ALVES, Antônio Willame da Silva. Técnicas de maricultura da macroalga vermelha Gracilaria birdiae na praia de Flecheiras, Trairi/Ce: efeito de parâmetros ambientais e climáticos sobre a produção de biomassa e extração de ágar. 2016. 63 f. Dissertação (Mestrado em Bioquímica)-Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2016. / Submitted by Anderson Silva Pereira (anderson.pereiraaa@gmail.com) on 2017-04-24T20:03:01Z No. of bitstreams: 1 2016_dis_awsalves.pdf: 1327556 bytes, checksum: d36c53185590d4f3573f395bc4a671c1 (MD5) / Approved for entry into archive by Jairo Viana (jairo@ufc.br) on 2017-04-26T18:41:30Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2016_dis_awsalves.pdf: 1327556 bytes, checksum: d36c53185590d4f3573f395bc4a671c1 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-04-26T18:41:30Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2016_dis_awsalves.pdf: 1327556 bytes, checksum: d36c53185590d4f3573f395bc4a671c1 (MD5) Previous issue date: 2016 / The red seaweed Gracilaria birdiae, abundant in Ceará, produce, among other polysaccharides, agar, a ficocolóide of great commercial importance because of its thickening properties, stabilizers and gelling agents. The aim of this study was to evaluate the effect of the climatic and environmental parameters in Flecheiras Beach –Trairi, through the dry and rainy season on the production yield of the biomass of G. birdiae, using conventional Long Line (LL) and Long Line with tubular net (RT) and on the yield of agar extraction from cultured seaweed. The LL technique consisted of 4 modules of 10 mm twisted polystyrene rope and the RT was composed of 4 modules of 0.7 mm nylon tubular net and 7 cm internodes, both of which were kept anchored and suspended on the surface of the column Water by buoys. The initial biomass of G.birdiae used in each module was 1.2 kg. The biomass yield (RB), the Daily Growth Rate (TCD) of the seaweed, the environmental parameters (pH, salinity, N-NH3 / NH4 +, N-NO2-, N-NO3- and PO43-) and the yield of agar were evaluated during the dry seasons (July to December) and rainy (January to June) in periods of cultivation of 30 and 45 days. The climatic parameters (cumulative precipitation and mean wind velocity) of the culture site were supplied monthly by FUNCEME. The highest RB were obtained in the dry season, reaching 0.85 kg m-1 for RT in 45 days of cultivation, as well as the highest TCDs, with a maximum of 5% day-1, despite the high wind speeds observed for this season. The lowest RB and TCD were observed in the rainy season (0.16 kg m-1 and 0.6% day-1 for RT45 respectively). The yields agar extraction of the cultivated seaweed varied between 11 and 20%, but without significant difference, as well as the values of environmental parameters (pH, N-NO3-, PO43-) between dry and rainy seasons. N-NH3 / NH4 + was detected only in the rainy season. Therefore, Flecheiras Beach, Trairi-Ce presented as a potential site for the cultivation of G. birdiae through the LL and RT techniques, reaching commercially viable high RB and TCD, but such indices were significantly influenced by the dry and Rainy season, and alterations and adaptations of the crop structures are necessary to the climatic conditions presented by each season of the year aiming to optimize the production of algal biomass. / A alga marinha vermelha Gracilaria birdiae é abundante no litoral cearense e biossintetiza, dentre outros polissacarídeos, o ágar, um ficocolóide de grande importância industrial devido às suas propriedades espessantes, estabilizantes e gelificantes. O objetivo desse trabalho foi avaliar o efeito dos parâmetros climáticos e ambientais das estações seca e chuvosa da Praia de Flecheiras-Trairi/CE sobre o rendimento de produção da macroalga agarófita G. birdiae, através das técnicas de Long Line convencional (LL) e Long Line com rede tubular (RT) e sobre o rendimento da extração de ágar das algas cultivadas. A técnica LL foi constituída por 4 módulos de corda de poliestileno torcida de 10 mm e a RT foi composta por 4 módulos de rede tubular de nylon de 0,7 mm e espaço entrenós de 7 cm, ambas mantidas ancoradas e suspensas na superfície da coluna d´agua por boias. A biomassa inicial de G.birdiae utilizada em cada módulo foi de 1,2 kg. O rendimento de biomassa (RB), a Taxa de Crescimento Diário (TCD) da alga, os parâmetros ambientais (pH, salinidade, N-NH3/NH4+, N-NO2-, N-NO3- e PO43-) e o rendimento de ágar da alga cultivada foram avaliados durante as estações seca (julho a dezembro) e chuvosa (janeiro a junho) em períodos de cultivo de 30 e 45 dias. Os parâmetros climáticos (precipitação acumulada e velocidade média dos ventos) do sítio de cultivo foram fornecidos mensalmente pela FUNCEME. Os maiores RB foram obtidos na estação seca, alcançando 0,85 Kg m-1 para RT em 45 dias de cultivo, assim como as maiores TCDs, com máxima de 5% dia-1, apesar das altas velocidades dos ventos observadas para essa estação. Já os menores RB e TCD foram observados na estação chuvosa (0,16 Kg m-1 e 0,6% dia-1 para RT45 respectivamente). Os rendimentos de extração de ágar (AGb) das algas cultivadas variaram entre 11 e 20%, porém sem diferença significativa, assim como os valores dos parâmetros ambientais (pH, N-NO3-, PO43-) entre as estações seca e chuvosa. N-NH3/NH4+ foi detectada apenas na estação chuvosa. Portanto, a Praia de Flecheiras, Trairi-Ce se apresentou como um sítio potencial para o cultivo de G. birdiae através das técnicas LL e RT, alcançando altos RB e TCD, viáveis comercialmente, porém, tais índices sofreram influência significativa das estações seca e chuvosa, sendo necessárias alterações e adequações das estruturas de cultivo às condições climáticas apresentadas por cada estação do ano visando otimizar a produção de biomassa algácea.

El objetivo principal de esta tesis doctoral fue realizar una evaluación ambiental, efectuando una comparación de los invernaderos tipo parral y multitúnel y de tres tipos diferentes de sustratos utilizados en la producción de tomate bajo condiciones protegidas en las Palmas Gran Canaria. Para llevar a cabo esta cuantificación se utilizó la metodología del Análisis del Ciclo de Vida (ACV). Esta tesis esta estructurada en capítulos, en el primer capítulo, aparece la introducción, objetivos, el planteamiento del problema, los antecedentes, la historia de la producción de cultivo bajo condiciones protegidas, descripción de los diferentes tipos de invernaderos, así como el área cultivada, la descripción e importancia del cultivo de tomate, historia general del ACV, principales trabajos realizados en agricultura utilizando la metodología de ACV etc. En el capítulo segundo, se realiza la descripción de la metodología del ACV, de acuerdo con la normativa de la International Standard Organization, ISO 14040 (2006).En este capítulo tercero, se desarrollan las principales fases de la aplicación del ACV en invernaderos Canarios, el cual se divide en objetivos, alcance y el inventario. Dentro de los objetivos y alcance se discuten la función de los sistemas, la unidad funcional, los límites de los sistemas, las reglas de asignación de las cargas ambientales agrícola, calidad y procedencia de los datos utilizados. En la fase del inventario, se recoge la información relativa a la infraestructura y montaje de los invernaderos, la producción del cultivo de tomate, el transporte utilizado para trasladar la producción de tomates y la gestión de los residuos de los invernaderos parral y multitúnel.En el montaje de la infraestructura de los invernaderos parral y multitúnel se cuantificó la cantidad de materiales que se emplearon en la estructura y el equipo auxiliar y respecto a la producción del cultivo de tomate bajo condiciones protegidas se consideró el manejo de los invernaderos durante la producción, la producción de fertilizantes y el control fitosanitario. En la gestión de los invernaderos se consideraron las diferentes prácticas culturales, la ventilación, el empleo de la maquinaria agrícola y la cosecha.En el capítulo cuarto, se presenta el análisis de impactos e interpretación de los resultados de esta tesis. El análisis de los resultados se ha estructurado de la siguiente forma: en el ACV de la infraestructura de los invernaderos parral y multitúnel, el principal resultado que sobre- sale es que el invernadero multitúnel es más contaminante ambientalmente que el invernadero parral en lo que se refiere a la infraestructura. En el capítulo quinto, se realiza una evaluación de tres tipos de sustratos utilizados en las Islas Canarias. En este capítulo se comparan los resultados de las cargas ambientales asociadas al tipo de sustrato utilizado en la producción del cultivo de tomate en invernadero: los diferentes tipos de sustratos estudiados son fibra de coco o lana de coco (Coconut fiber) origen Filipinas, lana de Roca (Rock wool) origen Dinamarca y el picón (Basalt) origen local en Las Palmas Gran Canaria, España. Además se hace una descripción de cada uno, origen, proceso de fabricación, cartacterísticas agronómicas, tipos de presentación, residuos y los tipos de transporte terrestre y marítimo utilizado para trasladar los sustratos desde el lugar de origen al lugar en donde son utilizados.De los tres tipos de sustratos utilizados en la producción del cultivo de tomate bajo condiciones protegidas, el que produce las mayores cargas ambientales es la lana de roca (Rock wool), seguido por el sustrato de fibra de coco (Coconut fiber) y en menor cantidad el picón. (Basalt). El picón es pues una buena opción a nivel local en las zonas productoras, siempre y cuando se homogenize el material, se mejore el manejo agronómico y el traslado del sustrato sea a distancias cortas.Por último, en el capítulo sexto se recogen las principales conclusiones generales del trabajo derivadas de la detección de los puntos ambientalmente débiles, en la infraestructura de los invernaderos y en el proceso de producción del cultivo de tomate bajo condiciones protegidas y al mismo tiempo se recomiendan futuras líneas de investigación. / The main goal of this Ph D thesis was to do an environmental assessment, comparing "parral" and multitunel greenhouses and three different substrates used in tomato production under protected conditions in Las Palmas de Gran Canaria. To carry out this quantification the methodology of the Life Cycle Assessment (LCA) was used. This thesis is structured in chapters, the first chapter includes the introduction, approach to the problem, goals, background, history of crop production under protected conditions, description of different types of greenhouses, as well as the cultivated area, the description and importance of the tomato crop, general history of the LCA, principal works realized in agriculture using methodology LCA etc.In the second chapter, the description of the methodology of the LCA, in accordance with the normative International Standard Organization, ISO 14040 (2006), is given.In the third chapter, the main stages of the implementation of LCA in Canarian greenhouses are developed. Within the objectives and scope, the function of the systems, the functional unit, the system's boundaries and the rules for the allocation of environmental burdens, quality and origin of data used are discussed. In the inventory phase, data from infrastructure and assembly of the greenhouses, crop production of tomato, the transport used to move the production of the crop of tomatoes and the management of the waste of the greenhouses parral and multitunel is collected.In the assembly of the parral and multitunel greenhouses infrastructure the amount of materials used in the structure and auxiliary equipment is quantified. In relation to tomato production under protected conditions, the management of greenhouses for the production, the fertilizer production and phytosanitary control are considered. In the management of greenhouses different cultural practices, ventilation, use of farm machinery and harvesting are considered.The fourth chapter presents the impact analysis and results interpretation of this thesis. The Analysis of the results is structured in the following form: the LCA of the infrastructure of the greenhouses parral and multitunel highlights that the multitunel greenhouse is environmentally more polluting that the parral one as it refers to the infrastructure.In the fifth chapter the environmental assessment of three types of substrates used in the Canary Islands, Spain is presented. This chapter compares the results of the environmental burdens associated with the type of substrate used in the production of greenhouse tomato crop. The different types of substrates studied are coconut fiber or wool coconut (Coconut fiber) from Philippine origin, Rock wool (Rock wool) from Denmark origin and picón (Basalt) from local sources in Las Palmas Gran Canaria, Spain. In addition, a description of each source is done: manufacturing process, agronomic characteristics, types of presentation and types of waste (residues), and land and sea transportation used to move the substrates from the origin to the place where they are used.Of the three types of substrates used in crop production of tomato under protected conditions, which produces the greatest environmental burdens is the Rock wool (Rock wool), followed by coconut fiber substrate (Coconut fiber) and less the amount picón. (Basalt). The substrate picón is then a good choice at the local level in production areas, provided that the material is homogenized, agricultural management is improved and the transfer of the substrate is at a short distance.Finally, in the chapter sixth the main conclusions derived from this work are described, taking into account the detection of the environmentally weak points in the greenhouses infrastructure and in the production process of the tomato crop under protected conditions. Furthermore, future research is recommended.

El sector hortícola del Litoral Norte del Uruguay tiene como objetivo la oferta de fresón principalmente en los meses de invierno. Frente a una falta de abastecimiento de plantas adecuadas para una producción precoz, se ha desarrollado un método de cultivo basado en plantas locales, obtenidas a través del enraizado directamente en maceta en el vivero y cultivares resultantes del proyecto de mejora genética nacional, siendo "INIA Yvahé" el más utilizado. La planta de maceta directa ha mostrado problemas de adaptación en cultivares como "Camarosa". Además existen nuevas selecciones avanzadas nacionales con mayor resistencia a oidio y ácaros que "Yvahé" y nuevos cultivares introducidos del exterior que es necesario evaluar. El método de producción de plantas en bandeja de alvéolos o "plug plant" demanda menos demanda de mano de obra, sustrato y costos de transporte. La zona norte también dispone de infraestructura de invernaderos que podrían ser una alternativa a los túneles bajos por menor tiempo de manejo y mayores oportunidades de realizar operaciones en el cultivo. Durante tres campañas, entre 2006 y 2008, se investigó la influencia en el comportamiento productivo, vegetativo, fenológico y de calidad de fruta de tipos de planta con cepellón, la fecha de plantación, cultivares y sistemas de forzado y la interacción entre dichos factores. El cultivar ("Guenoa"), con maceta directa y trasplante a mediados de marzo, obtuvo los mejores resultados en producción, peso medio de fruto y estabilidad en la producción de invierno entre campañas. En "Camarosa" se encontraron mejoras en su comportamiento con maceta directa al retrasar el trasplante y también con el uso de plantas en bandejas, lográndose un mejor equilibrio entre precocidad y desarrollo de planta. La producción fue mayor con túnel bajo que en invernadero, aunque la influencia de los factores fue independiente del forzado. / Vicente Castro, CE. (2009). Bases para la utilización de plantas con cepellón como material de plantación del fresón: influencia de la fecha de plantación y los cultivares bajo cultivo protegido en el Litoral Norte de Uruguay [Tesis doctoral]. Universitat Politècnica de València. https://doi.org/10.4995/Thesis/10251/6477

Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario / La mortalidad embrionaria que se ha observado en condiciones de cultivo del pez dorado Seriola lalandi, puede ser mencionada entre los principales obstáculos que han frenado el desarrollo acuícola de esta especie en nuestro país. Esta mortalidad se relaciona a la pérdida de flotabilidad de los huevos y embriones tempranos, la cual se debería a la participación del mecanismo de apoptosis celular. Estudios previos demostraron una mayor expresión de moléculas que participan en la vía intrínseca de este proceso, en huevos y embriones de S. lalandi con bajo nivel de flotabilidad. Por lo tanto, en este trabajo se propuso determinar si en esta pérdida de flotabilidad participan también moléculas de la vía extrínseca, como el sistema Fas/FasL y Caspasa 8. Para esto, se evaluó mediante la técnica de Western Blot la expresión de las proteínas Fas y Fas-L y mediante RT-qPCR la expresión del ARNm de Caspasa 8 en embriones tempranos de S. lalandi clasificados como flotantes y no flotantes. La proteína Fas se expresó como una banda de 50 kDa en todos los estadios en las muestras flotantes. Sin embargo, en los no flotantes este receptor se detectó en tres bandas reactivas de 40, 50 y 65 kDa. FasL (44 kDa) sólo fue detectado en embriones flotantes de 24 horas, mientras que en las muestras no flotantes este ligando se detectó en todos los estadios con un aumento (p<0,05) en su expresión, en la medida que avanzó el desarrollo. Por otro lado, los mayores niveles (p<0,05) de ARNm de Caspasa 8 se observaron en embriones de 24 horas en las muestras flotantes y a partir del estado de gástrula en los no flotantes. Además, la expresión de Caspasa 8 fue mayor (p<0,05) en las muestras no flotantes, en comparación con las flotantes en todos los estadios del desarrollo. Estos resultados, confirman la presencia de moléculas de la vía extrínseca de la apoptosis en huevos y embriones tempranos de S. lalandi, con perfiles de expresión en las muestras no flotantes que representarían un estado pre-apoptótico de estas muestras. Sin embargo, se requieren estudios especie-específicos y complementarios para entender principalmente, la naturaleza del agente inductor de la activación de esta vía. Finalmente, se asume que existió una viabilidad funcional comparable entre las muestras flotantes y no flotantes en todos los estadios del desarrollo analizados, debido a que no se encontraron diferencias (p<0,05) en los valores promedio de Ct, entre estas muestras, de cuatro genes constitutivos (ACTB, 18S, GAPDH y MAP1β). / The embryonic mortality observed under captivity in the yelow-tail kingfish Seriola lalandi could be mentioned among the main obstacles that have avoided its aquaculture development in our country. This mortality has been related to low buoyancy of eggs and early embryos, which would be due to the participation of the apoptosis mechanism. Previous results in S. lalandi have demonstrated greater expression of apoptosis intrinsic pathway molecules in eggs and embryos with low buoyancy level. Therefore, this work aimed in to determine if molecules of the extrinsic pathway such as Fas/FasL system and Caspase 8 are involved in the buoyancy losing. For this, Fas/FasL system and Caspase 8 expression were evaluated in early embryos of S. lalandi previously classified as floating and non-floating, by Western Blot and RT-qPCR, respectively. Fas protein was expressed as a 50 kDa band in all floating developmental stages. However, in non-floating this receptor was detected in three reactive bands of 40, 50 and 65 kDa. FasL (44 kDa) was only detected in 24-hour floating embryos, whereas in the non-floating samples this ligand was detected in all stages with an increase (p<0,05) in its expression as development progressed. By other hand, the highest levels (p<0,05) of Caspase 8 mRNA were observed in 24 hours embryos in floating samples and from gastrula stage in the non-floating ones. In addition, Caspase 8 expression was higher (p<0,05) in non-floating than floating samples, in all developmental stages. These results confirm the presence of apoptosis extrinsic pathway molecules in eggs and early embryos of S. lalandi, which show expression profiles in the non-floating samples that could be interpreted as apoptotic pre-activation. However, species-specific studies are required to understand the nature of the apoptotic pathway trigger. Finally, a comparable viability between floating and non-floating samples used in this study could be assumed since no differences (p<0,05) in Ct value of constitutive genes (ACTB, 18S, GAPDH and MAP1 β) were detected these samples. / Proyecto Fondecyt 11140639.

Mutações no gene Hfe causam a forma mais comum da hemocromatose hereditária, doença caracterizada por acúmulo progressivo de ferro nos tecidos parenquimatosos. Um estudo prévio conduzido em nosso laboratório (Am J Cardiol 88(4):388-91, 2001) encontrou associação entre mutação do gene Hfe e cardiomiopatia isquêmica, sugerindo que o acúmulo de ferro no tecido cardíaco pode ser um fator que potencializa as agressões ao sistema cardiovascular. O objetivo do presente trabalho foi testar a hipótese de que o ferro aumenta a susceptibilidade ao risco cardiovascular. A análise de dados de 318 pacientes seguidos durante 10 anos indicou que variantes genéticas do Hfe estão associadas com maior mortalidade em pacientes com insuficiência cardíaca de diferentes etiologias. Em seguida, verificou-se o acúmulo de ferro no coração, aorta e fígado ao longo de 1, 3, 6 e 12 meses em camundongos FVB. Para mimetizar os efeitos deletérios do ferro no ser humano, validamos proteínas envolvidas no metabolismo do ferro em camundongos e tratamos os animais com 10 mg diárias de ferro dextrano durante 4 semanas. Os resultados sem a sobrecarga de ferro já apontaram acúmulo de ferro significativo no coração e no fígado ao longo de 12 meses de vida, consistente com a ideia de aumento progressivo de risco cardiovascular associado ao envelhecimento. A sobrecarga de ferro foi associada com maior mortalidade e deterioração da função cardíaca. Os camundongos tratados com ferro apresentaram diminuição da fração de ejeção, redução da espessura do septo, maior remodelamento cardíaco e aumento do volume nuclear dos cardiomiócitos. Para entender as modulações gênicas causadas pelo ferro no coração, foi medida a expressão dos transcritos primários de mRNA relativo para os genes Hfe e para a hepcidina, encontrando-se ambos os genes significativamente menos expressos nos animais tratados com ferro em comparação ao grupo que só recebeu salina. Por fim, com o intuito de estudar em condições mais controladas o comportamento cardíaco frente à sobrecarga de ferro, foram comparados dois protocolos de extração primária de cardiomiócitos ventriculares de ratos neonatos para testes farmacológicos com ferro in vitro. O enriquecimento de cardiomiócitos in vitro se estabeleceu por dois métodos: separação por gradiente de percoll (Per) e por uma pré-seleção nomeada pre plating (PP). As células cardíacas foram mantidas por 8 dias em cultura e avaliações do metabolismo, produção de espécies reativas de oxigênio e contratilidade foram medidas. Ambos os métodos foram eficientes para a obtenção de células cardíacas, entretanto, as células extraídas por protocolo PP apresentaram metabolismo aumentado, com maior consumo de glicose e produção de lactato. Por diferentes parâmetros testados o protocolo PP apresentou maior estresse oxidativo, porém sem modular a quantidade de glutationas reduzidas e oxidadas. Notadamente, o protocolo PP apresentou maior atividade contrátil com aumento dos batimentos e maior influxo intracelular de cálcio. Células cardíacas extraídas pelo método PP foram tratadas com citrato de amônia férrico com doses de 50 ?g/mL e 100 ?g/mL e, após 24 horas, foi possível observar aumento significativo de apoptose. Desta forma, os modelos celulares em questão apresentam-se como importantes ferramentas para a identificação de mecanismos moleculares e celulares associados aos efeitos deletérios causados pelo ferro. Em conjunto, os resultados do presente trabalho apoiam a hipótese de que o acúmulo de ferro no tecido cardíaco aumenta a susceptibilidade cardiovascular. Trabalhos futuros permitirão melhor compreensão dos mecanismos envolvidos no acúmulo de ferro no coração ao longo do envelhecimento em pacientes com insuficiência cardíaca / Mutations in Hfe gene lead to the most common form of hereditary hemochromatosis, an autosomal recessive disease associated with iron accumulation in parenchymal tissues. In a previous study conducted in our laboratory (Am J Cardiol 88(4):388-91, 2001), genetic variation in the Hfe gene was associated with ischemic cardiomyopathy, suggesting that higher cardiac concentrations of iron aggravates injuries on the cardiovascular system. The aim of the present study was to test the hypothesis that iron increases susceptibility to cardiovascular risk. Analysis of data from 318 patients with 10-year follow-up showed that genetic variation in the Hfe gene was associated with higher mortality among patients with heart failure due to cardiomyopathy of different etiologies. Next, we demonstrated iron accumulation in heart, aorta, and liver in mice (FVB background) aged 1, 3, 6, and 12 months. To mimic the deleterious effect of iron observed in humans, we validated proteins playing a major role in iron metabolism and treated mice with 10 mg of iron-dextran daily for 4 weeks. Results showed that even without iron overload there is significant iron accumulation in the heart and liver with time, at 12 months of age, consistent with the idea that there is a progressive age-related increase in cardiovascular risk. Iron overload was associated with higher mortality in mice and impairment of cardiac function; in response to iron treatment ejection fraction and septum thickness were reduced, while cardiac remodeling and myocyte nuclear volume were increased. To understand the underlying mechanisms associated with iron-mediated modulation of genes in the heart, we assessed Hfe and hepcidin mRNA expression and found that these genes were significantly less expressed in iron-treated animals compared with the saline solution group. Lastly, to study cardiac behavior in the face of iron overload under well-controlled conditions we compared two protocols for primary extraction of neonatal rat cardiomyocytes for in vitro pharmacological tests: Percoll (Per) and pre plating (PP) extraction methods. Cardiac cells were used after 8 days and we measured metabolism, ROS production, and contractility. Both methods were effective in obtaining a high yield of cardiomyocytes. Nevertheless, cells extracted using PP protocol presented higher metabolic rate, as suggested by increased lactate production and glycolysis rate. In the PP protocol there was an increased oxidative stress, notwithstanding without modulating the amount of oxidized and reduced glutathione peroxidase. Notably, we found an increased contractile activity for pre-platting-prepared cells, with increased beating rate and higher calcium influx. Cardiac cells extracted by PP exposed to ferric ammonium citrate with doses of 50?g/mL and 100?g/mL, after 24 hours, displayed significant increased apoptosis. The cell models examined can be considered important tools for the identification of cell and molecular mechanisms associated with the harmful effects caused by iron. Taken together, the results of the present study support the hypothesis that cardiac tissue iron accumulation increases cardiovascular susceptibility. Further studies will help to unravel the mechanisms involved in cardiac iron accumulation throughout the aging process in patients with heart failure

Esta publicación busca presentar las metodologías utilizadas para la obtención de anticuerpos monoclonales, desde el cultivo celular de líneas llamadas hibridomas, mediante la criopreservación, la adaptación a distintos medios de cultivo, la amplificación celular, la cosecha de anticuerpos monoclonales y la criopreservación. Asimismo, este libro explica las técnicas empleadas para el proceso de purificación como son la evaluación del punto de producción de anticuerpos, la purificación de los anticuerpos empleando resinas y sistemas de cromatografia, la desalinización y la obtención de niveles de pureza aceptables. Se especifica que el objetivo central es emplear dichos anticuerpos en el desarrollo de futuros procedimientos de diagnóstico como ensayos de ELISA y desarrollo de prototipos de pruebas inmunocromatográficas. Los anticuerpos monoclonales desarrollados fueron dirigidos contra una proteína del virus de la laringotraqueitis infecciosa aviar el cual es un patógeno que tiene un impacto sobre la producción avícola mundial. Esta investigación desarrolla los métodos empleados por la empresa FARVET en el marco de un proyecto de investigación cofinanciado por el Instituto Nacional de Innovación Agraria (INIA).

Mutações no gene Hfe causam a forma mais comum da hemocromatose hereditária, doença caracterizada por acúmulo progressivo de ferro nos tecidos parenquimatosos. Um estudo prévio conduzido em nosso laboratório (Am J Cardiol 88(4):388-91, 2001) encontrou associação entre mutação do gene Hfe e cardiomiopatia isquêmica, sugerindo que o acúmulo de ferro no tecido cardíaco pode ser um fator que potencializa as agressões ao sistema cardiovascular. O objetivo do presente trabalho foi testar a hipótese de que o ferro aumenta a susceptibilidade ao risco cardiovascular. A análise de dados de 318 pacientes seguidos durante 10 anos indicou que variantes genéticas do Hfe estão associadas com maior mortalidade em pacientes com insuficiência cardíaca de diferentes etiologias. Em seguida, verificou-se o acúmulo de ferro no coração, aorta e fígado ao longo de 1, 3, 6 e 12 meses em camundongos FVB. Para mimetizar os efeitos deletérios do ferro no ser humano, validamos proteínas envolvidas no metabolismo do ferro em camundongos e tratamos os animais com 10 mg diárias de ferro dextrano durante 4 semanas. Os resultados sem a sobrecarga de ferro já apontaram acúmulo de ferro significativo no coração e no fígado ao longo de 12 meses de vida, consistente com a ideia de aumento progressivo de risco cardiovascular associado ao envelhecimento. A sobrecarga de ferro foi associada com maior mortalidade e deterioração da função cardíaca. Os camundongos tratados com ferro apresentaram diminuição da fração de ejeção, redução da espessura do septo, maior remodelamento cardíaco e aumento do volume nuclear dos cardiomiócitos. Para entender as modulações gênicas causadas pelo ferro no coração, foi medida a expressão dos transcritos primários de mRNA relativo para os genes Hfe e para a hepcidina, encontrando-se ambos os genes significativamente menos expressos nos animais tratados com ferro em comparação ao grupo que só recebeu salina. Por fim, com o intuito de estudar em condições mais controladas o comportamento cardíaco frente à sobrecarga de ferro, foram comparados dois protocolos de extração primária de cardiomiócitos ventriculares de ratos neonatos para testes farmacológicos com ferro in vitro. O enriquecimento de cardiomiócitos in vitro se estabeleceu por dois métodos: separação por gradiente de percoll (Per) e por uma pré-seleção nomeada pre plating (PP). As células cardíacas foram mantidas por 8 dias em cultura e avaliações do metabolismo, produção de espécies reativas de oxigênio e contratilidade foram medidas. Ambos os métodos foram eficientes para a obtenção de células cardíacas, entretanto, as células extraídas por protocolo PP apresentaram metabolismo aumentado, com maior consumo de glicose e produção de lactato. Por diferentes parâmetros testados o protocolo PP apresentou maior estresse oxidativo, porém sem modular a quantidade de glutationas reduzidas e oxidadas. Notadamente, o protocolo PP apresentou maior atividade contrátil com aumento dos batimentos e maior influxo intracelular de cálcio. Células cardíacas extraídas pelo método PP foram tratadas com citrato de amônia férrico com doses de 50 ?g/mL e 100 ?g/mL e, após 24 horas, foi possível observar aumento significativo de apoptose. Desta forma, os modelos celulares em questão apresentam-se como importantes ferramentas para a identificação de mecanismos moleculares e celulares associados aos efeitos deletérios causados pelo ferro. Em conjunto, os resultados do presente trabalho apoiam a hipótese de que o acúmulo de ferro no tecido cardíaco aumenta a susceptibilidade cardiovascular. Trabalhos futuros permitirão melhor compreensão dos mecanismos envolvidos no acúmulo de ferro no coração ao longo do envelhecimento em pacientes com insuficiência cardíaca / Mutations in Hfe gene lead to the most common form of hereditary hemochromatosis, an autosomal recessive disease associated with iron accumulation in parenchymal tissues. In a previous study conducted in our laboratory (Am J Cardiol 88(4):388-91, 2001), genetic variation in the Hfe gene was associated with ischemic cardiomyopathy, suggesting that higher cardiac concentrations of iron aggravates injuries on the cardiovascular system. The aim of the present study was to test the hypothesis that iron increases susceptibility to cardiovascular risk. Analysis of data from 318 patients with 10-year follow-up showed that genetic variation in the Hfe gene was associated with higher mortality among patients with heart failure due to cardiomyopathy of different etiologies. Next, we demonstrated iron accumulation in heart, aorta, and liver in mice (FVB background) aged 1, 3, 6, and 12 months. To mimic the deleterious effect of iron observed in humans, we validated proteins playing a major role in iron metabolism and treated mice with 10 mg of iron-dextran daily for 4 weeks. Results showed that even without iron overload there is significant iron accumulation in the heart and liver with time, at 12 months of age, consistent with the idea that there is a progressive age-related increase in cardiovascular risk. Iron overload was associated with higher mortality in mice and impairment of cardiac function; in response to iron treatment ejection fraction and septum thickness were reduced, while cardiac remodeling and myocyte nuclear volume were increased. To understand the underlying mechanisms associated with iron-mediated modulation of genes in the heart, we assessed Hfe and hepcidin mRNA expression and found that these genes were significantly less expressed in iron-treated animals compared with the saline solution group. Lastly, to study cardiac behavior in the face of iron overload under well-controlled conditions we compared two protocols for primary extraction of neonatal rat cardiomyocytes for in vitro pharmacological tests: Percoll (Per) and pre plating (PP) extraction methods. Cardiac cells were used after 8 days and we measured metabolism, ROS production, and contractility. Both methods were effective in obtaining a high yield of cardiomyocytes. Nevertheless, cells extracted using PP protocol presented higher metabolic rate, as suggested by increased lactate production and glycolysis rate. In the PP protocol there was an increased oxidative stress, notwithstanding without modulating the amount of oxidized and reduced glutathione peroxidase. Notably, we found an increased contractile activity for pre-platting-prepared cells, with increased beating rate and higher calcium influx. Cardiac cells extracted by PP exposed to ferric ammonium citrate with doses of 50?g/mL and 100?g/mL, after 24 hours, displayed significant increased apoptosis. The cell models examined can be considered important tools for the identification of cell and molecular mechanisms associated with the harmful effects caused by iron. Taken together, the results of the present study support the hypothesis that cardiac tissue iron accumulation increases cardiovascular susceptibility. Further studies will help to unravel the mechanisms involved in cardiac iron accumulation throughout the aging process in patients with heart failure

En esta Tesis Doctoral se estudió el proceso de regulación de la maduración externa de los frutos cítricos, con el objetivo de determinar los factores endógenos y exógenos que lo afectan. Los factores hormonales y nutricionales implicados en el proceso, se estudiaron: a) en cultivares de naranjos y mandarinos de maduración temprana, intermedia y tardía, y b) modificando el proceso en etapas próximas al cambio de color, mediante aplicaciones de reguladores de crecimiento y sustancias nitrogenadas, o interrumpiendo la conexión floemática entre el fruto y la planta (anillado de pedúnculo). El estudio de los factores exógenos (temperatura del aire y del suelo) se realizó en mandarinos de maduración temprana, a través de la disminución de la temperatura radicular cubriendo el suelo con mallas o cal, y su asociación con la temperatura del aire. Las principales conclusiones resultantes de este trabajo fueron: - Las giberelinas GA1 y GA4 deben exportarse desde el flavedo de los frutos para permitir el cambioa de color. - La aplicación de GA3 no solo retarda la pérdida de clorofilas, sino que reduce la concentración de pigmentos carotenoides coloreados (&-criptoxantina, cisviolaxantina y &-citraurina) y aumenta la de pigmentos propios de los frutos verdes (&-caroteno y luteína) a lo largo de todo el período de maduración. - Con el cambio de color se incrementa la concentración de ABA en el flavedo, pero éste no es el de promotor del proceso. - Se verifica una relación inversa entre el color y la concentración de nitrógeno en el flavedo en condiciones in vivo. Las evidencias de que el incremento de GAs es, por una parte, la señal endógena primaria que limita el cambio de color y promueve, por otra, el incremento del N endógeno, permiten postular un papel subsidiario de éste en el proceso de la maduración externa de los frutos cítricos. / Gambetta Romaso, MG. (2009). Control endógeno y exógeno de la maduración externa de los frutos cítricos [Tesis doctoral]. Universitat Politècnica de València. https://doi.org/10.4995/Thesis/10251/7584

Los Prunus tienen tendencia a cuajar muchos frutos, lo que reduce las posibilidades de obtener frutos con buen tamaño y calidad. Esta tesis doctoral describe una técnica agronómica basada en la aplicación de ácido giberélico (GA3), para reducir la floración y los costos de aclareo manual en cultivares de Prunus. También se estudian las implicaciones de los frutos y los inhibidores de la síntesis de giberelinas (Paclobutrazol, prohexadione-Ca) en el proceso de la floración. Complementariamente, se estudiaron los requerimientos de temperatura para la brotación y floración, y su dependencia de los contenidos en carbohidratos (CH). La aplicación de GA3 durante el período de inducción floral redujo la floración en unos 40%-50% en melocotones, nectarinas y ciruelos, siendo 50 mg 1-1 la dosis más adecuada de GA3. El tratamiento afectó la distribución de las flores a lo largo del ramo y algunos aspectos de la eficiencia del PSII. Se comprobó un efecto inhibidor del fruto sobre el proceso de floración, directamente mediante la reducción del número de yemas florales (YF), e indirectamente reduciendo el número de brotes en desarrollo. De ahí que se proponga la hipótesis de que la floración no es un proceso inductivo, sino más bien un proceso inhibitorio. Tanto el contenido de CH del floema de brotes y de raíces fibrosas, no ha podido relacionarse con el proceso de iniciación floral, aunque sí con los requerimientos energéticos para brotar. Sin embargo, se han encontrato evidencias de algunas perturbaciones en el proceso de reducción del ión nitrato en árboles con escasa tendencia a florecer. Los experimentos sobre varetas, demostraron que el frío promueve la brotación de yemas vegetativas (YV) y YF, siendo mayor el efecto sobre las primeras. Una gran acumulación de frío disminuye el porcentaje la brotación de las YF en cultivares con bajos requerimientos de frío disminuyendo el tiempò medio de brotación (MTB) de YV más rápidamente que el de YF. Se demuestra que existe una corr / González Rossia, DE. (2006). Control de la floración en el género prunus. Factores climáticos y nutricionales [Tesis doctoral]. Universitat Politècnica de València. https://doi.org/10.4995/Thesis/10251/1827

No hay suficientes datos sobre el porcentaje de pérdidas poscosecha durante el manejo de la fresa en la región de Irapuato, ni de los principales factores que reducen la calidad de la fruta. Por lo que el objetivo de este trabajo fue estimar los daños físicos y evaluar la calidad de la fresa durante el manejo poscosecha y el transporte simulado, así como identificar los principales factores que la afectan. Para ello, se procedió a cuantificar las pérdidas en el proceso de producción-expedición de las fresas de la variedad Chandler y Camarosa, así como a evaluar el efecto del manejo sobre la calidad de las fresas durante la recolección, la comercialización y la venta al detalle. Se identificaron los daños y defectos mediante una evaluación visual y se determinó el porcentaje en peso de fresa con daños y defectos. Se estimaron los daños por transporte simulado y la calidad de las fresas sometidas a vibración con tres frecuencias (8 Hz, 12 Hz y 18 Hz) en una plataforma de vibración. Los factores que afectaron la calidad de las fresas fueron: a). El daño mecánico infringido por los propios trabajadores durante la recolección. b). La manipulación excesiva y las altas temperaturas que prevalecen, provocando el suavizamiento de la piel haciéndola más susceptible a los daños, al oscurecimiento del color y a la pérdida de agua que provoca que luzca marchita. c). El transporte que provocó abrasiones y magulladuras. El parámetro de calidad más indicativo del daño mecánico de las fresas fue la firmeza, sin embargo, también se afectó el valor nutricional (contenido de vitamina C), el dulzor (contenido de azúcares), y el peso (contenido de humedad). Por lo que se recomienda implementar un programa de capacitación a los trabajadores para reducir las pérdidas poscosecha de las fresas en la región de estudio. / Alcántara González, MDL. (2009). Estimación de los daños físicos y evaluación de la calidad de la fresa durante el manejo poscosecha y el transporte simulado [Tesis doctoral]. Universitat Politècnica de València. https://doi.org/10.4995/Thesis/10251/6473