo; primero, durante la infección de lechones con una cepa de campo español y, segundo tras la vacunación con cepas atenuadas (vacunas comerciales), evaluando su eficacia frente a un desafío homólogo o heterólogo. Primer estudio: Los hallazgos más significativos de la RI de los cerdos infectados experimentalmente con una cepa española son: ausencia de producción de IL-2 e IL-4, aparición temprana de anticuerpos no neutralizantes, respuesta neutralizante inconstante y tardía y un desarrollo lento e irregular de CP-IFN-gamma específicas de PRRSV que, sin embargo, podría estar relacionado con el fin de la viremia. Una de las hipótesis que planteamos para explicar la anómala respuesta celular observada es la producción de IL-10 y de haptoglobina en las primeras fases de la infección. Planteamos también la hipótesis que quizás la RI desempeña un papel secundario en la resolución de la infección, tal y como ya se ha demostrado con otros arterivirus como el virus elevador de la lactato-deshidrogenasa del ratón.Segundo estudio: Los cerdos vacunados presentan periodos de viremia muy largos (42 días). Las largas viremias descritas con ambas vacunas denotan una situación indeseable dónde se posibilita la excreción del virus y por tanto la transmisión y la hipotética reversión a virulencia. Sorprendentemente, tras el desafío, se detectó el virus en sangre sólo en los animales vacunados con la cepa homóloga (V1) (4/5). La respuesta humoral neutralizante no aparece antes de los 2 meses post-vacunación y por tanto este parámetro no puede relacionarse con la protección otorgada por las vacunas. Nuestros resultados sugieren que son las CP-IFN-gamma el parámetro inmune que debería considerarse como marcador de protección. Independientemente de la vacuna que les administra, los animales que alcanzan una magnitud mínima de CP-IFN-gamma en el momento del desafío quedan protegidos. De hecho, la vacuna que aporta un mayor grado de protección es la vacuna heteróloga (V3), ya que induce los mayores niveles de CP-IFN-gamma. La falta de protección homóloga (V1) podría explicarse por la capacidad intrínseca de esta cepa de inducir IL-10 incluso en las células de los animales control. Todo ello sugiere que la protección conferida por una vacuna contra el PRRSV no depende sólo de la homología entre el virus vacunal y la cepa del desafío, sino que también debe considerarse el tiempo transcurrido tras la vacunación y las propiedades inmunológicas inherentes de cada cepa.En definitiva, nuestros estudios demuestran que la RI de los lechones tras la infección con una cepa virulenta del PRRSV es prácticamente igual a la que se desarrolla tras la vacunación con cepas atenuadas, ya sean éstas del genotipo europeo o del americano. Además, nuestro segundo estudio demuestra que las CP-IFN-gamma específicas de PRRSV desempeñan un papel importante en la protección frente a la infección. / Since it was described in 1987, Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome (PRRS) has become one of the most important diseases in the swine worldwide. A recent study estimates that the economic losses caused by PRRS in the US amount to more than US$ 560 millions annually.Regarding the commercialized vaccines, as of today, there is no convincing evidence indicating that they confer an acceptable and universal protection against the infection. One of the reasons for the lack of development of newer and more efficacious vaccines is the scarce knowledge on the immune response (IR) of pigs after infection by field strains.The etiologic agent for this disease is known as PRRS virus (PRRSV) or Porcine Arterivirus. Two genotypes are recognized (American and European). In addition, genetic diversity of strains within a given genotype is high. To date, the majority of the studies regarding the IR of pigs after the PRRSV infection or vaccination have been done using the American strains. The aim of this thesis is to characterize the IR against the European genotype. Firstly, during the infection of piglets with a wild-type Spanish strain and secondly after the vaccination with two attenuated virus (commercialized vaccines), evaluating their efficacy after a challenge with a homologous or a heterologous strain.First study: The most significant results in the IR of the piglets experimental infected with a Spanish strain are: lack of IL-2 and IL-4 production, early production of non-neutralizing antibodies, inconstant and late humoral neutralizing response and slow and irregular development of PRRSV-specific IFN-gamma-secreting cells (IFN-gamma-SC) measured by ELISPOT. Nevertheless, this last parameter would be associated with the disappearance of the virus from the blood. The IL-10 and haptoglobin production in the first phases of the infection could explain the anomalous cell response observed. We postulate that the IR maybe plays a secondary role in the resolution of the infection, as it has already been demonstrated with other Arterivirus as lactate dehydrogenase-elevating virus of the mice.Second study: After vaccination, some pigs remain viremic as late as 42 days post-vaccination. This extended period of viremia could significantly contribute to the spread of vaccine virus and, potentially, this phenomenon could facilitate the reversion to virulence. Surprisingly, after the challenge, only pigs vaccinated with the homologous strain (V1) become viremic (4/5). Vaccinated pigs do not develop neutralizing antibodies before the challenge. Therefore, this parameter cannot be related to the protection conferred by the vaccines. Our results suggest that IFN-gamma-SC play an important role in protection against the PRRSV infection in piglets. Regardless of the vaccine used, the pigs are protected if IFN-gamma-SC reach a minimum frequency at time of the infection. In fact, heterologous vaccine (V3) confers the best protection because it induces the highest IFN-gamma-SC frequency. The lowest protection conferred by the homologous vaccine (V1) could be explained by its intrinsic ability to induce a high IL-10 production even in naïve cells. Our results suggest that the protection afforded by a vaccine against PRRSV cannot be forecasted only by a global view of the genetic similarity between the strains but, maybe, can be forecasted by the time passed after the vaccination and the inherent immune properties of each strain.In summary, our studies show that the IR of the piglets after the infection with a wild-type strain is similar to the IR developed after the immunization with attenuated strains, both in European and American genotypes, in spite of the genetic diversity. The second study proves that the frequency of PRRSV-specific IFN-gamma-SC plays a significant role in the protection of vaccinated pigs against a PRRSV infection.

El Circovirus porcí tipus 2 (PCV2) és l'agent causal de la circovirosi porcina (CP), una malaltia multifactorial que afecta porcs en fases de transició i engreix i que causa importants pèrdues econòmiques a la indústria porcina d'arreu del món. Les característiques histopatològiques de la CP i el fet que els animals malalts pateixin sovint infeccions secundàries i oportunístiques indica que aquesta malaltia implica una greu alteració del sistema immunitari del porc. Durant molts anys, el control de la CP es centrava principalment en la millora d'estratègies de maneig i en el control dels factors de risc que influeixen la presentació clínica de la malaltia. A dia d'avui, s'han introduït al mercat internacional quatre vacunes enfront PCV2 i la seva implementació al camp ha disminuït dràsticament la incidència de la CP. La present Tesi tenia com objectiu la caracterització de les respostes immunitàries desenvolupades pel porc en el curs de la infecció i vacunació per PCV2. En la primera part (Estudis I i II), es va caracteritzar el perfil immunològic de porcs sub-clínicament infectats amb PCV2, amb especial èmfasi en les respostes mediades per cèl·lules i el paper de les proteïnes capside (Cap) i replicasa (Rep) de PCV2 en el seu desenvolupament. Es va demostrar que el virus sencer, però no Cap i Rep indueix l'alliberació d'interleuquina (IL)-10 en cèl·lules mononuclears de sang perifèrica (CMSP), fins i tot en els cultius procedents d'animals verges, indicant l'origen innat d'aquesta resposta. Addicionalment, es va observar que, en fases inicials de la infecció per PCV2, es pot detectar interferó (IFN)-&#945; en sèrum (dia 5 post-inoculació (PI)). Per altra banda, nivells detectables d'IL-10 només s'observaren de forma esporàdica, suggerint que els animals infectats sub-clínicament per PCV2 no es caracteritzen per tenir nivells elevats d'aquesta citoquina en sèrum. En relació a la immunitat adaptativa enfront a PCV2, es va veure que la resposta humoral es desenvolupa entra la segona i tercera setmana PI i que es caracteritza per la producció d'anticossos totals i neutralitzants, essent els neutralitzants d'aparició més tardana. La immunitat mediada per cèl·lules apareix entre la primera i segona setmana PI, i tant Cap com Rep estan implicades en el seu desenvolupament. A la segona part d'aquesta Tesi (Estudis III i IV), es va avaluar la immunogenicitat i eficàcia d'una vacuna comercial (una i dues dosis) basada en la Cap d'una soca de genotipus PCV2a en porcs convencionals. Els resultats d'aquests estudis van demostrar que la vacunació indueix el desenvolupament d'immunitat humoral i cel·lular i redueix la viremia, l'excreció i la càrrega vírica en teixits després de la infecció amb PCV2, tant amb soques de genotipus PCV2a com PCV2b. També es va observar que els anticossos maternals (AM) protegeixen enfront la infecció per PCV2 i influeixen en el desenvolupament de la resposta humoral després de la vacunació. Els resultats de l'estudi IV suggereixen que porcs amb títols d'IPMA per sota 5 log2 són potencialment més susceptibles a infectar-se amb PCV2. D'altra banda, es va veure que títols d'IPMA per sobre 10 log2 poden interferir amb el desenvolupament d'anticossos en resposta a la vacunació. En base a aquestes observacions, es proposa una "finestra de vacunació", definida com el rang de títols d'anticossos en el que els porcs s'haurien de vacunar per minimitzar la interferència amb els AM i, al mateix temps, assegurar el desenvolupament d'immunitat protectiva abans que els animals s'exposin a PCV2. / Porcine circovirus type 2 (PCV2) is the causative agent of Postweaning multisystemic wasting syndrome (PMWS), a multifactorial disease of nursery and fattening pigs that causes considerable economic losses to the swine industry worldwide. The histopathological features of PMWS and the fact that secondary and opportunistic infections are common in PMWS-affected pigs indicate that this disease involves a deep alteration of the immune system. For years, control of PMWS was limited mainly to the improvement of management strategies and to the control of risk factors thought to influence the infection outcome. At present, four vaccines against PCV2 are being sold on the international market and their application in the field drastically reduced the incidence of PMWS. This Thesis aimed to characterize the immune responses developed by pigs upon PCV2 infection and vaccination. In the first part (Studies I and II), the immune features of PCV2 experimental sub-clinical infections were characterized, with particular emphasis on cell-mediated responses, and on the role of PCV2 capsid (Cap) and replicase (Rep) proteins on it. Results from these studies showed that whole PCV2, but not Cap or Rep, induces the release of interleukin (IL)-10 in peripheral blood mononuclear cells (PBMC), even in those cultures obtained from PCV2-naïve pigs, a fact that indicates the innate origin of this response. In addition, it was found that interferon (IFN)-&#945; can be detected in serum at early stages of the sub-clinical infection (5 days post inoculation (PI)). In contrast, IL-10 in serum could only be sporadically detected, suggesting that increased levels of this cytokine are not characteristic of PCV2 sub-clinically infected pigs. With regards to the acquired immunity to PCV2, humoral responses were developed mostly between the second and third week PI, characterized by the production of PCV2 total and neutralizing antibodies (NA), appearing NA later than total antibodies. Cell-mediated immunity developed within the first two weeks PI and it was demonstrated that both Cap and Rep proteins of PCV2 are involved in its development. In the second part of this thesis (Studies III and IV), the immunogenicity and efficacy of a commercial PCV2a-based sub-unit vaccine used in one- and two-dose schedules was evaluated in conventional piglets. Results from these studies demonstrated that vaccination induced the development of humoral and cell-mediated responses and significantly reduced viremia, shedding, and viral load in tissues upon challenge with either PCV2a or PCV2b isolates. It was also found that maternally derived PCV2 antibodies (MDA) protect against PCV2 infection and influence the humoral response developed after vaccination. Results from study IV suggest that pigs with IPMA titres below 5 log2 are potentially more susceptible to PCV2 infection. Besides, IPMA titres beyond 10 log2 were seen to interfere with the development of antibodies following PCV2 vaccination. Based on these observations a "vaccination window" was proposed, defined as the range of antibody titres at which piglets should be vaccinated to minimize interference with MDA and, at the same time, ensure the development of protective immunity before PCV2 exposure.

INTRODUCCIÓN El nucleolo es el responsable de la biogénesis ribosomal. En los últimos años, nuestros conocimientos de la función del nucleolo han ido aumentando. Recientes publicaciones han elucidado su participación en otras importantes funciones como la supresión tumoral y la oncogénesis. El tamaño nucleolar ha sido correlacionado con la tasa de proliferación de los tejidos tumorales, con un potencial papel pronóstico de este parámetro. Este estudio ha sido llevado a cabo con el propósito de investigar cualitativamente el valor del nucleolo en el pronóstico del carcinoma de células claras renales. MATERIAL Y MÉTODOS Fueron incluidos en este estudio retrospectivo 92 pacientes afectos de carcinoma de células renales (CCR), tratados quirúrgicamente con un adecuado seguimiento y con tejido tumoral para examen ultraestructural. Las áreas nucleolares fueron obtenidas mediante microscopía electrónica. Mediante morfometría ultrasteructural calculamos el área nucleolar media (MNA) y el área nucleolar máxima (MaxNA). Fueron recogidos para cada caso, el grado tumoral Fuhrman, el estadio TNM del año 2004, el tamaño tumoral, el estado clínico y la supervivencia. Se realizó un estudio mediante análisis univariante y multivariante. RESULTADOS Obtuvimos diferencias significativas entre los valores del grado nuclear con ambos intervalo libre de progresión y supervivencia. Encontramos diferencias estadísticamente significativas entre todos los estadios TNM y el intervalo libre de progresión y la supervivencia. El estadio TNM muestra una correlación significativa con el MNA (Rho=0.23, p<0.05) y con el MaxNA (Rho=0.22, p<0.05). También el grado de Fuhrman mostraba una correlación significativa con el MNA (Rho=0.40, p<0.05) y con el MaxNA (Rho=0.28, p<0.059). El análisis univariante demostró una relación estadísticamente significativa entre el MNA y MaxNA con la supervivencia y el intervalo libre de progresión como variables continúa. Mediante el método de análisis de ROC obtuvimos el punto de corte con mayor rentabilidad diagnóstica. Los puntos de corte óptimos fueron 4.10 µm2 para el MNA con resultado del Log Rank tests 8.24 p=0.004 y 9.3 µm2 para el MaxNA con Log Rank test de 8.84 p=0.002. El análisis multivariante para la supervivencia específica mediante el método de riesgos proporcionales de Cox mostró como factores pronósticos independientes el MaxNA (p=0,011) y el estadio TNM (p=0,0001). El grado nuclear fue marginalmente significativo (p=0,053). CONCLUSIONES El resultado del presente estudio mediante morfometría ultraestructural demostró la relaciones del tamaño nucleolar en la gradación y en la progresión del carcinoma de células renales (CCR). Nuestros resultados muestran que el tamaño nucleolar es un factor pronóstico independiente en el CCR. La morfometría ultraestructural fue útil para establecer el importante papel del nucleolo en la patogénesis del CCR. / INTRODUCTION The nucleolus is responsible for ribosome biogenesis. In recent years, our knowledge of the human nucleolar function has been expanded. Recent reports have elucidated its involvement in others important functions, like tumour suppression and oncogenesis. Nucleolar size has been correlated to proliferation rate of cancer cells tissue, with a potential prognostic role of this parameter. The present study has been undertaken with the aim of quantitatively investigate the value of nucleoli in the prognosis of clear cell renal cell carcinoma (CCRCC). MATERIALS AND METHODS 92 patients with renal cell carcinoma (RCC) surgically treated with adequate follow-up data and tumoral tissue for ultrastructural examination, were included in this retrospective study. Nucleolar areas were obtained by electron microscopy. The mean of nucleolar areas (MNA) and maximum nucleolar area (MaxNA) were calculated by ultrastructural morphometry study. Fuhrman’s tumor grade, 2004 TNM system, tumoral size, clinical status and the length of survival were recorded in each case. The results were assessed by univariate and multivariate analysis. RESULTS Significant differences were found between nuclear grade and both progression-free interval and survival. There were statistically significant differences between all TNM stages in progression-free interval and survival. TNM stage showed a significant relation-ship with MNA (Rho=0.23, p<0.05) and MaxNA (Rho=0.22, p<0.059). Also Fuhrman´s grade showed a significant relation-ship with MNA (Rho=0.40, p<0.05) and MaxNA (Rho=0.28, p<0.05). Univariate analysis showed a statistically significant relationship between MNA and MAxNA as continuous variables and survival and progression-free interval. The optimal thresholds with greatest diagnostic accuracy for risk progression were obtained by ROC analysis. Optimal thresholds values were 4.10 µm2 for MNA with log Rank test value 8.24 p=0.004 and 9.3 µm2 for MaxNA with log Rank test value 8.84 p=0.002. Multivariate analysis by Cox proportional hazard method for specific cancer survival showed MaxNA (p=0.011) and Stage TNM (p=0.0001) like significant independent predictors. Nuclear grade was marginally significant (p=0.053). CONCLUSIONS The results of present study by ultrastructural morphometry showed the relationship of nucleolar size in the grading and progression of RCC. Ours results showed the Nucleolar size as an independent prognostic factor in RCC. Ultrastructural morphometry was useful for the establishment of important role of nucleoli in RCC pathogenesis.

El rápido progreso mundial en manejo y genética en vacas lecheras de alta producción, ha culminado con un aumento de animales por rebaño. A pesar de este aumento, la fertilidad y la eficacia reproductiva de estos animales ha ido disminuyendo desde los años 80. El manejo también ha sufrido importantes cambios estos años, al igual que el ambiente donde se encuentran las vacas de alta producción. La temperatura de confort de vacas lecheras se encuentra entre 5 y 25ºC, y por este motivo se puede pensar que el estrés por calor no sólo se producirá en zonas tropicales, si no que se expande globalmente y tiene una gran importancia para la ganadería. %&/El objetivo de esta tesis es estudiar factores de manejo y ambientales que puedan afectar a la fertilidad y a perdidas fetales iniciales en vacas altamente productoras en el Noreste español. Los estudios se realizaron en la zona del Segriá y los datos meteorológicos se obtuvieron de una estación situada a menos de 6 km de las granjas.En el primer estudio realizado se determinó que el índice de temperatura-humedad (THI) es mejor predictor para las perdidas fetales iniciales que la temperatura sola. Además, el período de 21-30 días postinseminación se determinó como un período crítico para la gestación.En el segundo estudio, las vacas altamente productoras fueron las que presentaron mayor fertilidad, evidenciando que el efecto negativo de la producción lechera sobre la eficacia reproductiva tiene que ser revisado. En el tercer estudio, los efectos de manejo fueron de gran importancia para la fertilidad de rebaños lecheros: el número de ordeños, los inseminadores y el toro. Posiblemente cada granja tiene que revisar periódicamente los toros utilizados, y entrenar a los técnicos inseminadotes correctamente.En el cuarto estudio se demostró que factores ambientales alrededor del periodo de inseminación tienen gran efecto sobre la fertilidad. No se pudo demostrar si el THI era mejor predictor para la pérdida de fertilidad que la temperatura sola.Finalmente en el quinto estudio se puso de manifiesto algunos marcadores de riesgo para la disminución de la fertilidad en granjas lecheras de alta producción, como los quistes ováricos y la baja producción de leche.En conclusión, para poder aumentar la eficacia reproductiva de granjas lecheras altamente productoras es necesario llevar a cabo un control periódico de los datos de cada rebaño, y monitorizar correctamente los animales. Además, el ambiente y el manejo se deben mejorar en este tipo de animales si se quiere seguir aumentando la producción lechera como hasta ahora. / The rapid worldwide progress in management and genetics of dairy herds has culminated in an increase of milk production and number of animals per herd. But despite this rapid progress, reproductive performance and reproductive disorders of high producing dairy has suffered a dramatic decrease and increase, respectively, since the mid 1980's. Management practices have also suffered significant changes during the last decades besides an increase in milk production. The most comfortable temperatures for dairy cows ranged from 5 to 25ºC. Therefore, heat stress in not confined in tropical regions of the world and has a great impact on farm economy. The main objectives of this thesis were to study environmental and management factors that affect fertility and pregnancy losses in high producing dairy cattle in northeastern Spain, a country with a seasonal warm weather. The studies were performed in high producing dairy herds in Lleida. Climatic data were obtained from a meteorological station located less than 6 km from the herds and management data were recorded in each herd.In the first study results indicated that temperature humidity index during the periimplantational period and warm season were a risk factor for pregnancy losses.In the second, cows that get pregnant before 90 days postpartum were those who produce more milk on 50 days postpartum. Management practices of these herds offset the negative effects of milk production.In the third, management practices demonstrated to be an important factor for conception rate. Three times per day milking, inseminating bull and AI technician were a risk factors for infertility.In the fourth, environment proved to be directly affecting conception rate especially around AI period.In the fifth, monthly summary records provide risk markers for fertility: low milk production and ovarian cysts.In conclusion, to increase reproductive performance of high producing dairy herds, it is necessary to monitor their status periodically. Moreover, management and environmental factors of dairy herds have a great importance on economic success of high producing dairy farms.