Made available in DSpace on 2015-04-14T14:51:28Z (GMT). No. of bitstreams: 1 451454.pdf: 6697842 bytes, checksum: 890c954db41088b36538c3133a7c2606 (MD5) Previous issue date: 2013-09-27 / Epilepsy, characterized by the occurrence of spontaneous and recurrent seizures, is one of the main chronic neurological diseases, affecting around 1% of the world's population. Adenosine is an endogenous modulator of neuronal excitability and has anticonvulsant properties. Thus, the modulation of adenosinergic signalling pathway may presents important effects on epilepsy. In this study we characterize different aspects of the adenosinergic signaling in a model of seizures induced by pentylenetetrazole (PTZ) in zebrafish. In this study we also analyzed the effect of different modulators of adenosinergic signaling on controlling the development of seizures. Our results showed that the activation of type A1 adenosine receptors has an important role in controlling seizures in zebrafish. Furthermore, we observed that ecto-5?-nucleotidase and ADA enzymes, in addition to nucleoside transporters, are directly involved in controlling extracellular adenosine levels and, consequently, in controlling the development of seizures in this teleost. In addition, we clarified the occurrence of controversial data related to the mTOR signaling pathway in oxidative stress. Previous studies have suggested the activation of this pathway in oxidative stress based on the misinterpretation of the phosphorylation of RSK and MSK proteins through the antibody anti-phospho-Thr389-S6K, in addition to protein S6 phosphorylation, regulated by the MAPK signaling pathway in this case. Therefore, these findings might contribute for a better understanding about the signaling pathways involved in the mechanisms of seizure control and represents na alternative for the development of antiepileptic drugs, increasing the therapeutic options in epilepsia. Our results may also contribute to future studies on the characterization and modulation of TOR signaling pathway in zebrafish. / A epilepsia, caracterizada pela ocorr?ncia de crises convulsivas espont?neas e recorrentes, ? umas das principais doen?as neurol?gicas cr?nicas, afetando em torno de 1% da popula??o mundial. A adenosina ? um modulador end?geno da excitabilidade neuronal e apresenta propriedades anticonvulsivantes. Sendo assim, a modula??o da via de sinaliza??o adenosin?rgica pode apresentar um efeito importante na epilepsia. Neste estudo, n?s caracterizamos diferentes aspectos da sinaliza??o adenosin?rgica em modelo de crise convulsiva induzida por pentilenotetrazol (PTZ) em peixe-zebra. Nossos resultados demonstram um aumento nas atividades da adenosina desaminase (ADA), respons?vel pela desamina??o de adenosina em inosina, logo ap?s uma crise convulsiva. Al?m disso, foi observado que os f?rmacos antiepil?pticos gabapentina, fenito?na e ?cido valpr?ico preveniram o efeito estimulat?rio promovido pelo PTZ sobre as atividades da adenosina desaminase. Neste estudo, tamb?m analisamos o efeito de diferentes moduladores da sinaliza??o adenosin?rgica no controle do desenvolvimento de convuls?es induzidas por PTZ. Nossos resultados demonstraram que a ativa??o de receptores de adenosina do tipo A1 tem importante participa??o no controle de crises convulsivas em peixe-zebra. Al?m disso, observamos que as enzimas ecto-5?-nucleotidase e ADA, al?m dos transportadores de nucleos?deos est?o diretamente envolvidos no controle dos n?veis extracelulares de adenosina e, consequentemente, no controle do desenvolvimento de crises convulsivas neste tele?steo. Al?m disso, esclarecemos a ocorr?ncia de dados controversos relacionados ? via de sinaliza??o mTOR em estresse oxidativo. Estudos sugeriram a ativa??o desta via em estresse oxidativo baseados na interpreta??o equivocada da fosforila??o das prote?nas RSK e MSK pelo anticorpo anti-fosfo-Thr389-S6K, al?m da fosforila??o da prote?na S6, regulada neste caso pela via de sinaliza??o MAPK. Este estudo pode contribuir para um maior entendimento das vias de sinaliza??o envolvidas nos mecanismos de controle de crises convulsivas e representar uma alternativa para o desenvolvimento de f?rmacos antiepil?pticos, aumentando as op??es terap?uticas em epilepsia. Nossos resultados tamb?m podem contribuir para futuros estudos referentes ? caracteriza??o e modula??o da via de sinaliza??o TOR em peixe-zebra.

Made available in DSpace on 2015-04-14T14:51:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 467154.pdf: 7061163 bytes, checksum: 094a6255137e152d52395cd63a9b0ee4 (MD5) Previous issue date: 2015-03-06 / Alzheimer disease (AD) and Parkinson disease (PD) are the two most common neurodegenerative disorders affecting around 35 and 10 million people worldwide, respectively. These disorders are characterized by neuronal protein deposits and progressive loss of function or structure of central nervous system (CNS). Studies have shown that purinergic system is involved in mechanisms associated with neurodegenerative diseases such as AD and PD. The purinergic signaling is meditated by ATP and adenosine through activation of purinoceptors P2 and P1, respectively. The nucleotide and nucleoside levels are modulated by the action of the ectonucleotidase family, especially by ecto-Nucleoside triphosphate diphosphohydrolases (NTPDases) and ecto-5?-nucleotidase (EC-5?-Nt). These enzymes hydrolyze ATP to adenosine, which is subsequently deaminated by the enzyme Adenosine Deaminase (ADA) to inosine. Adenosine is described as an important neuromodulator and neuroprotective of CNS, and its modulation has proven to be a promising alternative for the treatment of neurodegenerative diseases. Thus, this study aims to evaluate behavioral parameters in models of cognitive impairment induced by scopolamine, 6-hydroxydopamine, and paraquat in zebrafish and study the possible effect of these models on the purinergic system. Our results, using a model of pharmacological cognitive impairment induced by scopolamine in adult zebrafish, showed that selective and non-selective inhibitors of adenosine receptors (Caffeine, ZM241385, and DPCPX) prevented the cognitive deficit induced by scopolamine. The same results were found for the adenosine transporter inhibitor (dipyridamole), and ADA inhibitor (EHNA). These data support the hypothesis of adenosinergic signalling can modulate memory mechanisms. We also developed a new experimental model of neurodegeneration by treating adult zebrafish chronically with paraquat herbicide (Pq) that results in symptoms of PD. Treatment consisted of six ip. injections of Pq in doses of 10 or 20 mg/kg and each injection was administered every three days. Locomotor behavior was assessed 24 hours after each injection and showed a decrease in both doses. The turn angle was also evaluated and showed difference between the doses administered compared to control group. Non-motor behaviors such as anxiety and social interaction were not significantly different after chronic treatment with Pq. However, after Pq exposure, the animals showed a deficit in Y-maze task memory. Apart from the behavioral data, our results presented an increase on dopamine levels, whereas DOPAC decreased in the experimental group showing change in dopamine metabolism. The amount of tyrosine hydroxylase demonstrated no significant difference between control and treated fish; however, dopamine transporter expression decreased in the group treated with 10 mg/kg Pq, and there was no change at the highest dose. Our study also evaluated the effect of chronic exposure of Pq and 6-hydroxydopamine (6-OHDA) neurotoxins, commonly used as an animal model of PD, on extracellular nucleotide and nucleoside metabolism. Two doses of 6-OHDA were tested, 25 and 50 mg/kg, and the animals were sacrificed at six days after exposure. Our data showed no changes in ectonucleotidase activities or ATP, ADP and AMP levels after exposure to Pq. However, a decrease of extracellular adenosine and increase in inosine levels were observed when compared to the control group. The 6-OHDA treatment did not affect the activity of NTPDase, EC-5?-Nt, and ATP levels in both tested doses. In contrast to the previous results, ADP levels were different for each dose used, while the AMP levels decreased in both doses. The adenosine and inosine showed an increase in both doses of 6-OHDA tested in zebrafish brains. These data suggest that the purinergic system can be modulated differently in experimental animals with symptoms of Parkinson's disease. In addition, this study also presented a new model of neurodegeneration using the Pq and confirms the involvement of purinergic system on neurodegeneration as well as its pharmacological potential in neurodegenerative diseases. / As doen?as neurodegenerativas mais prevalentes s?o a doen?a de Alzheimer (DA) e a doen?a de Parkinson (DP) afetando cerca de 35 e 10 milh?es de pessoas no mundo, respectivamente. Essas patologias s?o caracterizadas pelo dep?sito de prote?nas em c?lulas neuronais e pela perda progressiva da fun??o ou estrutura no sistema nervoso central (SNC). Estudos t?m mostrado que o sistema purin?rgico est? envolvido nos mecanismos relacionados a DA e DP. A sinaliza??o purin?rgica ? mediada pela a??o do ATP e da adenosina atrav?s da ativa??o dos receptores P2 e P1, respectivamente. Os n?veis de nucleot?deos e de nucleos?deos s?o modulados pela a??o enzim?tica das ectonucleotidases, especialmente pela ecto-nucleos?deo trifosfato difosfoidrolases (NTPDases) e ecto-5'-nucleotidase (EC-5?-Nt). Estas enzimas hidrolisam ATP em adenosina, que ? subsequentemente desaminado pela enzima adenosina deaminase (ADA) a inosina. A adenosina ? descrita como importante neuromodulador e neuroprotetor do SNC e sua modula??o tem se mostrado uma alternativa promissora para o tratamento de doen?as neurodegenerativas. Com isso, este estudo visa avaliar par?metros comportamentais em modelos de d?ficit cognitivo induzidos por escopolamina, por 6-hidroxidopamina e por paraquat em peixe-zebra, e estudar o poss?vel efeito desses modelos sobre o sistema purin?rgico. Nossos resultados, utilizando o modelo farmacol?gico de d?ficit cognitivo induzido por escopolamina em peixe-zebra adulto, mostraram que os inibidores seletivos e n?o seletivos dos receptores de adenosina (Cafe?na, ZM241385 e DPCPX) preveniram o d?ficit causado pela escopolamina. Os mesmos resultados foram encontrados para o inibidor do transportador de adenosina (dipiridamol) e inibidor da ADA (EHNA). Esses dados suportam a hip?tese de que a sinaliza??o adenosin?rgica pode modular o processamento da mem?ria. Nosso estudo tamb?m caracterizou um novo modelo experimental de neurodegenera??o, tratando peixes-zebra adultos cronicamente com paraquat (Pq), herbicida associado aos sintomas da DP. O tratamento consistiu de seis inje??es intraperitoniais nas doses de 10 ou 20 mg/kg a cada tr?s dias. O comportamento locomotor foi avaliado 24 horas ap?s cada inje??o e mostrou uma diminui??o em ambas as doses. O ?ngulo de giro tamb?m foi avaliado 24 horas ap?s cada inje??o e demonstrou diferen?a entre as doses administradas. Comportamentos n?o motores como ansiedade e intera??o social n?o apresentaram diferen?a significativa ap?s o tratamento cr?nico com Pq. No entanto, os animais tratados com Pq demonstraram d?ficit de mem?ria em tarefa de labirinto em Y comparados com o grupo controle. Al?m dos dados comportamentais, nossos resultados mostraram um aumento nos n?veis de dopamina, enquanto os de DOPAC diminu?ram nos animais tratados com Pq, mostrando mudan?a no metabolismo. J? a tirosina hidroxilase n?o apresentou diferen?a significativa entre animais do grupo controle e tratados, por?m a express?o do transportador de dopamina diminuiu no grupo tratado com 10 mg/Kg de Pq, n?o havendo altera??o na maior dose. Nosso estudo tamb?m investigou os efeitos da exposi??o cr?nica do Pq e da neurotoxina 6-hidroxidopamina (6-OHDA), comumente usada como modelo animal de DP, sobre o metabolismo extracelular de nucleos?deos e nucleot?deos. Duas doses de 6-OHDA foram testadas, 25 e 50 mg/kg, e os animais foram eutanasiados seis dias ap?s a exposi??o. Nossos dados mostraram que o Pq n?o alterou a atividade das NTPDases e EC-5?-Nt ou os n?veis extracelulares de ATP, ADP e AMP. No entanto, o tratamento cr?nico com Pq diminui os n?veis extracelulares de adenosina e aumentou os n?veis de inosina. Os peixes tratados com 6-OHDA n?o apresentaram altera??es na atividade das NTPDases e EC-5?-Nt, bem como nos n?veis de ATP extracelular nas duas doses testadas. Por?m, houve mudan?as nos n?veis de ADP e uma diminui??o, em ambas as doses, nos n?veis de AMP. J? os n?veis extracelulares de adenosina e inosina apresentaram um aumento. Estes dados sugerem que o sistema purin?rgico pode ser modulado de forma diferente em animais experimentais com sintomas de Parkinson. Al?m disso, este trabalho tamb?m apresentou um novo modelo de neurodegenera??o utilizando o Pq al?m de refor?ar o envolvimento do sistema purin?rgico e o seu potencial farmacol?gico sobre doen?as neurodegenerativas.

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A morte celular necrótica é conhecida pelo seu caráter inflamatório, conferido pela grande quantidade de sinais de dano liberados. Durante a tuberculose primária progressiva é observada intensa lesão necrótica nos pulmões e disseminação do bacilo para outros órgãos. Neste estudo, nós hipotetizamos que a amplificação da necrose pulmonar, via reconhecimento de sinais de dano tecidual pelo receptor purinérgico P2X7 (P2X7R), poderia favorecer a progressão da doença, bem como a potencialização da resposta inflamatória. Vimos que o reconhecimento de extracelular ATP (eATP) via o receptor P2X7 é de suma importância para o desenvolvimento da doença grave, por favorecer a indução de necrose dos macrófagos infectados, o que facilitou o escape do bacilo. A adenosina, resultante da hidrólise do eATP, impactou na ativação da resposta imune adquirida. Nosso estudo provê uma nova perspectiva para o desenvolvimento de protocolos terapêuticos baseados na inibição do P2X7R e dos receptores de adenosina para evitar a indução de formas graves da doença. / Necrosis cell death is known as an inflammatory process due to the large amount of damage signals released. During the progressive primary tuberculosis, extensive necrotic lesions in the lung and intensive bacterial dissemination are observed. In this study, we hypothesized that the amplification of pulmonary necrosis through damage signals recognition by a purinergic receptor called P2X7 (P2X7R) could favor the progression of disease, as well as the augmentation of the inflammatory response. We found that the recognition of extracellular ATP (eATP) through P2X7R is crucial to the outcome of fatal tuberculosis by favoring the induction of necrosis of infected macrophages, which facilitated the bacterial escape. The adenosine, resulted from eATP hydrolyzation, impacted to the acquired immune response activation. Our study provides a new perspective to the development of therapeutic protocols based on the inhibition of P2X7R and adenosine receptor to avoid the induction of aggressive forms of tuberculosis.

La información disponible acerca de los transportadores de nucleósidos concentrativos en cerebro es muy limitada, mientras que existen varios estudios acerca de los transportadores equilibrativos. La primera parte de esta tesis se centra en la localización del transportador de nucleósidos concentrativo preferente por adenosina CNT2 en cerebro y su posible regulación transcripcional, ya que su afinidad por este neuromodulador es mayor que el resto de transportadores. Se ha visto que el transcrito de CNT2 se localiza en un gran número de regiones del sistema nervioso central, principalmente en poblaciones neuronales. En concreto, se han detectado niveles moderados del transcrito en hipocampo, amígdala, capas profundas de la corteza cerebral, corteza retrosplenial y piriforme, así como en la capa molecular del cerebelo. Estudios de regulación indican que el transcrito de esta proteína varía en situaciones donde la adenosina interviene vía el receptor de adenosina A1, por ejemplo, se han realizado estudos de privación de sueño prolongado donde los niveles de adenosina son muy elevados. Así mediante muestras de cortezas cerebrales de rata a las que se les tuvo en vigilia durante 24 horas, se valoraron los niveles de transcrito de CNT2, observando una disminución de hasta un 25% respecto al control. Tras ocho horas de recuperación los niveles iniciales sólo se recuperaban de forma parcial. También mediante modelos animales a los que se les había tratado con ácido kaínico para la inducción de convulsiones, los niveles del transportador aumentan a medida que pasa el tiempo tras el tratamiento. Esto sería consistente con el hecho de que la adenosina incrementa sus niveles en situaciones patológicas vía el receptor A1 en su función de neuroprotección.La segunda parte de esta tesis consiste en el estudio de la expresión de los transportadores de nucleósidos en tejidos tumorales. Para esto se han generado y desarrollado anticuerpos específicos contra las isoformas humanas de estas proteínas que se han utilizado en el análisis de un gran número de pacientes de tumores ginecológicos y de mama. Los resultados obtenidos nos indican que la pérdida de expresión de hCNT1 es más común que la de los transportadores equilibrativos en tumores ginecológicos y esta disminución se asocia a subtipos histológicos de peor pronóstico como pueden ser tumores de célula clara o adenocarcionomas. En tumores de mama, la expresión citoplasmática y sobre todo nuclear de hCNT1 se encuentra asociada a un por pronóstico, además de encontrar correlaciones positivas entre el número de células positivas para el transportador de nucleósidos hCNT1 y algunos marcadores del metabolismo de nucleótidos como DPD y TS, y correlaciones negativas con marcadores de baja proliferación celular como bcl2 y MIB. Si tenemos en cuenta el estado del nódulo linfático y lo asociamos al número de células positivas para hCNT1 observamos que estos dos factores combinados son indicativos de un mayor riesgo de recaída. / In this study, we analysed the concentrative transporter CNT2 in the rat brain and compared it with that of ENT1. Furthermore, we evaluated their changes in a situation of increased extracellular levels of adenosine, such as sleep deprivation. CNT2 mRNA was most prevalent in the amygdala, the hippocampus, specific neocortical regions and the cerebellum. Total sleep deprivation dramatically diminished the amounts of CNT2 mRNA, whereas ENT1 mRNA remained unchanged. This decrease in CNT2 transcript suggests a new physiological role for the transporter in the modulation of extracellular adenosine levels.In this part of the study we report the characterization of 2 new antibodies raised against hENT1 and hENT2. These 2 antisera, along with a previously characterized antibody against hCNT1 have been used to analyze NT expression in gynecologic cancers: hCNT1 was by far the isoform whose expression was most frequently reduced or lost in the types of gynecologic tumors analyzed. NT expression is related to the type of gynecologic tumor and its specific subtype, hCNT1 protein loss being highly correlated with poor prognosis histotypes. We also studied ninety breast cancer patients who were treated with CMF after surgery. hCNT1 and enzymes associated with nucleotide metabolism were assessed immunohistochemically. CNT1 expression was mostly cytoplasmic, with some nuclear staining.. Nuclear staining correlated negatively with decreased disease-free survival, whereas the percentage of hCNT1-positive cells correlated positively with reduced long term survival, the hCNT1-positive index being indicative of poor prognosis. A relative risk of relapse was associated with high hCNT1-positive indexes, whereas when this parameter was combined with the nodal status (positive) a high risk of relapse was found, suggesting that both parameters may reflect a poor prognosis.

Las manifestaciones pulmonares de la colitis ulcerosa son una de las manifestaciones extraintestinales menos frecuentes. La afectación pulmonar subclínica es mas frecuente que la enfermedad pulmonar activa. En una revisión publicada en el año 2003, los autores destacan como un 62,5% de los casos registrados presentan afectación pulmonar subclinica (alteraciones en la espirometría, volúmenes pulmonares, difusión pulmonar, permeabilidad pulmonar o hallazgos en el lavado broncoalveolar). La determinación de óxido nítrico en aire exhalado (ENO) y la provocación bronquial con adenosina 5´-monofosfato (AMP) y metacolina han permitido estudiar la inflamación y las alteraciones estructurales bronquiales mediante métodos no invasivos. Los objetivos del estudio fueron identificar diferencias en la prevalencia y grado de hiperrespuesta bronquial (HRB) a AMP y en la concentración de ENO entre individuos con colitis ulcerosa y controles sanos. Se incluyeron 24 pacientes con colitis ulcerosa activa o inactiva (índice de Truelove-Witts modificado) y 24 sujetos sanos. Los participantes no tenían enfermedades pulmonares concomitantes, su función pulmonar basal era normal, no eran fumadores y no sufrían enfermedades alérgicas. No habían recibido glucocorticoides o sufrido infecciones respiratorias en las cuatro semanas previas. La radiografía de tórax de los pacientes con colitis ulcerosa debía ser normal. Ambos grupos no tuvieron otras enfermedades concomitantes graves o mal controladas. El estudio fue transversal y abierto, constando de 3 visitas. En la visita 1 se recabó la historia clínica de los participantes y se les efectuó una exploración física. En la visita 2 se efectuaron pruebas cutáneas con método prick test a los alergenos respiratorios relevantes de nuestro medio, espirometría, determinación de ENO y provocación bronquial con AMP o metacolina (el orden de las exploraciones se aleatorizó). En la visita 3 se realizó determinación de ENO, espirometría y la provocación bronquial con el broncoconstrictor no empleado en la visita 2. Los resultados demuestran que aunque la prevalencia de HRB a AMP (PC20 ≤400mg/ml) en los pacientes con colitis ulcerosa fue similar a la identificada en sujetos sanos, estos presentaron una significativamente mayor respuesta bronquial a AMP (valorada mediante el índice de reactividad (IR) propuesto por Burrows y cols) que los individuos sanos (IR 4,2% / log mg/ml 95% IC 3,4-5,0 en colitis ulcerosa e IR 3,2% / log mg/ml (95% IC 2,8-3,7) en los controles sanos, p = 0,034. No hubo diferencias significativas en la prevalencia y grado de respuesta bronquial a metacolina ni en las concentraciones de ENO entre ambas poblaciones. La respuesta bronquial a AMP y a metacolina, así como los valores de ENO, no mostraron ninguna relación con la actividad, extensión o tiempo de evolución de la colitis ulcerosa. La correlación entre el IR a metacolina y AMP fue significativa (r = 0,56, p = 0,004) en los pacientes con colitis ulcerosa. En este grupo también se detectó una correlación significativa entre el FEV1% (en % del teórico) y la relación FEV1/FVC y el IR a metacolina (r = −0,44, p = 0,03 y r = −0,49, p = 0,01, respectivamente). En conclusión: la respuesta a AMP inhalado puede usarse para identificar cambios inflamatorios subclínicos en las vías aéreas de pacientes con colitis ulcerosa. Estos cambios sin embargo, no pudieron ser identificados con la determinación de la respuesta bronquial a metacolina ni mediante la determinación de la concentración de óxido nítrico en aire exhalado. Por otra parte la disociación entre la respuesta a AMP y la concentración de ENO, sugieren que los mecanismos que inducen ambos procesos son independientes. / Previous studies have demonstrated that airway responsiveness to direct bronchoconstrictor agents (histamine or methacholine) is increased in a significant proportion of subjects with ulcerative colitis. However, the airway responsiveness of these patients to adenosine 5´-monophosphate (AMP), an indirect bronchoconstrictor agent, has never been investigated. The aim of the present doctoral thesis was to determine differences in exhaled nitric oxide (ENO) and airway responsiveness to AMP between subjects with ulcerative colitis and healthy controls. Forty-eight nonsmoking adults (24 with ulcerative colitis and 24 healthy subjects) were challenged with increasing concentrations of AMP and methacholine. ENO levels were also measured before spirometry and challenge testing. All patients with ulcerative colitis had normal chest x- ray studies and none had current o previos respiratory syptoms. The response to each bronchoconstrictor agent was expressed by the bronchial responsiveness index (BRI), whereas ENO was measured with the single exhalation method. The mean (95% CI) BRI values for AMP were significantly higher in subjects with ulcerative colitis than in healthy controls: 4,2 %/log mg/ml (3,4-5,0) vs 3,2 %/log mg/ml (2,8-3,7, P= 0,03). By contrast, methacholine BRI and ENO values were similar in the two groups. In subjects with ulcerative colitis, BRI values for methacholine and AMP were significantly related (r = 0,56, P = 0,004). However, not significant correlation was found between ENO values and methacholine or AMP BRI. In addition, ENO values were not related with the activity or duration of the disease. We conclude that the response to inhaled AMP can be used to identify subclinical inflammatory changes in the airways of subjects with ulcerative colitis. These changes, however, cannot be identified with the determination of airway responsiveness to methacholine. Furthemore the dissociation between the response to AMP and ENO levels suggests that the mechanisms that induce these two changes are indepent.

Objetivo: Determinar la sensibilidad, especificidad, valor predictivo positivo y negativo del TEST de ADA en el diagnostico de Meningoencefalitis tuberculosa (MEC-TB) en pacientes de ambos sexos infectados con el VIH, hospitalizados en los pabellones de Medicina Interna del Hospital Nacional Arzobispo Loayza (HNAL). Periodo Enero-Diciembre 2006 Material y Métodos: Se realizó un estudio Transversal donde se revisó 201 historias clínicas de pacientes con VIH/SIDA hospitalizados durante Enero-Diciembre 2006. Solo 48 cumplieron los criterios de selección. Resultados: 29 casos fueron varones (60.4%) y 19 mujeres (39.5%). El rango de edades donde se concentro la mayor proporción de casos fue de 26 a 35 años (39.5%). Se encontró Meningitis Tuberculosa en 16 casos (33.3%), Meningocriptococosis 20 casos (41.6%), Toxoplasmosis cerebral 6 casos (12.5%), MEC viral 4 casos (10.4%), y un proceso neoplásico. La prevalencia de MEC-TB fue de 33.3%. Así también la Sensibilidad fue de 93.8 (71.7- 98.9), la especificidad de 71.9 (84.5- 59.6) y los valores predictivos positivo y negativo fueron de 62.5 (42.7-78.8) y 95.8 (79.8- 99.3) respectivamente, con un nivel de confianza del 95%. La Curva de ROC dio como punto de corte 6.1U/L con sensibilidad de 93.8% y especificidad de 71.9%, encontrándose un área de 89% bajo la curva Conclusión: El test de ADA es una prueba confiable para el diagnostico de MEC-TB en pacientes con VIH / Objective: To determine sensitivity, specificity, positive and negative predictive value of the ADA TEST for the tuberculous Meningoencephalitis (TB-MEC) diagnosis in both sexes patients infected with the HIV, hospitalized at the Internal Medicine pavilions of the “Arzobispo Loayza National Hospital”. January – December 2006. Material and Methods: A Cross-sectional study was made. 201 clinical histories of patients with HIV/AIDS hospitalized during January - December 2006 were reviewed. Only 48 histories fulfilled the selection criteria. Results: 29 cases were men (60.4%) and 19 women (39.5%). The greater proportion of cases was found in the range from 26 to 35 years (39.5%). There was found tuberculous meningitis in 16 cases (33.3%), cryptoccocal meningitis in 20 cases (41.6%), cerebral toxoplasmosis in 6 cases (12.5%), viral meningoencephalitis in 4 cases (10.4%), and one neoplasic case. The prevalence of tuberculous meningoencephalitis was 33.3%. The sensitivity was 93,8 (71,7- 98,9), the specificity was 71,9 (84,5- 59,6) and the predictive values positive and negative were 62,5 (42.7-78.8) and 95,8 (79,8- 99,3) respectively, with a 95% of confidence value. The ROC Curve gave a 6.1 U/L as cut point with a sensitivity of 93,8% and a specificity of 71.9%, with an area under the curve of 89%. Conclusion: The ADA test is a reliable test for the diagnosis of tuberculous meningoencephalitis in HIV patients.

Made available in DSpace on 2013-08-07T18:42:05Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000410539-Texto+Completo-0.pdf: 3151865 bytes, checksum: 48590cfe5b0c95580f676ed19d3f2c46 (MD5) Previous issue date: 2009 / Zebrafish is a small teleost considered an ideal model for studies of several human diseases. The genome of this specie has been partially sequenced and studies have shown several genes of this fish are similar to mammals, including humans. Schizophrenia is a serious neuropsychiatric syndrome that attains around 1% of world population. The use of antipsychotic drugs is the base for schizophrenia treatment. Evidence has shown the important role of ATP and adenosine in the central nervous system (CNS). The neurotransmitter ATP is stored in a vesicular manner and released in the synaptic cleft, where can act in specific receptors located in the cell membrane. The inactivation of signaling mediated by extracellular ATP is promoted by a family of enzymes named ectonucleotidases, which includes NTPDases (nucleoside triphosphate diphosphohydrolases) and the ecto-5´-nucleotidase. These enzymes are responsible for the extracellular catabolism of neurotransmitter ATP to adenosine. Studies from our laboratory have shown the presence of ectonucleotidases, such as NTPDases and ecto-5´-nucleotidase in CNS of zebrafish. Acetylcholine (ACh) is a neurotransmitter secreted by cholinergic nerve terminals together with ATP. After exerting its signal in nicotinic and muscarinic receptors, ACh is inactivated by the action of an enzyme named acetylcholinesterase (AChE), which hydrolyzes ACh to choline and acetate. The gene of AChE is already cloned and sequenced and this enzyme activity was detected in zebrafish brain. Considering that: (1) zebrafish is an important experimental model in pharmacological, biochemical, and pathological studies and (2) cholinergic and purinergic systems exert an important role in the CNS signaling and (3) receptors and enzymes involved in these neurotransmitter systems have been already described in this specie, it become important to evaluate the effects of antipsychotic drugs on enzymes involved in adenine nucleotide and acetylcholine hydrolysis in CNS from zebrafish. The in vitro effect of sulpiride, olanzapine, and haloperidol on AChE activity was evaluated. All the drugs inhibited this enzyme activity. In the in vivo study, haloperidol altered the AChE activity, activating ACh hydrolysis and increasing gene expression of AChE. It has been evaluated the in vitro effect of antipsychotic drugs on NTPDase activities in brain membranes of zebrafish. The three tested drugs were able to alter the NTPDase activities. Haloperidol inhibited the ATP and ADP hydrolysis, sulpiride inhbited ADP hydrolysis and olanzapine inhibited ATP hydrolysis. However, none promoted significant alteration on ecto-5’-nucleotidase activity. The results have shown that antipsychotics can influence the enzyme activities involved in the degradation of neurotransmitter ATP and acetylcholine, suggesting that purinergic and cholinergic systems can be a target of neurochemical effects promoted by these drugs. / O zebrafish é um pequeno teleósteo que vem sendo considerado um modelo ideal para estudos de numerosas doenças humanas. O genoma desta espécie está quase todo sequenciado e estudos demonstraram que muitos genes deste peixe são similares ao de mamíferos, inclusive humanos. A esquizofrenia é uma grave síndrome neuropsiquiátrica que acomete em torno de 1% da população mundial. O uso de fármacos antipsicóticos é a base dos tratamentos para esquizofrenia. Evidências têm demonstrado o importante papel desempenhado pelo ATP e a adenosina no sistema nervoso central (SNC). O neurotransmissor ATP é armazenado de forma vesicular e liberado na fenda sináptica, onde pode agir em receptores específicos localizados na membrana celular. A inativação do sinal mediado pelo ATP extracelular é realizada por uma família de enzimas denominadas ectonucleotidases, incluindo as NTPDases (nucleosídeo trifosfato difosfoidrolases) e a ecto-5´- nucleotidase. Estas enzimas são responsáveis pelo catabolismo extracelular do neurotransmissor ATP até adenosina. Estudos do nosso laboratório demonstraram a presença de ectonucleotidases como as NTPDases e a ecto-5´-nucleotidase no SNC de zebrafish. A acetilcolina (ACh) é um neurotransmissor secretado pelos nervos colinérgicos terminais, juntamente com o ATP. Após exercer seu sinal nos receptores nicotínicos e muscarínicos, a ACh é inativada pela ação de uma enzima denominada acetilcolinesterase (AChE), que hidrolisa a ACh até colina e acetato. O gene da AChE já foi clonado e sequenciado e esta atividade enzimática foi detectada em cérebro de zebrafish. Considerando que: (1) o zebrafish é um importante modelo experimental em estudos farmacológicos, bioquímicos e patológicos, e que (2) os sistemas purinérgico e colinérgico exercem um importante papel na sinalização no SNC e (3) receptores e enzimas envolvidos nestes sistemas de neurotransmissão já foram descritos nesta espécie, torna-se importante avaliar os efeitos das drogas antipsicóticas sobre enzimas envolvidas na hidrólise dos nucleotídeos de adenina e acetilcolina no SNC do zebrafish. O efeito in vitro de sulpirida, olanzapina e haloperidol foram avaliados na atividade da AChE. Todas as drogas promoveram inibição na atividade desta enzima. Já no estudo in vivo somente o haloperidol alterou a atividade da AChE, ativando a hidrólise de ACh e aumentando a expressão gênica da AChE. Foi avaliado o efeito in vitro das drogas antipsicóticas sobre a atividade das NTPDases em membranas cerebrais de zebrafish. As três drogas testadas foram capazes de alterar a atividade das NTPDases, sendo que o haloperidol inibiu a hidrólise de ATP e ADP, a sulpirida inibiu a hidrólise de ADP e a olanzapina inibiu a hidrólise de ATP. Entretanto, nenhuma das três drogas testadas promoveu alteração significativa na atividade da ecto-5´- nucleotidase. Os resultados demonstram que os fármacos antipsicóticos podem influenciar na atividade das enzimas envolvidas na degradação dos neurotransmissores ATP e acetilcolina, sugerindo que o sistema purinérgico e colinérgico podem ser alvo dos efeitos neuroquímicos promovidos por estes fármacos.

Neste trabalho relata-se pela primeira vez a determinação de adenosina por um biossensor baseado em tirosinase. O biossensor foi desenvolvido mediante a modificação de um eletrodo de carbono impresso (SPE) com nanopartículas de ouro (AuNPs), tirosinase (Tyr) e Nafion, denominado biossensor Nafion/Tyr/AuNPs/SPE. As AuNPs sintetizadas possuem diâmetro médio de 15,0 ± 1,1 nm e sua função é melhorar a via de condução de elétrons entre a enzima e o eletrodo. Utilizou-se o aprisionamento com filme Nafion® para evitar a lixiviação enzimática da superfície do eletrodo. A tirosinase imobilizada apresentou boa atividade frente ao substrato catecol. Verificou-se que a adenosina atua como um inibidor do tipo não-competitivo. O biossensor é estável durante pelo menos 45 dias. Além disso, foi realizada a eletro-oxidação da adenosina para sua determinação. O biossensor apresenta sensibilidade superior em comparação com SPE, AuNPs/SPE e Nafion/AuNPs/SPE. As curvas de calibração revelaram duas faixas lineares para as concentrações de adenosina, de 1,0 × 10-5 mol L-1 até 5,0 × 10-5 mol L-1 e entre 6,0 × 10-5 mol L-1 e 1,2 × 10-4 mol L -1. O limite de detecção (3 × (desvio padrão + média dos brancos)/coeficiente angular da curva) foi de 7,0 × 10-7 mol L-1. / In this work we report for the first time the determination of adenosine by a biosensor based on tyrosinase. The biosensor was developed by modifying a screen-printed carbon electrode (SPE) with gold nanoparticles (AuNPs), tyrosinase (Tyr) and Nafion, denoted as Nafion/Tyr/AuNPs/SPE biosensor. The synthesized AuNPs have a mean diameter of 15.0 ± 1.1 nm and their function is to improve the electron conduction pathway between the enzyme and the electrode. The entrapment with Nafion® film was selected to prevent the enzyme lixiviation from the electrode surface. Immobilized tyrosinase showed good activity with the catechol substrate. It was found that adenosine acts as a non-competitive type inhibitor. The biosensor is stable for at least 45 days. In addition, the electro-oxidation of adenosine was performed for its determination. The biosensor has superior sensitivity compared to SPE, AuNPs/SPE and Nafion/AuNPs/SPE. Calibration curves revealed two linear ranges for adenosine concentrations of 1,010-5 mol L-1 up to 5,010-5 mol L-1 and from 6,010-5 mol L-1 to 1,210-4 mol L-1. The detection limit (3 × (standard deviation + mean of blanks)/slope of the curve) was 7,010-7 mol L-1.

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