The meningitis is a serious inflammatory illness of meninges, the membranes that recover and protect encephalo and the spinal cord. The main causing agents of the meningitis are the viruses and the bacteria. Some works affirm that the adenosine, the final product of ATP hydrolysis (when degraded by ectonucleotidases), have an important protective role in brain disorders. Breakdown of extracellular ATP to adenosine is catalyzes by ecto-nucleotidases family, the NTPDase hydrolyze extracellular nucleotide tri and diphosphates (ATP and ADP) to nucleotide monophosphate (AMP) and the 5'-nucleotidase catalyzes the hydrolysis of AMP to adenosine. In this work we verified adenine nucleotides hydrolysis in the CSF of aseptic and bacterial meningitis patients, in order to compare with adenine nucleotides hydrolysis in controls patient (absence of neural inflammatory process). Were used patients with age between 18 and 59 years of both the sex in a sampling of 15 patient controls, 15 patients with aseptic meningitis and 15 patients with bacterial meningitis. For the criteria of inclusion and exclusion had been analyzed parameters like, aspect of the CSF, total counting of leukocytes, distinguishing counting of leukocytes, values of protein, glucose and lactate. We got as resulted a significant reduction of hydrolysis of the ATP in the patients with aseptic and bacterial meningitis when compared with patient controls. In contrast we got a significant increase of hydrolysis of the ADP and the AMP in the two groups of meningitis when compared with the controls. The increase in ADP and AMP hydrolysis maybe means the attempt of increase the adenosine production, that have a recognized neuroprotective actions in brain insults. / A meningite é uma grave doença inflamatória das meninges, as membranas que recobrem e protegem o encéfalo e a medula espinhal. Os principais agentes causadores da meningite são os vírus e as bactérias. Vários trabalhos afirmam que a adenosina, produto final da degradação do ATP (quando degradado pelas ectonucleotidases), possui um importante papel protetor nas desordens cerebrais. A degradação do ATP até adenosina é catalisada pela família das ecto-nucleotidases, a NTPDase hidrolisa nucleotídeos extracelulares tri e di-fosfatados (ATP e ADP) até nucleotídeos mono-fosfatados (AMP), e a 5'-nucleotidase catalisa a hidrolise do AMP até adenosina. Neste trabalho verificou-se a hidrólise dos nucleotídeos de adenina no líquor de pacientes com meningite asséptica e bacteriana, a fim de comparar a hidrólise destes nucleotídeos com pacientes controles (ausência de processo inflamatório neural). Foram utilizados pacientes com idade entre 18 e 59 anos de ambos os sexos em uma amostragem de 15 pacientes controles, 15 pacientes com meningite asséptica e 15 paciente com meningite bacteriana. Para os critérios de inclusão e exclusão foram analisados parâmetros tais como: aspecto do líquor, contagem total de leucócitos, contagem diferencial de leucócitos, valores de proteína, glicose e lactato. Obtivemos como resultado uma diminuição significativa da hidrólise do ATP nos pacientes com meningite asséptica e bacteriana quando comparados com pacientes controles. Ao contrário obtivemos um aumento significativo da hidrólise do ADP e do AMP nos dois grupos de meningites quando comparados com os controles. A hidrólise aumentada do ADP e do AMP refere-se talvez a tentativa de aumentar a produção de adenosina, que por sua vez possui um conhecido papel neuroprotetor frente a insultos cerebrais.

Biological aging is gradual and progressive decline of physical functions that begin in adulthood and ends with death in almost all animals species. One of the most common features of aging is the reduced ability to learn and remember new information. Age-related changes in the neural basis of memory processes are closely linked to oxidative stress. Here, the effects of caffeine caffeine and SCH58261, an A2A receptor antagonist, in the memory impairment and oxidative stress influenced by age in rats were investigated. Young and old rats were treated daily for 10 days with caffeine (30 mg/kg, p.o.) or SCH58261 (0,5 mg/kg, p.o.). The test used to evaluate the memory of animals was the novel object recognition task (article 1). After behavioral tasks, ascorbic acid and oxygen and nitrogen reactive species levels as well as Na+K+ ATPase activity were determined in rat brain. The results showed that memory deficit influenced by age was reversed by treatment with caffeine or SCH58261 besides improving short-term memory. Young animals also showed improved memory for short and long term when treated with caffeine and SCH58261.Furthermore, increased oxygen and nitrogen reactive species levels in brain of old rats were normalized by both caffeine and SCH58261. However, ascorbic acid levels decreased in brain of old rats were not changed by CAF or SCH58261. The inhibition Na+K+ ATPase activity in brain of old rats was also normalized by caffeine and SCH58261. Since caffeine ameliorates memory of aged rats and taking into account that organoselenium compounds have antioxidant and neuroprotective properties, it was also investigated whether diphenyl diselenide (PhSe)2 compound could improve memory impairment in middle-aged rats in a model of supplementation with caffeine. Middle-aged rats were treated for 30 days with both (PhSe)2 (10 p.p.m. in feed) and caffeiene (15 mg/kg, o.p.) or only (PhSe)2 or caffeine. Memory of animals was evaluated in the novel object recognition task (manuscript 1). The results showed an improvement in the short-term memory in animals treated only with (PhSe)2. The long-term memory was improved only in animals treated with both (PhSe)2 and caffeine. Moreover, treatments affected locomotor and exploratory activity. Thus, this study suggests that both antagonists of adenosinergic receptor, and (PhSe)2 were effective in ameliorating memory impairment influenced by aging. / O envelhecimento biológico é o declínio gradual e progressivo das funções físicas que começam com o nascimento e terminam com a morte em todas as espécies animais. Uma das características mais comuns do envelhecimento é a redução da capacidade de aprender e lembrar novas informações. Mudanças relacionadas à idade nos fundamentos neurais dos processos de memória estão intimamente ligadas ao estresse oxidativo. Neste estudo, os efeitos da cafeína e do SCH58261, antagonistas de receptores de adenosina, no prejuízo da memória e estresse oxidativo influenciado pela idade em ratos foram investigados. Ratos jovens (3 meses) e velhos (23 meses) foram tratados diariamente por 10 dias com cafeína (30 mg/kg p.o.) ou SCH58261 (0,5 mg/kg, p.o.). O teste utilizado para avaliar a memória dos animais foi o teste do reconhecimento do objeto novo (artigo 1). Após o teste comportamental, os níveis de acido ascórbico e espécies reativas de oxigênio e nitrogênio, bem como a atividade da Na+K+ ATPase foram determinados em amostras de cérebro dos animais. Os resultados mostraram que o déficit de memória induzido pela idade foi revertido pelo tratamento com cafeína ou SCH58261 na memória de longo prazo além de melhorar a memória de curto prazo. Os animais jovens também apresentaram melhora da memória de curto e longo prazo quando tratados com cafeína e SCH58261. Além disso, os níveis aumentados de espécies reativas de oxigênio e nitrogênio no cérebro dos ratos velhos foram revertidos por ambas cafeína e SCH58261. Entretanto os níveis de acido ascórbico, diminuídos no cérebro de ratos velhos, não foram mudados pela cafeína ou SCH58261. A atividade da Na+K+ ATPase inibida no cérebro dos animais velhos também foi normalizada pela cafeína e SCH58261. Uma vez que a cafeína melhorou a memória de ratos velhos e levando-se em consideração que muitos compostos orgânicos de selênio apresentam propriedades antioxidantes e neuroprotetoras, também foi investigado se o composto disseleneto de difenila (PhSe)2 seria capaz de melhorar o prejuízo da memória em ratos de meia idade (18 meses) em um modelo de suplementação juntamente com a cafeína. Ratos de meia idade foram tratados pelo período de 30 dias com ambos (PhSe)2 (10 p.p.m. na ração) e cafeína (15 mg/kg, o.p.) ou somente com (PhSe)2 ou cafeína. A memória dos animais foi avaliada no teste do reconhecimento do objeto novo (manuscrito 1). Os resultados demonstraram uma melhora na memória de curta duração nos animais tratados somente com (PhSe)2. Entretanto a memória de longa duração foi melhorada apenas nos animais tratados com ambos (PhSe)2 e cafeína. Além disso, os tratamentos melhoraram a atividade locomotora e exploratória. Assim, estes dois estudos sugerem que tanto os antagonistas de receptores adenosinérgicos, quanto o (PhSe)2 são capazes de melhorar o prejuízo da memória influenciado pelo envelhecimento.

Publicación a texto completo no autorizada por el autor / Determina el punto de corte de la adenosina deaminasa en el diagnóstico de tuberculosis pleural en el Hospital Nacional Dos de Mayo. El estudio es de tipo retrospectivo de precisión diagnóstica, en el que se examinan las historias clínicas de los pacientes con determinación de ADA en líquido pleural y diagnóstico confirmatorio de la etiología de la efusión pleural, durante su hospitalización en el Hospital Nacional Dos de Mayo en el 2015. A través de la curva ROC, se establece el mejor punto de corte para obtener los mejores parámetros de sensibilidad, especificidad, valores predictivos positivo y negativo (VPP y VPN) y los cocientes de verosimilitud positivo y negativo (CVP y CVN). Como resultados se observa que 83 sujetos que se incluyeron en el estudio. El 50,6 % fueron mujeres y la media de la edad fue de 43,0 ± 21,7 años. La TP presenta el 48%, seguido de las neoplasias (17%) y derrame paraneumónico (16%). El mejor punto de corte calculado fue de 28.08 UI/L, con una sensibilidad de 90%, especificidad de 88%, VPP de 87%, VPN de 90%, CVP de 7,5 y CVN de 0,11. Se concluye que el mejor punto de corte de la ADA en líquido pleural es de 28.08 UI/L para el diagnóstico de TP, con una sensibilidad de 90% y especificidad de 88%, en el Hospital Nacional Dos de Mayo durante el año 2015. / Tesis

Objetivo: Determinar la sensibilidad, especificidad, valor predictivo positivo y negativo del TEST de ADA en el diagnostico de Meningoencefalitis tuberculosa (MEC-TB) en pacientes de ambos sexos infectados con el VIH, hospitalizados en los pabellones de Medicina Interna del Hospital Nacional Arzobispo Loayza (HNAL). Periodo Enero-Diciembre 2006. Material y Métodos: Se realizó un estudio Transversal donde se revisó 201 historias clínicas de pacientes con VIH/SIDA hospitalizados durante Enero-Diciembre 2006. Solo 48 cumplieron los criterios de selección. Resultados: 29 casos fueron varones (60.4%) y 19 mujeres (39.5%). El rango de edades donde se concentro la mayor proporción de casos fue de 26 a 35 años (39.5%). Se encontró Meningitis Tuberculosa en 16 casos (33.3%), Meningocriptococosis 20 casos (41.6%), Toxoplasmosis cerebral 6 casos (12.5%), MEC viral 4 casos (10.4%), y un proceso neoplásico. La prevalencia de MEC-TB fue de 33.3%. Así también la Sensibilidad fue de 93.8 (71.7- 98.9), la especificidad de 71.9 (84.5- 59.6) y los valores predictivos positivo y negativo fueron de 62.5 (42.7-78.8) y 95.8 (79.8- 99.3) respectivamente, con un nivel de confianza del 95%. La Curva de ROC dio como punto de corte 6.1U/L con sensibilidad de 93.8% y especificidad de 71.9%, encontrándose un área de 89% bajo la curva. Conclusión: El test de ADA es una prueba confiable para el diagnostico de MEC-TB en pacientes con VIH. / Objective: To determine sensitivity, specificity, positive and negative predictive value of the ADA TEST for the tuberculous Meningoencephalitis (TB-MEC) diagnosis in both sexes patients infected with the HIV, hospitalized at the Internal Medicine pavilions of the “Arzobispo Loayza National Hospital”. January – December 2006. Material and Methods: A Cross-sectional study was made. 201 clinical histories of patients with HIV/AIDS hospitalized during January - December 2006 were reviewed. Only 48 histories fulfilled the selection criteria. Results: 29 cases were men (60.4%) and 19 women (39.5%). The greater proportion of cases was found in the range from 26 to 35 years (39.5%). There was found tuberculous meningitis in 16 cases (33.3%), cryptoccocal meningitis in 20 cases (41.6%), cerebral toxoplasmosis in 6 cases (12.5%), viral meningoencephalitis in 4 cases (10.4%), and one neoplasic case. The prevalence of tuberculous meningoencephalitis was 33.3%. The sensitivity was 93,8 (71,7- 98,9), the specificity was 71,9 (84,5- 59,6) and the predictive values positive and negative were 62,5 (42.7-78.8) and 95,8 (79,8- 99,3) respectively, with a 95% of confidence value. The ROC Curve gave a 6.1 U/L as cut point with a sensitivity of 93,8% and a specificity of 71.9%, with an area under the curve of 89%. Conclusion: The ADA test is a reliable test for the diagnosis of tuberculous meningoencephalitis in HIV patients. Key words: sensitivity, specificity, predictive values, ADA test, HIV infection, tuberculosis / Tesis

Made available in DSpace on 2015-07-22T20:49:34Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-10-27 / A cafeína tem sido considerada um fator de risco para o crescimento dos cistos na Doença Renal Policística Autossômica Dominante (DRPAD) devido ao aumento de secreção de fluido e proliferação celular induzidos pelo acúmulo de adenosina monofosfato cíclico (AMPc’), resultante da inibição da fosfodiesterase. O presente estudo teve como objetivos quantificar a ingestão de cafeína discriminando entre suas fontes dietéticas, avaliar o conhecimento sobre a necessidade de restrição de cafeína pelos pacientes com DRPAD e determinar a associação entre o consumo de cafeína e os dados clínicos e laboratoriais destes pacientes. A avaliação dos hábitos alimentares e do consumo de cafeína foi realizada através de três recordatórios de 24 horas, em dias não consecutivos e o conhecimento sobre a restrição de cafeína, considerado como orientação prévia, foi avaliado ao término da última entrevista com o paciente. Foram incluídos no estudo 102 pacientes com DRPAD (68F/34M, 38±14 anos), acompanhados no Ambulatório de Rins Policísticos da Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP) e 102 indivíduos saudáveis (74F/28M, 39±12 anos). Os dados clínicos, laboratoriais e parâmetros ultrassonográficos renais foram obtidos do prontuário destes pacientes. A ingestão de cafeína foi significantemente menor no grupo de pacientes DRPAD quando comparados aos controles (85,7 versus 134 mg/dia) e o volume renal não se correlacionou com a ingestão de cafeína. De acordo com as respostas, detectou-se que 63% dos pacientes DRPAD foram previamente orientados quanto à restrição de cafeína. Os pacientes nãoorientados, que consumiam significantemente mais cafeína do que os orientados, eram significantemente mais velhos, e apresentavam níveis significantemente maiores de creatinina sérica e menores de Taxa de Filtração Glomerular (TFG) estimada. A porcentagem de pacientes hipertensos e com Doença Renal Crônica (DRC) estágio 3 era maior neste grupo, porém sem atingir significância estatística. O volume renal tendeu a ser maior no grupo de pacientes não-orientados, mas sem significância estatística. A análise de regressão linear multivariada revelou que a idade, presença de hipertensão e DRC estágio 3 se associaram com o volume renal na amostra total. Em conclusão, o consumo de cafeína encontrou-se reduzido na presente amostra de pacientes com DRPAD, provavelmente, devido à orientação prévia quanto à necessidade de restrição. A cafeína não se associou de maneira independente com o volume renal, o qual sofreu maiores influências da idade, presença de hipertensão e DRC. / TEDE / BV UNIFESP: Teses e dissertações

O uso indiscriminado de recursos ergogênicos como os esteróides anabolizantes vêm se tornando um problema crescente em diversos segmentos da população, além do meio atlético, tendo como finalidade a obtenção de melhor desempenho físico ou simplesmente melhor aparência física, porém muitas vezes sem a preocupação com os riscos dos efeitos colaterais promovidos por esta prática. No presente trabalho estudamos os efeitos da associação do uso de doses suprafisiológicas de esteróides anabolizantes e do treinamento físico aeróbio de natação sobre o fluxo sangüíneo coronário de ratos normotensos, verificando a participação da adenosina como um dos possíveis mecanismos de regulação deste fluxo, além de alterações estruturais cardíacas que poderiam influenciar na perfusão sangüínea cardíaca. Ao observarmos somente o efeito do treinamento físico, verificamos que o mesmo foi eficaz em promover adaptações benéficas ao sistema cardiovascular, como a presença de hipertrofia cardíaca fisiológica e melhora no fluxo sangüíneo coronário em repouso, provavelmente mediado por uma maior formação de adenosina circulante e cardíaca. O uso de esteróides anabolizantes associado ao treinamento físico atenuou os efeitos benéficos promovidos pelo treinamento, observando-se a presença de hipertrofia cardíaca acompanhada por redução de débito cardíaco e fluxo sangüíneo coronário, mediado por menor produção de adenosina circulante, além de prejuízo na resposta vasodilatadora à acetilcolina, demonstrando uma provável disfunção endotelial e redução na densidade capilar cardíaca, caracterizando desta forma, um quadro patológico / The abusive use of ergogenic resources as the anabolic steroid became an increasing problem in several segments of the population, beyond the athletical way, searching for better performance or physical appearance, without being worried about the risks of the collateral effects promoted by this practice. In the present work we studied the effects of the use of supraphysiological doses of anabolic steroids associated with aerobic swimming training on the coronary blood flow of normotensive rats, investigating the participation of adenosine as one of the possible mechanisms of blood flow regulation, besides the cardiac structural alterations that could influence the coronary blood perfusion. The effect of the physical training was efficient to promote beneficial adaptations of the cardiovascular system, as the presence of physiological cardiac hypertrophy and improves the coronary blood flow at rest, probably mediated by a higher circulating and cardiac adenosine production. The use of anabolic steroids associated with the swimming training attenuated the beneficial effect promoted by training, being observed the presence of cardiac hypertrophy, followed by reduction of cardiac output and coronary blood flow, mediated by lower circulating adenosine production, besides the impairment of the vasodilator response to the acetylcholine, demonstrating a probable endothelial dysfunction and reduction of the cardiac capillary density, characterizing in this way, a pathological state

A transmissão sináptica é essencial para o funcionamento do sistema nervoso. A neuromodulação permite regular esse processo de forma precisa. Um desses mecanismos modulatórios é a regulação da liberação de neurotransmissores. A adenosina é um importante modulador da transmissão sináptica. Além disso, a ativação do subtipo A2a dos receptores para adenosina está envolvida com a facilitação da liberação de neurotransmissores no sistema nervoso central. O presente trabalho teve como objetivo avaliar os efeitos modulatórios da ativação do receptor A2a de adenosina sobre a liberação de neurotransmissores e sua via de sinalização intracelular em modelo in vitro. Além disso, a tese contempla a construção histórica dos conceitos abordados no trabalho permitindo uma visão clara de sua evolução. Esse projeto foi o pioneiro no Brasil a utilizar o sensor biossintético fluorescente de liberação de vesículas sinápticas (supereclipse sinapto-pHluorina), o qual foi gentilmente cedido pelo professor Gero Miensenboeck do Sloan-Kettering Institute for Cancer Research. Nossos resultados demonstraram que o tratamento com o agonista do receptor A A2a de adenosina aumentou a fluorescência do supereclipse sinapto-pHluorina, assim como os níveis de glutamato e noradrenalina. Além disso, foi demonstrado que o inibidor da proteína cinase dependente de AMPc aboliu o aumento nos níveis do glutamato e noradrenalina, tal como a fosforilação da proteína sináptica sinapsina I evocado pelo agonista do receptor A2a de adenosina. Desta forma, nossos dados sugerem que a ativação do receptor A2a de adenosina em cultura de células do bulbo de ratos Wistar modula a liberação de neurotransmissores e a fosforilação da sinapsina I, assim como a proteína cinase dependente do AMPc pode ser o modus operandi desse fenômeno modulatório / Synaptic transmission is a sine qua non process for nervous system physiology. Such precise process is accomplished in part due to modulation of neurotransmitter release. Adenosine is a putative synaptic transmission modulator. Moreover, adenosine A2a receptor facilitates neurotransmitter release in the Central Nervous System. The present study focuses on the modulation of neurotransmission by adenosine A2a receptor and its intracellular signaling pathway in in vitro model. Here, we provided evidence that adenosine A2a receptor agonist increases an optical biosynthetic sensor of synaptic vesicle release (supereclipct synapto-pHluorin), as well as glutamate and noradrenaline. Furthermore, it was demonstrated that cAMP-dependent protein kinase inhibitor abolished glutamate and norepinephrin increase, as well as synapsin I phosphorylation evoked by adenosine A2a receptor agonist. Therefore, our data suggest that adenosine A2a receptor activation modulates neurotransmitter release and synapsin I phosphorylation in cultured cells from medulla oblongata of Wistar rats, as well as cAMP-dependent protein kinase might be the modus operandi of this modulatory phenomenon

Made available in DSpace on 2015-04-14T14:50:54Z (GMT). No. of bitstreams: 1 410539.pdf: 3151865 bytes, checksum: 48590cfe5b0c95580f676ed19d3f2c46 (MD5) Previous issue date: 2009-01-28 / O zebrafish ? um pequeno tele?steo que vem sendo considerado um modelo ideal para estudos de numerosas doen?as humanas. O genoma desta esp?cie est? quase todo sequenciado e estudos demonstraram que muitos genes deste peixe s?o similares ao de mam?feros, inclusive humanos. A esquizofrenia ? uma grave s?ndrome neuropsiqui?trica que acomete em torno de 1% da popula??o mundial. O uso de f?rmacos antipsic?ticos ? a base dos tratamentos para esquizofrenia. Evid?ncias t?m demonstrado o importante papel desempenhado pelo ATP e a adenosina no sistema nervoso central (SNC). O neurotransmissor ATP ? armazenado de forma vesicular e liberado na fenda sin?ptica, onde pode agir em receptores espec?ficos localizados na membrana celular. A inativa??o do sinal mediado pelo ATP extracelular ? realizada por uma fam?lia de enzimas denominadas ectonucleotidases, incluindo as NTPDases (nucleos?deo trifosfato difosfoidrolases) e a ecto-5?- nucleotidase. Estas enzimas s?o respons?veis pelo catabolismo extracelular do neurotransmissor ATP at? adenosina. Estudos do nosso laborat?rio demonstraram a presen?a de ectonucleotidases como as NTPDases e a ecto-5?-nucleotidase no SNC de zebrafish. A acetilcolina (ACh) ? um neurotransmissor secretado pelos nervos colin?rgicos terminais, juntamente com o ATP. Ap?s exercer seu sinal nos receptores nicot?nicos e muscar?nicos, a ACh ? inativada pela a??o de uma enzima denominada acetilcolinesterase (AChE), que hidrolisa a ACh at? colina e acetato. O gene da AChE j? foi clonado e sequenciado e esta atividade enzim?tica foi detectada em c?rebro de zebrafish. Considerando que: (1) o zebrafish ? um importante modelo experimental em estudos farmacol?gicos, bioqu?micos e patol?gicos, e que (2) os sistemas purin?rgico e colin?rgico exercem um importante papel na sinaliza??o no SNC e (3) receptores e enzimas envolvidos nestes sistemas de neurotransmiss?o j? foram descritos nesta esp?cie, torna-se importante avaliar os efeitos das drogas antipsic?ticas sobre enzimas envolvidas na hidr?lise dos nucleot?deos de adenina e acetilcolina no SNC do zebrafish. O efeito in vitro de sulpirida, olanzapina e haloperidol foram avaliados na atividade da AChE. Todas as drogas promoveram inibi??o na atividade desta enzima. J? no estudo in vivo somente o haloperidol alterou a atividade da AChE, ativando a hidr?lise de ACh e aumentando a express?o g?nica da AChE. Foi avaliado o efeito in vitro das drogas antipsic?ticas sobre a atividade das NTPDases em membranas cerebrais de zebrafish. As tr?s drogas testadas foram capazes de alterar a atividade das NTPDases, sendo que o haloperidol inibiu a hidr?lise de ATP e ADP, a sulpirida inibiu a hidr?lise de ADP e a olanzapina inibiu a hidr?lise de ATP. Entretanto, nenhuma das tr?s drogas testadas promoveu altera??o significativa na atividade da ecto-5?- nucleotidase. Os resultados demonstram que os f?rmacos antipsic?ticos podem influenciar na atividade das enzimas envolvidas na degrada??o dos neurotransmissores ATP e acetilcolina, sugerindo que o sistema purin?rgico e colin?rgico podem ser alvo dos efeitos neuroqu?micos promovidos por estes f?rmacos

A Artrite Reumatóide (AR) é uma artropatia autoimune multifatorial com etiologia desconhecida que afeta aproximadamente 1% da população adulta. A estratégia padrão para o tratamento da AR consiste na administração de baixas doses de Metotrexato (MTX), cujo efeito anti-inflamatório está relacionado com a manutenção dos níveis elevados de adenosina (ADO) extracelular. No entanto, uma parte considerável dos pacientes com AR é refratária ao tratamento com MTX e o mecanismo pelo qual este fenômeno ocorre ainda não está totalmente esclarecido. Neste contexto, o presente estudo descreveu que a eficácia terapêutica ao MTX está associada com a expressão em células Tregs da ectoenzima CD39, cuja função biológica é a geração de ADO extracelular via metabolização do ATP. Especificamente, através da realização de um estudo longitudinal, observamos que pacientes respondedores ao MTX (R-MTX) apresentam uma expansão de células Tregs circulantes expressando CD39 após o tratamento com MTX. Por outro lado, identificamos que pacientes não respondedores ao MTX (UR-MTX) possuem uma redução da expressão de CD39 em células Tregs, o que culmina em um comprometimento das suas funções supressoras. Ainda, demonstramos que a expressão de CD39 em células Tregs é um biomarcador apto em predizer a resposta terapêutica ao MTX, visto que pacientes UR-MTX apresentam uma expressão reduzida de CD39 em Tregs mesmo antes do início do tratamento com MTX. Posteriormente, nós investigamos as bases moleculares que acarretam na expressão reduzida de CD39 observada em células Tregs de pacientes URMTX. Demonstramos que a estimulação com TGF-? tanto em células Tregs isoladas quanto diferenciadas in vitro aumenta a expressão de CD39 através da ativação sequencial da seguinte plataforma molecular: receptores de TGF-? (TGFBRII e TGFBRI), transdutor de sinal SMAD2, fator de transcrição CREB, de modo dependente da atividade de p38. Uma vez identificada a via envolvida com a indução da expressão de CD39, demonstramos que células Tregs diferenciadas de indivíduos que apresentam uma expressão reduzida de CD39 são incapazes de induzir a expressão desta ectoenzima através da estimulação com TGF-?. Por fim, transpondo nossos achados para pacientes com AR, observamos que pacientes UR-MTX apresentam uma redução nos níveis de RNAm para TGFBRII e CREB bem como também uma redução das proteínas fosforiladas SMAD2 e CREB em células CD4+ e Tregs, sugerindo que o comprometimento na cascata de sinalização de TGF-?, envolvida com a indução da expressão de CD39 em células Tregs, está associado com a resistência ao MTX. / Rheumatoid arthritis (RA) is an autoimmune multifactorial arthropathy with unknown etiology that affects approximately 1% of the adult population. The standard strategy for RA treatment comprises the administration of low doses of methotrexate (MTX), whose antiinflammatory effects are associated with maintenance of high levels of extracellular adenosine (ADO). However, a considerable proportion of RA patients is resistant to MTX treatment and the mechanisms underlying this phenomenon occurs is poorly understood. Within this context, the present study showed that therapeutic efficacy of MTX is associated with expression on Treg cells of the ectoenzyme CD39, whose function is related to the generation of extracellular ADO by ATP metabolism. Specifically, we conducted a longitudinal study and observed that responsive patients to MTX (R-MTX) exhibit an increase in the frequency of circulating Treg cells expressing CD39 after MTX treatment. On the other hand, we found that non-responsive patients to MTX (UR-MTX) have a reduction of CD39 expression on Treg cells, which culminates in an impairment of Treg function. Furthermore, these findings indicate that CD39 expression on Treg cells is a biomarker for therapeutic response to MTX, since UR-MTX patients had a depressed CD39 expression on Treg cells even before MTX treatment. Subsequently, the present study investigated the molecular mechanisms that would cause the reduction of CD39 expression on Treg cells from UR-MTX patients. For this, we demonstrated that TGF-? stimulation increases CD39 expression in isolated and in vitro differentiated Treg cells through participation/activation of the following molecules: receptors of TGF-?, TGFBRII and TGFBRI, signal transducer SMAD2 and transcription factor CREB, through p38 activity dependent-manner. Once identified these molecules involved with CD39 induction, we demonstrated that differentiated Treg cells from healthy individuals with an intrinsic reduction of CD39 expression on circulating Treg cells are unable to increase CD39 expression by TGF-? stimulation. Transposing our findings to RA patients, we found that UR-MTX patients exhibit a reduction of mRNA for TGFBRII and CREB as well as reduction on levels of phospho-SMAD2 and phospho-CREB in CD4+ and Treg cells, suggesting that an impairment in TGF-? signaling pathway, related to induction of CD39 expression on Treg cells, is associated with MTX resistance.

Submitted by Setor de Tratamento da Informa??o - BC/PUCRS (tede2@pucrs.br) on 2016-08-22T16:27:06Z No. of bitstreams: 1 TES_FERNANDA_FRANCINE_ZIMMERMANN_COMPLETO.pdf: 4145272 bytes, checksum: e7185015e9927f4db21344a6bf065ef8 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-08-22T16:27:06Z (GMT). No. of bitstreams: 1 TES_FERNANDA_FRANCINE_ZIMMERMANN_COMPLETO.pdf: 4145272 bytes, checksum: e7185015e9927f4db21344a6bf065ef8 (MD5) Previous issue date: 2016-04-08 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior - CAPES / Several psychiatric and neurological diseases are characterized by impairments in social function, such as autism spectrum disorders (ASD) and schizophrenia (SCZ). In this study, we conducted a behavioral screening at different times of zebrafish development at 6, 30, 70 and 120 dpf (postfertilization days) to establish a social interaction deficit model induced by valproic acid (VPA) at 48 ?M concentration to investigate social behavior, locomotion, aggression and anxiety. To analyze the social behavior of each fish was placed in an experimental tank. On one side of the experimental tank, an empty fish tank was placed; on the other side, a tank of identical size held 15 zebrafish, which were designed the ?stimulus fish?. We quantify the time of the experimental fish from the side of the tank "fish stimulus" in relation to empty tank. The locomotion of the animals was assessed by evaluating the following parameters: distance traveled, average speed, number of crossings and the time spent in each tank position (bottom vs. upper levels) was considered an index of anxiety. To analyze the aggression the animals were individually placed in an experimental tank. A mirror was placed at the side of the tank at an angle of 22.5? to the backwall of the tank so that the left vertical edge of the mirror touched the side of the tank and the right edge was further away.Thus, when the experimental fish swam to the left side of the tank, their mirror image appeared closer to them. indicating preference for the opponent.Our results showed that exposure to VPA induced changes on locomotor activity and anxiety in different periods of development in zebrafish. In addition, VPA-treated animals presented a deficit in social interaction to 70 dpf and 120 dpf. Exposure to VPA did not affect aggression in the adult stage after 70 dpf and 120 dpf. This study also investigated the purinergic signaling in a model of embryonic exposure to VPA, which induced deficit in social interaction in adult zebrafish. This study demonstrates the first evidence that exposure to VPA in embryonic zebrafish in 120 dpf can modulate the hydrolysis of nucleotide and nucleoside and adenosine deamination in zebrafish brain membranes. In addition, we analyzed the effects of oxytocin, the oxytocin receptor agonist (carbetocin) and oxytocin receptor antagonist (L-368,899) on the reversal of behavioral effects induced by MK-801 in zebrafish regarding behavior social, such as, changes in social interaction and aggression. These results support the role of NMDA receptors and oxytocinergic system in the regulation of social behavior and aggression. This study can contribute to a better understanding of social behavior and purinergic signaling on the main neuropsychiatric disorders that affect social behavior; autism and schizophrenia, as well as to present social interaction deficit models induced by embryological exposure to VPA and exposure to MK-801 in adult zebrafish. These findings reinforce the involvement of oxytocinergic system and its pharmacological potential on diseases that affect social behavior. / Diversas doen?as psiqui?tricas e neurol?gicas s?o caracterizadas por apresentarem preju?zos no funcionamento social, como os transtornos do espectro do autismo (TEA) e esquizofrenia (SCZ). Neste estudo, realizamos uma triagem comportamental em diferentes per?odos do desenvolvimento do peixe-zebra em 6, 30, 70 e 120 dpf (dias p?s-fertiliza??o) para estabelecer um modelo de d?ficit de intera??o social induzido por ?cido valpr?ico (VPA) na concentra??o de 48 ?M a fim de investigar o comportamento social, locomo??o, agressividade e ansiedade. Para analisar o comportamento social cada peixe foi colocado num aqu?rio experimental. De um lado do tanque experimental, foi colocado um aqu?rio vazio e; do outro lado, um aqu?rio de tamanho id?ntico com 15 animais, designados como "peixe est?mulo". Quantificamos o tempo de perman?ncia do peixe experimental entre o lado do aqu?rio "peixe est?mulo" em rela??o ao aqu?rio vazio. A locomo??o dos animais foi analisada avaliando os seguintes par?metros: dist?ncia percorrida, velocidade m?dia, n?mero de cruzamentos e o tempo gasto em cada zona do aqu?rio (superior versus inferior) foi considerado ?ndice de ansiedade. Para analisar a agressiviade os animais foram individualmente colocados em um aqu?rio experimental. Um espelho foi colocado inclinado a 22,5 ? da parede do fundo do aqu?rio, para que a borda esquerda vertical do espelho toque a borda direita do aqu?rio. Assim, quando o peixe virar para o lado esquerdo do tanque sua imagem no espelho aparecer? mais perto, indicando prefer?ncia pelo advers?rio. Nossos resultados demonstram que a exposi??o ao VPA induz mudan?as na atividade locomotora e ansiedade em diferentes per?odos do desenvolvimento em peixe-zebra. Al?m disso, os animais tratados com VPA apresentaram um d?ficit de intera??o social aos 70 dpf e 120 dpf. A exposi??o ao VPA n?o alterou a agressividade no est?gio adulto aos 70 dpf e 120 dpf. Neste estudo, tamb?m investigamos a sinaliza??o purin?rgica em um modelo de exposi??o embrion?ria ao VPA, que induz d?ficit de intera??o social em peixe-zebra adultos. Este estudo demonstra a primeira evid?ncia de que a exposi??o embrion?ria ao VPA pode modular a hidr?lise de nucleot?deos e nucleos?deo e a desamina??o de adenosina em membranas de enc?falo de peixe-zebra em 120 dpf. Al?m disso, analisamos os efeitos da ocitocina, do agonista do receptor da ocitocina (carbetocina) e do antagonista do receptor da ocitocina (L-368,899) na revers?o dos efeitos comportamentais induzidos pelo MK-801 em peixe-zebra em rela??o ao comportamento social, tais como, mudan?as na intera??o social e agressividade. Estes resultados sugerem o papel dos receptores NMDA e do sistema ocitocin?rgico na regula??o do comportamento social e agressividade. Este estudo pode contribuir para um melhor entendimento do comportamento social e da sinaliza??o purin?rgica sobre as principais desordens neuropsiqui?tricas que afetam o comportamento social; como o autismo e a esquizofrenia. Al?m disso, este estudo apresenta modelos de d?ficit de intera??o social induzido pela exposi??o embrion?ria ao VPA e exposi??o ao MK-801 em peixe-zebra adulto. Estes achados tamb?m refor?am o envolvimento do sistema ocitocin?rgico e o seu potencial farmacol?gico sobre doen?as que afetam o comportamento social.