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Avaliação de diferentes diluentes na criopreservação de sêmen ovino (Ovis aries)

GUIMARÃES, Adrianne Araújo 31 August 2010 (has links)
Submitted by Edisangela Bastos (edisangela@ufpa.br) on 2014-01-27T17:29:10Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 22974 bytes, checksum: 99c771d9f0b9c46790009b9874d49253 (MD5) Dissertacao_AvaliacaoDiferentesDiluentes.pdf: 451946 bytes, checksum: b6bb12018b8669ca3ca54a5f62e4c2cb (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Rosa Silva(arosa@ufpa.br) on 2014-01-28T13:47:48Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 22974 bytes, checksum: 99c771d9f0b9c46790009b9874d49253 (MD5) Dissertacao_AvaliacaoDiferentesDiluentes.pdf: 451946 bytes, checksum: b6bb12018b8669ca3ca54a5f62e4c2cb (MD5) / Made available in DSpace on 2014-01-28T13:47:48Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 22974 bytes, checksum: 99c771d9f0b9c46790009b9874d49253 (MD5) Dissertacao_AvaliacaoDiferentesDiluentes.pdf: 451946 bytes, checksum: b6bb12018b8669ca3ca54a5f62e4c2cb (MD5) Previous issue date: 2010 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Durante a criopreservação são inúmeras as alterações sofridas pelas células espermáticas, o que conduz à queda na motilidade e perda da sua viabilidade pós-descongelação. Por este motivo, surge a necessidade de aperfeiçoar os processos de tecnologia do sêmen, principalmente quanto ao uso de diluentes. O objetivo deste estudo foi avaliar a viabilidade de espermatozóides ovinos, submetidos ao processo de diluição e criopreservação, utilizando-se 3 diluentes (TES, TRIS e PBS) e 3 tempos de equilíbrio (4h, 8h e 12h), sendo o estudo dividido em 9 grupos: TES-4h, TES-8h, TES-12h, TRIS-4h, TRIS-8h, TRIS-12h, PBS-4h, PBS-8h e PBS-12h. Após a colheita, o sêmen foi avaliado macro e microscopicamente, e prédiluído nas soluções TES, TRIS e PBS, no entanto sem a adição dos crioprotetores (Solução A), onde permaneceram por 1h. Posteriormente, o sêmen foi diluído com as soluções TES, TRIS e PBS, já contendo os crioprotetores, novamente avaliado, para então ser envasado, sendo submetido aos diferentes tempos de equilíbrio, e em seguida, congelado. Após a descongelação, foi avaliado a motilidade e o vigor, e após o TTR, a motilidade, o vigor e o desprendimento do acrossoma. Na criopreservação com TRIS, a motilidade e o vigor foram estatisticamente similares (p>0,05) no sêmen congelado com equilíbrio de 4h (17,2% e 1,6), 8h (22,4% e 2,1) e 12h (14,8% e 1,6) (p>0,05). Após o TTR não foi observado diferença estatística (p>0,05) para a motilidade e o vigor em 4h (10,4% e 1,1) e em 12h (10,0% e 1,2) de equilíbrio, porém houve um aumento em 8h (15,6% e 1,6) (p<0,05). Não houve diferença estatística (p>0,05) no índice de desprendimento do acrossoma entre 4h (35,1) e 12h (37,6) de equilíbrio, havendo uma redução nestes índices em 8h (30,4) (p<0,05). Na criopreservação com TES, a motilidade do sêmen congelado com equilíbrio de 4h (24,8%) e 12h (27,6%) foram estatisticamente similares (p>0,05), sendo que o tempo de 8h (40,4%) diferiu estatisticamente dos demais. O vigor foi estatisticamente similar (p>0,05) para o sêmen descongelado com equilíbrio de 4h (2,0), 8h (2,6) e 12h (2,3), não diferindo estatisticamente (p>0,05). Após o TTR não foi observado diferença estatística (p>0,05) para a motilidade em 4h (18,8%) e em 12h (17,4%) de equilíbrio, porém houve um aumento em 8h (29,6%) (p<0,05). Em relação ao vigor e ao desprendimento do acrossoma não houve diferença estatística (p>0,05) em 4h (2,0 e 35,8), 8h (2,1 e 33,4) e 12h (1,8 e 42,2) de equilíbrio. Na criopreservação com o PBS, não foram observados motilidade e vigor após a descongelação. Esses resultados indicam que o diluente à base de TES e o tempo de equilíbrio de 8h mostraram-se mais adequados para a diluição e congelação de sêmen ovino. / During cryopreservation are numerous changes experienced by the sperm cells, which leads to the decrease in motility and loss of viability after thawing. For this reason, there arises the need to refine the process technology of semen, especially regarding the use of diluents. The aim of this study was to evaluate the viability of spermatozoa undergoing the process of cryopreservation and dilution, using three extenders (TES, TRIS and PBS) and three years of stability (4h, 8h and 12h), and the study was divided into nine groups: TES-4h-8h TES, TES- 12h, TRIS-4h-8h TRIS, TRIS-12h-4h PBS, PBS and PBS-8h-12h. After collection, semen was evaluated macro and microscopically, and pre-diluted solutions in TES, TRIS and PBS, but without the addition of cryoprotectants (Solution A), where they remained for 1 hour. Subsequently, semen was diluted with solutions TES, TRIS and PBS, already containing the cryoprotectants, again assessed to be so packed, and subjected to different periods of equilibrium, and then frozen. After thawing, motility was assessed and vigor, and after the TTR, motility, vigor and detachment of the acrosome. On cryopreservation with TRIS, motility and vigor were statistically similar (p> 0.05) in semen frozen with a balance of 4h (17.2% and 1.6), 8h (22.4% and 2.1) and 12h (14.8% and 1.6) (p> 0.05). After the TTR was not observed statistical difference (p> 0.05) in motility and vigor in 4h (10.4% and 1.1) and 12h (10.0% and 1.2) of balance, but there was an increase in 8h (15.6% and 1.6) (p <0.05). There was no statistical difference (p> 0.05) in the rate of detachment of the acrosome between 4h (35.1) and 12 (37.6) equilibrium, with a reduction in these indices at 8 am (30.4) (p <0 , 2005). On cryopreservation with ERT, the motility of frozen semen with a balance of 4h (24.8%) and 12h (27.6%) were statistically similar (p> 0.05), although the time of 8h (40.4% ) differed significantly from the others. The force was statistically similar (p> 0.05) for thawed-balanced 4h (2.0), 8h (2.6) and 12h (2.3), not statistically different (p> 0.05) . After the TTR was not observed statistical difference (p> 0.05) for sperm motility in 4h (18.8%) and 12h (17.4%) of balance, but there was an increase in 8h (29.6%) (p <0.05). In relation to the force and the detachment of the acrosome was no statistical difference (p> 0.05) 4h (2.0 and 35.8), 8h (2.1 and 33.4) and 12h (1.8 and 42 , 2) equilibrium. On cryopreservation with PBS, showed no motility and vigor after thawing. These results indicate that solvent-based TES and the equilibrium time of 8h were more suitable for dilution and freezing of ram semen.
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Atitudes da equipe assistencial em relação a doação de órgãos em hospitais de Porto Alegre

Vicari, Alessandra Rosa January 2010 (has links)
A disponibilidade e avanço nas técnicas cirúrgicas associado ao progresso na área imunológica e farmacológica (1, 2,15) tornaram o transplante de órgãos um tratamento realizado mundialmente em locais com diferenças sociais e culturais (4,5). O maior domínio no conhecimento desta terapia faz com ela possa ser oferecida atualmente para muitos pacientes. Conseqüentemente, o número de pacientes em lista de espera para transplante vem aumentando progressivamente e a realidade é uma demanda maior que a oferta, com aumento tanto no tempo de espera em lista como na mortalidade (4,32). Alguns estudos têm sido realizados para avaliar este problema e identificar os fatores que possam estar envolvidos no processo de doação de órgãos. As atitudes e opiniões de profissionais de saúde tem sido o objetivo de alguns desses estudos. A equipe médica e de enfermagem está envolvida em várias etapas do processo de doação de órgãos como na notificação de possíveis doadores e na abordagem familiar, com o fornecimento de informações claras e corretas que auxiliarão na tomada de decisão familiar. Conhecer as atitudes e opiniões destes profissionais em relação à doação de órgãos torna-se importante nesse processo. Profissionais com uma atitude positiva sentem-se mais confortáveis em realizar tarefas relacionadas ao processo de doação como abordagem da família e na comunicação de um potencial doador para a coordenação de transplantes, iniciando o processo de doação de órgãos (18). Por outro lado, uma atitude negativa pode influenciar na busca de potenciais doadores e na atitude de familiares (30). Este estudo teve como objetivo avaliar as atitudes e opiniões sobre a doação de órgãos, verificar se estas atitudes diferem entre hospitais público e privado e identificar fatores que determinam ou influenciam nas atitudes individuais para a doação de órgãos de profissionais da área médica e de enfermagem de dois hospitais que realizam transplantes na cidade de Porto Alegre - RS. O estudo foi realizado em dois hospitais com atividades em transplantes na cidade de Porto Alegre-RS sendo um hospital público e universitário e o outro privado. O estudo foi aprovado pelos comitês de ética em pesquisa das duas instituições. No período de junho a novembro de 2009 foram convidados a participar todos os profissionais auxiliares e técnicos de enfermagem, enfermeiros e médicos com vínculo nas instituições através do preenchimento de um questionário com 21 questões de múltipla escolha sobre dados demográficos, atitudes em relação à doação de órgãos e conhecimento sobre morte encefálica (ME). No hospital público o convite foi realizado por endereço eletrônico institucional de cada indivíduo e no hospital privado foi utilizada a página de acesso dos profissionais. As respostas foram direcionadas para um banco de dados e analisadas de forma anônima usando-se o programa Surveymonkey. Os resultados encontrados foram: não houve diferença significativa nas atitudes e opiniões em relação à doação de órgãos entre os hospitais. O número total de participantes foi 418. Quase toda a amostra 416(99,5%) foi a favor a doação e 351(84%) pretendiam doar seus órgãos após a morte. Não houve diferença significativa entre gênero, raça, idade e estado civil em relação ao desejo de doar. Alguns fatores foram relacionados a uma atitude positiva para a doação de órgãos: saber o conceito de ME está associado ao consentimento para a doação (99,4%VS 95,9 P= 0,029), pretender doador seus órgãos após a morte esta relacionado a autorização de doação de órgãos de um familiar (P<0,001) e ter informado a um familiar o desejo de ser doador (P<0,001). Houve uma tendência de que indivíduos que autorizariam a doação se soubessem o desejo do familiar, exercem atividades relacionadas a transplante de órgãos (98,8% VS 95,6% P=0,086). Profissionais com nível superior apresentaram uma atitude mais positiva em relação à autorização de doação de órgãos de um familiar se soubessem seu desejo do que auxiliares e técnicos de enfermagem (98,7%VS 91,1 P=0, 001) Em conclusão, os profissionais de saúde da área de enfermagem e médica têm uma atitude bastante favorável à doação de órgãos e estas atitudes não diferem de um hospital privado para público. Os fatores associados a uma atitude positiva para a doação foram o conhecimento sobre ME, a autorização de órgãos de um familiar e ter informado ao familiar o desejo de ser doador.
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Intenção de doar orgãos em uma população adulta.

Barcellos, Franklin Corrêa 01 April 2003 (has links)
Submitted by Leonardo Lima (leonardoperlim@gmail.com) on 2017-04-17T19:15:02Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) dissert Franklin.pdf: 1770404 bytes, checksum: a9d89e02abf3cb28d4897776ac2e393f (MD5) / Approved for entry into archive by Aline Batista (alinehb.ufpel@gmail.com) on 2017-05-10T14:58:07Z (GMT) No. of bitstreams: 2 dissert Franklin.pdf: 1770404 bytes, checksum: a9d89e02abf3cb28d4897776ac2e393f (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Aline Batista (alinehb.ufpel@gmail.com) on 2017-05-10T14:59:47Z (GMT) No. of bitstreams: 2 dissert Franklin.pdf: 1770404 bytes, checksum: a9d89e02abf3cb28d4897776ac2e393f (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2017-05-10T15:08:55Z (GMT). No. of bitstreams: 2 dissert Franklin.pdf: 1770404 bytes, checksum: a9d89e02abf3cb28d4897776ac2e393f (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2003-04-01 / Sem bolsa / Objetivo: Através de um estudo de base populacional, identificou-se a prevalência de intenção dos indivíduos em doar seus próprios órgãos e de seus familiares e descreveu-se características associadas e verificou-se seu entendimento sobre morte encefálica. Metodologia: Delineamento transversal, com indivíduos de idade igual ou superior a 20 anos, da zona urbana de Pelotas,RS. O instrumento foi um questionário estruturado, aplicado através de entrevistas individuais. Na análise bivariada, utilizaram-se os testes qui-quadrado e de tendência linear. A análise multivariada foi conduzida seguindo modelo hierarquizado, utilizandose a regressão de Poisson. Foi considerado estatisticamente significante o valor p  0,05 bi-caudal. Resultados: Entre os 3159 participantes, a prevalência de intenção de doar órgãos foi de 52%, sendo que 58% destes haviam expressado sua vontade a um familiar. A maioria dos entrevistados (80,1%) autorizaria a doação de órgãos após a morte de familiar que houvesse manifestado previamente sua vontade de ser doador. Entretanto, apenas 63% autorizaria a doação de órgãos de familiar com morte cerebral. Enquanto o tema não havia sido discutido, somente um terço das pessoas autorizariam a doação dos órgãos de seus familiares. Após ajuste para fatores de confusão, caracterizou-se a maior intenção entre os mais jovens, os de maior escolaridade e indivíduos com renda familiar acima de 10 salários mínimos. Os praticantes da religião Evangélica e Testemunha de Jeová referiram menos intenção. Conclusão: Neste estudo, metade dos indivíduos não autorizaria a doação de órgãos de familiares que não comunicaram sua intenção. O entendimento de morte cerebral, como critério de morte, pode ser uma barreira à doação de órgãos. / Não possui abstract.
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Estudo das alterações funcionais respiratórias em pacientes submetidos à colecistectomia videolaparoscópica /

Khenaifes, Tatiana Eing Granado. January 2011 (has links)
Orientador: Daniela Cristina Cataneo / Banca: Karla Magnani / Banca: Suzani Tanni / Resumo: A colecistectomia por via laparoscópica é uma técnica minimamente invasiva que permite remover a vesícula biliar com redução do tempo cirúrgico e hospitalar, possibilitando o retorno precoce às atividades diárias. Porém, apesar de ser uma técnica minimamente invasiva, pode acarretar uma série de alterações pulmonares importantes. Analisar as alterações funcionais respiratórias em indivíduos submetidos à colecistectomia videolaparoscópica. Foram avaliados, pela equipe do Hospital Estadual Bauru, no período de abril de 2008 até maio de 2010, todos os pacientes com indicação cirúrgica. No período pré-operatório todos foram submetidos à anamnese, espirometria, medida do índice diafragmático, ventilometria, manovacuometria, pico de fluxo expiratório, teste de caminhada de 6 minutos e teste de escada. Todos os testes foram repetidos no primeiro, quinto e trigésimo pós-operatórios. Somente o teste de escada não foi repetido no primeiro pós-operatório. Foi avaliada em cada pós-operatório a escala analógica de dor, e a escala de Borg foi aplicada após os testes dinâmicos. Foram avaliados 50 pacientes, sendo 76% mulheres e 24% homens. A média da idade foi de 47,8±14,2 e do IMC foi de 28,8±4,8 kg/m2. A amostra foi composta por 68% de não tabagistas, 20% de tabagistas e 12% de ex-tabagistas. Não houve qualquer caso de complicação pós-operatória. O VEF1 e CVF apresentaram queda significativa no PO1, voltando aos valores pré somente no PO30, a VVM apresentou queda significativa no PO1, voltado aos valores pré no PO5 e o PFE foi significativamente menor no PO1, já estando normalizado no PO5. A PImáx e PEmáx apresentaram queda significativa no PO1 e continuou reduzido no PO5 retornando aos valores pré no PO30. O VE e o VC não apresentaram diferença estatística em qualquer momento estudado, somente a f aumentou no PO1. O ID1 e ID2 não apresentaram... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Laparoscopic cholecystectomy is a minimally invasive technique that allows removal of the gallbladder with reduced surgical time and hospital stay, allowing an earlier return to daily activities, yet can cause a series of major pulmonary changes. The increasing of laparoscopic surgery for performing cholecystectomy has shown the need for evaluation of ventilatory changes resulting from the anesthesia, the pneumoperitoneum and visceral manipulation, plus the time of return to preoperative status. To evaluate changes in respiratory function in patients undergoing laparoscopic cholecystectomy. The team of Bauru State Hospital evaluated, from April 2008 until May 2010, all patients with surgical indication. In the preoperative period all underwent medical history, spirometry, peak expiratory flow, respirometry, manometry, measurement of diaphragmatic index, six minute walking test and stair-climbing test. All tests were repeated in the first, fifth and thirtieth postoperative days. The stair climbing test was not repeated in the first postoperative day. Pain analog scale was assessed at each postoperative, and the Borg scale was applied after the dynamic tests. Fifty patients were evaluated, 76% women and 24% men. The mean age was 47,8±14,2 and BMI was 28,8±4,8 kg/m2. The sample comprised 68% of nonsmokers, 20% were smokers and 12% former smokers. There was no case of postoperative complication. FEV1 and FVC showed a significant decrease in PO1, returning to PRE values in PO30, the MVV significant drop in PO1, returning to PRE values in PO5 and PEF were significantly lower in PO1, already being normal in PO5. MV and TV did not differ significantly at any time studied, only respiratory rate increased in PO1. The MIP and MEP showed a significant drop in the PO1 returning to baseline at PO5. The ID1 and ID2 did not differ at any time studied. The 6MWD was significantly lower than... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre
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Isolamento, cultura de protoplastos e regeneração de plantas de laranja doce (Citrus sinensis L. Osbeck) / Isolation, protoplast culture and regeneration of sweet orange (Citrus sinensis L. Osbeck)

Lívia Mendes de Castro 08 February 2010 (has links)
A regeneração de plantas, por organogênese ou embriogênese somática, a partir do cultivo de células e tecidos vegetais in vitro é a base para a utilização da biotecnologia no melhoramento. Realizaram-se estudos com cinco cultivares de laranja doce (Citrus sinensis L. Osbeck), Pêra, Natal, Lima Verde, Hamlin e Westin. Este trabalho objetivou a avaliação da eficiência de isolamento de protoplastos das cultivares de laranja doce; o estudo da eficiência de plaqueamento em função de cinco densidades de protoplastos e diferentes meios de cultura e avaliação da embriogênese somática em função da composição dos meios de cultura e concentração da fonte de carboidrato. As soluções enzimáticas testadas para o isolamento de protoplastos foram: 1. Grosser e Chandler (1987), composta de 1% de celulase Onozuka RS (Yakult), 1% macerase R- 10 (Yakult Honsha) e 0,2% de pectoliase Y-23 (Seishin); 2. Grosser e Chandler (1987) modificado, composta de 1% de celulase Onozuka RS (Yakult), 1% macerase R-10 (Yakult Honsha); 3. Solução enzimática composta de 4% de celulase Onozuka R-10 (Yakult), 1% macerase R-10. O plaqueamento dos protoplastos foi realizado em cinco densidades, 2 x 104, 5 x 104; 105; 2x 105 e 3 x 105 protoplastos . mL-1,nos meios de cultura EME 0,7M, BH3 0,7M e BH3 + EME 0,7M em ausência de luz, a 25 ± 1 ºC. A solução enzimática 2 proporcionou um maior rendimento no isolamento de protoplastos das cultivares Hamlin, Natal e Pera e solução enzimática 1 foi melhor para a cultivar Westin. A eficiência final de plaqueamento avaliada aos 90 dias foi superior nas densidades de de 3 x 105 e 2 x 105 protoplastos. mL-1 para as cultivares Hamlin, Natal e Lima Verde, e na densidade de 2 x 105 e 105 protoplastos. mL-1 para a cultivar Westin. A indução da embriogênese somática ocorreu em meio de cultura MT modificado com 500 mg.L-1 de extrato de malte, acrescido de sacarose, galactose, glicose, sorbitol, lactose e maltose, nas concentrações de 18, 37, 75, 110 e 150 mM à temperatura de 27 °C. A formação de embriões somáticos variou com o genótipo, sendo a cultivar Lima Verde e Westin apresentaram menor número de embriões somáticos. As melhores fontes de carboidratos foram a maltose, seguida pela lactose nas concentrações de 37 e 75 mM para a cultivar Pêra, 37 mM para a cultivar Natal e 37, 75 e 110 mM para a cultivar Hamlin. / Plant regeneration, by organogenesis or somatic embryogenesis from cell cultures and in vitro plant tissue culture is the basis for the use of biotechnology in plant breeding. Studies were conducted with five cultivars of sweet orange (Citrus sinensis L. Osbeck), Pêra, Natal, Lima Verde, Hamlin and Westin. This work aimed to evaluate the isolation efficiency of protoplasts, to evaluate platting efficiency of protoplasts based on five densities of cells and different culture media and to evaluate somatic embryogenesis based on culture medium composition and concentration. The enzymatic solutions tested were: 1. Grosser and Chandler (1987): 1% de cellulase Onozuka RS (Yakult), 1% macerase R-10 (Yakult Honsha) and 0,2% de pectoliase Y-23 (Seishin); 2. Grosser and Chandler (1987) modified: 1% de cellulase Onozuka RS (Yakult) and 1% macerase R-10 (Yakult Honsha); 3. Enzimatic solution containing 4% cellulase Onozuka R-10 (Yakult) and 1% macerase R-10. Protoplasts were cultured at densities of 2 x 104; 5 x 104; 105; 2 x 105 e 3 x 105 protoplasts.mL-1 in EME 0,7M, BH3 0,7M and BH3 + EME 0,7M, in the dark, at 25 ± 1 ºC. The enzymatic solution 2 provided higher yield for the cultivars Hamlin, Natal and Pêra, and enzymatic solution 1 resulted in better protoplast isolation for cultivar Westin. Final platting efficiency, evaluated 90 days after culture, was higher at the densities of 3 x 105 e 2 x 105 protoplasts.mL-1 for Hamlin, Natal and Lima Verde, and at the density of 2 x 105 e 105 protoplasts.mL-1 for Westin. Somatic embryogenesis stimulation occurred in cultured medium MT (MURASHIGE AND TUCKER, 1969) modified with 500 mg. L-1 of malt extract, supplemented with sucrose, galactose, glucose, maltose, lactose and sorbitol at concentrations of 18, 37, 75, 110 and 150 mM, at 27 ± 1 ºC. Somatic embryos produced varied with the genotype, the smaller number of somatic embryos was observed in cultivars Lima Verde and Westin. The best source of carbohydrate were maltose, followed by lactose at concentrations of 37 and 75 mM for cultivar Pêra, 37 mM for cultivar Natal, and 37, 75 and 110 mM for cultivar Hamlin.
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Reprodução em Brachiaria spp.: SERK (Somatic Embryogenesis Receptor-Like Kinase) no desenvolvimento da antera, do ovário e na embriogênese / Reproduction in Brachiaria spp.: SERK (SOMATIC EMBRYOGENESIS RECEPTOR-LIKE KINASE) in anther and ovary development and in embryogenesis

Andréa Dias Koehler 30 March 2010 (has links)
Gramíneas do gênero Brachiaria apresenta importância econômica como forrageiras no Brasil. O melhoramento genético, entretanto, é restrito devido a diferenças de ploidia entre os genótipos e a reprodução por apomixia. A indução de haplóides e duplo-haploides pelo cultivo in vitro de anteras ou de micrósporos isolados é relatada em diversas espécies. Além da criação de novos genótipos linhagens duplo-haplóides podem ser utilizadas como ferramentas para o estudo de marcadores moleculares. Dentre os fatores essenciais para o sucesso da técnica está o estádio do desenvolvimento do micrósporo, sendo o estádio uninucleado, geralmente, o mais responsivo. Um dos objetivos deste trabalho foi contribuir para a definição de parâmetros para a cultura de haplóides em Brachiaria. Flores e anteras isoladas de B. brizantha (B105) em diferentes estádios de desenvolvimento foram processadas para microscopia de luz. Os eventos observados foram associados a marcadores morfologicos. Experimentos de cultura de anteras foram estabelecidos e estruturas semelhantes a calos ocorreram em pouco explantes. Secções histológicas revelaram a ocorrência de micrósporos com divisão simétrica, indicando um possível desvio da rota do micrósporo para a rota esporofítica. Genes definidos como marcadores de embriogênese como SERK (SOMATIC EMBRYOGENESIS RECEPTOR-LIKE KINASE), podem ser utilizados para identificar o potencial embriogênico de células ou grupo de células, possibilitando monitorar a resposta in vitro. Duas seqüências parciais de cDNA isoladas de B. brizantha apresentaram alta identidade com homólogos de SERK1 e SERK2 de monocotiledôneas. Análise filogenética confirmou a alta similaridade sugerindo serem os possíveis ortólogos de SERK em Brachiaria, sendo nomeados como BbrizSERK1 e BbrizSERK2. Clones parciais da seqüência genômica foram obtidos. Análise de Southern blot identificou duas cópias deste gene tanto na planta apomítica como na sexual. A análise da expressão de BbrizSERK2 por RT-qPCR na planta apomítica e sexual e durante a embriogênese somática revelou que este gene não é específico de tecidos reprodutivos. Expressão diferencial de BbrizSERK entre ovários apomíticos e sexuais, especialmente durante a megasporogênese, foi observada por hibridização in situ. Detectou-se forte sinal na célula-mãe do megásporo em ovários sexuais e ausência de sinal em ovários apomíticos. Após a antese, a expressão na planta apomítica foi observada apenas na região micropilar e proembriões. Na sexual, foi observada nas antípodas e aparato da oosfera. Em anteras o mesmo padrão de expressão foi observado entre a planta apomítica e sexual, com forte expressão no tapete e nas células-mãe do grão de pólen, o que sugere um importante papel deste gene na esporogênese em Brachiaria. Em calos embriogênicos forte sinal foi observado em massas proembriogênicas, em embriões globulares e também em embriões somáticos mais desenvolvidos, confirmando a função de SERK como marcador de embriogênese em Brachiaria. Em anteras cultivadas in vitro, forte sinal foi observado em micrósporos binucleados com divisão simétrica e em alguns micrósporos vacuolados. Experimentos futuros com genes desta família poderão contribuir para monitorar processos in vitro em Brachiaria, indicando células ou grupos de células com potencial embriogênico, ajudando na definição das melhores condições de cultivo para a embriogênese e também para o estudo da reprodução neste gênero / Brachiaria, gramineae present economic importance as forage in Brazil. The genetic breeding, however, is restricted by differences in ploidy among the genotypes and the apomixis. The development of a haploid and double haploid production has been reported for several species. Besides the production of new genotypes the development of double haploid lineages may be used for studies with molecular markers. Among important factors for the success of haploid plant development relies on the microspore developmental stage, with the uninucleate stage being usually the most responsive. One of the objectives of this work was to contribute for the definition of parameters for the development of haploid cultures in Brachiaria. B. brizantha (B105) flowers and isolated anthers were collected in different stages of development and processed for light microscopy. The events observed were associated to morphological markers. Anther culture experiments were established and calli formation ocurred to a few explants. Histological sections of anthers cultivated in vitro, however, revealled the occurrence of microspores with symmetrical divisions, indicating a possible alternative to the sporophytic route. Genes defined as markers of embryogenesis, such as SERK (SOMATIC EMBRYOGENESIS RECEPTOR-LIKE KINASE), may be utilized to identify the embryogenic potential of cells, or cell clusters, in an attempt to monitor the in vitro response. Two partial sequences of cDna isolated from B. brizantha (B30) showed high identity of these two sequences to SERK1 and SERK2 homologs from monocots. The phylogenetic analysis confirmed high similarity with these genes, indicating that these sequences are possible orthologs of SERK in Brachiaria, hence these were named BbrizSERK1 and BbrizSERK2. Partial clones of genomic sequences were obtained. Southern blot analysis suggested two copies of this gene in both apomictic and sexual B. brizantha. The expression analysis of BbrizSERK2 by RT-qPCR revealed that this gene is not specific to reproductive tissues. Differential expression of BbrizSERK between apomictic and sexual ovaries, especially during megasporogenesis, was observed by in situ hybridization. A strong signal was detected in the megaspore mother cell in sexual ovaries, with absence in apomictic ovaries. After anthesis, the expression in the apomictic plant was observed only in the micropylar region and proembryos, however, in the sexual plant, the expression was observed in the antipodals and egg apparatus. In anthers, the same in situ pattern was observed in the apomictic and the sexual plant, with a strong expression in the tapetum and the pollen grain mother cell, suggesting an important role of this gene in the sporogenesis in Brachiaria. In embryogenic calli, strong signal was observed in proembryogenic masses, globular embryos and somatic embryos in later stages of development, confirming the role of SERK as an embryogenic marker in Brachiaria. In cultivated anthers, a strong signal was observed in binuclear microspores with symmetric division and vacuolated microspores. Further studies with this gene family may contribute to monitoring the in vitro processes in vitro in Brachiaria, defining cells or cell clusters with an embryogenic potential, helping for the definition of culture conditions for embryogenesis and also for reproductive studies in this genus
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Afecções cirúrgicas em aves: estudo retrospectivo / Surgical disorders in birds: retrospective study

Patricia Ferreira de Castro 20 August 2010 (has links)
As aves representam a grande maioria das espécies da fauna silvestre mantidas como animais de companhia em nosso meio e respondem diretamente pela crescente demanda pelo atendimento médico veterinário. O avanço na área da anestesiologia viabilizou a realização de procedimentos cirúrgicos mais longos e complexos e contribuiu para o desenvolvimento e aprimoramento da técnica operatória em aves, contudo, dados nacionais de casuística relacionados às afecções cirúrgicas de aves ainda são inexistentes. Assim, este estudo avaliou retrospectivamente as operações realizadas em aves no Serviço de Cirurgia de Pequenos Animais do Hospital Veterinário da Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia da Universidade de São Paulo, entre janeiro de 2000 a junho de 2008, com o objetivo de identificar as afecções cirúrgicas, apresentar sua ocorrência e distribuição de freqüência segundo as ordens e espécies acometidas, avaliar as técnicas operatórias empregadas e comparar os dados obtidos com os achados da literatura. De um total de 90 operações realizadas para diagnóstico e/ou tratamento de afecções, 27 foram ortopédicas e 63 de tecidos moles. Quanto ao percentual de operações ortopédicas realizadas segundo as diferentes ordens, observou-se: Psittaciformes 85,19%, Piciformes 7,41%, Anseriformes 3,70% e Falconiformes 3,70%. Para as operações de tecidos moles os psitaciformes representaram 92,06%, columbiformes 3,17%, passeriformes 3,17% e anseriformes 1,59%. Entre os tipos de afecções ortopédicas encontradas as fraturas apresentaram a maior ocorrência (88,89%), seguidas de luxação (3,70%), avulsão traumática de extremidade (3,70%) e artrite/osteomielite (3,70%), o membro pélvico foi o mais acometido e o tibiotarso o osso mais fraturado. Dentre as afecções cirúrgicas de tecidos moles as neoplasias apresentaram a maior ocorrência (30,16%), seguida das neoformações cutâneas ou de anexos não neoplásicos (17,46%), neoformações cutâneas sem diagnóstico (7,94%), distocia (7,94%), fístula de papo (7,94%), hérnia abdominal (4,76%), sinusite (4,76%), gangrena de extremidade de membros (3,17%), perfuração de esôfago (3,17%), prolapso de cloaca (3,17%), Necrose avascular de dígito (1,59%), ferida na região da quilha (1,59%), perfuração de cavidade celomática (1,59%), neoformação em cavidade celomática sem diagnóstico (1,59%), corpo estranho em trato gastrointestinal (1,59%) e otite (1,59%). O lipoma foi a neoplasia e o cáseo a neoformação não neoplásica mais freqüentes. A distribuição das afecções cirúrgicas segundo as espécies acometidas mostrou o grupo dos papagaios, representado em sua maioria por espécies do gênero Amazona, como prevalente. A fixação interna com pino intramedular foi a técnica operatória mais utilizada nas afecções cirúrgicas ortopédicas e apresentou elevado índice de retorno à função para tratamento das fraturas. A exérese foi a técnica operatória mais utilizada nas afecções cirúrgicas de tecidos moles e mostrou índices elevados de cura e baixa ocorrência de recidivas. O conhecimento das afecções cirúrgicas e das espécies de aves mais acometidas, bem como dos resultados obtidos com as técnicas operatórias empregadas, acrescentam informações para aqueles que já atuam nesta área e servem como indicador de estudo para futuros cirurgiões de aves / Birds represent one of the main wildlife species kept as pets in our country and respond directly by the growing demand for health care veterinarian. Advancement in the field of anesthesiology has enabled the surgical procedures longer and more complex and contributed to the development and refinement of surgical technique in birds. However, national data series related to surgical disorders in birds are still poor. This study assessed retrospectively the avian operations at the Service of Small Animal Surgery - Veterinary Hospital of the School of Veterinary Medicine and Animal Science of the University of São Paulo, from January 2000 to June 2008. The focus was to identify the surgical disorders, occurrence and frequency distribution according to orders and species affected, also we evaluated the surgical techniques employed and compared the results with the literature findings. A total of 90 operations were performed for diagnosis or treatment of surgical disorders. Of these 27 were orthopedic and 63 soft tissue surgeries. Considering the orthopedic surgeries performed according to orders we observed: Psittaciformes 85,19%, Piciformes 7,41%, Anseriformes 3,70% and Falconiformes 3,70%. And for the soft tissues operations the Psittaciformes represented 92,06%, Columbiformes 3,17%, Passeriformes 3,17% and Anseriformes 1,59%. Fractures presented the highest incidence among orthopedic disorders (88,89%), followed by luxation (3,70%), traumatic avulsion of the end (3,70%) and arthritis/osteomyelitis (3,70%). The pelvic limb was the most affected member and the tibiotarsus was the most commonly fractured bone. Among the surgical disorders of soft tissue, neoplasms accounted for 30,16%, followed by cutaneous neoformation or annexes nonneoplastic (17,46%), cutaneous neoformations undiagnosed (7,94%), dystocia (7,94%), fistula crop (7,94%), abdominal hernia (4,76%), sinusitis (4,76%), gangrene of the extremity members (3,17%), esophageal perforation (3,17%), prolapse of cloaca (3,17%), \"avascular necrosis of digit (1,59%), wound in the region of the keel (1,59%), perforation of the coelomic cavity (1,59%), neoformation in the coelomic cavity without a diagnosis (1,59%), foreign body in the gastrointestinal tract (1,59%) and otitis (1,59%). Lipoma and caseous were the most frequent cancer and non-neoplastic neoformation observed, respectively. The distribution of surgical disorders according to species affected showed that the \"group of parrots\", mainly represented by species of Amazonas genus, was prevalent. Internal fixation with intramedullary pin was the technique most often used in orthopedic surgical disorders and showed a high rate of recovery of limb function. The excision was the technique mostly used in the surgical disorders of soft tissue and presented high rates of cure and low recurrence. Knowledge of surgical and bird species most affected, and the results obtained with the surgical techniques employed, add information for those who works in this area and will be an indicator for future surgeons of birds
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Fenologia, biologia floral e germinação in vitro de Cyrtopodium eugenii Rchb. f. & Warm. (Orchidaceae) / Fenology, floral biology and in vitro germination of Cyrtopodium eugenii Rchb.f. & Warm. (Orchidaceae)

NUNES, Camila de Marillac Costa 18 February 2009 (has links)
Made available in DSpace on 2014-07-29T16:24:21Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Capa Camila Marillac.pdf: 113274 bytes, checksum: 456413e1a73b4f6c572c42092e6ba8a6 (MD5) Previous issue date: 2009-02-18 / Cyrtopodium eugenii Rchb. f. (Orchidaceae) is a specie widely distributed in Brazilian savannah, being the Planalto Central its main center of diversification. C. eugenii is a terrestrial specie, usually found in the Cerrado, growing in sand soil, dry environment and to the half shade. Due the beauty and exotic character of its flowers, C. eugenii present high ornamental and commercial potential. However, no studies were found of its preservation even in vitro protocols for shoots obtainment to be used in flower production. Thus, the present study has as objective to characterize the fenology, morphology and reproductive biology in C. eugenii and to establish protocols for symbiotic and asymbiotic germination in vitro. The plants studied grows at the Biological Reserve Prof. Jose Ângelo Rizzo, a forest remainder of 500 ha of bioma Cerrado, whose predominant vegetation is of the type Cerrado Rupestre, located in the Serra Dourada, city of Mossâmedes-GO. From the months of July of 2007 through August of 2008 monthly visits had been carried out for accompaniment and collects of data of 51 plants, distributed in three populations. For the establishment of the germination protocols in vitro of C. eugenii established the symbiotic culture, pairs the isolated fungic contends the mycorrhizae Epulorhiza sp., obtained from roots of C. eugenii, with the seeds of C. eugenii in medium FA, and the asimbytic culture, where the seeds had been cultivated in culture mediuns that are regularly used for seed orchids germination, being the complete MS medium, the MS medium with reduction to the half of the concentration of macronutrients (½ MS) and the Knudson medium (KC). The analysis of the behavior of C. eugenii allowed to verify that this species present annual budding and at the dry time. At the rainy time, when the temperature raised, plants of C. eugenii start to invest its energy in the production of vegetative parts, such as sprouts of pseudobulbs and leves. The flowers of C. eugenii are disposed of cyclical form in the floral connecting rods, which arrive to reach up to 130 cm of height. This species is self-compatible, even so in natural conditions, the fruit set is low. Not evidenced was presence of efficient pollinators. High frequency of ants during budding of C. eugenii was verified. However, the observations indicated that these insects only act as visitors and they are attracted by the secretion of substance at the time of the budding throughout the floral connecting rod and that have high concentration of soluble solid. The establishment of the symbiotic germination in vitro did not disclose resulted satisfactory because no protocorms formation were obtained. However, satisfactory results had been founded in the asymbiotic germination in vitro, being the ½ MS medium superior to the KC and the complete MS medium for the time, germination of seeds and establishment of new plants of C. eugenii. / A espécie Cyrtopodium eugenii Rchb. f. (Orchidaceae) é amplamente distribuída pelo Brasil, sendo o Planalto Central o seu principal centro de diversidade. C. eugenii é uma espécie terrestre, comumente encontrada no Cerrado, crescendo em solos arenosos, ambientes secos e à meia sombra. Devido ao caráter exótico de sua inflorescência e à beleza de suas flores, C. eugenii apresenta elevado potencial ornamental e comercial. Entretanto, não são encontrados estudos para sua preservação ou métodos para obtenção de mudas que possam ser utilizadas na floricultura ou no paisagismo. Assim, o presente estudo tem como objetivos caracterizar a fenologia, a morfologia e os apectos reprodutivos desta espécie de orquídea e estabelecer protocolos para germinação simbiótica e assimbiótica in vitro. Parte do trabalho foi desenvolvida na Reserva Biológica Prof. José Ângelo Rizzo, um remanescente florestal de 500 ha do bioma Cerrado, cuja vegetação predominante é do tipo Cerrado Rupestre, localizada na Serra Dourada, município de Mossâmedes GO. No período de julho de 2007 a agosto de 2008 foram realizadas visitas mensais para acompanhamento e coleta de dados fenológicos e de biologia floral de 51 indivíduos, distribuídos em três sub-populações. Para o estabelecimento dos protocolos de germinação in vitro de C. eugenii estabeleceu-se o cultivo simbiótico, pareando o isolado fúngico contendo o micélio micorrízico de Epulorhiza sp., obtido a partir de raízes de C. eugenii, com as sementes de C. eugenii em meio FA, e o cultivo assimbiótico, em que as sementes foram cultivadas em meios de cultura comumente usados para germinação de orquídeas, sendo o meio MS completo, o meio MS com redução à metade da concentração de macronutrientes (½ MS) e o meio de Knudson (KC). A análise do comportamento de C. eugenii permitiu verificar que esta espécie apresenta floração anual e na época seca. Na época chuvosa, quando a temperatura é mais elevada, plantas de C. eugenii passam a investir sua energia na produção de partes vegetativas, tais como brotos de pseudobulbos e folhas. As flores de C. eugenii são dispostas de forma cíclica nas hastes florais, as quais chegam a atingir até 130 cm de altura. Esta espécie é autocompatível, embora em condições naturais, a taxa de frutificação seja baixa. Não foi observada presença de polinizadores eficientes. Foi verificada elevada freqüência de formigas durante a floração. Porém, as observações indicaram que estes insetos atuam apenas como pilhadores e que são atraídos pela secreção de uma substância liberada constantemente na época da floração ao longo da haste floral e cujo teor de sólidos solúveis é elevado. O estabelecimento da germinação simbiótica in vitro não revelou resultados satisfatórios uma vez que a formação de protocormos não foi obtida. Todavia, resultados satisfatórios foram encontrados na germinação assimbiótica in vitro, sendo o meio ½ MS superior ao KC e ao MS completo para o tempo, taxa de germinação de sementes e estabelecimento de novas plântulas de C. eugenii.
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Estudo da interação entre células-tronco transplantadas e células do hospedeiro na bioengenharia pulpar / Study of the interaction between transplanted stem cells and host cells in pulp bioengineering

Cibele Pelissari dos Santos 20 March 2014 (has links)
O uso de células tronco já é uma realidade em algumas áreas da Medicina, porém o mesmo não se aplica para a Odontologia, que segue utilizando materiais artificiais para substituir tecidos dentais perdidos. Desde 2000, quando Gronthos e colaboradores identificaram células-tronco na polpa de dentes permanentes, os estudos avançaram para que, num futuro breve, essas células possam ser de fato aplicadas para regenerar tecidos dentais, com destaque para a endodontia, onde o uso dessas células parece ser mais eminente. Dessa forma, esse trabalho procurou analisar a co-participação de células humanas transplantadas e células do hospedeiro em um modelo de engenharia pulpar. Para tanto, células de papila apical, enriquecidas ou não para o marcador CD146, foram transplantadas em câmaras pulpares despulpadas preenchidas com colágeno. Dois modelos animais foram utilizados, sendo um modelo transgênico para o gene GFP e outro imunocomprometido pela aplasia do timo (nude). Os resultados foram analisados nos dias 14 e 21 pós-transplante das amostras em cápsula renal. Nas amostras GFP realizou-se imunofluorescência para o marcador anti-GFP, com o objetivo de identificar as células do hospedeiro, enquanto nas amostras nude utilizou-se o marcador lâmina A para identificar as células humanas transplantadas. Nas análises morfológicas de todas as coroas transplantadas houve a formação de um tecido conjuntivo frouxo de celularidade variável, com a presença de vasos bem formados com eritrócitos em seu interior, inclusive nas coroas que receberam somente colágeno. Somente as amostras que receberam células houve a formação de matriz mineralizada no espaço pulpar, mas nos tempos experimentais analisados não foi possível visualizar as células humanas. Nas amostras nude, o marcador lâmina A foi negativo para todos os grupos que receberam transplante de células. Nas amostras GFPs, o marcador anti-GFP foi positivo na totalidade das células em todas as amostras estudadas. A partir disso concluiu-se que as células-tronco humanas de papila apical transplantadas apesar de terem desempenhado alguma função fisiológica, não foram identificadas após 14 e 21 dias e o tecido neoformado no interior da câmara pulpar era proveniente do hospedeiro. Adicionalmente, concluímos que não é necessário o transplante de células para a formação de um tecido conjuntivo frouxo no interior da câmara pulpar. / The use of stem cells is already a reality in some areas of Medicine, but the same does not apply for Dentistry, which keeps on using artificial materials to replace lost dental tissues. Since 2000, when Gronthos and coleagues identified stem cells in the pulp of permanent teeth, studies advanced so that, in the near future, these cells may actually be applied to regenerate dental tissues, especially in endodontics, in which the use of these cells seems to be more imminent. Thereby, this study sought to examine the co-participation of transplanted human cells and host cells in a model of dental pulp engineering. For this, apical papilla cells enriched or not with CD146 marker, were transplanted into decelluarized pulp chambers (empty crowns) filled with collagen. Two animal models were used, a transgenic model for the GFP gene and an immunocompromised by thymus aplasia (nude). The results were analyzed on days 14 and 21 after transplantation of samples into renal capsule. In the GFP samples immunofluorescence was performed for the anti-GFP marker in order to identify host cells, while in the nude samples the lamina A marker was used to identify the transplanted human cells. In the morphological analysis of all transplanted crowns there was formation of a loose connective tissue of variable cellularity, with the presence of well-formed vessels with erythrocytes inside, including in the crowns that received only collagen. Osteodentine was formed in the pulp chamber only in the samples that received cell, but after the wait time was not possible to visualize the human cells. In the nude samples the Lamina A marker was negative for all groups transplanted with cells. In the GFPs samples, the anti-GFP marker was positive for all cells in this group. We concluded that it was not necessary to use transplanted cells to form a connective tissue inside the pulp chamber and although transplanted human stem cells from apical papilla played some physiological function, after 14 and 21 days of transplantation, they were no longer present in the tissue newly formed by the host.
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Expressão de marcadores imunoistoquímicos em neoplasias melanocíticas de equinos por microarranjo de tecidos / Expression of immunohistochemical biomarkers in equine melanocytic neoplasms using tissue microarray

Maria Luísa de Lima Landman 19 April 2011 (has links)
O objetivo deste estudo foi verificar o comportamento morfológico e a expressão das proteínas S-100, Melan-A, HMB-45, Ki-67, PCNA e p53, em 25 neoplasias melanocíticas de equinos. Informações clínicas (gênero, raça, pelagem, idade e localização da lesão) e morfológicas (características celulares, pigmentares, nucleares, de nucléolo, de melanófagos, presença de invasão e necrose) dos animais foram coletadas. Para a expressão das proteínas por imunoistoquímica foi confeccionado um bloco de microarranjo de tecidos das amostras teciduais, juntamente com os controles positivos das reações. A avaliação da expressão das proteínas S100, HMB-45 e Melan-A foi baseada em um escore, e a das proteínas Ki-67, PCNA e p53 foi feita por contagem de células. Animais SRD (16/25, 64%), de raça Lusitana (6/25, 24%), Árabe (2/25, 8%) e Sueca (1/25, 4%) fizeram parte deste estudo, todos tordilhos e a maioria machos (18/25, 72%). A idade dos animais variou de 4 a 24 anos (média de 13 anos). A região perianal (13/25, 52%) foi a que mais apresentou neoplasias. Na análise morfológica houve predomínio de neoplasias com celularidade moderada (52%) e intensa (40%), distribuição difusa e em feixes (52%), ausência de figuras de mitose (96,0%) e predomínio de células epitelióides e fusiformes no mesmo tumor (80%). A atipia nuclear era discreta (48%) e moderada (44%), com núcleos de formato arredondado e alongado em um mesmo tumor (76%) e cromatina dispersa (60%). Os nucléolos eram múltiplos e, em sua maioria, proeminentes (88%). Observou-se predomínio de células tumorais de pigmentação intensa (68%), distribuição difusa e localização em derme (100%). A maioria dos casos apresentou alta celularidade de macrógafos (64%) e distribuição difusa (96%). Quanto à expressão de proteínas para melanócitos por imunoistoquímica, 44% dos casos apresentaram expressão moderada a forte de S100, 56% apresentaram expressão fraca de HMB-45 e 64% apresentaram expressão negativa de Melan-A. Houve positividade de 72% dos casos para pelo menos dois dos anticorpos citados acima. Os anticorpos de proliferação celular Ki-67 e PCNA tiveram média de acima. Os anticorpos de proliferação celular Ki-67 e PCNA tiveram média de positividade de 0,0005% e 15,7%, respectivamente. A análise da expressão de p53 teve média de 6,1% de positividade. Houve associação estatisticamente positiva entre a celularidade dos macrófagos com S100 e com p53. Em conclusão: 1. os dados clínicos obtidos reproduzem o comportamento biológico das neoplasias melanocíticas em equinos, exceto pela idade dos animais; 2. as neoplasias equinas se assemelham a nevos azuis celulares em humanos e melanocitomas em cães; 3. o microarranjo de tecidos mostrou-se uma maneira econômica, rápida e com menos variáveis técnicas; 4. a utilização de um painel de anticorpos de melanócitos é pertinente na diferenciação entre tumores melanocíticos e não melanocíticos, reproduzindo o painel diagnóstico utilizado em literatura humana e canina; 5. o índice de proliferação celular encontrado sugere que os dois anticorpos (Ki-67 e PCNA) podem ser usados na contagem de células em atividade mitótica e 6. a proteína p53 tem maior relação com a parada do ciclo celular que a observada em outros estudos em equinos, podendo indicar um comportamento biológico diferente do apresentado em cães e humanos. / The aim of this study was to evaluate the morphological behavior, and expression of the following proteins: S-100, Melan-A, HMB-45, Ki-67, PCNA and p53, in 25 equine melanocytic neoplasms. Clinical (gender, breed, coat color, age and lesions location) and morphological (cellular, pigment, nuclear, nucleoli, melanophages, invasion and necrosis) data were collected. A tissue microarray block, embedded in paraffin, with equine tissue samples and positive controls, was elaborated for protein expression through immunohistochemistry. The evaluation of S100, HMB-45 and Melan-A was based on a score, and for Ki-67, PCNA and p53 it was based on cellular count. Breeds were: Mixed breed (16/25, 64%), Lusitano (6/25, 24%), Arab (2/25, 8%) and Swedich (1/25, 4%). All animals were gray and the majority males (18/25, 72%). Age varied from 4 to 24 years old (mean=13 years). The perianal region (13/25, 52%) was the most common location. Morphological analysis have shown neoplasms with predominantly moderate (52%) and intense (40%) cellularity, diffuse and fascicles distribution (52%), no mitoses figures (96%) and predominance of epithelioid and spindle cells in the same tumor (80%). There was discrete (48%) and moderate (44%) nuclear atypia, round and elongated nucleus in the same tumor (76%), and disperse chromatin (60%). Nucleoli were multiple and prominent in the majority of cases (88%). Tumor cells with diffuse and intense pigmentation, with dermal location (100%) were predominant. High cellularity of macrophages (64%) with diffuse distribution (96%) was mostly seen. The protein expression for melanocytes have shown 44% of moderate to strong expression for S100 protein, 56% of weak expression for HMB-45 protein and 64% of negative expression for Melan-A protein. It was found positivity for more than two antibodies in 72% of equine melanocytic neoplasms. The proliferation antibodies Ki-67 and PCNA had mean positivity of 0,0005% and 15,7%, respectively. The p53 expression had mean positivity of 6,1%. Macrophages cellularity was statistically associated with S100 and p53. In conclusion: 1. clinical data obtain reproduce the biological behavior of equine Macrophages celllularity was statistically associated with S100 and p53. In conclusion: 1. clinical data obtain reproduce the biological behavior of equine melanocytic neoplasms, excepting the animals age; 2. equine melanocytic neoplasms assemble to human cellular blue nevi and dogs melanocytoma; 3. the tissue microarray was shown to be an economic, rapid and less variable technique; 4. using a panel for antibodies for melanocytes is relevant to differentiate melanocytic and not melanocytic tumors, reproducing the diagnosis panel used in human and canine literature; 5. the proliferation index found suggests that both antibodies (Ki-67 and PCNA) could be used in mitotic activity cell count; and 6. p53 protein has more relation with cellular cycle stop than in other equine studies, probably indicating a different biological behavior than the presented in humans and dogs.

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