Orientador : Francisco Gomes de Alcantara / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-15T08:39:05Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Paiva_SoniaMinervinode_M.pdf: 2056307 bytes, checksum: 9e6da0b280b444a7fbbf92beba4f81f4 (MD5) Previous issue date: 1980 / Resumo: O autor estudou quantitativamente, em diferentes níveis, os neurônios do plexo miontérico do esôfago de cinco pacientes chagásicos falecidos na fase da moléstia de Chagas dos quais, três adquiriram a doença por meio de transfusão sanguínia e dois adquiriram naturalmente. A contagem neuronal foi realizada inicialmente em apenas um anel do terço inferior do esôfago, e, posteriormente, foram contados os neurônios presentes em vários anéis e sofageanos do terço superior. Médio e inferior. A percentagem média de desnervação do terço inferior do esôfago observada nos cinco casos estudados foi de 61,2% e 63,3%, obtida a partir da contagem dos neurônios em um nível e em vários níveis, respectivamente. Esses resultados sugerem que a contagem em apenas um anel poderia ser utilizada, um trabalhos como este, para expressar o grau de desnervação desse segmento do esôfago em particular. Em todos os casos ocorreu redução do número de neurônios, redução essa foi variável para cada caso. Comparando o número de neurônios obtidos nos cinco casos chagásicos agudos com aqueles descritos por WADA (1979) em indivíduos ¿normais¿, obtivemos percentagens de desnervação que foi de 39,7% para indivíduos de 2 meses; 66% para o de 2 anos; 55% para o de 4 anos; 87% para o de 40 anos e de 57,4% para o indivíduo de 64 anos de idade / Mestrado / Mestre em Ciências Biológicas

Orientador: Fabiano Antonio Cadioli / Coorientador: Luiz Carlos Marques / Banca: Willian Marinho Dourado Coêlho / Banca: Marcos Rogério André / Resumo: Em bovinos o protozoário Trypanosoma vivax causa enfermidade que pode levar à redução dos índices produtivos ou a morte do animal. O diagnóstico deste protozoário pode ser realizado por testes parasitológicos, sorológicos e moleculares. Entretanto estes testes não são capazes de fornecer prognóstico, indicar a fase da infecção e a responsividade ao tratamento instituído. Por outro lado, o proteinograma sérico pode fornecer tais informações. O objetivo do estudo foi determinar o perfil eletroforético de proteínas de fase aguda de bovinos Girolando naturalmente infectados com T. vivax (NIF), utilizando-se como matriz gel de acrilamida contendo dodecil sulfato de sódio (SDS-PAGE). Foram estudados dois grupos de animais, NIF (n=507) e grupo de bovinos não infectados (NI; n=50). Amostras de soros de ambos os grupos foram submetidas à reação de imunofluorescência indireta (RIFI) e Ensaio de Imunoadsorção Enzimática (ELISA) para detecção de anticorpos anti-T. vivax e realização do fracionamento eletroforético. A porcentagem de soros positivos pela RIFI foi de 89,74% e pelo ELISA 93,09%, sendo que este método mostrou-se capaz de detectar mais amostras positivas do que a RIFI para detecção de anticorpos anti-T. vivax em fases iniciais da infecção. No fracionamento proteico foram consideradas 12 proteínas; sendo elas IgA, ceruloplasmina, proteínas de 95 KDa, 88 KDa, transferrina, albumina, antitripsina, IgG, haptoglobina, glicoproteína ácida e proteínas de 23 KDa e 20,5 KDa. No grupo NIF observou-se aumento de proteína total, IgA, proteína de 88 KDa, albumina, antitripsina, IgG, haptoglobina, 20,5 KDa e diminuição de ceruloplasmina, proteína de 95 KDa e 23 KDa e transferrina. Glicoproteina ácida não apresentou diferença significativa entre os grupos NIF e NI. A antitripsina pode ser utilizada como indicador da... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The protozoan T. vivax can cause an important disease in cattle, which is responsible for death or low index productive. The diagnosis is based on parasitologic, molecular and sorological tests. However, these tests are not able to provide prognostic, infection phase and response of treatment. On the other hand, serum proteinograms can accomplish these features. The present work aimed to assess the acute phase proteins eletrophoretic profile in Girolando cattle naturally infected by T. vivax (NIF) by SDS-Page. For this purpose, two groups of animals were utilized: one naturally infected by T. vivax (NIF; n=507) and another one by noninfected cattle (NI; n=50). Serum samples were submitted to IFA and ELISA for detecting IgG antibody to T. vivax. SDS-Page was only performed in samples which showed positive results in serological testes. The percentage of positive samples by IFA and ELISA were 89,74% and 93,09%, respectively. ELISA showed a higher number of seropositive samples when compared to IFA. In eletrophoretic fractioning 12 proteins were evaluated, including IgA, ceruloplasmin, 95 KDa and 88 KDa proteins, transferrin, albumin, antitrypsin, IgG, haptoglobin, acidic glycoprotein, and 23 KDa and 20,5 KDa proteins. NIF animals showed an increase of serum concentration of IgA, 88 KDa, albumin, antitrypsin, IgG, haptoglobin, 20,5 KDa when compared to NI animals; on the other hand, serum concentration of ceruloplasmin, 95 KDa and 23 KDa proteins, and transferrin were lower in NIF animals when compared to NI animals. Acidic glycoprotein serum concentration did not shown differences when both groups of sampled animais were compared. Since Antitrypsin was only detected in NIF animals, this protein may be used as a marker of T. vivaxinfection in cattle. More studies should be performed aiming to clarify the identity of 95, 88, 23, 20,5 KDa... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:55Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-07-26Bitstream added on 2014-06-13T20:36:32Z : No. of bitstreams: 1 ferreirafilho_jcr_me_arafcf.pdf: 627816 bytes, checksum: b1c11f69fc69c2ac25f9a07f076cafa8 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Universidade Estadual Paulista (UNESP) / Os membros da subfamília Triatominae são vetores do protozoário Trypanosoma cruzi, agente etiológico da doença de Chagas. Eles compreendem 144 espécies agrupadas em 18 gêneros e são encontrados principalmente nas Américas, desde o sul dos Estados Unidos ao sul da Argentina e Chile. Essencialmente a identificação desses insetos tem sido baseada na descrição comparativa da morfologia de indivíduos adultos incluindo as estruturas da genitália masculina e feminina, aspectos gerais do corpo como cabeça, tórax, antena e coloração, entre outros. Entretanto a distinção por critérios morfológicos apresenta limitações para caracterização de espécies do gênero Rhodnius devido às semelhança entre elas, especialmente entre R. prolixus, R. domesticus, R. robustus, R. neglectus, and R. nasutus, espécies conhecidas como “grupo prolixus”. Nesse estudo as técnicas de biologia molecular, sequenciamento do gene 16S e PCR-RFLP, foram utilizados para caracterização de sete espécies de Rhodnius. Os produtos do sequenciamento do gene 16S das espécies R. brethesi; R. nasutus, R. nasutus, R. neglectus, R. pictipes; R. prolixus, R. robustus, e R. sp geraram alinhamento de 380 pares de bases com 48 sítios polimórficos. A visualização das bandas geradas pelas enzimas de restrição BstUI, HhaI, RsaI and Mbol com as sete amostras de Rhodnius possibilitou distingui-las com exceção de R. prolixus, R. neglectus e R.robustus. Os dois métodos feitos para as mesmas amostras confirmaram a validade da utilização do método PCR-RFLP para identificação de R. brethesi, R. nasutus, R. pictipes e R. sp, uma vez que o gene 16S já é um marcador estabelecido para as espécies de Rhodnius e as duas metodologias apresentaram os mesmos resultados, confirmaram também o trabalho realizado por Naegele et al. 2006 em que a técnica de PCR-RFLP distinguiu R. stale, R. pictipes, R. Prolixus and R. domesticus / The members of the subfamily Triatominae are vectors of the protozoan Trypanosoma cruzi, which is the etiologic agent of Chagas disease. They consist of 144 species grouped into 18 genera and are found mainly in the Americas, from the southern United States to southern Argentina and Chile. Essentialy, the identification of these insects has been based on the comparative description of the morphology of adult specimens, including the structures of both the male and female genitalia, general body features like head, thorax, antennae and color, among others. However, this method is not particularly useful in the characterization of species belonging to the genus Rhodnius because they are very similar morphologically, specially R. prolixus, R. domesticus, R. robustus, R. neglectus, and R. nasutus, which are known as “prolixus complex”. In this study molecular biology techniques, such as sequencing of 16S gene and PCR-RFLP, was used to contribute to the characterization of seven species of Rhodnius. The products of the sequencing of the 16S species R. brethesi; R. nasutus, R. nasutus, R. neglectus, R. pictipes; R. prolixus, R. robustus, and R. sp generated a alingment of 380bp with 48 polymorphic sites. The visualization of the bands arising from the use of restriction enzymes BstUI, HhaI, RsaI and Mbol with samples of seven species of Rhodnius possible to distinguish them except for R. prolixus, R. neglectus and R.robustus. The two methods performed in parallel for the same samples confirmed the validity of using the enzymatic method for specific identification of R. brethesi, R. nasutus, R. pictipes e R. sp, since the 16S gene is already an established marker for it and the two methods showed the same results, confirmed too the work performed by Naegele et al.2006 that the PCR-RFLP technic distinguished R. stale, R. pictipes, R. Prolixus and R. domesticus

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:23:05Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-12-08Bitstream added on 2014-06-13T18:50:18Z : No. of bitstreams: 1 arnosti_lv_me_araiq_parcial.pdf: 215593 bytes, checksum: 9aa2e576ef79aac6ab3e5f640a4d7dba (MD5) Bitstreams deleted on 2014-11-14T12:16:59Z: arnosti_lv_me_araiq_parcial.pdf,Bitstream added on 2014-11-14T12:17:45Z : No. of bitstreams: 1 000694045.pdf: 771714 bytes, checksum: 54f50f27e86e669f9973e97bc2ab3d70 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / A família Trypanosomatidae compreende um grande número de protozoários parasitas, incluindo importantes agentes etiológicos de doenças humanas. Entre os causadores de doenças, destaca-se o Trypanosoma brucei (responsável pela Doença do Sono) e o Trypanosoma cruzi (agente causador da Doença de Chagas). Ambos possuem como mecanismo de processamento dos seus mRNAs o “trans-splicing”, que envolve a excisão de íntrons e a união dos éxons de dois transcritos independentes, o splice-leader, e o pré-mRNA aceptor. As reações de cis e trans-splicing in vitro com extrato nuclear de células HeLa já foram padronizadas e utilizada como modelo em diversos experimentos. Entretanto, em tripanosomas, as únicas referências sobre a reação de transsplicing in vitro são de Vianna et. al., (2001) e Skaked et. al., (2010), com extratos de parasitas preparados de modos diferentes. A reação com células permeáveis do Trypanosoma cruzi foi usada como modelo para análise de drogas tripanocidas na reação de trans-splicing (Barbosa et. al., 2007); porém, não é um sistema livre de células conforme mencionado acima. Diante disso, este trabalho propõe reproduzir a reação de “trans-splicing” in vitro com extratos nucleares livre de parasitas utilizando as formas epimastigotas de T. cruzi e/ou as formas prociclicas de T. brucei e uma sequência parcial de alfa tubulina de T. cruzi como pré-mRNA aceptor. A padronização desta reação in vitro possibilitará avanços no entendimento da maquinaria do trans-spliceossomo, tornando-se também um modelo interessante para avaliação de mecanismo de ação de drogas tripanocidas / Trypanosomatidae family comprises a large number of protozoan parasites, including important etiological agents of neglected human diseases. Among the diseases’ agents, Trypanosoma brucei (responsible for sleeping sickness) and Trypanosoma cruzi (causative agent of Chagas' disease) are the most important parasites. Both have trans-splicing as a mechanism for the processing of its mRNA, which involves the excision of introns and union of exons form two independent transcripts, the spliceleader (SLRNA), and the acceptor pre-mRNA. The reaction of cis-and transsplicing in vitro with nuclear extract of HeLa cells has already been standardized and used as a model in several experiments. However, in trypanosomes, the only references on the reaction of trans-splicing in vitro are from Vianna et. al., (2001) and Skaked et. al., (2010), using parasitefree extracts prepared on different methods. For trypanocidal drugs analyze, trans-splicing reaction using T. cruzi permeable cells was used as a model (Barbosa et. al., 2007), but this is not the same as free-cell nuclear extract as mentioned above. Thus, this work shows trans-splicing in vitro reaction using nuclear extracts either from T. cruzi epimastigote forms and/or T. brucei procyclic forms reacting with the T. cruzi alpHa-tubulin cloned sequence as pre-mRNA acceptor. The standardization of this in vitro reaction will be able to promote advances to understanding the transspliceosomo machinery, as well as occurred in mammalian cis- and/or trans-splicing, becoming also an interesting model for evaluating trypanocidal drugs interference

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:23:46Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-02-18Bitstream added on 2014-06-13T18:19:58Z : No. of bitstreams: 1 sampaio_ph_me_jabo.pdf: 692117 bytes, checksum: 3c437fb5bb356c636b004d7e3732942b (MD5) / Em bovinos o protozoário Trypanosoma vivax causa enfermidade que pode levar à redução dos índices produtivos ou a morte do animal. O diagnóstico deste protozoário pode ser realizado por testes parasitológicos, sorológicos e moleculares. Entretanto estes testes não são capazes de fornecer prognóstico, indicar a fase da infecção e a responsividade ao tratamento instituído. Por outro lado, o proteinograma sérico pode fornecer tais informações. O objetivo do estudo foi determinar o perfil eletroforético de proteínas de fase aguda de bovinos Girolando naturalmente infectados com T. vivax (NIF), utilizando-se como matriz gel de acrilamida contendo dodecil sulfato de sódio (SDS-PAGE). Foram estudados dois grupos de animais, NIF (n=507) e grupo de bovinos não infectados (NI; n=50). Amostras de soros de ambos os grupos foram submetidas à reação de imunofluorescência indireta (RIFI) e Ensaio de Imunoadsorção Enzimática (ELISA) para detecção de anticorpos anti-T. vivax e realização do fracionamento eletroforético. A porcentagem de soros positivos pela RIFI foi de 89,74% e pelo ELISA 93,09%, sendo que este método mostrou-se capaz de detectar mais amostras positivas do que a RIFI para detecção de anticorpos anti-T. vivax em fases iniciais da infecção. No fracionamento proteico foram consideradas 12 proteínas; sendo elas IgA, ceruloplasmina, proteínas de 95 KDa, 88 KDa, transferrina, albumina, antitripsina, IgG, haptoglobina, glicoproteína ácida e proteínas de 23 KDa e 20,5 KDa. No grupo NIF observou-se aumento de proteína total, IgA, proteína de 88 KDa, albumina, antitripsina, IgG, haptoglobina, 20,5 KDa e diminuição de ceruloplasmina, proteína de 95 KDa e 23 KDa e transferrina. Glicoproteina ácida não apresentou diferença significativa entre os grupos NIF e NI. A antitripsina pode ser utilizada como indicador da... / The protozoan T. vivax can cause an important disease in cattle, which is responsible for death or low index productive. The diagnosis is based on parasitologic, molecular and sorological tests. However, these tests are not able to provide prognostic, infection phase and response of treatment. On the other hand, serum proteinograms can accomplish these features. The present work aimed to assess the acute phase proteins eletrophoretic profile in Girolando cattle naturally infected by T. vivax (NIF) by SDS-Page. For this purpose, two groups of animals were utilized: one naturally infected by T. vivax (NIF; n=507) and another one by noninfected cattle (NI; n=50). Serum samples were submitted to IFA and ELISA for detecting IgG antibody to T. vivax. SDS-Page was only performed in samples which showed positive results in serological testes. The percentage of positive samples by IFA and ELISA were 89,74% and 93,09%, respectively. ELISA showed a higher number of seropositive samples when compared to IFA. In eletrophoretic fractioning 12 proteins were evaluated, including IgA, ceruloplasmin, 95 KDa and 88 KDa proteins, transferrin, albumin, antitrypsin, IgG, haptoglobin, acidic glycoprotein, and 23 KDa and 20,5 KDa proteins. NIF animals showed an increase of serum concentration of IgA, 88 KDa, albumin, antitrypsin, IgG, haptoglobin, 20,5 KDa when compared to NI animals; on the other hand, serum concentration of ceruloplasmin, 95 KDa and 23 KDa proteins, and transferrin were lower in NIF animals when compared to NI animals. Acidic glycoprotein serum concentration did not shown differences when both groups of sampled animais were compared. Since Antitrypsin was only detected in NIF animals, this protein may be used as a marker of T. vivaxinfection in cattle. More studies should be performed aiming to clarify the identity of 95, 88, 23, 20,5 KDa... (Complete abstract click electronic access below)

Orientador: Daria Repka / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-14T20:54:04Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Gavino_VandaAparecida_M.pdf: 1213422 bytes, checksum: 63e55917673ac05dcca108dd6f25622c (MD5) Previous issue date: 1985 / Resumo: Não informado / Abstract: Not informed. / Mestrado / Mestre em Ciências Biológicas

Orientador: Fabiano Antonio Cadioli / Banca: Adriana Coelho de Souza / Banca: Rosangela Zacarias Machado / Banca: Paulo Cesar Ciarlini / Banca: Geórgia Modé Magalhães / Resumo: Trypanosoma evansi acomete diversas espécies de animais em todo o mundo. A infecção se caracteriza por intensa parasitemia associada a anemia, que evolui para lesões teciduais atribuídas à resposta autoimune do hospedeiro. O objetivo desse estudo foi avaliar a evolução da infecção experimental pelo Trypanosoma evansi até as fases mais tardias da infecção, a partir das lesões patológicas, estresse oxidativo tecidual, parasitemia e parâmetros hematológicos. Para tal, os ratos infectados com T. evansi foram eutanasiados aos 7, 14, 21, 28 e 35 dias após a inoculação (DAI), os animais foram anestesiados, e posteriormente colhidos 5 ml de sangue intracardíaco com anticoagulante etileno diamino tetra acetato de sódio (EDTA). Os achados histopatológicos foram avaliados de acordo com o tipo de lesão e a incidência de T. evansi, sendo descrita a localização da lesão e determinada a intensidade por escores. O estresse oxidativo foi avaliado a partir da resposta imune celular por imunomarcações da enzima óxido nítrico sintase induzível (iNOS) de imunohistoquímica. A carga parasitária foi detectada pela imunomarcação do parasita pela mesma técnica. Foi notada uma acentuada anemia no DAI 21. No baço, a hiperplasia linfoide em todos os momentos, evidenciando-se no DAI 35. No coração, presença de parasitas no interior de vasos e câmaras ventriculares, no DAI 21 e infiltrado inflamatório polimorfonuclear em todos os momentos, porém, extremamente acentuado no DAI 28. Nos rins notou-se a presen... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Trypanosoma evansi affects several species of animals worldwide. The infection is characterized by intense parasitemia associated with anemia, which evolves to tissue lesions attributed to the host's autoimmune response. The objective of this study was to evaluate the evolution of the experimental infection by Trypanosoma evansi until the later stages of the infection, from the pathological lesions, tissue oxidative stress, parasitemia and hematological parameters. To that end, mice infected with T. evansi were euthanized at 7, 14, 21, 28 and 35 days after inoculation (DAI), animals were anesthetized, and 5 ml of intracardiac blood was then collected with anticoagulant ethylene diamine tetraacetate sodium (EDTA). The histopathological findings were evaluated according to the type of lesion and the incidence of T. evansi. The location of the lesion was described and the intensity determined by scores. Oxidative stress was evaluated from the cellular immune response by immunostaining of the enzyme inducible nitric oxide synthase (iNOS) immunohistochemistry. The parasite load was detected by immunolabeling the parasite by the same technique. It was noted a marked anemia in DAI 21. In the spleen, lymphoid hyperplasia at all times, evidenced in DAI 35. In the heart, presence of parasites inside vessels and ventricular chambers, in DAI 21 and polymorphonuclear inflammatory infiltrate in all However, the presence of the parasite from the DAI 14 associated with a toxic nephrosis was ... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Submitted by Sandra Pereira (srpereira@ufrrj.br) on 2017-08-29T14:02:13Z No. of bitstreams: 1 2009 - Breno Almeida Soares.pdf: 7105040 bytes, checksum: 3b6aebf34151816545510b0506ed3412 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-08-29T14:02:13Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2009 - Breno Almeida Soares.pdf: 7105040 bytes, checksum: 3b6aebf34151816545510b0506ed3412 (MD5) Previous issue date: 2009-09-25 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior, CAPES, Brasil. / This work is part of a research project which investigates the utilization of abundant and accessible natural products in the synthesis of new molecules with potential activity against Chagas? disease. Recent studies carried out in our laboratory showed activity against Trypanosoma cruzi for piperine, a major component of Piper nigrum and for a series of its derivatives and analogues. Using bioisosterism as a strategy for molecular modification, we describe here the design, synthesis and antiparasitic evaluation of class of derivatives of 1,2,4-oxadiazole. The key step of the synthetic strategy used involved the SNAC reaction of the benzamidoxima with acid chlorides followed by cyclization, which allowed the preparation of eight new 1,2,4-oxadiazole The evaluation of the toxic activity of these new derivatives against epimastigote form of T. cruzi confirmed the bioisosteric relationship between the natural amide and the new products prepared, showing the oxadiazole 55 direct derived from piperine, as the most active compound in the series. / Este trabalho se insere numa linha de pesquisa que visa a utiliza??o de produtos naturais abundantes e access?veis na s?ntese de novas mol?culas com potencial atividade anti-chag?sica. Estudos recentes em nosso laborat?rio demonstraram a atividade antiparasit?ria da piperina e de uma s?rie de derivados e an?logos sobre o Trypanosoma cruzi, agente etiol?gico da doen?a de Chagas. Utilizando o bioisosterismo como estrat?gia de modifica??o molecular, descrevemos aqui o planejamento, a s?ntese e a avalia??o antiparasit?ria de derivados da classe dos 1,2,4-oxadiaz?is. A etapa-chave da estrat?gia sint?tica utilizada envolveu a rea??o de SNAC da benzamidoxima com cloretos de ?cidos, seguida de cicliza??o, que permitiu a prepara??o de oito novos 1,2,4- oxadiaz?is. A avalia??o da atividade t?xica destes novos derivados contra a forma epimastigota do T. cruzi confirmou a rela??o bioisost?rica entre a amida natural e os novos derivados preparados, evidenciando o oxadiazol 55 derivado direto da piperina, como o composto mais ativo da s?rie.

Orientador: Regina Maria Barretto Cicarelli / Banca: Marcia Aparecida da Silva Graminha / Banca: Maurício Bacci Junior / Resumo: A família Trypanosomatidae compreende um grande número de protozoários parasitas, incluindo importantes agentes etiológicos de doenças humanas. Entre os causadores de doenças, destaca-se o Trypanosoma brucei (responsável pela Doença do Sono) e o Trypanosoma cruzi (agente causador da Doença de Chagas). Ambos possuem como mecanismo de processamento dos seus mRNAs o "trans-splicing", que envolve a excisão de íntrons e a união dos éxons de dois transcritos independentes, o splice-leader, e o pré-mRNA aceptor. As reações de cis e trans-splicing in vitro com extrato nuclear de células HeLa já foram padronizadas e utilizada como modelo em diversos experimentos. Entretanto, em tripanosomas, as únicas referências sobre a reação de transsplicing in vitro são de Vianna et. al., (2001) e Skaked et. al., (2010), com extratos de parasitas preparados de modos diferentes. A reação com células permeáveis do Trypanosoma cruzi foi usada como modelo para análise de drogas tripanocidas na reação de trans-splicing (Barbosa et. al., 2007); porém, não é um sistema livre de células conforme mencionado acima. Diante disso, este trabalho propõe reproduzir a reação de "trans-splicing" in vitro com extratos nucleares livre de parasitas utilizando as formas epimastigotas de T. cruzi e/ou as formas prociclicas de T. brucei e uma sequência parcial de alfa tubulina de T. cruzi como pré-mRNA aceptor. A padronização desta reação in vitro possibilitará avanços no entendimento da maquinaria do trans-spliceossomo, tornando-se também um modelo interessante para avaliação de mecanismo de ação de drogas tripanocidas / Abstract: Trypanosomatidae family comprises a large number of protozoan parasites, including important etiological agents of neglected human diseases. Among the diseases' agents, Trypanosoma brucei (responsible for sleeping sickness) and Trypanosoma cruzi (causative agent of Chagas' disease) are the most important parasites. Both have trans-splicing as a mechanism for the processing of its mRNA, which involves the excision of introns and union of exons form two independent transcripts, the spliceleader (SLRNA), and the acceptor pre-mRNA. The reaction of cis-and transsplicing in vitro with nuclear extract of HeLa cells has already been standardized and used as a model in several experiments. However, in trypanosomes, the only references on the reaction of trans-splicing in vitro are from Vianna et. al., (2001) and Skaked et. al., (2010), using parasitefree extracts prepared on different methods. For trypanocidal drugs analyze, trans-splicing reaction using T. cruzi permeable cells was used as a model (Barbosa et. al., 2007), but this is not the same as free-cell nuclear extract as mentioned above. Thus, this work shows trans-splicing in vitro reaction using nuclear extracts either from T. cruzi epimastigote forms and/or T. brucei procyclic forms reacting with the T. cruzi alpHa-tubulin cloned sequence as pre-mRNA acceptor. The standardization of this in vitro reaction will be able to promote advances to understanding the transspliceosomo machinery, as well as occurred in mammalian cis- and/or trans-splicing, becoming also an interesting model for evaluating trypanocidal drugs interference / Mestre