Orientador : Luiz Sebastião Prigenzi / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-14T14:08:01Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Corsini_AntonioCarlos_D.pdf: 6786480 bytes, checksum: 7808a8e1edfec8e7d4343c0e377b0a3f (MD5) Previous issue date: 1978 / Doutorado

Orientador : Fernando Dias de Avila Pires / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-15T00:19:52Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Fabian_MartaElena_D.pdf: 11521562 bytes, checksum: 0191c9e8ef4d0a8a1a98c66b427145ae (MD5) Previous issue date: 1987 / Resumo: O presente estudo foi realizado no período de julho de 1983 a dezembro de 1984, nos municípios cearenses de Palhano, Russa, Morada Nova, Limoeiro do Norte, Canindé, Quixadá e Pereiro, os quais correspondem à parte da área endêmica da tripanossomíase americana. Do total de dezessete espécies de morcego coletadas, apenas Artibeus jamaicensis planirostris, Phyollstomus hastatus, Phillostomus discolor e Sturnira lilium foram encontradas infectadas por tripanossomos. Para efeito deste trabalho serão consideradas apenas as três primeiras espécies, assim como Molossus, pelas interrelações observadas com triatomíneos, apesar de não ter ¿ se apresentado infectada por tripanossomos. Os morcegos filostomídeos aqui estudados apresentam ritmos de atividades semelhantes, com um marcado pico após o escurecer, diminuindo a seguir ms mantendo alguma atividade ao longo da noite (especialmente no aso de Artibeus jamaicensis planirostris e Phyollstomus hastatus) Relativamente a Molossus, verificaram-se dois picos de atividades bem marcados, o primeiro ao anoitecer e o segundo ao amanhecer, com alguma atividade ao longo da noite... Observação: O resumo, na íntegra, poderá ser visualizado no texto completo da tese digital / Abstract: The present research was undertaken in seven different municipalities of Ceará State, Brazil, namely Palhano, Russas, Morada nova, Lomoeiro do Norte , Canindé, Quixadá and Pereiro, from July 1983 to December 1984. Seventen species were collected, but only Artibeus jamaicensis planirostris, Phyollstomus hastatus, and Phillostomus discolor infected by trypanosomes but was also studied because of its relationship with triatomine bugs. These Phillostomidae bats had similar rhythms of activity with the main peak at the beginning of the active phse, after dark. During the night their activity rhythms were reduce but did not stop completely (Artibeus jamaicensis planirostris and Phyollstomus hastatus). Molossus molossus had a biomodal pattern of activity with the main pak soon after dark and the secondary peak immediately before dawn, but keepinglow levels of activity throughout the night... Note: The complete abstract is available with the full electronic digital thesis or dissertations / Doutorado / Ecologia

Orientador : Prof. Dr. Wanderson Duarte da Rocha / Coorientadora : Profª. Drª. Larissa Magalhães Alvarenga / Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Ciencias Biológicas (Microbiologia, Parasitologia e Patologia Básica). Defesa: Curitiba, 14/05/2014 / Inclui referências : f. 71-82 / Resumo: A doença de Chagas, causada pelo Trypanosoma cruzi, é uma doença parasitária que afeta em torno de 12 a 14 milhões de indivíduos, causando um importante impacto econômico. Uma vez que as formas de tratamento disponíveis apresentam eficiência questionáveis e sérios efeitos colaterais, a busca de formas alternativas à terapêutica atual se faz necessária. A melhoria na "entrega" de fármacos pode ser uma estratégia interessante para redução dos efeitos colaterais dos tratamentos utilizados. Além disso, os fármacos ideais são aqueles que interferem em mecanismos específicos do parasito, que são essenciais para sua sobrevivência no hospedeiro mamífero. Nesse sentido, foi demostrado previamente que as mucinas denominadas gp35/50 participam no processo de adesão e invasão celular possibilitando o estabelecimento da infecção, tornando-se candidatos interessantes para o desenvolvimento de novas estratégias terapêuticas no tratamento desta parasitose. Adicionalmente, anticorpos monoclonais anti-gp35/50 (mAb-10D8) são capazes de interferir com o mecanismo de virulência de formas tripomastigotas metacíclicas. Conciliando todas as características, decidimos obter anticorpo recombinante anti-gp35/50 (scFv-10D8) para fins terapêuticos, uma vez que estas moléculas são específicas e tem sido utilizadas com sucesso em outras patologias. Desta forma, a tecnologia de anticorpos recombinantes a partir RNA total de hibridoma (mAb-10D8) foi utilizada aqui para obtenção das regiões variáveis das cadeias leves e pesada de mAb-10D8 por RT-PCR utilizando iniciadores específicos. Os fragmentos obtidos foram sequenciados e utilizados para síntese de um gene sintético de scFv (scFv-10D8) otimizado para expressão em E. coli. O gene de scFv-10D8 foi subclonado em vetor de expressão procariótico fusionado à cauda de histidinas (pET22b). Após otimização das condições de indução e enriquecimento de uma fração contendo scFv-10D8, foi demonstrado que a proteína recombinante é capaz de reconhecer as mesmas proteínas identificadas pelo mAb-10D8. Diante destes resultados, especula-se que esse anticorpo recombinante anti-gp35/50 de T. cruzi manterá as mesmas propriedades descritas para o mAb-10D8 e seu fragmento Fab na redução da virulência. Sendo assim, é provável que o scFv-10D8 poderá ser utilizado sozinho ou associado a outras moléculas tóxicas ao parasito. Palavras-chave: Trypanosoma cruzi, scFv-10D8, gp35/50, anticorpos recombinantes. / Abstract: Chagas disease is a parasitic disease caused by Trypanosoma cruzi, and affects approximately 10 million individuals causing a major economic impact. Since the available therapeutic approaches have questionable effectiveness and serious side effects, the search for alternatives to the current therapeutic strategies is required. The improvement on drug delivery can reduce the side effects caused by the treatment. Moreover, the ideal drugs are the ones that interfere with specific mechanisms from the parasite that is essential for its survival in the mammalian host. Thus, it was previously shown that the mucins called gp35/50 are involved in cell adhesion and invasion processes enabling the establishment of infection and become interesting candidates for the development of new chemotherapeutic agents. Additionally, it was published that anti-gp35/50 monoclonal antibodies (mAb-10D8) are capable of interfering with the virulence mechanisms of trypomastigotes. Combining all the features we decided to obtain anti-gp35/50 recombinant antibody (scFv-10D8) for therapeutic purposes, since these molecules are specific and have been successfully used in other pathologies. Here, the technology of recombinant antibodies was used to obtain the regions encoding the variable light and heavy chains of mAb-10D8 by RT-PCR using specific primers and total RNA from hybridoma cells. The fragments were sequenced and used for the synthesis of a synthetic gene of scFv (scFv- 10D8) optimized for E. coli expression. The scFv-10D8 gene was subcloned fused to a histidine tag into a prokaryotic expression system (pET22b). After testing some induction conditions and enriching a fraction containing scFv-10D8, it was demonstrated that the recombinant antibody is able to recognize in the same fashion as mAb-10D8 the parasite protein. These results encourage us to speculate that this scFv anti-T.cruzi gp35/50 can be used in a new therapeutic strategy for Chagas disease, since it may retain the features previously described for mAb-10D8 and its Fab fragment. Thus, scFv-10D8 may be used alone or conjugated to a known drug against T. cruzi. Keywords: Trypanosoma cruzi, scFv-10D8, Recombinant antibodies, gp35/50

Orientador : Anibal Eugenio Vercesi / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-07-27T23:51:06Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Catisti_Rosana_D.pdf: 27879026 bytes, checksum: 9ca11d6622077883543ad498337004ef (MD5) Previous issue date: 2001 / Resumo: O íon cálcio exerce papel essencial no controle de uma série de funções celulares, porém seu excesso pode desencadear tanto a morte celular programada (apoptose) quanto a acidental (necrose). Para avaliarmos os efeitos de ácido araquidônico (AA) na homeostase intracelular de cálcio, utilizamos dois modelos experimentais: mitocôndrias isoladas de fígado de rato e tripanossomatídeos. Comparamos a capacidade de abertura do poro de transição de permeabilidade, utilizando-se concentrações de AA e de carbonil cianeto p-trifluorometoxifenil-hidrazone (FCCP) capazes de causar, de modo similar, a dissipação do potencial elétrico transmembrana (? ?) em mitocôndrias de fígado de rato, na presença de cálcio e do substrato respiratório succinato. O efeito protonofórico de AA e FCCP foi muito pouco modificado por carboxiatractilosídeo. A abertura do poro de transição de permeabilidade, induzida por AA ou FCCP, mostrou ser sensível a catalase, EGTA, ADP, ditiotreitol, ciclosporina A, rotenona e por substratos respiratórios. Isto indica que a condição de estresse oxidativo associada ao estado oxidado dos nucleotídeos de piridina leva à oxidação de tióis das proteínas de membrana, abrindo o poro. Investigamos também o mecanismo de ação de AA na mobilização intracelular de cálcio, em formas tripomastigotas procíclicas de Trypanosoma brucei, promastigotas de Leishmania donovani e amastigotas de Trypanosoma cruzi. Verificamos que o influxo de cálcio é estimulado pela melitina, e bloqueado pelo inibidor da fosfolipase A2 ácido 3-(4-octadecil)-benzoilacrílico (OBAA). AA induz o influxo de cálcio, num mecanismo sensível a LaCb. Entretanto, melitina e AA induzem um aumento na [Ca2+]iem T. brucei, quando incubados em meio livre de Ca2+, indicando mobilização de Ca2+ de organelas intracelulares. Essa hipótese foi sugerida pelos experimentos mostrando que AA promove liberação de Ca2+de acidocalcisomas nestas células. Os resultados mostrando mudanças no potencial de membrana mitocondrial, liberação de alaranjado de acridina e Ca2+ dos acidocalcisomas, e transporte de Ca2+ através da membrana plasmática, sugerem que, em adição à possível estimulação nos processos mediados por canais de Ca2+,AA, na faixa de concentração aqui utilizada, tem outros efeitos não específicos em membranas de tripanossomatídeos / Abstract: Calcium ions play essential role in the control of many cellular functions, however the excess may act as a trigger for both programmed (apoptosis) or accidental cell death (necrosis). To evaluate the role of arachidonic acid (AA) in intracellular calcium homeostases, we used two experimental models: isolated rat liver mitochondria and trypanosomatids. We have compared the PTP opening ability of AA with that of carbonyl cyanide m-chlorophenylhydrazone (FCCP) at concentrations that cause similar quantitative dissipation of the membrane potential (? ?) in Ca2+-Ioaded rat liver mitochondria respiring on succinate. The protonophoric effects of AA and FCCP were only slightly modified by carboxyatractyloside and were followed by PTP opening, sensitive to catalase, EGTA, ADP, dithiothreitol, cyclosporin A, rotenone or NAD(P)H-linked substrates. These results indicate that a condition of oxidative stress associated with the oxidized state of PN underlies membrane protein thiol oxidation and PTP opening. We also studied the AA induced-calcium mobilization in Trypanosoma brucei procyclic trypomastigotes, Leishmania donovani promastigotes and Trypanosoma cruzi amastigotes. We verified that Ca2+influx was also stimulated in a dose-dependent manner (50-400 nM) by the amphiphilic peptide melittin. This effect was blocked by the phosphqlipase A2 inhibitor 3-(4-octadecyl)-benzoylacrylic acid. The unsaturated fatty acid AA, in the range of 10-75 µM, induced Ca2+entry by a mechanism sensitive to LaCb. However, both melittin and AA induced increase in [Ca2+]i in T. brucei procyclic trypomastigotes incubated in Ca2+-free medium implying Ca2+ mobilization trom intracellular stores. This hypothesis was supported by experiments showing that AA promoted Ca2+release from the acidocalcisomes of these cells. The results showing changes in mitochondrial membrane potential, release of acridine orange and Ca2+from the acidocalcisomes and Ca2+release across the plasma membrane suggest that in addition to the stimulation of a Ca2+channel mediated process, AA, in the range of concentrations used here, have other nonspecific effects on the trypanosomatids membranes / Doutorado / Ciencias Biomedicas / Mestre em Ciências Médicas

Orientador: Cáris Maroni Nunes / Banca: Flávia Lombardi Lopes / Banca:Silvana de Cassia Paulan / Resumo: Os protozoários do gênero Leishmania, da família Trypanosomatidae, são responsáveis por causar as leishmanioses, zoonoses de distribuição mundial que atingem países de regiões tropicais e subtropicais, representando um importante problema de saúde pública. As espécies de Leishmania patogênicas à humanos são classificadas em dois subgêneros, Leishmania e Viannia, sendo responsáveis pelas três formas clínicas mais comuns da doença. O subgênero Leishmania tem representantes no Velho e no Novo Mundo, enquanto que as espécies do subgênero Viannia estão presentes somente nas regiões tropicais das Américas, sendo responsáveis pela manifestação tegumentar na forma cutânea e mucocutânea. O avanço nas tecnologias de sequenciamento e montagem dos genomas de espécies de Leishmania têm possibilitado melhor entendimento das leishmanioses, da relação parasita-hospedeiro e até mesmo a identificação diferencial das espécies, auxiliando no entendimento das diferenças nas manifestações clínicas. Com o intuito de ampliar as informações genômicas das espécies de Leishmania e do subgênero Viannia, trabalhamos com o sequenciamento de DNA genômico e ferramentas de bioinformática para a montagem do genoma e anotação de proteínas de duas espécies, Leishmania (Viannia) guyanensis e Leishmania (Viannia) shawi / Abstract: The protozoa of the Trypanosomatidae family Leishmania genus, are responsible for causing leishmaniosis, zoonosis of global distribution that affects countries in tropical and subtropical regions, representing an important public health problem. The Leishmania species pathogenic to humans are classified into two subgenera, Leishmania and Viannia, which are responsible for three of the most common clinical manifestations of this disease. The subgenus Leishmania has representatives in the Old and New World, while the Viannia species are present only in the tropical regions of the Americas. These are responsible for the tegumentary manifestation of the cutaneous and mucocutaneous forms. The advance in the technologies of sequencing and the assembly of the genomes of Leishmania species have allowe to better understand the leishmaniosis, the parasite-host relationship and even the differential identification of the species thus, helping to understand the differences in the clinical manifestations. In order to expand the genomic information of the Leishmania species and the subgenus Viannia, we worked with genomic DNA sequencing and bioinformatics tools for assembling the genome and annotating proteins of two species, Leishmania (Viannia) guyanensis and Leishmania (Viannia) shawi / Mestre

Resumo: A doença de Chagas e toxoplasmose são problemas de saúde pública no Brasil e entender com detalhes a biologia dos agentes causais, T. cruzi e T. gondii respectivamente, pode ser um ponto crucial para gerar informações relevantes voltadas para o desenvolvimento de tratamento efetivo no combate a estas doenças. No entanto, a busca de novos alvos para quimioterapia de algumas doenças parasitárias esbarra, por exemplo, na ausência de ferramentas que possibilitem o estudo da função de genes essenciais para a sobrevivência do organismo. Dentro desta problemática, o objetivo central deste estudo é a identificação de proteínas envolvidas no transporte nucleocitoplasmático de RNAs, mais especificamente a exportação de mRNAs, com a utilização de ferramentas de genética reversa para análise de proteínas essenciais envolvidas nestas vias em T. cruzi e T. gondii. Além disso, T. gondii tem sido o modelo de estudo escolhido por diversos grupos, uma vez que dispõe de várias ferramentas de genética reversa consideradas inviáveis ou laboriosas em outros parasitas (como Plasmodium ou Trypanosoma). A escolha do tema foi baseada em dois fatos principais: a) dentro do contexto de eventos moleculares essenciais, o transporte de RNA mensageiro (mRNA) ao local de tradução é uma etapa essencial e crucial na seleção de genes a serem expressos em uma célula eucariótica; b) escassez de publicações envolvendo diversos grupos de parasitas, demonstrando ser um tema da pesquisa básica em parasitologia que necessita ser explorado. Os dados gerados neste estudo permitiram identificar que a maioria das proteínas relacionadas com a exportação de mRNAs não são tão conservadas ao longo da filogenia de eucariotos, principalmente em relação aos protozoários que divergiram na base da árvore filogenética. A exceção encontrada foi Sub2/UAP56, uma proteína relacionada com exportação de mRNAs em fungos e humanos, respectivamente, que se encontra altamente conservada ao longo da filogenia de eucariotos. Em T. cruzi foi observado que TcSub2 é uma proteína nuclear, relacionada com alguns sítios de transcrição por RNA Polimerase II e essencial, não sendo possível obter o nocaute duplo do respectivo gene. Em T. brucei e T. gondii foi observado que a diminuição gradual das proteínas em questão, TbSub2 e TgUAP56 respectivamente, resulta em acúmulo de mRNAs poliadenilados nos núcleos afetando a exportação dos mRNAs e resultando em morte celular. A partir da observação da participação de proteínas ortólogas de Sub2 na exportação de mRNAs em parasitas, a outra parte deste estudo foi identificar proteínas associadas a TcSub2 para iniciar o entendimento sobre esta via bem como verificar a presença de proteínas específicas e provavelmente essenciais de parasitas para futuros estudos funcionais.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:24:15Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-08-16Bitstream added on 2014-06-13T20:51:49Z : No. of bitstreams: 1 goto_rl_me_botfm.pdf: 753340 bytes, checksum: 36ca648feea8785034d94b3a1806eb56 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Universidade Estadual Paulista (UNESP) / A doença de Chagas, causada pelo Trypanosoma cruzi, é uma doença infecciosa crônica negligenciada. Apresenta grande incidência no Brasil e, nos últimos anos, passou a ser uma endemia de centros urbanos. É acompanhada por alterações no sistema imune com variações nos níveis séricos das citocinas pró-inflamatórias. O tratamento disponível no Brasil é o benzonidazol, com baixa eficácia na fase crônica e efeitos colaterais importantes. Não há estudos que relacionem o tratamento, a resposta imune e a desnutrição na doença de Chagas. Sabe-se que a desnutrição é um fator de imunossupressão e que poderia interferir na evolução das doenças infecciosas e parasitárias. Portanto, o objetivo foi avaliar a desnutrição associada com o tratamento anti-parasitário e com as citocinas pró-inflamatórias, em camundongos Balb/c infectados. Foram utilizados 90 animais, divididos em seis grupos: G1-controle, G2-infectado com dieta normal, G3-infectado com dieta normal e tratado, G4-controle desnutrido, G5-desnutrido e infectado e G6 desnutrido, infectado e tratado. Foram avaliados em cinco momentos: M1-1°dia, M2-3°dia, M3-5°dia, M4-7°dia e M5-9°dia. Para infecção foi utilizada a cepa aguda Y, com pico de parasitemia no sétimo dia (M4). Realizou-se a eutanásia de três animais de cada grupo, em cada momento. Para determinação das citocinas foi utilizado o ELISA e, para análise histopatológica, amostras do coração, intestino e fígado. O medicamento foi dado na dosagem de 100 mg/kg/dia. A análise estatística foi realizada pelo Grupo de Apoio à Pesquisa da Faculdade de Medicina de Botucatu. Observou-se que nos animais desnutridos houve redução significativa do peso no M4, mostrando que a desnutrição agravou a infecção. O coração foi o órgão que apresentou maior diminuição do seu peso, tanto nos animais com dieta... / Chagas disease, caused by Trypanosoma cruzi, is a neglected infectious chronic disease. It is highly incident in Brazil and, in the last few years, it has become endemic in certain urban centers. It is accompanied by alterations in the immune system with variations in the serum levels of pro-inflammatory cytokines. The treatment available in Brazil is benznidazole with low efficacy in the chronic phase and important side effects. No studies have related treatment, immune response and malnutrition in Chagas disease. It is known that malnutrition is an immunodepression factor and that it could interfere with the development of infectious and parasitic diseases. Therefore, this study aimed at evaluating malnutrition associated with anti-parasitical treatment and pro-inflammatory cytokines in infected Balb/c mice. Ninety animals were used, and they were divided into six groups: G1-control, G2-infected mice with a normal diet, G3-infected mice with a normal diet and treated, G4-malnourished control, G5-malnourished and infected and G6-Malnourished, infected and treated. The animals were evaluated at five moments: M1-1st day, M2-3rd day, M3-5th day, M4-7th day and M5-9th day. The acute Y strain, with a parasitemia peak on the seventh day (M4), was used for infection. Three animals from each group were euthanized at each moment. ELISA was used for cytokine determination, and heart and liver samples were used for histological analysis. The drug was used at a dosage of 100 mg/kg/day. Statistical analysis was performed by the Research Support Group of the Botucatu School of Medicine. Significant weight loss at M4 was observed in malnourished animals, thus showing that malnutrition aggravated infection. The heart was the organ that showed the largest weight reduction, both in animals under a normal diet and in malnourished... (Complete abstract click electronic access below)

Orientador : Dr. Stenio Perdigão Fragoso / Co-orientadora : Drª. Gisele Fernanda Assine Picci / Tese (doutorado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biologia Celular e Molecular. Defesa: Curitiba, 10/06/2014 / Inclui referências / Área de concentração : Biologia Celular e Molecular / Resumo: O protozoário Trypanosoma cruzí, agente causador da Doença de Chagas, possui características incomuns em relação à organização e expressão gênicas, tais como genes arranjados em polícístrons, transcritos processados por uma reação de trans splícíng, ausência promotores clássicos da RNA Polimerase 11 e poucos fatores de transcrição codificados em seu genoma. Essas características sugerem que a regulação diferencial da expressão gênica, que permitem um ciclo de vida complexo, é controlada por mecanismos pós-transcricionais, principalmente através de elementos em eis presentes, em geral, nas regiões não traduzidas (UTRs) dos mRNAs e de proteínas ligadoras de RNA (fatores em trans). As proteínas CCCH zínc fínger, caracterizadas por possuírem três resíduos de cisteína e um de histidina que coordenam um íon zinco na sequência C-X7;8-C-X5-C-X3-H, estão entre as proteínas ligadoras de RNA que promovem o controle do processamento, estabilidade, distribuição e tradução dos mRNAs. O objetivo do presente trabalho foi estudar o papel que proteína TcZC3H31 (a qual possui três domínios CCCH zínc fínger) desempenha durante o ciclo de vida do T. cruzí, usando técnicas como nocaute gênico, superexpressão e ribonômica. Essa proteína é expressa quase que exclusivamente nas formas epimastigota e tripomastigota metacíclico. Durante a divisão celular (G2, mitose e citocinese) de epimastigotas foram observadas estruturas com alta concentração dessa proteína, as quais não são observadas nos parasitas em na fase G1 do ciclo celular. Foram obtidos parasitas nocautes para esse gene, os quais foram incapazes de se diferenciar de epimastigota para a forma tripomastigota metacíclico, enquanto parasitas superexpressando TcZC3H31 se diferenciam com maior eficiência do que os parasitas selvagens, sugerindo que essa proteína é essencial para a diferenciação do T. cruzí. Ensaios de imunoprecipitação de RNA seguida de sequenciamento (experimentos de ribonômica) permitiram a identificação de mRNAs alvos dessa proteína. A maioria dos genes identificados nessa análise codificam proteíno-quinases. O padrão de expressão de alguns RNAs alvos foi avaliado por PCR quantitativa ao longo do ciclo de vida e nos parasitas mutantes obtidos. Através dessas análises foi possível identificar um grupo de 5 genes para os quais padrão de expressão acompanha ao da proteína TcZC3H31, ou seja, seus mRNAs estão aumentados quando a proteína está superexpressa e diminuídos quando a proteína está ausente (nocaute gênico). Palavras-chave: Trypanosoma cruzí. CCCH zínc fíngers. Regulação da expressão gênica. Regulação pós-transcricional. Metaciclogênese. / Abstract: The protozoan parasite Trypanosoma cruzí is the causative agent of chagas disease and presents unusual gene expression and organization features. For example, genes are arranged in polícístrons, transcripts are processed through a trans splícíng reaction, and their genome lacks the classic RNA Polymerase li promoters and encodes only a few transcription factors. Those features suggest that the differential regulation of gene expression, required for the complexity of their life cycle, is controled at the posttranscriptional level, mainly through eis contrai elements, which are generally present in the untranslated regions (UTRs) of mRNAs and trans-acting factors, such as RNAbinding proteins (RBPs). The CCCH zínc fínger proteins are characterized by the presence of three cystein and one histidine residues that coordinate the zinc ion in the motif C-X718-C-X5-C-X3-H. They are RNA binding proteins that contrai mRNA processing, stability, distribution and translation. The aim of the present work was to to examine the role that the TcZC3H31 (a three CCCH zínc fínger motifs-containing protein) plays during the life cycle of T. cruzí. TcZC3H31 is almost exclusively expressed in the epimastigote and metacyclic trypomastigote forms. During cell division (G2, mytose and cytokinesis phases) TcZC3H31 was concentrated in structures, which were not observed in the G1 phase. T. cruzí null mutant for TcZC3H31 gene is not able to undergo differentiation to metacyclic trypomastigote forms, whereas TcZC3H31- superexpressing parasites differentiate more efficiently than wild type counterpart. These data suggest that TcZC3H31 protein is essential for T. cruzí differentiation. RNA immunoprecipitation followed by sequencing (ribonomic assays) identified the TcZC3H31 mRNA targets. Most of them encode for protein kinases. The expression pattern of some targets through the life cycle and in the mutant parasites was measured by quantitative PCR. This analysis enabled the identification of a 5 genes group wich showed an expression pattern similar to the expression of TcZC3H31 protein, with an increase of these mRNAs in response to the protein overexpression and a decrease in the protein absence (gene knockout). Key words: Trypanosoma cruzí. CCCH zínc fíngers. Gene expression regulation. Postranscriptional regulation. Metacyclogenesis.

Orientador: João Aristeu da Rosa / Banca: Mara Cristina Pinto / Banca: Maria Tercília Vilela de Azeredo Oliveira / Resumo: Os membros da subfamília Triatominae são vetores do protozoário Trypanosoma cruzi, agente etiológico da doença de Chagas. Eles compreendem 144 espécies agrupadas em 18 gêneros e são encontrados principalmente nas Américas, desde o sul dos Estados Unidos ao sul da Argentina e Chile. Essencialmente a identificação desses insetos tem sido baseada na descrição comparativa da morfologia de indivíduos adultos incluindo as estruturas da genitália masculina e feminina, aspectos gerais do corpo como cabeça, tórax, antena e coloração, entre outros. Entretanto a distinção por critérios morfológicos apresenta limitações para caracterização de espécies do gênero Rhodnius devido às semelhança entre elas, especialmente entre R. prolixus, R. domesticus, R. robustus, R. neglectus, and R. nasutus, espécies conhecidas como "grupo prolixus". Nesse estudo as técnicas de biologia molecular, sequenciamento do gene 16S e PCR-RFLP, foram utilizados para caracterização de sete espécies de Rhodnius. Os produtos do sequenciamento do gene 16S das espécies R. brethesi; R. nasutus, R. nasutus, R. neglectus, R. pictipes; R. prolixus, R. robustus, e R. sp geraram alinhamento de 380 pares de bases com 48 sítios polimórficos. A visualização das bandas geradas pelas enzimas de restrição BstUI, HhaI, RsaI and Mbol com as sete amostras de Rhodnius possibilitou distingui-las com exceção de R. prolixus, R. neglectus e R.robustus. Os dois métodos feitos para as mesmas amostras confirmaram a validade da utilização do método PCR-RFLP para identificação de R. brethesi, R. nasutus, R. pictipes e R. sp, uma vez que o gene 16S já é um marcador estabelecido para as espécies de Rhodnius e as duas metodologias apresentaram os mesmos resultados, confirmaram também o trabalho realizado por Naegele et al. 2006 em que a técnica de PCR-RFLP distinguiu R. stale, R. pictipes, R. Prolixus and R. domesticus / Abstract: The members of the subfamily Triatominae are vectors of the protozoan Trypanosoma cruzi, which is the etiologic agent of Chagas disease. They consist of 144 species grouped into 18 genera and are found mainly in the Americas, from the southern United States to southern Argentina and Chile. Essentialy, the identification of these insects has been based on the comparative description of the morphology of adult specimens, including the structures of both the male and female genitalia, general body features like head, thorax, antennae and color, among others. However, this method is not particularly useful in the characterization of species belonging to the genus Rhodnius because they are very similar morphologically, specially R. prolixus, R. domesticus, R. robustus, R. neglectus, and R. nasutus, which are known as "prolixus complex". In this study molecular biology techniques, such as sequencing of 16S gene and PCR-RFLP, was used to contribute to the characterization of seven species of Rhodnius. The products of the sequencing of the 16S species R. brethesi; R. nasutus, R. nasutus, R. neglectus, R. pictipes; R. prolixus, R. robustus, and R. sp generated a alingment of 380bp with 48 polymorphic sites. The visualization of the bands arising from the use of restriction enzymes BstUI, HhaI, RsaI and Mbol with samples of seven species of Rhodnius possible to distinguish them except for R. prolixus, R. neglectus and R.robustus. The two methods performed in parallel for the same samples confirmed the validity of using the enzymatic method for specific identification of R. brethesi, R. nasutus, R. pictipes e R. sp, since the 16S gene is already an established marker for it and the two methods showed the same results, confirmed too the work performed by Naegele et al.2006 that the PCR-RFLP technic distinguished R. stale, R. pictipes, R. Prolixus and R. domesticus / Mestre

Orientador: Paulo Câmara Marques Pereira / Banca: Silvia Justina Papini / Banca: Dalmo Correia Filho / Resumo: A doença de Chagas, causada pelo Trypanosoma cruzi, é uma doença infecciosa crônica negligenciada. Apresenta grande incidência no Brasil e, nos últimos anos, passou a ser uma endemia de centros urbanos. É acompanhada por alterações no sistema imune com variações nos níveis séricos das citocinas pró-inflamatórias. O tratamento disponível no Brasil é o benzonidazol, com baixa eficácia na fase crônica e efeitos colaterais importantes. Não há estudos que relacionem o tratamento, a resposta imune e a desnutrição na doença de Chagas. Sabe-se que a desnutrição é um fator de imunossupressão e que poderia interferir na evolução das doenças infecciosas e parasitárias. Portanto, o objetivo foi avaliar a desnutrição associada com o tratamento anti-parasitário e com as citocinas pró-inflamatórias, em camundongos Balb/c infectados. Foram utilizados 90 animais, divididos em seis grupos: G1-controle, G2-infectado com dieta normal, G3-infectado com dieta normal e tratado, G4-controle desnutrido, G5-desnutrido e infectado e G6 desnutrido, infectado e tratado. Foram avaliados em cinco momentos: M1-1°dia, M2-3°dia, M3-5°dia, M4-7°dia e M5-9°dia. Para infecção foi utilizada a cepa aguda Y, com pico de parasitemia no sétimo dia (M4). Realizou-se a eutanásia de três animais de cada grupo, em cada momento. Para determinação das citocinas foi utilizado o ELISA e, para análise histopatológica, amostras do coração, intestino e fígado. O medicamento foi dado na dosagem de 100 mg/kg/dia. A análise estatística foi realizada pelo Grupo de Apoio à Pesquisa da Faculdade de Medicina de Botucatu. Observou-se que nos animais desnutridos houve redução significativa do peso no M4, mostrando que a desnutrição agravou a infecção. O coração foi o órgão que apresentou maior diminuição do seu peso, tanto nos animais com dieta... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Chagas disease, caused by Trypanosoma cruzi, is a neglected infectious chronic disease. It is highly incident in Brazil and, in the last few years, it has become endemic in certain urban centers. It is accompanied by alterations in the immune system with variations in the serum levels of pro-inflammatory cytokines. The treatment available in Brazil is benznidazole with low efficacy in the chronic phase and important side effects. No studies have related treatment, immune response and malnutrition in Chagas disease. It is known that malnutrition is an immunodepression factor and that it could interfere with the development of infectious and parasitic diseases. Therefore, this study aimed at evaluating malnutrition associated with anti-parasitical treatment and pro-inflammatory cytokines in infected Balb/c mice. Ninety animals were used, and they were divided into six groups: G1-control, G2-infected mice with a normal diet, G3-infected mice with a normal diet and treated, G4-malnourished control, G5-malnourished and infected and G6-Malnourished, infected and treated. The animals were evaluated at five moments: M1-1st day, M2-3rd day, M3-5th day, M4-7th day and M5-9th day. The acute Y strain, with a parasitemia peak on the seventh day (M4), was used for infection. Three animals from each group were euthanized at each moment. ELISA was used for cytokine determination, and heart and liver samples were used for histological analysis. The drug was used at a dosage of 100 mg/kg/day. Statistical analysis was performed by the Research Support Group of the Botucatu School of Medicine. Significant weight loss at M4 was observed in malnourished animals, thus showing that malnutrition aggravated infection. The heart was the organ that showed the largest weight reduction, both in animals under a normal diet and in malnourished... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre