Made available in DSpace on 2016-08-10T10:54:02Z (GMT). No. of bitstreams: 1 SOLANGE MARIA SEIXAS MARTINS.pdf: 6696788 bytes, checksum: 209fdfa09ac23f069a02890863dae15d (MD5) Previous issue date: 2012-03-05 / The growing demand and insufficiently structured health care network for emergency hospital care has contributed to the overload of these services, making them one of the most problematic areas in the Brazilian health system. A caring and welcoming triage protocol in the hospital emergency room, stands out among the guidelines proposed in Brazilian public policies to address this issue. In this context, we developed a qualitative case study aiming to describe the perception of patients and nurses concerning to the triage of patients in the emergency room service in Goiânia, GO, Brazil. A total of 19 nurses and 21 patients participated in the study. Data were collected from November 2010 to April 2011 through participant observation and semi-structured interviews. The analysis and interpretation of data revealed that the meanings held by the participants concerning to the implementation of a caring and welcoming triage protocol were related to the transformation of the care model and to the limitations and challenges faced in emergency care services. The participants mentioned that before this protocol was implemented, the emergency service was characterized by long wait lines, overcrowding, disorganized service flow, and deaths during waiting in lines. The delayed service, its poor problem-solving capacity, lack of consistency with patient needs, and the presence of work overload were identified as factors that created frustrations not only to the service users but also to the health professionals. organization, priority treatment, efficiency and, consequently, improved quality of care. The limitations and challenges of this protocol implementation are related to promote a caring and welcoming reception in a more respectful way at the emergency room, which involves time, and a greater availability to see, listen, and inform users. The nurses noted the need for continuing education to improve technical competencies (triage protocol) and human skills (welcoming) to care. Among the difficulties mentioned were the lack of capability to problem-solving in ambulatory emergency care, which is hard for the professional during the triage protocol to refer the patient to this service. The outcomes suggested that the protocol enabled the organization and definition of access to the service according to levels of priority. There are, however, many challenges to implementing a welcoming and humanized care provided to people who require emergency care in the hospital and pre-hospital environments. / A crescente demanda e a insuficiente estruturação da rede de atenção às urgências hospitalares têm contribuído para a sobrecarga destes serviços, transformando-os em uma das áreas mais problemática do sistema de saúde brasileiro. Entre as diretrizes propostas pelas políticas públicas brasileiras para solução desta problemática destaca-se o Acolhimento com Avaliação e Classificação de Risco. Neste contexto, optou-se por desenvolver um estudo de caso qualitativo com o objetivo de descrever a perspectiva de usuários e enfermeiros sobre o Acolhimento com Avaliação e Classificação de Risco em um serviço de urgência e emergência hospitalar em Goiânia, Goiás. Participaram 19 enfermeiros e 21 usuários. Os dados foram coletados de novembro de 2010 a abril de 2011, por meio de observação direta e entrevistas semi-estruturadas. A partir da análise e interpretação dos dados, constatou-se que os sentidos atribuídos pelos participantes para a implementação do acolhimento com avaliação e classificação de risco relacionaram-se à transformação do modelo assistencial e aos limites e desafios para o serviço de urgência. Os participantes mencionaram que antes da implantação deste protocolo, o serviço de urgência e emergência hospitalar era caracterizado por longas filas de espera, superlotação, desorganização do fluxo de atendimento, pessoas que morriam na fila. A demora no atendimento, a baixa resolutividade, a falta de atendimento condizente às necessidades dos usuários e a sobrecarga de trabalho foram mencionados como fatores geradores de frustração não apenas para os usuários, mas também para os enfermeiros. As mudanças foram percebidas de modo positivo e estiveram relacionadas à organização do serviço, ao tipo de atendimento, à eficiência da equipe e, conseqüentemente, à melhor atenção ao usuário. Os limites e desafios para implementação do protocolo referem-se à promoção do efetivo acolhimento que envolve tempo, maior disponibilidade para ver, ouvir e informar o usuário. Os enfermeiros destacaram a necessidade do processo de educação continuada para o aprimoramento de competências e habilidades técnicas (avaliação com classificação de risco) e humanas (acolhimento) para cuidar. Entre as dificuldades mencionaram a falta de resolutividade do serviço de urgência pré-hospitalar fixo (atenção básica), o que prejudica o encaminhamento resolutivo para a rede básica de urgência (contra-referência). Os resultados sugerem que o protocolo trouxe organização e definição do acesso ao serviço por nível de prioridade. No entanto, ainda são muitos os desafios para o acolhimento e a humanização do cuidar de pessoas que requerem atendimento de urgência no âmbito hospitalar e pré-hospitalar.

O objetivo do presente estudo foi estimar a especificidade e taxa de falso-positivo de protocolos de triagem auditiva neonatal (TAN), realizados com os procedimentos emissões otoacústicas evocadas transientes-módulo triagem (EOAet) e potenciais evocados auditivos de tronco encefálico automático (PEATEa), de forma isolada ou combinada, aplicados em uma ou duas etapas. Participaram deste estudo 200 recém-nascidos, selecionados aleatoriamente, submetidos à triagem auditiva, no período entre Março/2006 e Julho/2006. A estimativa da taxa de falso-positivo e da especificidade foi realizada com a TAN em uma etapa e com três protocolos: protocolo 1, TAN realizada em duas etapas com EOAet; protocolo 2, TAN realizada em duas etapas com PEATEa; e protocolo 3, TAN realizada em uma etapa com dois procedimentos - teste com EOAet seguido de reteste com PEATEa para os recém-nascidos que não passaram no primeiro procedimento. Os resultados mostraram alta taxa de falso-positivo na triagem auditiva realizada em uma etapa para ambos os procedimentos. Apesar de não ter havido diferença estatisticamente significante quando comparadas as taxas de encaminhamento para diagnóstico audiológico obtidos nos protocolos com EOAet e com PEATEa, o protocolo com EOAet encaminhou 4 vezes mais recém-nascidos. O protocolo com EOAet e PEATEa apresentou a maior taxa de encaminhamento (6%), com diferença estatisticamente significante ao ser comparado com os protocolos 1 (EOAet) e 2 (PEATEa). Concluiu-se que a triagem auditiva neonatal deve ser realizada em duas etapas (teste-reteste), a fim de reduzir a taxa de falso-positivo e de encaminhamento, aumentando a especificidade; a taxa de falso-positivo e conseqüentemente a especificidade foram melhores no protocolo com PEATEa, seguido dos protocolos com EOAet e com EOAet e PEATEa. / O objetivo do presente estudo foi estimar a especificidade e taxa de falso-positivo de protocolos de triagem auditiva neonatal (TAN), realizados com os procedimentos emissões otoacústicas evocadas transientes-módulo triagem (EOAet) e potenciais evocados auditivos de tronco encefálico automático (PEATEa), de forma isolada ou combinada, aplicados em uma ou duas etapas. Participaram deste estudo 200 recém-nascidos, selecionados aleatoriamente, submetidos à triagem auditiva, no período entre Março/2006 e Julho/2006. A estimativa da taxa de falso-positivo e da especificidade foi realizada com a TAN em uma etapa e com três protocolos: protocolo 1, TAN realizada em duas etapas com EOAet; protocolo 2, TAN realizada em duas etapas com PEATEa; e protocolo 3, TAN realizada em uma etapa com dois procedimentos - teste com EOAet seguido de reteste com PEATEa para os recém-nascidos que não passaram no primeiro procedimento. Os resultados mostraram alta taxa de falso-positivo na triagem auditiva realizada em uma etapa para ambos os procedimentos. Apesar de não ter havido diferença estatisticamente significante quando comparadas as taxas de encaminhamento para diagnóstico audiológico obtidos nos protocolos com EOAet e com PEATEa, o protocolo com EOAet encaminhou 4 vezes mais recém-nascidos. O protocolo com EOAet e PEATEa apresentou a maior taxa de encaminhamento (6%), com diferença estatisticamente significante ao ser comparado com os protocolos 1 (EOAet) e 2 (PEATEa). Concluiu-se que a triagem auditiva neonatal deve ser realizada em duas etapas (teste-reteste), a fim de reduzir a taxa de falso-positivo e de encaminhamento, aumentando a especificidade; a taxa de falso-positivo e conseqüentemente a especificidade foram melhores no protocolo com PEATEa, seguido dos protocolos com EOAet e com EOAet e PEATEa.

As concepções de moduladores da dinâmica dos microtúbulos, que levam ao bloqueio do ciclo celular, e de bloqueadores de canais de cálcio tipo L (Cav), tais como o 1,4-di-hidropiridinas e análogos, que diminuem a resistência do organismo humano aos tratamentos quimioterápicos através da inibição da proteína de transmembrana P-gp, são estratégias importantes tanto para terapias antitumorais quanto para leishmanicida. Esta abordagem tem mostrado resultados interessantes na diminuição da resistência à quimioterapia em câncer chamada de MDR (do inglês Multi Drug Resistence), além de também serem uma estratégia importante para controlar a fase inicial da leishmaniose. Diante desse contexto, e baseado no estudo de Ueki 2013 e colaboradores que, a partir de estudos anteriores, os quais relatam a superexpressão das enzimas estona deacetilase (HDAC) e catepsina L (CTSL) em células tumorais, propuseram um pró-fármaco seletivo, planejado a partir de um espaçador de lisina acetilada, que garante a liberação do fármaco seletivamente nas células tumorais, trabalhamos no desenvolvimento de uma nova proposta de pró-fármaco trifuncional. Nossa proposta foi desenvolvida a partir de estudos de triagem virtual, baseados em ligantes e em estrutura, predição das propriedades farmacocinéticas e toxicológicas (ADME/Tox) e também técnicas de bioinformática para a construção de um modelo de canal de cálcio, devido à inexistência de estruturas, do mesmo, que estivessem depositadas no banco de dados de proteínas PDB (Protein Data Bank). Paralelamente, nosso grupo de síntese colaborador sintetizou, através de técnicas de \"Click Chemistry\" e reações de Mitsunobu multicomponentes, uma biblioteca de novos híbridos trifuncionais, os quais, após estudos de atividade biológica, foram avaliados (in silico) frente à estrutura da tubulina, e os compostos mais promissores desta biblioteca serviram de base para novos estudos de triagem virtual. Para a obtenção dos nossos hits, executamos 4 estratégias de triagem virtual, separadas em 2 tarefas. Ao final, selecionarmos um total 59 hits, dos quais, 9 hits apresentam promissoras atividades bloqueadoras do canal de cálcio e 65 hits apresentam promissoras atividades moduladoras da tubulina. Estes hits seguem em estágio de compra e ensaios in vitro e após comprovada a eficácia dos mesmos, estes futuramente farão parte de uma nova proposta de pró-farmaco trifuncional. / The concepts of modulating microtubule dynamics, and calcium channel L-types (CAV) blockers are important strategies for anticancer and antileishmanial therapies. Microtubule modulators that blocks the cell cycle and the calcium channel blockers, such as, 1,4-dihydropyridines and analogues, reduce the resistance of the human body to chemotherapeutic treatments by inhibiting transmembrane P-gp protein. This approach has shown interesting results in reduced resistance to chemotherapy in cancer called MDR (Multi Drug Resistance), and an important strategy for controlling the early stage of leishmaniasis. In this context, we work to develop a new proposal for trifunctional prodrug. We have based on the study of Ueki 2013 and collaborators, which, from earlier studies with reported overexpression of both deacetylase estona enzymes (HDACs) and cathepsin L (CTSL) in tumor cells, proposed a selective prodrug. We considering an acetylated lysine link/spacer, which ensures the release of the drug selectively in tumor cells, have now designed this selective prodrug. Our proposal was developed from virtual screening studies, based on ligands and structure, prediction of pharmacokinetic and toxicological properties (ADME / Tox) and also bioinformatics techniques for the construction of a calcium channel model, due to the inexistence of Structures of the same that were deposited in the database of proteins PDB (Protein Data Bank). At the same time, our collaborating synthesis group synthesized, through Click Chemistry techniques and Mitsunobu multicomponent reactions, a library of new trifunctional hybrids, which, after studies of biological activity, were evaluated (in silico) against the structure of tubulin , And the most promising compounds from this library served as the basis for further virtual screening studies. To obtain our hits, we performed 4 virtual screening strategies, separated into 2 tasks. In the end, we selected 59 hits, of which 9 hits show promising calcium channel blocking activities and 65 hits show promising tubulin modulating activities. These hits follow in vitro purchase and testing, and after proven effectiveness, they will be part of a new tri prodrug proposal.

Objetivo. A desnutrição em indivíduos hospitalizados tem apresentado elevada prevalência no Brasil e no mundo e é conseqüência de uma série de fatores. O presente trabalho teve por objetivo estudar os fatores associados ao risco de desnutrição em adultos hospitalizados. Casuística e Métodos. Foi um estudo transversal e a amostra constituída por 300 indivíduos hospitalizados com idade de 18 a 64 anos, sorteados na listagem de internação das ultimas 48 horas. Foram conduzidos dois modelos de regressão logística múltipla, adotando-se a desnutrição como variável dependente. O diagnóstico do estado nutricional foi obtido com uma avaliação nutricional completa. No primeiro modelo, foram selecionadas e incluídas todas variáveis de interesse e que apresentaram nível de significância de 20por cento (p<0,20). No segundo modelo, as variáveis mais fortemente associadas no primeiro foram retiradas com o objetivo de avaliar outros fatores. A partir das variáveis estudadas, foram desenvolvidos e propostos dois instrumentos de triagem nutricional. Resultados. No primeiro modelo, as variáveis associadas à desnutrição foram perda de peso recente, ossatura aparente, redução de apetite, diarréia, ingestão energética inadequada e sexo masculino. Perda de peso (odds ratio de 58,03 e p<0,001) e ossatura aparente (odds ratio de 47,62 e p<0,001) foram os fatores mais fortemente associados. No segundo modelo, as variáveis associadas foram redução de apetite, sexo masculino, mudança recente na alimentação, presença de dor que prejudica a alimentação, câncer e internações hospitalares no último ano. A partir das variáveis significativas (p<0,05) e dos coeficientes de regressão obtidos na análise estatística, foram propostos dois instrumentos de triagem nutricional (TRINUT 1 e TRINUT 2). Com o objetivo de avaliar instrumentos de triagem nutricional, analisou-se a concordância de três instrumentos disponíveis na literatura e os propostos, adotando-se a avaliação nutricional completa como padrão ouro. Observou-se adequada concordância de todos os instrumentos e os de melhor concordância foram o MST (Malnutrition Screening Tool) (k=0,84) e o TRINUT 1 (k=0,86). Conclusões. Conclui-se que a triagem nutricional é o primeiro passo para o atendimento ao indivíduo hospitalizado, deve ser adotado por hospitais e seu desenvolvimento deve ser realizado a partir da identificação dos fatores associados ao risco de desnutrição na população / Malnutrition in hospitalized patients has shown a high prevalence in Brazil and in the world and is consequence of several factors. The objective of this study was to assess the factors associated with risk of malnutrition in hospitalized adult patients. It was a cross-sectional study with a sample composed by 300 hospitalized adults patients, ranging from 18 and 64 years of age. Two multiple logistic regression were conducted, with malnutrition established as the dependent variable. Nutritional status was assessed by a full nutritional assessment. In the first model, all variables of interest and with a statistical significance of 20per cent (p<0,20), tested by a simple analysis, were included. In second model, stronger variables associated in the first model were excluded, with the intention of assessing others variables with malnutrition. The variables associated with malnutrition in the first model were recent loss weight, apparent ossature, decreased appetite, diarrhea, inadequate energy intake and male sex. Weight loss (odds ratio 58,03; p<0,001) and apparent ossature (odds ratio 47,62; p<0,001) were strongest risks factors. In the second model, the variables associated were decreased appetite, male sex, recent change intake, pain while eating, cancer and hospitalization during last year. Based on significant variables (p<0,05) and regression coefficients, two nutritional screening tools were proposed (TRINUT 1 and TRINUT 2). To assess nutritional screening tools, a concordance analysis was conducted with three tools available in published literature and the proposed tools, adopting the nutritional the full nutritional assessment as gold standard. The concordance analysis between all tools was adequate and stronger agreement was the MST (Malnutrition Screening Tool) (k=0,84) and TRINUT 1 (k=0,86). In conclusion, nutritional screening is the first step to attend hospitalized patients, should be used in hospitals and its development must be realized based on the identification of risk factors within the population

As enzimas, acetilcolinesterase (AChE) e ?-secretase1 (BACE1), são alvos validados para o tratamento da Doença de Alzheimer (DA) uma vez que atuam no sistema nervoso central contribuindo para o avanço da doença. Neste contexto, o interesse por inibidores destas enzimas e a busca por ensaios enzimáticos seletivos e eficazes tem importância crucial. Neste trabalho é descrito o desenvolvimento de metodologias on-line, em capilares de sílica fundida, e off-line, em esferas de agarose para triagem de ligantes envolvendo as enzimas AChE e BACE1 via imobilização e co-imobilização por ligação covalente. Nos métodos on-line, a imobilização da BACE1 e a co-imobilização das enzimas AChE e BACE1 em capilares de sílica fundida foram realizadas via ligação amino-glutaraldeído e as atividades das enzimas foram monitoradas on-line por cromatografia líquida de alta de eficiência e espectrometria de massa (CLAE-EM) através da medida das massas correspondentes aos produtos das clivagens enzimáticas. Nestes, foram possíveis se determinar os parâmetros cinéticos para as enzimas imobilizadas como; variações de pH e temperatura, as constantes cinéticas (KMap) e validação com inibidores padrão. Ressaltando também a aplicação na triagem de uma coleção de oito compostos sintéticos com identificação de dois compostos e a caracterização dos mesmos. Nos métodos off-line, a imobilização da AChE e da BACE1 em suportes de agarose foram realizadas partindo de diferentes tipos de ligação com grupos nucleófilos previamente ligados ao suporte. Os diferentes suportes de agarose com a AChE imobilizada foram estudados usando o propionato de p-nitrofenil como substrato por meio da medida da absorbância do produto formado p-nitrofenol a 348 nm. O sistema com a enzima imobilizada agarose-trietilamina-AChE (agarose-TEA-AChE) ótimo foi utilizado para validação do método para triagem de ligantes com o inibidor padrão sendo determinado os parâmetros cinéticos e termodinâmicos de inibição, tais como; potência inibitória (IC50), constante de inibição (Ki) e constante de dissociação (KD). Já para a enzima BACE1, a atividade enzimática foi monitorada por fluorescência a ?em= 495 nm (?ex= 395 nm) utilizando o substrato IV, sendo possível a seleção do melhor método para imobilização da BACE1. Em ambos os métodos, on-line e off-line, a imobilização foi eficiente refletindo na atividade de cada enzima após o processo. Os métodos para triagem desenvolvidos neste trabalho são inéditos para ambas as enzimas e reportam grandes avanços comparados aos ensaios já consolidados, uma vez que a co-imobilização contribuiu para a construção de um modelo de triagem inovador, sendo possível a avaliação das interações específicas de um ligante contra dois alvos biológicos em um mesmo sistema (CLAE-EM) automatizado. Ressaltando também que os métodos com a AChE e BACE1 em duas matrizes distintas forneceram modelos de ensaios com formatos diferentes que podem ser aplicados de acordo com as ferramentas analíticas disponíveis, desde as mais simples como espectrofotometria no UV-Vis, fluorescência, aos mais sofisticados e automatizados como CLAE-EM. / The enzymes, acetylcholinesterase (AChE) and ?-secretase1 (BACE1), are targets validated for the treatment of Alzheimer\'s Disease (AD) because they act in the central nervous system contributing to the disease advance. In this context, the interest in inhibitors of these enzymes and the search for selective and effective enzymatic assays is of crucial importance. This work describes the development of on-line methodologies, in fused silica capillaries, and off-line in agarose beads for screening ligands involving the AChE and BACE1 enzymes via immobilization and co-immobilization by covalent attachment. In the on-line methods the immobilization of BACE1 and co-immobilization of AChE and BACE1 enzymes in fused silica capillaries were performed via amino-glutaraldehyde bonding and the enzyme activities were monitored on-line employing high performance liquid chromatography and mass spectrometry (HPLC-MS) by measuring the masses corresponding to the products of the enzymatic cleavages. In these enabled the determination of kinetic parameters for immobilized enzymes such as; pH and temperature variations, kinetic constants (KMap) and validation with standard inhibitors. Also, the application in the screening of a collection of eight synthetic compounds with identification and characterizations of two compounds was carried out. In the off-line methods, the immobilizations of AChE and BACE1 on agarose supports were performed through different types of binding with nucleophilic groups previously attached to the support. The different active-agarose supports with immobilized AChE were studied using p-nitrophenyl propionate as substrate by measuring the absorbance of the product formed p-nitrophenol at 348 nm. The system with the immobilized enzyme optimal agarose-triethylamine-AChE (agarose-TEA-AChE) was used for validation of the method for screening ligands with the standard inhibitor being determined the kinetic and thermodynamic parameters of inhibition, such as; inhibitory power (IC50), inhibition constant (Ki) and dissociation constant (KD). For BACE1 enzyme, the enzymatic activity was monitored by fluorescence at ?em = 495 nm (?ex = 395 nm) using the substrate IV, and it was possible to select the best method for immobilization of BACE1. In both methods, both on-line and off-line, the immobilizations procedures were efficient reflecting on the activity of each enzyme after the process. The screening methods developed in this work are unprecedented for both enzymes and represent an improvement to the already consolidated screenings assays, because the co-immobilization contributed to the construction of an innovative screening model, being possible the evaluation of the specific interactions of a ligand against two biological targets in the same automated system. It is worth emphasizing that the AChE and BACE1 methods in two different matrices have provided models of assays in different format that can be applied according to the available analytical tools, from the simplest ones such as UV-Vis spectrophotometry, fluorescence, to the automated systems such as HPLC-MS.

A doença de Chagas, uma infecção parasitária amplamente distribuída na América Latina, é um problema grave de saúde pública com consequências devastadoras em termos de morbidade e mortalidade humana. O arsenal terapêutico contra a doença é bastante limitado e insuficiente em todos os aspectos clínicos. Visando o desenvolvimento de novos agentes antichagásicos, várias proteínas do parasita têm sido exploradas como alvos terapêuticos. Neste contexto, a enzima cruzaína, uma cisteíno protease envolvida nos estágios de desenvolvimento e diferenciação do Trypanosoma cruzi, foi selecionada para os nossos estudos, visando a identificação de inibidores através do uso do método de planejamento de fármacos baseado na estrutura do receptor (SBDD, do inglês, structure-based drug design). Esta metodologia engloba uma diversidade de estratégias, empregando estruturas cristalográficas de proteínas alvo, disponíveis usualmente no Protein Data Bank (PDB). Entre as técnicas modernas utilizadas no SBDD, destaca-se a triagem virtual baseada na estrutura do receptor (SBVS, do inglês, structure-based virtual screening), que possibilita a seleção de novos candidatos a ligantes de proteínas alvo, a partir de grandes bases de dados de compostos. No presente trabalho de dissertação, a seleção de 19 estruturas da enzima cruzaína, em complexo com ligantes, permitiu a aplicação de métodos de SBDD. Um conjunto com cerca de 3,4 milhões de compostos, com característica líder-similar (do inglês, lead-like), e outro conjunto com aproximadamente 450.000 compostos, com característica fragmento-similar (do inglês, fragment-like), foram coletados da base de dados ZINC. O programa DOCK 3.5.54 foi empregado na triagem virtual das bases de dados utilizando-se a estrutura cristalográfica PDB ID: 3KKU. Um subconjunto com 35.000 moléculas foi selecionado para estudos posteriores com os programas GOLD e Surflex. As 500 melhores moléculas selecionadas por cada um dos programas foram analisadas visualmente considerando-se diversas características estruturais dos subsítios da enzima cruzaína e dos ligantes (e.g., complementaridade molecular, flexibilidade, lipofilia do subsítio S2, presença de doadores e aceptores de hidrogênio entre os subsítios S2 e S1). Desta forma, um conjunto final de 18 compostos foi priorizado para os ensaios bioquímicos frente a enzima cruzaína. Destes 18 compostos, 6 apresentaram atividade inibitória frente a cruzaína, com destaque para os 2 mais promissores, com valores de IC50 (concentração de inibidor necessária para reduzir em 50% a atividade enzimática) de 20 &micro;M e 580 nM. O inibidor mais potente da série foi selecionado da base fragmento-similar e apresentou um valor de eficiência do ligante (EL) de 0,53 kcal/mol/átomo, considerado significativo para otimização em química medicinal. A integração de técnicas computacionais e experimentais permitiu a descoberta de ligantes com inovação estrutural, abrindo novas perspectivas para o planejamento de inibidores mais potentes e seletivos da enzima cruzaína de T. cruzi. / Chagas disease, a parasitic infection widely distributed in Latin America, is a serious public health problem with devastating consequences in terms of human morbidity and mortality. The therapeutic arsenal against the disease is very limited and insufficient in all clinical aspects. This has led to a new paradigm for the discovery of new agents that act on specific enzymes or metabolic pathways. The enzyme cruzain, a cysteine protease essential for the survival of the parasite Trypanosoma cruzi, has been selected in this work as an attractive target for the development of new inhibitors through the use of structure-based drug design (SBDD). This approach brings together a diversity of strategies, which employs crystal structures of target proteins, usually available in the Protein Data Bank (PDB). Structure-based virtual screening (SBVS), one of the most important techniques used in SBDD, allows the selection of new ligands of target proteins from large libraries of compounds. In this work, 19 crystal structures of the cruzain enzyme, in complex with ligands, allowed the application of SBDD methods. A data set of about 3.4 million compounds, with lead-like characteristics, and a second data set, with approximately 450,000 compounds, with fragment-like characteristics, were collected from the ZINC data base. The docking program DOCK 3.5.54 was employed in the virtual screening of the data sets using the crystal structure PDB ID: 3KKU. A subset of 35,000 compounds was selected for further studies with the programs GOLD and Surflex. The 500 top ranked molecules for each of the programs were visually inspected considering a number of structural characteristics of the subsites of the cruzain enzyme, as well as of the ligands (e.g., molecular complementarity, flexibility, the hydrophobic S2 subsite, and the presence of hydrogen donors and acceptors between the subsites S2 and S1). Thus, a final subset of 18 compounds was prioritized for the biochemical assays against the cruzain enzyme. Six out of 18 compounds exhibited enzyme inhibition, with the most two promising inhibitors having IC50 values (IC50 refers to the concentration of compound required for 50% inhibition of cruzain) of 20 &micro;M e 580 nM. The most potent inhibitor of the series was selected from the fragment-like data set and showed a ligand efficiency of 0,53 kcal/mol/atom, which is considered significant in drug design. The integration of computational and experimental approaches allowed the discovery of compounds with innovative structures, providing new perspectives for the design of inhibitors of T.cruzi cruzain having increased potency and selectivity.

INTRODUÇÃO: O diagnóstico do estado nutricional por rastreamento e avaliação nutricional permite detectar desnutrição e se associa com desfechos clínicos negativos em pacientes adultos hospitalizados. OBJETIVO: Identificar o teste mais adequado para avaliação de risco e estado nutricional em relação a desfechos clínicos negativos em pacientes adultos hospitalizados; e investigar a complementaridade existente entre os testes de rastreamento (NRS 2002) e avaliação nutricional (SGA). MÉTODOS: Estudo prospectivo, sequencial, não intervencionista, realizado em 705 pacientes adultos de ambos os sexos, de distintas enfermarias, no Instituto Central do Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina da Universidade de São Paulo. Em até 48 horas da admissão aplicou-se em todos os pacientes quatro testes de rastreamento e avaliação nutricional (NRS 2002: Triagem de Risco Nutricional 2002, MUST: Triagem Universal de Risco Nutricional, MNA-SF: Mini Avaliação Nutricional Reduzida, e SGA: Avaliação Subjetiva Global). Os pacientes foram seguidos até o desfecho final, obtendo-se as intercorrências clínicas de complicações, tempo de internação prolongado e mortalidade. Analisou-se o desempenho de todos os testes por curvas ROC (Receiver Operating Characteristic Curve) e razão de verossimilhança (LR). Verificou-se a complementaridade entre NRS 2002 e SGA por regressão logística e o número necessário de pacientes a avaliar para encontrar um desfecho negativo (NNS). RESULTADOS: NRS 2002 detectou 27,9% (n=197) de risco nutricional, MUST 39,6% (n=279), MNA-SF 73,2% (n=516) e SGA indicou 38,9% de desnutrição moderada e grave (n=274). Os testes NRS 2002 e SGA mostraram melhor desempenho em predizer desfechos clínicos negativos que MUST e MNA-SF pela curva ROC. NRS 2002 apresentou LR positiva maior que os demais testes para todos os desfechos clínicos. Segundo a regressão logística, 13% (IC 10,0- 17,0%) dos doentes podem ter tempo de internação prolongado, 9% (IC 7,0- 12,0%) complicação moderada ou grave e 1% (IC 0,3 - 2,1%) mortalidade. Para tempo de internação prolongado, os pacientes desnutridos por SGA, classe B (SGA B) aumentam esta probabilidade em 1,9 vezes (IC 1,2-3,2 vezes, p=0,008) e SGA classe C (SGA C) em 3,8 vezes (IC 2,0-7,2 vezes, p<0,0001). Para pacientes em risco nutricional por NRS 2002 (NRS+), a probabilidade de complicação moderada e grave aumenta em 1,9 vezes (IC 1,1-3,5 vezes, p=0,03), em 1,9 vezes (IC 1,1-3,4 vezes, p=0,02) para doentes SGA B e em 17,8 vezes (IC 1,4-5,8 vezes, p=0,003) para doentes SGA C. A probabilidade para mortalidade aumenta em 3,9 vezes (IC 1,2- 13,1 vezes, p=0,03) para pacientes NRS+. O NNS calculado para todos os desfechos clínicos negativos em pacientes NRS+ & SGA C (em risco nutricional por NRS 2002 e desnutridos graves pela SGA) foi menor que para os testes isolados. CONCLUSÕES: NRS 2002 é o melhor teste de rastreamento nutricional. A aplicação de SGA em doentes sob risco nutricional por NRS 2002 aumenta a capacidade de predição de desnutrição em relação a desfechos clínicos negativos. / INTRODUCTION: The diagnosis of nutritional status by nutritional screening and assessment tools detects malnutrition and is associated with negative clinical outcomes in adult hospitalized patients. OBJECTIVE: To identify the most appropriate tool for analysis of nutritional risk and malnutrition in relation to adverse clinical outcomes in adult hospitalized patients, and to investigate the complementarity of the nutritional screening (NRS 2002) and nutritional assessment (SGA) tests. METHODS: A prospective, sequential, non-interventional study, conducted in 705 adult patients of both sexes, from different wards in the Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina da Universidade de São Paulo. Within 48 hours of admission, all the patients were submitted to four nutritional screening and assessment tests (NRS 2002: Nutritional Risk Screening 2002, MUST: Malnutrition Universal Screening Tool, MNA-SF: Mini Nutritional Assessment Short Form and SGA: Subjective Global Assessment). Patients were followed until the final outcome, obtaining clinical outcomes of complications, length of hospital stay and death. The performance of the tests was analyzed by the ROC (Receiver Operating Characteristic) curve and likelihood ratio (LR). The complementarity of screening and assessment tools was analyzed by logistic regression, and the number of patients required to screen was obtained by calculating the number needed to screen (NNS). RESULTS: NRS 2002 detected 27.9% (n = 197) of nutritional risk, MUST 39.6% (n = 279), MNA-SF 73.2% (n = 516), and SGA detected moderate or severe malnutrition in 38.9% of the patients (n = 274). NRS 2002 and SGA had a better performance in predicting adverse clinical outcomes than MUST and MNA-SF confirmed by ROC curve. NRS 2002 had higher positive LR compared to the other tests for all the clinical outcomes. According to the logistic regression analysis, 13% (CI 10.0-17.0%) of the patients may have length of hospital stay, 9% (CI 7.0-12.0%) moderate or severe complications and 1% (CI 0.3 - 2.1%) mortality. For length of hospital stay, malnourished patients by SGA, class B (SGA B) increase this probability in 1.9 times (CI 1.2-3.2 times, p = 0.008) and SGA class C (SGA C) in 3.8 times (CI 2.0-7.2 times, p <0.0001). For patients nutritionally at risk by NRS 2002 (NRS +), the probability of moderate and severe complication increase in 1.9 times (CI 1.1-3.5 times, p = 0.03), in 1.9 times (CI 1.1-3.4 times, p = 0.02) for SGA B patients and 17.8 times (CI 1.4-5.8 times, p = 0.003) for SGA C patients. The probability of mortality increase in 3.9 times (CI 1.2-13.1 times, p = 0.03) for NRS+ patients. The NNS calculated for all adverse clinical outcomes in patients NRS+ & SGA C (at nutritional risk by NRS 2002 and severe malnourished by SGA), was lower than for the test separately. CONCLUSIONS: NRS 2002 is the best test for nutritional risk screening. The application of SGA in nutritionally at risk patients by NRS 2002 increases the predictive capacity of malnutrition in relation to adverse clinical outcomes.

Doenças causadas por agentes infecciosos e parasitários são chamadas negligenciadas por não despertarem interesse das indústrias farmacêuticas para o desenvolvimento de novas alternativas terapêuticas. Essas doenças são responsáveis por levar milhões de pessoas à morte todos os anos e afetam principalmente os países pobres e em desenvolvimento. Dentre estas, a doença de Chagas e as leishmanioses, parasitoses causadas por parasitas flagelados pertencentes à família Trypanosomatidae, T. cruzi e Leishmaina sp., respectivamente, se apresentam como um sério problema de saúde pública mundial. Endêmicas em vários países e causando milhões de mortes anualmente, ainda hoje não existem fármacos eficientes e seguros para o tratamento dessas doenças. Este panorama torna eminente a necessidade de pesquisa e desenvolvimento de novos fármacos para essas parasitoses. A busca por agentes quimioterápicos envolve a seleção de vias metabólicas essenciais à sobrevivência dos parasitas. Dentre estas, destacamse cisteíno-proteases presentes nesses tripanossomatídeos, deste modo a cruzaína no T. cruzi, e a CPB2.8 na Leishmania mexicana, se mostram como alvos bioquímicos promissores. A disponibilidade de estruturas cristalográficas da cruzaína e do sequenciamento genômico da CPB2.8, nos permite utilizar estratégias de planejamento de fármacos baseado no receptor (SBDD) na identificação de candidatos a fármacos para essas doenças. Entre as técnicas modernas de SBDD utilizadas, a triagem virtual possibilita identificar promissores candidatos a novos fármacos. Assim neste trabalho, obteve-se por meio da técnica de modelagem comparativa o modelo da enzima CPB2.8 de L. mexicana, visto a indisponibilidade da estrutura cristalográfica no Protein Data Bank (PDB). De modo a refinar o modelo construído realizou-se a simulação por dinâmica molecular de 100ns, apresentando estabilização a partir de 80ns. A simulação por dinâmica molecular foi validada por meio do gráfico de Ramachandran, gráfico de raio de giro, RMSD, gráfico de superfície hidrofóbica. Foram calculados os mapas de interação molecular no programa GRID das seguintes proteínas: cruzaína, CPB2.8, catepsina B e catepsina L, e, posteriormente, foi construído um modelo farmacofórico baseado no sítio ativo das enzimas cruzaína e CPB2.8. O modelo farmacofórico da cruzaína foi validado por curva ROC apresentando valor de AUC 61%. A triagem virtual foi realizada para ambas as proteínas e foram obtidos 369 compostos para a cuzaína e 225 compostos para a CPB2.8. Foi realizado o ancoramento molecular desses compostos obtidos pela triagem virtual a fim de diminuir a quantidade de compostos a serem avaliados experimentalmente. / Neglected diseases are caused by parasites and infectious agents and affect mainly people in poor areas being prevalent in 149 countries and causing 534,000 deaths per year. Among neglected diseases we can highlight Chagas Disease and Leishmaniasis, both have a high rate of morbidity and mortality and both are addressed in this project in the search of new drugs against a NTD. Nowadays, the search for new drugs involves the selection of biological pathways essential for parasite survival, in this class of parasites we can suggest the cysteine proteases, a proteases family present in Trypanosoma cruzi and and Leishmania ssp. In order to obtain a new agent against Neglected Disease in this work was obtained the model of the enzyme CPB2.8 of L. mexicana using the comparative modeling technique, due to the unavailability of the crystallographic structure in the Protein Data Bank (PDB). In order to refine the constructed model was performed the molecular dynamics simulation of 100ns, stabilization was achieved from 80ns. Molecular dynamics simulation was validated using the Ramachandran graph, radius of rotation graph, RMSD, hydrophobic surface area graph. The molecular interaction fields were calculated in the GRID program to cruzain, CPB2.8, cathepsin B and cathepsin L. Based on molecular interaction fields generated pharmacophoric models were constructed using information about the active site of the enzymes cruzain and CPB2.8. The pharmacophoric model of cruzain was validated by ROC curve presenting AUC value of 61%. Virtual screening was performed for both proteins and 369 compounds were obtained for cuzain and 225 compounds for CPB2.8. Docking studies of these compounds was performed in order to decrease the amount of compounds to be evaluated experimentally.

Submitted by JOSIANE SANTOS DE OLIVEIRA (josianeso) on 2019-03-21T12:07:39Z No. of bitstreams: 1 João Francisco Machado Silveira_.pdf: 1685606 bytes, checksum: 776b25f02ad2c2e8571054ae9dd59b5c (MD5) / Made available in DSpace on 2019-03-21T12:07:39Z (GMT). No. of bitstreams: 1 João Francisco Machado Silveira_.pdf: 1685606 bytes, checksum: 776b25f02ad2c2e8571054ae9dd59b5c (MD5) Previous issue date: 2018-10-26 / Nenhuma / Calcular a proporção de candidatos inaptos para a doação de sangue por comportamento sexual de risco, em 2016, em serviços de hemoterapia situados nas sete macrorregiões do Rio Grande do Sul; comparar a taxa de incidência de AIDS nessas macrorregiões com o percentual de candidatos excluídos por comportamento sexual de risco; verificar se a proporção de excluídos da doação de sangue por essa causa variou entre os meses de 2016 no RS e entre os anos de 2009 a 2016 no maior hemocentro do Estado. A partir das planilhas do HEMOPROD, preenchidas por cada serviço de hemoterapia situado nas macrorregiões sul, serra, norte, vales, missioneira, centro-oeste e metropolitana, foi calculado o percentual de candidatos homens e mulheres inaptos para a doação de sangue por comportamento sexual de risco. Nas análises, foi aplicado qui-quadrado de Pearson com posterior teste de resíduos ajustados. As relações de prevalência foram calculadas por meio de Regressão de Poisson. A comparação dos percentuais encontrados com os dados sobre AIDS, obtidos do Boletim de HIV/AIDS do RS, ocorreu por meio de correlação de Spearman. O percentual de doadores excluídos por comportamento de risco foi de 8,8% no RS em 2016. Comparando com a macrorregião sul, este percentual é 42,2 vezes maior na macrorregião metropolitana; 27,1 vezes maior na macrorregião centro-oeste; 26,1 vezes maior na macrorregião norte; 21,3 vezes maior na macrorregião dos vales; 12,6 vezes maior na macrorregião missioneira e 6,9 vezes maior na serra (p<0,001). Nossos cálculos apontam que a probabilidade de um homem relatar comportamento sexual de risco no RS é 3,2 vezes maior do que uma mulher (p<0,001). Considerando as sete macrorregiões, constatou-se correlação forte entre a taxa de incidência de AIDS e o comportamento de risco declarado pelos candidatos na triagem clínica (rs=0,895; p<0,001). O percentual de excluídos por comportamento de risco, em 2016 no RS, foi maior nos meses de novembro e dezembro (p<0,001). Dados do maior hemocentro do Estado indicam que a inaptidão clínica por essa causa diminuiu 66,2% de 2009 a 2016, acompanhando a redução da taxa de incidência de AIDS nesse período, com a qual está fortemente correlacionada (rs=0,738; p<0,05) os percentuais de inaptidão clínica por comportamento de risco, calculados para o RS e para cada uma de suas sete macrorregiões de saúde, poderão ser considerados em estudos futuros sobre as causas de exclusão de candidatos a doação de sangue no Estado. Além disso, indicam ser necessário intensificar ações de prevenção ao HIV/AIDS e a outras IST, sobretudo nas macrorregiões metropolitana, centro-oeste e norte. / The main objectives of this study were: a) Calculate the proportion of unqualified candidates for blood donation due to their sexual risk behavior at seven macro regions of Rio Grande do Sul (RS) in the year of 2016; b) Compare the incidence rates detection of AIDS of those macro regions against the percentage of candidates excluded due their sexual risk behavior; c) Verify if the proportion of the excluded from blood donation for this reason varied between 2009 and 2016 on the State's main blood center and between the months of 2016 at RS. the percentage of clinically unqualified men and women for blood donation at RS macro regions called “South”, “Sierra”, “North”, “Valley”, “Missioneira”, “Midwest” e “Metropolitan” were calculated from HEMOPROD worksheets, received from State’s hemotherapy services. AIDS data were obtained from the RS State HIV/AIDS Bulletin. In the analysis, Pearson's chi-square with adjusted residuals test were used and the prevalence ratios were calculated by Spearman's correlation. The percentage of excluded candidates due their sexual risk behavior were compared to AIDS data by Spearman correlation. The prevalence of donor exclusion by risk behavior was 8.8% at RS. Comparing to the “South” macro region, the proportion of candidates excluded due to their sexual risk behavior was 42.2 higher at “Metropolitan” macro region; 27.1 at “Midwest” macro region; 26.1 at “North” macro region; 21.3 at “Valley” macro region; 12.6 at “Missioneira” macro region and 6.9 at “Sierra” macro region (p <0.001). The results show that the probability of a man to declare some sexual risk behavior is 3.2 higher than a woman (p<0.001). Considering the seven macro regions, a strong correlation was found between AIDS incidence rates and sexual risk behavior, declared by the blood donors in clinical screening (rs = 0.895; p <0.001). The percentage of excluded candidates by risk behavior at RS in 2016 was higher in November and December (p<0.001). The data from the State's main blood center shows that the non-qualification by the sexual risk behavior decreased 66.2% from 2009 to 2016, followed by the reduction of AIDS incidence rates in this period, which is strongly correlated (rs = 0.738, p<0.05). The percentages of clinical unsuitability by sexual risk behavior, calculated at RS and the seven State's macro regions can be considered into future studies about the causes of clinical unsuitability of candidates for blood donation at RS. The results also suggest to intensify preventions measures against HIV/AIDS epidemic, mainly at “Metropolitan”, “Midwest” and “North” macro regions.

Made available in DSpace on 2016-04-27T18:11:55Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Sabrina Alves Lima Peixoto.pdf: 1105981 bytes, checksum: df28082bce8b18a4b917509231b971cf (MD5) Previous issue date: 2012-01-31 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Introduction: The audiologic monitoring of children with risk indicators for hearing loss (RIHL) aims at the early identification of hearing losses in order to provide adequate therapeutic intervention, and therefore to reduce its consequences upon speech and language development of such children. Aim: To study the results of the audiologic monitoring in a group of children with RIHL submitted to a two-stage protocol of neonatal hearing screening (NHS). Method: Sample was divided in two groups: group 1 (G1) failed transient otoacoustic emission (TOAE) and passed the second stage with Automated Brainstem Auditory Evoked Potential (A-BAEP); and group 2 (G2) with satisfactory results in both procedures, TOAE and A-BAEP. Data collecting included tympanometry, TOAE and Visual Reinforcement Audiometry (VRA) with insertion phones or in free field at 0.5, 1.0, 2.0 and 4.0 kHz. Children who could not be conditioned or who didn t allow the placement of insertion phones and/or bone transducer underwent click-BAEP or frequency specific BAEP at 0,5 and 2.0 KHz. Results: Of the 34 children submitted to audiologic monitoring, 9 presented conductive disorder 3 from G2 (N=17) and 6 from G1 (N=17). No sensorineural hearing losses were detected in both groups. Neonates with RIHL and who failed TOAE presented greater prevalence of conductive hearing disorders in the audiologic monitoring when compared to children who did not fail / Introdução: O monitoramento audiológico de crianças com Indicadores de Risco para Deficiência Auditiva (IRDA) apresenta como propósito a identificação de perdas auditivas para que possam ser oferecidas intervenções terapêuticas adequadas, diminuindo assim a influência desse acometimento no desenvolvimento da fala e da linguagem. Objetivo: Estudar os resultados do monitoramento audiológico em um grupo de crianças com IRDA, submetidas ao protocolo de duas etapas na triagem auditiva neonatal (TAN). Método: A casuística foi dividida em dois grupos: grupo 1 (G1): crianças que falharam nas emissões otoacústicas por estímulo transiente (EOAT) e passaram na segunda etapa com Potencial Evocado Auditivo de Tronco Encefálico Automático (PEATE-A); grupo 2 (G2): crianças com resultados satisfatórios tanto nas EOAT como no PEATE-A. Os procedimentos utilizados na coleta de dados foram: timpanometria, EOAT e Audiometria de Reforço Visual (ARV), com fones de inserção ou em campo livre, nas frequências de 0.5, 1.0, 2.0 e 4.0 kHz. Nos casos de não condicionamento na ARV e de não aceitação da colocação dos fones de inserção e/ou transdutor ósseo pelas crianças com suspeita de perda auditiva, realizou-se o PEATE-click ou PEATE por frequência específica (PEATE-FE) nas frequências de 0.5 e 2kHz. Resultados: Do total de 34 crianças submetidas ao monitoramento audiológico, nove apresentaram alteração condutiva, três do G2 (N=17) e seis do G1 (N=17). Não foram detectadas perdas auditivas sensorioneurais em ambos os grupos. Conclusão: As crianças que falharam nas EOAT na TAN apresentaram maior prevalência de alterações auditivas condutivas no monitoramento audiológico em comparação com as que não falharam