Introdução e objetivos: A determinação de fatores preditores precoces da mortalidade após o transplante hepático ortotópico é essencial para o aprimoramento e o aumento da eficácia desta modalidade terapêutica. O objetivo do presente estudo é avaliar a associação entre o fator V e a ALT como preditores da mortalidade hospitalar em pacientes submetidos ao transplante hepático e avaliar outros possíveis fatores prognósticos. Métodos: Estudo retrospectivo que analisou 96 pacientes adultos submetidos ao transplante hepático entre março de 2002 e outubro de 2010 no Hospital de Clínicas de Porto Alegre. A mortalidade hospitalar foi o desfecho principal. Foi investigada a possível associação de fatores pré, trans e pós-operatórios com o desfecho. Resultados: As variáveis que apresentaram associação com a mortalidade hospitalar na análise univariada foram ALT > 2500UI/L, AST > 2500UI/L, fator V ≤ 45% e re-operação na internação. A associação do fator V ≤ 45% com a ALT > 2500UI/L nas primeiras 48 horas de pós-operatório assim com a ocorrência de reoperação na internação demonstraram associação com a mortalidade hospitalar no modelo de análise multivariada. A acurácia do teste da associação entre fator V ≤ 45% e ALT > 2500UI/L para o desfecho mortalidade hospitalar foi de 88,5%. Conclusões: A presença conjunta do fator V ≤ 45% e da ALT > 2500UI/L nas primeiras 48 horas após o transplante hepático foi um fator de risco independente para a mortalidade hospitalar na amostra analisada. O teste possibilita um reconhecimento precoce dos pacientes com maior risco de óbito na internação.

Memoria para optar al Título Profesional de Ingeniera Agrónoma / Injertar es un manejo cultural que permite unir secciones de dos plantas de la misma especie o de especies emparentadas, una parte basal o portainjerto y una parte aérea o cultivar, de tal manera que crezcan y se desarrollen como una sola planta. Una adecuada selección de portainjerto y cultivar permite obtener una planta con condiciones muy favorables para la producción. En plantas de tomate (Solanum lycopersicum L.), el cultivo se puede establecer en suelos con una cantidad elevada de agentes patógenos. Además el injerto es valorizado por ser una alternativa no química, amigable con el medio ambiente y acorde con la inminente prohibición del Bromuro de Metilo para el 2015. Éste también podría favorecer el crecimiento vegetal en condiciones de baja temperatura, exceso o falta de humedad y alta salinidad del sustrato; podría incrementar la productividad; mantener un alto vigor; y aprovechar las cualidades productivas de la parte aérea de la planta. Se establecieron dos ensayos independientes para estudiar el efecto del injerto de empalme oblicuo entre dos portainjertos y dos cultivares de tomate en dos estados fenológicos bajo condiciones de invernadero de una plantinera comercial. Las combinaciones que mostraron los mejores resultados se obtuvieron utilizando el portainjerto Maxifort con el cultivar Adrale para la variable largo de hipocotilo con 5,19±0,11 cm y cantidad de hojas con 6, 81±0,12 unidades en dos hojas verdaderas y materia seca con 0,49±0,02 g en cuatro hojas verdaderas. Por otro lado utilizando el cultivar DRW 7680 con el portainjerto Maxifort se lograron las mejores sobrevivencias (96%) con dos hojas verdaderas y las mayores alturas de plantas (21,60±0,31 cm) en estado de cuatro hojas verdaderas. No obstante, los individuos injertados en cuatro hojas presentaron una recuperación, crecimiento y desarrollo a una tasa inferior que las injertadas en dos hojas. Por tanto, la mejor combinación para la producción de plantas injertadas de tomate con la técnica de empalme oblicuo, es Maxifort en la sección basal y cualquiera de las dos alternativas en la sección aérea en estado fenológico de dos hojas verdaderas. / Grafting allows to join two sections of plants, of the same species or form related species, a basal part or rootstock and a cultivar or aerial part, in order to grow and develop as a single plant. Proper selection of rootstock and cultivar allows to get plants with favorable production conditions. In tomato (Solanum lycopersicum L.), the crop can be established on soils with high number of pathogens. Besides grafting is valued for being a non-chemical, friendly alternative to the environment, in accordance with the imminent ban of methyl bromide by 2015. This could also promote plant growth under low temperature, excess or lack of humidity and high salinity substrate; may increase productivity, maintaining a high vigor, and exploit productive qualities of the aerial part of the plant. Two independent trials were established to study the effect of slant cut between two rootstocks and two cultivars of tomato in two phenological phases under greenhouse conditions of a commercial nursery. The best results were obtained using the rootstock Maxifort with the cultivar Adrale for long hypocotyls with 5,19±0,11 cm, number of leaves with 6, 81±0,12 units in two true leaves and dry matter with 0,49±0,02 g in four true leaves, obtained. On the other hand using the DRW 7680 cultivar the best survivals (96%) were achieved with two true leaves and greater heights of plants (21,60±0,31 cm) in four true leaves. However, individuals grafted on four leaves had recovery, growth and development at a lower rate than grafted on two leaves. Therefore, the best combination for tomato production of grafted plants with slant cut is Maxifort in the basal section, and either of the two cultivars at two true leaves.

AIMS. To retrospectively review our liver transplant performance to identify factors that influenced late mortality and morbidity.METHODS. Clinical records from 279 patients with liver transplants performed in Hospital Vall d´Hebron between January 1991and December 2001 and one year of survival, were reviewed. Minimal outcome was two years (r:1yr-12yr). Medium outcome was 9 years. The data evaluated by univariate and multivariate analyses regarding clinical outcome.RESULTS. Recipients mean was 55±5years, with 11%>65 years and 65% was male. Main indication for transplantation was postnecrotic cirrhosis (60%), followed by CHC in addition to cirrhosis (28%), choleostatic cirrhosis (6%), fulminant hepatitis (2%), Budd-Chiari (1%) and metabolic cirrhosis (1%). Half of the recipients (54%) were infected by HCV. A great percentage of recipients (44%) were at Child-Pugh C stage. Concomitant diseases were: renal insufficiency in 11%, arterial hypertension in 9%, diabetes mellitus in 16% and portal thrombosis in 18%. Inmunosupression at last the first year of liver transplantation was with cyclosporina in 108 patients (39%) and tacrolimus in 169 patients (60%). Patient actuarial survival what live at least a year, was 94%, 89%, 79% and 60% at 2yr, 3yr, 5yr and 10yr respectively. Seventy-five patients died in the outcome. Causes of death were recurrence primary disease in 11%, medical complications in 7% and de novo tumors in 5%. Rate of retransplant was 10% (27 patients). From all the pre-operative variables that appeared significant in univariate analysis, the factors that showed independent predictive value of late mortality were: old recipient (OR 1,03) , renal disfunction in the first year postransplant (OR 2,1) and liver disfunction at last the first year postransplant (OR 2,2). Characteristics of the patients with the risk factor of mortality "renal disfunction", were: >60 years, renal disfunction pretransplant or in the first year postransplant and Cyclosporine in the induction. Characteristics of the patients with the risk factor of mortality "liver disfunction", were: HCV pretransplant, HCV recurrence in the first year, acute rejection in the first year and Cyclosporine in the induction. The mean long term complications in liver transplant were: arterial hypertension in 50%, renal disfunction in 49%, diabetes mellitus in 30%, hypercholesterolaemia in 19%, hypertriglyceridaemia in 18%, cardiovascular complications in 15% and de novo tumors in 14%. From all the preoperative variables that appeared significant in univariate analysis, the factors that showed independent predictive value of late morbidity were:1. Renal disfunction: old recipient, pretransplant cardiovascular complications and long stay in the hospital of the recipient.2. Arterial hypertension: pretransplant arterial hypertension and CHC pretransplant in the recipient, donor exitus by traffic accident.3. Diabetes Mellitus: pretransplant diabetes and HCV pretransplant in the recipient4. Hypercholesterolaemia: no risk factors. Tacrolimus in the first year postransplantation is protector factor.5. Hypertriglyceridaemia: cold ischaemia time>8h, donor male, intraoperative transfusion of platelets, long stay in ICU of the recipient.6. Cardiovascular complications: old recipient and pretransplant cardiovascular complications, long time since of transplantation.7. De novo tumors: old recipient.CONCLUSIONS. Old recipient, renal disfunction in the first year and liver disfunction at last the first year postTH are the most significant risk factor for late mortality. Arterial hypertension, renal disfunction and diabetes mellitus are the mean long term complications in liver transplantation, and the most significance risk factors are old recipient, HCV preTH, arterial hypertension and diabetes mellitus preTH, young donor and use Cyclosporine in the inmunosupression.

Introducción: La extracción laparoscópica en el donante vivo puede influenciar negativamente en la evolución del injerto por el efecto del neumoperitoneo. Por otro lado existe un aumento de la evidencia de que la tolerancia al daño renal puede estar relacionada con el sexo.Objetivo: El objetivo de este trabajo es estudiar el efecto de la hiperpresión abdominal sobre el injerto durante la extracción laparoscópica, desde el punto de vista bioquímico, anatomopatológico y molecular, así como la relación con el sexo.Material y método: Se han practicado 20 autotrasplantes con nefrectomía contralateral en cerdos, 10 extracciones abiertas y 10 laparoscópicas. La mitad de cada grupo eran hembras. Se ha estudiado la evolución del injerto durante 7 días desde el punto de vista bioquímico, anatomopatológico y molecular (MDA y Kim-1), analizando las diferencias en función de la vía de extracción y el género.Resultados: La recuperación bioquímica del injerto es la misma en hembras con independencia del tipo de extracción. Los machos con extracción laparoscópica presentan una recuperación de la función renal más lenta respecto a las hembras (p 0.016).Se objetiva tanto un mayor infiltrado intersticial a los 7 días de evolución (p 0.018), como una mayor presencia de MDA en el tejido tras la reperfusión (0.032) en machos con respecto a las hembras. En cuanto al posible marcador de daño celular: Kim-1, ya en la muestra basal es significativamente mayor en hembras con extracción laparoscópica, respecto a los machos con extracción abierta (p 0.014). Sin embargo presentan mucho menos daño tisular que los machos, en especial cuando la extracción es laparoscópica (p 0.05).Conclusiones: El género parece intervenir en la capacidad de recuperación del injerto a los 7 días desde el punto de vista bioquímico, anatomopatológico y molecular, en especial si la extracción es laparoscópica. El aumento de Kim-1 en las hembras no se traduce en una mayor afectación tubular y podría significar un marcador de capacidad de recuperación del injerto. / Introduction: Pneumoperitoneum used at laparoscopic living donor nefrectomy can have a negative impact over graft. Some authors have shown renal damage relationship with gender.Objectives: To analyze the effect of abdominal high preassure over renal graft during laparoscopic nephrectomy in a porcine model.Material & Methods: We performed 20 autotransplant and contralateral nephrectomy in a porcine model, 10 open nephrectomy and 10 laparoscopic. Half of each group were females. We followed graft evolution over a 7 day period. We analyzed data at 3 levels: biochemical, pathological and molecular (MDA and KIM-1). We checked differences depending on surgical approach and gender.Results:Graft's biochemical recovery is similar in female regardless of surgical technique. Male in laparoscopic removal showed a slower recovery of renal function (p 0.016).We found higher percentatge of interstitial infiltrate (p 0.018) and MDA at 7 day at tissue exam after reperfusion (p 0.032) in male rather than female,Regarding at KIM-1, it was seen at basal biopsy a higher expression in female with laparoscopic surgery rather than male in opern surgery (p 0.014). However, less tissue damage was seen in female specially at laparoscopic surgery (p 0.05).Conclusions: Gender seems to influence graft's recovery at 7 days follow-up at biochemical, pathological and molecular point of view, mainly if laparoscopic surgery is performed. Overexpression of KIM-1 in female does not generate a higher tubular damage. It may have a significance as a graft recovery marker.

El linfoma es una enfermedad neoplásica originada por transformación maligna de los linfocitos que residen en los ganglios linfáticos y otros tejidos linfoides. El linfoma folicular (LF) es un subtipo histológico. Cuando se presenta en fase avanzada es prácticamente incurable con tratamiento quimio-radioterápico convencional. Muchos de los pacientes responden inicialmente al tratamiento, pero la mayoría, presentan recaídas de la enfermedad, en ese momento el número de respuestas obtenidas con tratamientos convencionales es menor y la duración más breve.Se han estudiado diversas estrategias de tratamiento con el objetivo de mejorar estos resultados, la administración de combinaciones de diferentes fármacos antineoplásicos y la utilización del trasplante hemopoyético, es decir, dosis muy altas de quimioterapia asociada o no a radioterapia, seguida de la administración de células madre hemopoyéticas,. Estas células pueden proceder de un donante compatible (trasplante alogénico) o del propio paciente (trasplante autogénico), y obtenerse de la médula ósea o de la sangre periférica lo que es un avance destacable ya que la obtención células progenitoras de sangre periférica en lugar de médula ósea, es más cómoda y disminuye la toxicidad global del trasplanteEn esta tesis se defiende que un tratamiento que combina fármacos como IAP-VP16 (ifosfamida, Ara-C, prednisona y VP-16) podría asociarse a una proporción elevada de respuestas en pacientes con LF en recaída o que no responde a tratamientos previamente utilizados; el mismo régimen podría ser útil para movilizar y recoger células madre hematopoyéticas de sangre periférica y para llegar a la fase de trasplante autogénico con mínima carga tumoral, óptimas condiciones para la obtención de un mayor número de respuestas.Los resultados confirman que el esquema IAPVP-16 permite obtener una proporción elevada de respuestas completas (41%) y de respuestas parciales (39%) en sólo 3 meses, con una toxicidad aceptable, lo que hace posible que la mayoría de los pacientes candidatos puedan alcanzar la fase de trasplante con una óptima reducción tumoral. Comparamos esta terapia de rescate con otros tratamientos y constatamos que la proporción de respuestas es similar o incluso superior. Además la respuesta favorable a la quimioterapia IAPVP-16 se asoció a una prolongación de la supervivencia. El análisis de la capacidad movilizadora de progenitores hematopoyéticos a sangre periférica (PHSP) del esquema de tratamiento IAPVP-16 más G-CSF, en pacientes con neoplasias linfoides en fase refractaria o en recaída mostró que este tratamiento consigue una cantidad adecuada en el 91% de pacientes, incluidos algunos casos en los que otras pautas previas fracasaron. Los factores que significativamente influyeron negativamente sobre el número de células CD34+ recogidas fueron los antecedentes de fracaso en movilizaciones anteriores y un recuento plaquetar bajo (<150 x 109/l) previo al tratamiento movilizador. El estudio de la eficacia antitumoral y la toxicidad del trasplante autogénico en pacientes con LF en fase avanzada, en su mayoría previamente tratados con el esquema IAPVP-16, nos confirmó que esta terapia obtiene o mantiene una alta proporción de respuestas. Las respuestas se prolongan en el tiempo más que el último periodo de remisión, en la mayoría de los pacientes. La toxicidad relacionada con el procedimiento fue baja, con un solo fallecimiento, lo que supone una mortalidad del 3%, aunque creemos que es necesario un seguimiento más prolongado para identificar con precisión la frecuencia de complicaciones tardías. La supervivencia global estimada a 2 años fue del 83% y la supervivencia libre de progresión del 57% Ninguna variable analizada fue predictiva para progresión o supervivencia en nuestro estudio. Los resultados obtenidos en nuestra serie son similares a los observados en algunas de las series más importantes publicadas. / Lymphoma is a neoplastic disease origin in malignant transformation of lymphocytes of lymphatic nodes and tissues. Follicular lymphoma (FL) is a histologyc subtype. Patients with advanced disease have a poor outcome with standard chemo-radiotherapy treatment. Most patients are initially sensitive to first-line therapies but almost all of them relapse and subsequent remissions are less frequent and shorter with standard treatments.Several treatment strategies have been studied in an effort to obtain a better rate of responses, combinations of different antineoplastic drugs and the use of hematopoietic transplant, that is, high-dose therapy supported by stem cells transplantation. Stem cells could come of bone marrow or peripheral blood, the last origin is an important advance because this procedure is more comfortable and decrease the transplant toxicity. In this thesis we have explorer the efficacy of IAPVP-16 regimen, an antineoplastic drug combination (ifosfamide, Ara-C, prednisone and VP-16), which could obtain a high response rate in FL patients in relapse o who do not respond a previous treatments. The same therapy could be useful for peripheral blood progenitor cells (PBPC) mobilization and allowing most patient to proceed with significant tumor reduction stem cell transplantation (SCT), optimal conditions for achieve a better rate of responses.Our results confirm that IAPVP-16 regimen achieve a high number of complete (41%) and partial remissions (39%) in only 3 months, with low-moderate related toxicity. Patients obtain a good tumor reduction before SCT. We compare our salvage therapy with others salvage treatments and the response rate were similar. Moreover we observed that the response with IAPVP-16 were associated with a longer overall survival. The analysis of efficacy of IAPVP-16 regimen plus G-CSF for PBPC mobilization in patients with relapsed or refractory lymphoproliferatives disorders shows that this treatment achieve an enough number of PBCP in a 91% of patients, included some cases that have failed previous attempts. A history of previous mobilization failure and a low platelet count (<150 x 109/l) negatively influence the harvesting.We have studied the anti-tumor efficacy and toxicity of autologous stem cell transplantation in advanced FL patients, most of them previously treated with IAPVP-16 regimen. This therapy obtains a high response rate. Progression-free interval after SCT is longer than the previous interval in most patients. Transplant-related toxicity was low, only one death, that is, a mortality of 3%. Longer follow-up is necessary to identify any late complications. The estimated 2-years overall survival is 83% and progression-free survival 57%. Any factor analyzed influenced progression or survival in our study. Our results compare with others studies published.

La logística de un Trasplante de Progenitores Hematopoyéticos (TPH) incluye en la mayoría de casos (TPH autólogo y de Sangre de Cordón Umbilical (SCU)), una etapa de criopreservación a temperaturas de -196ºC. Las técnicas de congelación más extendidas utilizan DMSO como crioprotector para optimizar la viabilidad y funcionalidad de las células reduciendo la proporción de agua congelada y la deshidratación intracelular durante el proceso de congelación.La presencia del crioprotector hace que las suspensiones celulares descongeladas sean hipertónicas y como las células responden importando y exportando agua frente a un cambio de osmolaridad, el retorno a condiciones isotónicas puede resultar en la superación de los límites mecánicos de las membranas plasmáticas por una entrada masiva de agua al citoplasma (choque osmótico). Este fenómeno es de especial importancia durante la reconstitución y manipulación de células descongeladas debido a que la membrana celular es un conjunto de lípidos y proteínas organizados que por debajo de los 20ºC pierde fluidez, limitando su resistencia y por tanto su capacidad de respuesta osmótica.En 1978, el profesor John Goldman95 publicó las primeras evidencias del fenómeno de choque osmótico sobre la reducción de capacidad clonogénica en médula ósea (MO) descongelada. Sin embargo, este trabajo no ha tenido una gran repercusión en los protocolos de criopreservación seguramente porque el número de Células Progenitoras Hematopoyéticas (CPH) en MO y en Aféresis (CPH-A) está por encima del umbral mínimo definido para uso clínico. Esta situación cambia en el momento que la SCU se define como fuente de células progenitoras debido a su limitada proporción en estos productos. Así, en 1995 el Dr. Pablo Rubinstein139 reabre el debate de la relevancia del choque osmótico en productos hematopoyéticos descongelados e introduce la estabilidad osmótica previa a la infusión para reducir el efecto del cambio brusco de osmolaridad durante el retorno a condiciones isotónicas.Para la práctica diaria de un laboratorio de procesamiento celular, y por extensión para el equipo clínico de trasplante, el choque osmótico afecta a los controles de calidad del descongelado si estos incluyen manipulaciones que impliquen cambios bruscos de osmolaridad. En este sentido, un caso muy llamativo es el de la citometría de flujo (CMF), no en vano, casi ningún laboratorio realiza este tipo de análisis en muestras descongeladas debido seguramente a la falta de correlación con los datos precongelación.Más alarmante es el hecho de que la infusión directa de los inóculos descongelados pueda ser también una fuente de choque osmótico que comprometa la viabilidad celular resultando, en el caso de TPH con dosis límite de CPH, determinante para el éxito de la recuperación hematopoyética.En este ámbito se ha desarrollado el trabajo experimental de esta Tesis Doctoral que proporciona evidencias, cuantifica el efecto del choque osmótico en los controles de calidad de productos hematopoyéticos descongelados, propone un método de CMF para su análisis y valida dos sistemas automáticos aptos para la clínica que rinden productos estabilizados osmóticamente, listos para trasplante y sin pérdida celular ni de viabilidad significativas. / Current logistics of Hemopoetic Progenitor Cells Transplant (HPT) usually includes (Autologous HPT and Umbilical Cord Blood Cells (UCB) Transplant) a cryopreservation step at temperatures of -196ºC. Dimethyl sulfoxide, the most used cryoprotector raises cellular viability and function both by reducing frozen water proportion as well as intracellular dehydration during the freezing process of cells.Presence of cryoprotector makes thawed cellular suspension hypertonic and as cells respond importing and exporting water from their cytoplasm in front of changes of osmolarity, the return to isotonic conditions may surpass the mechanical limits of plasmatic membranes by means of a massive entry of water into the cytoplasm (osmotic shock).This is specially important during the reconstitution and manipulation of thawed cells because cell membrane is a set of organized lipids and proteins that below of 20ºC loose fluidity thus limiting resistance and so capacity of response in front of an osmotic shock.In 1978, first evidences about the reduced clonogenicity in thawed cells from Bone Marrow (BM) were published by professor John Goldman. However, these results have not had great repercussion on cryopreservation protocols possibly because the huge number of progenitor cells in BM and Apheresis (HPC-A). This situation changes when UCB is defined as a suitable source of progenitor cells due to the limited number of cells in these products. In this regard, Dr. Pablo Rubinstein reopens in 1995 the debate about the relevance of osmotic shock in thawed progenitor cells grafts. In that work, osmotic stability before infusion was introduced to reduce deleterious effect of sudden changes in osmolarity during the return to isotonic conditions.Considering Cell Processing laboratories current practices, osmotic shock concerns quality controls of thawed cells when sudden changes in osmolarity are included in these techniques. It is specially relevant when Flow Cytometry is considered because almost no laboratory uses this technique to analyze thawed samples because of the lack of correlation with pre freeze data.In addition, direct infusion of thawed grafts could be a source of osmotic shock altering cells viability which, in case of limiting number of progenitor cells in the graft, could affect hemopoètic recovery of the transplanted patient.In this field has been developed the experimental of the present Doctoral Thesis which provides evidences and quantify the effect of the osmotic shock in quality controls of thawed hemopoetic grafts as well as proposes a method of Flow Cytometry to analyze them. Finally, in this work two automatic systems available for the clinic were validated to wash DMSO and producing osmotically stabilized products without significant looses of viability and progenitor cells.

La mayoría de pacientes a los que se practica un trasplante de progenitores hematopoyéticos han recibido previamente múltiples transfusiones de hematíes. Cada transfusión recibida se traduce en 0.2 gramos de hierro que se depositan en el organismo sin que exista ningún sistema fisiológico capaz de eliminar el hierro sobrante. Es lógico pensar que tras múltiples transfusiones muchos de estos pacientes sufran una importante sobrecarga corporal de hierro. En otros pacientes, como los aquejados de hemocromatosis primaria y secundaria, sabemos que la sobrecarga de hierro es fuente de toxicidad. En el caso especial de los pacientes sometidos a trasplante de progenitores hematopoyéticos, la sobrecarga de hierro puede ser especialmente peligrosa durante las fases de aplasia y de reducción significativa de las defensas inmunitarias por las que pasan estos pacientes. En este trabajo se investiga si la sobrecarga férrica es un trastorno frecuente entre los pacientes que reciben un autotrasplante de progenitores hematopoyéticos, si dicha sobrecarga se asocia con morbimortalidad infecciosa, si existe algún germen en particular asociado a las infecciones en el contexto de sobrecarga férrica y si la sobrecarga férrica comporta una mayor mortalidad durante el trasplante. Además se investiga la evolución de algunos parámetros metabólicos del hierro durante el trasplante. El trabajo está basado en cuatro artículos. En el primero se demuestra que el valor de ferritina pre-trasplante y de saturación de transferrina en el dia -4 del trasplante constituyen factores pronósticos de la mortalidad global y de la mortalidad tóxica del trasplante. En el segundo artículo se demuestra que la sobrecarga hepática de hierro es muy frecuente entre los pacientes que mueren tras un trasplante hematopoyético. Además se demuestra que es frecuente la asociación entre dicha sobrecarga y la muerte por infección invasiva por el hongo aspergillus. En el tercer artículo. Se investiga si diversos parámetros asociados a sobrecarga de hierro pueden predecir la aparición de toxicidad e infección durante los primeros tres meses tras el trasplante (mucositis grave, bacteriemias y fiebre). Se demuestra que el nivel de ferritina pre trasplante se asocia con dichas variables. Por último, en el último artículo se demuestra que la elevada saturación de transferrina que se produce durante el acondicionamiento del trasplante es debida al stop de la eritropoyesis.En general, estos trabajos demuestran que existe una asociación entre sobrecarga férrica e incremento de morbilidad precoz y mortalidad durante el trasplante hematopoyético. Con posterioridad a los artículos recogidos en esta tesis, otros artículos han estudiado el mismo tema y han llegado a la misma conclusión. Sin embargo, el diseño de estos estudios no permite contestar si también existe una relación causa-efecto. Podría ser que aquellos pacientes con más hierro posiblemente han sido más transfundidos, y quizá esa mayor necesidad de transfusiones indica asimismo un peor pronóstico de la enfermedad. Pero las importantes relaciones del hierro con la generación de radicales libre y toxicidad nos explican que pueda comportarse como un agente tóxico. Por otra parte, su valor importantísimo para la virulencia de los gérmenes también nos explica su papel en el incremento de la infección.Esta tesis constituye un trabajo pionero en este tema. Previa a la publicación de los trabajos que conforman esta tesis no existía prácticamente literatura sobre el efecto de la sobrecarga férrica en el curso del trasplante. Hemos observado que tras su publicación se han multiplicado los trabajos internacionales sobre este tema. Por ello es posible que en unos años tengamos respuesta a muchas de las preguntas que en esta tesis se plantean. / Most patients who practiced a haematopoietic stem cell transplantation have previously received multiple transfusions of red blood cells. Each received transfusion translates into 0.2 grams of iron, that are deposited in the body without any physiological system capable of removing excess iron. It is logical to think that after multiple transfusions, many of these patients suffer a significant iron overload. In other patients, such as those suffering from primary and secondary hemochromatosis, we know that iron overload is a source of toxicity. In the special case of patients undergoing haematopoietic stem cell transplantation, iron overload can be especially dangerous during the aplasia phase, with a significant reduction in the immune system. This paper investigates whether the iron overload is a common disorder among patients receiving an hematopoietic transplant, if this iron overload is associated with infectious morbidity, whether a particular germ is associated with infections in the context of iron overload and if the iron overload involves an increased mortality during the transplant. It also investigates the evolution of some iron metabolic parameters during the transplant.The work is based on four articles. The first one shows that the value of pre-transplant ferritin and transferrin saturation in the day -4 of conditioning are prognostic factors for overall mortality toxic related mortality. The second article shows that the hepatic iron overload is very common among patients who die after an hematopoietic transplant. It also shows that there is often an association between the iron overload and death from invasive infection by the fungus aspergillus. In the third article, we investigate whether various parameters associated with iron overload may predict the occurrence of toxicity and infection during the first three months after transplantation (severe mucositis, bacteraemia and fever). We show that the level of pre-transplant ferritin is associated with these three variables. Finally, the last article demonstrates that the high transferrin saturation that occurs during conditioning for transplantation is due to the stop of erythropoiesis.In general, these studies show an association between iron overload and increased morbidity during early hematopoietic transplantation and mortality . Since the articles collected in this thesis, other articles have studied the same subject and have reached the same conclusions. However, the design of these studies can not answer if a cause-effect relationship exists. It could be that patients with more iron may have been more transfused, and perhaps the greater need for transfusions also indicates a worse prognosis of the disease. But the relationships of iron with the generation of free radical toxicity may explain how this element can function as a toxic agent. Moreover, its major value to the virulence of the germs also explains his role in the increase of the infection.This thesis is a pioneering work on this issue. Before the publication of works that comprise this thesis there was virtually no literature on the effect of iron overload in the course of transplantation. After their publication others international works appeared about this topic. It is therefore possible that in some years answers about questions raised in this thesis will appear.

La infección por el virus de la hepatitis C (VHC) es la causa más frecuente de hepatopatía crónica y la primera causa de cirrosis hepática, hepatocarcinoma y trasplante hepático (TH) en nuestro medio, con una prevalencia en España del 2,5% y afectando al 3% de la población mundial. La reinfección por el VHC tras el TH se produce desde el momento de la reperfusión del injerto y a las 72 horas del TH ya se consiguen niveles de ARN-VHC en sangre similares a los pre-TH. Aunque la velocidad de progresión de la fibrosis en los pacientes trasplantados por VHC es muy variable, esta acontece de forma mucho más acelerada que en los pacientes inmunocompetentes.Esta mayor aceleración en la progresión de la fibrosis en los pacientes portadores de trasplante hepático hace que la principal causa de pérdida del injerto y de muerte de estos pacientes sea la insuficiencia hepática secundaria a la recurrencia de la cirrosis por VHC, lo que condiciona que la supervivencia del paciente y del injerto están reducidas en los pacientes infectados por VHC frente a los no-infectados, con una supervivencia del 70% a los 5 años. El tratamiento antiviral es el principal elemento capaz de modificar la evolución natural de estos pacientes. La curación tras tratamiento antiviral se define con respuesta viral sostenida (RVS) (negatividad del ARN-VHC en sangre mediante PCR sensible a las 24 semanas de haber terminado el tratamiento antiviral). La optimización del tratamiento de la recurrencia de la infección por VHC en los pacientes trasplantados hepáticos es de gran interés, ya que esto permite mejorar la indicación del tratamiento antiviral, limitar efectos secundarios y disminuir costes, mejorando las tasas de RVS y de supervivencia de este grupo de pacientes. Los tres estudios que conforman esta tesis abordan específicamente el manejo del tratamiento de la recurrencia de la infección por VHC en los pacientes trasplantados hepáticos. El estudio 1 evalúa la el momento de la indicación del tratamiento antiviral, el estudio 2 aborda la elaboración de un modelo pronóstico, con el fin específico de identificar de manera temprana, con una combinación de factores basales y dinámicos precoces, que pacientes no van a responder al tratamiento antiviral estándar, evitar toxicidad o deben ser re-dirigidos a nuevas estrategias terapéuticas que incluyan fármacos más eficaces. Finalmente, el estudio 3 se centra en un parámetro viral muy concreto y de la máxima importancia como es el establecimiento de la definición temporal de la curación de la infección de la infección por VHC, especialmente en los pacientes trasplantados, en los que las alteraciones de la bioquímica hepática pueden estar en relación a otros procesos y el poder establecer de forma precoz y definitiva la curación de la infección adquieren gran trascendencia. Los resultados nos permitieron demostrar que el tratamiento de la recidiva del VHC en la fase aguda de la recurrencia es igual de seguro y eficaz que en la fase de hepatitis crónica activa, pero no aumenta las tasas de curación. La estrategia para la elaboración de un modelo para pronosticar la RVS nos permitió crear una pocket-chart de fácil uso con las siguientes variables: edad del donante, genotipo de la IL28B del receptor y la respuesta viral rápida. También pudimos demostrar que el establecimiento de la RVS era igual de eficaz a la semana 24 que a la 12 tras la finalización del tratamiento. / Resumen Infeccion with hepatitis C virus (HCV) is the leading cause of chronic liver disease and hepatocellular carcinoma and is the main indication for liver transplantation (LT) in our area. Prevalence in Spain is 2.5% and 3% over the world. Recurrent HCV infection of the allograft is universal in the anti-HCV-positive candidates. The graft is infected at reperfusión, and at 72 hours post-transplant RNA-HCV levels are similar to pre-LT levels. Fibrosis deposition in LT patients is variable, but is accelerated in LT recipients compared with patients who are not immunosuppressed. The natural history of chronic hepatitis C is accelerated in LT recipients, and is the main cause of graft lost and death. Survival is reduced in HCV-LT patients in comparison with non-HCV patients. Antiviral treatment is the main element able to modify the natural evolution of these patients. Treatment response is defined as a sustained virological response (SVR), (absence of HCV RNA from serum by a sensitive PCRbased assay 24 week after antiviral treatment). Improvement of HCV recurrent management is of great interest, because it allows to enhance treatment indication, minimize side effects and reduce costs improving SVR rates and survival in HCV-LT patients. The 3 studies that comprise this thesis addresses the manegment of HCV recurrence in LT patients. The first study addresses the timing of antiviral indication, the second study works about prognosis models to identify with basal and early on-treatment factors pacients who are going to respond to antiviral tratament, and who not, in order to avoid toxicity, and identify patients who shouls be re-directed to other treatments. The third study is focused on a very specific viral parameter; re-definition of SVR, early determination of treatment response may simplify patient care and reduce costs associated with monitoring but, most importantly, in the particular setting of LT patients, early assessment of post-treatment response is of special importance because this population is at risk of developing complications, and early exclusion of relapse facilitates their recognition and prompt treatment. The result of these studies have allowed to demonstrate that treatment in the acute phase of HCV-recurrence is as safe as in the chronic phase, but it doesn’t improve SVR rates. The prognostic model allow us to build an easy use pocket-chart with the following variables: donor age, recipient IL28B genotype and rapid virological response. We were able to establish that HCV-RNA testing at 12 weeks after completion of treatment in liver transplant recipients is as useful as testing at 24 weeks to establish SVR.

Made available in DSpace on 2013-08-07T19:05:42Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000431052-Texto+Completo-0.pdf: 2074520 bytes, checksum: 2dae42f616032d577c099f0636f82081 (MD5) Previous issue date: 2010 / Objectives: evaluation of retinal function after transplantation of bone marrow mononuclear cells (BMMCs) in sodium iodate model of retinal degeneration. Methods: the BMMCs were obtained from GFP+ transgenic mice. The retinal degeneration was induced with intravenous administration of 25 mg/kg in C57Bl/6 mice (n=18). Three days after injury animals received transplants via intracarotideal infusion of bone marrow mononuclear cells, or bone marrow mononuclear cells lysed with liquid nitrogen. Animals that received saline served for control. For assessing retinal function, electroretinography was performed in 7 and 16 days after transplantation. Histological analysis of retinal injury was performed on the day 16. The migration and incorporation of transplanted cells was evaluated with PCR 1 hour and 16 days after transplantation. Results: the amplitude and implicit time of b-wave and a-wave were significantly different when comparing the pre-injury and 2 days after sodium iodate. The averages after treatment showed no significant difference between groups or in different time points in each treatment. The PCR were positive in both right and left eyes for 1 hour and 16 days after transplantation. Retinal histology analysis showed severe damage in the central retina. Conclusions: the model of retinal degeneration used was capable of inducing large retinal lesion size and severity. No potential electroretinogram recovery was detected after transplantation of BMMCs. However, the presence of BMMCs in the injuries sites after carotid infusion encourages further studies to investigate the possibility of retinal regeneration of these cells and their therapeutic potential. / Objetivos: avaliar a funcionalidade da retina após o transplante de células mononucleares da medula óssea (CMMOs) em um modelo experimental de degeneração retiniana induzida com iodato de sódio (NaIO3).Métodos: as células para o transplante foram obtidas de camundongos transgênicos GFP+. A degeneração retiniana foi induzida com a administração intravenosa de 25 mg/kg de NaIO3 em camundongos C57Bl/6. Três dias após a indução da lesão os grupos de animais (n=6 para cada grupo) receberam, via infusão intracarotídea, transplante de 1x106 CMMOs ou 1x106 CMMOs lisadas com nitrogênio líquido. Animais que receberam solução salina serviram como controle. No 7° e no 16° dia após a infusão, a funcionalidade da retina dos animais foi avaliada com eletrorretinografia (eletrorretinograma - ERG). Foram realizados processamento histológico e PCR para análise. Resultados: a amplitude e o tempo implícito das componentes a e b do ERG mostraram alteração significativa quando comparados os períodos pré-lesão e 2 dias pós-lesão. Os ERGs obtidos no 7° e 16° dia após o transplante não apresentaram diferença significativa nos parâmetros avaliados quando comparados os tratamentos entre si, e cada tratamento ao longo do tempo. O resultado da PCR foi positivo para 1 hora e 16 dias após a infusão de células mononucleares. A análise histológica da retina mostrou lesões severas na retina central. Conclusões: o modelo de lesão retiniana com o NaIO3 se mostrou capaz de induzir lesão de grande extensão e gravidade. Não houve recuperação dos potenciais do ERG após o transplante de CMMOs. No entanto, a presença das CMMOs na retina, após infusão carotídea, incentiva novos estudos para investigação da possibilidade de regeneração retiniana com estas células e do seu potencial terapêutico.

Orientador: Fausto Viterbo / Banca: Fausto Viterbo de Oliveira Neto / Banca: Antonio de Castro Rodrigues / Banca: Jesus Carlos Andreo / Banca: Antonio João Tedesco-Marchese / Banca: Gerson Chadi / Resumo: As lesões nervosas periféricas sempre ocasionam comprometimento da sensibilidade ou da motricidade, de partes ou segmentos do organismo. Algumas lesões leves podem evoluir para a cura completa em poucas semanas, se a integridade morfológica do axônio estiver preservada. Entretanto, as lesões com perda tecidual, se não foram tratadas adequadamente, podem evoluir com prejuízos na função muscular ou na sensibilidade cutânea. Assim sendo, este trabalho teve por objetivo estudar a possível regeneração axonal do nervo ciático de rato albino (Rattus norvegicus albinus) lesado experimentalmente, através do uso de enxerto venoso ao avesso e de enxerto venoso preenchido com plasma rico em plaquetas, sob o ponto de vista histomorfológico. Os animais foram divididos em quatro grupos experimentais (G2, G3, G4 e G5) contendo 15 animais em cada grupo e um grupo com dez animais serviu como controle (G1). Em todos os grupos o nervo ciático direito foi utilizado para estudo experimental. Os Grupos G 2, G 3, G 4 e G 5 receberam enxerto venoso da veia jugular externa, do lado esquerdo, do mesmo animal. Em todas as técnicas utilizadas, os valores médios de morfometria foram maiores no enxerto do que no coto distal. As técnicas com veias preenchidas apresentaram melhores médias aritméticas quando comparadas com as veias não preenchidas. / Abstract: Peripheral nerve lesions ever produce sensorial or motor consequences. Some lesions could have good evolution if the neural morphology integrity is preserved. Nevertheless, peripheral nerve gaps could have dramatic evolution. In the present study we tested neural regeneration of the sciatic nerve in albino laboratory rats submitted to experimental neural lesion and treatment with entubulization using venous jugular autologus grafts. Four experimental groups were used, with the vein graft replacing a sciatic gap. In two of them the veins were inverted. In a normal and inverted vein group, the veins were filled with blood plasma enriched by a pool of platelets. A "sham" group was used as control. The nerve fibers counting showed higher average in the graft stump compared to the vein graft. Both blood plasma enriched with platelets filled groups presented better results than non filled groups. / Doutor