Made available in DSpace on 2017-07-25T19:29:45Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Marcos Fernando Basso.pdf: 3822084 bytes, checksum: d2aa276083a740974a36a726bdce8dad (MD5) Previous issue date: 2010-07-06 / Fundação Araucária de Apoio ao Desenvolvimento Científico e Tecnológico do Paraná / The grapevine (Vitis spp.) being vegetatively propagated facilitates the spread of viruses. In general, viruses are able to induce disorders in plant cells including photosynthesis and metabolic changes, causing alterations in grape quality. The purpose of Chapter I was to identify and molecularly characterize the viruses present in vector mealybugs in two establised vineyards (Rio Grande do Sul, Brazil), one of cv. Cabernet Sauvignon (Vitis vinifera), cultivated since 1995, and the of cv. Isabel (V. labrusca), cultivated since 1971. Plants were checked serologically for six viruses detected. Fragments that comprise complete or partial viral genes were amplified by RT-PCR using 17 pairs of specific primers for detection of the following viruses: Grapevine virus A (GVA), Grapevine virus B (GVB), Grapevine virus D (GVD), Grapevine fleck virus (GFkV), Grapevine fanleaf virus (GFLV), Arabis mosaic virus (ArMV), Grapevine chrome mosaic virus (GCMV), Rupestris stem pitting-associated virus (RSPaV) and Grapevine leafroll-associated virus 1-4 (GLRaV-1 to - 4). Degenerate primers were used for detection of Closterovirus, Trichovirus and Vitivirus genera and Betaflexiviridae family. For each primer pair at least one amplicon was cloned and sequenced, identifying seven isolates of RSPaV, three isolates of GLRaV-2 and two isolates of GLRaV-3. The obtained sequences (submitted to GenBank) showed identities higher than 90% with the homologous viral isolates from the GenBank. GVA, GVB and GLRaV-3 were detected in three of five samples of mealybugs collected in Caxias do Sul (RS) and Petrolina (PE) vineyards. High genetic variability of RSPaV and unavailability of commercial antiserum have impaired the detection of this virus in grapevines. In Chapter II the objective was to produce polyclonal antiserum against the recombinant coat protein (CP) of RSPaV. The complete CP gene of this virus was amplified, cloned, sequenced and subcloned into expression vector pRSET-B, and the recombinant plasmid was used for expression in Escherichia coli cells (strain BL21:DE3). The yield of RSPaV CP, expressed per ml of culture, was 17.35 μg for rabbit immunization 2.55 mg were used. The antiserum showed a concentration of 1939 mg IgG/ml which was able to recognize the recombinant protein in Western blot and detect RSPaV in grapevine infected tissues using the indirect ELISA technique. In Chapter III physiological alterations of plant and enological quality changes of the grapes from infected grapevines GLRaV-2 and RSPaV infected were studied. For these evaluations the photosynthetic potential, total chlorophyll (a and b), total soluble sugars and starch were determined in leaves. Healthy or asymptomatic leaves showed favourable values for almost all characteristics. The saturation photosynthesis was 2.9 (C. Franc) and 2.25 (C. Sauvignon) times higher in healthy than in infected grapevines. Considering the grape quality significant differences between grapes from infected and non-infected grapevine were also observed in five from six characteristics studied. Healthy grapes showed 17.88 (cv. C. Franc) and 16.10 (cv. C. Sauvignon) oBrix values while infected showed 15.35 and 13.38, respectively. Therefore, these viruses can damage the productivity and quality production of these grape cultivars. / A videira (Vitis spp.), por ser propagada vegetativamente, facilita a disseminação dos vírus. O objetivo do Capítulo I foi identificar e caracterizar molecularmente os vírus presentes em dois vinhedos antigos: um da cv. Cabernet Sauvignon (CS) (Vitis vinifera) de 1995 e outro da cv. Isabel (V. labrusca) de 1971 além de detectar sorologicamente tais isolados. Foram amplificados, por RT-PCR, fragmentos que compreendem genes virais completos ou parciais, utilizando-se 17 pares de oligonucleotídeos específicos para a detecção dos seguintes vírus: rapevine virus A (GVA), Grapevine virus B (GVB), Grapevine virus D (GVD), Grapevine leck virus (GFkV), Grapevine fanleaf virus (GFLV), Arabis mosaic virus (ArMV), Grapevine chrome mosaic virus (GCMV), Rupestris stem pitting-associated virus (RSPaV), Grapevine leafroll-associated virus 1 a 4 (GLRaV-1 a -4), além de oligonucleotídeos degenerados para a família Betaflexiviridae e os gêneros Closterovirus, Trichovirus e Vitivirus. Pelo menos um fragmento amplificado, para cada par de oligonucleotídeos, foi clonado e sequenciado, identificando-se sete isolados de RSPaV, três de GLRaV-2 e dois de GLRaV-3. As sequências obtidas e depositadas no GenBank apresentaram identidades superiores a 90% com os respectivos isolados virais do GenBank. Também GVA, GVB e GLRaV-3 foram detectados via RT-PCR, em três de cinco amostras de cochonilhas coletadas em vinhedos de Caxias do Sul (RS) e Petrolina (PE). A variabilidade genética do RSPaV e a indisponibilidade de antisoro comercial têm dificultado a detecção deste vírus em videiras. No Capítulo II o objetivo foi produzir anti-soro policlonal utilizando a proteína capsidial (CP) recombinante do RSPaV. O gene completo da CP deste vírus foi previamente amplificado, clonado e sequenciado e, posteriormente subclonado em vetor de expressão pRSET-B, sendo o plasmídeo recombinante utilizado para a expressão em Escherichia coli BL21:DE3. O rendimento foi de 17,35 μg de CP do RSPaV expressa por ml de cultura, sendo utilizados 2,55 mg para a imunização do coelho. O anti-soro produzido apresentou uma concentração de 1939 mg de IgG/ml, foi capaz de reconhecer a proteína recombinante em Western blot e detectar o RSPaV em tecidos infectados de videira em ELISA indireto. De forma geral, os vírus são capazes de induzir desordens na célula vegetal que incluem alterações fotossintéticas e metabólicas, refletindo na qualidade da uva. No Capítulo III estudaram-se as alterações fisiológicas e da qualidade enológica da uva produzida em videiras infectadas com os vírus GLRaV-2 e RSPaV. Foram determinados nas folhas: potencial fotossintético, clorofilas total (a e b), açúcares solúveis totais e amido. Quanto às variáveis de qualidade da uva, foram observadas diferenças significativas, em favor das uvas de plantas sadias, em 5 das 6 variáveis. Uvas sadias apresentaram 2,53 (C. Franc, CF) e 2,72 (CS) °Brix a mais do que as infectadas. Para as variáveis relacionadas às alterações fisiológicas foram observadas diferenças significativas, em favor das folhas sadias ou assintomáticas, para quase todas variáveis analisadas, sendo a fotossíntese de saturação 2,9 (CF) e 2,25 (CS) vezes superior em plantas sadias. Estes vírus podem comprometer a produtividade e a qualidade da produção destas cultivares.

Base teórica: O tratamento dos pacientes hemofílicos no Brasil apresentou avanços importantes nos últimos anos. Passamos de uma realidade de tratamento sob demanda, com quantitativos de fatores de coagulação insuficientes segundo o preconizado pela Federação Mundial de Hemofilia, para uma situação de programas de profilaxia primária, imunotolerância e fatores de coagulação recombinantes. A análise dos dados obtidos através do registro dos pacientes origina as informações imprescindíveis à concepção, gestão e avaliação de um programa público desta monta. O Ministério da Saúde, através do Perfil das Coagulopatias Hereditárias no Brasil, tem publicado de forma sistemática os resultados da compilação dos dados enviados pelos diferentes centros de tratamento do país. Nessas publicações ficam evidentes o sub-registro, ou a subavaliação, de dados clínicos imprescindíveis ao adequado tratamento destes pacientes. Objetivo: Avaliar as características epidemiológicas e clínicas dos pacientes portadores de hemofilia no estado do Rio Grande do Sul, no período de 01 de janeiro de 2003 a 31 de dezembro de 2007, uma vez que não foram encontrados estudos epidemiológicos publicados sobre a realidade nacional ou regional dos pacientes hemofílicos, anteriores ao acima descrito, em nosso país. Métodos: Este estudo avaliou de forma histórica os pacientes com diagnóstico de hemofilia no estado do Rio Grande do Sul. Foram consultados dois bancos de dados: o cadastro de portadores de coagulopatias hereditárias do Hemocentro do Estado do Rio Grande do Sul (HEMORGS), bem como seus registros de prontuário, e os arquivos do Laboratório de Hemostasia do Departamento de Genética da Universidade Federal do Rio Grande do Sul. Foram incluídos no estudo todos os pacientes cadastrados no HEMORGS até 31/12/2007 e aqueles cujo exame realizado no Laboratório de Hemostasia do Departamento de Genética da Universidade Federal do Rio Grande do Sul confirmou o diagnóstico de hemofilia e que ainda não haviam sido cadastrados. O registro constou de dados demográficos como data de nascimento, idade, raça/cor, sexo, data do diagnóstico, procedência e local de tratamento. Também foram levantados a prevalência de complicações crônicas da hemofilia como acometimento musculoesquelético, presença de inibidores e infecções relacionadas às transfusões ou infusões de fatores de coagulação e os produtos empregados na terapêutica, tais como fatores de coagulação liofilizados derivados de plasma humano e recombinantes, antifibrinolíticos, hemocomponentes e outros. Por fim, os óbitos ocorridos nos últimos cinco anos também foram analisados. Conclusão: Os recentes avanços no tratamento da hemofilia no Brasil são inegáveis. Entretanto, o impacto destes avanços na situação clínica e qualidade de vida dos pacientes hemofílicos serão de difícil avaliação, uma vez que são poucos os estudos que avaliam as condições clínicas e complicações relacionadas ao tratamento destes. Os dados obtidos através dos Perfis das Coagulopatias Hereditárias no Brasil, indicam claramente o sub-registro e a sub-avaliação nesta população de pacientes. Neste trabalho, realizamos um amplo perfil epidemiológico e clínico da população de pacientes portadores de hemofilia no estado do Rio Grande do Sul em um período não compreendido por estudos prévios. / Theoretical basis: The treatment of hemophilia patients in Brazil has made important advances in recent years. At first the treatment was on demand with insuficent clotting factors according to the World Federation of Hemophilia, than the reality changed improving considerably including primary prevention programs, immune tolerance and sufficient recombinant clotting factors. The analysis of data obtained from the patient record information are essential to the design, management and evaluation of a public health program. The Ministry of Health (MOH), through the Profile of Hereditary Coagulopathies in Brazil, has published systematically the data compilation, results reported by the country's different treatment centers. These publications demonstrate underreporting, or underdiagnosis, data essential to provide adequate treatment for these patients. Objective: To evaluate the epidemiological and clinical characteristics of patients with hemophilia in the state of Rio Grande do Sul, from January 1, 2003 to December 31, 2007, since there are no epidemiological studies on the national reality or regional of hemophiliacs, patients prior to the above, in our country. Methods: This study evaluated the medical records of patients diagnosed with hemophilia in the state of Rio Grande do Sul. Two databases were consulted: The registration of patients with hereditary the Blood Bank of the Rio Grande do Sul State coagulopathies (HEMORGS) and the Hemostasis Laboratory of the Department of Genetics of the Federal University of Rio Grande do Sul files. The study included all patients enrolled in HEMORGS until 31/12/2007 and those whose examination conducted in the Laboratory hemostasis of the Genetics Department of the Federal University of Rio Grande do Sul confirmed the diagnosis of hemophilia and who had not yet been registered. We retrieved data in regard to age, skin color, sex, date of diagnosis, origin and place of treatment, prevalence of chronic complications including musculoskeletal involvement, presence of inhibitors and infections related to transfusion or infusion of coagulation factors and products used in therapy, such as coagulation factors lyophilized derived from human and recombinant plasma antifibrinolytic agents, and other blood components. Also, the deaths in the past five years were also analyzed. Conclusion: Recent advances in the treatment of hemophilia in Brazil are undeniable. However, the impact of these advances in the clinical situation and quality of life of hemophilia patients are difficult to assess, since there are few studies evaluating the clinical conditions and treatment-related complications. The data obtained from the Hereditary Coagulopathies profiles in Brazil, clearly indicate underreporting and under-estimation in this patient population. We carried out an extensive clinical and epidemiological profile of the population of patients with hemophilia in Rio Grande do Sul state in a period not investigated by previous studies.

Orientador: Mary Marcondes / Banca: Rosemeri de Oliveira Vasconcelos / Banca: Raimundo Souza Lopes / Banca: Estevam Guilherme Lux Hoppe / Banca: José Eduardo Tolezano / Resumo: O objetivo do presente estudo foi determinar a presença de anticorpos anti-Leishmania sp. no soro e de DNA de Leishmania infantum chagasi no sangue periférico das diversas espécies de animais domésticos, residentes em um raio de 250 metros de distância de seres humanos portadores de leishmaniose visceral (LV), bem como avaliar as características ambientais, em uma região da cidade de Juazeiro (BA), na tentativa de determinar os possíveis fatores de risco para a ocorrência da doença. Para tanto, após a seleção de 21 casos humanos de LV distribuídos em seis bairros do município, realizou-se a sorologia e a reação em cadeia de polimerase em tempo real (qPCR) de soro e sangue total, respectivamente, de 498 animais, sendo 383 (76,91%) da espécie canina, 84 (16,87%) felina, 15 (3,00%) caprina, 12 (2,42%) equídea e 4 (0,80%) ovina. A prevalência de LV, considerando-se os resultados sorológicos e da qPCR, foi de 6,43% (32/498), sendo 5,75% (22/383) na população de cães e 11,90% (10/84) na de gatos. Vinte cães (5,22%) e 10 (11,90%) gatos foram sororreagentes e as outras espécies não apresentaram anticorpos anti-Leishmania sp. Apenas dois (0,40%) dos 498 animais apresentaram DNA do parasita no sangue, ambos da espécie canina e sem a presença de anticorpos séricos anti-Leishmania sp. Os gatos apresentaram duas vezes mais chances de se tornarem portadores da LV que os cães (OR=2,21; IC=1,1-4,87; p=0,043), e os felinos domiciliados apresentaram um risco 9,57 vezes maior de se infectarem que os gatos semidomiciliados (OR=9,57; IC=2,21-41,37; p=0,0006). O acesso a rua não foi associado com a doença em cães, e o sexo e a faixa etária não constituíram um risco para os animais contraírem esta zoonose. A presença de mais de um animal por domicílio aumentou em 3,46 vezes as chances de infecção na população... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The aim of the present study was to determine the presence of antibodies anti-Leishmania sp. in serum and DNA of Leishmania infantum chagasi in peripheral blood of domestic animals living within a 250 m perimeter from human cases of visceral leishmaniasis (VL), as well as to evaluate the environmental characteristics, in the region of the city of Juazeiro, Bahia, in an attempt to determine possible risk factors for the occurrence of the disease. For this, after the selection of 21 human cases of VL distributed in six neighborhoods of Juazeiro, serology and real time polymerase chain reaction (qPCR) in whole blood were performed in 498 animals, being 383 (76.91%) dogs, 84 (16.87%) cats, 15 (3%) goats, 12 (2.42%) equids, and 4 (0.8%) sheep. The prevalence of VL, considering serological and qPCR results, was 6.43% (32/498), being 5.75% (22/383) dogs and 11.9% (10/84) cats. Twenty (5.22%) dogs and 10 (11.9%) cats were seroreactive and the others species did not present antibodies anti-Leishmania sp. Only two (0.40%) out of 498 animals presented the parasite DNA in blood, both dogs without the presence of anti- Leishmania antibodies. Cats were two times more likely to have VL than dogs (OR = 2.21; 95% CI, 1.1 - 4.87; p = 0.043), and the domiciled cats were more likely to be positive for VL than semi-domiciled (OR=9.57; 95% CI, 2.21 - 41.37; p=0.0006). Access to the street was not associated to the disease in dogs, and sex and gender did not constitute a risk factor for the development of VL. The presence of more than one animal per household increased in 3.46 times the odds of infection in the population (OR=3,46; IC=1,49-8,06; p=0,0025). No significant association was found between the number of people per household, the distance from human VL cases, the type of house walls, the number of rooms, or the presence... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Submitted by Fabíola Silva (fabiola.silva@famerp.br) on 2016-06-20T21:04:05Z No. of bitstreams: 1 fabiananakashima_tese.pdf: 1263029 bytes, checksum: ea1d05d8998fac5ccacd5e04039e5c2a (MD5) / Made available in DSpace on 2016-06-20T21:04:05Z (GMT). No. of bitstreams: 1 fabiananakashima_tese.pdf: 1263029 bytes, checksum: ea1d05d8998fac5ccacd5e04039e5c2a (MD5) Previous issue date: 2015-12-14 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo - FAPESP / Introduction: Toxoplasma gondii, which causes toxoplasmosis, is an intracellular protozoan that has several transmission routes, among them the transfusion. Objective: To investigate by serological and molecular methods the T. gondii infection in blood donors to assess the risk of transmission via transfusion. Methods: We selected 750 individuals able to donate blood. These individuals were submitted to an interview about their lifestyle habits and a collection of peripheral blood. The immunosorbent assay (ELISA) was used to investigate the presence of anti-T. gondii IgM and IgG classes, and the Nested PCR and qQPCR, the parasitaemia. Positive samples in the molecular methods were submitted for genotyping by the Multilocus Nested PCR RFLP method. Donors with positive molecular result and no positive serology were recalled to investigate seroconversion by ELISA and Indirect Immunofluorescence (IIF). In addition, recipients of blood components with molecular suspected parasitemia were screened. Of these, aliquots were separated from peripheral blood prior to transfusion and after transfusion (± 20 days), which were also analyzed by serological methods (ELISA and IIF) and molecular (PCR, qPCR Mulitplex nested PCR and RFLP). Results: Three hundred and fifty-seven (47.6%) donors had positive result and 393 (52.4%) showed no positive result for the presence of anti-T. gondii IgG class. Twenty-seven (3,6%) showed positive result for IgM and 723 (96.4%) non-reactive. The variables associated with infection by T. gondii were: advanced age (P < 0.0001), consumption of raw milk (P = 0.001), consumption of raw and underare beef and pork meat (P = 0.003), to reside in the countryside (P = 0.004), frequent presence of mechanical vectors in the residence (cockroach, mouse and fly P = 0.02; mice, P = 0.03), lower education (1st grade incomplete, P <0.0001 and 1st grade complete, P = 0.002) and low family income (P = 0.002). No sample was positive by qPCR, but 40 (11%) were positive by Nested PCR and positive serology. However, these samples did not show amplification when undergoing to genotyping. The four cases screened did not show positive results to molecular analysis and no recalled donor presented seroconversion. Conclusion: We concluded that the studied population of blood donors is exposed to various risk factors associated with infection by T. gondii, and it is likely that the high frequency of anti-T. gondii IgG class found in this study is related to this exposure. The results show that there is no molecular evidence of parasitaemia in the studied donors, thus the risk of transmission of this infection via blood transfusion is low or zero in this region. In addition, the failure of genotyping and the non-occurrence of seroconversion of reanalyzed donors suggest that the positivity found in some samples analyzed by Nested PCR, were related to false-positive results. / Introdução: Toxoplasma gondii, causador da toxoplasmose, é um protozoário intracelular que apresenta várias vias de transmissão, dentre elas a transfusional. Objetivo: Investigar por métodos sorológicos e moleculares, a infecção por T. gondii em doadores de sangue para avaliar o risco de transmissão via transfusional. Casuística e métodos: Foram selecionados 750 indivíduos aptos à doação de sangue. Estes indivíduos foram submetidos a uma entrevista sobre seus hábitos de vida e a uma coleta de sangue periférico. Com o ensaio imunoenzimático (ELISA) foi investigada a presença de anticorpos anti-T. gondii das classes IgM e IgG, e por Nested PCR e qPCR a parasitemia. As amostras positivas nos métodos moleculares foram submetidas à genotipagem pelo método Multilocus Nested PCR RFLP. Os doadores com resultados moleculares positivos e sorologias não reagentes foram reconvocados para investigar a soroconversão por ELISA e imunofluorescência indireta (IFI). Além destes, os receptores dos hemocomponentes com suspeita molecular de parasitemia foram rastreados. Destes, foram separadas alíquotas de sangue periférico, antes da transfusão e após a transfusão (±20 dias), as quais também foram analisadas pelos métodos sorológicos (ELISA e IFI) e moleculares (Nested PCR, qPCR e Mulitplex Nested PCR RFLP). Resultados: Trezentos e cinquenta e sete (47,6%) doadores apresentaram resultado reagente e 393 (52,4%) apresentaram resultado não reagente para a pesquisa de anticorpos anti-T. gondii da classe IgG. Vinte e sete (3,6%) apresentaram resultado reagente para IgM e 723 (96,4%) não reagente. As variáveis associadas a infecção por T. gondii foram: média de idade avançada (P < 0,0001), consumo de leite cru (P = 0,001), consumo de carne crua e mal passada de bovino e suíno (P = 0,003), residir na zona rural (P = 0,004), presença frequente de vetores mecânicos na residência (barata, rato e mosca P = 0,02; ratos, P = 0,03), menor grau de escolaridade (1º grau incompleto, P < 0,0001 e 1º grau completo, P = 0,002) e a baixa renda familiar (P = 0,002). Nenhuma amostra foi positiva pela qPCR, mas 40 (11%) apresentaram resultado positivo pela Nested PCR e sorologia reagente. Entretanto, estas amostras ao serem submetidas a genotipagem, não apresentaram amplificações. Os quatro casos rastreados também não apresentaram resultados positivos nas análises moleculares e nenhum doador reconvocado apresentou soroconversão. Conclusão: Concluímos que a população de doadores de sangue estudada está exposta a vários fatores de riscos associados a infecção por T. gondii e, é provável que a elevada frequência de anticorpos anti-T. gondii da classe IgG encontrada neste trabalho esteja relacionada a esta exposição. Os resultados demonstram que não há evidências moleculares de parasitemia nos doadores estudados, portanto o risco de transmissão desta infecção via transfusional é baixo ou nulo para esta região. Além disto, o insucesso da genotipagem e a não ocorrência de soroconversão dos doadores reanalisados sugerem que a positividade, encontrada em algumas amostras analisadas por Nested PCR, tratavam-se de resultados falso-positivos.

Submitted by Suzana Dias (suzana.dias@famerp.br) on 2018-10-19T20:56:33Z No. of bitstreams: 1 JaquelineCalçaAssis_dissert.pdf: 1656909 bytes, checksum: 0f9e5425c7d3ffa51b86c71d5b4b9687 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-10-19T20:56:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 JaquelineCalçaAssis_dissert.pdf: 1656909 bytes, checksum: 0f9e5425c7d3ffa51b86c71d5b4b9687 (MD5) Previous issue date: 2016-11-07 / The presence of anti-HBc alone can have several meanings: false positive, healing immune window, delayed immunity or occult hepatitis B virus infection (OBI). In clinical practice, it is important and necessary to clarify the diagnosis to prevent transmission to the risk population such as hemodialysis patients, blood donors, transplant recipients and co-infected individuals with HIV and/or HCV. Objectives: The aim of the study was to determine the prevalence of anti-HBc alone and occult hepatitis B, respectively, in blood samples from Adolfo Lutz Institute - Regional Laboratory Center X - São José do Rio Preto (IAL - CLR X - SJRP) and patients from Municipal Ambulatory of Viral Hepatitis (AMHV) both from São José do Rio Preto city in the period from January 1st, 2009 to December 31st, 2014. Methods: The study population of IAL - CLR X - SJRP is from the region served by the 15th Health Regional Division (DRS), and the AMHV is a population screened for clarification, monitoring and treatment of viral hepatitis in the city. In this population with anti-HBc alone, patients were immunized against hepatitis B and the individuals without vaccine response were selected for the performance of HBV-DNA research for the diagnosis of occult hepatitis B. Results: During the study period, 6805 samples were evaluated without duplication in IAL - CLR X - SJRP, of these 624 samples had anti-HBc positive, and the prevalence of anti-HBc alone was 17.63% (110/624). In the AMHV, 940 patients anti-HBc isolated were evaluated, from these 816 (86.81%) were vaccinated and after the criterion of disregarding the vaccinated patients who did not have anti-HBs evaluated after vaccination (85 - 10.42%), 731 (89.58%) patients were considered for analysis of the vaccine response, and 568 (77.70%) presented seroconversion with anti-HBs positive and 163 (22.30%) non-seroconverted patients. The research of HBV-DNA was performed in 25.77% (42/163) patients without a vaccine response, finding a prevalence of occult hepatitis B (OBI) of 47.62% (20/42).The presence of antibodies to HIV and HCV was 25.40% and 13.25% in the blood samples IAL - CLR X - SJRP and in AMHV was 1.80% and 0.33%, respectively. Conclusion: The results show the occurrence of antiHBc alone in IAL - CLR X - SJRP and the need of monitoring this population. In AMHV, the vaccination was effective for most cases, which demonstrates the need of vaccine introduction as a routine in anti- HBc alone patients in the overall population. The occult hepatitis B was found in almost half of patients assessed without vaccine response. / A presença do anti-HBc isolado pode ter vários significados: falso positivo, janela imunológica de cura, imunidade tardia ou infecção oculta pelo vírus da hepatite B (IOB). Na prática clínica é importante e necessário o esclarecimento diagnóstico para evitar transmissão em populações de risco como pacientes hemodialisados, doadores de sangue, transplantados e indivíduos coinfectados com HIV e/ou HCV. Objetivo: O objetivo do estudo foi determinar a prevalência de anti-HBc isolado e hepatite B oculta, respectivamente, em amostras de sangue do Instituto Adolfo Lutz - Centro de Laboratório Regional X - São José do Rio Preto (IAL - CLR X - SJRP) e pacientes do Ambulatório Municipal de Hepatites Virais (AMHV) ambos da cidade de São José do Rio Preto, no período de 01 de janeiro de 2009 a 31 de dezembro de 2014. Casuística e Métodos: A população estudada do IAL - CLR X - SJRP é proveniente da região atendida pela Divisão Regional de Saúde (DRS) XV e a do AMHV é uma população triada para esclarecimento, acompanhamento e tratamento das hepatites virais do município. Nesta população com anti-HBc isolado os pacientes foram imunizados contra hepatite B e os indivíduos sem resposta vacinal foram selecionados para realização da pesquisa de HBV-DNA para diagnóstico da hepatite B oculta. Resultados: Durante o período de estudo, foram avaliadas 6805 amostras, sem duplicação, no IAL - CLR X - SJRP, destas, 624 amostras apresentavam anti-HBc reagente, sendo a prevalência de anti-HBc isolado 17,63% (110/624). No AMHV foram analisados 940 pacientes com anti-HBc total isolado destes 816 (86,81%) foram vacinados e depois de aplicado o critério de desconsiderar os pacientes vacinados que não tiveram o anti-HBs avaliado após a vacinação (85 - 10,42%), 731 (89,58%) pacientes foram considerados para análise da resposta vacinal, sendo que 568 (77,70%) apresentaram soroconversão com anti-HBs positivo e 163 (22,30%) pacientes não soroconverteram. A pesquisa do HBV-DNA foi realizada em 25,77% (42/163) dos pacientes sem resposta vacinal, encontrando uma prevalência de hepatite B oculta (IOB) de 47,62% (20/42). A presença de anticorpos contra HIV e HCV foi de 25,40%, 13,25% nas amostras do IAL - CLR X - SJRP e no AMHV foi de 1,80%, 0,33%, respectivamente. Conclusão: Os resultados obtidos demonstram a ocorrência de anti-HBc isolado nas amostras do IAL - CLRX - SJRP e a necessidade de acompanhamento dessa população. No AMHV a vacinação esclareceu a maioria dos casos, o que demonstra a necessidade da introdução da vacina como rotina em pacientes anti-HBc isolado na população geral. A hepatite B oculta foi encontrada em quase metade dos pacientes não respondedores vacinais avaliados.

Submitted by Luanna Matias (lua_matias@yahoo.com.br) on 2015-02-09T12:44:38Z No. of bitstreams: 2 Tese - Rodrigo Scaliante de Moura - 2014.pdf: 1156729 bytes, checksum: e7cbaa588f1b727f7e6e68f23536f799 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2015-02-20T11:00:49Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Tese - Rodrigo Scaliante de Moura - 2014.pdf: 1156729 bytes, checksum: e7cbaa588f1b727f7e6e68f23536f799 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-02-20T11:00:49Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Tese - Rodrigo Scaliante de Moura - 2014.pdf: 1156729 bytes, checksum: e7cbaa588f1b727f7e6e68f23536f799 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Previous issue date: 2014-03-31 / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / Serology to detect IgM antibodies against the PGL-I, a species-specific antigen from Mycobacterium leprae, can be used to aid in the identification of individuals with high bacillary load. Samples and the database from the U-MDT clinical trial were used to compare and report the perfomance of diverse classification methods. This study also evaluated the possibility of enhancement of serological tests by substituting the antigen carrier protein, the bovine serum albumin (BSA) by a human protein (HSA), aiming to eliminate unespecific bindings. The tests specificity was evaluated using sampes from household contacts, healthy population, TB patients and Visceral Leishmaniasis from endemic and non-endemic areas. In this study the most sensitive and the least specific approach was represented by counting the number of skin lesions, which identifiel 99% of MB leprosy patients. ML Flow HSA tests correcty allocated 70.9% and 68.6% of patients in the PB group, and 87% and 81% of patients in the MB group, respectively. The study suggests that the carrier protein of the antigen did not influence significantly in the seropositivity of studied groups. PGL-I serology did not presented cross-reactions with Visceral Leishmaniasis serum samples and confirmed a low positivity among control groups. / A sorologia para detecção de anticorpos da classe IgM contra o PGL-I, antígeno específico do M. leprae, pode ser utilizada para auxiliar na identificação de indivíduos com alta carga bacilar. Amostras e o banco de dados do ensaio clínico U-MDT foram utilizados para descrever o desempenho de diversos métodos de classificação. Este estudo também avaliou a possibilidade de melhoria dos testes sorológicos pela substituição da proteína carreadora do antígeno, a albumina bovina (BSA), por uma proteína humana (HSA), visando eliminar ligações não específicas. A especificidade dos testes foi avaliada utilizando amostras de contatos de pacientes, indivíduos saudáveis, pacientes de tuberculose e de leishmaniose visceral de áreas endêmica e não endêmica para hanseníase. Neste estudo, a abordagem mais sensível, porém menos específica foi a contagem de lesões, que foi capaz de detectar 99% dos pacientes multibacilares. Os testes ML Flow utilizando BSA ou HSA foram capazes de alocar corretamente 70,9% e 68,6% dos pacientes PB e, 87% e 81% dos pacientes MB, respectivamente. Portanto, este estudo sugere que a proteína carreadora do antígeno não influencia de maneira significativa na soropositividade dos grupos estudados. A sorologia PGL-I não apresentou reatividade cruzada com o soro de pacientes de Leishmaniose Visceral e se confirmou a baixa soropositividade entre os grupos controle.

Submitted by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2016-08-09T13:56:09Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Kelly Deyse Segati - 2012.pdf: 1381150 bytes, checksum: 6c27c539f7ddade59c13124dfc688935 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2016-08-09T13:57:32Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Kelly Deyse Segati - 2012.pdf: 1381150 bytes, checksum: 6c27c539f7ddade59c13124dfc688935 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2016-08-09T13:57:32Z (GMT). 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HPV DNA was detected by the polymerase chain reaction (PCR) and genotyping was performed by reverse line-blot hybridization assay. CT seropositivity was tested by ELISA for the detection of IgG antibodies and the detection of CT was done by PCR to amplify a sequence in the cryptic plasmid generating a fragment of 512 base pairs. The total prevalence of HPV infection was 85.2%. Seropositivity for CT was 26%. Thirty-one women 26.7 were tested positive for CT antibodies and HPV-DNA. Of these 10.3% had diagnosis of cervical intraepithelial neoplasia grade 1 (CIN1) or cervicitis, while 16.3% had histological diagnosis of CIN2 worse diagnosis. When employed PCR test positivity was found to be 8.8%. Eleven women 9.48% were tested positive for CT and HPV DNA. Of these 5.1% had diagnosis of cervicitis or CIN1 and 4.3% had a diagnosis of CIN2 or worse diagnosis. The agreement between serology and PCR tests for CT was considered poor (kappa=0.10 IC 95% 0.69-7.9). Taking as reference the cases negatives for HPV and CT, a positivity for HPV and CT seropositivity was significantly associated with a diagnosis of CIN2 or worse diagnosis, for all HPV types (OR=11.9 IC=2.00-91.5 p=0.0009) and types 16 and 18 (OR=7.50 IC=0.91-76.28 p=0.02). Significant association was observed after adjustment for HPV. A Borderline significance was observed considering other HPV types (OR=7.50 IC=0.91-76.28 p=0.02). CT seropositivity was associated with CIN2 worse diagnosis in women infected by HPV, mainly when the types 16 and 18 were involved. This study did not show any association between CT infection detected by PCR and CIN2 or worse diagnosis. These data support the hypothesis that seropositivity for CT compared to PCR positivity in HPV positive women, especially for types 16 and 18, is a better measure of previous exposure, which reflects a higher probability of association with the severity of cervical neoplasia. / A infecção por Chlamydia trachomatis (CT) pode estar associada com a persistência dos tipos de Papilomavírus humano (HPV) oncogênicos e desenvolvimento da neoplasia cervical. Há indicações de que a detecção de CT por sorologia seja uma melhor medida de exposição cumulativa ou da exposição passada quando comparada a detecção pela reação da polimerase em cadeia (PCR). O objetivo deste estudo foi comparar a positividade para CT pelos métodos de ELISA e PCR e relacionar com a gravidade da neoplasia cervical em mulheres com anormalidades citológicas. Entre fevereiro de 2007 e março de 2009, 136 mulheres, foram encaminhadas à Clínica de Colposcopia na Santa Casa de Misericórdia em Goiânia-GO por exame citológico alterado. A detecção de DNA do HPV foi realizada por PCR utilizando os iniciadores PGMY09/PGMY11, e a genotipagem foi realizada por hibridização reversa em pontos. A positividade para CT foi avaliada por ELISA para detecção de anticorpos IgG e por PCR empregando iniciadores cujo alvo é uma região de plasmídeo críptico, gerando um fragmento de aproximadamente 512 pares de bases. A prevalência total da infecção por HPV foi 85,2%. A positividade para CT por sorologia foi de 25%. Trinta e uma amostras 26,7% foram positivas para HPV e CT. Destas 10,3% tinham diagnóstico de neoplasia intraepitelial cervical grau 1 (NIC1) ou cervicite, enquanto 16,3% tinham diagnóstico histológico de NIC 2 ou pior diagnóstico. Quando empregado o teste de PCR a positividade encontrada foi de 8,8%. Onze amostras 9,48% foram positivas para HPV e CT por PCR, sendo que 5,1% das pacientes apresentavam diagnóstico de NIC1 ou cervicite e 4,3% tinham diagnóstico de NIC 2 ou pior diagnóstico. A concordância entre os testes de sorologia e PCR para CT foi considerado ruim (kappa=0,10 IC 95% 069-7.9). Tomando como referência casos negativos para HPV/CT, a positividade para HPV/CT por sorologia foi significantemente associada com diagnóstico de NIC2 ou pior diagnóstico, para todos os tipos de HPV (OR=11.9 IC=2.00-91.5 p=0.0009) e para os tipos 16 e 18 (OR=16.25 IC=2.28-148.57 p=0.0005). Uma associação limítrofe foi observada considerando outros tipos de HPV (OR=7.50 IC=0.91-76.28 p=0.02). Houve associação estatisticamente significante após o ajustamento para infeção por HPV entre as infecções pelos tipos 16 e 18 e soropositividade para CT com a gravidade da neoplasia cervical. Quando empregado o teste de PCR, não houve associação entre a coinfecção HPV/CT e a gravidade da neoplasia cervical. Estes dados reforçam a hipótese de que a soropositividade para CT quando comparada a positividade por PCR em mulheres HPV positivas, especialmente para os tipos 16 e 18, é uma melhor medida de exposição anterior, o que reflete maior probabilidade de associação com a gravidade da neoplasia cervical.

As infecções pneumocócicas são uma importante causa de morbi-mortalidade entre as crianças. Até 2000, era disponível apenas a vacina pneumocócica polissacarídica 23valente, de uso a partir dos 2 anos de idade. Essa vacina era recomendada para crianças com fibrose cística (FC) e para as asmáticas em uso de corticóide oral, dentre outras recomendações. A partir de 2000, licenciou-se a vacina pneumocócica conjugada 7valente, com grande impacto contra infecções causadas pelos sorotipos vacinais. Nos países onde as crianças não são universalmente vacinadas com essa vacina, as recomendações permanecem as mesmas. Atualmente, os adultos asmáticos estão incluídos nas recomendações para vacinação pneumocócica nos EUA. Há poucos estudos sobre o risco de doença pneumocócica em crianças asmáticas per si e naquelas com fibrose cística e sobre a resposta à vacina pneumocócica conjugada. Salienta-se que ainda não há um critério estabelecido para avaliar a resposta sorológica a essa vacina. Recentemente, foi sugerido o critério de 0,35mcg/ml por Elisa para se correlacionar com proteção para doença invasiva pneumocócica. Objetivou-se determinar a concentração dos anticorpos contra os sorotipos vacinais contidos na vacina pneumocócica conjugada 7valente em crianças com asma moderada em uso de corticóide inalatório e em crianças com fibrose cística; avaliando-as pelos critérios de 0,35mcg/ml, 1,3mcg/ml e aumento de 4 vezes o título pós em relação ao pré-vacinal, para cada sorotipo e para a vacina, considerando-se a positividade para 5 sorotipos. Foram avaliadas 18 crianças em cada grupo. A mediana da idade foi de 82,5m nas asmáticas e 69,5m naquelas com FC. Foi colhida amostra para sorologia pré-vacinação e outra após 2 doses da vacina conjugada. As concentrações de anticorpos para os sorotipos vacinais foram quantificadas pelo Elisa. Para 0,35mcg/ml de corte, a grande maioria nos dois grupos já era positiva à inclusão para os sorotipos vacinais e à vacina. Considerando-se o valor de 1,3mcg/ml, entre os que eram negativos, as crianças asmáticas responderam entre 66,7% (9V) e 100% (14), e as com FC, entre 50% (19F) e 100% (6B e 14); e, em relação à resposta vacinal para esse nível, as asmáticas apresentaram 81,8% de resposta, enquanto as com FC, 91,7%. Avaliando-se pelo aumento de 4 vezes o título pós em relação ao pré-vacinal, a melhor resposta aos sorotipos, nos asmáticos, foi de 33,3% (4, 6B, 14 e 18C), e a nos com FC, 61,1% para o 6B; em termos de resposta vacinal, obteve-se 16,7% e 44,4%, para as asmáticas e aquelas com FC, respectivamente. Não houve interferência da vacinação prévia com a vacina pneumocócica polissacarídica. As medianas dos títulos pós em relação aos pré-vacinais, para os sorotipos, nos dois grupos, apresentaram um aumento significante. Apesar de boa parte das crianças apresentarem uma positividade elevada à inclusão, aquelas que eram negativas tenderam a apresentar uma boa resposta à vacina. / Pneumococcal infections are an important morbi-mortality cause among children. Until 2000, it was only available the 23-valent polysaccharide pneumococcal vaccine for children over two years old. This vaccine was recommended for cystic fibrosis (CF) children and to asthmatics children in use of oral corticosteroids, among other recommendations. From 2000, it was licensed the 7-valent conjugated pneumococcal vaccine, with a great impact against the infections caused by the vaccine serotypes. In the countries that dont make a universally use of this vaccine for children, the recommendations remain the same. At the present time, asthmatic adults are included for the pneumococcal vaccine recommendations in the United States. There are few studies about pneumococcal disease risk with cystic fibrosis children and asthmatics, per si, and about the conjugated pneumococcal vaccine response. It points out that there are no a definitive criteria or evaluation established for the serology response for this vaccine. It was suggested, recently, that the level of 0,35mcg/ml, measured by ELISA, is adequate to correlate with the invasive pneumococcal disease protection. The goal of this study was to determine the antibodies concentration of the seven vaccine serotypes from 7-valent conjugated pneumococcal vaccine among children with moderate asthma in use of inhaled corticosteroids and with cystic fibrosis. It was considered the dosage 0,35mcg/ml and 1,3mcg/ml levels and the four-fold increase between pre- and post-immunization concentrations levels, to each serotype and to the vaccine (positivity for five serotypes or more) for positivity. Eighteen children were included in each study group. The age median was 82,5 months for the asthmatics and 69,5 months for the CF children. A blood sample was taken for pre-immunization serology and a second one after the second vaccine dose was given. The antibodies concentrations for the vaccine serotypes were measured by ELISA. Considering the 0,35mcg/ml levels, the majority of children, in both groups, was positive for vaccine serotypes and for the vaccine as well in the beginning. At the 1,3mcg/ml level, among the children with negative serology, asthmatic children responded between 66,7% (9V) and 100% (14), and those with CF, between 50% (19F) and 100% (6B e 14). Related to the vaccine response for this level, the asthmatics had a 81,8% response, while the CF childrens response was 91,7%. Evaluating for the four-fold increase between pre- and post-immunization concentrations, the best response observed for the vaccine serotypes was 33,3% (4, 6B, 14 e 18C) for the asthmatics. In the CF group the best result was 61,1% (6B). In terms of the vaccine response, it was observed that 16,7% and 44,4% were the results for both the asthmatics and CF group, respectively. The polysaccharide vaccine didnt interfere in the results. The medians of the pre- and post-immunization antibodies concentrations for the vaccine serotypes, in both groups, were significantly increased. Despite those children that were already positive for the criteria evaluated, at the first moment of the study, for those children that were negative, the majority had a positive serology towards the vaccination response.

Ehrlichia canis e Anaplasma platys são parasitas de células sanguíneas transmitidos por carrapatos de larga distribuição mundial. O objetivo deste trabalho foi detectar a presença de E. canis e A. platys em cães naturalmente infectados no município de Porto Alegre, RS, Brasil, através de técnicas sorológicas e moleculares; realizar análise molecular dos agentes através do sequenciamento de um fragmento do gene 16S rRNA e compará-lo com sequências disponíveis no Genbank. Adicionalmente, avaliamos os parâmetros hematológicos e possíveis fatores de risco associados à infecção. Amostras de sangue foram coletadas de 146 cães residentes no Bairro Arquipélago, região suburbana de Porto Alegre e 53 cães mantidos no Centro de Controle de Zoonoses (CCZ). Dentre os animais analisados, 27 (13,56%) apresentaram resultado positivo na nPCR e 20 (10,2%) apresentaram sorologia positiva para A. platys. Através da ferramenta BLASTn, as sequências obtidas neste estudo foram comparadas e mostraram similaridade de 99,75% a 100% em relação a outras sequências de A. platys disponíveis no Genbank. Neste estudo não foi observada a presença de E. canis. DNA do agente não foi amplificado em nenhuma das amostras analisadas através de técnicas moleculares, e tampouco foram detectados cães sororreagentes, indicando a baixa prevalência do agente no município. Ao comparar a prevalência de infecção/exposição entre as populações estudadas, não observamos diferença significativa entre elas. Não foram observadas diferenças significativas nos parâmetros hematológicos e fatores de risco analisados nos animais infectados ou expostos, exceto a contagem de basófilos, que foi associada positivamente com infecção por A. platys. / Erlichia canis and Anaplasma platys are tick borne disease which has a worldwide geographic distribution. The aim of this study was to detect the presence of E. canis and A. platys in naturally infected dogs in Porto Alegre/RS – Brazil by serological and molecular techniques, performing molecular analysis of the agents by sequencing of a fragment of the 16S rRNA and comparing it with sequences available in Genbank. Additionally, we evaluated the hematological parameters and potential risk factors associated with infection. Blood samples were collected from 146 dogs living in the Arquipelago neighborhood, a suburban area of Porto Alegre and 53 dogs from Control Centrer of Zoonosis (CCZ). Among the examined animals, 27 (13.56%) were positive by nPCR and 20 (10.2%) were seropositive for A. platys. Through the BLASTn, the sequences obtained in this study were compared and showed similarity of 99.75% to 100% as compared to other sequences of A. platys available in Genbank. None of the dogs showed antibodies or E. canis DNA, indicating the low occurrence of the agent in Porto Alegre. There were no significant differences between positive groups and hematological parameters, or among the risk factors evaluated, except basophils count was associated with A. platys infection.

Coeliac disease (CD) is considered to be the result of a complex interplay of intrinsic (genetic) factors and variable extrinsic (environmental) factors. The complex background of CD explains its wide spectrum of clinical manifestations. For a very long time CD was considered more or less a disease of childhood, which was extremely rare in adults. Nowadays we know that CD is one of the most common food intolerance disorders. An epidemiological study of CD in a geographically defined area of Sweden (Paper1) showed a prevalence of 95.5/ 100 000 inhabitants. Among the associated diseases an especially high incidence of associated thyroid disease, 10.8% was observed. In a fifteen-year cohort follow up study of all CD-patients residing in the counties of Örebro and Linköping (Paper 2) the total mortality was increased with 38% (SMR 1.38 95% C.I. 0.31-0.83). This was mainly explained by a 48% increased death rate in ischemic heart disease, significant in patients over 65 years (SMR 1.58 95% C.I. 1.00-2.06). However, there was a 47 % lower risk of all malignancies (SIR 0.53 95% C.I. 0.31-0.83). A cohort of 22 consecutively biopsy-proven adult CD patients (Paper 3), were followed in respect of antibody titres from diagnosis and after 1, 3, 6, and 12 months on a gluten free diet (GFD). All antibody titres fell sharply within one month. Thus excluding a CD diagnosis serologically on a patient who has initiated a GFD by herself is not to recommend. In another cohort with CD patients (Paper IV) who were diagnosed 8-12 years earlier recommended and who were recommended, the reliability of diet history, serological and biochemical markers to predict the appearance of the small intestinal mucosa were analysed (Paper IV). The history of a strict GFD gave a predictive value of 88% of a mucosa in remission. The values of serological tests (AGA, EmA and tTG) to predict a mucosa in remission were 93% for all. In CD patients in remission gastro-intestinal symptoms were evaluated with the GSRS questionnaire. Subjects with CD reported significantly more GI-symptoms than a general population sample (p&lt;0.01). This was particularly true for women with CD who scored worse than female controls .By contrast men with CD reported no more symptoms than male controls.