Orientador: Helio Langoni / Resumo: O interesse pelo estudo das zoonoses, enfermidades comuns aos humanos e aos animais, aumentou acentuadamente nos últimos anos, sugerindo maior integração, conhecimento e relacionamento entre profissionais da área da saúde. Dentre estas zoonoses a brucelose, a toxoplasmose, a leptospirose e a doença de Chagas (DC) têm elevada importância veterinária e para a saúde pública, pela gravidade e potencial letalidade com que se apresentam em humanos. Atenção especial deve ser dada às pessoas vivendo com HIV/aids (PVHA), pois a imunossupressão à que estão sujeitas pode agravar ainda mais o seu quadro clínico, fato que gera necessidade de diagnósticos mais eficientes para essas infecções. Com o objetivo de determinar o perfil sorológico destas zoonoses em PVHA, atendidos no Serviço de Ambulatório Especializado de Infectologia “Domingos Alves Meira” (SAEI-DAM), entidade pertencente ao complexo de assistência da Faculdade de Medicina de Botucatu – UNESP, bem como relacionar aos hábitos, comportamentos e fatores de risco de exposição a essas doenças, além da obtenção de dados referentes ao grau de conhecimento em relação às zoonoses estudadas. Foram analisadas 236 amostras de soro desses pacientes para a presença de anticorpos anti- Brucella abortus, que mostraram-se negativas para todas as amostras. Para leptospirose quatro (1,69%) amostras foram positivas, para a toxoplasmose 154 (65%) amostras positivas, sendo 146 (94,8%) somente para anticorpos da classe IgG, dois (1,3%) somente para ... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Doutor

A toxoplasmose é uma protozoose altamente prevalente que atinge pelo menos um bilhão de indivíduos no mundo. A infecção causada pelo Toxoplasma gondii é benigna e assintomática, mas pode causar perdas visuais ou morte em fetos e pacientes imunossuprimidos. Isto pode ser controlado com diagnóstico e instituição de tratamento, mas depende da determinação de infecção ativa ou recente. O diagnóstico parasitológico é complexo, demorado e só executado em poucos centros, sendo a sorologia específica essencial no diagnóstico da doença. A avidez de anticorpos IgG tem sido utilizada para determinação da infecção recente, porém os testes convencionais de avidez só permitem uma estimativa indireta destes anticorpos a partir dos anticorpos totais e os de alta avidez. A quantificação destes anticorpos de baixa avidez seria interessante devido aos altos títulos na fase aguda da infecção ou como marcadores da atividade da doença. Padronizamos um ensaio imunoenzimático (ELISA), utilizando o pH como agente caotrópico, para permitir a determinação e quantificação dos anticorpos de baixa avidez. Na padronização utilizamos amostras de soro de coelhos experimentalmente infectados ou amostras do banco de material biológico do Laboratório de Protozoologia do IMTSP. Nossos resultados mostraram que pH 3,5 apresentou poder caotrópico semelhante a uréia 6M (r2= 0,9909), e que nos soros experimentais, os anticorpos de alta avidez foram resistentes aos dois caotrópicos associados. Os anticorpos recuperados na eluição com pH 3.5 ou Uréia eram semelhantes quanto a especificidade antigênica por imunomarcação ou Western Blot. A neutralização do anticorpo eluído por pH permitiu seu reensaio por ELISA após 1 hora de renaturação, com a quantificação direta dos anticorpos de baixa avidez.. A reprodutibilidade intra e inter teste foi superior a 95%, embora com resultados piores para o pH 3,5. Uma vez padronizada a reação, foram analisadas 150 amostras de soros humanos com sorologia e avidez conhecidas, composta por grande maioria de soros de alta avidez. As medidas de avidez por porcentagem mostraram um resultado errático, atribuído ao uso de grande maioria de anticorpos de alta avidez, embora a medida dos anticorpos recuperados mantivesse correlação com estimativa a partir da medida indireta (r2= 0.48). Esta abordagem permite a determinação direta dos anticorpos de baixa avidez, que são os anticorpos inicialmente produzidos em um desafio antigênico. Nosso ensaio é semelhante ao imunológico, já que a apresentação de antígenos por exossomos ácidos de células dendríticas foliculares no centro germinativo parece ser o sistema de seleção de clones produtores de anticorpos de alta avidez. As perspectivas futuras de uso da medida dos anticorpos de baixa avidez na toxoplasmose são imensas, desde a relação com a gravidade da doença, pela sua quantidade, ou da presença de infecção recente, principalmente em infecção congênita ou e em imunossuprimidos, ou a reatividade da doença crônica, como na toxoplasmose ocular. / Toxoplasmosis is a highly prevalent protozoosis, affecting at least one billion people worldwide. The infection caused by Toxoplasma gondii is asymptomatic and benign but it can cause visual losses in addition to death in fetuses and immunocompromised patients. The agent can be controlled by early diagnosis and treatment, but this therapy depends on the determination of active or recent infection. The parasitological diagnosis is complex, time consuming and only performed in few centers, so specific serology is essential for diagnosis. The IgG avidity tests has been used to determine recent infection, but avidity conventional tests only provide an indirect estimate of low avidity antibodies from the total and high avidity antibodies. The quantification of low avidity antibodies would be interesting due to high titers in the acute phase of infection or as markers of disease activity. Using reversible chaotrope such as pH, we standardized an enzyme immunoassay (ELISA) to allow the determination and quantification of low avidity antibodies. For standardization we used serum samples from experimentally infected rabbits or samples of biological material bank of the Laboratory of Protozoology, IMTSP. Our results showed that pH 3.5 is a chaotrope similar to 6M urea (r2 = 0.9909) in avidity ELISA, and high avidity antibodies had similar resistance to two associated chaotrope in experimental sera. The antibodies recovered on elution with pH 3.5 or urea had similar antigen specificity by immunostaining or Western blot. The neutralizing antibody eluted by pH allowed retest by ELISA after 1 hour of refolding, with direct quantification of antibodies of low avidity. The reproducibility inter and intra test were above 95%, but with worse results for pH 3.5. After standardization, we analyzed 150 samples of human sera with known serology and avidity, composed by a large majority of high avidity samples. Avidity as percent of high avidity antibodies showed erratic results in chaotrope comparison, attributed to the majority of high avidity samples, although the direct measure of low avidity IgG kept correlation with the indirect estimate (r2 = 0.48). This approach allows the direct determination of low avidity antibodies that are early produced in an antigen challenge. Our test is similar to the biology of antibody selection, since antigen presentation by acid exosomes of follicular dendritic cells in germinal center seems to be the system of selection of clones that produce high avidity antibodies. The prospective use of the quantification of low avidity antibodies in toxoplasmosis are attractive, either by the quantitative relationship with the severity of the disease; or the increased presence in recent infections, especially in congenital infection and in immunosuppressed patients, or their relative increase in reactivated chronic disease, such as ocular toxoplasmosis.

Toxoplasma gondii é apontado como causa primária de doença congênita, abortamentos e natimortalidade em humanos e animais de produção. No Brasil, genótipos atípicos do parasita podem estar relacionados com ocorrência de enfermidade severa, inclusive em indivíduos imunocompetentes. Este estudo aplicou-se à reprodução experimental de infecções por T. gondii em ovinos, com vistas a estudar aspectos relacionados à ocorrência da transmissão congênita, avaliando reinfecções produzidas por diferentes genótipos de T. gondii isolados no Brasil. Treze ovelhas soronegativas para a infecção por T. gondii foram primo-infectadas com 2x103 oocistos esporulados via oral deste parasito, Grupo 1 (4 animais) com genótipo BrI e Grupos 2 e 3 (5 e 4 animais, respectivamente) com genótipo BrIII. Após a cronificação da infecção, os animais foram emprenhados. Da mesma forma, uma segunda infecção foi realizada após 2 meses de gestação, animais dos Grupos 1 e 3 receberam oocistos de T. gondii genótipo BrIII e o Grupo 2 recebeu BrI. Semanalmente foram observados os efeitos da reinfecção comparando com um grupo controle (5 animais) não infectado, através de exames físicos, ultrassonográficos, sorológicos, hematológicos e bioquímicos. Utilizando bioensaio em camundongos, análise molecular, exames histopatológicos e imunohistoquímica, avaliou-se a infecção experimental de ovelhas e cordeiros. Verificaram-se as diferenças entre as médias dos resultados dos grupos com ANOVA dois fatores para a sorologia e ANOVA um fator, post-hoc Bonferroni ou Kruskall-Wallys, post-hoc U de Mann-Withney para os outros parâmetros, sendo considerados significativos quando p<0,05. Não foram observados abortamentos, obtiveram-se 19 cordeiros dos grupos experimentais, todos soronegativos. As ovelhas infectadas apresentaram altos títulos de IgG e hipertermia após a primo-infecção e aumento moderado após a reinfecção, com diferença estatística somente no Grupo 1. Parâmetros clínicos alterados nos grupos experimentais foram observados principalmente nos dias 21 e 28 após o desafio. Houve significância estatística comparando-se resultados de patologia clínica em infecções por genótipos diferentes em vários pontos de tempo. À necropsia, observou-se fibrina nas placentas das ovelhas infectadas, um feto mumificado em uma das ovelhas do Grupo 2 e cordeiros e ovelhas com linfoadenomegalia. PCR realizado em amostras de tecido alterado confirmou presença de T. gondii em linfonodos e coração de cordeiros do grupo 2 e coração e placenta de ovelhas do Grupo 3. Nos bioensaios em camundongos dos tecidos de cordeiros foram observados cistos cerebrais em um animal do Grupo 2, confirmados por PCR. Análises histopatológicas confirmaram taxa de transmissão de 26% nos três grupos experimentais. Exceto por uma ovelha do Grupo 1, todos os ovinos, incluindo o cordeiro positivo, estavam infectados com o isolado utilizado na primo-infecção. Observou-se maior frequência de transmissão congênita endógena em ovelhas soropositivas após reinfecção com genótipos diferentes, com alterações fisiológicas significativas em ovelhas gestantes, porém não acarretando abortamento ou malformações. A primo-infecção proporcionou imunidade cruzada contra reinfecção subsequente na maioria dos animais, aparentando maior eficácia quando utilizado genótipo BrIII / Toxoplasma gondii is considered the primary cause of congenital disease, miscarriage and stillbirth in humans and farm animals. In Brazil, non-classical genotypes may be related with severe toxoplasmosis also in immunocompetent patients. This study evaluated infections and reinfections caused by two atypical field strains of T. gondii isolated in Brazil and their consequences over congenital transmission in sheep. Thirteen Santa Ines ewes seronegative for T. gondii were prime-infected orally with 2x103 sporulated oocysts, being Group 1 from genotype BrI (4 animals), whilst Groups 2 and 3 ewes received an inoculum from genotype BrIII (5 and 4 animals, respectively). After infection chronification all animals were mated. Likewise, a second inoculation was held at 2 months pregnancy, Group 1 and 3 receiving oocysts from genotype BrIII, while Group 2 was infected with genotype BrI. Blood samples for serology, CBC, biochemistry, vital signs evaluation and abdominal ultrasound were performed weekly, comparing with a control group (5 animals). Experimental infection from ewes and lambs was evaluated thru mice bioassay, molecular analysis, histopathological and immunohistochemical tests. To analyze serology variation between groups their mean results were subjected to two-way ANOVA. The other parameters were tested using one-way ANOVA followed by Bonferroni or Kruskall-Wallys followed by Mann-Whitney U, where statistical significance was set at p<0,05. No abortion was observed and 19 lambs were born from ewes of the experimental groups presenting negative serology. Infected ewes showed high IgG titles and fever after prime-infection and moderate increase after reinfection, although only Group 1 presented statistical significance. Altered clinical values were observed from experimental groups mainly 21 and 28 days post challenge. Significant differences were detected when comparing infections from different genotypes. Post-mortem analysis revealed fibrin over placentas from ewes of all experimental groups; a mummified fetus inside an ewe from Group 2 and lymph nodes enlargement within ewes and lambs. PCR performed on altered tissues from necropsy confirmed presence of T. gondii on lymph nodes and heart of a Group 2 lamb and on placenta and heart of Group 3 ewes. Considering mice bioassays from lamb tissues, one animal from group 2 presented brain smear cysts, also PCR analysis positive. Histopathological tests corroborate a congenital transmission rate of 26% among experimental groups. Apart from one ewe from Group 1 all the other animals, including the positive lamb, were infected with the strain from the prime-infection. Therefore, it was more frequently observed endogenous congenital transmission in seropositive ewes after reinfections with different strains leading to significant physiological variations in pregnant ewes, abortion and congenital malformations absence notwithstanding. The prime-infection also provided cross protective immunity against a following reinfection for the majority of the animals, suggesting apparent better response when performed using genotype BrIII

Os isolados de Toxoplasma gondii encontrados no Brasil apresentam grande variedade genética. No país, foram verificadas quatro linhagens clonais, denominadas tipo BrI, BrII, BrIII e BrIV. Dentre elas, a virulência para camundongos varia, sendo BrI virulenta, BrIII não virulenta e, as linhagens BrII e BrIV são consideradas de virulência intermediária. A definição da virulência desses isolados é feita, na maioria dos estudos, a partir do isolamento por bioensaio, com a determinação da mortalidade de camundongos infectados. No entanto, a dose de T. gondii inoculada nesses animais é desconhecida e, assim, trata-se de um método impreciso para caracterização da virulência. Dessa maneira, este estudo tem por objetivo avaliar a virulência, em camundongos, de 22 isolados brasileiros de T.gondii, utilizando inóculos padronizados. Para o teste de virulência, utilizou-se taquizoítas de cada um dos isolados, em três concentrações (10¹, 10² e 10³). Cada dose foi inoculada via intraperitoneal em grupos formados por quatro camundongos heterogênicos fêmeas, de oito semanas de idade, da linhagem Swiss Webster. A mortalidade dos animais foi observada por 30 dias e, baseando-se nesses dados, além do tempo decorrido pós-inoculação até a morte dos animais, determinou-se a virulência dos isolados. Dos 22 isolados brasileiros incluídos nesse estudo, sete (32%) foram definidos como de virulência intermediária, pois houve sobrevivência de animais infectados e a mortalidade foi dose-dependente. Além disso, 15 (68%) foram considerados virulentos, uma vez que causaram a morte de todos os camundongos independente da dose analisada. Comparando as classificações definidas pelo bioensaio e pelo teste de virulência, 83% dos isolados virulentos analisados se mantiveram como virulentos, em contrapartida os isolados não virulentos e de virulência intermediária pelo bioensaio mostraram um fenótipo de maior virulência no teste. Devido à predominância de isolados virulentos no Brasil, o uso de uma metodologia padronizada para determinação da virulência em camundongos é de pouca utilidade epidemiológica. / The isolates of Toxoplasma gondii found in Brazil present a great genetic variety. In the country, four clonal lineages, denominated type BrI, BrII, BrIII and BrIV were verified. Among them, virulence for mice varies, with virulent BrI and non-virulent BrIII, and the BrII and BrIV strains are considered as intermediate virulence. The determination of the virulence of these isolates is made, in the majority of the studies, from the isolation by bioassay, with the determination of the mortality of infected mice. However, the dose of T. gondii inoculated in these animals is unknown and thus is an imprecise method for characterization of virulence. Thus, this study aims to evaluate the virulence of 22 Brazilian isolates of T. gondii in mice using standardized inocula. For the virulence test, tachyzoites from each of the isolates were used in three concentrations (10¹, 10² and 10³). Each dose was inoculated intraperitoneally into groups consisting of four 8-week-old female heterogenic mice of the Swiss Webster strain. The mortality of the animals was observed for 30 days and, based on these data, in addition to the time elapsed post-inoculation until the death of the animals, the virulence of the isolates was determined. Of the 22 Brazilian isolates included in this study, seven (32%) were defined as intermediate virulence, since there was survival of infected animals and mortality was dose-dependent. In addition, 15 (68%) were considered virulent, since they caused the death of all mice regardless of the dose analyzed. Comparing the classifications defined by the bioassay and the virulence test, 83% of the virulent isolates analyzed remained virulent. In contrast, the non virulent isolates and intermediate virulence by the bioassay showed a phenotype of greater virulence in the test. Due to the predominance of virulent isolates in Brazil, the use of a standardized methodology for the determination of virulence in mice is of little epidemiological utility.

Made available in DSpace on 2015-04-14T13:54:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 453678.pdf: 323040 bytes, checksum: fd4b44c4b7c1c3b0c9912c9eb1ee0883 (MD5) Previous issue date: 2014-01-17 / Introduction : Parasitic infections are a public health problem in Brazil and in other developing countries with variations according to sanitation, socioeconomic status, educational level, age, and hygienic habits, among other variables. In the elderly population, few studies have been published about intestinal parasites and Toxoplasma gondii infections. Objective : To evaluate the prevalence of intestinal parasitic infections and T. gondii seroprevalence associated with the demographic, socioeconomic, hygienic, sanitary and health conditions of the elderly of the Family Health Strategy (FHS) in the city of Porto Alegre, Rio Grande do Sul, Brazil. Methods : This cross-sectional study collected a random sample of FHS elderly individuals living in the city of Porto Alegre, from march 2011 to december 2012. For selection of the elderly, 30 FHS teams were selected, of which 36 respondents were randomly selected by ESF. Data collection was conducted by Community Health Workers (CHW) during home visits; the CHW administered a general epidemiological questionnaire and provided instructions to each patient regarding the collection of fecal samples. Blood and stool samples were collected later by the project team at the healthcare unit where each elderly individual was registered. The blood samples intended for hemograms were sent to the Clinical Pathology Laboratory of the S?o Lucas Hospital. The blood samples intended for toxoplasmosis examination and the fecal samples intended for parasitological stool examination were sent to the Biochemistry, Molecular Genetics and Parasitology Laboratory of the Institute of Geriatrics and Gerontology, PUCRS. Results : The prevalence of intestinal parasites was 10.8%, with the following frequencies: 29 (44.0%), Endolimax nana; 21 (32.0%), Entamoeba coli; 6 (9.0%), Giardia lamblia; 4 (6.0%), Ascaris lumbricoides; 3 (5.0%), Strongyloides stercoralis; 2 (3.0%), Trichuris trichiura; and 1 (2.0%), Iodamoeba butschlii. We found no significant association between infection and the demographic and socioeconomic variables. Regarding the hygiene and sanitary variables, the elderly who had other pets that were not cats or dogs had a higher prevalence of intestinal parasites (27.8% (P=0.041)), and those who had animals that were bathed more often had a higher prevalence of enteroparasites (16.0% (P=0.024)); these associations remained significant in the multivariate analysis. Regarding the health variables, the elderly who did not have hypertension or mental disease had a higher prevalence of intestinal parasites than those who had these diseases (15.4% (P=0.032) and 12.8% (P=0.049), respectively). In assessing the hemogram, anemia was no significant relationship with intestinal parasites and association with eosinophilia was significant when examined only the prevalence of pathogenic parasites: 7.3% (P=0.010). In T. gondii analysis were evaluated 599 elderly individuals; the seroprevalence of T. gondii IgG and IgM was 88.0% and 0.8%, respectively. In the multivariate analysis, the following variables were independently associated with IgG antibody positivity: age, personal income and use of eyeglasses. With respect to IgM antibody positivity, the independently associated variables were age, self-rated health and wears glasses. In assessing the seroprevalence, 581 elderly individuals were evaluated. Conclusion : The prevalence of intestinal parasites in the elderly was low compared with that found in other studies, and the parasites were predominantly nonpathogenic, such as E. coli and E. nana. These findings implicate interpersonal transmission, environmental contamination or the ingestion of contaminated food or water in this population. There was a high prevalence of elderly individuals who were positive for toxoplasma IgG antibodies. This finding raises concern regarding potential latent infection because this population may have compromised immunity. The findings highlight the importance of the ongoing measures related to sanitation and hygiene education in this community. / Introdu??o : As parasitoses constituem um problema de sa?de p?blica no Brasil, apresentando varia??es de acordo com as condi??es de saneamento b?sico, n?vel socioecon?mico, grau de escolaridade, idade e h?bitos de higiene, entre outras vari?veis. Na popula??o idosa s?o raros os estudos publicados sobre infec??es por enteroparasitos e pelo Toxoplasma gondii. Objetivo : Avaliar a preval?ncia das infec??es enteroparasit?rias e a soropreval?ncia de T. gondii de acordo com as condi??es demogr?ficas, socioecon?micas, higi?nicas, sanit?rias e de sa?de dos idosos atendidos pela Estrat?gia Sa?de da Fam?lia (ESF) do munic?pio de Porto Alegre, Rio Grande do Sul, Brasil. Metodologia : Estudo transversal coletado em uma amostra aleat?ria de idosos da ESF do munic?pio de Porto Alegre, no per?odo de mar?o de 2011 a dezembro de 2012. Para a sele??o dos idosos, foram sorteadas 30 equipes da ESF, das quais foram sorteados 36 idosos por ESF. A coleta de dados foi realizada pelos Agentes Comunit?rios de Sa?de (ACS), em visita domiciliar, por meio de question?rio geral de inqu?rito epidemiol?gico e orienta??o quanto ? coleta de amostras fecais. A coleta de sangue e fezes foi realizada posteriormente pela equipe do projeto na unidade de sa?de onde os idosos estavam cadastrados. As amostras de sangue para a realiza??o de hemograma foram encaminhadas para o Laborat?rio de Patologia Cl?nica do Hospital S?o Lucas da PUCRS. As amostras de sangue para o exame de toxoplasmose e as amostras para a realiza??o do exame parasitol?gico de fezes foram encaminhadas para o Laborat?rio de Bioqu?mica, Gen?tica Molecular e Parasitologia do Instituto de Geriatria e Gerontologia da PUCRS. Resultados : Na avalia??o dos enteroparasitos, foram avaliados 581 idosos e a preval?ncia de enteroparasitoses foi de 10,8%, sendo 29 (44,0%) de Endolimax nana, 21 (32,0%) de Entamoeba coli, 6 (9,0%) de Giardia lamblia, 4 (6,0%) de Ascaris lumbricoides, 3 (5,0%) de Strongyloides stercoralis, 2 (3,0%) de Trichuris trichiura e 1 (2,0%) de Iodamoeba b?tschlii. N?o foi encontrada nenhuma associa??o significativa com as vari?veis demogr?ficas e socioecon?micas. Nas vari?veis higi?nicas e sanit?rias, os idosos que diziam ter outros animais de estima??o, exceto gato ou cachorro, apresentaram maior preval?ncia de enteroparasitos: 27,8% (P=0,041), e os que possu?am animais que eram banhados com maior frequ?ncia tamb?m apresentaram maior preval?ncia de enteroparasitos: 16,0% (P=0,024); essas vari?veis se mantiveram na an?lise multivariada. Na associa??o com as vari?veis de sa?de, os idosos que n?o apresentavam hipertens?o arterial ou doen?a mental tiveram maior preval?ncia de enteroparasitos do que os que tinham essas doen?as: 15,4% (P=0,032) e 12,8% (P=0,049), respectivamente. Na avalia??o do hemograma, anemia n?o teve rela??o significativa com as enteroparasitoses, e a associa??o com eosinofilia foi significativa quando avaliada a preval?ncia somente de parasitos patog?nicos: 7,3% (P=0,010). Na an?lise do T. gondii, foram avaliados 599 idosos com soropreval?ncia para T. gondii IgG de 88,0% e 0,8% para T. gondii IgM. Na an?lise multivariada, as vari?veis que se associaram de forma independente para IgG positivo foram: faixa et?ria, renda pessoal e uso de ?culos; e para IgM positivo: faixa et?ria, autopercep??o de sa?de e uso de ?culos. Conclus?o : A preval?ncia de enteroparasitos encontrada nos idosos foi baixa quando comparada com outros estudos, ocorrendo um predom?nio de parasitos n?o patog?nicos, como E. coli e E. nana. Esses achados indicam a possibilidade de transmiss?o interpessoal, contamina??o ambiental ou mesmo a ocorr?ncia de ingest?o de alimentos ou ?gua contaminados. Com rela??o ? toxoplasmose, foi encontrada uma alta preval?ncia de anticorpos IgG positivo para T. gondii nos idosos. A preocupa??o ? para uma potencial infec??o latente, uma vez que essa popula??o est? sujeita a condi??es que podem comprometer sua imunidade. Sugere-se, assim, o desenvolvimento de medidas relacionadas a saneamento b?sico e programas cont?nuos de educa??o sanit?ria na comunidade estudada.

Made available in DSpace on 2016-08-10T10:55:34Z (GMT). No. of bitstreams: 1 FABIO FERNANDES RODRIGUES.pdf: 954225 bytes, checksum: 5d064ea8e5f258f04a154e91365850bb (MD5) Previous issue date: 2007-06-11 / Toxoplasmosis is a zoonosis with universal distribution. The protozoan Toxoplasma gondii is responsible for the pathology, which infects fowls and mammals including men. The present study is an epidemiologic inquiry that has as objective to establish epidemiologic profile of toxoplasmosis in Anápolis County, delineating periodic incidences and the prevalence. The epidemiologic inquiry has as the aim acquires data which lead primary, secondary and tertiary prevention for toxoplasmosis more efficient and effective in Anápolis County and other cities. Results of serologic assays for antibodies anti-toxoplasma of immunoglobulins (Ig) M and G class, carried out by public laboratories of Anápolis were used. Results correlated with sex and laboratorial techniques during five years (2001 January to 2005 December) were used. Term of free and revealed consent was sign by six laboratories which participated of research. In all laboratories was analyzed 2399 exams, but 56 was considered missing cases, therefore, left 2343 exams. The data was submitted to descriptive statistic analysis, which showed absolute results and percentiles. In Anápolis County the acute toxoplasmosis prevalence was 11% in the group with antibodies antitoxoplasma IgM+ IgG- combination. Cases prevalence which has previous contact with Toxoplasma gondii followed by acquired immunity was 3% in the group with antibodies anti-toxoplasma IgM- IgG+ combination. Cases prevalence, with exclusion of acute toxoplasmosis diagnosis, without discard previous infection possibility, was 60% in the group with antibodies anti-toxoplasma IgM- IgG+ combination. Cases prevalence with exclusion of acute toxoplasmosis and previous infection possibility in the group IgM- IgG- was 25%. Indeterminate cases have a prevalence of 1%. In gender variable female corresponded to 93,42%. The laboratorial technique most used was immunefluorescence (IFI), representing 66,75% of all exams. In conclusion cases prevalence with exclusion of acute toxoplasmosis diagnosis, without discard previous infection possibility is in agreement with literature; global prevalence was undertook without consider ages; was impossible to know toxoplasmosis positivity in pregnancy; acute toxoplasmosis rate was 11%. / A toxoplasmose é uma zoonose de distribuição universal. O protozoário Toxoplasma Gondii, responsável pela patologia, infecta animais homeotérmicos incluindo o homem. O presente estudo trata-se de um inquérito epidemiológico que objetivou traçar o perfil epidemiológico da toxoplasmose no Município de Anápolis, estabelecendo incidências periódicas e a prevalência. O inquérito epidemiológico aplicado tem o objetivo de obter dados que permitirão maior eficácia e efetividade nas futuras medidas de prevenção primária, secundária e terciária a serem adotadas na cidade de Anápolis ou em outros municípios para a toxoplasmose. Foram utilizados os resultados dos testes sorológicos realizados pelos laboratórios da rede assistencial de saúde da cidade de Anápolis para a pesquisa de anticorpos anti-toxoplasma das classes de imunoglobulinas (Ig) M e G, correlacionados com as variáveis sexo e técnica laboratorial utilizada, em uma série histórica de 05 anos (janeiro de 2001 a dezembro de 2005). Assinaram o Termo de Consentimento Livre e Esclarecido e participaram da pesquisa seis (06) laboratórios, e foi contabilizado um total de 2399 exames analisados, sendo que 56 casos foram considerados faltosos (missing cases), utilizando-se, então, o resultado de 2343 exames. Para avaliação dos dados, os mesmos foram submetidos à análise estatística descritiva, apresentando valores absolutos em cada variável e seus respectivos percentuais. No Município de Anápolis a prevalência da toxoplasmose aguda no grupo resultante da combinação de anticorpos anti-toxoplasma IgM+ IgG-, foi de 11%. Constatou-se que a prevalência de casos em que houve contato prévio com o Toxoplasma gondii seguidos de uma imunidade adquirida foi de 3% para o grupo resultante da combinação de anticorpos anti-toxoplasma IgM+ IgG+. Averiguou-se que a prevalência de casos em que se exclui o diagnóstico de toxoplasmose aguda, sem descartar a possibilidade de infecções antigas foi de 60% para o grupo resultante da combinação de anticorpos anti-toxoplasma IgM- IgG +. A prevalência de casos em que se exclui o diagnóstico de toxoplasmose aguda e que também se descarta a possibilidade de infecções antigas, representada pelo grupo IgM-/IgG -, foi de 25%. Ressalta-se que a situação indeterminada teve uma prevalência de 1%. Com relação à variável sexo, predominou o feminino, correspondendo a 93,42% dos participantes e a técnica laboratorial mais utilizada foi a de Imunofluorescência (IFI), com 66,75%. Concluiu-se que a prevalência de casos em que se exclui o diagnóstico de toxoplasmose aguda, sem descartar a possibilidade de infecções antigas, está em concordância com a literatura; a prevalência global foi apontada sem se considerar as faixas etárias; não foi possível conhecer a positividade de toxiplasmose para gestação; a taxa de toxoplasmose aguda foi de 11%.

A toxoplasmose é uma infecção mundial que é transmitida por carne contendo cistos teciduais, água ou legumes crus contaminados com oocistos, contato com felinos, ou transmissão vertical. A toxoplasmose é usualmente assintomática, mas pode causar doença severa no feto quando transmitida durante fase aguda na mãe. O rastreamento da toxoplasmose congênita é normalmente executado durante o pré-natal, pela detecção de anticorpos IgM específico ou pela demonstração de aumento dos títulos de anticorpos IgG para T.gondii. Neste trabalho, 160 mães IgM positivas em rastreamento externo foram avaliadas para IgM, IgG, IgA e avidez dos anticorpos IgG em ensaios usando Uréia e NH4SCN como agente caotrópico, e extrato salino e uma proteína recombinante ROP2 como antígeno. A maioria das mães com resultado positivo de IgM eram negativas (124) quando retestadas, 16 negativas para todos os testes e somente 36 casos de IgM e IgG positivos. Nossa reação foi convalidada pelo Kit VIDAS Toxo IgG (Biomerieux), as 15 amostras aleatórias foram concordantes na maioria das amostras, incluindo as 3 de baixa avidez. A maioria das mães com IgG e IgM positivas confirmadas apresentaram índices intermediário e alto de avidez, e apenas 3 com índice baixo de avidez, que é sugestivo de infecção aguda. O uso de proteína recombinante Rop2 como antígeno resultou em muitos falsos negativos. O rastreamento de toxoplasmose congênita em áreas de alta prevalência induz uma baixa eficiência da sorologia, altos índices de pacientes tratados e baixa detecção. Ensaios de avidez são promissores, mas a sua padronização é obrigatória. / Toxoplasmosis is a worldwide infection transmitted by meat containing tissue cysts, water or crude vegetables contaminated with oocysts, contact with feline or vertical transmission. Toxoplasmosis is usually asymptomatic, but it can cause severe disease to the fetus during acute mother infection. The screening of congenital toxoplasmosis is usually been performed during prenatal, by detecting specific IgM antibodies or by demonstration of a significant increase specific IgG antibodies. In this work, 160 confirmed IgM positive mothers by external screening were evaluated for IgM, IgG, IgA, and avidity by several approaches using Urea and NH4SCN as chaotropic agents, and saline extract and a recombinant protein Rop2 as antigen. Most mother (124) were IgM negative when retested, 16 negative for all T.gondii tests and only 36 IgM and IgG positive. Our avidity reaction was convalidated by Kit VIDAS Toxo IgG (Biomerieux), 15 aleatory samples were concordant in most samples, including the 03 low avidity. Most of confirmed IgG and IgM positive mothers presented intermediary or high avidity indexes, only 3 presenting low avidity index, sugestive of acute infection. Use of recombinant proteins Rop 2 as antigen resulted in high false negative. Screening congenital toxoplasmosis in high prevalent areas by IgM serology showed low efficiency, higher treatment rates and low detection of acute infection. Avidity assays are promising markers of recent infection, but false negatives could be frequent.

A ovinocultura é um sistema de criação muito antigo em nosso país e ainda continua apresentando uma série de problemas que dificultam a produção econômica desses animais e necessitam de urgentes soluções. Visando minorar estes prejuízos esta pesquisa foi idealizada com o intuito de realizar um estudo minuncioso das principais enfermidades reprodutivas parasitárias e bacterianas. Todos os animais foram submetidos ao exame clínico geral e específico do sistema reprodutor e colheram-se amostras de soro, sêmen, abortamentos, lóquios, secreções, fezes e zaragatoa prepucial e vaginal dependendo da enfermidade a ser estudada. Não foi possível o isolamento nos fetos de nenhum agente etiológico. Conclui-se que a toxoplasmose é a enfermidade de maior importância nos rebanhos de estado de São Paulo e a de maior fator de risco em casos de abortamentos, a neosporose estaria relacionada principalmente com animais que apresentam repetição de cio, leptospirose foi observado em baixa titulação e a mais prevalente foi a Leptospira australis sorovar australis proveniente de animais silvestres, a campilobacteriose e a brucelose são as duas enfermidades da reprodução com menor ocorrência no estado. Foi isolado o primeiro caso de endometrite no Brasil por Histophilus somni. Foi isolado o primeiro caso de orquite por Actinobacillus seminis no estado de São Paulo. / Sheep industry is a traditional system in Brazil and presents a series of issues that complicate economical exploitation and urgently need solution. In order to reduce losses this research was idealized to carefully study the major bacterial and parasitary reproductive diseases. All animals were submitted to a general and specific reproductive system clinical examination. Blood, semen, abortions, lochia, vaginal discharges, feces, and preputial/vaginal swabs were collected according to the studied disease. It was not possible to isolate any etiological agent from aborted fetuses. The conclusion was that toxoplasmosis was the major disease on São Paulo herds and has the biggest risk factor in abortions, neosporosis would be related to animals that present heat repetition, leptospirosis was observed with low antibodies titles and the most prevalent was Leptospira australis sorovar australis arising from wild animals, campilobacteriosis and brucellosis are both the reproductive diseases with the lowest occurrence in the state. The first endometritis case caused by Histophilus somni. In Brazil was isolated. The first orchitis case caused by Actinobacillus seminis in São Paulo state was isolated.

As formas sintomáticas de toxoplasmose são um grave problema de saúde pública e ocorrem em cerca de 10 a 20% das pessoas infectadas. Com o objetivo de melhorar o diagnóstico molecular de toxoplasmose sintomática em pacientes brasileiros, este estudo avaliou o desempenho da PCR em tempo real (qPCR) na detecção do DNA de T. gondii testando dois conjuntos de iniciadores moleculares (B1 e REP-529) para diagnóstico molecular. A metodologia foi testada em 807 amostras clínicas com diagnóstico clínico conhecido, ELISA e PCR convencional (cPCR) em um período de 9 anos. Todas as amostras foram de pacientes com suspeita clínica de diferentes formas da toxoplasmose. De acordo com a curva mínima de limite de detecção (no CT), o REP-529 apresentou maior sensibilidade para detectar DNA de T. gondii do que B1. Ambos os conjuntos de iniciadores moleculares foram avaliados retrospectivamente usando o DNA de 515 amostras clínicas diferentes. Os 122 pacientes com resultado negativo na PCR em tempo real, provavelmente por terem infecção crônica, demonstraram alta especificidade (REP-529, 99,2% e B1, 100%). Das 393 amostras com ELISA positivo (IgG), 146 apresentaram diagnóstico clínico de toxoplasmose e cPCR positivo. As sensibilidades de REP-529 e B1 foram de 95,9% e 83,6%, respectivamente. A comparação dos desempenhos do REP-529 e B1 foi analisada prospectivamente em 292 amostras. Assim, a partir de um total de 807 amostras de DNA analisadas, 217 (26,89%) apresentaram PCR positivo, pelo menos em um conjunto de iniciadores e com toxoplasmose sintomática confirmada pelo diagnóstico clínico. O REP-529 foi positivo em 97,23%, enquanto o B1 amplificou apenas 78,80%. Depois de comparar várias amostras em um laboratório brasileiro de referência, este estudo concluiu que o conjunto de iniciadores REP-529 apresentou melhor desempenho do que B1. Essas observações foram baseadas após o uso de casos com diagnóstico clínico definido, ELISA e cPCR. / Symptomatic forms of toxoplasmosis are a serious public health problem and occur in around 10-20% of the infected people. Aiming to improve the molecular diagnosis of symptomatic toxoplasmosis in Brazilian patients, this study evaluated the performance of real time PCR (qPCR) in detecting T. gondii DNA testing two primer sets (B1 and REP-529) for molecular diagnosis. The methodology was assayed in 807 clinical samples with known clinical diagnosis, ELISA, and conventional PCR (cPCR) results in a 9-year period. All samples were from patients with clinical suspicion of several features of toxoplasmosis. According to the minimum detection limit curve (in CT), REP-529 had greater sensitivity to detect T. gondii DNA than B1. Both primer sets were retrospectively evaluated using 515 DNA from different clinical samples. The 122 patients without toxoplasmosis (with negative real-time PCR) provided high specificity (REP-529, 99.2% and B1, 100%). From the 393 samples with positive ELISA (IgG), 146 had clinical diagnosis for toxoplasmosis and positive cPCR. REP-529 and B1 sensitivities were 95.9% and 83.6%, respectively. Comparison of REP-529 and B1 performances was further analyzed prospectively in 292 samples. Thus, from a total of 807 DNA analyzed, 217 (26.89%) had positive PCR with, at least one primer set and with symptomatic toxoplasmosis confirmed by clinical diagnosis. REP-529 was positive in 97.23%, whereas B1 amplified only 78.80%. After comparing several samples in a Brazilian referral laboratory, this study concluded that REP-529 primer set had better perform than B1 one. These observations were based after using cases with defined clinical diagnosis, ELISA, and cPCR.

Made available in DSpace on 2015-04-14T13:34:50Z (GMT). No. of bitstreams: 1 345941.pdf: 176784 bytes, checksum: 22cc77de71d7c9f7cda426596a11ac55 (MD5) Previous issue date: 2006-03-27 / A Toxoplasmose ? uma zoonose universal, transmitida tanto atrav?s de contamina??o oral, quanto de maneira cong?nita. O protozo?rio causador, Toxoplasma gondii, provoca no organismo uma forte resposta imune celular, padr?o Th1, que n?o resolve a infec??o mas que leva a maioria das pessoas a um est?gio cr?nico assintom?tico. Em algumas regi?es do sul do pa?s, h? uma elevada preval?ncia de les?es oculares, causadas por toxoplasmose, a maioria delas adquiridas. Nesse estudo determinou-se a variabilidade dos n?veis s?ricos de duas citocinas importantes na resposta imune ao Toxoplasma, a Interleucina 12 (IL-12) ) e o Fator de Necrose Tumoral-&#945; (TNF-&#945;). Foram analisados soros de 106 pacientes com diferentes apresenta??es cl?nicas da doen?a (les?o ocular cicatrizada, les?o ocular recidivante, doen?a recente e toxoplasmose cr?nica assintom?tica) e de 31 controles sadios, obtendo-se valores significativamente mais elevados de IL-12 nos indiv?duos que apresentavam les?es oculares cicatrizadas, quando comparados com todos os outros grupos de pacientes e controles (p<0,005). Os valores de TNF-&#945; n?o apresentaram diferen?as entre os grupos. Os resultados apontam para a viabilidade de novos estudos, visando a uma poss?vel aplica??o da determina??o de IL-12 s?rica na pr?tica cl?nica, como teste progn?stico nos casos de toxoplasmose ocular.