Los cultivos de células vegetales pueden constituir plataformas biotecnológicas ecológicas para la producción de metabolitos secundarios de plantas con actividad farmacológica, así como un excelente sistema para ampliar el conocimiento del metabolismo secundario. El taxol y taxanos relacionados son metabolitos secundarios vegetales con una notable actividad anticancerígena. A pesar de la importancia de estos compuestos, su producción biotecnológica todavía necesita ser optimizada y aún se desconocen algunos aspectos de su biosíntesis. En este trabajo hemos estudiado la respuesta a la acción de la beta-metil-ciclodextrina (CD) y coronatina (CORO) de dos cultivos celulares de Taxus (T. media y T. globosa) con el fin de encontrar alternativas para la producción de taxanos; también hemos caracterizado el gen TB768, que previamente fue seleccionado a partir de un estudio de cDNA-AFLP, como candidato a codificar para una enzima implicada en la biosíntesis de taxol. La producción de taxanos, fue mayor en las líneas celulares de T. media que en T. globosa e incrementó significativamente por la adición simultánea de los elicitores CD y CORO, correlacionando con la expresión de los genes conocidos de la biosíntesis de taxol. El análisis funcional del gen TB768 demostró, confirmando las predicciones in silico, que este gen codifica para una acil-CoA ligasa citoplasmática, capaz de convertir la β-fenilalanina en su éster de CoA, un precursor de la cadena lateral del taxol. De esta forma la nueva proteína caracterizada, beta-fenilalalina CoA ligasa (TBPCCL), estaría implicada en una de las últimas etapas de la ruta biosintética de taxanos. Estos estudios contribuyen a la creación de nuevos y mejores sistemas de producción sostenible de taxol y taxanos relacionados; mediante sistemas de elicitación o de ingeniería metabólica. / Plant cell cultures constitute eco-friendly biotechnological platforms for the production of plant secondary metabolites with pharmacological activities, as well as a suitable system for extending our knowledge of secondary metabolism. Taxol and related taxanes are plant secondary metabolites with a remarkable anticancer activity. Despite the importance of these phytochemicals, their biotechnological production still requires optimization and several aspects of their biosynthesis remain unknown. In this work, we studied the response of two Taxus cell cultures (T. media and T. globosa) to the addition of β-methyl cyclodextrin (CD) and coronatine (CORO) with the aim of finding alternative systems for taxane production; we also characterized the TB768 gene, which a previous cDNA-AFLP analysis revealed to be a putative candidate for encoding a taxol biosynthetic enzyme. Taxane production was higher in the T. media than the T. globosa cell line, and was significantly enhanced by the simultaneous addition of both elicitors (CD and CORO); the expression of known taxol biosynthetic genes was correlated with the improved taxane production. Confirming in silico predictions, functional analysis of the TB768 gene showed that it encodes a cytoplasmic acyl-CoA ligase able to convert β-phenylalanine into its respective CoA ester derivative, a precursor of the taxol lateral chain. Therefore, this newly characterized enzyme, β-phenylalanine CoA ligase (TBPCCL), must be involved in one of the last steps of the taxane biosynthetic pathway. These studies are a contribution to the establishment of sustainable taxol production systems by elicitation or metabolic engineering approaches.

La presente Tesis se orientó a la caracterización molecular de la infección causada por PCV2 utilizando la tecnología de los microarrays. Este virus es el agente infeccioso esencial de la enfermedad sistémica (ES) por PCV2, una enfermedad de carácter multifactorial que afecta principalmente a cerdos en las fases de transición y engorde, y es una de las enfermedades porcinas más importantes económicamente a nivel mundial. La tecnología de los microarrays permite la determinación simultánea de los niveles de ARNm de miles de genes y ha sido utilizada en los últimos años para investigar los perfiles de expresión génica de tejidos y líneas celulares, ayudando a descifrar las interacciones huésped-patógeno que son relevantes para la patogénesis de varias enfermedades. Es por ello que esta Tesis se orientó a identificar genes y procesos biológicos implicados en la respuesta inmune de cerdos subclinicamente infectados por el PCV2 y también de animales naturalmente afectados por la ES-PCV2. La primera parte de esta Tesis consistió en un trabajo exploratorio dirigido a evaluar la utilidad de la plataforma Affymetrix Porcine GeneChip® para estudiar el perfil global del transcriptoma de lechones de la raza Duroc, derivados por cesárea y privados de calostro (DCPC), experimentalmente infectados por PCV2. A partir del análisis de los datos de los microarrays, se seleccionaron 25 y 33 genes que resultaron diferencialmente expresados (DE) entre los grupos control e inoculados con PCV2 en linfonodos mesentéricos y pulmones, respectivamente. La gran mayoría de los genes sobre-expresados en el grupo inoculado con PCV2 estaba relacionada a la respuesta inmune. Desde el punto de vista del transcriptoma, los animales inoculados con PCV2 fueron capaces de activar la respuesta mediada por células y desarrollar anticuerpos específicos para PCV2, hechos que se asocian a la generación de una infección subclínica. Los resultados de este trabajo indicaron que la técnica de los microarrays es una herramienta útil para el estudio de la patogénesis de la infección por el PCV2. El segundo estudio fue dirigido a caracterizar los mecanismos moleculares de la respuesta inmune que tienen lugar en las fases temprana y tardía de la infección subclínica por PCV2. Los genes sub-expresados en las muestras de linfonodo mediastínico (LM) se relacionaron principalmente a la adhesión celular y migración, lo que sugiere la participación de esos genes en los procesos inflamatorios observados en la infección por PCV2. La inmunidad innata se desarrolló en la primera semana p.i. y se demostró por la sobre-expresión de varios genes estimulados por interferón (ISGs) entre las muestras de LM y de sangre total (ST) de los animales inoculados con PCV2. También se detectó un aumento en la expresión de genes relacionados con la activación linfocitaria en la primera semana p.i. en las muestras de LM de los cerdos infectados, lo que indica la activación temprana de la respuesta adaptativa. Se obtuvieron resultados similares en las fases tardías de la infección, dada la sobre-expresión de los genes que codifican para el interferón (IFN)-γ y para la inmunoglobulina (Ig)-G en el día 29 p.i en las muestras de LM. El tercer estudio consistió en investigar los cambios globales en el transcriptoma de animales naturalmente afectados por ES-PCV2 y congéneres sanos. Tras los análisis de datos, se encontraron 366 tránscritos con significativa abundancia diferencial en el grupo de animales afectados por ES-PCV2 en relación al grupo control. Los resultados de este estudio identificaron mecanismos (daño mediado por el complemento e inmunosupresión) potencialmente involucrados en la inflamación y depleción linfocitaria en tejidos linfoides, características histopatológicas claves de la ES-PCV2. / This PhD Thesis aimed to characterize the molecular mechanisms underlying the porcine circovirus type 2 (PCV2) infection using the microarray technology. This virus is the essential infectious agent of PCV2- systemic disease (SD), a multifactorial condition that mainly affects nursery and growing pigs, and is considered one of the most economically important pig diseases worldwide. Microarray technology allows simultaneous measurement of the mRNA levels of thousands of genes and have been used during recent years to examine gene expression profiles of tissues or cell lines subjected to infection, helping to unravel host–pathogen interactions relevant to pathogenesis of a variety of diseases. Therefore, this Thesis aimed to identify genes and biological processes implicated in the immune response of pigs subclinically infected by PCV2 and also of animals naturally affected by PCV2-SD. In the study of this Thesis, an exploratory work was conducted to evaluate the technical feasibility of utilizing the Affymetrix Porcine GeneChip® platform to study the global transcriptional profile of caesarean-derived, colostrum-deprived (CDCD) Duroc piglets experimentally infected with PCV2. The microarray analysis detected 25 and 33 significantly differentially expressed (DE) between control and PCV2 groups for mesenteric lymph node and lung, respectively. Most up-regulated genes in PCV2 group were closely related to the immune response. From a transcriptional point of view, PCV2-inoculated pigs were able to activate a cell-mediated response and develop PCV2-specific antibodies, which probably led to a subclinical infection. The results from this study also indicate that a microarray-based approach is a helpful tool to better understand the pathogenesis of PCV2 infection. The second study was aimed to characterize the early and late molecular events underlying the immune response taking place during a subclinical PCV2 infection. Down-regulated genes from mediatinal lymph nodes (MLN) samples were mainly related to cell adhesion and migration, suggesting the participation of these genes in the inflammatory processes (granulomatous infiltration) observed in the PCV2 infection. Innate immunity developed within the first week post-infection (p.i.) and it was demonstrated by the up-regulation of several interferon-stimulated genes (ISGs) both in MLN and whole blood (LWB) samples from PCV2-infected pigs. An increased expression of genes related to lymphocyte activation was also detected during the first week p.i. in LWB samples of infected animals, indicating an early activation of adaptive responses. Similar results were obtained at late stages of infection by the up-regulation of genes coding for interferon (IFN)-γ and the immunoglobulin (Ig)-G at 29 days p.i. in MLN samples. The aim of the third study was to investigate the global transcriptional profile of MLNs from pigs naturally affected by PCV2-SD, as well as healthy counterparts. The microarray data analysis detected 366 transcripts with significant differential abundance in the PCV2-SD group of pigs relative to healthy animals. Results from this study identified potential mechanisms (complement mediated damage and immunosuppression) underlying the inflammation and lymphocyte depletion in lymphoid tissues, which are key features of PCV2-SD.

El término diferencias individuales se refiere a las diferencias en respuestas conductuales que son consistentes a lo largo del tiempo y entre contextos. Su estudio intenta identificar estas diferencias y explicar los factores que predisponen a los individuos de una determinada especie a responder de una manera determinada. El presente trabajo tuvo como objetivos principales: caracterizar las diferencias individuales en conducta agresiva del perro mediante el cuestionario C-BARQ®; valorar el efecto de la manipulación neonatal, la edad y la camada sobre diferencias individuales en la respuesta fisiológica de estrés en cachorros; identificar diferencias individuales en la respuesta conductual de estrés en cachorros y valorar el efecto de la manipulación neonatal sobre esas diferencias y, por último, evaluar las características de la agresividad del perro hacia personas de la familia y los factores causales que podrían contribuir a las diferencias individuales en la expresión de dicha conducta. Para lograr el primer objetivo, se analizaron las correlaciones entre la conducta agresiva y otros factores del CBARQ®. Así, se sugiriere una posible relación entre la conducta agresiva hacia los propietarios y la ansiedad. Por otro lado, la conducta agresiva hacia personas desconocidas se encontró relacionada con el miedo. Además, se observó una correlación entre la conducta depredadora y la agresividad hacia personas y perros desconocidos. Para lograr el segundo y tercer objetivo, diferentes camadas de cachorros fueron sometidas a un tratamiento de manipulación durante la vida neonatal. Para evaluar posibles diferencias entre cachorros manipulados y no manipulados, se evaluó la respuesta de estrés de los cachorros mediante un test de Open Field. No se observaron diferencias entre cachorros manipulados y no manipulados en las variables fisiológicas cortisol, temperatura rectal y serotonina ni en las diferencias individuales en conducta. Sí se observaron diferencias significativas entre camadas. Además, se observó una declinación de concentración de serotonina sérica con la edad. El cuarto objetivo se logró mediante la comparación de casos clínicos de perros con agresividad hacia personas de la familia y casos control. Se observó que los perros adoptados después de las 12 semanas de vida eran menos agresivos hacia personas de la familia que los perros adoptados antes de esa edad. También se encontró que los perros cuyos dueños compartían comida de la mesa eran más agresivos. Además, se comprobó que los procesos patológicos que causan dolor no solo aumentan el riesgo de que el perro muestre comportamiento agresivo hacia sus propietarios, sino que también aumentan el riesgo de que el animal reduzca o elimine las señales de aviso antes del episodio de agresividad. / The term individual differences refers to the differences in behavioral responses that are consistent over time and between contexts. Its study attempts to identify these differences and explain the factors that predisposed the individuals of a particular species to respond in a specific way. The aims of the present work were: to identify behavioral characteristics related to aggression through a correlation analysis of the C-BARQ’s factors; to evaluate the effect of neonatal handling, the age and litter on the individual differences in the physiological response to stress in puppies; to identify individual differences in the behavioral response to stress in puppies and to evaluate and investigate the main features of cases of canine aggression towards family members in a referral practice and to determine the causal factors related to this problem. In order to reach the first objective we analyzed the correlations between the behavioural characteristics related to aggression and other C-BARQ’s factors. A possible relation between canine aggression towards the family members and anxiety was suggested. Also, aggression towards unknown people was found to be correlated to fear. In addition, we observed a correlation between predatory behavior and aggression towards unknown people and dogs. To attain the second and third objectives, we used different litters of puppies. Each puppy was randomly assigned to one of three experimental groups: control group (non-handled), handled once a day and handled three times a day. Handling was performed from the 3rd until the 21st day of life. To evaluate the possible differences between handled and non handled animals, we evaluate the stress response by means of an Open Field Test. No differences were found between handled and non handled puppies neither in the physiological variables cortisol, rectal temperature and serum serotonin nor in the behavioral variables. We did find differences between litters in the physiological variables and individual differences in behavior. Also, serum serotonin was found to decline with age. The fourth objective was achieved by comparing clinical cases of dogs presenting aggression towards family members with control cases. We found that dogs adopted after 12 weeks of age presented a lower risk of being aggressive towards household members. Being fed from the table was also considered as a potential causal factor of dogs showing aggression towards family members. In addition, we observed that dogs presenting an underlying painful condition had a higher risk of being aggressive towards family members and were more likely to be impulsive during the aggressive events.

Los sistemas SPECT de animal pequeño alcanzan una resolución espacial inferior al milímetro. Para conseguirlo, es necesario utilizar colimadores pinhole, ya que la imagen del objeto proyectada en la gammacámara a través del pequeño orificio del colimador puede estar ampliada respecto al objeto. Con el fin de optimizar el proceso de reconstrucción y obtener resoluciones submilimétricas utilizando equipos de pequeño formato equipados con un colimador pinhole, es necesario utilizar métodos de reconstrucción iterativos. Estos algoritmos ofrecen una calidad de imagen superior y una mejor exactitud en la cuantificación que los métodos de reconstrucción analíticos, al poder corregir las diferentes degradaciones sufridas en el proceso de formación de la imagen. A continuación se detalla el trabajo desarrollado y los principales resultados obtenidos para conseguir este objetivo: 1. Implementación de un programa de calibración para calcular los parámetros geométricos que describen la adquisición de un equipo SPECT equipado con colimador pinhole. 2. Desarrollo de un algoritmo de reconstrucción iterativa OSEM para la reconstrucción de estudios SPECT con colimador pinhole. 3. Adaptación el algoritmo de reconstrucción y el programa de calibración a un equipo SPECT con colimador pinhole de pequeño formato desarrollado en nuestro centro. La resolución tomográfica del equipo fue de 1 mm para radios de adquisición pequeños. Las imágenes reconstruidas de estudios en ratones muestran la viabilidad del equipo para su utilización con pequeños animales. 4. Incorporación en la matriz de transición del sistema la geometría del sistema, la penetración septal a través del colimador y la respuesta del detector. La resolución, el contraste y los coeficientes de recuperación mejoran al incorporar la penetración septal respecto a la modelización geométrica, aunque la mejora más importante se obtuvo al incluir la respuesta del detector. El número de iteraciones utilizadas en la reconstrucción debe limitarse para evitar la aparición de artefactos de anillo. Estos artefactos son de mayor importancia cuando la modelización del sistema incorpora la geometría, la penetración septal y la respuesta del detector. 5. Comparación del algoritmo de reconstrucción desarrollado con un algoritmo de reconstrucción que calcula la matriz de transición con técnicas de Monte Carlo. El tiempo de cálculo de la matriz de transición del sistema con la aproximación analítica fue tres órdenes de magnitud inferior al de la aproximación por Monte Carlo. La resolución y el contraste de las imágenes reconstruidas mediante ambas aproximaciones fueron similares. Las imágenes reconstruidas con el modelo Monte Carlo presentaban una relación señal/ruido sensiblemente más baja, posiblemente asociada a problemas de precisión en el cálculo de los elementos de matriz por la utilización de un número insuficiente de historias de fotones en el cálculo. / Small animal SPECT systems can achieve a spatial resolution of less than 1 mm. Such resolution is possible thanks to pinhole collimators, which can amplify the gamma camera projection of the object, and by using iterative reconstruction methods. These methods improve image quality and offer better quantification accuracy than analytic reconstruction methods, by correcting the different degradations that occur during the image formation process. The work developed and the main results are detailed as follows: 1. A calibration program to calculate geometric parameters that describe the acquisition process of a SPECT system with a pinhole collimator was implemented. 2. An OSEM iterative reconstruction algorithm for SPECT studies acquired with a pinhole collimator was developed. 3. The reconstruction algorithm and the calibration program were adapted to an in-house developed small SPECT device with a pinhole collimator. Tomographic resolution was 1 mm for small acquisition radii. Image reconstruction of mice studies showed the viability of using the equipment with small animals. 4. System geometry, septal penetration through the collimator and detector were incorporated response to the transition matrix. In the first approach, the system geometry was incorporated. Resolution, contrast, and recovery coefficients improved when septal penetration was modeled, although the greatest improvement was obtained when detector response was included. Iterations had to be limited to avoid the appearance of ring-artifacts. 5. The reconstruction algorithm developed (analytical model) was compared with a reconstruction algorithm which calculates the transition matrix based on Monte Carlo techniques (Monte Carlo model). The computation time of the transition matrix system using the analytical approach was three orders of magnitude lower than the Monte Carlo approach. Resolution and contrast of the reconstructed images using the two approaches were similar. Images reconstructed with the Monte Carlo model presented a lower signal-to-noise ratio than images reconstructed with the analytical model, possibly due to accuracy problems associated with the matrix elements because of an insufficient number of photons in the calculation.

La tesis aborda el proceso migratorio como fuente potencial de estrés y, por tanto, de desajuste de la salud psicológica de las personas migrantes, analizando el papel de distintas variables —valoración cognitiva, discriminación, sentido de control, estrategias de afrontamiento, entre otras — que estarían influyendo en la relación entre proceso migratorio y salud mental. Basada principalmente en el modelo cognitivo-transaccional del estrés de Lazarus y Folkman (1986) y el modelo explicativo de Moos (1984), la tesis se enmarca dentro de la perspectiva transnacional de la migración, atendiendo a las investigaciones que señalan a la comunidad de migrantes peruanos en Santiago de Chile como una comunidad que mantiene fuertes vínculos con Perú (Núñez y Stefoni, 2004), a partir de la constitución de la familia, el envío de remesas y el uso de las redes sociales existentes (Stefoni, 2005), y debido a la falta de recursos económicos y a las condiciones de exclusión o segregación social que sufre la comunidad (Stefoni, 2007). La muestra está compuesta por 355 migrantes peruanos de entre 18 y 58 años (Medad = 35.07 años, DT = 9.72) ubicados en la ciudad de Santiago de Chile. La distribución por sexo responde a 132 hombres y 223 mujeres. El tiempo de estadía en Chile varía entre 3 meses y 16 años (M= 40.58 meses, DT = 40.75). El 52.8% de la muestra son solteros, 41.4% casados o convivientes, el 5.2 % son separados y el 0.6 % viudos. De las personas casadas o con pareja estable, 56.6% tiene la pareja en Perú y 32.9% en Chile. Primeramente se analizaron los estresores o problemas narrados por los migrantes atendiendo al tipo de problema, contenido, ubicación, participantes y nacionalidad de los mismos. Se evaluaron diferentes V.I. a través de distintos cuestionarios o escalas: a) Discriminación Personal (Escala de Discriminación personal percibida, Basabe, Zoblina y Páez, 2004); b) Discriminación Grupal (Escala de Discriminación grupal percibida, Navas et al., 2004); c) Sensación de control (a partir de la pregunta de la Encuesta Mundial de Valores- WVS, Inglehart, 1998); d) Estrés Percibido (Perceived Stress Questionnaire, Levenstein et al., 1993); e) Estrategias de afrontamiento (Cuestionario de Respuestas de afrontamiento-CRI, Moos, 1993); f) Estrategias de aculturación generales (Escala de Orientación hacia país de origen y acogida, Basabe, Zoblina y Páez, 2004) y g) Actitudes y estrategias de Aculturación (Escala de Actitudes y Estrategias de Aculturación, Navas et al., 2004). La V.D. salud mental se ha evaluado a través del Talbieh Brief Distress Inventory (Ritsner, Ravinowitz y Sluzberg, 1995). Los estresores que las personas migrantes afrontan una vez en la sociedad de llegada tienen que ver con problemas vinculados a la economía y condiciones laborales (41.3%): falta de trabajo, inestabilidad laboral, maltrato laboral; problemas o dificultades en las relaciones de proximidad (36.5%): separación de la familia de origen o problemas de pareja; temas asociados a la salud (11.5%); y aspectos psicosociales (10.7%): discriminación. Diferentes participantes han sido identificados en los problemas narrados: el propio sujeto (34.5%), núcleo familiar (24.5%), empleador/familia del empleador (12.7%); pareja (8.8%). En cuanto a la ubicación de los problemas, el 69.6% se situaban en Chile, el 12.3% en Perú y el 17.8% tanto en Perú como en Chile. La valoración cognitiva no diferencia en función de los distintos contenidos de los problemas, los cuales se constituyen como situaciones nuevas, para las que las personas migrantes no cuentan con experiencia, no predecibles, inminentes, para las que no se ha tenido tiempo de prepararse y no causadas por el propio sujeto. Atendido el estresor discriminación, las y los peruanos migrantes perciben mayor discriminación dirigida a su grupo, como un todo, que a ellos personalmente. A pesar de que se aprecia en menor grado, la discriminación personal es la que se relaciona con la respuesta sintomatológica (sensitividad, depresión y ansiedad). Las personas que reportan problemas vinculados específicamente con la discriminación presentan, en mayor media, estrategias de afrontamiento evitativas a nivel cognitivo. Además, se demuestra el papel mediador parcial de las estrategias de evitación cognitivas en la relación estrés-salud mental en las persona migrantes. Al aumentar el estrés pre o post-migratorio se movilizan estrategias de evitación cognitivas, las cuales añaden sus efectos negativos al del estrés percibido incrementando aun más la posibilidad de consecuencias negativas para la salud mental. / Stress has been often linked to the immigration process, and, in turn, the stress has been associated with the risk of developing mental health problems, such as depression, anxiety or psychosomatic problems. The thesis "The new migration typologies and their relation with the migrants’ mental health” addresses the migration process as a potential source of stress and, therefore, as an imbalance of psychological health of migrants. The thesis analyzes the role of different variables - cognitive appraisal, discrimination, sense of control, coping strategies, acculturation strategies and attitudes, among others - that can influence the relationship between mental health and migration process. Mainly based on the cognitive-transactional stress model of Lazarus and Folkman (1986) and the explanatory model of Moos (1984), the thesis is framed within the transnational perspective on migration, based on the research that points that the community of Peruvian migrants in Chile is a community that maintains strong ties with Peru. The thesis identifies the different stressors that are faced by the Peruvian migrants in Santiago, their consequences on the mental health and the variables that could be influencing this relation. Despite the relevant results founded in this thesis, further studies are needed to confirm the role of these variables on the relation between migratory stressors and mental health.

PART 1. EFECTE DE LA HIPÒXIA I FACTORS POINFLAMATORIS SOBRE EL REMODELAT CARDÍAC EN CARDIOMIÒCITS VENTRICULARS HUMANS. INTRODUCCIÓ. Els mecanismes moleculars pels quals la isquèmia miocardíaca es tradueix en remodelat ventricular i insuficiència cardíaca són poc coneguts. HIPÒTESI. La hipòxia i factors proinflamatoris són inductors específics de recanvi de matriu extracel•lular en els cardiomiòcits humans. MÈTODES. Cardiomiòcits ventriculars humans adults (cèl•lules AC16) van ser incubats en condicions de tensió reduïda d’oxigen, CoCl2 (activador del factor de transcripció induïble per hipòxia 1, HIF-1), rotenona (inhibidor de HIF-1), TNFα, IL1β, LPS o vehicle durant intervals de temps variables. Un cop completats els períodes d’incubació, van obtenir-se els sobrenadants i el RNA cel•lulars per determinar la secreció cel•lular i l’expressió gènica de factors relacionats amb el recanvi de matriu extracel•lular. RESULTATS. La hipòxia indueix la producció de PIIINP (propèptid aminoterminal del del procolàgen tipus III) i inhibeix la síntesi i producció de TIMP1 (inhibidor tissular de metaloproteinases tipus 1) en els cardiomiòcits. La IL1β estimula la producció de PIIINP, TIMP1 i àcid hialurònic en cardiomiòcits. CONCLUSIÓ. La hipòxia i la IL1β activen el remodelat de matriu extracel•lular en cardiomiòcits ventriculars humans. Els resultats suggereixen que la hipòxia i la IL1-β són factors contribuents a la dilatació ventricular i insuficiència cardíaca en la malaltia cardíaca isquèmica. PART 2. EFECTE DE LA HIPÒXIA SOBRE LA SECRECIÓ DEL PÈPTID NATRIURÈTIC TIPUS B (BNP) EN CARDIOMIÒCITS VENTRICULARS HUMANS. INTRODUCCIÓ. El principal estímul per la síntesi i secreció de BNP es la distensió de la paret cardíaca. Evidències recents suggereixen que la isquèmia cardíaca pot induir també la producció de BNP. HIPÒTESI. La tensió reduïda d’oxigen estimula directament l’expressió gènica i la secreció de BNP en cardiomiòcits ventriculars humans en absència d’estímuls hemodinàmics o neurohormonals. MÈTODES. Cardiomiòcits ventriculars adults (cèl•lules AC16) van ser incubats en condiciones normòxiques o hipòxiques amb o sense la presència de rotenona. L’acumulació de BNP, ANP i VEGF es va mesurar en els sobrenadants cel•lulars. L’expressió gènica d’aquests factors va determinar-se mitjançant PCR a temps real. L’activitat transcripcional de HIF-1 va determinar-se en extractes nuclears cel•lulars mitjançant un enziminmunoassaig lligat a la seqüència d’unió de HIF-1 al DNA. RESULTATS. L’activitat transcripcional de HIF-1 va induir-se en condicions hipòxiques. La hipòxia va estimular la secreció i l’expressió gènica de BNP i VEGF però no d’ANP en els cardiomiòcits. La inhibició de HIF-1 en condicions hipòxiques va disminuir la secreció de BNP i VEGF. CONCLUSIONS. La hipòxia indueix la síntesi i secreció de BNP en cardiomiòcits ventriculars humans a través d’un mecanisme depenent de l’activació transcripcional de HIF-1. PART 3. ESTUDI DE LA SIGNIFICACIÓ CLÍNICA DE LES CONCENTRACIONS PLASMÀTIQUES DE BNP A L’INGRÉS EN PACIENTS AMB SÍNDROME CORONÀRIA AGUDA (SCA). INTRODUCCIÓ. Els pacients SCA presenten concentracions plasmàtiques elevades de BNP atribuïdes a la distensió de la paret ventricular. Existeix poca informació sobre el valor clínic d’aquest marcador cardíac en pacients amb SCA i fracció d’ejecció ventricular esquerra (LVEF) preservada. La demostració que la hipòxia estimula directament la secreció de BNP en cardiomiòcits ventriculars permet formular la hipòtesi que els pacients amb SCA sense insuficiència cardíaca i/o disfunció ventricular presenten concentracions plasmàtiques de BNP elevades, en relació al grau d’hipòxia cel•lular. Mètodes. L’estudi es va realitzar en 1806 pacients amb SCA ingressats de forma consecutiva dins les primeres 24 hores posteriors a l’inici dels símptomes. Es va realitzar un seguiment durant un any de l’aparició d’esdeveniments adversos. RESULTATS. La concentració plasmàtica de BNP en els pacients amb SCA i LVEF preservada va ser superior a l’observada en un grup control d’individus sans. Durant el seguiment, l’aparició d’esdeveniments adversos va ser del 10,0% en els pacients amb LVEF reduïda i del 7,9% en els pacients amb LVEF preservada. Els pacients amb BNP>150 pg/ml van presentar una major probabilitat d’esdeveniments adversos. L’anàlisi estadístic multivariat mostra que la contribució de BNP en la predicció d’esdeveniments adversos es manté desprès d’ajustar en funció de la LVEF. CONCLUSIONS. Els pacients amb SCA i LVEF preservada presenten concentracions plasmàtiques de BNP elevades a l’ingrès, que constitueixen un factor predictor independent de presentar nous episodis de SCA i/o mortalitat. / MOLECULAR MECHANISMS OF MYOCARDIAL SECRETION: VENTRICULAR REMODELING AND SECRETION OF B-TYPE NATRIURETIC PEPTIDE. The molecular mechanisms by which myocardial ischemia translates in ventricular remodeling and heart failure remain unclear. In the current thesis it was explored whether hypoxia and proinflammatory factors are specific inducers of matrix remodeling in cardiomyocytes. Adult human ventricular cardiomyocytes (AC16 cells) were incubated at normoxic or hypoxic conditions and stimulated with proinflammatory factors. Matrix remodeling and cellular secretion and gene expression of matrix remodeling factors were analyzed. Results show that hypoxia activates matrix remodeling and induces the production of PIIINP (procollagen III N-terminal propeptide) and inhibits the production of TIMP-1 (tissue inhibitor of metalloproteinase 1). IL1β stimulated the cardiac production of PIIINP, TIMP1 and hyaluronic acid. Results suggest that hypoxia and IL1β may contribute to ventricular dilation and heart failure in ischemic heart diseases. The effect of hypoxia on the cardiac secretion of B-type natriuretic peptid (BNP) was also evaluated. Hypoxia stimulated the protein release and mRNA levels of BNP and VEGF but not ANP in AC16 cells. The analysis of the transcriptional activity of the hypoxia-inducible factor 1 (HIF-1) in nuclear extracts showed that HIF-1 activity was induced under hypoxic conditions. The treatment of AC16 cells with the HIF-1 inhibitor rotenone in hypoxia inhibited BNP and VEGF release. In conclusion, data indicate that hypoxia induces the synthesis and secretion of BNP in human ventricular myocytes, likely through HIF-1-enhanced transcriptional activity. This observed direct effect of hypoxia on BNP secretion in human ventricular myocytes allowed hypothesizing that patients with acute coronary syndromes (ACS) without ventricular dysfunction or heart failure present high plasma levels of BNP related with their degree of cardiac hypoxia. Thus, prognostic significance of BNP plasma levels was evaluated in a cohort of 1806 consecutive patients with ACS admitted within the first 24 hours after the onset of symptoms. The follow up for adverse events was of one year. Plasma levels of BNP in ACS patients with preserved left ventricular ejection fraction (LVEF) were higher than in the control group without ACS. During follow-up, adverse events was 10.0 % in patients with reduced LVEF and 7.9 % in patients with preserved LVEF. Patients with BNP>150 pg/ml presented significantly higher probability of adverse events during follow up. Results show that ACS patients with preserved LVEF present higher BNP levels at admission, which constitute an independent predictor of presenting new ACS and mortality.

Reproducció digital de la còpia impresa dipositada a la Biblioteca de la Facultat de Medicina, amb l'autorització de l'hereva legal de l'autor. / Extractos de la Introducción de la tesis: El concepto de peligrosidad es en esencia jurídico y se debe a la Escuela Positivista italiana. El considerar al delincuenta como una personalidad en la cual el delito es fatal, es decir, no elegido libremente, ya sea por factores constitucionales o por factores sociales, lleva implícita la idea de que no es justo que tal persona tenga que cargar con una pena. (…) Pero la sociedad tiene el deber de defenderse de los criminales y para ello esta Escuela valora la peligrosidad. El individuo no es imputable, no es responsable, pero es peligroso y como tal la sociedad lo aparta de su seno y lo recluye en establecimiento adecuado hasta tanto haya desaparecido la peligrosidad. Fue el paso del derecho punitivo al preventivo. La sociedad no castiga, se previene, y en vez de imponer una pena, señala las llamadas “medidas de seguridad”. (…)En nuestro país la idea de la defensa social tomó cuerpo legal en la Ley de 4 de agosto de 1933, conocida con el nombre de Ley de Vagos y Maleantes. Esta Ley es un cuerpo legal defensivo en el cual se hizo realidad la doctrina del estado peligroso. (…) Esta progresiva tipificación de conductas por Ley amplia y extiende la aplicación de medidas de seguridad sobre los componentes de la sociedad, que por su conducta asocial o antisocial se hacen merecedores de ellas, y demuestra cómo a medida que acanza el progreso social la comunidad se defiende apartando de sí a un mayor número de indivíduos cuyo comportamiento se hace intolerables, conductas que, por otro lado, no pueden ser tipificadas como delito en el Código Penal. (…) La aplicación de estas medidas requiere un estudio cuidadoso y atento de la persona y de su conducta, y ello obliga a quienes hayan de actuar en esa aplicación, además de sentir el estímulo de la vocación, no distraigan su atención profesional en otras actividades que puedan desviarla de ésta. Inspirada en este mismo pensamiento, la Ley antes citada admite la posibilidad de encomendar esta función a Jueces especiales. La puesta en marcha de estos Juzgados especiales llevó consigo la aplicación más perfecta de la Ley, pero también la más frecuente expedientación de delincuentes habituales (…) La extraordinaria labor que tal número de expedientes requiere desde el aspecto médico, ya que cada inculpado debe ser reconocido por el Médico Forense, llevó asimismo a la autoridad competente a la convicción de la necesidad de nombrar Médicos Forenses que dedicaran su función exclusivamente a estos Juzgados (…) La función del Médico Forense en estos Juzgados especiales es extensa y varia, puesto que por una parte deberá hacer, en muchos casos, el diagnóstico de certeza cuando una calificación entrañe un diagnóstico médico, y por otra parte deberá (…) señalar si existen en el sujeto reconocido estigmas profesionales (…) Es por ello que hemos creído de interés el estudiar una sistemática, mediante la cual el Médico Forense pueda deducir de una manera lo más objetiva posible, la peligrosidad potencial de una persona, por medio de la valoración de un índice de peligrosidad social y de un índice de peligrosidad criminal.

Interpersonal victimization is widely acknowledged to be a significant stressor and psychologically damaging factor for both children and adolescents. Despite the large number of studies that report a clear association between specific kinds of victimization and psychiatric disorders, little research to date has accounted for the full spectrum of victimization to which adolescents can be exposed. The current thesis aims to analyse the mental health aftermath of victimization, taking into account the wide range of victimizations to which adolescents are exposed, and highlighting the higher vulnerability of those who can be considered “poly-victims”. It also aims to study the role that variables like self-esteem may play in buffering the negative effects of victimization. This thesis is based on four studies (Soler, Paretilla, Kirchner, & Forns, 2012; Soler, Kirchner, Paretilla & Forns, 2013; Soler, Segura, Kirchner, & Forns, 2013; Soler, Forns, Kirchner, & Segura, 2014). Overall, the results highlight the high burden of victimization to which Spanish adolescents are exposed, and show that youth rarely suffer single victimizing events but are more likely to endure rather multiple victimization experiences. Similarly, very few adolescents reported victimization in only one area (e.g., only sexual victimization); rather, they tend to report a combination of different areas. Moreover, it was found that the impact of individual areas of victimization on mental health tends to decrease and even become irrelevant when the combination of different areas is taken into account, showing that it is probably the combination of victimization areas, and not single areas, that is truly important for adolescents’ mental health. Overall, girls at adolescent ages showed higher psychological distress than boys. Moreover, although in general boys and girls reported equivalent amounts of victimization (i.e., total kinds of victimization), girls reported twice as much child maltreatment and sexual victimization as boys. Boys and girls in the poly-victim condition were the ones that reported the most psychopathological symptoms (e.g., PTSS, suicidal behaviours) and lower self-esteem, highlighting the cumulative effect of increasing stressors (Cloitre et al., 2009). A gender-specific psychopathologic response linked to the cumulative pattern of interpersonal victimization was found, with boys showing increased distress in the poly-victim condition and girls showing increased distress even in mild levels of victimization. This signals that victimization may play an important role in producing the gender differences in mental health that are found in the general population, and highlights females’ greater vulnerability to victimization. Experiencing multiple kinds of victimization or poly-victimization was found to affect adolescents’ self-evaluation as worthy social beings (i.e., self-liking), but it did not seem to make them question their self-efficacy (i.e., self-competence). Also, self-liking was found to be a partial mediator of the relationship between victimization and certain mental health variables (e.g., internalizing symptoms) in both boys and girls, whereas self-competence was found to be a mediator of this relationship only in girls. These findings may be of help to clinicians and health practitioners since they suggest that working on adolescents’ sense of personal value (self-liking) and girls’ sense of ability to meet personal goals (self-competence) may help them to build up resilience in the face of adversity. / La victimización interpersonal ha sido ampliamente considerada una importante fuente de estrés y de malestar psicológico tanto para niños como para adolescentes. A pesar de que la literatura contiene numerosos estudios que demuestran una clara asociación entre distintos tipos de victimización y algunos trastornos psiquiátricos, pocos son los que han tenido en cuenta el amplio abanico de victimizaciones al que niños y adolescentes pueden verse expuestos. La presente tesis pretende analizar las consecuencias del sufrimiento de victimización interpersonal en términos de salud mental, tomando en cuenta el amplio abanico de victimización al que los adolescentes pueden verse expuestos y subrayando la mayor vulnerabilidad de aquellos considerados poli-víctimas. En general, los resultados subrayan la importante carga de victimización a la que los adolescentes españoles se ven sometidos y muestran que rara vez los jóvenes experimentan un único episodio de victimización de forma aislada. Las chicas adolescentes presentaron más malestar psicológico que los chicos y el doble de maltrato infantil y de victimización sexual. Los adolescentes en la condición de poli-víctimas fueron los que presentaron más síntomas psicopatológicos y menos autoestima. En este sentido, se encontró que la respuesta psicológica vinculada al patrón acumulativo de victimización interpersonal es diferente según el género. Mientras que los chicos mostraron significativamente más malestar únicamente en la condición de poli-victimas, las chicas lo mostraron incluso en la condición de víctimas. Esto subraya la mayor vulnerabilidad de las chicas ante la victimización e indica que ésta puede estar jugando un papel importante sobre las diferencias de género que se encuentran en la población general a nivel de salud mental. Por último, los resultados mostraron que el hecho de experimentar múltiples tipos de victimización o poli-victimización afecta más la autovaloración que los adolescentes hacen de su propia valía como seres sociales (self-liking) que su percepción de auto-eficacia (self-competence). Los resultados de la presente tesis pueden ser útiles para clínicos y otros profesionales de la salud mental ya que, por un lado, subrayan la importancia de considerar los distintos tipos de victimización a los que los adolescentes se ven expuestos, y por el otro, indican que para ayudar a los adolescentes a desarrollar resiliencia frente a la adversidad sería recomendable trabajar principalmente la visión que tienen sobre su propia valía (self-liking).

La soca de ratolins amb senescència accelerada SAMP8 és utilitzada habitualment com a model de senescència; i el seu ús per a l’estudi de la malaltia d’Alzheimer s’ha estès degut a la manifestació espontània dels seus trets histopatològics distintius. En estudis recents es va identificar la presència de grànuls amiloides a l’hipocamp dels ratolins SAMP8. Aquests clústers de grànuls augmenten amb l’edat i s’estenen al llarg de l’hipocamp. A més a més, les característiques morfològiques dels grànuls amiloides són molt similars als grànuls tenyits amb Periodic Acid Schiff (PAS), descrits anteriorment en els SAMP8 i en ratolins envellits d’altres soques. L’objectiu principal d’aquesta tesi ha estat estudiar la composició, l’origen i el desenvolupament dels grànuls que apareixen amb l’edat a l’hipocamp dels ratolins senescents SAMP8 amb la finalitat d’aportar nova informació sobre la neuropatologia d’aquests ratolins per al seu ús com a model de la malaltia d’Alzheimer. En aquest treball s’ha identificat la correspondència entre els grànuls amiloides i els grànuls PAS de l’hipocamp d’aquests animals. Aquests grànuls són el resultat d’un procés degeneratiu present en els astròcits i que pot afectar també zones properes, i estan formats per fragments membranosos provinents de l’acumulació de restes d’estructures i orgànuls, com els mitocondris. A més a més, s’ha identificat la presència d’un neo-epítop en el nucli dels grànuls que és, almenys parcialment, de naturalesa glucídica. Aquest neo-epítop és reconegut per anticossos IgM contaminants presents en anticossos comercials produïts en ascites de ratolí o sèrum de ratolí i conill. Aquestes IgM contaminants són probablement anticossos naturals, i algunes IgM hemaglutinen de forma positiva i específica els eritròcits humans de tipus A. La presència tant del neo-epítop com de les IgMs han estat la causa de falses tincions positives que han generat interpretacions errònies del significat fisiopatològic dels grànuls. És el cas, per exemple, de la presència de β-amiloide o la proteïna tau en aquestes estructures. Finalment, les lesions cerebrals de pacients associades a malalties neurodegeneratives i a l’envelliment no corresponen als clústers de grànuls de l’hipocamp d’aquests ratolins, tot i que seria interessant estudiar la presència del neo-epítop en aquestes condicions fisiopatològiques. / SAMP8 mice present an accelerated senescence and are usually used as a model of aging. Because this strain of mice spontaneously expresses several histopathological features of Alzheimer’s disease (AD), it has been recently used as a model for studying this disease. Alterations in the expression of β-amyloid (Aβ) peptides, tau hyperphosphorilation, an increase of oxidative stress and gliosis suggest that SAMP8 mice could be a relevant model for studying the first stages of sporadic AD and its relation to aging. Recent studies in our group identified the presence of Aβ clustered granules in the hippocampus of SAMP8 mice when immunohistochemical stainings were performed with antibodies directed against Aβ peptides. These clustered granules increase in number and extension with age, and they spread throughout the hippocampus. The features of Aβ clustered granules are very similar to the granules stained with Periodic Acid Schiff (PAS) already described in SAMP8 mice, as well as in aged mice of other strains. On the other hand, human brain lesions present in aging and other neurodegenerative diseases, such as AD, may vary their chemical composition with time, suffering substantial alterations in the principal components and the addition of secondary components. The main objective of this thesis is to study the composition, origin and development of the granules that appear with age in the hippocampus of SAMP8 mice, with the aim of further describing the neuropathology of these animals and provide new information for using them as a murine model of AD. Therefore, in this thesis we studied the composition and order of appearance of the constituents of the hippocampal granules of SAMP8 mice, and the possible coincidence between Aβ and PAS granules. The morphology, ultrastructure, cellular origin and formation process of these structures has been also ascertained; and a comparison between these structures and human brain lesions of neurodegenerative diseases have been performed. The results obtained in this thesis allowed reaching several conclusions. The pathological clustered granules of the hippocampus of aged SAMP8 mice correspond to the PAS granules described in aged mice of several mouse strains. These granules are the result of a degenerative process located in astrocytes that could affect the surrounding neuropil. In the granules formation process, several abnormal membranous structures and cellular organelles, like mitochondria, produce membranous waste that finally accummulates forming the core of the granules. On the other hand, a neo-epitope absent before the granules formation appears in the membranous residues. This neo-epitope is located in the nucleus of the mature granules and contains at least some structures of glycosidic nature. The neo-epitope is recognized by contaminant IgM antibodies present in a wide range of commercial antibodies produced in mouse ascites or mouse and rabbit sera, which are probably natural antibodies, and some of these IgMs haemmagglutinate A-type human erythrocytes, but not B and O subtypes. The neo-epitope could be considered an A-like epitope because monoclonal antibodies anti-A-type human erythrocytes do not recognize it. Both the neo-epitope presence in the granular structures and the IgMs contained in commercial antibodies have been the cause of false-positive stainings, and as a result, they have generated misunderstandings about the composition and physiopathological significance of the hippocampal granules of aged mice, as is the case of Aβ peptides and tau protein, which are not contained in these granules. Finally, human brain lesions described to date in patients of neurodegenerative diseases or aged individuals do not correspond to the clustered pathological granules present in the hippocampus of aged mice. The study of the presence of the neo-epitope in diseased human brain could be interesting in the understanding of the neuropathology of aging and neurodegenerative diseases.

Als darrers anys, la qüestió del talent ha estat molt present en organitzacions i empreses. La literatura consultada suggereix que els professionals considerats com a talent son essencials per a que una empresa aconsegueixi diferenciar-se dels seus competidors. L’objectiu d’aquesta investigació ha estat desenvolupar un model d’identificació de talent als equips de vendes d’empreses del sector d’alimentació, identificar el talent que disposen aquestes organitzacions i conèixer la seva relació amb els resultats de les empreses a les que hi treballen. Per a això, s’han definit els factors que ajuden a identificar el talent i s’ha desenvolupat un qüestionari per a mesurar-ho. El qüestionari ha estat administrat als professionals de vendes de les organitzacions mitjançant els directors de vendes, sota la supervisió dels directors de recursos humans i l’investigador. Un cop recollides les dades de 378 professionals de l’àrea de vendes, s’ha realitzat l’anàlisi corresponent. Els resultats mostren que els professionals de vendes considerats com a talent, asseguren un creixement sostingut de les empreses analitzades. Així mateix, s’afegeixen propostes per a futures investigacions, així com les implicacions de cara a la identificació i desenvolupament d’aquests professionals per a integrar millor a les persones dins les organitzacions i per ajudar a les organitzacions a aconseguir els seus objectius a través de les persones. / En los últimos años, la cuestión del talento ha estado muy presente en organizaciones y empresas. La literatura consultada sugiere que los profesionales considerados como talento son esenciales para que una empresa logre diferenciarse de sus competidores. El objetivo de esta investigación ha sido desarrollar un modelo de identificación de talento en los equipos de ventas de empresas del sector de alimentación, identificar el talento que disponen estas organizaciones y conocer su relación con los resultados de las empresas en las que trabajan. Para ello, se han definido los factores que ayudan a identificar el talento y se ha desarrollado un cuestionario para medirlo. El cuestionario ha sido administrado a los profesionales de ventas de las organizaciones a través de los directores de ventas, bajo la supervisión de los directores de recursos humanos y el investigador. Tras recoger datos de 378 profesionales del área de ventas, se ha realizado el análisis correspondiente. Los resultados muestran que los profesionales de ventas considerados como talento aseguran un crecimiento sostenido de las empresas analizadas. Asimismo, se añaden propuestas para futuras investigaciones, así como implicaciones prácticas de cara a la identificación y desarrollo de estos profesionales para integrar mejor a las personas en las organizaciones y ayudar a las organizaciones a alcanzar sus objetivos a través de las personas. / During the latest’s year’s talent has been a focus of study in the companies. Consulted literature suggests that those professionals considered as talent are key to take an advantage against competitors. The objective of this research has been to develop a talent identification model for sales forces on food companies, identify their talent and to know its relation with their business results. To do that, we have defined the factors that detect talent among the sales force and we have developed a questionnaire to measure it. The questionnaire has been administered to the sales professionals through the sales directors, under the supervision of the human resources directors and the researcher. After analyzing 378 sales professionals, we have proceed with the corresponding analysis. The results suggest that sales professionals considered as talent ensure a sustained business growth.. Also, we add future research proposals, and practical applications for a better integration of people in the companies as well as helping companies to reach their goals through the people.