The aim of the diploma thesis was to provide an overview of the prevalence of allergenic and potentially allergenic metals in eye shadows. The diploma thesis gives an overview of the legislation on cosmetics and description of the types of allergenic reactions caused by allergenic and potential allergenic metals in eye shadows. Listed below are the preparation methods of the samples for analysis and the list of the methods by which can the selected metals be analyzed. The experimental part of the diploma thesis deals with an analysis of selected allergenic and potentially allergenic metals in eye shadows. In the experimental part of diploma thesis method of sample preparation for analysis of eye shadows and a method of analysis of sample of eye shadows by ICP-MS have been optimized. Monitored analytes were selected metals. Altogether 6 samples of eye shadows from different manufacturers were chosen. Measured results have been statistically processed, confronted with the applicable legislation and assessed in terms of possible allergic reactions.

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Résumé : PROBLÉMATIQUE: L’exposition résidentielle à l’humidité excessive ou aux moisissures est maintenant reconnue comme un facteur important influençant la santé respiratoire. Cette problématique a été peu étudiée chez les étudiants universitaires, bien que vulnérables par leur faible revenu et leur statut de locataire. OBJECTIFS: Cette maîtrise vise à décrire la prévalence (a) de l’exposition résidentielle à l’humidité excessive ou aux moisissures et (b) des maladies respiratoires chez les étudiants universitaires, ainsi qu’à (c) examiner l’association entre l’exposition résidentielle à l’humidité excessive ou aux moisissures et ces maladies. MÉTHODES: En 2014, une enquête électronique a été réalisée auprès de 2097 étudiants enregistrés à l’Université de Sherbrooke (Québec, Canada). Lorsque possible, des questions et des scores validés ont été utilisés pour estimer les prévalences des maladies respiratoires (rhinite allergique, asthme et infections respiratoires), de l’exposition résidentielle à l’humidité excessive ou aux moisissures et des covariables (ex. : revenu annuel familial, statut tabagique, atopie familiale, caractéristiques de l’étudiant). Les associations entre cette exposition et ces maladies ont d’abord été examinées par des tests de chi-carré en utilisant un seuil alpha de 0,05. Des régressions logistiques multivariées ont ensuite été utilisées pour déterminer les associations brutes et ajustée entre cette exposition et les maladies respiratoires. Les analyses descriptives ont été pondérées pour le sexe, l’âge et le campus d’étude. RÉSULTATS: L’exposition à l’humidité excessive ou aux moisissures était fréquente parmi les participants (36,0%; Intervalle de confiance (IC)95% : 33,9-38,1). Ceux-ci ont également été nombreux à rapporter une rhinite allergique (23,9%; IC95% :22,0-25,8), de l’asthme (32,6%; IC95% : 30,5-34,7) et des infections respiratoires (19,4%; IC95% :17,7-21,2) au cours de la dernière année. Après ajustement, les associations demeuraient significatives entre l’exposition à l’humidité excessive ou aux moisissures et la rhinite allergique (Rapport de cote (RC) : 1,30; IC95% : 1.05-1.60), l’asthme RC : 1,75; IC95% : 1,42-2,16), mais pas les infections respiratoires (RC : 1,07; IC95% : 0,85-1.35). CONCLUSIONS: La prévalence élevée de l’exposition résidentielle des étudiants universitaires à l’humidité excessive ou aux moisissures, de même que son association avec l’asthme et la rhinite allergique, mettent en lumière sa contribution potentielle à la forte prévalence des maladies respiratoires ayant une composante allergique dans cette population. Cette étude fournit un nouveau levier pour les organisations de santé publique et leurs partenaires afin d’adapter les stratégies préventives ciblant les logements insalubres, particulièrement chez les populations vulnérables. / Abstract : PROBLEMATIC: Indoor residential dampness and mold is now recognised as a major respiratory health determinant. University students are vulnerable to such exposure by their low income and high mobility, but few studies have assessed their exposure. OBJECTIVES: This project aims to describe prevalence of (a) residential dampness or mold exposure and (b) respiratory diseases in University students as well as to (c) examine the independent contribution of residential excessive dampness and mold to these diseases. METHODS: In 2014, an online survey was conducted among 2097 students registered at the University of Sherbrooke (Quebec, Canada). Validated questions, and scores when possible, were used to assess respiratory diseases (allergic rhinitis, asthma-like symptoms, respiratory infections), residential excessive dampness and mold, and covariates (e.g. family annual income, smoking status, parental atopy, student characteristics). Associations between exposure and diseases were first evaluated using bivariate analyses (khi-square tests) with an alpha value of 0.05. Using logistic regressions, the crude and adjusted relationships between residential excessive dampness or mold and respiratory diseases were examined. Results were weighted for sex, age and campus affiliation. RESULTS: Residential dampness or mold exposure was frequent (36.0%; 95%Confidence Interval (CI) : 33.9-38.1). Respondents also reported high prevalence of allergic rhinitis (32.6%; 95%CI : 30.5-34.7), asthma-like symptoms (23.9%; 95%CI : 22.0-25.8) and respiratory infections (19.4%; 95%CI : 17.7-21.2). After adjustment, associations with residential excessive dampness or mold were significant for allergic rhinitis (Odd Ratio(OR) : 1.30; 95%CI : 1.05-1.60) and asthma-like symptoms (OR : 1.75; 95%CI : 1.42-2.16), but not for respiratory infections (OR : 1.07; 95%CI : 0.85-1.35). CONCLUSIONS: High frequency of residential excessive dampness and mold, as well as its associations with asthma and allergic rhinitis highlight this exposure’s potential contribution to high atopy prevalence among university students. These results emphasize the importance for public health organizations to tackle poor housing, especially for vulnerable populations.

A Aspergilose Broncopulmonar alérgica (ABPA) é uma doença complexa,desencadeada por uma reação de hipersensibilidade ao Aspergillus fumigatus, que apresenta vários estágios, sendo que no estágio mais grave, os pacientes apresentam bronquiectasias. O diagnóstico da doença é difícil e o maior problema é a falta de antígenos padronizados necessários para a determinação de anticorpos específicos. O objetivo do presente estudo é avaliar se os testes cutâneos com os análogos de Asp f 1 podem auxiliar no diagnóstico e no estadiamento da ABPA. Três grupos de pacientes classificados por testes sorológicos foram obtidos a saber 20 ABPA (16BQ+; 4BQ-), 25 possíveis -ABPA (14BQ+;11BQ-) e 24 asmáticos sem ABPA (11BQ+;13BQ-). Fizeram parte do estudo 10 pessoas sem asma . Todos foram submetidos a testes intradérmicos com três antígenos a-sarcina, mitogilina e estrictocina.Houve uma intensa reação a todos os antígenos e as reações produzidas foram semelhantes para os três antígenos. As reações de leitura tardia positivas à mitogilina foram biopsiadas. As biopsias de 2 (12,5%) dos pacientes BQ+ do grupo ABPA e 5 do grupo ABPA possível com BQ+ (35,6%) mostraram vasculite por depósito de imunocomplexos. 11 pacientes do terceiro grupo não apresentaram vasculite. O quarto grupo não apresentou reação tardia. Todos os pacientes com reação positiva apresentaram BQ+. alfa-sarcina, a mitogilina e a restrictocina diferenciaram pacientes com ABPA por testes intradérmicos e podem ser aplicados no diagnóstico da doença. A maior incidência de bronquiectasias foi encontrada no primeiro grupo (80%) e no segundo (56%). No terceiro grupo nenhum caso foi encontrado em 23 pacientes com asma e teste ID positivo ao aspergillus fumigatus todos os pacientes com vasculite tinham bronquiectasia. Há possibilidade de que as lesões produzidas nos pulmões sejam produzidas por vasculite. / Allergic Bronchopulmonary Aspergillosis (ABPA) is a complex disease, triggered by a hypersensitivity reaction to Aspergillus fumigatus. The disease diagnosis is difficult, and a major problem is the lack of standardized allergens for the determination of specific antibodies. The aim of the present study is to evaluate if intradermal (ID) tests with analogs of Asp f 1 can aid in the diagnosis and stage assessment of abpa. Three groups of patients classified by serological tests were obtained. 20 ABPA (16BQ+; 4BQ-), 25 possible-ABPA (14BQ+; 11BQ-), 24 asthmatic-ABPAfree (11BQ+; 13BQ-) and 10 asthma-free people were submitted to id tests with three antigens: mitogillin, a-sarcin and restrictocin. There was intense reaction to all three antigens and the response was similar. The positive reactions to mitogillin were biopsied. The skin biopsies of two (12,5%) bq+ patients of the first group and 5 BQ+ (35,6%) patients of the second one showed vasculitis by immune complexes (IC) deposition. 11 patients of the third group had negative biopsies. The fourth group didn\'t have late-reaction. All patients with positive reaction were BQ+. By ID test, alfa-sarcin, mitogillin and restrictocin could differentiate patients with abpa and can be applicable in disease diagnosis. The higher incidence of bronchiectasis was found in the first (80%) and second (56%) groups. In the third group, IC wasn\'t found in 23 asthma patients and id test was positive to A. fumigatus. All patients with vasculitis by IC had bronchiectasis. Therefore, the results indicate that this kind of pulmonary lesion is caused by vasculitis.

Neste trabalho foram investigadas a atividade antialérgica de extratos, ou substâncias isoladas, obtidos de fontes naturais. Para isso foi utilizado o sistema biossensor baseado em mastócitos os quais liberam a enzima beta-hexosaminidase usada como marcador da degranulação. Para algumas substâncias naturais da classe dos flavonóides (quercetina-Qc e rutina-Rt) e ácidos polifenólicos (ácido dimetoxicinâmico-Dm e ácido cafeico-Cf), os ensaios biológicos foram conduzidos na presença de beta-ciclodextrina (beta-CD) a fim de estudar a eficiência do ensaio biológico e o efeito de complexação na atividade antialérgica. Inicialmente, foram investigadas, as propriedades espectroscópicas destes flavonóides e ácidos polifenólicos, na ausência, e presença de beta-CD. As mudanças nos espectros de absorção e fluorescência, em presença de beta-CD, mostraram que ocorre a associação dos fármacos com a beta-CD. Assim, as constantes de incorporação (Kc) foram determinadas pelo método de Higuchi e Connors e os resultados mostraram maior incorporação da Qc (Kc = 172 /M) na cavidade da beta-CD quando comparada a Rt (Kc = 139 /M). No caso dos polifenóis, Dm mostrou incorporação maior em relação ao Cf, com valores de Kc iguais a 718 e 278 /M, respectivamente. Os valores de Kc foram considerados apropriados para a aplicação de compostos de inclusão como agentes terapêuticos. Assim, os complexos de inclusão sólidos, foram preparados por uma adaptação do método da co-evaporação e caracterizados por Análise Termogravimétrica (TGA), Análise Térmica Diferencial (DTA), Calorimetria Diferencial de Varredura (DSC), espectroscopia na região do Infravermelho (FTIR) e Ressonância Magnética Nuclear de Prótons (1H-RMN). O parâmetro físico-químico para interação hidrofóbica (log P) foi determinado para os flavonóides e acidos polifenólicos e os resultados indicaram que a hidrofobicidade seguiu a seguinte ordem: Dm > Cf > Qc > Rt. Os complexos de inclusão foram mais eficazes para inibir a liberação da beta-hexosaminidase do que os fármacos na forma livre. A atividade anti-alérgica da Qc livre (IC50= 5,1 µM) mostrou um aumento de oito vêzes quando complexada com a beta-CD (IC50= 0,62 µM). Um aumento da atividade foi observado, também, para os complexos Rt/CD, Cf/CD e Dm/CD. Este efeito foi mais forte para os compostos com maior hidrofobicidade. A atividade antialérgica das substâncais naturais livres provenientes de várias classes de plantas tais como flavonóides, ácidos polifenólicos, terpenos, alcalóides e iridóides foi, também, investigada. Os flavonóides tais como quercetina (IC50= 5,1 µM), 7-metil quercetina (IC50= 6,2 µM), caempferol-3-glicosideo (IC50= 6,7 µM) and 4-O-(6-trans-p-coumaroil)--D-glicopyranosil okanina (IC50= 5,8 µM) mostraram a maior atividade antialérgica comparados ao fumarato de cetotifeno (IC50= 15,1 µM). Os extratos provenientes de diversas espécies de plantas tais como Bidens sulphurea, Bidens gardneri, Bidens graveolens, Mikania parodii Cabrera e Mikania pilosa Baker foram, também, investigados. Os resultados mostraram maior atividade para o extrato de Bidens obtido de acetato de etila. Este extrato é rico em derivados metilados de quercetina os quais exibiram forte atividade antialérgica quando utilizados no ensaio biológico como substância isolada. / Anti-allergic activity of extracts and isolated compounds obtained from natural sources was investigated using the mast-cell based biosensor system. Mast cells release beta-hexosaminidase enzyme which is used as a marker of degranulation. Flavonoids (quercetin-Qc and rutin-Rt) and polyphenolic acids (caffeic acid-Cf and dimethoxy cinnamic acid-Dm) were used as inclusion compounds with beta-cyclodextrin (beta-CD) in order to compare the efficiency of the biological assay and the anti-allergic activity of the drugs free or associated with beta-CD. Spectroscopic properties of the flavonoids and polyphenolic acids were monitored in the absence or presence of beta-CD. The absorbance and fluorescence spectra showed drug association with beta-CD; subsequently the stability constants (kc) of the drugs were obtained in accordance with the method of the Higuchi-Connors. The results showed higher association of Qc with beta-CD (Kc= 172 /M) compared to Rt (Kc= 139 /M). For the polyphenolic acids, Dm exhibited the higher association with beta-CD compared to Cf (718 and 278 /M respectively). The Kc values felt within the range considered adequate for the formation of inclusion complex, and they can be used to improve the bioavailability of the flavonoids and polyphenolic acids. The solid inclusion compounds were obtained by an adaptation of the co-evaporation method and characterized by Thermo Gravimetric Analysis (TG), Differential Thermal Analysis (DTA), Differential Scanning Calorimetry (DSC), Fourier Transform Infrared Spectroscopy (FTIR) and Proton Nuclear Magnetic Resonance Spectroscopy (1H NMR). Physico-chemical parameter for hydrophobic interaction (log P) was determined for the flavonoids and polyphenolic acids and the results indicated that the hydrophobicity followed the order: Dm > Cf > Qc > Rt. The inclusion complexes were more effective at inhibiting beta-hexosaminidase release than plain drugs. The anti-allergic activity of plain Qc (IC50= 5.05 M) showed eightfold improvement when included inside the beta-CD cavity (IC50= 0.62 M). Higher biological activity on the part of the complex was also observed for the complexes Rt/CD, Cf/CD and Dm/CD. This effect was stronger for the compounds with higher hydrophobicity. The anti-allergic activity of plain natural compounds from several classes of plants such as flavonoids, polyphenolic acids, terpenes, alkaloids and iridoids was investigated. Flavonoids such as quercetin (IC50= 5.1 µM), 7-methyl quercetin (IC50= 6.2 µM), kaempferol-3-glycoside (IC50= 6.7 µM) and 4-O-(6-trans-p-coumaroil)--D-glucopyranosyl okanin (IC50= 5.8 µM) showed the stronger anti-allergic activity compared with ketotifen fumarate, a reference drug (IC50= 15.1 µM). Extracts proceeding from different species of plants such as Bidens sulphurea, Bidens gardneri, Bidens graveolens, Mikania parodii Cabrera and Mikania pilosa Baker were also investigated. The results showed stronger anti-allergic activity for ethyl acetate extracts obtained from Bidens specie. This extracts are rich in methylated quercetin derivatives which showed strong anti-allergic activity when assayed as isolated substances

As relações bidirecionais entre o Sistema Nervoso e o Sistema Imune são relevantes para a manutenção da homeostase do organismo. Estudos realizados em nosso laboratório mostraram que 14 dias de coabitação com um conspecífico doente (injetado com células do tumor de Ehrlich-TAE) produziu mudanças comportamentais, endócrinas e imunológicas. Este estudo analisa os efeitos da convivência com um animal portador de tumor de Ehrlich em camundongos OVA sensibilizados e desafiados sobre a resposta alérgica pulmonar. Pares de camundongos machos foram separados em três grupos: naïve, controle e experimental. Os animais do grupo naïve não foram manipulados sendo utilizados para a avaliação de parâmetros basais. Um animal de cada par dos grupos experimental e controle foi imunizado com OVA. No dia D(0), os animais imunizados receberam uma dose reforço de OVA. No dia D(0) os camundongos do grupo experimental que não foram manipulados foram inoculados com 5x106 células de tumor de Ehrlich; seus companheiros de gaiola moradia foram designados CAD (companheiro do animal doente). Os camundongos não perturbados de cada par do grupo controle foram tratados (i.p.) em D(0) com 0,9% de NaCl, sendo designados CAS (companheiro do animal saudável). O desafio intranasal com OVA foi realizado nos camundongos CAS e CAD nos dias D(12) e D(13); colheram-se o sangue e os tecidos no dia D(14). Em comparação com o grupo CAS, os camundongos do grupo CAD apresentaram 14 dias após a coabitação: (1) aumento do número de eosinófilos e neutrófilos no LBA, (2) diminuição na contagem de células da medula óssea, (3) aumento do níveis de IL-4 e IL-5 e diminuição de IL-10 e INF-ϒ no sobrenadante do LBA, (4) aumento dos níveis de IgG1-OVA, diminuição dos níveis de IgG2a-OVA e nenhuma alteração na IgE-OVA no sangue periférico, (5) aumento na expressão de ICAM-1, VCAM-1 e L-selectina em granulócitos do LBA, (6) diminuição da reatividade da traquéia à metacolina in vitro, (7) aumento da desgranulação de mastócitos, (8) nenhuma alteração nos níveis plasmáticos de corticosterona, (9) aumento dos níveis de adrenalina e noradrenalina plasmáticas, (10) diminuição no tempo de permanência e entradas nos braços abertos do labirinto em cruz elevado, (11) diminuição da expressão de IL-6 no PVN e (12) diminuição da expressão de C-fos no PFC. Estes resultados mostram que a convivência forçada com um animal portador de um tumor ascitico de Ehrlich exacerba a inflamação alérgica pulmonar de camundongos. Eles foram discutidos como decorrentes da estimulação do Sistema Nervoso Autônomo Simpático (SNS) pelo estresse psicológico gerado pela coabitação com o parceiro doente, via liberação de adrenalina e noradrenalina e consequente mudança no perfil de citocinas Th1/Th2 para uma resposta do tipo Th2. Esta alteração seria, provavelmente, um dos mecanismos responsáveis pelo aumento do recrutamento celular para as vias aéreas dos camundongos do grupo CAD. / The bidirectional relationship between the nervous system and the imune system is relevant for homeostatic organism maintenance. Studies from our laboratory showed that 14 days of cohabitation with a sick conspecific (injected with Ehrlich tumor cells-TAE) produced behavioral, endocrinological and immunological changes. This study analyzes the effects of cohabitation with an Ehrlich tumor-bearing animal on ovalbumin (OVA)-induced lung inflammatory response in mice. Pairs of male mice were separate into three groups: naïve, control and experimental. Animals of the naïve group were kept undisturbed being used for assessment of basal parameters. One animal of each experimental and control pair of mice was immunized with OVA. On D(0), these OVA-immunized animals received an OVA booster. At this day (D(0)) the experimental mice that were kept undisturbed were inoculated with 5x106 Ehrlich tumor cells; their immunized cage-mates were then referred as to CSP(companion of sick partner). The undisturbed mice of each control pair were i.p. treated on D(0) with 0.9% NaCl; their sensitized cage-mate were subsequently referred as CHP (companion of health partner). The intranasal OVA challenge was performed on CSP and CHP mice on D(12) and D(13); blood and tissue collection were performed on D (14). Fourteen days after cohabitation, in comparison to the CHP mice, the CSP mice displayed the following: (1) an increased number of eosinophils and neutrophils in the BAL, (2) a decreased bone marrow cell count, (3) increased levels of IL-4 and IL-5 and decreased levels of IL-10 and INF-ϒ in the BAL supernatant, (4) increased levels of IgG1-OVA, decreased levels of IgG2a-OVA and no changes in OVA-specific IgE in the peripheral blood, (5) increased expression of ICAM-1, VCAM-1 and L-selectin in the BAL granulocytes, (6) decreased tracheal reactivity to metacholine measured in vitro , (7) increased mast cell degranulation, (8) no changes in plasma corticosterone levels (9) increased levels of plasmatic adrenaline and noradrenaline, (10) decreased time and % of entries on open arms of elevated plus maze, (11) decreased expression of IL-6 on PVN and (12) decreased expression of C-fos on PFC. These results suggest that cohabitation with an Ehrlich tumor bearing mice exacerbates allergic lung inflammatory response in mice. Most probably, the changes observed in CSP mice are a consequence of the psychological stress induced by forced cohabitation with the sick partner. Strong involvement of the sympathetic nervous system through adrenaline and noradrenaline release and a shift of the Th1/Th2 cytokine profile toward a Th2 response were considered to be the mechanisms underlying the cell recruitment to the animal´s airways.

A tolerância pode ser considerada um dos pilares da imunologia. Sabe-se que a tolerância a um antígeno pode gerar tolerância a outro antígeno não relacionado, fenômeno conhecido como tolerância cruzada. Neste trabalho caracterizamos a tolerância cruzada utilizando a OVA como tolerógeno e extrato de Blomia tropicalis (Bt) ou Hemocianina de Keyhole limpet (KLH) como alérgenos. Verificamos que é possível reproduzir o fenômeno da tolerância cruzada neste modelo de inflamação alérgica induzida tanto pelo KLH quanto pela Bt, com diminuição do infiltrado inflamatório no pulmão, eosinófilos, IgE total e produção de muco. Ainda, a estratégia de utilizar a tolerância cruzada terapeuticamente, i.é., após a sensibilização com KLH, a indução de tolerância cruzada não foi capaz de prevenir a resposta alérgica. Em conjunto, nossos dados mostram que a tolerância à OVA modifica as respostas alérgicas tanto à Bt quanto ao KLH no modelo de inflamação pulmonar experimental de forma profilática, mas que a tolerância cruzada não é eficiente em animais já sensibilizados. / Tolerance is among the Immunology pillars. Experimental data indicate that tolerance towards an antigen can promote tolerance to an unrelated antigen, a phenomenon known as cross-tolerance. Here we sought to characterize cross tolerance using OVA as a tolerogen and Blomia tropicalis (Bt) extract or Keyhole limpet Hemocianina (KLH) as allergens. We found that cross tolerance can be reproduced in the model of allergic lung disease induced by KLH or Bt, with less inflammatory infiltrate in the lung, eosinophils, total IgE and mucus production. Using cross tolerance therapeutically, i.e., after KLH sensitization, was not effective, since the allergic lung response was not modulated. Altogether, our data shows that OVA tolerance modulate allergic lung disease induced either by Bt or KLH when used as prophylactic model, however cross tolerance is ineffective in sensitized animals.

Introdução: Asma e rinite alérgicas são doenças inflamatórias crônicas das vias aéreas cuja principal etiopatogenia é a reação de hipersensibilidade ao ácaro da poeira. O único tratamento específico que modifica a história natural da doença é a imunoterapia alérgeno-específica (ITAE). Porém, as reações adversas ainda são uma dificuldade na consolidação da ITAE como forma de tratamento. Um meio de minimizar as reações e maximizar os efeitos terapêuticos é o uso de adjuvantes, entre eles vacinas e lipopolissacárides bacterianos, que objetivam aumentar o desvio da resposta imune de perfil T-helper (TH) 2 para TH1. A vacina de Bordetella pertussis de célula inteira (Pw) mostrou ter um papel protetor em modelos experimentais de asma induzida por ovalbumina. Porém, seu papel na alergia respiratória induzida por ácaros ainda não é conhecido. Nosso objetivo foi avaliar os efeitos da vacina tríplice bacteriana (difteria-tétano-coqueluche - DTPw) em um modelo murino de alergia respiratória crônica induzida pelo ácaro Dermatophagoides pteronyssinus (Derp). Métodos: O protocolo teve duração de 30 dias. Camundongos BALB/c foram divididos em 6 grupos, os quais foram sensibilizados por via subcutânea com solução salina ou Derp 50mcg, em três injeções. Três grupos foram imunizados com Derp, apenas com o ácaro ou associado as vacinas de difteria-tétano (DT) e DTPw, respectivamente. Os outros três receberam soro fisiológico, com ou sem vacinas DT e DTPw. Os animais, posteriormente, sofreram desafio intranasal com soro fisiológico ou Derp por 7 dias e foram sacrificados 24 horas após o último desafio. Medimos IgE, IgG1 e IgG2a séricas específicas anti-Derp; resistência, elastância e hiperresponsividade das vias aéreas; densidade de leucócitos polimorfonucleares (PMN) e área de muco ácido no epitélio nasal; celularidade no lavado bronco-alveolar (BAL); e remodelamento das vias aéreas inferiores. Resultados: Os animais sensibilizados com Derp produziram altos níveis de imunoglobulinas específicas, apresentaram aumento da densidade de PMN e da área de muco ácido nasal, elevação das células inflamatórias no BAL às custas de macrófagos e remodelamento significativo das vias aéreas. As vacinas levaram à redução dos níveis de IgE específica e o grupo Derp-DTPw apresentou os menores níveis, similares aos grupos salina. A vacina DTPw não alterou os níveis de IgG1 ou IgG2a em relação ao grupo Derp. Não houve diferença entre todos os 6 grupos quanto aos parâmetros ventilatórios e quanto à contagem de eosinófilos no BAL. As vacinas DT e DTPw inibiram o infiltrado PMN nasal e DTPw modulou a produção do muco ácido. Os grupos vacinados tiveram redução da celularidade no BAL e do remodelamento em comparação com os controles, com resultados mais expressivos no grupo Derp-DTPw em relação ao grupo Derp-DT. Conclusões: Neste modelo murino de alergia respiratória crônica induzida por ácaro, a vacina DTPw diminuiu a IgE específica sérica, as células inflamatórias no nariz e no BAL, o muco ácido nasal e o remodelamento das vias respiratórias inferiores. / Background: Asthma and allergic rhinitis are chronic inflammatory diseases of the airways whose primary etiology is hypersensitivity reaction to house dust mite (HDM). The only specific treatment which modifies the natural history of the disease is the allergen specific immunotherapy (ASIT). However, adverse reactions are still a difficulty in consolidating ASIT as a good treatment option. One way to minimize adverse reactions and maximize therapeutic effects is the use of adjuvants, including bacterial lipopolysaccharide and vaccines that aim to shift immune response profile from T helper (TH) 2 to TH1. Bordetella pertussis whole-cell vaccine (Pw) has shown to have a protective role in experimental models of ovalbumin-induced asthma. Nevertheless, its role in respiratory allergy induced by HDM is unknown. Our objective was to evaluate the effects of diphtheria-tetanus-pertussis (DTPw) vaccine in a murine model of respiratory allergy induced by the HDM Dermatophagoides pteronyssinus (Derp). Methods: The protocol lasted 30 days. BALB/c mice were divided into 6 groups, which were sensitized subcutaneously (s.c.) with saline solution or Derp 50mcg, in three injections. Three groups were submitted to Derp alone or associated with diphtheria-tetanus (DT) vaccine and DTPw, respectively. The other three received saline solution with or without DT and DTPw vaccines. Subsequently mice underwent intranasal challenge with saline or Derp for 7 days and were sacrificed 24h after the last challenge. We measured serum specific IgE, IgG1 and IgG2a anti-Derp, airway resistance, elastance and hyperresponsiveness, density of polymorphonuclear (PMN) leukocytes infiltration in nasal mucosa, acidic nasal mucus content, cellularity in bronchoalveolar lavage (BAL) and lower airways remodeling. Results: HDM sensitized mice produced high levels of specific immunoglobulins, increased density of PMN leukocytes and acidic mucus in nasal mucosa, inflammatory cells in BAL due to macrophages and developed significant airway remodeling. Vaccines have led to a progressive reduction in specific IgE levels and Derp-DTPw group had lower levels, similar to groups sensitized with saline solution. DTPw vaccine did not alter the levels of IgG1 and IgG2a compared to Derp group. There was no difference between all six groups on behalf of ventilatory parameters and eosinophil counts in BAL. Both DT and DTPw vaccines inhibited PMN infiltrate in the nose and DTPw modulated acidic nasal mucus. Vaccinated groups had reductions in BAL cellularity and remodeling compared to controls, and Derp-DTPw group had better results than Derp-DT group. Conclusions: In this murine model of chronic respiratory allergy induced by HDM, DTPw vaccine decreased specific IgE, inflammatory cells in the nose and BAL, acidic nasal mucus and lower airways remodeling

INTRODUÇÃO: A pneumonite de hipersensibilidade (PH) é uma doença intersticial causada pela inalação de antígenos orgânicos específicos ou substâncias de baixo peso molecular em indivíduos geneticamente suscetíveis. A PH crônica representa seu estágio final, na qual a exposição antigênica prolongada leva à fibrose. Na PH crônica, o envolvimento das pequenas vias aéreas (PVA) é proeminente; entretanto, uma avaliação detalhada através de métodos funcionais e de avaliação quantitativa e automatizada pela tomografia computadorizada (TC) não foi realizada previamente. MÉTODOS: estudo transversal de 28 pacientes com PH crônica, com avaliação através de provas de função pulmonar (PFPs); oscilometria forçada (FOT); análise automatizada do volume pulmonar através da TC, incluindo quantificação de aprisionamento aéreo; e teste cardiopulmonar de exercício (TCPE) incremental em cicloergômetro para avaliar performance ao exercício, incluindo medidas seriadas da capacidade inspiratória e hiperinsuflação dinâmica (HD). Foram incluídos pacientes entre 18 a 75 anos, com diagnóstico confirmado pela combinação de achados tomográficos, exposição antigênica e biópsia compatível e/ou LBA com linfocitose. Foram excluídos pacientes com CVF e/ou VEF1 < 30% predito, tabagismo > 20 anos-maço, uso de oxigênio suplementar; diagnóstico prévio de asma ou DPOC, diagnóstico de hipertensão arterial pulmonar ou impossibilidade de realizar TCPE. Os dados foram comparados com controles saudáveis. RESULTADOS: 28 pacientes (16 mulheres; idade média 56 +- 11 anos; CVF 57 +- 17% predito) foram avaliados, e todos apresentavam padrão ventilatório restritivo sem resposta broncodilatadora. Na FOT, 4 pacientes apresentaram resistência aumentada a 5 Hz (R5), enquanto todos apresentaram baixa reactância (X5), sendo que nenhum apresentou resposta broncodilatadora significativa. Pacientes com PH crônica tiveram menor capacidade de exercício com menor O2 de pico, diminuição da reserva ventilatória, hiperventilação, dessaturação de oxigênio e escores de dispneia (Borg) aumentados quando comparado aos controles. A prevalência de HD foi encontrada em apenas 18% da coorte. Ao comparar pacientes com PH crônica com O2 normal e baixo (< 84% predito, LIN), o último grupo apresentou maior hiperventilação (slope E/CO2), um menor volume corrente e menores escores de capacidade física na avaliação do questionário de qualidade de vida (SF-36). A análise da curva ROC mostrou que volumes pulmonares reduzidos (CVF%, CPT% e DLCO%) foram preditores de baixa capacidade ao exercício. Na TC, a PH crônica teve aumento de áreas com alta densidade em unidades Hounsfield, inferindo maior extensão de opacidades em vidro fosco e fibrose em relação aos controles saudáveis. A extensão das áreas de atenuação reduzida (AAR) e aprisionamento aéreo em relação ao volume pulmonar total é pequena, e não se correlaciona com índices funcionais obstrutivos; entretanto, pacientes com maior percentual dessas áreas apresentam menos fibrose e função pulmonar mais preservada. CONCLUSÃO: a PH crônica se caracterizou por um acometimento eminentemente restritivo, e não de obstrução de vias aéreas, nos diferentes métodos diagnósticos aplicados. A redução da capacidade de exercício foi prevalente devido à limitação ventilatória e de troca gasosa, a exemplo de outras doenças intersticiais pulmonares, e não pela HD. Redução dos volumes pulmonares foram bons preditores das respostas ventilatórias durante o exercício / INTRODUCTION: Hypersensitivity pneumonitis (HP) is an interstitial lung disease caused by the inhalation of specific organic antigens or low molecular weight substances in genetically susceptible individuals. Chronic HP represents its final stage, in which prolonged antigenic exposure causes fibrosis. In chronic HP, small airway involvement is prominent; however, a detailed characterization through functional evaluation and through automatic quantitative evaluation of computed tomography (CT) has not been previously assessed. METHODS: Cross-sectional study with 28 chronic HP patients, with evaluation by pulmonary function tests (PFTs), forced oscillometry (FOT), automated lung volume analysis through CT, including quantification of air trapping (AT); and incremental cardiopulmonary exercise testing (CPET) on a cycle ergometer to evaluate exercise performance, including serial measurements of inspiratory capacity to establish dynamic hyperinflation (DH). Inclusion criteria: patients aged 18 to 75 years, with a chronic HP diagnosis confirmed by the combination of CT findings, known antigenic exposure and compatible biopsy and / or BAL with lymphocytosis. Exclusion criteria: FVC and / or FEV1 < 30% predicted, smoking > 20 pack-years, supplemental oxygen use; previous diagnosis of asthma or COPD; pulmonary arterial hypertension, or medical conditions that could interfere with CPET. Data were compared with healthy controls. RESULTS: All patients (16 women; mean age 56 +- 11 years; FVC 57 +- 17% predicted) had restrictive ventilatory pattern without bronchodilator response. In FOT, 4 patients had increased resistance at 5 Hz (R5), all patients presented low reactance (X5) values, and none presented a significant bronchodilator response. Chronic HP patients had reduced exercise performance with lower peak V?O2, diminished breathing reserve, hyperventilation, oxygen desaturation and augmented Borg dyspnea scores when compared with controls. The prevalence of DH was only found in 18% of patients. When comparing chronic HP patients with normal and low peak VO2 (< 84%predicted, LLN), the later exhibited higher hyperventilation (VE/VCO2 slope), lower tidal volumes, and poorer physical functioning scores on Short-form-36 health survey. ROC curve analysis showed that reduced lung volumes (FVC%, TLC% and DLCO%) were high predictors of poor exercise capacity. On CT, chronic HP is characterized by increased pulmonary densities (Hounsfield Units) inferring the extension of ground glass opacities and fibrosis when compared with healthy subjects. The extension of low attenuation areas (LAA) and AT in relation to the hole lung volume is low and does not correlate with PFT indexes of obstruction; however, patients with greater extension of these areas had less fibrosis and more preserved PFTs. CONCLUSIONS: Chronic HP was characterized by an imminently restrictive lung disorder, and not by airway obstruction, according to the different diagnostic methods applied in this study. Reduction of exercise capacity was prevalent due to ventilatory and gas exchange limitation, similarly to other fibrotic interstitial lung diseases, rather than due to DH. Reduced lung volumes were good predictors of ventilatory responses during exercise