Made available in DSpace on 2016-01-26T12:51:19Z (GMT). No. of bitstreams: 1 jorgeadasdib_tese.pdf: 343099 bytes, checksum: ab3f9830cf7060129a9dcec26d66b83c (MD5) Previous issue date: 2008-06-06 / No previous study has addressed the question of prognostic determinants for patients with Chagas? cardiomyopathy at the terminal stage listed for heart transplantation. Casuistic and Method: All patients listed for heart transplantation at our institution from August, 2000 to March, 2005 were considered for the study. Patients removed from the waiting list for clinical status improvement were excluded from the investigation. Patients were followed until death, cardiac transplantation or the end of the study period. Cardiac transplant recipients were censored at the time of transplantation. No patient was lost to follow up. A Cox regression hazards model was used to establish independent predictors of all-cause mortality. Variables previously demonstrated to predict mortality in either Chagas or non-Chagas? disease heart failure were entered the univariate analysis. Separate analyses were performed for Chagas and non-Chagas? disease patients. Results: Median follow up was 32 (15,121) days in Chagas disease and 79 (14,151) days in non-Chagas? disease patients. In Chagas disease patients, the hemodynamic instability (p=0.01; hazard ratio=0,077, 95% confidence interval, 0.01 to 0.58) as well as the transpulmonary gradient (p=0.02; hazard ratio=1.15, 95% confidence interval, 1.02 to 1.30) were retained as independent predictors of all-cause mortality. Serum sodium levels (p=0.002; hazard ratio=0.81; 95% confidence interval, 0.71 to 0.93) was independent predictor of all-cause mortality for non-Chagas? disease patients. Conclusion: The hemodynamic instability and transpulmonary gradient were independent predictors of all-cause mortality for Chagas? disease patients listed for heart transplantation. A larger, prospective cohort study is needed to validate our findings. / At? agora nenhum estudo preocupou-se em estabelecer determinantes progn?sticos para pacientes com insufici?ncia card?aca cr?nica terminal secund?ria ? cardiomiopatia da doen?a de Chagas na fila de espera para transplante card?aco. Casu?stica e M?todo: Todos os pacientes alocados em fila de espera de transplante card?aco em nossa institui??o, de agosto de 2000 a mar?o de 2005, foram inicialmente considerados para o estudo. Os pacientes que foram removidos da lista de espera em virtude de melhora no estado cl?nico foram retirados do estudo. Os pacientes foram acompanhados at? a morte, transplante card?aco ou a data final estipulada para o estudo. Os pacientes receptores de transplante de cora??o foram retirados do estudo na data em que o ato operat?rio ocorreu. N?o se perdeu contato com os pacientes durante o acompanhamento cl?nico enquanto na fila de espera de transplante card?aco. O modelo de an?lise de riscos proporcionais de Cox foi utilizado para se estabelecer vari?veis de predi??o independentes de mortalidade geral. As vari?veis que eram capazes de predizer mortalidade geral em pacientes com insufici?ncia card?aca cr?nica secund?ria ? cardiomiopatia da doen?a de Chagas ou a outras cardiomiopatias foram utilizadas no modelo univariado. An?lises univariadas foram feitas nos pacientes chag?sicos e n?o chag?sicos separadamente. Resultados: A mediana do tempo de acompanhamento cl?nico foi 32 (15, 121) dias nos pacientes chag?sicos e 79 (14, 151) dias nos pacientes n?o chag?sicos. Nos pacientes chag?sicos, a instabilidade hemodin?mica (p=0,01; raz?o de risco=0,077, intervalo de confian?a de 95% entre 0,01 e 0,58) e o gradiente transpulmonar (p=0,02; raz?o de risco =1,15, intervalo de confian?a de 95% entre 1,02 e 1,30) foram as vari?veis de predi??o independentes de mortalidade geral. Os n?veis s?ricos de s?dio (p=0,002; raz?o de risco =0,81; intervalo de confian?a de 95% entre 0,71 e 0,93) foi a vari?vel de predi??o independente para os pacientes n?o chag?sicos na fila de espera para transplante card?aco. Conclus?es: A instabilidade hemodin?mica e o gradiente transpulmonar foram preditores independentes de mortalidade geral em pacientes com insufici?ncia card?aca cr?nica secund?ria ? cardiomiopatia da doen?a de Chagas na lista de espera para transplante card?aco. Um estudo prospectivo de coorte longitudinal ? necess?rio para validar os resultados obtidos nesta investiga??o.

Submitted by Cleide Dantas (cleidedantas@ufpa.br) on 2014-02-07T12:57:38Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Tese_EstudoGenotipicoTrypanosoma.pdf: 3239637 bytes, checksum: 1bcb0506e1758886b51d1bcdc717d0da (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Rosa Silva(arosa@ufpa.br) on 2014-02-12T12:18:03Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Tese_EstudoGenotipicoTrypanosoma.pdf: 3239637 bytes, checksum: 1bcb0506e1758886b51d1bcdc717d0da (MD5) / Made available in DSpace on 2014-02-12T12:18:03Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Tese_EstudoGenotipicoTrypanosoma.pdf: 3239637 bytes, checksum: 1bcb0506e1758886b51d1bcdc717d0da (MD5) Previous issue date: 2011 / A doença de Chagas aguda (DCA) é endêmica na Amazônia Brasileira sendo a via oral a principal forma de transmissão com surtos familiares ou multifamiliares. Esta via independe da colonização de triatomíneos no domicílio e a ocorrência é regular com média de 100 casos/ano e 5% de óbitos. Apresenta distribuição espaço-temporal bem definida, colocando a enfermidade como emergência de importância em saúde pública nos estados do Pará, Amapá e Amazonas. A presença de mamíferos e triatomíneos silvestres, infectados naturalmente com o c e habitando distintos ecótopos terrestres e arbóreos, mantém um intenso ciclo enzoótico em toda a Amazônia. Perfis moleculares de linhagens de T. cruzi na região estão associados a hospedeiros mamíferos (incluindo o homem), triatomíneos, ecótopos e manifestações clínicas. Foram estudados quatro surtos de DCA ocorridos nos Municípios de Barcarena, Belém e Cachoeira do Arari no Estado do Pará e em Santana, no Estado do Amapá e abordados os aspectos epidemiológicos (parasitológico e sorológico manifestações clínicas, reservatórios e triatomíneos silvestres associados aos surtos). Foi investigado também em São Luís, Estado do Maranhão, o ciclo domiciliar e silvestre do T. cruzi, porém sem a ocorrência de casos de DCA. O estudo incluiu também a genotipagem molecular de T. cruzi pelo gene de mini-exon dos isolados (homem, mamíferos e triatomíneos silvestres) associados aos diferentes ciclos de transmissão. O diagnóstico parasitológico foi confirmado em 63 pacientes com a seguinte sensibilidade nos testes aplicados: 41,3% (26/63) pela gota espessa; 58,7% (37/63) no QBC; 79,4% (50/63) no xenodiagnóstico e 61,9% (39/63) na hemocultura. A sorologia de 2648 pessoas por hemaglutinação indireta (HAI) foi de 3,05% (81/2648) e imunofluorescência indireta IFI apresentaram respectivamente resultados de e 2,49% (66/2648) para IgG e 2,37 (63/2648) para IgM. Os resultados em São Luís foram todos negativos. Foram capturados 24 mamíferos, 13 Didelphis marsupialis, 1 Marmosa cinerea, 5 Philander opossum, 3 Metachirus nudicaudatus, 1 Oryzomys macconnelli, 1 Oecomys bicolor e 433 R. rattus. A taxa de infecção para T. cruzi foi de 7,14% (29/404). Um total de 3279 triatomíneos foi capturado sendo: Triatoma rubrofasciata (n=3008), com taxa de infecção (TI) de 30.46%, (39/128), Rhodnius robustus (n=137), com TI de 76% (79/104), R. pictipes (n=94), TI de 56,9% (49/86%), E. mucronatus (n=6) e P. geniculatus (n=12) com TI de 50% e as demais espécies sem infecção R. neglectus (n=5) e P. lignarius (n=6). As palmeiras foram os principais ecótopos dos triatomíneos silvestres. O urucurizeiro (S. martiana) apresentava infestação de 47,41% (101/213) dos triatomíneos; o “inajazeiro” (Maximiliana regia) 35,21% (75/213); o “babaçueiro” (Orbgnya. speciosa) 5,16% (11/213); o “dendezeiro” (Eleas melanoccoca) 1,87% (4/213) e a “bacabeira” (Oenocarpus bacaba) 10,32% (22/213). Para a genotipagem foram obtidos 46 isolados de tripanossomas de origem humana, 31 isolamentos de mamíferos silvestres e 74 amostras de triatomíneos. Todos os isolados foram caracterizados como da linhagem TcI de T. cruzi. Todos os casos humanos no Pará foram caracterizados como positivos por exame parasitológico. Nem todos os casos de Santana, Amapá, apresentaram casos parasitológicos positivos, pela demora do diagnóstico, mesmo assim estes foram definidos como DCA. Exames como xenodiagnóstico, hemocultura e o QBC® foram mais sensíveis do que a gota espessa. A sorologia por HAI e IFI (IgG e IgM) tiveram excelente sensibilidade para detectar os casos agudos em tempos distintos de infecção. O achado de mamíferos (D. marsupilais) e triatomíneos silvestres (R. pictipes e P. geniculatus) infectados com consideráveis taxas de infecção para T. cruzi no entorno das residências dos pacientes sustentam a importância destes hospedeiros associados à transmissão da DCA. Apesar de na Amazônia circularem vários genótipos de T. cruzi nos diferentes hospedeiros, neste trabalho foi identificada somente a linhagem TCI de T. cruzi, a mais predominante na Região. Em São Luís, Maranhão, embora sem registro de casos de DCA apresenta um ciclo domiciliar associados ao rato doméstico e o triatomíneo da espécie T. rubrofasciata, e um ciclo silvestre mantido por didelfídeos. Nos dois ciclos circulam a linhagem TCI de T. cruzi. Estudos com marcadores de maior resolução com isolados de T. cruzi regionais podem ajudar a esclarecer os ciclos de transmissão, as rotas de contaminação e os hospedeiros envolvidos em casos de DCA na Amazônia. / The acute Chagas disease (ACD) is endemic in the Brazilian Amazon, and its main transmission route is oral, throughout family and multi-family outbreaks. This route is independent from the colonization of triatomine bugs in dwellings and its occurrence is regular, with mean rates of 100 cases per year and a lethality rate of 5%. The disease has a well-defined spatio-temporal distribution, which makes it a relevant public health concern in the states of Pará, Amapá and Amazonas. The existence of wild mammals and triatomine bugs naturally infected with Trypanosoma cruzi inhabiting different terrestrial and arboreal ecotopes maintains an intense enzootic cycle all over the Amazon region. Molecular profiles of T. Cruzi lineages in the region are associated with mammal reservoirs (including humans), triatomine bugs, ecotopes and clinical manifestations. We analyzed four ACD outbreaks in the municipalities of Barcarena, Belém and Cachoeira do Arari on Pará State, and Santana on Amapá State, based on epidemiologic features (laboratory, parasitological and serological diagnoses, clinical manifestations and the reservoirs and wild triatomines related to the outbreaks). We also investigated the domestic and wild transmission cycles of T. cruzi in São Luis on Maranhão State, without the occurrence of ACD cases. This study comprised molecular genotyping of T. cruzi on the mini-exon gene of the isolates associated with both transmission cycles (humans, mammals and wild triatomine vectors). Parasitological diagnosis was confirmed in 63 patients with the following sensitivity rates: 41.3% (26/63) for the thick blood film method; 58.7% (37/63) for QBC; 79.4% (50/63) for xenodiagnosis; and 61.9% (39/63) for blood culture. The serological diagnosis of 2648 individuals by indirect hemagglutination assay (IHA) was of 3.05% (81/2648), whereas the results of the indirect immunofluorescence test (IIF) were 2.49% (66/2648) for IgG and 2.37% (63/2648) for IgM. All tests carried out in São Luís were negative. A total of 24 mammals, 13 Didelphis marsupialis, 1 Marmosa cinerea, 5 Philander opossum, 3 Metachirus nudicaudatus, 1 Oryzomys macconnelli, 1 Oecomys bicolor and 433 R. rattus were captured. The infection rate for T. cruzi was of 7.14% (29/404). A total of 3279 triatomine bugs were captured: T. rubrofasciata (n=3008) and infection rate (IR) of 30.46%, (39/128) and R. robustus (n=137) IR of 76% (79/104), R. pictipes (n=94), IR of 56.9% (49/86%) E. mucronatus (n=6) and P. geniculatus (n=12) IR of 50% and the other non-infected species R. neglectus (n=5) and P. lignarius (n=6). Palm trees were the main ecotopes for the wild triatomine bugs. S. martiana was infested with 47.41% (101/213) of the triatomines; Maximiliana regia, 35,21% (75/213); Orbgnya speciosa, 5.16% (11/213); Eleas melanoccoca), 1.87% (4/213); and Oenocarpus bacaba, 10.32% (22/213). Genotyping was carried out using 46 isolates of trypanosomes obtained from humans, 31 from wild mammals and 74 from samples of triatomine bugs. All isolates were characterized as belonging to the Tcl lineage. All human cases in Pará were characterized as positive by parasitological testing. Not all the cases in Santana were tested positive because of the delay on diagnosis, but they were defined as positive. Xenodiagnosis, blood culture and QBC® were more sensitive than the thick blood film. Serological examinations by IHA and IIF (IgG and IgM) presented an optimal sensitivity to detect acute cases in different moments of infection. Mammals (D. marsupialis) and wild triatomine bugs (R. pictipes and P. geniculatus) infected with high infection rates of T. cruzi in the patients’ peridomicile area account for the importance of these reservoirs in the transmission cycle of the ACD, and are associated with its transmission. Even though several genotypes of T. cruzi circulate in the Amazon Region, only the Tcl lineage was identified in the patients, mammals and triatomines investigated in this study. In São Luís, in spite of these having no record of human cases of ACD, it has a domestic cycle associated with the black rat and the triatomine bugs of the species T. rubrofasciata, as well as a sylvatic cycle associated with didelphids. The Tcl cycles circulate in both cycles. Studies with isolates of local T. cruzi using markers with a higher definition might help clarify the transmission cycles, transmission routes and the reservoirs involved in cases of ACD in the Amazon Region.

Submitted by Edisangela Bastos (edisangela@ufpa.br) on 2014-07-02T19:06:05Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Dissertacao_FrequenciaAnticorposLeptospira.pdf: 3768981 bytes, checksum: e539a6fea43864c811069c820b41df5d (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Rosa Silva (arosa@ufpa.br) on 2014-07-14T14:21:40Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Dissertacao_FrequenciaAnticorposLeptospira.pdf: 3768981 bytes, checksum: e539a6fea43864c811069c820b41df5d (MD5) / Made available in DSpace on 2014-07-14T14:21:40Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Dissertacao_FrequenciaAnticorposLeptospira.pdf: 3768981 bytes, checksum: e539a6fea43864c811069c820b41df5d (MD5) Previous issue date: 2010 / Faz um levantamento sorológico para anticorpos contra Leptospira spp e Trypanosoma cruzi em primatas neotropicais mantidos em cativeiro. Amostras de 94 primatas neotropicais adultos, machos e fêmeas de diferentes espécies pertencentes ao criatório do Centro Nacional de Primatas (CENP)-Ananindeua-PA, coletadas para a realização da Soroaglutinação Microscópica (SAM), na qual foram utilizadas 84 amostras sorológicas, em que 35 (41,67%) apresentaram anticorpos contra leptospira e 49 (58,33%) foram soronegativas. De 11 espécies utilizadas na pesquisa, as maiores positividades estavam nas espécies de Cebus apella 69.23% (9/13), Aotus infullatus 33,33% (5/15), Callithrix penicillata 28,57% (4/14) e Saimiri sciureus 22,73 (5/22). De 35 amostras positivas, 11 (31,42%) reagiram contra o sorovar Cynopteri, oito (22,85%) foram reagentes para Andamana, seis (17,14%) contra o sorovar Hebdomadis, quatro (11,42%) para Copenhageni, três (8,57%) contra o sorovar Patoc, duas (5,71%) para o sorovar Cuíca, e o restante reagiram para pelo menos um sorovar (2,85%) sorovar Hardjo, Icterohaemorrhagiae, Javanica, Grippotyphosa e Autumnalis. Para detecção de anticorpos contra o T. cruzi, foram utilizadas 94 amostras sorológicas de primatas neotropicais. As amostras de cada animal foram submetidas aos exames sorológicos de Hemaglutinação Indireta (HAI) e Ensaio Imunoenzimático (ELISA). Das amostras avaliadas pela HAI, apenas uma fêmea da espécie Saguinus niger revelou resultado positivo, porém todas as amostras revelaram resultado negativo quando submetidas ao ELISA-recombinante. Com relação aos parâmetros hematológicos e bioquímicos não foram observadas alterações que indicassem uma possível infecção. Conclui-se que a ocorrência de anticorpos contra as leptospiras nas espécies de primatas foi alta, mesmo não apresentando sintomas, e todos os parâmetros hematológicos e bioquímicos estarem normais indicando que apesar destes animais encontrarem-se em cativeiro, possivelmente tiveram contato em vida livre com a bactéria e a infecção pode estar sendo mantida entre eles e casos de leptospirose e doença de Chagas em primatas neotropicais são raros, porém deve-se lembrar que os mesmos atuam como reservatórios de Leptospira spp e Tripanosma cruzi no ambiente silvestre. / Make a serological survey for antibodies against Leptospira spp and Trypanosome cruzi in Neotropical primates kept in captivity. 94 samples of neotropical primates adults, males and females of different species kept in captivity in the Primates National Center - Ananindeua- PA, collected for the accomplishment of the Microscopic Agglutination Test (MAT), in the which was used 84 serum samples, of which 35 (41.67%) presented antibodies against leptospira and 49 (58.33%) were seronegative. From 11 species used in research, the highest positivity was in the species of Cebus apella (69.23%), Aotus infullatus (33.33%), Callithrix penicillata (28.57%) and Saimiri sciureus (22.73%). From 35 positive samples, 11 (31.42%) reacted against serovar Cynopteri, eight (22.85%) were reagents for Andaman, six (17.14%) against serovar Hebdomadis, four (11.42%) for Copenhagen, three (8.57%) against serovar Patoc, two (5.71%) to serovar Cuíca, and the remainder responded to at least one serovar (2.85%) serovar Hardjo, Icterohaemorrhagiae, Javanica, Grippotyphosa and Autumnalis. To detect the anticorpos against T. cruzi, were used 94 samples of neotropical primates. The samples of each animal were submitted to the Indirect Hemagglutination (IHA) and Enzyme- Linked Immunosorbent Assay (ELISA). Of samples avaluated by IHA, only one female from the specie Saguinus niger showed result positive, but, all samples showed result negative when avaluated by ELISA. In relation to hematological and biochemical parametes, were not observed alterations that indicated a possible infection. It is concluded that the occurrence of antibodies against leptospires in species of primates was relatively high, even showing symptoms, and all hematological and biochemical parameters were normal indicating that although these animals find themselves in captivity, possibly had contact in the wild life with the bacterium, and the infection may be maintained between them and cases of leptospirosis e Chaga’s disease in neotropical primates are rares, but we should remember that they act with reservoir of Leptospira spp and Tripanosma cruzi at wild environment.

<p><i>Trypanosoma cruzi</i>, the causative agent of Chagas´ disease, is an evolutionarily ancient species with distinct biological and immunological characteristics. A fundamental understanding of the basic biology of the parasite is necessary in order to develop reliable therapeutic and prophylactic agents against <i>T. cruzi</i>. We have, as a part of the <i>T. cruzi</i> genome project launched by the WHO, generated ESTs corresponding to about one third of the functional genes in the parasite. Only about 1/3 of the unique ESTs could be assigned a function upon sequence comparison to all publicly available data. Comparative analysis of the ESTs to functional genes in <i>S.</i> <i>cerevisiae</i> and <i>C. elegans</i> as well as to sequence data from all other kinetoplastids provided primary insights into the evolutionary divergence of <i>T. cruzi.</i> </p><p>A novel dispersed gene family (<i>DGC3</i>) was identified and shown to be present specifically on chromosome 3 and its homologue. Sequence analysis of ten isolated <i>DGC3</i> genes revealed a high sequence similarity of almost 98% among copies. The <i>DGC3</i> genes were transcribed, <i>trans</i>-spliced with the spliced leader and polyadenylated, but did not seem to have any protein-coding property. These data preliminary suggest that it encodes a novel family of functional RNA. </p><p>In the <i>T. cruzi</i> CL Brener strain, the two alleles of a single copy gene encoding the trypanothione synthetase (TcTRS) enzyme appeared to be highly polymorphic. The divergence of the deduced protein sequence was 4%, almost ten-fold higher than another protein, trypanothione reductase, involved in the same pathway. The observed allelic divergence might influence the TcTRS activity thereby having implications for drug design. Moreover, the <i>TcTRS</i> gene was found to be flanked by a number of genes involved in diverse functions and located to a pair of homologous chromosomes with a size difference of about 2 Mbp. </p><p>A gene potentially encoding the polypyrimidine-binding protein (TcPTB) was identified and characterised regarding its organisation and function. The deduced amino acid sequence was shown to comprise four RRM domains generally present in other PTBs. Interestingly, the <i>TcPTB</i> gene appeared to be expressed in a stage-specific manner implicating different functions during parasite development.</p>

Trypanosoma cruzi, the causative agent of Chagas´ disease, is an evolutionarily ancient species with distinct biological and immunological characteristics. A fundamental understanding of the basic biology of the parasite is necessary in order to develop reliable therapeutic and prophylactic agents against T. cruzi. We have, as a part of the T. cruzi genome project launched by the WHO, generated ESTs corresponding to about one third of the functional genes in the parasite. Only about 1/3 of the unique ESTs could be assigned a function upon sequence comparison to all publicly available data. Comparative analysis of the ESTs to functional genes in S. cerevisiae and C. elegans as well as to sequence data from all other kinetoplastids provided primary insights into the evolutionary divergence of T. cruzi. A novel dispersed gene family (DGC3) was identified and shown to be present specifically on chromosome 3 and its homologue. Sequence analysis of ten isolated DGC3 genes revealed a high sequence similarity of almost 98% among copies. The DGC3 genes were transcribed, trans-spliced with the spliced leader and polyadenylated, but did not seem to have any protein-coding property. These data preliminary suggest that it encodes a novel family of functional RNA. In the T. cruzi CL Brener strain, the two alleles of a single copy gene encoding the trypanothione synthetase (TcTRS) enzyme appeared to be highly polymorphic. The divergence of the deduced protein sequence was 4%, almost ten-fold higher than another protein, trypanothione reductase, involved in the same pathway. The observed allelic divergence might influence the TcTRS activity thereby having implications for drug design. Moreover, the TcTRS gene was found to be flanked by a number of genes involved in diverse functions and located to a pair of homologous chromosomes with a size difference of about 2 Mbp. A gene potentially encoding the polypyrimidine-binding protein (TcPTB) was identified and characterised regarding its organisation and function. The deduced amino acid sequence was shown to comprise four RRM domains generally present in other PTBs. Interestingly, the TcPTB gene appeared to be expressed in a stage-specific manner implicating different functions during parasite development.

Les perturbations anthropiques en Amazonie liées au déboisement de la forêt tropicale conduisent à une mosaïque de paysages constituée de végétations secondaires (forêts secondaires, palmeraies, jachères) et de pâturages. Ces modifications favorisent la prolifération de grands palmiers héliophiles invasifs de la famille Attalea spp., palmiers qui constituent l'écotope principal des espèces de Rhodnius, punaises hématophages vectrices de Trypanosoma cruzi, agent étiologique de la Maladie de Chagas en Amérique Latine. Cette étude a porté sur différentes unités de paysage de trois communautés rurales du bas Tapajós (Amazonie brésilienne) ayant une époque d'installation différente sur le territoire (25-75 ans). Six unités de paysage ont été définies sur le terrain et appliquée via une classification supervisée à une image SPOT 5, afin d'obtenir une cartographie du risque environnemental associé à la présence de palmiers dans la région. Sur les cent trente trois palmiers disséqués appartenant aux trois espèces Attalea maripa, A. phalerata et A.speciosa, 73 (54.88%) étaient infestés par R. robustus (742 insectes récoltés). Des diminutions significatives de densité de triatomes ont été observées chez A. maripa, dans la communauté la plus récemment établie (Araipá) et dans les unités de paysage les plus anthropisées. L'infection des insectes par T. cruzi et T. rangeli a été examinée à l'aide de méthodes moléculaires (mini exon SL_IR and sno-RNA-C11). Respectivement 123 (16.57%) et 69 (9.3%) insectes dans 31 (23.3%) et 17 (13.82%) palmiers ont été identifiés positifs à T cruzi et à T.rangeli. Aucune infection n'a été trouvée dans les insectes collectés à Araipá et aucune différence significative n'a été mise en évidence entre les différentes unités de paysage. Les souches de Trypanosoma cruzi identifiées à l'aide de 4 marqueurs moléculaires (mini exon SL-IR, GPI, HSP60 et D7-24α-rRNA) appartiennent à la lignée TcId et 10 (8.13%) individus présentent une infection mixte TcI-TcII. Vingt espèces d'hôtes réparties en trois classes (mammifères, oiseaux, sauropsidés) ont été identifiées comme sources alimentaires à partir du repas sanguin contenu dans le tube digestif des insectes, à l'aide d'amorces cytochrome b, spécifiques de vertébrés. Quatre-vingts et un pourcent des repas détectés ont été effectués sur des mammifères, hôtes potentiels de T.cruzi dont Tamandua tetradactyla, source alimentaire principale. Cet hôte a été clairement identifié comme réservoir de T.rangeli ainsi que suggéré pour T.cruzi. L'analyse phylogénique réalisée à l'aide de séquences de cytochrome b démontre que les individus de Rhodnius identifiés dans la région du Tapajos appartiennent au clade II, ce qui correspond à une extension de l'aire précédemment décrite pour ce clade. L'utilisation du marqueur mitochondrial cytochrome b a permis de mettre en évidence une structuration phylogénétique (haplogroupes) non retrouvée à l'aide des marqueurs microsatellites. Ce résultat montre que l'histoire des gènes (génome mitochondrial) ne retrace pas l'histoire des individus (microsatellites, 10 locus). L'analyse de génétique des populations conduite à l'aide des deux types de marqueurs n'a pas révélé de structuration génétique au sein de la zone d'étude entre les communautés ou les unités de paysage. Cette étude met en évidence des flux géniques importants peu sensibles à la fragmentation du milieu, la dynamique d'invasion des palmiers assurant aux insectes une connectivité fonctionnelle entre les différentes unités de paysages et les communautés. La prédiction du risque environnemental lié à la situation du Tapajós va vers une augmentation du risque de transmission de la Maladie de Chagas dans cette région, du fait de l'abondance des palmiers, de leur forte connectivité, et de la présence de vecteurs et d'hôtes infectés circulant entre les différentes communautés et unités du paysage

Submitted by Anderson Silva (avargas@icict.fiocruz.br) on 2012-06-04T13:19:24Z No. of bitstreams: 1 luciana_g_portugal_ioc_bp_0019_2009.pdf: 1548127 bytes, checksum: 8942d79125d2358e00f75100870c51fe (MD5) / Made available in DSpace on 2012-06-04T13:19:24Z (GMT). No. of bitstreams: 1 luciana_g_portugal_ioc_bp_0019_2009.pdf: 1548127 bytes, checksum: 8942d79125d2358e00f75100870c51fe (MD5) Previous issue date: 2009 / Instituto Oswaldo Cruz, CNPq, PAPES III / Fundação Oswaldo Cruz. Escola Nacional de Saúde Pública. Rio de janeiro, RJ, Brasil / Este trabalho determinou o perfil de infecção natural, ao longo do tempo, do Trypanosoma cruzi nos marsupiais Didelphis aurita e Philander frenatus e nos roedores Nectomys squamipes, Akodon cursor e Oligoryzomys nigripes no Município de Sumidouro, RJ. O diagnóstico parasitológico, obtido através de hemocultivos, e as prevalências sorológicas, obtidas através de Imunoflorescência Indireta, foram analisadas e correlacionadas com os dados populacionais, biológicos e de habitat dos hospedeiros, e com as variáveis ambientais e de composição de fauna da área. As dinâmicas populacionais dos pequenos mamíferos seguiram os padrões observados para as espécies neotropicais, estando relacionadas às suas estratégias reprodutivas, sendo estacional para os marsupiais e oportunista para os roedores. Apesar da degradação ambiental, os marsupiais e roedores apresentaram preferências por microhabitats específicos dentro da área de captura. Nenhuma amostra proveniente dos roedores foi positiva no hemocultivo, nem na análise sorológica. Na análise parasitológica dos marsupiais, 5% dos hemocultivos foram positivos, enquanto que na sorologia, a prevalência variou de 20% a 60% para D. aurita e 0% e 67,5% para P. frenatus. Através das taxas de infecção, não foram encontradas relações entre o parasitismo e a riqueza ou diversidade de mamíferos da área de estudo. Não houve diferença entre o habitat de animais infectados e não infectados. Não houve diferença entre machos e fêmeas infectados. O parasitismo por T. cruzi não afetou a biologia dos seus hospedeiros nem suas dinâmicas populacionais neste cenário de transmissão do parasito. Assim, foi verificada a existência de um ciclo de transmissão de T. cruzi na área, com ausência de participação dos roedores. Os marsupiais atuaram como hospedeiros mantenedores nas duas áreas de estudo, devido às evidências sorológicas e as baixas parasitemias. É possível que outras espécies de mamíferos estejam atuando na área como hospedeiros mantenedores ou amplificadores da infecção, como o furão Galictis cf. Cuja, que foi a primeira espécies capturada com infecção natural por T. cruzi na área. Concluímos que o ciclo de transmissão do T. cruzi nesta região apresentou um perfil de parasitemia sub-patente nas espécies marsupiais, caracterizada apenas pelo diagnóstico sorológico, e uma continuidade de transmissão ao longo de todo o ano nas duas áreas, observada através das conversões sorológicas. / The aim of this study was to understand the natural infection dynamic by Trypanosoma cruzi in the marsupials Didelphis aurita and Philander frenatus and the rodents Nectomys squamipes, Akodon cursor and Oligorysomys nigripes in order to along time, in Sumidouro Municipality, Rio de Janeiro State. The parasitological diagnose obtained from Haemoculture and the Serological prevalence obtained from Immunofluorescense assay were analyzed and correlated with the population dynamics of the hosts, their habitat and biological factors, and also with environment variables and species composition of the study area. The population dynamics of the small mammals followed the patterns observed for Neotropical species, showing a relation with the reproductive strategies, which was seasonal for the marsupials and opportunist for the rodents. Despite of the environment degradation, the marsupials and rodents presented preference for specifics microhabitats in the study area. No rodent was positive neither in the haemoculture nor in serology for T. cruzi infection. In the parasitological analysis of the marsupials, 5% of the haemocultures were positive while the prevalence using serology ranged from 20% to 60% for D. aurita and from 0% to 67,5% for P. frenatus. No relation was found between parasitism and richness and diversity of mammals’ species. Marsupials’ habitats were more related to triatomines’ habitat than the rodents’ habitat. No difference was observed between males and females infected animals. The parasitism of T. cruzi did not affect the biology of the hosts, neither their population dynamics in this scenario of transmission. Thus, a transmission cycle of T. cruzi was confirmed in the study area, and the rodents’ species were not participating in the transmission. The marsupials D.aurita and P. frenatus acted in this scenario as maintaining hosts in both study areas, due to the serological evidences and low parasitemia. It is possible that other mammal species are participating in this cycle as maintaining or amplifier hosts, for example the ferret Galictis cf. cuja. In conclusion, the profile of the transmission cycle of T. cruzi in this area was a sub-patent parasitemia in the marsupials, evidenced only by serologic results, and there is continuity in the parasite transmission throughout the year in the two study areas, observed in the serologic conversions.

Submitted by Anderson Silva (avargas@icict.fiocruz.br) on 2012-10-08T14:10:36Z No. of bitstreams: 1 vitor_r_martins_ioc_bc_0060_2010.pdf: 14544688 bytes, checksum: 76307bc128cffc7f8681bae1aca5ee91 (MD5) / Made available in DSpace on 2012-10-08T14:10:36Z (GMT). No. of bitstreams: 1 vitor_r_martins_ioc_bc_0060_2010.pdf: 14544688 bytes, checksum: 76307bc128cffc7f8681bae1aca5ee91 (MD5) Previous issue date: 2010-01 / Earthwatch Institute, USAID, Instituto Conservação Internacional do Brasil, The Center for Infectious Disease Dynamics (CIDD)- Penn State University, CNPq/Fullbright. / Ecology and Environment do Brasil. Núcleo de Fauna. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / A expansão das fronteiras agrícolas exigida pelo crescimento populacional humano tem causado impactos ambientais com consequências que se estendem da escala local à global. O Pantanal brasileiro é uma região de grande diversidade biológica e que sofre alterações ambientais, induzidas por humanos através da pecuária extensiva, e alterações ambientais sazonais, causadas pelo regime de inundação. Nesta região, o Mal das Cadeiras em cavalos, causado por Trypanosoma evansi, representa um fator de impacto à pecuária extensiva no Pantanal, onde cavalos são utilizados no manejo do gado e como principal meio de transporte. Embora não haja relatos da Doença de Chagas no Pantanal, Trypanosoma cruzi é encontrado circulando em alta prevalência em animais silvestres em vários biomas. Neste contexto, o objetivo desta tese foi avaliar o papel dos pequenos roedores e marsupiais no ciclo de transmissão de T. cruzi e T. evansi e como alterações ambientais causadas por humanos podem influenciar na micro e macrofauna do Pantanal e na interação entre as mesmas. Para isso comparamos a diversidade de roedores e marsupiais e de helmintos de Thrichomys pachyurus entre uma área de reserva e uma área de pecuária extensiva no Pantanal, o perfil de infecção por T. cruzi e T. evansi e analisamos ainda o impacto da infecção natural por dois tripanosomatídeos em três espécies de roedores silvestres. A criação de gado na área estudada não estava associada à perda de riqueza de espécies nem mudança na composição de espécies, mas influenciou na abundância relativa das espécies e padrão de ocupação dos habitats. O roedor O. mamorae foi a espécie que apresentou prevalência mais alta de ambos tripanosomas, provavelmente por ser encontrado nos mesmos ambientes utilizados tanto por Tabanídeos como por Triatomíneos, vetores de T. evansi e T. cruzi, respectivamente. Apesar da baixa prevalência de animais com parasitemias expressivas, os marsupiais apresentaram maior potencial de amplificação de T. cruzi. Os roedores examinados apresentaram baixo impacto das infecções por T. evansi e T. cruzi nos parâmetros hematológicos estudados. No roedor T. pachyurus as infecções por T. evansi e/ou helmintos, não apresentaram impacto relevante à saúde do animal, a julgar pelos parâmetros hematológicos dentro dos limites normais. Este roedor apresentou alta diversidade de helmintos, provavelmente por ocupar diversos tipos de habitat, sendo considerado habitat-generalista nas áreas estudadas. A presença de um nematódeo de cervídeos e porcos em T. pachyurus, apenas na área de gado, sugere que a criação de gado concentra diferentes espécies em uma mesma mancha e/ou mesmo tipo de habitat, ocasionando o compartilhamento de ambiente e a transmissão/aquisição de parasitos entre espécies distintas. Concluímos que nas áreas estudadas os pequenos roedores e marsupiais apresentam papel secundário na manutenção do ciclo de transmissão de T. cruzi e T. evansi em comparação com outras espécies de mamíferos no Pantanal. / The demand for agriculture expansion required for the growing human population has caused from local to global scale environmental impacts. The Brazilian Pantanal is a region of great biological diversity, which suffers anthropogenic environmental alterations, caused by cattle ranching, and natural environmental alterations, caused by seasonal flooding. In this region, the horse illness called “Mal das Cadeiras”, caused by Trypanosoma evansi, can cause major impacts to the cattle ranching activities, where horses are frequently used for cattle management activities and transportation. Although in the Pantanal, human Chagas Disease has not been reported, Trypanosoma cruzi has been found in circulating in high prevalence in wild animals in a variety of Biomes. In this context, the objective of this thesis was to evaluate the role of small rodents and marsupials in the transmission cycle of T. cruzi and T. evansi, and how anthropogenic environmental alterations may influence the micro and macro fauna in the Pantanal, and also how they interact with each other. For that the diversity of small rodents and marsupials and the helminthes of Thrichomys pachyurus were compared between a preserved area and a cattle ranching area, as well as the infection profile of T. cruzi and T. evansi and analyzed the impact of the natural infection by T. cruzi and T. evansi in three species of wild rodents. Cattle ranching was not associated to species richness loss nor to a change in species composition, but has influenced on the relative abundance of the small rodent and marsupial species and their habitat occupation pattern. The rodent O. mamorae was the species with the highest prevalence of both trypanosomes, probably for being present in the same habitats as Tabanid flies and Triatomine bugs, vectors of T. evansi and T. cruzi, respectively. Despite of the low prevalence of animals with expressive parasitemias, marsupials presented a higher potential for amplifying T. cruzi. The examined rodents presented low impact to the infections by T. cruzi and T. evansi in the studied blood parameters. In the rodent, T. pachyurus the infections by T. evansi and/or helminthes did not present a relevant impact to the animal‟s health, as their hematological parameters were within the normal limits. This rodent presented high diversity of helminths, probably for occupying several habitat types, being considered a habitat-generalist in the studied areas. The presence of a nematode from cervids and pigs in T. pachyurus only in the cattle area, suggests that cattle ranching forces different species to share a same habitat type and/or patch, facilitating the transmission/acquisition of parasites between distinct species. We concluded that in the studied áreas the small rodents and marsupials presented a secondary role in the maintenance of the transmission cycle of T. cruzi and T. evansi in comparison to other mammal species in the Pantanal.

Made available in DSpace on 2016-06-17T14:14:16Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license.txt: 1914 bytes, checksum: 7d48279ffeed55da8dfe2f8e81f3b81f (MD5) Tese_Fred_Luciano_Neves_Santos.pdf: 7174621 bytes, checksum: af4e9021f0c8974198df6ec268ccfaf9 (MD5) Previous issue date: 2016 / Made available in DSpace on 2016-07-05T22:07:11Z (GMT). No. of bitstreams: 3 Tese_Fred_Luciano_Neves_Santos.pdf.txt: 436440 bytes, checksum: 1d22503c32c1f332f780c4197a546123 (MD5) Tese_Fred_Luciano_Neves_Santos.pdf: 7174621 bytes, checksum: af4e9021f0c8974198df6ec268ccfaf9 (MD5) license.txt: 1914 bytes, checksum: 7d48279ffeed55da8dfe2f8e81f3b81f (MD5) Previous issue date: 2016 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Aggeu Magalhães. Recife, PE, Brasil / O diagnóstico da doença de Chagas crônica (DCC) baseia-se em metodologias que usam em sua fase sólida antígenos brutos, semipurificados ou recombinantes, podendo resultar em baixa sensibilidade ou reação cruzada. Uma forma para resolver este problema é o uso de quimeras formadas por epítopos conservados e repetitivos de diferentes estruturas parasitárias em uma única molécula. O nosso objetivo foi caracterizar e avaliar o uso de quimeras em imunoensaios para o diagnóstico da DCC. As quimeras, IBMP-8.1, IBMP-8.2, IBMP-8.3 e IBMP-8.4 foram purificadas por meio de cromatografia e sua pureza avaliada por SDSPAGE. Ensaios de dicroísmo circular (DC) e espalhamento dinâmico da luz (EDL) foram usados para avaliação do raio hidrodinâmico das quimeras, avaliação de sua estabilidade e escolha do sistema tampão que oferecesse o menor estado de agregação molecular. Ensaios sorológicos para detecção de anticorpos anti-Trypanosoma cruzi através de ELISA foram realizados utilizando um painel de 857 amostras positivas para a DCC e 689 negativas. Para avaliação de reação cruzada foram usadas 1079 amostras de diversas doenças endêmicas no país. A purificação foi eficiente uma vez que o SDS-PAGE indicou ausência de degradação das quimeras. As análises de DC e EDL mostraram que as quatro quimeras apresentaram menor tendência de agregação em tampão carbonato pH 9,6, sendo, assim, este o sistema para a sensibilização das placas. Os ensaios sorológicos revelaram valores elevados de sensibilidade (Sen) e especificidade (Esp) para a molécula IBMP-8.4 (Sen-99,3%; Esp- 100%). O desempenho para as demais moléculas foi satisfatório, ficando os valores de Sen e Esp acima de 94%. As moléculas IBMP-8.1, IBMP-8.2, IBMP-8.3 e IBMP-8.4 apresentaram respectivamente 0,46%, 0,85%, 0,46% e 0,37% de reação cruzada. Os resultados apontam que as quimeras atingiram os critérios de proficiência do Ministério da Saúde podendo, dessa forma, ser utilizados em ensaios diagnósticos para a DCC. Chronic Chagas disease (CCD) diagnosis is based on serological methods employing crude, semipurified or recombinant antigens, which eventually may result in low sensitivity or crossreactivity. An alternative method for solving this problem is the use of chimeric molecules composed by conserved and repetitive epitopes of distinct parasite structures. Our objective was to evaluate the use of chimeras in immunoassays for the diagnosis of CCD. The chimeras IBMP-8.1, IBMP-8.2, IBMP-8.3 and IBMP-8.4 were purified by chromatography and their purity assessed by SDS-PAGE. Circular dichroism (CD) and dynamic light scattering (DLS) were used to assess the hydrodynamic radius of the chimeras, to evaluate their stability and to select the buffering system that offers the lowest state of molecular aggregation. Serological tests for detection of anti-Trypanosoma cruzi were performed by ELISA using a panel of 857 positive and 689 negative serum samples for CCD. Cross-reactivity was assessed by using 1079 serum samples from patients with unrelated diseases. The purification was efficient since SDS-PAGE indicated the absence of degradation of chimeric proteins. Analyses of CD and DLS showed that the four chimeras had low aggregation tendency in carbonate buffer, pH 9.6. Serological testing showed high values of sensitivity (Sen) and specificity (Spe) for IBMP-8.4 (Sen-99.3%; Spe-100%). The performance of other molecules was satisfactory, being the Sen and Spe values above 94%. Cross-reaction was observed in 0.46%, 0.85%, 0.46% and 0.37% of the samples tested against IBMP-8.1, IBMP-8.2, IBMP-8.3 and IBMP- 8.4, respectively. The results indicate that the chimeras reached the Brazilian Ministry of Health proficiency criteria and may thus be used in diagnostic assays for CCD.

Fundação de Amparo a Pesquisa do Estado de Minas Gerais / Chagas disease, caused by the protozoan Trypanosoma cruzi, is ranked as the most serious parasitic disease in Latin America and has become a worldwide problem. A bulk of studies substantiates that Th1-associated cytokines are essential elements in early resistance against the parasite and are associated with the development of the chronic cardiac form. Although cytokines have a key role in the immune response against T. cruzi, little is known about IL-3, IL-7 and IL-9 in this context. Then the aim of this study was to analyze the role of IL-3, IL-7 and IL-9 in the acute phase of T. cruzi experimental infection. For this purpose, parameters indicative of improvement in clinical status of the animals both infected and treated as just treated were studied, such as: morbidity, mortality and histopathology. The amount of cardiac mast cells and the serum cytokines profile were also evaluated. Our data revealed that the treatment with IL-3, IL-7 or IL-9 did not alter the clinical parameters analyzed or the amount of cardiac mast cells in mice infected with T. cruzi. However the treatment with IL-3 decreased the cardiac T. cruzi-induced inflammation and the treatment with IL-7 increased serum levels of IL-5 in infected animals. In addition, the treatment with IL-9 increased the serum levels of Th1 cytokine profile (IL-2, IFN-y and TNF-α) and decreased cardiac fibrosis in infected animals, suggesting a possible protective role of this cytokine in this context. Taken together, our results underline the importance of these cytokines in modulation of T. cruzi infection. Since studies involving IL-3, IL-7 and IL-9 activity during Chagas disease are critical in understanding the parasite control process and the protective and/or harmful action of these cytokines in the host. In addition, understanding of the immunological mechanisms mediated by these cytokines that are involved in disease development may contribute to the establishment of new therapeutic interventions to prevent Chagas disease and treat their symptomatic forms. / A Doença de Chagas, causada pelo protozoário Trypanosoma cruzi, é classificada como a doença parasitária mais grave da América Latina e tornou-se um problema mundial. A maior parte dos estudos confirma que as citocinas de perfil Th1 são elementos essenciais na resistência precoce contra o parasita e estão associadas ao desenvolvimento da forma cardíaca crônica. Embora as citocinas tenham um papel chave na resposta imune contra T. cruzi, pouco se sabe a respeito da função de IL-3, IL-7 e IL-9 neste contexto. Assim, o objetivo deste estudo foi analisar o papel destas citocinas na fase aguda da infecção experimental com T. cruzi. Para isto, parâmetros indicativos de melhora clínica dos animais tanto infectados e tratados como apenas tratados foram estudados, tais como: morbidade, mortalidade e histopatologia. A quantidade de mastócitos cardíacos e o perfil de citocinas séricas também foram avaliados. Os dados revelaram que o tratamento com IL-3, IL-7 ou IL-9 não alterou os parâmetros clínicos analisados nem a quantidade de mastócitos cardíacos nos camundongos infectados com T. cruzi. No entanto, o tratamento com IL-3 diminuiu a inflamação cardíaca T. cruzi-induzida e o tratamento com IL-7 aumentou os níveis séricos de IL-5 nos animais infectados. Além disso, o tratamento com IL-9 aumentou os níveis séricos das citocinas de perfil Th1 (IL-2, IFN-y e TNF-α) e diminuiu a fibrose cardíaca nos animais infectados, sugerindo um possível papel protetor desta citocina neste contexto. Em suma, os nossos resultados demonstram a importância destas citocinas na modulação da infecção por T. cruzi. Já que estudos envolvendo a atividade de IL-3, IL-7 e IL-9 durante a doença de Chagas são fundamentais na compreensão sobre o processo de controle parasitário e da ação protetora e/ou prejudicial dessas citocinas no hospedeiro. Além disso, o entendimento dos mecanismos imunológicos mediados por estas citocinas que estão envolvidos no desenvolvimento da doença pode contribuir para o estabelecimento de novas intervenções terapêuticas a fim de prevenir a doença de Chagas e tratar suas formas sintomáticas / Doutor em Imunologia e Parasitologia Aplicadas