Made available in DSpace on 2014-06-11T19:28:24Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-06-14Bitstream added on 2014-06-13T20:37:15Z : No. of bitstreams: 1 siloto_ev_me_botfmvz.pdf: 809179 bytes, checksum: 7511ba3985111f498b7461c523562d75 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Universidade Estadual Paulista (UNESP) / Os efeitos da aflatoxina e fumonisina e sua associação, sobre a produção e a qualidade dos ovos em poedeiras comerciais, foram avaliados bem como a eficácia de um adsorvente glucano em promover a redução e/ou eliminação total destes efeitos. Foram utilizadas 168 poedeiras com 37 semanas de idade, por um período experimental de 56 dias. O delineamento experimental foi inteiramente casualizado em esquema fatorial 3x2 + 1 (3 tratamentos com micotoxinas: aflatoxina (AF), fumonisina (FU) e aflatoxina + fumonisina (AF + FU); 2 tratamentos com e sem adsorvente; e grupo controle sem micotoxinas e adsorvente), totalizando 7 tratamentos e 6 repetições com 4 aves/gaiola. As rações foram contaminadas, isoladamente ou em combinação, com 1ppm de AF e 25ppm de FU e o adsorvente foi incluído na concentração de 2kg/ton ração. Os tratamentos com presença de AF apresentaram as menores porcentagens (p = 0,0594) de postura (76,72% para AF e 77,38% para AF+FU). A massa de ovos obteve a menor média (p<0,05) no tratamento com AF+FU (49,49 g) que foi diferente do grupo controle (64,06 g). O tratamento com AF apresentou maior espessura e resistência de casca comparado ao grupo controle e ao tratamento com FU. O uso do adsorvente no tratamento com AF reduziu a resistência da casca voltando aos valores próximos aos do controle. As alterações observadas neste estudo são indicativas da toxicidade da aflatoxina na concentração de 1 ppm. Os efeitos da fumonisina foram menos evidentes em função da baixa dose utilizada neste estudo (25mg/kg). O uso de glucano na concentração de 2 kg/ton foi efetivo em reverter alguns dos efeitos tóxicos da aflatoxina e, em menor extensão da fumonisina, quando estas micotoxinas estavam separadamente na ração de poedeiras comerciais / The present study was conducted to evaluate the effects of aflatoxin and fumonisin and their association on production and egg quality in laying hens and was also evaluated the effectiveness of an adsorbent glucan to promote the reduction and/or total elimination of these effects. One hundred and sixty-eight 37-wk-old laying hens were used for a trial period of 56 days. The experimental design was a completely randomized with 3x2+ 1 factorial arrangement (three treatments with mycotoxins: aflatoxin (AF), fumonisin (FU) + fumonisin and aflatoxin (AF + FU), two treatments with and without adsorbent, and the control group without mycotoxin and adsorbent), totaling seven treatments, six replicates and four birds per cage. The mycotoxins were added to rations, singly and in combination, at levels of 1 ppm AF and 25 ppm FU and the adsorbent was included in the dosage of 2kg/ton .The treatments with the presence of AF had the lowest percentages (p = 0,0594) of stance (76,72% to AF and 77,38% to AF + FU). The egg mass received the lowest average (p<0,05) in the treatment with AF + FU (49,49 g) which was different from the control group (64,06 g). Treatment with AF showed higher values of thickness and peel strength compared to the control group and treatment with FU. The use of the adsorbent in the treatment with AF reduced the strength of the shell back to values near baseline. The changes observed in this study are indicative of the toxicity of aflatoxin at a concentration of 1mg/kg. The effects of fumonisin were less evident because of the low levels used in this study (25mg/kg). The level of glucan added to the diets was effective to prevent some of the toxic effects of aflatoxins and to a lesser extent of fumonisin, when the mycotoxins were separately in the diet of laying hens

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Mycotoxins are toxic substances resulting from the secondary metabolism of different strains of fungi. Among the known mycotoxins, aflatoxins are considered the most important, due to its presence and magnitude of contamination in food intended for human consumption and animal. From the observation that milk-producing animals that consume feed contaminated with aflatoxin B1 aflatoxin M1 will excrete in their milk, it is necessary to develop mechanisms for accurate and reliable analysis of this contaminant. Milk is one of the most complete foods "naturally" available for man, with a balanced composition of nutrients; their consumption is recommended for all stages of human development, especially in the early stages of life. This work validated a methodology for analysis of aflatoxin M1 in fluid milk and milk powder, based on the extraction and purification with immunoaffinity column with subsequent separation and detection by liquid chromatography coupled to high performance tandem mass spectrometry. The limits of detection and quantification were determined 0.003 and 0.007 μg L-1 for fluid milk and 0.003 and 0.125 μg L-1 for milk powder. The coefficients of global recovery for the method of extraction of aflatoxin M1 were 95.2% for fluid milk and 95.9% for milk powder, with a standard deviation of 5.7% and 5.3% respectively. Following the development and validation of the analytical method was a study of the occurrence of aflatoxin M1 in milk samples and fluid samples of milk powder. At a total, 173 samples were analyzed, being 123 of them for fluid milk, divided into: 23 raw milk samples, 21 samples of pasteurized milk, and 79 samples of milk UHT; obtained from outlets in the three states of southern Brazil. For milk powder were analyzed 50 samples obtained from retailers in the state of Rio Grande do Sul. The results showed an incidence of positivity of 90.2% (111) in samples of fluid milk in concentration levels from 0.01 - 0.60 μg L-1 with an average contamination of 0.07 μg L-1. For samples of milk powder, 100% (50) were contaminated at levels of concentration from 0.06 - 1.58 μg L-1 with average contamination of 0.54 μg L-1. For samples of liquid milk, 46% (57) exceeded the maximum permitted levels of aflatoxin M1 in milk, proposed by the European Union legislation (0.05 μg L-1) and 0.8% (1) exceeded the proposed maximum permitted by Brazilian legislation (0.5 μg L-1). For the samples of milk powder, 98% (49) exceeded the maximum allowed by the proposed European Union legislation. Based on these results, the method was sensitive and suitable for determination of aflatoxin M1 levels proposed by the Brazilian and European legislations. The high occurrence of aflatoxin M1 in the samples suggests that the monitoring of aflatoxin M1 in milk should be a continuous process in our region. / Micotoxinas são substâncias tóxicas resultantes do metabolismo secundário de diversas linhagens de fungos. Dentre as micotoxinas conhecidas, as aflatoxinas são consideradas as de maior importância devido a sua presença e magnitude de contaminação em alimentos destinados ao consumo humano e animal. A partir da observação de que animais produtores de leite que consumam ração contaminada com aflatoxina B1 irão excretar aflatoxina M1 em seu leite, faz-se necessário o desenvolvimento de mecanismos seguros e confiáveis para análise deste contaminante. O leite é um dos mais completos alimentos disponíveis in natura para o homem, apresentando uma balanceada composição em nutrientes, sendo seu consumo recomendado em todas as etapas de desenvolvimento do ser humano, principalmente nas fases iniciais da vida. Neste trabalho foi validada uma metodologia de análise de aflatoxina M1 em leite fluido e em pó, baseada em extração e purificação com coluna de imunoafinidade com posterior separação e detecção por cromatografia líquida de alta eficiência acoplada a espectrometria de massas sequencial. Os limites de detecção e quantificação determinados foram 0,003 e 0,007 μg L-1 para leite fluido e 0,003 e 0,125 μg L-1 para leite em pó. Os coeficientes de recuperação globais para o método de extração de aflatoxina M1 foram 95,2% para leite fluido e 95,9% para leite em pó, com desvio padrão relativo de 5,7% e 5,3%, respectivamente. Em seguida ao desenvolvimento e validação do método analítico foi realizado um estudo de ocorrência de aflatoxina M1 em amostras de leite fluido e de leite em pó. No total foram analisadas 173 amostras, sendo 123 de leite fluido, divididas em: 23 amostras de leite cru, 21 amostras de leite pasteurizado e 79 amostras de leite UHT, obtidas em estabelecimentos comerciais nos três estados da região sul do Brasil e 50 amostras de leite em pó, obtidas em estabelecimentos comerciais do estado do Rio Grande do sul. Os resultados encontrados mostram uma ocorrência de positividade de 90,2% (111) nas amostras de leite fluido, em níveis de concentração de 0,01 - 0,60 μg L-1 com contaminação média de 0,07 μg L-1. Para as amostras de leite em pó, 100% (50) estavam contaminadas, em níveis de concentração de 0,06 - 1,58 μg L-1 com contaminação média de 0,54 μg L-1. Das amostras de leite fluido 46% (57) excederam os limites máximos permitidos de aflatoxina M1 em leite, propostos pela legislação da União Européia (0,05 μg L-1) e 0,8% (1) excederam os limites máximos permitidos propostos pela legislação brasileira (0,5 μg L-1). Em relação às amostras de leite em pó, 98% (49) excederam os limites máximos permitidos propostos pela legislação da União Européia. Baseado nos resultados encontrados o método mostrou-se sensível e adequado para determinação de aflatoxina M1 nos níveis propostos pelas legislações brasileira e européia. A alta ocorrência de aflatoxina M1 nas amostras analisadas sugere que o monitoramento da aflatoxina M1 em leite deve ser um procedimento contínuo em nossa região.

Resumo: Este trabalho visa fornecer às autoridades sanitárias e ao setor industrial elementos que possam contribuir para a prevenção do perigo químico aflatoxina em amendoim (Arachis hypogaea L.) e seus derivados. O estudo foi realizado em três partes: A Parte A, compreendeu a elaboração dos planos APPCC (Análise dos Perigos e Pontos Críticos de Controle) no processamento das indústrias de beneficiamento de grãos de amendoim (Empresa A) e de fabricação de doces de amendoim (Empresa B), identificando as etapas do processo que apresentam pontos críticos de controle (PCC) para o perigo químico aflatoxina. Observou-se que nos dois processos não há nenhum método que consiga destruir, ou mesmo reduzir os teores, da micotoxina. Assim, restam manter rigorosos controles e monitoramentos em cada PCC quanto aos índices de aflatoxina e de umidade dos grãos como medidas preventivas para prevenir e reduzir a possibilidade de infestação dos grãos por fungos e conseqüente produção de aflatoxina. As etapas de recepção dos grãos, secagem, armazenamento e transporte são as que requerem maior atenção na cadeia de beneficiamento. Para a indústria de doces, as etapas mais críticas são as de recepção e armazenamento de grãos e de doces e o transporte. Na Parte B, foram obtidas as isotermas de sorção até o equilíbrio higroscópico de três variedades de amendoim (Runner IAC 886, Caiapó e Tatu Vermelho), para uma ampla faixa de umidade relativa e temperaturas controladas. Verificou-se que o equilíbrio higroscópico dos três amendoins é diretamente proporcional à umidade relativa do ar e decrescente com o aumento de temperatura, para uma mesma umidade relativa. A variedade Caiapó apresentou uma umidade de equilíbrio menor que as outras variedades, podendo-se dizer que a quantidade de lipídeos e carboidratos ...(Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The purpose of this work is to provide technical information to the authorities and industries on aflatoxin production and prevention measures in peanuts (Arachis hypogaea L.) and its products. The work was divided in three parts: Part A: HACCP (Hazard Analysis and Control of Critical Points) plans elaboration in two industries, one of post-harvest treatment of peanuts (Industry A) and another of peanuts candy products (Industry B). Critical Control Points (CCP) for aflatoxin were indentified, and it was observed that no process measure is available to eliminate or even reduce the toxin. Thus, rigid monitoring and control on aflatoxin content must be carried on to avoid fungus infestation and hence toxin production. The process steps of raw peanuts reception, drying, storage and transportation are critical for Industry A. For Industry B, the most important steps are reception and storage of both raw peanuts and candies. Part B: sorption isotherms for three peanuts varieties (Runner IAC 886, Caiapó e Tatu vermelho) were obtained, for wide relative humidity (RH) and temperature (T) ranges. Hygroscopic equilibrium is directly proportional to RH and conversely proportional to T. Caiapó variety presented the lowest equilibrium moisture content (EMC), confirming that lipids and carbohydrates quantities area correlated to EMC. The Modified Halsey model was the best on representing the experimental sorption data. Part C: microbiological experiments were carried out to assess fungus growth and aflatoxin production in String bean and kernels of Runner IAC 886 peanuts. Two concentrations of Aspergilus flavus spores 104 e 106 spores/mL, were inoculated, two storage periods were used 15 and 30 days, three relative humidities were employed 75 %, 84 % and 90 %, and three temperature were applied 25, 30 and 35º C. Growth analysis was assessed by counting spores ...(Complete abstract click electronic access below) / Orientador: João Cláudio Thoméo / Coorientador: Vanildo Luiz Del Bianchi / Banca: Myrna Sabino / Banca: José Antonio Gomes Vieira / Mestre

Para avaliar o efeito de diferentes linhagens de leveduras, Saccharomyces cerevisiae, vivas, na redução de aflatoxicoses e, contribuir para o entendimento do modo de ação destas leveduras sobre aflatoxina B1 marcada com trítio (AFB13H), foram conduzidos três experimentos. No primeiro experimento, foram utilizados ratos Wistar para investigar o efeito de duas linhagens de S. cerevisiae (Y1026 e Y904), e da suplementação com aminoácidos na redução de aflatoxicoses. O bioensaio, em delineamento inteiramente casualizado, foi conduzido por 28 dias para avaliar sete tratamentos (dietas), sendo um livre de aflatoxinas e seis contendo 400&#61549;g kg-1 de aflatoxinas; destes, cinco com leveduras, a saber: Y1026 (níveis de 0,5; 1,0 e 5,0%) e Y904 (níveis de 1% e 1%+1000ppm de metionina + 1000 ppm de cisteína). Não foram observadas diferenças estatistiticamente significativas no consumo de alimentos, ganho de peso, conversão alimentar e função hepática entre os animais submetidos aos diferentes tratamentos. No entanto, o exame histopatológico revelou que os animais que receberam aflatoxinas sem leveduras sofreram danos mais severos em relação aos que receberam aflatoxinas juntamente com leveduras, os quais apresentaram poucos danos celulares. Conclui-se que, as duas linhagens de leveduras em todas as situações estudadas apresentaram capacidade de reduzir as aflatoxicoses. O segundo ensaio foi conduzido com o objetivo de investigar o efeito de diferentes doses da levedura Y1026 no controle de aflatoxicoses em ratos. Neste bioensaio, os animais foram distribuídos em gaiolas individuais ao acaso, e foram submetidos a 7 tratamentos (dietas) por 60 dias, sendo uma sem aflatoxinas e seis contaminadas com 550 &#61549;g kg-1 de aflatoxinas, das quais cinco contendo a levedura Y1026 (doses: 0,2; 0,5; 1,0; 2,0 e 5,0%). Foram realizadas análises sobre o aproveitamento do alimento, funções hepáticas e tecido hepático. O consumo de alimentos pelos animais alimentados com dieta livre de aflatoxinas foi maior do que pelos animais que receberam dietas contaminadas com a toxina, os demais parâmetros para julgamento do aproveitamento dos alimentos não diferiram estatisticamente entre os animais que foram submetidos a ambos os tratamentos. A atividade de enzimas hepáticas foi maior nos animais que não receberam a toxina do que nos demais. O exame histopatológico revelou que os animais que receberam aflatoxinas e aflatoxinas mais 0,2 ou 0,5% da levedura apresentaram sinais claros de hepatotoxidez e que os demais animais que ingeriram os níveis mais altos da levedura sofreram poucos danos celulares. Conclui-se que, a dose de levedura Y1026 aplicada foi determinante na redução das aflatoxicoses em ratos Wistar. No último bioensaio, trinta ratos foram alimentados por 28 dias seguindo-se quatro tratamentos (dietas): uma dieta livre de aflatoxinas e as outras três contaminadas com 500 &#61549;g kg 1 de aflatoxina, sendo uma o controle com aflatoxinas e as outras duas na presença de 1% de levedura Y1026 ou Y904. No 18º dia, seis animais de cada um dos tratamentos que recebiam aflatoxinas foram transferidos para gaiolas metabólicas, onde permaneceram por cinco dias em adaptação e, no 23º dia, estes receberam, por via oral, uma dose simples de 2&#61549;Ci/animal de AFB13H. Os animais restantes (três ratos em cada um dos tratamentos) foram utilizados nos exames histopatológicos. A radioatividade foi determinada 12, 24, 48, 72, 96 e 120 horas após a introdução do material radioativo nos animais. Os animais que receberam dietas contendo as leveduras apresentaram a absorção, a distribuição e a excreção da radioatividade mais lenta do que aqueles que não receberam os probióticos. O exame histopatológico revelou que os animais que ingeriram leveduras sofreram poucos danos celulares e que aqueles que não receberam levedura foram muito afetados. As leveduras apresentaram habilidade de reduzir aflatoxicoses e modificaram a absorção, a distribuição e a excreção da radioatividade de AFB13H em ratos Wistar. / The capacity of Saccharomyces cerevisiae, from two Strain, to reduce aflatoxicosis and the effect of yeast cells on tritium-labeled B1 aflatoxin (AFB13H) were investigated in three distinct studies. The effects of S. cerevisiae Y1026 and Y904 strains and diets amended with amino acids on the reduction of aflatoxicosis in Wistar rats were evaluated in the first study. A completely randomized block-designed bioassay with Wistar rats was conducted to evaluate seven formulations (Treatments), which consisted of an aflatoxin-free formulation and six formulations with 400 &#61549;g kg-1 of aflatoxins. Of these, three formulations had the yeast strain Y1026 (at 0.5, 1.0 and 5.0%) and two had the strain Y904 (at 1% and 1%+1000ppm of methionine + 1000 ppm of cysteine). No statistical differences were observed for the food consumption, weights of the body organs, feed conversion and liver function between the animals fed the different treatments. Histopathological analysis revealed that animals fed aflatoxins diet without yeast cells had liver damage caused by the toxins and those that were fed aflatoxin-diet amended with yeast cells had less liver tissue damage. Therefore, the results obtained suggested that the presence of either yeast strain in the formulations caused a reduction in aflatoxicosis. The second study was conducted to investigate the effect of different dosages of the yeast strain Y1026 on the control of aflatoxicosis in rats. The bioassay was conducted with rats randomly placed in individual cages and fed seven different diets (7 treatments) for 60 days. These were an aflatoxin-free formulation and six others containing aflatoxins at 550 &#61549;g kg-1, of which five had the yeast strain Y1026 (concentrations at 0.2; 0.5; 1.0; 2.0 and 5%). Feed conversion, liver functions indexes and liver tissue parameters were evaluated. The activity of the liver enzymes was greater in animals that fed the toxin-free diet when compared to other animals. Histopathological analysis showed that animals fed aflatoxin containing diets with and without 0.2 or 0.5% yeast cells showed clear signs of hepatotoxicity, while animals that were fed diets with higher concentrations of yeast cells had less liver tissue damage. The concentration of the yeast cells (Y1026) used in the formulations was correlated with the reduction of aflatoxicosis in Wistar rats. The third study fed Wistar rats an aflatoxin-free diet and diets with aflatoxins (at 500 &#61549;g kg 1) and aflatoxin amended with a 1% concentration of the yeast strains Y1026 or Y904. In this study, six animals from each group fed the aflatoxin-diets were transferred to metabolic cages and received a single oral dose of AFB13H at 2&#61549;Ci/animal. Three animals of each treatment were kept at the initial conditions and their liver tissues were used for histopathological analysis. Radiation levels in the animals were monitored at 12, 24, 48, 72, 96 and 120 h after receiving the labeled aflatoxin. Animals fed diets with active yeast cells had absorption, distribution and excretion levels of the labeled toxin different than those that did not receive the probiotic. Histopathological analysis showed that animals fed diets with yeast cells had less liver tissue damage while those fed the aflatoxin-diet had significantly higher liver damage. Therefore, these results indicate that active yeast cells have the ability to reduce aflatoxicosis and modify the absorption, distribution and excretion of radioactivity from AFB13H in Wistar rats.

O objetivo do trabalho foi avaliar a capacidade de cepas de bactérias ácido-láticas (BAL) em remover a aflatoxina M1 (AFM1) em solução tampão fosfato salina (TFS) e em amostras de leite. Nos ensaios com TFS, verificou-se a influência do tempo de contato (15 min. ou 24 horas) entre as células de sete cepas de BAL e AFM1, as diferenças entre a eficiência de remoção das bactérias viáveis e inviabilizadas termicamente, e a estabilidade do complexo BAL/AFM1 formado. As três cepas de BAL com maior percentual (> 33%) de remoção da AFM1 nos ensaios com TFS foram re-avaliadas utilizando-se leite UHT (ultra-high-temperature) desnatado artificialmente contaminado com AFM1. Para isso, foram utilizadas somente células inviabilizadas termicamente, verificando-se o efeito da temperatura (4ºC ou 37ºC) sobre a capacidade de remoção da toxina por 15 minutos. A remoção média da AFM1 pelas cepas de BAL em TFS variou entre 5,60±0,45 e 45,67±1,65% (n=3), sendo que as células inviáveis obtiveram percentuais de remoção de AFM1 significativamente maiores que as células viáveis, em ambos os tempos de contato analisados (15 min. ou 24 horas), não havendo diferença significativa entre os tempos. Observou-se que o complexo BAL/AFM1 obtido nos ensaios com TFS é instável, pois 40,57±4,66 a 87,37±1,82% da AFM1 retida pela bactéria foram recuperados em solução após a lavagem do complexo com TFS. As três cepas de BAL com maior percentual de remoção da AFM1 em TFS (Lactobacillus rhamnosus, Lactobacillus delbrueckii spp. bulgaricus e Bifidobacterium lactis) não apresentaram diferenças significativas nos ensaios com leite UHT a 37ºC. Somente B. lactis apresentou maior capacidade de remover a AFM1 do leite UHT a 4ºC. Os resultados demonstraram que a remoção de AFM1 empregando-se as BAL em alimentos é viável para reduzir as concentrações da toxina a níveis seguros. Entretanto, estudos adicionais são necessários a fim de investigar os mecanismos envolvidos na remoção da toxina pelas BAL com vistas à aplicação em indústrias de alimentos. / The purpose of this study was to evaluate the ability of strains of lactic acid bacteria (LAB) to remove aflatoxin M1 (AFM1) in phosphate buffer saline (PBS) and in milk samples. In the assays with PBS, the influence of contact time (15 min. or 24 hours) between the cells of seven LAB strains and AFM1 was evaluated, as well as the differences between the removal efficiency of viable and non-viable (heat-killed) bacteria, and the stability of AFM1/LAB complex produced. The three LAB strains with the highest percentage (> 33%) of AFM1 removal in the tests with PBS were reevaluated using UHT (ultra-high-temperature) skimmed milk spiked with AFM1. For these assays, only non-viable bacterial cells were used for checking the effect of temperature (4ºC or 37ºC) on the toxin removal capacity during 15 min. The mean AFM1 removal by LAB strains in PBS ranged from 5.60±0.45 and 45.67±1.65% (n=3). Non-viable cells showed AFM1 removal percentages significantly higher than viable cells in both contact times (15 min. or 24 hours), although there were not significant differences between these contact times. The AFM1/LAB complex resulted from the tests with PBS was unstable, as 40.57±4.66 to 87.37±1.82% of AFM1 retained by the bacteria were recovered in solution after washing the complex with PBS. The three LAB strains with the highest percentage of AFM1 removal in the PBS assays (Lactobacillus rhamnosus, Lactobacillus delbrueckii spp. bulgaricus and Bifidobacterium lactis) showed no significant differences in the UHT skimmed milk assays at 37ºC. Only B. lactis had greater ability to remove AFM1 in UHT milk at 4ºC. The results demonstrated that the removal of AFM1 by using LAB in foods is viable to reduce the toxin concentrations until safe levels. However, additional studies are needed to investigate the mechanisms involved in the toxin removal by LAB aiming its application in food industries.

Orientador: Jose Luiz Pereira / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-08-13T15:09:21Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Copetti_MarinaVenturini_D.pdf: 6048122 bytes, checksum: 93c1ab6938ae661500c36bb19ce26312 (MD5) Previous issue date: 2009 / Resumo: O Brasil se encontra entre os maiores produtores mundiais de cacau. Parte da sua produção é destinada à exportação, principalmente após passar por algum processamento industrial, e o restante se destina ao consumo interno. A qualidade obtida ao final do processamento do cacau depende de uma ampla variedade de fatores, dentre os quais os microrganismos desempenham um papel fundamental. A presença de fungos é observada em várias fases do processamento, o que além do aspecto deteriorativo representa um perigo toxicológico devido a possibilidade de síntese de micotoxinas. Na presente tese são apresentados os resultados sobre a presença de fungos, ocratoxina A e aflatoxinas em um total de 494 amostras de cacau analisadas em diferentes fases do processamento. A maior quantidade e diversidade de fungos foi encontrada em amostras coletadas durante o processamento na fazenda, especialmente durante a secagem e estocagem das amêndoas. Foram isolados 1132 espécies potencialmente toxigênicas do gênero Aspergillus: A. flavus, A. parasiticus, A. niger, A. carbonarius e grupo dos A. ochraceus. Com relação à presença de micotoxinas, as amostras da secagem e estocagem foram as que apresentaram maiores níveis de ocratoxina A e aflatoxinas na fazenda, enquanto que nas amostras coletadas em indústrias processadoras de cacau os maiores níveis de ocratoxina A foram detectados na casca, torta e cacau em pó e os de aflatoxina, nos nibs e liquor. Nas amostras de chocolate observou-se uma relação direta entre a quantidade de cacau no produto e os níveis de aflatoxinas e ocratoxina A, sendo estes maiores em chocolate em pó e chocolate meio amargo. Também foram conduzidos experimentos para avaliar as condições que afetam a produção de ocratoxina A no cacau por A. carbonarius. Foi observado que, diante da presença de inóculo, a produção de ocratoxina A já ocorre durante a fermentação. Os níveis de ocratoxina A foram menores quando sementes de cacau com polpa integral foram fermentadas durante 6 dias em caixas, se comparados aos obtidos com sementes parcialmente despolpadas e conduzidas à secagem sem prévia fermentação. Os resultados em geral mostraram a existência de uma grande diversidade de fungos, muitos dos quais toxigênicos, durante o processamento do cacau e a inter-relação de fatores intrínsecos, ambientais e de processamento pareceram determinar a ocorrência ou não de micotoxinas / Abstract: Brazil is one of the biggest cocoa producing countries. Part of its production is exported, mainly after undergoing some industrial processing, and the other supplies the internal market. The quality of the final cocoa product depends on several factors, and microorganisms play an important role on this. Investigations have demonstrated the presence of filamentous fungi in many processing stages. Besides the spoilage potential, those are a cause for concern from the toxicological aspect, since mycotoxins may be produced. This thesis presents the results concerning the presence of fungi, ochratoxin A and aflatoxins in a total of 494 cocoa samples collected at different processing stages, from farm to market. The greatest occurrence and the major diversity of fungi were found in samples collected during the drying and storage of the beans on the farm. A total of 1132 potentially toxigenic fungi were isolated, belonging to the species A. flavus, A. parasiticus A. niger, A. ochraceus group and A. carbonarius. Regarding the presence of mycotoxins, samples collected during drying and storage presented the highest ochratoxin A and aflatoxin levels amongst samples collected at farm. During industrialization, the most contaminated products were the cocoa shell, cocoa cake and cocoa cake with respect to ochratoxin A. The aflatoxin levels were higher in the nibs and liquor. A direct correlation between the amount of cocoa in the product and the ochratoxin A level in the chocolate was observed. Dark chocolate and powdered commercial cocoa were the most contaminated samples. An additional experiment was carried out to evaluate the conditions affecting ochratoxin A production by A. carbonarius in cocoa on the farm. It was observed that ochratoxin A production could start during fermentation if toxigenic fungi were present, and lower ochratoxin levels were found when the integral beans were fermented during 6 days in box if compared to those with pulp partially removed and submitted to drying fermentation. In general, during cocoa processing, a wide variety of fungi was found, some of these toxigenic. Intrinsic, environmental and processing factors acting together seemed to determine the production of mycotoxins in cocoa / Doutorado / Doutor em Ciência de Alimentos

Submitted by Kamila Costa (kamilavasconceloscosta@gmail.com) on 2015-07-14T19:57:04Z No. of bitstreams: 1 Dissertação - Silmara M Miranda.pdf: 1535464 bytes, checksum: 2e2afc8694fa41a1cb6af9490965b12b (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2015-07-16T19:32:15Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissertação - Silmara M Miranda.pdf: 1535464 bytes, checksum: 2e2afc8694fa41a1cb6af9490965b12b (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2015-07-16T19:36:56Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissertação - Silmara M Miranda.pdf: 1535464 bytes, checksum: 2e2afc8694fa41a1cb6af9490965b12b (MD5) / Made available in DSpace on 2015-07-16T19:36:56Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertação - Silmara M Miranda.pdf: 1535464 bytes, checksum: 2e2afc8694fa41a1cb6af9490965b12b (MD5) Previous issue date: 2014-06-27 / FAPEAM - Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do Amazonas / Filamentous fungi are organisms with the ability to produce various secondary metabolites, among them, mycotoxins, characterized by the toxic properties that have the human and animal organism. Are produced mostly by species of the genera Aspergillus and Penicillium, by engaging with relevant food contamination and mycotoxin production. The study aimed to identify the mycoflora and mycotoxins in samples of cassava produced in TNL in the Amazon region, Brazil flour. 30 samples of cassava flour in the local market and evaluated for moisture and water activity (aw), fungi (isolation, purification and identification by traditional taxonomy) and mycotoxins were collected. Confirmation of toxigenic fungal species was made by molecular biology, scanning electron microscopy was performed in three toxigenic species and mycotoxins were identified by MALDI-TOF. The results of moisture and (aw) ranging from 7.08 to 13.55% and 0.37 to 0.69 respectively. Among the samples analyzed, 30% had fungi and of these 18.5% were toxigenic. The species most frequently identified were Aspergillus flavus, Penicillium waksmanii and Penicillium citrinum. Among the toxigenic fungi Penicillium citrinum, Aspergillus flavus and Aspergillus amoenus were found. MALDI-TOF showed the presence of aflatoxin B1, patulin and citrinana more frequently. We conclude that greater attention to cassava flour, one of the most consumed foods in the north of the country is needed as toxigenic fungi and mycotoxins were found in the samples analyzed. / Fungos filamentosos são organismos com a capacidade de produzir diversos metabólitos secundários, dentre eles, as micotoxinas, caracterizadas pelas propriedades tóxicas que apresentam ao organismo humano e animal. São produzidas em sua maioria por espécies dos gêneros Aspergillus e Penicillium, relevantes pelo envolvimento com contaminação de alimentos e produção de micotoxinas. O estudo objetivou identificar a micobiota e ocorrência de micotoxinas em amostras de farinha de mandioca produzidas em Coari na região Amazônica, Brasil. Foram coletadas 30 amostras de farinha de mandioca no mercado local e avaliadas quanto à umidade e atividade de água (aw), fungos (isolamento, purificação e identificação pela taxonomia tradicional) e micotoxinas. A confirmação das espécies fúngicas toxigênicas foi feita pela biologia molecular, foi realizada microscopia eletrônica de varredura em três espécies toxigênicas e micotoxinas foram identificadas por MALDI-TOF. Os resultados de umidade e (aw) variaram de 7,08 a 13,55% e 0,37 a 0,69 respectivamente. Entre as amostras analisadas, 30% apresentaram fungos e destes 18,5% foram toxigênicos. As espécies identificadas com maior frequência foram Aspergillus flavus, Penicillium waksmanii e Penicillium citrinum. Entre os fungos toxigênicos foram encontrados Penicillium citrinum, Aspergillus flavus e Aspergillus amoenus. MALDI-TOF demonstrou presença de aflatoxina B1, citrinana e patulina com maior frequência. Conclui-se que é necessário maior orientação para os produtores da farinha de mandioca, um dos alimentos mais consumido na região Norte do país, pois fungos toxigênicos e micotoxinas foram encontrados nas amostras analisadas.

O objetivo da pesquisa foi avaliar os efeitos da AFB1 e FB1, isoladas e associadas e com ou sem a inclusão de um antioxidante (cúrcuma) em frangos de corte, utilizando-se os seguintes tratamentos (T): T1 (controle): 0 AFB1 + 0 FB1 + 0 Cúrcuma; T2: 0 AFB1 + 0 FB1 + 222 mg/kg Cúrcuma; T3: 0 AFB1 + 20 mg/kg FB1 + 0 Cúrcuma; T4: 0 AFB1 + 20 mg/kg FB1 + 222 mg/kg Cúrcuma; T5: 0,5 mg/kg AFB1 + 0 FB1 + 0 Cúrcuma; T6: 0,5 mg/kg AFB1 + 0 FB1 + 222 mg/kg Cúrcuma; T7: 0,5 mg/kg AFB1 + 20 mg/kg FB1 + 0 Cúrcuma; T8: 0,5 mg/kg AFB1 + 20 mg/kg FB1 + 222 mg/kg Cúrcuma. Os parâmetros avaliados incluíram: conversão alimentar, ganho de peso, consumo alimentar, proteínas séricas, hematologia, enzimas hepáticas, histopatologia de vísceras, resposta vacinal, resíduos de aflatoxinas e fumonisina em vísceras e músculos. Os dados foram analisados como um fatorial 2 x 2 x 2 por análise de variância. Não houve interação significativa para os três fatores analisados no desempenho zootécnico, porém houve diferença significativa nas dietas contendo aflatoxina, quando comparada com as outras dietas, para todas as variáveis analisadas. A AST e LDH foram as únicas variáveis significativas para a interação de todos os fatores (AFB1, FB1 e CMT), porém as outras variáveis, exceto a GGT, apresentaram diferença significativa nas dietas contendo aflatoxina, quando comparada com as outras dietas, para todas as variáveis analisadas. As lesões histopatológicas no fígado, rim e bursa de Fabricius foram aumentando gradualmente do tratamento controle até o tratamento contendo adição de aflatoxina e fumonisina, com ou sem cúrcuma, sendo que o efeito mais severo foi observado nos órgãos desses tratamentos. Não houve diferença significativa com a inclusão da cúrcuma. Não houve nenhuma variável significativa para a interação de todos os fatores avaliados para a biometria dos órgãos, porém fígado, rim e coração apresentaram diferença significativa nas dietas contendo aflatoxina, quando comparada com as outras dietas, para todas as variáveis analisadas. Nenhuma variável foi significativa para a interação de todos os fatores avaliados para o hemograma aos 21 dias, porém aos 42 dias, leucócitos, linfócitos e basófilos apresentaram diferença significativa para a interação de todos os fatores. Não houve diferença estatística para a interação dos três fatores analisados para os títulos de anticorpos para a doença de Newcastle. Os resíduos de FB2 no fígado e AFB2 no músculo peitoral foram as únicas variáveis significativas para a interação de todos os fatores analisados. Os resultados obtidos indicam que não houve efeito da cúrcuma na diminuição dos efeitos deletérios da aflatoxina e fumonisina. / The objective of this research project was to evaluate the effects of AFB1 and FB1, alone or in combination and associated or not with an antioxidant (turmeric) in broiler chickens, using the following treatments (T): T1 (control): 0 AFB1 + 0 FB1 + 0 Turmeric; T2: 0 AFB1 + 0 FB1 + 222 mg/kg Turmeric; T3: 0 AFB1 + 20 mg/kg FB1 + 0 Turmeric; T4: 0 AFB1 + 20 mg/kg FB1 + 222 mg/kg Turmeric; T5: 0.5 mg/kg AFB1 + 0 FB1 + 0 Turmeric; T6: 0.5 mg/kg AFB1 + 0 FB1 + 222 mg/kg Turmeric; T7: 0.5 mg/kg AFB1 + 20 mg/kg FB1 + 0 Turmeric; T8: 0.5 mg/kg AFB1 + 20 mg/kg FB1 + 222 mg/kg Turmeric. The parameters evaluated included: feed conversion, weight gain, food intake, serum proteins, hematology, liver enzymes, histopathology of viscera, vaccine response and residues of aflatoxin and fumonisin in tissues of viscera and muscles. Data were analyzed as a 2 x 2 x 2 factorial by analysis of variance. There was no significant interaction for the three analyzed factors on the performance, but there were significant differences in the diets containing aflatoxin when compared to the other diets, for all variables analyzed. AST and LDH were the only significant variables for the interaction of all factors (AFB1, FB1 e CMT), but other variables, with the exception of GGT, showed significant difference in diets containing aflatoxin when compared to other diets for all the variables analyzed. Histopathological lesions in the liver, kidney and bursa of Fabricius were gradually increased from the control treatment to aflatoxin and fumonisin treatment, with or without turmeric, with the most severe effect being observed in the organs of these treatments. There was no significant variable for the interaction of all factors evaluated for organ biometry, but liver, kidney and heart showed a significant difference in diets containing aflatoxin when compared to other diets for all variables analyzed. No variable was significant for the interaction of all factors evaluated for the blood test at 21 days, but at 42 days leukocytes, lymphocytes and basophils showed significant differences for the interaction of all factors. There was no statistical difference for the interaction of all factors analyzed for antibody titers to Newcastle disease. The residues of FB2 in the liver and AFB2 in the pectoral muscle were significant for the interaction of all the factors. The results showed no effect of turmeric powder in reducing the deleterious effects of aflatoxin and fumonisin.

O aproveitamento de células vivas de leveduras – Saccharomyces cerevisiae – como probiótico, e, componentes extraídos da parede celular desta levedura, como aditivos, para desejadas funções, têm sido objeto de interesse cada vez maior, pelos resultados promissores até então obtidos e, concomitantemente, pelo excedente de biomassa de leveduras gerado pela indústria de etanol e cerveja no Brasil. Por estes motivos, foram conduzidos dois experimentos, um com o objetivo de investigar a possibilidade de utilizar o milho como um veículo alternativo para a levedura S. cerevisiae – como probiótico, e outro, com o propósito de estudar a capacidade de reduzir danos promovidos pelas aflatoxinas, das leveduras vivas, das termolisadas e mananoligossacarídeos. O primeiro experimento foi montando em um arranjo fatorial 2x2x5, constituído de duas concentrações de leveduras (1 e 2%), grãos de milho com dois teores de umidade (16 e 20%) e 5 períodos de armazenamento (0, 15, 30, 90 e 110 dias), distribuído ao acaso, com 4 repetições. O outro estudo, foi um bioensaio, conduzido durante 28 dias, com ratos Wistar, em um experimento com delineamento inteiramente casualizado, com 7 tratamentos e 5 repetições. A concentração de células aplicadas nos grãos de milho não influenciou a viabilidade das leveduras durante o armazenamento. A umidade do substrato interferiu no desenvolvimento da viabilidade, e que, em substratos com maiores teores de umidade foram observadas menores médias de viabilidade durante o armazenamento. A viabilidade das células de leveduras permaneceu constante por 30 dias e aos 90 dias em armazenamento foram observadas reduções no número de células viáveis. As leveduras apresentaram viabilidade de 70% aos 110 dias em armazenamento. A inoculação de leveduras vivas em grãos de milho, visando a sua utilização como probiótico, é uma técnica viável. Os tratamentos com levedura termolisada e mananoligossacarídeos não foram capazes de reduzir os danos promovidos pelas aflatoxinas em nível de hepatócitos. As leveduras vivas foram capazes de reduzir os danos promovidos pelas aflatoxinas em nível celular. / The utilization of live cells of yeasts - Saccharomyces cerevisiae - as probiotic, and, extracted components of the cellular wall of this yeast, as addictive, to desired functions, have been object of interest, due the promising results until then obtained and, simultaneously, for the excess of biomass of yeasts generated by the etanol and beer industry in Brazil. For these reasons, two experiments were led, one with the objective of investigate the possibility to use the corn as an alternative vehicle for the yeast S. cerevisiae - as probiotic, and other, with the purpose of studying the capacity to reduce damages promoted by the aflatoxins of the live yeasts, termoliseds and mananoligossacarides. The first experiment was mounted in a factorial arrangement 2x2x5, constituted of two concentrations of yeasts (1 and 2%), corn grains with two moisture contents (16 and 20%) and 5 storage periods (0, 15, 30, 90 and 110 days), random arrangement, with 4 replications. The other study, was a bioassay, led during 28 days, with rats Wistar, in completely randomzed desing, with 7 treatments and 5 repetitions. The concentration of applied cells in the corn grains did not influence the viability of the yeasts during the storage. The moisture of the substrate interfered in the development of the viability, and that in substrate with bigger moisture contents smaller viability averages were observed during the storage. The viability of the cells of yeasts remains constant for 30 days and to the 90 days in storage reductions were observed in the number of viable cells. The yeasts presented viability from 70% to the 110 days in storage. The inoculation of live yeasts in corn grains, aiming its use as probiotic, is a viable technique. The treatments with yeast termolised and mananoligossacarídes were not capable of reducing the damages promoted by the aflatoxins in hepatocites level. The live yeasts were capable to reduce the damages caused by the aflatoxins in cellular level.

As aflatoxinas são metabólitos secundários produzidos por fungos toxigênicos das espécies Aspergillus flavus, A. parasiticus e A. nomius. São amplamente encontradas em matérias-primas de rações animais, em especial o milho, e têm a capacidade de levar a quadros clínicos agudos ou crônicos de aflatoxicose, caracterizados por, desde a morte por hepatite aguda até a diminuição do desempenho zootécnico por diminuição de peso ou consumo de ração. A aflatoxina B1 tem sido considerada o metabólito mais perigoso, uma vez que possui alto poder hepatotóxico, além de ser mutagênica e carcinogênica. Atualmente a ciência trabalha rumo à descoberta de substâncias que sejam indicadoras confiáveis de contaminação por componentes tóxicos em homens e em animais, os chamados biomarcadores, que medem uma mudança celular, biológica ou molecular em um meio biológico (tecidos humanos, células ou fluídos) que fornecem informação a respeito de uma doença ou exposição a uma determinada substância. Sua detecção pode auxiliar na identificação, no diagnóstico e no tratamento de indivíduos afetados que podem estar sob risco, mas ainda não exibem os sintomas. Sendo assim, com o auxílio de análises que confirmem a patogenicidade da aflatoxina B1 (determinação da atividade de enzimas hepáticas, da avaliação da função renal, de hematologia, da dosagem de minerais séricos e da avaliação de desempenho zootécnico), o objetivo deste trabalho foi avaliar a aplicabilidade da determinação de resíduos hepáticos de aflatoxinas e do aduto sérico AFB1-lisina na avaliação da eficiência de adsorventes em frangos de corte. Utilizou-se 240 pintos de 1 dia, machos, de linhagem Cobb 500&reg;, distribuídos aleatoriamente em 4 dietas experimentais: Controle Negativo: Ração Basal (RB); RB &#43; 0,5% de adsorvente ((aluminosilicato de cálcio e sódio hidratado/HSCAS); RB &#43; 0,5% de adsorvente &#43; 500 &micro;g de AFB1/kg de ração e; RB &#43; 500 &micro;g de AFB1/kg de ração.Os resultados experimentais mostram que o efeito deletério da AFB1, na concentração utilizada, é mais pronunciado que os efeitos protetores do HSCAS sobre os parâmetros de saúde dos animais. Não houve ação efetiva do adsorvente utilizado sobre quase nenhuma variável estudada, apenas para a redução das lesões histopatológicas em fígado, na redução da concentração de gama-glutamiltransferase (GGT), fósforo e aumento da contagem de hemáceas aos 21 dias de idade. Porém, influenciou positivamente a redução de resíduos hepáticos de aflatoxina G1 aos 21 dias e as concentrações de AFB1-lisina sérica aos 21 e aos 42 dias de idade. Estes dados são importantes porque permite concluir que, embora sintomatologicamente o HSCAS não tenha exercido função efetiva, molecularmente foi capaz de mostrar de eficácia sobre os alguns biomarcadores de aflatoxinas no organismo das aves / Aflatoxins are secondary metabolites produced by toxigenic fungi of the species Aspergillus flavus, A. parasiticus and A. nomius. They are widely found in raw materials of animal feed, in particular corn, and have the ability to lead to clinical cases of acute or chronic aflatoxicosis, characterized by acute hepatites leading to death until lower performance by decreased weight or feed intake. Aflatoxin B1 has been considered the most dangerous metabolite, since it has high hepatotoxic power, besides being mutagenic and carcinogenic. Nowadays science works toward the discovery of substances that are reliable indicators of contamination by toxic components in humans and animals, called biomarkers, which measure a cell change, biological or molecular in a biological medium (human tissues, cells or fluids) that provide information regarding a disease or exposure to a particular substance. Its detection can assist in the identification, diagnosis and treatment of affected individuals who may be at risk, but still do not exhibit symptoms. Thus, with the help of analysis that confirm aflatoxin B1 pathogenicity (determination of liver enzymes activity, assessment of renal function, hematology, dosage of serum minerals and evaluation of animal performance), the objective of this work was to evaluate the applicability of the determination of aflatoxin liver residues and serum AFB1-lysine adduct in the evaluation of the adsorbents efficiency in broiler chickens. Two hundred and fourty day-old male chicks, Cobb 500&reg; lineage, were randomly distributed into 4 experimental diets: Negative Control: Basal Feed (BF); BF &#43; 0.5% adsorbent (hydrated sodium calcium aluminosilicate/HSCAS); RB &#43; 0.5% adsorbent &#43; 500 &micro;g AFB1/kg of feed; and RB &#43;500 &micro;g AFB1/kg of feed. The experimental results show that the deleterious effect of AFB1, at the concentration used, is more pronounced that the protective effects of HSCAS on animal health parameters. There was no effective action of the adsorbent used on almost any variable studied, only for the reduction of the histopathological lesions in the liver, reduction of gamma-glutamyltransferase (GGT) and phosphorus concentration, and increased count of red blood cells at 21 days. However, influenced positively the reduction of aflatoxin G1 liver residues at 21 days and the concentrations of serum AFB1-lysine at 21 and 42 days. These are important data because they allow to conclude that, although symptomatically the HSCAS has not exercised effective function, molecularly was able to show some efficacy on aflatoxin biomarkers in the birds body