This thesis aimed to identify the trypanocidal mode of action of non-natural chamuvarinin analogs, and to assess the previously uncharacterized secondary alternative oxidase (AOX2) as a possible drug target of the trypanosomatids. The drugs used to treat infections with Trypanosoma brucei, Trypanosoma cruzi and Leishmania spp. are highly toxic and are increasingly becoming less effective as the parasites develop resistance, therefore new drugs against the diseases are desperately needed. Non-natural analogs of chamuvarinin were tested for trypanocidal activity to determine the structure activity relationships of the compounds against insect-form T. cruzi and Leishmania spp. This identified several potent and selective analogs, which retained good activity against the medically relevant intracellular forms of the parasites. Photoaffinity labeling was utilized to identify the mode of action and protein target(s) of the chamuvarinin analogs. The analogs were shown to deplete ATP levels and to induce mitochondrial dysmorphia and mitochondrial oxidative stress. Photoaffinity labeling confirmed the mitochondrial localization of the protein target(s) of these compounds, however the exact protein target(s) were unable to be identified by protein pull-down and mass spectrometry. The previously uncharacterized secondary alternative oxidases (AOX2) are conserved throughout the human-infective trypanosomatids and are absent from mammalian cells, thus making an attractive drug target if the protein is essential. The AOX2 of T. brucei, T. cruzi and L. major were expressed in Escherichia coli to characterize the enzymatic activity of the proteins. T. brucei AOX2 was successfully purified and shown to be an ubiquinol oxidase, which contains bound iron (III). The role of AOX2 within the trypanosomatids was determined by biochemical phenotyping and genetic manipulation of T. brucei, T. cruzi and L. major, which indicated that AOX2 is an essential mitochondrial oxidase in the three trypanosomatids, with a putative role in energy production, and therefore is an attractive multi-trypanosomatid drug target.

No description available.

Recent studies proposed that mammalian cell lines with slower growth rates were infected more efficiently by Trypanosoma cruzi, and that cell-to-cell transmission could be occurring during infection. This open the question of whether host cell-growth rate is a cellular characteristic influencing Trypanosoma cruzi invasion and infection. To prove if this was the case, the cell growth-rate was inhibited by starvation, reducing the foetal bovine serum concentration in the medium, and using a cell-cycle arresting drug, Baicalein. Then the percentage of infected cells of the control and the growth-modified group was measured via epifluorescence microscopy. The results did not show a strong evidence of negative correlation between the cell-growth rate and infection efficacy. To assess if cell-to-cell infection was occurring, the percentage of infected cells in contact with other infected cells was measured. This value was compared to the stochastic probability of this event happening. The results showed that the random probability of an infected cell being next to another infected cell was much lower than the percentage obtained from the empirical data. This suggests that cell-clusters found in infections are not a random event and that the dominant mechanism of infection is a short-range one: either by cell-to-cell infection, or by the proliferation of already infected cells. To support cell-to-cell transmission, parasites potentially passing from one cell to another were inspected through confocal microscopy and actin-rich regions were found at the parasite location. To determine whether actin played a role in this event, cells with a mutation in the actin gene were infected and compared to the mock group. The results showed that the percentage of infected cells in contact with other infected cells was lower for the mutant cells, suggesting that actin could play a key role in this event.

Lors d'une infection, la principale voie d'activation du macrophage passe par l'IFNY . Par conséquent, la connaissance des événements qui surviennent préalablement à l'activation du macrophage revêt un intérêt certain. Cette thèse s'est donc intéressée à l'effet de l'infection par le parasite protozoaire intracellulaire Trypanosoma cruzi sur deux fonctions IFN-Y -dépendantes du macrophage murin: la production d'oxyde nitrique et la synthèse de la machinerie de présentation antigénique restreinte au CMH de classe I. Les résultats obtenus démontrent que l'infection préalable du parasite pré-active le macrophage à produire de l'oxyde nitrique en réponse à l'IFN-y à des niveaux nettement supérieurs de ceux atteints par le macrophage uniquement stimulé à l'IFN-Y • Cette pré-activation résulte de l'engagement par le parasite des voies NF-KB, Erkl/Erk2 et SAPK/JNK. L'activation subséquente de la voie Jak/STAT par l'IFN-y induit la translocation au noyau de STATla et à la transcription d'un ARNm stable d'iNOS. Une dégradation ralentie de l'ARNm d'iNOS mène à des niveaux élevés de protéine iNOS et d'oxyde nitrique. La stabilité de l'ARNm d'iNOS résulte de l'activation des voies Erkl/Erk2 et SAPK/JNK par le parasite, alors que le facteur de transcription NF-KB favorise probablement une expression maximale d'iNOS. Les résultats présentés dans cette thèse montrent également que l'infection préalable du macrophage par T. cruzi réduit l'expression IFN-Y -dépendante du CMH de classe I et des immuno-sous-unités du protéasome, que cette diminution est due à l'activation de c-Jun suite à l'inhibition des phosphatases murines qui, en retour, est une conséquence des radicaux libres d'oxygène générés par le macrophage en réponse au contact de T. cruzi. Bien que ces résultats soient intéressant en soi, l'ensemble des travaux présentés dans cette thèse vont quelque peu au-delà des objectifs initiaux, en faisant ressortir le rôle essentiel que semble jouer la voie de signalisation SAPK/JNK dans la modulation des fonctions IFN-y -dépendantes du macrophage.

A Doença de Chagas é um dos maiores problemas de saúde pública na América do Sul causando um elevado prejuízo à população. A despeito dos inúmeros esforços para o seu controle, a doença não tem cura e apresenta problemas científicos ainda não esclarecidos. Considerando-se que vários pesquisadores têm usado a radiação ionizante para modificar protozoários ou propriedades imunológicas de biomoléculas, neste trabalho foram estudados aspectos da resposta imunológica induzida em camundongos, resistentes e suscetíveis ao T. cruzi, utilizando formas irradiadas deste parasita. Doses baixas de radiação preservaram a capacidade reprodutiva e de invasão celular. Animais resistentes e suscetíveis, imunizados com os parasitas tratados por radiação, produziram anticorpos específicos. Após o desafio, os animais apresentaram baixa parasitemia, com exceção dos grupos imunizados com parasitas que receberam apenas altas doses de radiação. A seleção de formas tripomastigotas foi obtida irradiando-se os parasitas com baixas doses, o que promoveu aprimoramento da qualidade da resposta imune, a exemplo do que se observa quando da utilização de complemento. Estes dados evidenciam a importância da seleção das formas tripomastigotas para a imunização contra o T. cruzi e apontam a radiação ionizante como alternativa para este fim, uma vez que quando a seleção é feita utilizando-se complemento, depara-se com a dificuldade de sua remoção, colocando em risco o processo de imunização por introduzir substancias estranhas ao organismo. / Chagas\'s disease is one of the major public health problems in South America, promoting high prejudice to the local population. Despite the massive efforts to control it, this disease has no cure and presents puzzling unsolved questions. Considering that many researchers have used ionizing radiation to modify protozoans or biomolecules, we investigated the immunological response aspects of susceptible and resistant mice using irradiated parasites. Low radiation doses preserved the reproductive and invasive capacities of the parasite. Both susceptible and resistant animals, after immunization with irradiated parasites produced specific antibodies. After a challenge, the animals presented low parasitaemia, excepting those immunized with the antigen irradiated with higher doses. Using low radiation doses, we were able to selectively isolate trypomastigotes, leading to an improvement in the quality of the immune response, as previously reported when performing complement system assays. These data highlight the importance of selecting trypomastigote forms for immunization against T. cruz; and point towards ionizing radiation as an alternative to achieve this selection, since when this procedure is performed using complement, the subsequent steps are impaired by the difficulties to remove this component from the system.

Este trabalho descreve um novo modelo murino para o estudo da infecção crônica pelo T. cruzi usando o clone Sylvio X10/4. A infecção crônica de camundongos C3H/HePAS é caracterizada por intensas lesões inflamatórias no coração que podem ser comparáveis às observadas na doença de Chagas humana. Lesões moderadas também estavam presente na musculatura estriada esquelética desses animais. No coração dos animais crônicos foram detectados parasitas viáveis, confirmando a hipótese de que o desenvolvimento da patologia cardíaca na doença de Chagas está diretamente relacionada com a persistência do T. cruzi no tecido inflamado. Em contraste, camundongos A/J cronicamente infectados desenvolvem lesões no fígado e no músculo estriado, enquanto que no coração, não foram observados lesões nem parasitas. A análise fenotípica das gerações F1 e F2 (A/J X C3H/HePAS) sugere que a predisposição genética para desenvolver lesões teciduais na infecção pelo T. cruzi é heterogênea uma vez que a patologia no coração e no fígado é segregada na geração F2. Nossos resultados corroboram a hipótese que a heterogeneidade na patologia observada em pacientes com a doença de Chagas (ausência ou presença de lesões cardíacas ou digestivas) pode ser atribuída a fatores genéticos. / This work describes a novel murine model of the chronic infection by T. cruzi using the clone Sylvio X10/4. The infection in the C3H/HePAS mouse strain is characterized by intense inflammatory lesions in the heart, which can be comparable to the observed in the human Chagas\' disease. Moderate striated muscle lesions are also present in C3H/HePAS mice. In the heart of the chronic animals viable parasites were detected, confirming the hypothesis that the development of the heart pathology in the Chagas\' disease is related to parasite persistence in the inflamed tissue. By contrast, in infected A/J mice, develop lesions in the liver and skeletal muscle, while in the heart, lesions nor parasites were not observed. The phenotypic analysis of the generations F1 and F2 (A/J X C3H/HePAS) mice suggests that the genetic predisposition to develop the inflammatory lesions caused by T. cruzi is heterogeneous because the heart and liver pathology segregate in the F2 generation. These findings raise the hypothesis that the pathology heterogeneity observed in humans with Chagas\' disease (absence and presence of cardiac or digestive chronic lesions) can be attributed to host genetic factors.

Submitted by Marlene Santos (marlene.bc.ufg@gmail.com) on 2014-10-02T20:53:47Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Sueli Meira da Silva Dias - 2006.pdf: 822890 bytes, checksum: 1982b1c5fbad1e0a077fcf7876d69f21 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Approved for entry into archive by Jaqueline Silva (jtas29@gmail.com) on 2014-10-02T21:07:22Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Sueli Meira da Silva Dias - 2006.pdf: 822890 bytes, checksum: 1982b1c5fbad1e0a077fcf7876d69f21 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-10-02T21:07:22Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Sueli Meira da Silva Dias - 2006.pdf: 822890 bytes, checksum: 1982b1c5fbad1e0a077fcf7876d69f21 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Previous issue date: 2006-06-28 / Thirty cronic chagasic pacients were submitted to specific treatment against Chaga’s disease. The drug of choice was Benznidazole. After treatment laboratorial exams such as parasitological and imunological aiming terapheutic validation were performed. The parasitological analysis is represented by post-treatment hemoculture of 30 cronic chagasic pacients and demonstrated the presence of promastigotes and epimastigotes in 10% (3/30) of pacients, probably characterizing a mixed infection. These hemocultures were named 371, 437 and 438. From these three pacients two were from Goias (GO) and one from Minas Gerais (MG) which are endemic regions to Chaga’s disease as well as to Leishmaniasis which justified the study of this probable co-infection. The work was developed in two phases: in the first phase it was made the biological experimental study of the mixed sotck and in the second phase it was made the confirmation of the Leishmania spp gender through PCR technique. In the experimental biological study the model used was Balb/c isogenic mice and we made an intraperitoneal inoculation of the stocks and we analysed the following parameters: parasitism, hemoculture, sorology by IFI and histopathology. The parasitism observation occured between 48 hours periods through 90 days, and the hemoculture observations occured weekly through 120 days and resulted positive only in mice innoculated with stock 371. The sorology showed anti-T. cruzi antibodies titers in mice innoculated with stocks 371 and 437. The histopathology revealed the presence of amastigotes in tissues cardiac slides from mice innoculated with stock 438, showing that only the epimastigotes forms are present in the mixed stocks and are viable to infect the experimental model used in this work. The confirmation of the Leishmania subgenus envolved in this co-infection was possible through molecular biology techniques. In PCRRFLP, after digestion of PCR products by Hae III restriction enzymes which has specific clivage sites for L. (Viannia) subgender. The samples represented by 371, 437 and 438 stocks and the controls of L. (L.) amazonensis and L. (L.) chagasi did not suffer clivage of its amplified segments in PCR. Only the control constituted by L. (V.) braziliensis suffered clivage resulting in fragments of aproximately 40 and 80 bp confirming undoubtfully that the samples represented by the mixed stocks 371, 437 and 438 isolated from cronic chagasic pacients cantained L. (Leishmania) spp. / Trinta pacientes chagásicos crônicos foram submetidos ao tratamento específico para a doença de Chagas. A droga utilizada foi o Benznidazol. Após o tratamento foram realizados exames laboratoriais compreendendo análises parasitológicas e imunológicas, com a finalidade de validação terapêutica. A análise parasitológica representada pela hemocultura evidenciou a presença concomitante de promastigotas e epimastigotas em 10% (3/30) delas, caracterizando uma provável infecção mista. Essas hemoculturas foram denominadas 371, 437 e 438. Dos três pacientes, dois são procedentes do estado de Goiás (GO) e um do estado de Minas Gerais (MG), regiões endêmicas tanto para a doença de Chagas como para a leishmaniose, o que justificou o estudo desta provável co-infecção. O presente trabalho foi desenvolvido em duas etapas. Na primeira etapa, foi realizado o estudo biológico experimental dos estoques mistos e na segunda, a confirmação do gênero Leishmania spp nos estoques mistos, através da técnica de PCR. No estudo biológico experimental, foram utilizados como modelos camundongos Balb/c isogênicos, realizando-se inoculação intraperitoneal dos estoques. Posteriormente foi analisada a parasitemia, hemocultura, sorologia por IFI e histopatologia. A observação da parasitemia ocorreu a cada 48 horas pelo período de 90 dias, e a hemocultura foi analisada semanalmente por 120 dias, resultando positiva apenas nos camundongos inoculados com o estoque 371. A IFI detectou apenas anticorpos anti-T. cruzi, nos camundongos inoculados com os estoques 371 e 437. A análise histopatológica revelou presença de ninhos de amastigotas nos cortes cardíacos dos camundongos inoculados com o estoque 437, demonstrando no conjunto dessas análises, que apenas as formas epimastigotas presentes nos estoques mistos se mostraram viáveis em infectar o modelo experimental utilizado. A presença de protozoários do gênero Leishmania nos estoques foi confirmada mediante realização de PCR. Na PCR-RFLP, o produto da amplificação foi tratado com a enzima de restrição Hae III que tem sítios específicos de clivagem para o subgênero L. (Viannia). As amostras representadas pelos estoques 371, 437 e 438 e os controles de L. (L.) amazonensis e L. (L.) chagasi não sofreram clivagem de seus segmentos amplificados na PCR. Apenas o controle constituído de L. (V.) braziliensis sofreu clivagem, resultando fragmentos de aproximadamente 40 e 80 pb, confirmando inequivocamente que as amostras representadas pelos estoques mistos 371, 437 e 438 isoladas de pacientes chagásicos crônicos realmente continham L. (Leishmania) spp.

A Doença de Chagas é um dos maiores problemas de saúde pública na América do Sul causando um elevado prejuízo à população. A despeito dos inúmeros esforços para o seu controle, a doença não tem cura e apresenta problemas científicos ainda não esclarecidos. Considerando-se que vários pesquisadores têm usado a radiação ionizante para modificar protozoários ou propriedades imunológicas de biomoléculas, neste trabalho foram estudados aspectos da resposta imunológica induzida em camundongos, resistentes e suscetíveis ao T. cruzi, utilizando formas irradiadas deste parasita. Doses baixas de radiação preservaram a capacidade reprodutiva e de invasão celular. Animais resistentes e suscetíveis, imunizados com os parasitas tratados por radiação, produziram anticorpos específicos. Após o desafio, os animais apresentaram baixa parasitemia, com exceção dos grupos imunizados com parasitas que receberam apenas altas doses de radiação. A seleção de formas tripomastigotas foi obtida irradiando-se os parasitas com baixas doses, o que promoveu aprimoramento da qualidade da resposta imune, a exemplo do que se observa quando da utilização de complemento. Estes dados evidenciam a importância da seleção das formas tripomastigotas para a imunização contra o T. cruzi e apontam a radiação ionizante como alternativa para este fim, uma vez que quando a seleção é feita utilizando-se complemento, depara-se com a dificuldade de sua remoção, colocando em risco o processo de imunização por introduzir substancias estranhas ao organismo. / Chagas\'s disease is one of the major public health problems in South America, promoting high prejudice to the local population. Despite the massive efforts to control it, this disease has no cure and presents puzzling unsolved questions. Considering that many researchers have used ionizing radiation to modify protozoans or biomolecules, we investigated the immunological response aspects of susceptible and resistant mice using irradiated parasites. Low radiation doses preserved the reproductive and invasive capacities of the parasite. Both susceptible and resistant animals, after immunization with irradiated parasites produced specific antibodies. After a challenge, the animals presented low parasitaemia, excepting those immunized with the antigen irradiated with higher doses. Using low radiation doses, we were able to selectively isolate trypomastigotes, leading to an improvement in the quality of the immune response, as previously reported when performing complement system assays. These data highlight the importance of selecting trypomastigote forms for immunization against T. cruz; and point towards ionizing radiation as an alternative to achieve this selection, since when this procedure is performed using complement, the subsequent steps are impaired by the difficulties to remove this component from the system.

No capítulo 1, a modelagem HQSAR, a docagem e os estudos de ROCS foram construídos utilizando uma série de 57 inibidores de cruzaína. O melhor modelo HQSAR (q2 = 0,70, r2 = 0,95, r2test = 0,62, q2rand. = 0,09 and r2rand. = 0,26) foi utilizado para predizer a potência de 121 compostos extraídos da literatura (conjunto de dados V1), resultando em um valor de r2 satisfatório de 0,65 para essa validação externa. Uma validação externa adicional foi empregada utilizando uma série de 1223 compostos extraído dos bancos de dados ChEMBL e CDD (conjunto de dados V3); nessa validação externa o valor de AUC (área sob a curva) para a curva ROC foi de 0,70. Os mapas de contribuição, obtidos para o melhor modelo HQSAR 3.4, estão de acordo com as predições do modo de interação e com as bioatividades dos compostos estudados. Nos estudos de ROCS, a forma molecular utilizada como filtro, foi útil na rápida identificação de modificações moleculares promissoras para inibidores de cruzaína. O valor de AUC obtido com a curva ROC foi de 0,72, isso indica que o método foi muito eficiente na distinção entre inibidores ativos e inativos da enzima cruzaína. Em seguida, o melhor modelo HQSAR foi utilizado para predizer os valores de pIC50 para novos compostos. Alguns dos compostos identificados, utilizando esse método, demonstraram valores de potência calculada maior do que a série de treinamento em estudo. No capítulo 2, os efeitos sobre a potência na inibição da enzima cruzaína pela substituição de um grupo nitrila como warhead por outros grupos foi avaliada. Com a síntese de 20 compostos do tipo dipeptidil, avaliou-se a relação estrutura-atividade (SAR), baseado na troca do grupo warhead na porção P1\'. O grupo oxima foi mais potente que o grupo correspondente nitrila em 0,7 unidades logarítmicas. Os compostos do tipo dipeptidil aldeídos e azanitrila obtiveram potências mais elevadas do que o correspondente dipeptidil nitrila em duas de magnitude. Os compostos dipeptidil alfa-beta insaturados foram menos potentes do que o correspondente dipeptidil nitrila. No capítulo 3, estratégias de química medicinal foram empregadas nas sínteses de 23 novos análogos, contendo o esqueleto básico de imidazopiridina. Sete e doze compostos sintetizados exibiram EC50 <= 1µM in vitro contra os parasitos Tripanosoma cruzi (T. cruzi) e brucei (T. brucei), respectivamente. Com os resultados promissores de atividade biológica in vitro, citotoxicidade, estabilidade metabólica, ligação proteica e propriedades farmacocinéticas, o composto 41 foi selecionado como candidato para os estudos de eficácia in vivo. Esse composto foi submetido em um modelo agudo da infecção com T. cruzi em ratos (cepa Tulahuen). Depois de estabelecida a infecção, os ratos foram dosados duas vezes ao dia, durante 5 dias; e monitorados por 6 semanas usando um sistema de imagem in vivo IVIS (do inglês, \"In Vivo Imaging System\"). O composto 41 demonstrou inibição parasitária comparável com o grupo de treinamento dosado com benzonidazol. O composto 41 representa um potencial líder para o desenvolvimento de novos fármacos para o tratamento de tripanossomíases. / In chapter 1, the HQSAR, molecular docking and ROCS were applied to a dataset of 57 cruzain inhibitors. The best HQSAR model (q2 = 0.70, r2 = 0.95, r2test = 0.62, q2rand. = 0.09 and r2rand. = 0.26) was then used to predict the potencies of 121 unknown compounds (the V1 database), giving rise to a satisfactory predictive r2 value of 0.65 (external validation). By employing an extra external dataset comprising 1223 compounds (the V3 database) either retrieved from the ChEMBL or CDD databases, an overall ROC AUC (area under the curve) score well over 0.70 was obtained. The contribution maps obtained with the best HQSAR model (model 3.4) are in agreement with the predicted binding mode and with the biological potencies of the studied compounds. We also screened these compounds using the ROCS method, a Gaussian-shape volume filter able to identify quickly the shapes that match a query molecule. The AUC obtained with the ROC curves (ROC AUC) was 0.72, indicating that the method was very efficient in distinguishing between active and inactive cruzain inhibitors. These set of information guided us to propose novel cruzain inhibitors to be synthesized. Then, the best HQSAR model obtained was used to predict the pIC50 values of these new compounds. Some compounds identified using this method has shown calculated potencies higher than those which have originated them. In chapter 2, the effects on potency of cruzain inhibition of replacing a nitrile group with alternative warheads were explored; with the syntheses of 20 dipeptidyl compounds, we explored the structure activity relationships (SAR) based on exchanging of the warhead portion (P1\'). The oxime was 0.7 units more potent than the corresponding nitrile. Dipeptide aldehydes and azadipeptide nitriles were found to be two orders of magnitude more potent than the corresponding dipeptide nitriles. The vinyl esters and amides were less potent than the corresponding nitrile by between one and two orders of magnitude. In chapter 3, we synthesized 23 new imidazopyridine analogues arising from medicinal chemistry optimization at different sites on the molecule. Seven and twelve compounds exhibited an in vitro EC50 <= 1µM against Trypanosoma cruzi (T. cruzi) and Trypanosoma brucei (T. brucei) parasites, respectively. Based on promising results of in vitro activity (EC50 &lt; 100 nM), cytotoxicity, metabolic stability, protein binding and pharmacokinetics (PK) properties, compound 41 was selected as a candidate for in vivo efficacy studies. This compound was screened in an acute mouse model against T.cruzi (Tulahuen strain). After established infection, mice were dosed twice a day for 5 days, and then monitored for 6 weeks using an in vivo imaging system (IVIS). Compound 41 demonstrated parasite inhibition comparable to the benznidazole treatment group. Compound 41 represents a potential lead for the development of drugs to treat trypanosomiasis.

Submitted by Anderson Silva (avargas@icict.fiocruz.br) on 2012-09-03T16:36:35Z No. of bitstreams: 1 monete_r_gomes_ioc_bcs_0002_2010.pdf: 4408396 bytes, checksum: dc300c2a3e79c9521a3d4a99c18e5e9d (MD5) / Made available in DSpace on 2012-09-03T16:36:35Z (GMT). No. of bitstreams: 1 monete_r_gomes_ioc_bcs_0002_2010.pdf: 4408396 bytes, checksum: dc300c2a3e79c9521a3d4a99c18e5e9d (MD5) Previous issue date: 2010 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil. / Leishmania major, Trypanosoma brucei e Trypanosoma cruzi (Tritryps) são protozoários unicelulares que causam a leishmaniose, a doença do sono e a doença de Chagas, respectivamente. Essas doenças causam ônus econômicos principalmente em regiões subtropicais e tropicais. Atualmente, não existem vacinas comercialmente disponíveis e não há tratamento eficaz para tais doenças. Isso se deve ao fato dos fármacos disponíveis apresentarem muitos efeitos colaterais e estarem propensas ao desenvolvimento de resistência. A maioria desses fármacos foi descoberta através da seleção de um grande número de compostos contra parasitas íntegros. Porém, nos últimos anos, uma nova abordagem vem ganhando espaço sob o termo de “desenho racional de fármacos”. Este termo representa a busca por compostos contra alvos moleculares específicos, visando diferenças bioquímicas e fisiológicas entre o parasita e o hospedeiro. A era pós-genômica gerou uma grande quantidade de informações que permitem a identificação ótima de novos alvos. Neste contexto, a partir de dados públicos dos genomas de Tritryps, reconstruímos as vias de processamento da informação genética (com ênfase nas vias de replicação e reparo, transcrição e tradução) nesses organismos, para adquirir uma melhor representação das enzimas envolvidas nestes processos. Estas análises permitiram estudos comparativos para identificar candidatos a novos alvos terapêuticos. Em nossa metodologia utilizamos a ferramenta AnEnPi (http://bioinfo.pdtis.fiocruz.br/AnEnPi/) para buscar nas seqüências genômicas por enzimas análogas. Utilizando os dados provindos do KEGG, primeiro houve uma etapa de clusterização das estruturas primárias de todas as enzimas desse banco de dados anotadas com o mesmo EC. Para isso utilizou-se uma pontuação (score) de similaridade no Blastp de 120, como parâmetros de corte. Encontramos 830 grupos de ECs com mais de um cluster e 1430 com um único cluster. Após isso, foi realizado um passo de reanotação. Para isto, foi rodado um novo Blastp, assumindo como ponto de corte um e-value de 10e-20, entre todas as proteínas preditas nos genomas de cada Tritryp contra todos os clusters. Desses dados geramos mapas das vias de interesse para esses organismos e os comparamos aos mapas que o KEGG disponibiliza como padrão. Identificamos alguns casos de analogia nestas vias entre seres humanos e Tritryps que podem vir a ser utilizados como novos alvos terapêuticos para o desenvolvimento de fármacos contra esses parasitas. Foi feita a modelagem por homologia de um análogo (6.1.1.-, de T. brucei), utilizando a ferramenta MHOLline. Além disso, buscamos no banco de alvos terapêuticos para doenças negligenciadas, TDRTARGETS (http://tdrtargets.org/), pelos ECs identificados como possíveis novos alvos, e não encontramos nenhuma ocorrência. Tal fato pode indicar que com a metodologia aplicada conseguimos identificar novos candidatos a alvos terapêuticos contra estes parasitas. Em análises futuras, vamos testar e-values mais restritivos na etapa de reanotação, para assim, testar o potencial de reanotação da ferramenta. / Leishmania major, Trypanos oma brucei e Trypanosoma cruzi (Tritryps) are unicellular protozoa that cause leishmaniasis, sleeping sickness and Chagas disease, respectively. These diseases cause economic burden mainly in subtropical and tropical regions. Currently, there are no commer cially available vaccines and no effective treatment for such diseases. This is because the available drugs present many side effects and are willing to develop resistance. Most of these drugs were discovered through the screening of large numbers of compo unds against whole parasites. However, a new approach has been gaining ground under the term "rational drug design", recently. This term represents the search for compounds against specific molecular targets, aiming physiological and biochemical difference s between parasites and hosts. The post - genomic era generated a lot of information that allow optimal identification of new targets. In this context, from public data of the Tritryps’ genomes, we reconstructed the genetic information processing pathway (wi th emphasis on replication and repair, transcription and translation) of these organisms, to obtain a better representation of enzymes involved in these processes. These analyses allowed comparative studies to identify candidates for new therapeutic target s. In our methodology we used the AnEnPi tool ( http://bioinfo.pdtis.fiocruz.br/AnEnPi/ ) to search the genomes for analogous enzymes. Using the data coming from KEGG, there was first a clustering step of the primary structures of all enzymes annotated with the same EC in this database. For this we used a Blastp similarity score of 120 as threshold. We found 830 groups of ECs with more than one cluster and 1430 with only one cluster. After that, we performed a reannotation step. For this task a new Blastp was done, assuming an e - value cutoff of 10e - 20 , among all pr edicted proteins, from each Tritryp genome, against all clusters. From these data we generated maps, for Tritryps, of the pathways of interest and compared them to the KEGG standard maps. We identified some cases of analogy in these pathways between humans and Tritryps that may be used as new therapeutic targets for developing drugs against these parasites. The homology modeling was done for an analog (6.1.1. - , T. brucei ), using the tool MHOLline. Furthermore we also searched in the therapeutic targets data base for neglected disease, TDRTARGES (http://tdrtargets.org/), for the ECs identified as possible new targets, and no occurrences were found. This may indicate that with the methodology applied we managed to identify new candidates for therapeutic targets against these parasites. In further analysis, we will test more restrictive e - values on the reannotation step to test the potential of reannotation of the tool.