Hiperprolinemias são erros inatos do metabolismo causados pela deficiência de enzimas envolvidas no catabolismo da prolina, o que resulta em acúmulo tecidual de desse aminoácido. Clinicamente, os pacientes podem apresentar manifestações neurológicas graves como retardo mental e convulsões, cuja fisiopatologia não está totalmente elucidada. O objetivo desse trabalho foi investigar o efeito da prolina sobre parâmetros bioquímicos (metabolismo energético, estresse oxidativo e sistema glutamatérgico) em cérebro e fígado, bem como sobre parâmetros comportamentais de ratos submetidos ao modelo experimental de hiperprolinemia e investigar possíveis efeitos neuroprotetores das vitaminas E e C, da guanosina e do exercício físico sobre as alterações causadas pela prolina. Os resultados mostraram que a administração aguda e crônica de prolina induz peroxidação lipídica, compromete o metabolismo energético cerebral, diminui os níveis de ATP intracelular, inibe a atividade da Na+,K+-ATPase sem alterar a expressão de suas subunidades catalíticas, e prejudica a captação de glutamato, embora não diminua o conteúdo de seus transportadores. Todas essas alterações podem estar intimamente relacionadas ao déficit cognitivo causado pela hiperprolinemia, o qual também está relacionado à diminuição dos níveis de BDNF e da atividade colinérgica. A hiperprolinemia também altera a homeostase hepática pela indução de um leve grau de estresse oxidativo e de alterações metabólicas, as quais provavelmente não implicam em dano significativo ao tecido hepático, mas sugerem uma adaptação tecidual ao estresse oxidativo. Além disso, demonstramos que a utilização das vitaminas antioxidantes, da guanosina e/ou do exercício físico pode contribuir para a contenção do estresse oxidativo, da toxicidade glutamatérgica e dos prejuízos na cognição induzidos pela hiperprolinemia. Acreditamos que esses achados possam ser relevantes para o entendimento das alterações neurológicas presentes na hiperprolinemia, além de sugerir possibilidades de neuroproteção, como por exemplo, o exercício físico que poderia ser usado como um adjuvante terapêutico no tratamento dos pacientes hiperprolinêmicos. A magnitude dos efeitos biológicos das vitaminas antioxidantes e especialmente da guanosina requerem estudos adicionais para uma melhor compreensão das suas ações neuroprotetoras na hiperprolinemia. / Hyperprolinemias are inborn errors of metabolism of proline caused by genetic defects in the L-proline catabolic pathway, resulting in tissue accumulation of this amino acid. Clinically, patients may present severe neurological manifestations, such as mental retardation and seizures. However, the mechanisms underlying these alterations are not fully understood. The aim of this study was to investigate the effect of proline on biochemical parameters (energy metabolism, oxidative stress and glutamatergic system) in brain and liver, as well as on behavior of rats submitted to experimental hiperprolinemia. In addition, we investigated some neuroprotective effects of vitamins E and C, guanosine and physical exercise on the harmful effects induced by proline. The results showed that acute and chronic proline administration induce lipid peroxidation, impair energy metabolism by inhibiting key enzymes in the brain, decrease of intracellular ATP levels and inhibit the Na+,K+-ATPase activity, but not the expression of their catalytic subunits. Moreover, this amino acid impairs glutamate uptake, but not decrease the content of their carriers. All these changes caused by proline may be closely related to cognitive impairment caused by hyperprolinemia, which also seem to involve a reduction in the BDNF levels and cholinergic activity. The hyperprolinemia also alters hepatic homeostasis by inducing a mild degree of oxidative stress and metabolic changes, which probably do not involve significant damage to liver tissue, but show a process of tissue adaptation to oxidative stress. Also, we showed that the antioxidant vitamins, the nucleoside guanosine and physical exercise may contribute to the counteracting of oxidative stress, excitotoxicity and cognitive deficit induced by hyperprolinemia. These findings may be relevant to the comprehension of neurological disorders in hyperprolinemia and suggest possibilities for neuroprotection to hyperprolinemic patients, such as physical exercise, which may be used as an adjuvant therapy for these patients. The magnitude of benefical effects of antioxidant vitamins and especially guanosine on hyperprolinemia requires additional studies to better understand its neuroprotective actions.

Submitted by (edna.saturno@ufrpe.br) on 2016-08-11T13:06:12Z No. of bitstreams: 1 Ana Lydia Vasco A Peixoto.pdf: 2392494 bytes, checksum: da169ddb32ab0f7830d6e65c01995e93 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-08-11T13:06:12Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Ana Lydia Vasco A Peixoto.pdf: 2392494 bytes, checksum: da169ddb32ab0f7830d6e65c01995e93 (MD5) Previous issue date: 2007-02-12 / The antioxidant substances prevent the oxidative damages during freezing/thawing processes and incubation period caused by ROS to sperm cells, improving the sperm parameters (vigor, motility and acrosome integrity), besides avoid damages to DNA. The aim of this study was to evaluate the effect of vitamin C and Trolox addition to diluent used to ram semen cryopreservation. The ejaculates of eleven rams were harvested by artificial vagina. After macrocospic (aspect, color and viscosity) and microscopica (motility and vigor) evaluation the pool was diluted in Tris-egg yolk (Exp. 1, 2 and 3) and Fiser (Exp. 2) and supplemented with antioxidant substances: G1) Diluent (Control); G2) Diluent + 600 mM/L of vitamin C; G3) Diluent + 60 mM/L of Trolox and G4) Diluent + 600 mM/L of vitamin C + 60 mM/L of Trolox. The freezing was done by automatized method using two curves: fast(C2= –0.5 oC/minute of 25 to 5 oC, and -12.5 oC/minute of 5 to –120 oC) to the Exps. 1 and 2, and slow (C1= –0.25 oC/minute of 25 to 5 oC, and –20 oC/minute of 5 to –120 oC) to the Exp. 2, and by conventional method (90 minutes), where after the refrigeration (5 °C) the samples were placed in liquid nitrogen during 10 minutes until reaching -120 oC (Exp. 2 and 3). The straws with 100 (Exp. 1), 75 (Exp. 2 and 3) and 200 (Exp. 2) x 106 spermatozoa were transferred into the liquid nitrogen storage container (-196 oC). The semen samples were evaluated after thawing (0 min; Exp. 1, 2, and 3) and after 30 (Exp. 1 and 2) and 60 min (Exp. 1, 2 and 3) of the incubation at 37 ºC according to progressive motility, vigor, oxidative stress, acrosome and DNA integrity (Exp. 1, 2 and 3) and sperm kinetics (MT, MT, VSL,VCL, VAP, LIN, STR, ALH, and BCF; Exp. 3). In the Exp. 1, there was significant difference (p<0.05) among evaluation times (0, 30 and 60 min) in the parameters of acrosome integrity and oxidative stress for the groups supplemented with vitamin C and Trolox and the Control group (p>0.05). However, in the Exp. 2 the percentages of PM, vigor and acrosome integrity had significant difference (p<0.05) between incubation times (0 and 60 min), being that the group supplemented with Trolox (G3) presented greater cell percentages with oxidative stress (p<0.05) when compared to the vitamin C group (G2). On the Exp. 3, there was evidence that the incubation time intervened on the sperm kinetics (MT, MP, VSL, VAP, LIN and STR), acrosome integrity and oxidative stress of sperm cells, besides presenting negative correlation between acrosome integrity and oxidative stress for the G3 group(Trolox), positive correlation between acrosome integrity and progressive motility to the G2 group (vitamin C) and negative correlation between oxidative stress and LIN to the G2 group(vitamin C) after 60 minutes of incubation. However, it can be concluded that the incubation time intervenes negatively on in vitro viability of the sperm cells independent of the vitamin C and Trolox adition; using the conventional method of cryopreservation of ram semen diluted in Tris-egg yolk, the vitamin C addition provides less oxidative stress on the spermatozoa after post-thawing; Using the automatized method of cryopreservation of ram semen diluted in Fiser, it should be used the slow curve of refrigeration (0.25 ºC/min) without necessity of vitamin C (600μM/L) and Trolox (60μM/L) addition and; Based on the kinetics, acrosome integrity, and oxidative stress, the addition of ascorbic acid and Trolox do not minimizes the negative effects of the cryopreservation and the incubation of ram semen at temperature of 37 oC after thawing. / Os antioxidantes previnem os danos oxidativos durante processos de congelação/descongelação e período de incubação causados pelas ROS/RNS às células espermáticas, melhorando os parâmetros espermáticos (vigor, motilidade e integridade acrossomal), além de evitar danos ao DNA. Objetivou-se com este estudo avaliar o efeito da adição de vitamina C e Trolox ao diluidor utilizado para criopreservação de sêmen ovino, utilizando o ejaculado de onze carneiros colhidos através de vagina artificial. Após avaliação macroscópica (aspecto, cor e viscosidade) e microscópica (motilidade e vigor), o pool foi diluído em Tris-gema (Exp. 1, 2 e 3) e Fiser (Exp. 2) e suplementado com antioxidantes: G1) Diluente (Controle); G2) Diluente + 600 mM/L de vitamina C; G3) Diluente + 60 mM/L de Trolox e G4) Diluente + 600 mM/L de vitamina C + 60 mM/L de Trolox. A congelação foi realizada pelo método automatizado utilizando duas curvas: Rápida (C2= –0,5 oC/minuto, de 25 oC a 5 oC, e a -12,5 oC/minuto, de 5 oC a –120 oC) para os Exp. 1 e 2 e Lenta (C1= –0,25 oC/minuto, de 25 oC a 5 oC, e a –20 oC/minuto, de 5 oC a –120 oC) apenas para o Exp. 2, e pelo método convencional (90 minutos), onde após a refrigeração (5 °C) as amostras foram colocadas em nitrogênio líquido por 10 minutos até atingirem –120 oC (Exp. 2 e 3). As palhetas foram envasadas com 100 (Exp. 1), 75 (Exp. 2 e 3) e 200 (Exp. 2) x 106 espermatozóides e, em seguida, armazenadas em botijão criobiológico (-196 oC). As amostras de sêmen foram avaliadas imediatamente após a descongelação (0 min; Exp. 1, 2, e 3) e depois de 30 (Exp. 1 e 2) e 60 min (Exp. 1, 2 e 3) de incubação a 37 ºC (30 e 60 minutos), quanto à motilidade progressiva (MP), vigor, estresse oxidativo, integridade de acrossoma e de DNA (Exp. 1, 2 e 3) e quanto a motilidade cinética espermática (MT, MP, VSL, VCL,VAP, LIN, STR, ALH, e BCF; Exp. 3). No Exp. 1, houve diferença significativa (p<0,05) entre os tempos de avaliação (0, 30 e 60 min) nos parâmetros de integridade de acrossoma e estresse oxidativo para os grupos tratados com vitamina C e Trolox e o grupo controle (p>0,05). Todavia, no Exp. 2 os porcentuais para MP, vigor e integridade de acrossoma diferiram (p<0,05) entre tempos de incubação (0 e 60 min), sendo que o grupo suplementado com Trolox (G3) apresentou maiores porcentuais de células com estresse oxidativo (p<0,05), quando comparado ao grupo suplementado com vitamina C (G2). Para o Exp. 3, constatou-se que o tempo de incubação interferiu na cinética espermática (MT, MP, VSL, VAP, LIN e STR), na integridade acrossomal e no grau de estresse oxidativo, além de apresentar correlação negativa entre integridade acrossomal e estresse oxidativo para o G3 (Trolox), correlação positiva entre integridade do acrossoma e MT para o G2 (vitamina C) e negativa para estresse oxidativo e LIN para o G2 (vitamina C), após 60 minutos de incubação. Contudo, pode-se concluir que o tempo de incubação interfere negativamente na viabilidade in vitro das células espermáticas independente da adição de vitamina C e Trolox; ao se utilizar o método convencional de congelação de sêmen ovino diluído em Tris-gema, a adição de vitamina C e Trolox proporciona menos estresse oxidativo às células espermáticas imediatamente após a descongelação; Ao se usar o método automatizado de congelação de sêmen ovino diluído em Fiser, deve-se utilizar a curva lenta de refrigeração (0,25 ºC/min), sem necessidade da suplementação de vitamina C (600 mM/L) e Trolox (60 mM/L) ao diluente e, Com base na avaliação da cinética, da integridade acrossomal e do estresse oxidativo, a adição de ácido ascórbico e Trolox não minimiza os efeitos negativos da criopreservação e da incubação de sêmen ovino à temperatura de 37 oC, pós-congelação.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / São Cristóvão, SE / Este estudo teve como objetivo avaliar a composição físico-química e compostos bioativos de polpa e da casca da pitomba oriunda do estado de Sergipe/Brasil. Foi determinado o rendimento, a caracterização físico-química, o teor de minerais, vitamina C e carotenoides da polpa e casca de pitomba. A casca apresentou elevado rendimento (44,60% do fruto). Notou-se na polpa quantidade considerável de vitamina C (200,68±2,93 mg/100g de amostra fresca) e carotenoides (43,56±2,04 μg/ mL do extrato), enquanto a casca apresentou elevado teor de minerais, principalmente potássio (223,00±2,00 mg/100 g), cálcio (78,90±0,40 mg/100 g) e magnésio (47,50±0,90 mg/100g). O conhecimento dos constituintes da casca e polpa da pitomba, in natura, agrega valor ao fruto, pois possibilita um melhor aproveitamento deste, tendo em vista que a casca é descartada e apenas a sua polpa é consumida.

Orientador: Delia B. Rodriguez-Amaya / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-08-17T19:38:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Ferreira_JoseEmilsonMacedo_D.pdf: 1145251 bytes, checksum: 12b769bfa14756a6b420616c8d648c83 (MD5) Previous issue date: 2011 / Resumo: A implementação de novas tecnologias de processamento e o desenvolvimento de novos produtos amplia a necessidade de se estudar não apenas seus atributos sensoriais e sua vida de prateleira, mas também os seus aspectos nutricionais e funcionais. Dentre estas tecnologias emergentes, o uso da microencapsulação na preservação dos carotenóides e flavonóides em alimentos durante o processamento e na estocagem do produto, focando os materiais de parede e as condições operacionais utilizadas foram objetos da revisão bibliográfica no primeiro capítulo. No segundo capítulo, as técnicas de processamento sob alta pressão e seus possíveis efeitos na isomerização e degradação dos carotenóides em frutas e hortaliças foi o foco da pesquisa bibliográfica. A microfiltração de sucos e polpas de frutas, suas limitações tecnológicas, a permeação e possíveis perdas de carotenóides, flavonóides e da vitamina C foram descritos na revisão do terceiro capítulo. No quarto capítulo, a otimização da microencapsulação por spray drying da polpa de pitanga com maltodextrina, amido modificado e goma arábica, visando a maior retenção dos carotenóides e dos flavonóides, foi realizada por metodologia de superfície de resposta. As melhores retenções dos carotenóides e dos flavonóides no processamento por spray drying ocorreram na temperatura de entrada de 150°C, numa proporção de 25% de polpa e 75% de material de parede. A goma arábica apresentou a melhor eficiência na microencapsulação. A estabilidade de carotenóides e flavonóides durante a estocagem das microcápsulas na temperatura ambiente e na presença de oxigênio e luz foi também investigada no capítulo 5. A goma arábica promoveu a maior estabilidade dos compostos estudados durante a estocagem na presença de luz (345lux). A degradação de carotenóides seguiu uma cinética de primeira ordem e os flavonóides, a cinética de zero ordem. O efeito da alta pressão hidrostática na polpa de cajá, na manutenção das formas trans-carotenóides ou na formação de cis-carotenóides é apresentado no capítulo 6. As polpas não pressurizadas e as pressurizadas não diferiram significativamente nas concentrações dos trans-carotenóides. As concentrações dos cis-isômeros foram significativamente maiores nas amostras pressurizadas, com exceção do ß-caroteno. Acima de 400MPa e por mais de 15 minutos de pressurização, fica mais evidente a tendência de redução da forma trans em todos os carotenóides estudados e de modo inverso, uma elevação das concentrações de cis-carotenóides na polpa de cajá pressurizada. No capítulo 7 são apresentados os resultados da microfiltração de polpas de goiaba, pitanga e tomate, onde as concentrações de carotenóides, flavonóides e da vitamina C foram quantificadas ao longo do fluxograma de processamento. Não houve a permeação dos carotenóides através da membrana filtrante. Mesmo com permeação dos flavonóides através das membranas, as concentrações no retentado foram duas vezes maiores para os três frutos em estudo, em relação as obtidas no permeado. O ácido ascórbico foi o composto que mais permeou. No entanto, houve perdas em todas as etapas de processamento / Abstract: The implementation of new processing technologies and the development of new products amplifies the necessity to study not only the sensory attributes and the shelf life, but also their nutritional and functional aspects. Among these emerging technologies, the use of microencapsulation in the preservation of carotenoids and flavonoids in foods during processing and storage of the product, focalizing wall materials and the operating conditions used, were the objectives of the review of literature in first chapter. In the second chapter, processing techniques at high pressure and their possible effects on the isomerization and degradation of carotenoids in fruits and vegetables were the focus of the literature review. The microfiltration of juices and pulps, the technological limitations, the permeation and possible losses of carotenoids, flavonoids and vitamin C were described in the review of the third chapter. In the fourth chapter, the optimization of microencapsulation by spray drying of the pulp of pitanga with maltodextrin, modified starch and gum Arabic, aiming at greater retention of carotenoids and flavonoids, was carried out by response surface methodology. The best retentions of both carotenoids and flavonoids in spray drying occurred at an inlet temperature of 150°C, at a proportion of 25% pulp and 75% wall material. Gum Arabic showed greater microencapsulation efficiency. The stability of carotenoids and flavonoids during storage of the microcapsules at ambient temperature in the presence of oxygen and light was investigated in Chapter 5. Gum Arabic promoted greater estability of the compounds studied during storage in the presence of light (345lux). The degradation of carotenoids followed first order kinetics and of flavonoids, zero order kinetics. The effect of high hydrostatic pressure on the pulp of cajá, in retaining transcarotenoid or in the formation of cis-carotenoid, is presented in Chapter 6. The unpressurized and pressurized pulps did not differ significantly in the concentrations of the trans-carotenoids. The concentrations of the cis-isomers were significantly higher in the pressurized samples, with the exception of ß-carotene. Above 400MPa and for more than 15 minutes of pressurization, the tendency of the trans¿form to decline for all the carotenoids studied, and conversely, the elevation of cis-carotenoids in the pressurized cajá pulp became more evident. Chapter 7 presents the results of microfiltration of pulp from guava, pitanga and tomato, in which the concentrations of carotenoids, flavonoids and vitamin C were determined along the processing flow diagram. There was no permeation of carotenoids through the filtering membrane. Although flavonoids permeated through the membrane, the concentrations in the retentate were twice those of the permeate, for all three fruits studied. Ascorbic acid permeated more, but there were losses in all the processing steps / Doutorado / Engenharia de Alimentos / Doutor em Ciência de Alimentos

Orientador: Elaine Minatel / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-13T07:56:17Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tonon_Erika_M.pdf: 1677236 bytes, checksum: e065259ff1028e91f63695538acbe0e8 (MD5) Previous issue date: 2009 / Resumo: A peroxidação lípidica causada pelo aumento de espécies reativas de oxigênio (EROs) no período que antecede o início da degeneração muscular no camundongo mdx, sugere que o estresse oxidativo pode ser um dos mecanismos primários da degeneração muscular distrófica, ao invés de ser um efeito secundário deste processo. No presente trabalho verificamos se o tratamento com ácido ascórbico antes que se iniciem os ciclos de degeneração/regeneração diminui a degeneração muscular em camundongos mdx. Camundongos mdx com 14 dias de vida pós-natal receberam por gavagem doses diárias de 0,1mg/kg de Ácido Ascórbico diluído em água por 7 (grupo mdx T7) e 14 dias (grupo mdx T14) e/ou dose de 200mg/kg por 14 dias (grupo mdx T14AA). Animais mdx controle receberam solução salina. Após este período, os músculos tibial anterior (TA), esternomastóide (STN) e diafragma (DIA) foram retirados. Na análise histológica, o ácido ascórbico diminuiu a degeneração muscular nos músculos TA do grupo mdx T7 e no DIA do grupo mdx T14AA (P<0,05, Student's t Test) quando comparados ao controle. Não houve diferença significativa nos níveis séricos de creatina quinase entre os grupos analisados (P>0,05, Student's t Test). Aumento significativo no conteúdo de TNF-", pela técnica de Western Blotting, foi observado nos músculos dos camundongos mdx tratados com ácido ascórbico. Os resultados indicam que o tratamento precoce de camundongos mdx com o ácido ascórbico diminuiu significativamente a mionecrose nos músculos tibial anterior e diafragma. O presente trabalho também sugere que o aumento do TNF-" não está necessariamente correlacionado ao aumento da mionecrose. / Abstract: Increased production of reactive oxygen species (ROS) can cause lipid peroxidation in the period preceding muscle necrosis in the mdx mice. This suggests that ROS may be involved as a primary, rather than secondary, cause of degeneration. In the present study, we verified whether ascorbic acid treatment before the cycles of muscle degeneration-regeneration decreases muscular degeneration in mdx mice. Mdx mice at 14 days of age received 0.1mg/kg of acid ascorbic daily in the water for 7 (group mdx T7) or 14 days (group mdx T14) and/or 200mg/kg for 14 days (group mdx T14AA). Control mdx mice received saline. After this period the tibialis anterior (TA), sternomastoid (STN) and diaphragm (DIA) muscles were removed. Hislogical analysis showed that ascorbic acid significantly decreased muscle degeneration in the TA of mdx T7 group and in the DIA of mdx T14AA group (P<0,05, Student's t Test) compared to control. There were no changes in serum CK activity in the ascorbic acid-treated mice compared to control (P>0,05, Student's t Test). Immunoblots showed a significant increase in the content of TNF-" in the muscles of the treated mdx mice. The present results indicate that ascorbic acid treatment before the cycles of muscle fiber degeneration-regeneration significantly decreases myonecrosis in TA and DIA dystrophic muscles. The present findings also sugest that increase TNF-" not necessarily correlates with increased myonecrosis. / Mestrado / Anatomia / Mestre em Biologia Celular e Estrutural

Orientador: Wilson de Figueiredo Jardim / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Quimica / Made available in DSpace on 2018-08-13T19:05:41Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Guedes_NiveaCristinadeCarvalho_D.pdf: 4953955 bytes, checksum: 1152bc5a0e4999e2d110490ec6abbb2c (MD5) Previous issue date: 2009 / Resumo: Um protocolo para avaliar o mercúrio potencialmente tóxico em águas naturais foi proposto de acordo com as seguintes etapas: (i) investigação de um redutor seletivo para espécies de mercúrio potencialmente tóxicas presentes em sistemas aquáticos; (ii) otimização do método; (iii) calibração experimental do método realizada com soluções contendo 50 mg L de Hg e diferentes ligantes em diferentes razões metal:ligante, utilizando-se ácido húmico (AH), cisteina (Cys), histidina (Hys) e ácido nitrilotriacético (NTA); (iv) aplicação do método em amostras de águas naturais, provenientes de sistemas aquáticos distintos (naturais e impactados), enriquecidas com diferentes concentrações de Hg (5, 10, 25 e 50 mg L), baseado na titulação das amostras de águas com concentrações conhecidas de Hg, seguida da determinação do metal pela técnica proposta; (v) para inferir o potencial tóxico do Hg determinado a partir do metodo proposto, a relação entre os resultados analíticos e respostas dos testes de toxicidade aguda com a bactéria Escherichia coli e o microcrustaceo Daphnia similis foram avaliados. Foi utilizado um espectrofotômetro de absorção atômica do vapor frio acoplado a um sistema FIA com amostragem discreta (o reagente é adicionado na amostra e não em fluxo). Os resultados mostraram que a utilização do ácido ascórbico (AA) como redutor do Hg (HgAA), em proporções definidas em relação a quantidade da amostra, em pH 6,4 ± 0,1 (tampão fosfato), com detecção após 60 ± 10 min, apresentou LQ = 0,5 mg L, desvio padrão relativo (n= 6) em 50 mg L de Hg de 4%, para uma faixa de trabalho de 0,5 - 60,0 mg L e fator de linearidade da curva de 97,3%. Os valores de HgAA determinados nas soluções com os ligantes foram diretamente influenciados pela natureza e pela proporcao molar dos complexos formados, sendo Cys > Hys > AH > NTA. Nas amostras de águas naturais o HgAA apresentou relação direta com o material particulado e carbono orgânico total e inorgânico. Uma significativa correlação foi determinada entre os resultados analíticos e a resposta bacteriana (ANOVA, teste F95%), sendo, r = 0,97 para as soluções com os ligantes e r = 0,94 para as amostras naturais. A correlação com os resultados da D. similis nas amostras naturais em relação ao HgAA obtido, foi r = 0,65, essa correlação não foi significativa pelo teste F95%, mas pode ser considerada expressiva visto o diferente mecanismo de interação deste organismo aquático e o Hg. Considerando que o método apresentou sensibilidade na faixa de trabalho, repetibilidade analítica e significativa correlação com os resultados biológicos, essa nova proposta de determinação de Hg pode ser útil para gerar informações relacionadas com a toxicidade aguda do Hg em águas naturais / Abstract: A protocol for the assessment of potentially toxic mercury in natural waters has been developed in accordance to the following stages: (i) research for a selective reductant of potentially toxic mercury species present in natural water samples; (ii) method optimization; (iii) experimental calibration carried out with solutions containing 50 mg L of Hg and different organic ligands at different ratios metal:ligand, including humic acid (HA), cysteine (Cys), histidine (Hys) and nitrilotriacetic acid (NTA); (iv) method application in samples from distinct aquatic ecosystems (natural and impacted) were carried out using different concentrations of Hg (5, 10, 25 e 50 mg L) based on titration of water samples with known Hg concentrations and followed by the metal determination using the purposed method; (v) to infer the Hg toxic potential determined with the proposed method, the relationship between analytical results and acute toxicity test with the bacterium Escherichia coli and the microcrustacean Daphnia similis was evaluated. A cold vapor atomic absorption spectrophotometer coupled to flow injection (FIA) system with stop-flow sampling was used. The results showed that the use of ascorbic acid (AA) as a reductant (HgAA), in specifc ratios sample:reductant, at pH 6.4 ± 0.1 (phosphates buffer), with detection after 60 ± 10 min, presented a limit of quantification (LOQ) of 0.5 mg L, with a relative standard deviation (n=6) at 50 mg L of Hg of 4%, linear range of 0.5 ¿ 60.0 mg L and linearity factor of 97.3%. The values of HgAA determinated in the presence of ligands were directly dependent with the ligand nature and concentration, being Cys > Hys > HA > NTA. In natural water samples, HgAA was directly related to particulate matter, total organic and inorganic carbon. A significant correlation (ANOVA, F95% test) was observed between analytical results and bacteria response, being r = 0.97 for the synthetic solutions with ligands and r = 0.94 for natural samples. The correlation with Daphnia results and HgAA in natural samples was r = 0.65, not significance at F95%, but it can be expressive, once accepted the different mechanisms of interaction of this aquatic organism. Considering that the method has adequate sensitivity, analytical repeatability and significant correlation with biological results, this new protocol for the determination of Hg can be useful in generating information concerning the Hg acute toxicity in natural water / Doutorado / Quimica Analitica / Doutor em Ciencias Quimicas

Orientador: Wilma De Grava Kempinas / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-15T09:54:25Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Fernandes_GlauraScantamburloAlves_D.pdf: 1055644 bytes, checksum: ab0438c5919291591e8712767f1827c9 (MD5) Previous issue date: 2009 / Resumo: A hiperglicemia está relacionada com desordens no sistema reprodutor masculino. Quando induzida quimicamente, ela pode causar diminuição nos níveis dos hormônios sexuais, no peso dos órgãos reprodutores, na concentração espermática, na fertilidade bem como alteração no comportamento sexual de ratos machos. No homem, a hiperglicemia pode levar a impotência sexual, diminuição da libido e da espermatogênese. Contudo, os principais fatores que ocasionam essas alterações ainda são discutíveis. Uma das hipóteses seria o aumento do estresse oxidativo, o qual pode causar peroxidação lipídica nas membranas biológicas, neuropatias hiperglicêmicas, danificar a molécula de DNA e comprometer a comunicação celular. No entanto, há escassez de informações que relacionem o efeito do estresse oxidativo aumentado com a morfofisiologia do sistema reprodutor masculino em indivíduos hiperglicêmicos. Diante disso, o objetivo deste estudo foi avaliar se o tratamento com antioxidantes (vitaminas C e/ou E), ao diminuir o estresse oxidativo, poderia diminuir os danos causados pela hiperglicemia no sistema reprodutor masculino de ratos. Para tanto, a hiperglicemia foi induzida quimicamente utilizando dose única do antibiótico streptozotocin em ratos machos adultos (90 dias de idade; 9 ou 10/grupo experimental). Esses animais foram divididos em grupos experimentais que receberam vitamina C e E (sozinhas ou associadas), ou apenas os veículos (grupo normoglicêmico) durante trinta dias consecutivos por via oral. No 31º dia do período experimental, após a eutanásia dos animais, foi coletado sangue para avaliação dos biomarcadores do estresse oxidativo e dos níveis hormonais, e órgãos reprodutores para avaliação dos parâmetros espermáticos e resposta noradrenérgica do ducto deferente. O delineamento experimental acima descrito foi empregado a um outro lote de animais para realização das análises histopatológicas e morfométricas do testículo e epidídimo. Os resultados mostraram que a hiperglicemia causou significativo aumento do estresse oxidativo e da sensibilidade dos receptores a1 noradrenérgicos, diminuição no peso corporal e dos órgãos reprodutores, redução na motilidade espermática, no nível de testosterona, aumento no número de espermatozóides malformados e um rearranjo nos componentes do tecido epididimário. As vitaminas reduziram significativamente o nível do estresse oxidativo e o número de espermatozóides malformados, mas em ambos os casos a vitamina C foi mais efetiva. As vitaminas também reduziram parcialmente a sensibilidade dos receptores a à noradrenalina. Com relação aos prejuízos da motilidade espermática a vitamina C sozinha amenizou parcialmente essas alterações. Também, a administração da vitamina C sozinha preveniu a redução da proporção dos componentes epididimários. Além disso, a vitamina C sozinha e associada com a vitamina E restabeleceram parcialmente os níveis de testosterona. Entretanto, a associação das vitaminas causou uma redução significativa nos níveis de LH. Contudo, a produção espermática diária, o tempo de trânsito espermático pelo epidídimo, o aspecto histológico dos testículos e epidídimos, o diâmetro dos túbulos seminíferos, os níveis de FSH e a resposta máxima noradrenérgica foram estatisticamente semelhantes entre os grupos experimentais. Em conclusão, essas vitaminas, atuando como antioxidantes, podem diminuir algumas alterações no sistema reprodutor masculino de ratos causados pela hiperglicemia. / Abstract: The hyperglycemia is related to disorders in the male reproductive system. When induced chemically, it can reduce the sexual hormones' level, reproductive organs' weight, sperm concentration, and fertility as well as the male rat sexual behavior. In men, the hyperglycemia can lead to sexual impotence, libido and spermatogenesis reduction. However, the main factors that are responsible for these alterations are still controversial. One of the possible causes for this would be the increase of the oxidative stress, which can cause lipid peroxidation in the biological membranes, hyperglycemic neuropathies, injury in the DNA molecule and to compromise the cellular communication. However, there is a lack of information related to the increased oxidative stress effect with the morphophysiology from the male reproductive system in hyperglycemic subjects. In this sense, the aim of the present study was to evaluate if the treatment with antioxidants (vitamins C and/or E), lowering the oxidative stress, could somehow attenuate the damages caused by hyperglycemia in the male rat reproductive system. Therefore the hyperglycemia was induced chemically using a single dose of streptozotocin antibiotic in male adult rats (90 days old; 9 or 10/experimental group). These animals were divided into experimental groups that received vitamin C or E (isolated or in association), or only the vehicles (normoglycemic group) during thirty consecutive days orally. At the 31st day from the experimental period, after the euthanasia of the rats, blood was collected to evaluate biomarkers of oxidative stress and hormonal levels, and reproductive organs to evaluate the permatic parameters and the noradrenergic response of vas deferens. The experimental design described above was applied in another amount of animals for the accomplishment of histopathological and morphometric analysis from testis and epididymis. The results showed that hyperglycemia caused significant increase in the oxidative stress and in the sensibility of noradrenergic a1 receptors, decrease in the body mass and in the reproductive organs' weights, reduction on the sperm motility, on epididymal tissue, in the testosterone level, an increase in the malformed sperm number and a rearrangement in the epididymal tissue components. The vitamins reduced significantly the level of oxidative stress and the number of malformed sperm, but in both cases vitamin C was more effective. These vitamins also reduced partly the sensibility to noradrenalin in the a receptors. In relation to the injuries in the sperm motility, the vitamin C alone attenuated partly these alterations. In addition, the vitamin C alone also prevented the reduction of the epididymal compartimental. Besides that, the vitamin C alone and in association to vitamin E reestablished partly the testosterone levels. Meanwhile, the association of the vitamins caused a significant reduction in the LH levels. Nonetheless, the daily sperm production, the transit time by epididymis, the histological aspect of the testes and epididymides, the seminiferous tubular diameter, the FSH levels and the maximum noradrenergic response were statistically equal among the groups. In summary, these vitamins, acting as antioxidants, may reduce some changes in the rat male reproductive system caused by hyperglycemia. / Doutorado / Biologia Celular / Doutor em Biologia Celular e Estrutural

O exercício físico intenso altera o sistema antioxidante, aumentando a geração de radicais livres e/ou diminuindo a concentração de antioxidantes. Assim o objetivo deste estudo foi verificar os efeitos da oferta de vitamina C através de um suplemento alimentar e dieta rica em ácido ascórbico no estresse oxidativo induzido pelo exercício. A amostra foi composta por 13 nadadores de elite (6 homens e 7 mulheres), com idades entre 18 e 26 anos, IMC médio 21,8kg/m², que treinavam em média 19,4h semanais. Os atletas foram submetidos à carga de exercício aguda em 3 fases, controle (C), dieta rica em vitamina C (D) e suplemento de vitamina C (S), nas quais amostras de sangue foram colhidas antes, imediatamente após e 24 horas depois do exercício, para determinação bioquímica e do estresse oxidativo. O uso de suplementos alimentares foi feito pela maioria dos nadadores (92,3%), e os suplementos mais usados eram Maltodextrina, associação de proteína e carboidrato, enquanto o relato do consumo de antioxidantes não foi muito freqüente (25%). Em relação ao consumo de antioxidantes, os nadadores apresentavam consumo alimentar variável de vitamina C, sendo que muitos deles apenas adequaram o consumo devido à adição feita pelo estudo. O consumo de vitamina E foi inadequado para todos os atletas, já o consumo de selênio, retinol e zinco tiveram uma grande oscilação. Durante as fases o único antioxidante que apresentou flutuações foi o ácido ascórbico, que foi menor na fase C em relação às outras fases. Para a maioria dos indivíduos o consumo de carboidrato e fibras se mostrou insuficiente, e o de lipídeos e calorias adequados, enquanto o consumo de proteínas variou bastante. O uso de dieta rica em vitamina C favoreceu uma menor peroxidação lipídica em nadadores de alto rendimento, já que apresentou menores valores de FOX, e diminuição da peroxidação lipídica após exercício, pela diminuição dos valores de TBARS, enquanto tiveram aumento dos níveis de vitamina C no plasma logo após o exercício. Enquanto o uso de suplemento de vitamina C, que também conteve a peroxidação lipídica após exercício, aumentou o poder antioxidante nos mesmos nadadores, devido maiores níveis do antioxidante GSH. Os quais sem uso de nenhuma adição de vitamina C tiveram um maior dano hepático e tecidual, pois apresentaram maiores níveis de TGO, menores níveis de antioxidantes, devido aos baixos níveis de vitamina C e GSH, e um aumento do ácido úrico, um antioxidante que aumenta em situações onde há grande quantidade de radicais livres presentes. Ainda pode-se verificar que, antes do exercício, quanto mais ácido ascórbico na dieta mais vitamina C, menos TGO e menos ácido úrico no sangue; e ainda logo após o exercício e 24 horas depois quanto mais ácido ascórbico menos TGO e menos ácido úrico séricos. Sendo assim as mudanças observadas com a adição de vitamina C à dieta de nadadores de alto rendimento sugere um importante papel do ácido ascórbico plasmático e da suplementação alimentar na defesa contra o estresse oxidativo induzido pelo exercício / The strenuous exercise alters the antioxidant system by increasing the generation of free radicals and / or decreasing the concentration of antioxidants. Then the aim of this study was to investigate the effects of supply of vitamin C through a dietary supplement and diet rich in ascorbic acid in the exercise-induced oxidative stress. The sample was compound of 13 elite swimmers (6 men and 7 women) aged between 18 and 26 years, average BMI 21.8 kg / m², who trained on average 19.4 hours per week. The athletes were submitted to acute exercise load in three phases: control (C), diet rich in vitamin C (D) and supplement vitamin C (S), in which blood samples were collected before, immediately after and 24 hours after exercise to biochemical determination and oxidative stress. The use of dietary supplements is done by most of the swimmers (92.3%), and supplements most used were maltodextrin, association of protein and carbohydrate, while the report of consumption of antioxidants was not very frequent (25%). Regarding the consumption of antioxidants, the swimmers had dietary vitamin C variable, and many of them just adjusted consumption due to addition made by the study. The consumption of vitamin E was inadequate for all athletes, while the consumption of selenium, retinol and zinc had a great oscillation. During the phases the only antioxidant that showed fluctuations was ascorbic acid, which was lower in phases C when compared to other phases. For most individuals the consumption of carbohydrates and fibers were insufficient, and lipid and calories adequate, while protein intake varied widely. The use of diet rich in vitamin C favored a lower lipid peroxidation in swimmers high performance, then showed lower values of FOX, and decreased lipid peroxidation after exercise by the decrease in TBARS values, while they had increased levels of vitamin C plasma immediately after exercise. While the use of supplement vitamin C, which also contained the lipid peroxidation after exercise, increased the antioxidant power of the same swimmers, due higher levels of the antioxidant GSH. This without use addition of vitamin C had a greater damage liver and tissue, because they showed higher levels of TGO, lower levels of antioxidants, due lower levels of vitamin C and GSH, and increased uric acid, an antioxidant that increases in situations where there are lots amount the free radicals presents. Further can be seen that, before exercise, the more ascorbic acid in vitamin C diet, less TGO and less uric acid in blood, and even after exercise and 24 hours after the more ascorbic acid less serum TGO and uric acid. Thus the observed change with the addition of vitamin C to the diet of high-performance swimmers suggests an important role of ascorbic acid and dietary supplementation in protecting against exercise-induced oxidative stress.

O aumento da conscientização por parte da população em relação ao impacto da alimentação no estado de saúde tem imposto à indústria de alimentos uma série de novos desafios, entre eles a necessidade de desenvolver alimentos com maior apelo de \"saudabilidade\" e que promovam bem-estar físico e mental. Em função das recentes exigências do consumidor, os compostos bioativos, aqueles capazes de otimizar funções fisiológicas atuando na promoção e prevenção da saúde têm sido alvos de inúmeras pesquisas. Incorporar compostos bioativos em alimentos é um difícil tarefa, pois muitos compostos bioativos são altamente susceptíveis à degradação quando incorporado à matriz alimentícia. Entre esses compostos está o ácido ascórbico, considerado um composto bioativo por ser um potente antioxidante, que além do seu papel no organismo humano, inclusive vitamínico, também exerce função de aditivo alimentar atuando como um antioxidante natural capaz de evitar ou retardar a oxidação de componentes da matriz alimentícia, evitando assim, alterações de cor e/ou odor desagradáveis. Uma alternativa viável e promissora de incorporar ácido ascórbico à matriz alimentícia evitando sua degradação seria o uso da tecnologia de microencapsulação. Das numerosas técnicas de microencapsulação disponíveis, spray chilling, também conhecida como spray congealing ou spray cooling, vem recebendo especial atenção nos últimos anos em função do seu baixo custo e facilidade de execução. Neste sentido, este trabalho objetivou-se estudar a microencapsulação do ácido ascórbico pela técnica de spray chilling e aplicar as micropartículas carregadas em um produto cárneo emulsionado, não apenas para desenvolvimento de um alimento contendo composto funcional, mas também para substituir o antioxidante até então utilizado na indústria de alimentos para o produto cárneo em questão. O estudo foi dividido em 3 etapas, duas delas compreenderam o desenvolvimento e caracterização das micropartículas lipídicas sólidas carregadas com ácido ascórbico e a terceira à aplicação do ácido ascórbico encapsulado em salsicha produzida com carne de frango. A estabilidade do ácido ascórbico microencapsulado foi consideravelmente melhorada em comparação com sua forma livre. A tecnologia de spray chilling revelouse como uma técnica eficaz de microencapsulação para atender o objetivo proposto. A aplicação do ácido ascórbico encapsulado em salsicha foi bem sucedida, foi produzido um alimento com características similares ao convencional, inclusive, com aceitação sensorial favorável. Foi atendido o objetivo de microencapsular o ácido ascórbico e promover sua aplicação em uma matriz alimentícia. Os resultados desse trabalho poderão subsidiar novos estudos com intuito de microencapsular outros compostos bioativos e de aplicar o ácido ascórbico microencapsulado em outras matrizes alimentícias seja com objetivo de desenvolver alimentos funcionais e/ou de substituir aditivos alimentares atualmente utilizados que não oferecem nenhum benefício adicional à saúde do consumidor por um composto que além de atuar como antioxidante na matriz alimentícia, tem função vitamínica e de composto bioativo no organismo favorecendo a manutenção da saúde do consumidor, e assim, atendendo as novas tendências de busca por alimentos mais saudáveis. / The increased awareness on the part of the population in relation to the impact of food on health has imposed the food industry a series of new challenges, among them the need to develop foods with greater appeal of healthfulness and that promote wellbeing. Due to recents demands consumer, the bioactive compounds, those able to optimize physiological functions working in health promotion and disease prevention have been the targets of numerous studies. Incorporate bioactive compounds in foods is a difficult task because many bioactive compounds are highly susceptible to degradation when incorporated into the food matrix. Among these compounds is ascorbic acid, considered as a bioactive compound to be a potent antioxidant in addition to its role in the human body, including vitamin, also exerts a function as a food additive acting as a natural antioxidant can prevent or retard oxidation Component the food matrix, thus avoiding color change and/or unpleasant odor. A viable and promising alternative to incorporating ascorbic acid to the food matrix preventing their degradation would be the use of microencapsulation technology. Of the numerous techniques available microencapsulation, spray chilling, also known as spray congealing or spray cooling, has received special attention in recent years due to their low cost and ease of implementation. Thus, this work aimed to study the microencapsulation of ascorbic acid by spray chilling technique and apply the loaded microparticles in a emulsified meat product, not only for the development of a food containing functional compound, but also to replace the hitherto used antioxidant in the food industry for meat product in question. The study was divided into three stages, two of which comprised the development and characterization of solid lipid microparticles loaded with ascorbic acid and third application of ascorbic acid produced sausage with encapsulated in chicken. The stability of the microencapsulated ascorbic acid has been considerably improved compared to the free form. The spray chilling technology proved to be an effective technique of microencapsulation to meet the objective. The application of ascorbic acid encapsulated in sausage was successful food was produced with characteristics similar to conventional inclusive, with favorable sensory acceptability. Was served the purpose of microencapsulate ascorbic acid and promote its application in a food matrix. The results of this study may support further studies aiming to microencapsulate other bioactive compounds and apply ascorbic acid microencapsulated other food matrix is aiming to develop functional foods and/or replace currently used food additives that offer no additional benefit to health consumer for a compound that in addition to acting as an antioxidant in food matrix has vitamin function and bioactive compound in the body favoring the maintenance of the health of the consumer, and thus, given the new trends search for healthier foods.

Orientador: Helena Teixeira Godoy / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-08-26T04:11:35Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Aldrigue_MauroLuiz_D.pdf: 4824419 bytes, checksum: ad7cda2a5f6c5f9480fcf5bcc909dd80 (MD5) Previous issue date: 1998 / Resumo: Atualmente, a vitamina C é a mais importante dentre as vitaminas comercializadas. Destaca-se por sua eficiente ação antioxidante, empregada em alimentos e seu largo uso como fármaco. Entre os compostos que apresentam esta atividade vitamínica, o ácido L-ascórbico (AA) é a forma mais difundida e comercializada, embora o produto de sua oxidação, o ácido desidroascórbico (DHAA) possua a mesma atividade vitamínica. Já, com cerca de 5% desta atividade, o ácido isoascórbico (IAA) é adicionado a vários alimentos, o, que leva a necessidade de métodos eficientes também para o seu controle. Para melhor avaliar o potencial vitamínico de fontes naturais de vitamina C, que são as frutas, os legumes e seus produtos, busca-se desenvolver métodos que determinem simultaneamente estas formas ativas, o que constitue em um dos grandes desafios metodológicos na atualidade. Assim, a metodologia para análise das formas ativas de vitamina C (AA, DHAA e lAA) foi estabelecida com a técnica de Cromatografia Líquida de Alta Eficiência (CLAE), utilizando coluna Spherisorb ODS-2, 5Jµm,150x4,6mm, fase móvel aquosa com 2,5mmol/L de cetrimida e 25mmol/L de acetato de amônia, pH 5,60 ajustado com ácido acético e vazão de 0,80mL/min, utilizando detector de arranjo de diodos, operando a 263nm. A quantificação foi feita por padronização externa, através das curvas analíticas. Os limites de detecção e quantificação estabelecidos foram de 0,5Jµg/mL e 1,0µg/mL, respectivamente, tanto para o AA DHAA e lAA. As taxas de recuperação foram de 97,8; 98,8 e 117,1% para o AA DHAA e lAA, respectivamente. Os testes de repetibilidade apresentaram coeficientes médios de variação abaixo de 6,0%. Concomitantemente, uma outra condição cromatográfica de análise foi desenvolvida, com os mesmos objetivos, empregando uma coluna PLRP-S, 5µm,100A, 250x4,6mm, fase móvel aquosa com 250mmol/L de NaH2P04,pH 3,30, ajustado com HCl, vazão de 0,50mL/min, utilizando o mesmo sistema de detecção. Os limites de detecção e quantificação, para esta nova condição, foram 0,35µg/mL e 1,0µg/mL, respectivamente para todas as formas de vitamina C estudadas e os coeficientes de variação abaixo de 10,0%. Para a detecção de DHAA, em ambas as condições, foi utilizada a reação com DL-homocisteína e a quantificação por diferença entre duas injeções. Estudou-se também a reação do DHAA com o-fenilenodiamina (o-PDA), para detecção em uma única injeção, porém obteve-se menor sensibilidade e maior tempo de reação. Na aplicação em amostras optou-se pela metodologia desenvolvida com coluna C18, principalmente por apresentar uma melhor resolução e um menor custo. O método foi aplicado na determinação de vitamina C total (AA e DHAA) em caju, cujo teor variou de 207,0 a 300,8mg/l00g em frutos maduros. Nos produtos de caju a concentração variou entre 148,5 a 243,0mg/100g em sucos comerciais; 118,0mg/100g em polpa congelada comercial; 229,0 a 318,5mg/100g em polpa congelada artesanal; e 170,7mg/100g em néctar. Os frutos de acerola apresentaram teores médios de 1229,2mg/100g em frutos maduros a 3498,lmg/100g em frutos verdes. Nos sucos comerciais os valores obtidos variaram de 710,0 a 881,2mg/100g; 1141,1 a 1375,2mg/100g na polpa congelada comercial e 282,3mg/100g no néctar. Outras matérias-primas também tiveram seu teor de vitamina C determinado, como uva e suco de uva comercial, goiaba vermelha, ameixa, figo-da-índia e beterraba. O DHAA foi detectado exclusivamente em ameixa e uva niágara e com teor elevado em frutos de caju (45,7%) e frutos maduros de acerola (20,7%). Os resultados foram comparados com o método oficial de titulação com 2,6-dicloroindofenol. O estudo de validação do método desenvolvido com a coluna C18, apresentou resultados bastante satisfatórios para recomendá-Io na aplicação da determinação de vitamina C em trutas e seus produtos, além de oferecer duas vantagens em relação ao método oficial: não apresenta interferência em matrizes coloridas e possibilita a determinação do DHAA, que é imprescindível em alguns casos / Abstract: Currently, amongst commercially available vitamins, vitamin C is the most important. Due to its efficient antioxidant action, it is used in foods and widely in farmaceuticals. Of the substances which present this vitaminic activity, L-ascorbic acid (AA) is a well known and commercialized form, though its oxidation product, dehydroascorbic acid (DHAA) possesses the same amount of antiascorbutic action. Isoascorbic acid (IAA) which possesses about 5% of this activity is added to various foods, thus requiring efficient methods for its control. To better evaluate the vitaminic potential of the natural sources of vitamin C, i.e. fruits, legumes and their products, the need to develop methods which could simultaneously determine these active forms imposes a great methodological challenge. Thus, a methodology for the analysis of the various active forms of vitamin C (AA, DHAA, IAA) was developed, using a High Performance Liquid Chromatography (HPLC) technique, and using a Spherisorb ODS-2 column, 1,5µm particle size, 15cmx4.6mm i.d. The aquous mobile phase was 2.5mmol/L of cetrimide and 25mmol/L of ammonium acetate, pH 5.60 adjusted with acetic acid and a flow rate of 0.8mL/min, using a diode array detector (DAD) operating at 263nm. Quantitative data were obtained using calibration curves constructed by plotting peak area versus concentration. Detection and quantification limits were 0.5 and 1.0µg/mL for AA, DHAA and IAA, respectively. The recovery was 97.8% for AA, 98.8% for DHAA and 117.1% for IAA. Reapeated injections showed a relative standard deviation lower than 6.0%. Concomitantly, another method was also developed, with the same objectives, with a PLRP-S column, 5µm particle size, 100A pore size, 25cmx4.6mm i.d., mobile phase of 250mmol/L NaH2P04, pH 3.30 adjusted with HCI, flow rate of 0.50mL/min and DAD (?=263nm). Detection and quantification limits were 0.35µg/mL and 1.0µg/mL respectively. The relative standard deviation was lower than 10.0%. For the detection of DHAA, in both methods, the reaction with DL-homocistein was used and quantification by difference, using two injections. A reaction of DHAA with o-phenylenediamine (o-PDA) was also studied, for detection with single injection, but with lower sensitivity in the UV detection and a reaction which consumed much time. For application in the samples we opted for the methodology developed using the CI8 column, mainly for presenting a better resolution and being less expensive. The determination of total vitamin C (AA and DHAA) was carried out in cashew fruit, which varried from 207.0 to 300.8mg/100g in mature fruits and 148.5 to 243.0mg/100g in commercial juices. Commercial frozen cashew pulp presented 118.0mg/100g and artesanal pulp 229.0 to 318.5mg/100g, while a nectar presented 170.7mg/100g. The West Indian cherry fi-uitspresented a variation trom 1229.2mg/100g in mature fruits to 3498.1mg/100g in green fruits. Commercial juices varried trom 710.0 to 881.2mg/100g; frozen commercial pulp from 1141.1 to 1375.2mg/100g and nectar 282.3mg/100g. Vitamin C was determined in other samples: grape, grape juice, prune, red guava, figo-da-Índia and beeroot. DHAA was only detected in prune and niagara grapes and at higher concentrations in cashew fruits (45.7%) and mature West Indian cherry fruits (20.7%). The results were compared with the official method of titration with 2,6- dichloroindophenol. The study of the validation of the method developed with the C18 column, presented satisfactory results thus being recommended for the determination of vitamin C in fruits and their products, besides offering the advantages in relation to the method of AOAC in matrixes which present interference with the color during titration, and it also offers the possibility of determining of DHAA, which is necessary in some cases / Doutorado / Doutor em Ciência de Alimentos