Orientador: Luiz Claudio Di Stasi / Resumo: O termo Doença Inflamatória Intestinal (DII) compreende duas doenças, a Retocolite Ulcerativa (RCU) e a Doença de Crohn (DC), caracterizadas por inflamação crônica que compromete o trato gastrointestinal. Estudos mostram que o estresse oxidativo é um dos fatores determinantes para o desenvolvimento da DII. A terapêutica atual não proporciona cura permanente, demonstrando a necessidade de novas estratégias terapêuticas. A espécie Bertholletia excelsa (Lecythidaceae), popularmente conhecida como castanha-do-pará, é uma árvore nativa da Floresta Amazônica; de seu fruto retira-se a castanha, semente oleaginosa com alto teor de ácidos graxos, selênio e outros componentes como vitaminas e minerais, que podem apresentar atividade farmacológica associada a efeitos benéficos. Devido à sua composição, o objetivo do presente estudo foi avaliar a atividade anti-inflamatória da castanha-do-pará como potencial terapia adjuvante para o tratamento da DII. Ratos Wistar receberam por via oral cinco doses do óleo (18,75; 37,5; 75; 150 e 300 mg/kg) durante 5 dias consecutivos. Após o tratamento, foi feita indução do processo inflamatório por meio da administração via retal de 0,25 mL de solução contendo 10 mg de TNBS em etanol a 50% (v/v). Após 72h da indução do processo inflamatório, os animais foram mortos e os cólons retirados para análises macroscópicas (tamanho e escore da lesão, relação peso-comprimento colônico) e bioquímicas tais como atividade das enzimas mieloperoxidase (MPO) e fosfata... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Inflammatory Bowel Disease (IBD) is a term that comprises two disorders, Ulcerative Colitis (UC) and Crohn’s Disease (DC), which are chronic inflammation that compromise the gastrointestinal tract. Studies show that the oxidative stress is one of the many factors involved in DII pathogenesis. The pharmacological treatment doesn’t bring cure, highlighting the necessity of new therapeutical strategies. The species Bertholletia excelsa Bonpl. (Lecythidaceae), popularly known as Brazil nut, is a native tree from the amazon rainforest. From its fruit is removed a oilseed with high contents of fatty acids, selenium and another components such vitamins and minerals, that can produce pharmacological activity associated with beneficial effects. Due to its composition, the objective of this project was to evaluate the anti-infammatory activity of the Brazil nut oil as a potential adjuvant therapy for the treatment of IBD. Male wistar rats received orally five dosis of oil (18,75; 37,5; 75; 150 e 300 mg/kg) through five consecutive days. After treatment the inflammatory process was induced by rectally administration of 0,25 mL of a solution containing 10 mg of TNBS diluted in ethanol 50% (v/v). Seventy two hours after induction of the inflammatory process, the animals were killed and the colons removed for macroscopic (size and score of lesion, weight/length ratio) and biochemical analysis such as activity of the enzimes myeloperoxidase (MPO) and alkaline phosphatase (AP), and total lev... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

O óleo de copaíba é um produto natural encontrado principalmente na região amazônica, onde é utilizado na medicina popular como tratamento para inflamações e como cicatrizante. A espécie Copaifera multijuga Hayne demonstrou um potencial efeito anti-inflamatório em relação a outras espécies de Copaífera L., tendo como principal responsável o composto majoritário β-cariofileno. Nosso grupo de pesquisa vem estudando a veiculação deste óleo em nanoemulsões e desenvolveu uma formulação que contém uma elevada proporção de óleo de copaíba no núcleo oleoso (20 % w/v), sem prejuízo da estabilidade do sistema. A partir desta formulação, seguiram-se os estudos de avaliação da permeação cutânea, de otimização da formulação e de avaliação de atividade anti-inflamatória, apresentados neste trabalho. Um método em cromatógrafo a gás acoplado à espectrômetro de massas no modo headspace (HS-CG/EM) foi validado a fim de analisar β-cariofileno em mostras de pele provenientes do teste de permeação cutânea com nanoemulsões de óleo de copaíba. O método mostrou-se específico, linear, preciso e exato. O teste de permeação cutânea demonstrou que apenas com a nanoemulsão é possível detectar β-cariofileno na camada da derme, enquanto que, com o óleo, somente no estrato córneo. A seguir, foram testados dois tensoativos catiônicos na formulação da nanoemulsão para verificar se a carga positiva na interface da gotícula poderia promover a permeação cutânea do β-cariofileno. O tensoativo brometo de cetiltrimetilamônio provou ser mais eficiente em concentrações consideradas seguras para o uso tópico, revertendo o potencial zeta para valores adequados, sem interferir no tamanho de gotícula e índice de polidispersão. O tensoativo oleilamina também reverteu o potencial zeta, porém somente em concentrações muito elevadas, podendo ser consideradas tóxicas. O teste de permeação cutânea demonstrou que a incorporação de tensoativos catiônicos aumenta a retenção de β-cariofileno na epiderme em três vezes, enquanto que, na derme, não há diferença estatística entre as formulações aniônica e catiônica. Após, as nanoemulsões escolhidas foram incorporadas em hidrogéis de Carbopol®, Natrosol® e quitosana com vistas ao espessamento e adequação da viscosidade ao uso tópico. O hidrogel com quitosana 8 apresentou-se instável, com aumento de tamanho de gotícula e índice de polidispersão, apesar de não ter afetado o potencial zeta. Os hidrogéis de Carbopol® e Natrosol® apresentaram bons resultados de caracterização físico-química, porém somente o hidrogel de Natrosol® foi escolhido para os estudos de permeação cutânea e atividade anti-inflamatória in vivo, devido ao seu caráter neutro. No estudo de permeação cutânea das nanoemulsões incorporadas em hidrogel, houve um aumento na retenção de β-cariofileno na derme em relação às nanoemulsões, e houve a facilitação de permeação até o fluido receptor. Por fim, o estudo da atividade in vivo das formulações selecionadas demonstrou que o óleo de copaíba apresenta atividade anti-inflamatória e que a sua incorporação em nanoemulsões aumenta este efeito. No entanto, ambas nanoemulsões, tanto negativamente quanto positivamente carregadas, apresentaram resultado semelhante para a inibição do edema. Quando compara-se a permeação cutânea das formulações verifica-se que na derme não há diferença estatística, o que pode justificar a semelhança do grau de inibição da inflamação no teste in vivo. Em relação à atividade das nanoemulsões incorporadas em hidrogéis, pode-se verificar que no teste de edema de pata apenas a formulação carregada positivamente teve um efeito mais pronunciado, enquanto no edema de orelha as formulações obtiveram um perfil equivalente ao controle cetoprofeno, porém não potencializaram o efeito do óleo. Quanto ao estudo com os parasitos causadores da Leishmaniose, os testes in vitro mostraram que os tratamentos (óleo de copaíba, β-cariofileno e suas nanoemulsões) foram mais eficazes contra as espécies L. major e L. donovani em comparação às espécies L. amazonensis e L. braziliensis. O teste in vivo mostrou que todos os tratamentos foram capazes de reduzir a área da ferida dos camundongos infectados com L. major. No entanto, eles não conseguiram recuperar totalmente os animais. / Copaiba oil is a natural product found especially in the Amazon region, where it is used as treatment for inflammations and as wound healer in the popular medicin. The species Copaifera multijuga Hayne showed a potential anti-inflammatory effect in relation to other Copaifera L. species, mainly due to its major compound, β-caryophyllene. Our research group studied the oil incorporation in nanoemulsions and developed a formulation containing a high copaiba oil proportion in the oil core (20% w/v) without loss of system stability. Based in this nanoemulsion, we present in this study the skin permeation, the formulation optimization and the anti-inflammatory activity. A method in gas chromatograph coupled with mass spectrometer in headspace mode (HS-GC/MS) was validated to analyze β-caryophyllene in skin samples from the skin permeation assay. The method proved to be specific, linear, precise and accurate. Skin permeation test showed that only with the nanoemulsion is possible to detect β-caryophyllene in the dermis layer, while with the oil, only in the stratum corneum. After, two cationic surfactants were tested in the nanoemulsion to prove if the positive charge on the droplet interface could promote β-caryophyllene permeation. Cetyltrimethylammonium bromide proved to be more effective at concentrations considered safe for topical use, reversing the zeta potential to suitable values, without interfering with droplet size and polydispersity index. Oleylamine also reversed the zeta potential, but only at very high concentrations, that may be considered toxic. Skin permeation test showed that the incorporation of cationic surfactants increases β-caryophyllene retention in the epidermis by three fold, whereas in the dermis, there is no statistical difference between the cationic and anionic nanoemulsions. Afterward, the chosen nanoemulsions were incorporated in Carbopol®, Natrosol® and chitosan hydrogels in order to adjust the viscosity for topical use. Chitosan hydrogel presented instability, with an increase in droplet size and polydispersity index, although it has not affected the zeta potential. Carbopol® and Natrosol® hydrogels showed good results in physicochemical characterization, but only Natrosol® hydrogel was chosen for the following skin permeation 10 and anti-inflammatory activity in vivo studies due to its neutral character. In nanoemulsions thickened-hydrogel skin permeation study, there was an increase in the β-caryophyllene retention in the dermis compared to nanoemulsions, and promoted permeation to the receptor fluid. Finally, in vivo anti-inflammatory activity from selected formulations showed that the copaiba oil has anti-inflammatory activity and that its incorporation into nanoemulsions increases this effect. However, both negative and positively charged nanoemulsions, showed similar results for inhibition of edema. When the nanoemulsions’ skin permeation is compared, it is found that in the dermis there is no statistical difference, which may explain the similarity degree of inflammation inhibition in the in vivo test. Regarding to the activity of the nanoemulsions incorporated in hydrogels, it can be verified that in paw edema assay, only the positively charged formulation had a more pronounced effect, whereas in the ear edema the formulations obtained a profile equivalent to the control, ketoprofen, but did not potentiate the effect of the oil. As for the study with the parasites causing Leishmaniasis, in vitro tests showed that the treatments (copaiba oil, β-caryophyllene and their nanoemulsions) were more effective against L. major and L. donovani compared to L. amazonensis and L. braziliensis. In vivo assay showed that all treatments were able to reduce the wound area of mice infected with L. major. However, they were unable to fully recover the animals from the disease.

L'athérosclérose est une des premières causes de mortalité dans les pays industrialisés. Elle est à l'origine de diverses pathologies telles que les infarctus du myocarde, les accidents vasculaires cérébraux et les maladies des artères coronaires. Deux facteurs clés sont à l'origine de l'athérosclérose : 1) un stress oxydant qui conduit à l'oxydation des lipoprotéines de basse densité dans la paroi artérielle et qui constitue la première étape du processus athérosclérotique ; 2) un processus inflammatoire auto-entretenu qui permet le développement des dernières étapes de l'athérogénèse conduisant à la formation d'une plaque d'athérome. La maladie reste silencieuse jusqu'à ce qu'elle se dévoile subitement à travers les évènements cités précédemment. L'utilisation d'antioxydants synthétiques ou naturels pour lutter contre l'athérogénèse est prouvée in vitro mais s'avère inefficace in vivo. Devant ce constat, une des stratégies envisagées consiste à inhiber conjointement le stress oxydant et l'inflammation. Dans ce but, des molécules présentant la double propriété, antioxydante et anti- inflammatoire, s'avèrent intéressantes. Les dérivés phénoliques d'origine naturelle sont connus pour leurs propriétés antioxydantes, principalement dues à leur caractère piégeur de radicaux libres grâce à la présence du noyau phénolique Dans le cadre de notre projet, nous nous sommes intéressés aux diarylheptanoïdes macrocycliques qui sont des composés phénoliques extraits de différentes plantes et très peu exploités malgré des propriétés biologiques intéressantes. Parmi eux, le tédarène A, macrocycle naturel de type cyclodécaphane, extrait en 2012 d'une éponge marine, la Tedania Ignis, présente des propriétés anti-inflammatoires et un caractère antioxydant. Au cours de ce travail de thèse, la première synthèse totale du tédarène A a été réalisée. Les étapes clés ont concerné l'introduction stéréocontrollée du système diènique (Z,E) non conjugué au noyau phénol et la cyclisation en conditions de Ullmann du macrocycle diarylheptanoïde. Différents analogues du tédarène A ont été également conçus et préparés. Les modifications structurelles ont été introduites au niveau de la chaîne heptanoïde des macrocycles synthétisés. Le tédarène A et les différents analogues de type diarylheptanoïdes linéaires et macrocycliques synthétisés ont été évalués pour leurs activités antioxydante et anti- inflammatoire. / Atherosclerosis is one of the first cause of mortality in industrialized countries. It leads to cerebrovascular accident, stroke and all of the coronary heart diseases. Two key steps induce atherosclerosis : 1) an oxidative stress leading to the low density lipoproteins oxidationand initiating atherogenesis ; 2) a self-sustained inflammatory process allowing the last steps development of atherogenesis giving the atheroma plaque formation. This pathology is silent until it appears suddenly with the consequences mentionned above. The synthetic or natural antioxidants use to fight atherosclerosis is effective in vitro but not in vivo. One the basis of these informations, one of the proposed strategies is to inhibit both oxidative stress and inflammation. Therefore, it will be interesting to design molecules with a dual activity : antioxidant and anti-inflammatory. Natural phenolic compounds are well-know for their antioxidant activities due to the phenol moiety wich is able to trap free radicals. As part of our project, we are interested in macrocyclic diaryl heptanoids wich are phenolic compounds extracted from different plants and under-exploited despite interesting biological properties. Among them, tedarene A, a natural macrocycle type cyclodecaphane, extracted in 2012 from a marine sponge, Tedania Ignis, exhibits anti-inflammatory and antioxidant property. During this Ph.D work, the fisrt total synthesis of tedarene A was carried out. The key steps involved the stereocontrolled introduction of the diene system (Z,E) not conjugated to the phenol moiety and the cyclization of the diarylheptanoid macrocycle using Ullmann conditions. Various analogs of tedarene A were also designed and prepared. Structural changes were introduced onto the heptanoid chain part of synthesized macrocycles. Tedarene A and the various synthesized linear and macrocyclic diarylheptanoid analogues were evaluated for their antioxidant and anti-inflammatory activities.

The health benefits of fish oil supplementations have been proven to be effective by several studies which are discussed in this thesis. It was found that these compounds had potent anti-inflammatory properties and since then has prompted much research into the use of these compounds as potential treatments for chronic inflammation based diseases, where the overuse of current anti-inflammatory drugs cause many problems with undesired side-effects. The aim of this research is to study the bioactivity of resolvin E1 and various analogues, and to determine a novel route towards resolvin E1 natural product so that bioactivity tests may be conducted in comparison of synthetically produced resolvin E1 and naturally extracted resolvin E1. The initial aim of this research was to develop a range of analogues of a fragment of Resolvin E1. This was so that a series of compounds could be produced with various R groups to identify any structure-activity relationships for this part of the natural product. There is one stereocentre in this fragment of resolvin E1 and it was decided that a racemic version of these compounds would be tested for bioactivity, and if any of the compounds had significant anti-inflammatory properties then the R and S versions could be separated, allowing for the testing of both enantiomers to determine which gave the most potent anti-inflammatory response. This led to the creation of several novel fragments and their biological testing. The secondary aim of the project was to complete the total synthesis of the resolvin E1 natural product. We devised a novel route towards resolvin E1 which used MIDA boronate protecting group to introduce a fixed trans double bond which was useful in a compound with multiple alkene systems. Resolvin E1 also contains three stereocentres, the synthesis from the fragment work was recycled to begin the synthesis, and made use of 1,2:5,6-di-O-isopropylidene-D-mannitol and Noyori s catalyst to setup the stereocentres. The use of new MIDA-boronate moieties were also explored in order to develop a new, efficient synthesis toward resolvin E1.

Orientador: Marco Antônio Alvarenga / Resumo: Na espécie equina, o embrião se movimenta no útero entre os dias 9 e 16 após a ovulação, o concepto apresenta uma forma esférica e se move constantemente no lúmen uterino mediante contrações miometriais, produzidas por estimulação química da vesícula embrionária. O deslocamento embrionário durante este período é essencial para o reconhecimento materno da gestação. Este longo período de estímulo garante que o embrião produza sinais anti-luteolíticos no endométrio, evitando a luteólise. Após 17 dias, a vesícula embrionária cessa a mobilidade e ocorre a fixação em um dos cornos. Durante a mobilidade, o embrião produz prostaglandinas PGE-2, PGF-2α e PGI-2. Se houver uma falha durante a migração embrionária, o reconhecimento materno da gestação pode ser afetado e consequentemente há lise do corpo lúteo, resultando na perda precoce da prenhes. O uso do anti-inflamatório flunixin meglumine imediatamente após a transferência do embrião é amplamente utilizado para prevenir uma reação inflamatória local, a luteólise e a perda embrionária precoce. No entanto, de acordo com a literatura, o ácido mefenâmico causa menos efeitos sobre a mobilidade embrionária e aumenta as taxas de gestação. O objetivo deste estudo foi elucidar o efeito do ácido mefenâmico sobre a mobilidade embrionária em éguas. Foram selecionadas 10 éguas para o estudo. Após a confirmação da gestação com ultrassom transretal, a mobilidade embrionária foi avaliada por ultrassonografia em série (a cada 5 minutos) durante 1 h... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: In the equine specie, the embryo moves in the uterus between days 9 and 16 after ovulation, the conceptus presents a spherical shape and moves constantly in the uterine lumen through myometrial contractions, produced by chemical stimulation of the embryonic vesicle. Embryonic displacement during this period is essential for maternal recognition of pregnancy. This long stimulus period ensures that the embryo produces anti-luteolytic signals to the endometrium, avoiding the luteolysis. After 17 days the embryonic vesicle stops the mobility and occurs the fixation in one of the horns. During mobility, the embryo produces prostaglandins PGE-2, PGF, and PGI-2. If there is a failure during embryo migration the maternal recognition of pregnancy may be affected and consequently lysis of corpus luteum, resulting in the early pregnancy loss. The use of the anti-inflammatory flunixin meglumine immediately after the embryo transfer is widely used in order to prevent a local inflammatory reaction, luteolysis, and early embryonic loss. However, according to the literature, mefenamic acid cause less effects on embryonic mobility and increases pregnancy rates. The objective of this study was to elucidate the effect of mefenamic acid on embryonic mobility in mares. There were selected 10 mares for the study. After confirmation of pregnancy with transrectal ultrasound, the embryo mobility was evaluated by serial ultrasonography (every 5 minutes) during 1 hour. This examination was considered t... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Submitted by BRUNA RAGASSI (bruna_ragassi@hotmail.com) on 2018-06-28T16:17:37Z No. of bitstreams: 1 Bruna Ragassi .pdf: 2101839 bytes, checksum: 9fec82e4090b7e088c646916c780712d (MD5) / Approved for entry into archive by Cristina Alexandra de Godoy null (cristina@adm.feis.unesp.br) on 2018-06-28T17:14:39Z (GMT) No. of bitstreams: 1 ragassi_b_me_ilha.pdf: 2101839 bytes, checksum: 9fec82e4090b7e088c646916c780712d (MD5) / Made available in DSpace on 2018-06-28T17:14:39Z (GMT). No. of bitstreams: 1 ragassi_b_me_ilha.pdf: 2101839 bytes, checksum: 9fec82e4090b7e088c646916c780712d (MD5) Previous issue date: 2018-05-07 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / A qualidade da água é um assunto de crescente preocupação, especialmente devido à presença de fármacos que contaminam o ambiente aquático. Muitos compostos têm sido detectados em efluentes de estações de tratamento de esgoto (ETEs) e águas superficiais em todo o mundo. A ocorrência de fármacos no ambiente pode apresentar efeitos adversos aos ecossistemas aquáticos. O objetivo desse estudo foi avaliar a presença e a concentração dos fármacos diclofenaco, ibuprofeno e naproxeno durante março de 2017 a fevereiro de 2018 em 7 pontos de amostragem, sendo 5 pontos no Córrego das Marrecas - SP e 2 pontos na ETE do município de Dracena - SP. Em cada ponto do córrego foi mensurada a concentração de oxigênio dissolvido (OD), pH, temperatura e sólidos totais dissolvidos (SDT) com auxílio de uma Sonda Multiparamétrica Aquaread AP 2000. Para a identificação dos fármacos, as amostras foram preparadas por microextração líquido – líquido dispersiva e analisadas por cromatografia líquida de alta eficiência. Foi realizada uma análise descritiva para avaliação dos resultados de média, desvio padrão e coeficiente de variação dos parâmetros físico-químicos. Uma matriz de correlação foi aplicada para avaliar a interação entre os parâmetros físico-químicos da água e os fármacos dois a dois. Os três fármacos foram detectados em todos os pontos da ETE e do córrego. A maior concentração do diclofenaco (0,458 mg.L-1) foi registrada no ponto de lançamento do efluente da ETE no mês de março. Nesse ponto foi verificada a maior concentração de ibuprofeno (0,120 mg.L-1), porém no mês de maio. O naproxeno apresentou a maior concentração (0,040 mg.L-1) no mês de abril na nascente do Córrego das Marrecas e a jusante da ETE. Os parâmetros que apresentaram uma correlação significativa foram: ibuprofeno x temperatura, quanto maior a temperatura, menor a concentração de ibuprofeno. Oxigênio dissolvido x sólidos totais dissolvidos, quanto maior os STD, menor a concentração de OD. Oxigênio dissolvido x temperatura, quanto maior a temperatura menor o OD. Mudanças e melhorias devem ser realizadas para que a remoção desses compostos seja total, amenizando a transferência dessas substâncias para os ambientes aquáticos e diminuindo seus riscos para a saúde humana e para o meio ambiente. / Water quality is a subject of increasing concern, especially due to the presence of drugs that contaminate the aquatic environment. Many compounds have been detected in effluents from sewage treatment plants (ETEs) and surface water worldwide. The occurrence of drugs in the environment may have adverse effects on aquatic ecosystems. The objective of this study was to evaluate the presence and concentration of the drugs diclofenac, ibuprofen and naproxen during March 2017 to February 2018 in 7 sampling points, 5 points in the Stream of Marrecas - SP and 2 points in the TTE of the municipality of Dracena - SP The concentrations of dissolved oxygen (DO), pH, temperature and total dissolved solids (TDS) were measured at each point of the stream using an Aquaread AP 2000 Multiparameter Probe. For drug identification, the samples were prepared by dispersive liquid-liquid microextraction and analyzed by chromatography high efficiency liquid. A descriptive analysis was performed to evaluate the results of mean, standard deviation and coefficient of variation of physical-chemical parameters. A correlation matrix was applied to evaluate the interaction between the physicochemical parameters of water and drugs two to two. All three drugs were detected at all points of the TEE and the stream. The highest concentration of diclofenac (0.458 mg.L-1) was recorded at the point of launch of the ETE effluent in March. At that point, the highest concentration of ibuprofen (0.120 mg.L-1) was observed, but in May. The naproxen had the highest concentration (0.040 mg.L-1) in April at the source of the Stream of Marrecas and downstream of the TEE. In the TEE it was observed that a greater reduction of diclofenac occurred (97.7% in March), followed by ibuprofen (91.7%) and naproxen (43.5%) both in April. The parameters that presented a significant correlation were: ibuprofen x temperature, the higher the temperature, the lower the concentration of ibuprofen. Dissolved oxygen x total dissolved solids, the higher the STD, the lower the OD concentration. Dissolved oxygen x temperature, the higher the temperature the lower the OD. Changes and improvements should be made to the removal of these compounds, minimizing the transfer of these substances to aquatic environments and reducing their risks to human health and the environment.

Ces travaux de thèse décrivent l’hémisynthèse de dérivés de l’acide grandiflorénique (AG). Ce produit naturel a dans un premier temps été converti en ent-kaur-9(11),16-dien-19-ol, composé qui a ensuite été estérifié dans les conditions de Steglich par une série d’acides benzoïques diversement substitués. Aux douze nouveaux composés ainsi obtenus a été ajoutée la synthèse du 9(11),16-dien-19-(2- méthyl-5-nitro-1H-imidazol-1-yl)éthyl-ent-kaurène. Ces dérivés de l’AG ont été soigneusement purifiés, puis complètement caractérisés (IR, SM, RMN 1D et 2D) en vue de leur évaluation biologique. L’activité antibactérienne a été testée sur différentes souches bactériennes comme Staphylococcus aureus, Enterococcus faecalis, Klebsiella pneumoniae, Pseudomonas aeruginosa et Escherichia coli. Les propriétés fongicides ont été évaluées sur Candida albicans et C. krusei. L’activité anti-inflammatoire in vivo a été étudiée sur des souris BIO:NMRI en utilisant le test de l’oedème de l’oreille induit par le xylol. Les dérivés d’acide grandiflorénique n’ont malheureusement montré aucune activité antibactérienne, ni antifongique, mais leur activité anti-inflammatoire s’est montrée prometteuse dans le cas de l’inflammation aiguë, le 9(11),16-dien-18-[2-(4-isobutylphényl)propyl]-ent-kaurène se révélant être le meilleur composé. / This thesis work describes the hemisynthesis of grandiflorenic acid (GA) derivatives. GA natural product was first converted into ent-kaur-9(11),16 dien-19-ol, which was next esterified under Steglich conditions with a series of diversely substituted benzoic acids. To the twelve new compounds thus obtained, was added the preparation of the 9(11),16-dien-19-(2-methyl-5-nitro-1H-imidazol-1-yl)ethyl-entkaurene. All these new GA derivatives were carefully purified, and then fully characterized (IR, MS, 1D and 2D NMR) in the aim of their biological evaluation. The antibacterial activity was tested against several bacteria strains, such as Staphylococcus aureus, Enterococcus faecalis, Klebsiella pneumoniae, Pseudomonas aeruginosa, and Escherichia coli. The fungicide properties were evaluated against Candida albicans and C. krusei. The in vivo anti-inflammatory activity was studied on BIO:NMRI mice using the xylol-induced ear-edema test. Unfortunately, no antibacterial nor antifungal activity was exhibited by the grandiflorenic acid derivatives, but their anti-inflammatory activity revealed promising against acute inflammation, with the 9(11),16-dien-18-[2-(4-isobutylphenyl)propyl]- ent-kaurene being the best compound.

?rea de concentra??o: Ci?ncias Fisiol?gicas. / Submitted by Jos? Henrique Henrique (jose.neves@ufvjm.edu.br) on 2017-01-09T16:47:50Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) lucas_abreu_costa.pdf: 2675995 bytes, checksum: b6686da3b0509ff9d2b21c38e1fdc5ce (MD5) / Approved for entry into archive by Rodrigo Martins Cruz (rodrigo.cruz@ufvjm.edu.br) on 2017-01-10T13:46:07Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) lucas_abreu_costa.pdf: 2675995 bytes, checksum: b6686da3b0509ff9d2b21c38e1fdc5ce (MD5) / Made available in DSpace on 2017-01-10T13:46:07Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) lucas_abreu_costa.pdf: 2675995 bytes, checksum: b6686da3b0509ff9d2b21c38e1fdc5ce (MD5) Previous issue date: 2016 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior (CAPES) / A planta Ageratum fastigiatum (Gardn.) R. M. King et H. Rob. ? comumente utilizada na medicina popular da regi?o do Vale do Jequitinhonha como anti-inflamat?rio e analg?sico. Em virtude do papel do sistema imune e de fatores inflamat?rios sol?veis na etiologia e no mecanismo fisiopatol?gico de diversas doen?as inflamat?rias, este trabalho teve como objetivo investigar par?metros relacionados ? atividade anti-inflamat?ria do extrato etan?lico de A. fastigiatum e de uma fra??o derivada desse extrato. A identifica??o dos constituintes qu?micos da fra??o do extrato etan?lico de A. fastigiatum foi realizada por meio da Cromatografia L?quida de Alta Efici?ncia com Detectores de Arranjo de Diodo acoplada ? espectrometria de massas (CLAE-DAD-MS) seguida pela Espectrometria de Massas em Tandem com ioniza??o por electrospray (ESI-MS/MS). A t?cnica de exclus?o com azul de tripan foi utilizada para determina??o da viabilidade das culturas de c?lulas mononucleares do sangue perif?rico (PBMC) incubadas por 8, 24 e 120 horas com o extrato etan?lico, a fra??o e o solvente Dimetilsulf?xido (DMSO). Na avalia??o do perfil proliferativo de linf?citos pela t?cnica de citometria de fluxo, PBMC estimuladas com o mit?geno Fitohemaglutinina (PHA) foram incubados por 120 horas na aus?ncia ou presen?a de diferentes concentra??es n?o t?xicas dos componentes citados. Para an?lise da produ??o das citocinas pr?-inflamat?rias, PBMC tratadas ou n?o com diferentes concentra??es n?o t?xicas do extrato etan?lico de A. fastigiatum, da fra??o e do solvente DMSO foram incubadas por 8 horas e estimulada nas ?ltimas 4 horas com Miristato Acetato de Forbol (PMA), utilizando a t?cnica de citometria de fluxo, linf?citos totais, c?lulas CD4+ e CD8+ foram avaliados quanto ? produ??o de IFN-?, TNF-? e IL-2. De acordo com nossos resultados, a concentra??o de DMSO, para todas as culturas celulares tratadas com o extrato etan?lico ou sua fra??o, foi definida como sendo 1% v/v para avalia??o da citotoxicidade e an?lise da produ??o de citocinas em linf?citos e de 0.5% v/v no ensaio de prolifera??o celular. Na an?lise fitoqu?mica da fra??o do extrato etan?lico foram identificados dois flavon?is nunca antes descrito na constitui??o qu?mica da planta, a 7-metil-quercetina e a Rhamnocitrina, tais compostos n?o alteraram os par?metros anti-inflamat?rios avaliados neste estudo. O extrato etan?lico, por sua vez, nas concentra??es de 6,25 e 12,5 ?g/mL reduziu significativamente a prolifera??o de linf?citos, ao mesmo tempo, nas concentra??es de 50 e 75 ?g/mL inibiu a produ??o das citocinas TNF-? e IL-2 em c?lulas CD8+, na maior concentra??o inibiu ainda a produ??o de IL-2 na popula??o de linf?citos totais. Sugere-se que o extrato etan?lico de A. fastigiatum possui componentes ativos agindo sinergicamente ou de forma isolada que contribuem para atividade anti-inflamat?ria atribu?da ? planta em seu uso na medicina popular. / Disserta??o (Mestrado) ? Programa Multic?ntrico de P?s-gradua??o em Ci?ncias Fisiol?gicas, Universidade Federal dos Vales do Jequitinhonha e Mucuri, 2016. / Ageratum fastigiatum (Gardner.) R. M. King et H. Rob. is a plant commonly used in the folk medicine of the Jequitinhonha Valley as anti-inflammatory and analgesic. Because of the role of the immune system and soluble inflammatory factors in the etiology and pathophysiological mechanism of various inflammatory diseases, this study aimed to investigate parameters related to the anti-inflammatory activity of the ethanol extract of A. fastigiatum and a fraction derived from this extract. The identification of the chemical constituents of the fraction of ethanol extract of A. fastigiatum was performed by High Performance Liquid Chromatography with Efficiency Diode Arrangement detectors coupled to mass spectrometry (HPLC-DAD-MS) followed by Mass Spectrometry in Tandem with electrospray ionization (ESI-MS/MS). The exclusion technique with Trypan blue was used to determine the viability of peripheral blood mononuclear cell (PBMC) cultures, previously incubated for 8, 24 and 120 hours with the ethanol extract, the fraction and the solvent dimethylsulfoxide (DMSO). In the evaluation of the proliferative profile of lymphocytes using the flow cytometry technique, PBMC stimulated with the mitogen Phytohemagglutinin (PHA) were incubated for 120 hours in the absence or presence of different non-toxic concentrations of the mentioned components. In order to analyze the production of pro-inflammatory cytokines, PBMC treated or not with different non-toxic concentrations of the ethanolic extract of A. fastigiatum, of the fraction, and of the solvent DMSO was incubated for 8 hours and stimulated with phorbol myristate acetate (PMA) in the last 4 hours. Subsequently, total lymphocytes, CD4+ and CD8+ cells were assessed for production of IFN-?, TNF-? and IL-2, using flow cytometry. According to our results, the concentration of DMSO, for all cell cultures treated with ethanolic extract and its fraction was defined as 1% v/v for evaluation of cytotoxicity and analysis of cytokine production by lymphocytes, and 0.5% v/v to be used in the cell proliferation assay. In the phytochemical analysis of the fraction of ethanol extract, were identified two flavonols never before described in the chemical constitution of the plant, 7-methyl-quercetin and Rhamnocitrina. Such compounds did not modified the anti-inflammatory parameters evaluated in this study. The ethanol extract, on the other hand, in concentrations of 6.25 and 12.5 ?g/ml significantly reduced the proliferation of lymphocytes, while at concentrations of 50 and 75 ug/mL, it inhibited the production of TNF-? and IL-2 in CD8+, in addition, at the highest concentration it inhibited IL-2 production by total lymphocytes population. It is suggested that the ethanol extract of A.fastigiatum has active components acting synergistically or separately, resulting in the anti-inflammatory activity attributed to the plant by the folk medicine.

A febre é um aumento regulado da temperatura corporal central, caracterizada por uma alteração no centro termorregulatório, a qual resulta da interação entre o sistema nervoso central e o imunológico. Enquanto a febre caracteriza lesão celular, infecção e inflamação, ela tem sido considerada o mais importante componente da resposta de fase aguda. Embora existam evidências de que a febre aumenta a defesa do hospedeiro, alguns estudos têm sugerido que o aumento da temperatura central a níveis febris pode ser prejudicial. Portanto, nas situações clínicas nas quais os riscos associados com a febre superam os benefícios, o tratamento antipirético é formalmente indicado. Os derivados pirazolínicos constituem um importante grupo de compostos orgânicos que têm sido extensivamente estudados devido às suas inúmeras atividades biológicas, que incluem atividade antipirética. Recentemente uma série de derivados pirazolínicos inéditos foi avaliada quanto à atividade antiedematogênica e antinociceptiva em camundongos. Estes compostos causam antinocicepção no teste da formalina e no modelo de artrite induzida por adjuvante de Freund, bem como diminuem o edema induzido por carragenina. Dados os efeitos antiinflamatórios descritos para estes compostos, o objetivo do estudo foi investigar o efeito de oito derivados 5-trifluormetil-4,5-diidro- 1H-1-pirazol-1-carboxiamida (TFDPs) sobre a temperatura corporal basal, a febre induzida por S. cerevisiae (0.135 g/Kg, i.p.) e a inflamação peritoneal em ratos Wistar machos de 28 dias de idade. Somente os compostos 3Et- e 3Pr-TFDP (140 e 200 μmol/kg respectivamente, s.c., 4 h após a injeção do S. cerevisiae) atenuaram a febre em 61.0% e 82.4%, respectivamente. Estes dois compostos foram selecionados para a investigação dos mecanismos de ação. Os efeitos sobre a atividade da ciclooxigenase-1 e -2 (COX-1 e COX-2), a oxidação in vitro do 1,1-difenil-2- picrilhidrazil (DPPH), os níveis de TNF-a e IL-1b e influxo de leucócitos na cavidade peritoneal dos ratos injetados com S. cerevisiae foram determinados. Enquanto 3Et- e 3Pr-TFDP não alteraram o aumento nos níveis de TNF-a e IL-1b induzido por S. cerevisiae, o derivado 3Et- TFDP causou uma redução de 42% na contagem de leucócitos na cavidade peritoneal. 3Et- e 3Pr-TFDP não alteraram a atividade da COX-1 e COX-2 in vitro, mas apresentaram atividade antioxidante no ensaio do DPPH, com CI50 de 39.3 (25.0-62.0) mM e 162.9 (135.6-195.7) mM, respectivamente. Em outro grupo de experimentos, foi avaliado o efeito do pré-tratamento dos animais com os compostos 3Et- e 3Pr-TFDP sobre a inflamação peritoneal induzida por S.cerevisiae em ratos. O pré-tratamento com 3Et-TFDP (140 μmol/kg, 5 mL/Kg, s.c.) preveniu significativamente o aumento no influxo de leucócitos, a permeabilidade vascular peritoneal e a atividade da mieloperoxidase (MPO), mas não teve efeito sobre os níveis de TNF-a e IL-1b. Por outro lado, 3Pr-TFDP (200 μmol/kg, 5 mL/Kg, s.c.) não apresentou efeito sobre nenhum desses parâmetros inflamatórios. O presente estudo descreve dois novos derivados pirazolínicos com atividade antipirética, cujos mecanismos de ação não envolvem inibição da COX ou inibição da liberação de citocinas pirogênicas. Além disso, foi demonstrado que o composto 3Et-TFDP apresenta potencial antiinflamatório, atuando sobre o influxo de leucócitos, permeabilidade vascular peritoneal e aumento da atividade da MPO induzidos por S. cerevisiae. Em conjunto, nossos dados sugerem que os derivados pirazolínicos 3Et- e 3Pr-TFDP parecem ser compostos antipiréticos e antiinflamatórios promissores. / Fever is a regulated increase of body core temperature characterized by a raised thermoregulatory set point, which results from the interaction of the central nervous and immune systems. While fever is a hallmark of injury, infection and inflammation, it has also been considered the most important component of acute-phase response. Although there is evidence supporting the idea that fever enhances host defenses, some studies have suggested that raising core temperature to the febrile range may be harmful. Therefore, in the clinical situations in which fever-associated risks outweigh benefits, antipyretic treatment is formally indicated. Pyrazoles constitute an important group of organic compounds that have been extensively studied due to their numerous biological activities. Recently a series of pyrazole derivatives have been screened for antinociceptive and antiedematogenic activity in mice. These compounds cause antinociception in the formalin test and in the Freund's adjuvant (CFA) animal model of arthritis and decrease carrageenin-induced edema. Given the effects reported for these compounds, we decided to investigate the effect of eight 5-hydroxy-5-trifluoromethyl-4,5-dihydro- 1H-1-carboxyamidepyrazoles (TFDPs) on body temperature, baker´s yeast-induced fever and peritoneal inflammation in 28 days-old male Wistar rats. Only 3ethyl- and 3propyl-TFDP (140 and 200 μmol/kg, respectively, s.c., 4 h after S. cerevisiae injection) attenuated baker’s yeastinduced fever by 61.0% and 82.4%, respectively. These two effective antipyretics were selected to investigate the mechanisms of action. The effects on cyclooxygenase-1 and -2 (COX-1 and COX-2) activities, on 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl (DPPH) oxidation in vitro, on TNF-a and IL- 1b levels and on leukocyte counts in the washes of peritoneal cavities of rats injected with baker’s yeast were determined. While 3ethyl- and 3propyl-TFDP did not reduce baker’s yeastinduced increases of IL-1 or TNF- levels, 3ethyl-TFDP caused a 42% reduction in peritoneal leukocyte count. 3ethyl- and 3propyl-TFDP did not alter COX-1 and COX-2 activities in vitro, but presented antioxidant activity in the DPPH assay with an IC50 of 39.3 (25.0-62.0) mM and 162.9 (135.6-195.7) mM, respectively. In a other set of the experiments, we investigate the effect of 3- ethyl- and 3-propyl-5-hydroxy-5-trifluoromethyl-4,5-dihydro-1H-1-carboxyamidepyrazoles on S.cerevisiae-induced peritoneal inflammation in rats. Pre-treatment with 3ethyl-TFDP (140 μmol/kg, 5 mL/Kg) significantly prevented S.cerevisiae-induced increase in leukocyte influx, peritoneal vascular permeability and myeloperoxidase activity, but had no effect on TNF-a and IL-1b levels. On the other hand, 3propyl-TFDP (200 μmol/kg, 5 mL/Kg) had no effect on these inflammatory parameters. The current study describes two novel antipyretic pyrazole derivatives, whose mechanisms of action do not involve the classic inhibition of the COX pathway or pyrogenic cytokine release. In addition, it is shown that 3ethyl-TFDP presents antiinflammatory potential, since it reduces leukocyte influx, peritoneal vascular permeability and MPO activity. Taken together, our data suggest that the pyrazole derivatives 3ethyl- and 3propyl-TFDP seems a promising antipyretic and anti-inflammatory compounds.

Baccharis trimera (Less.) DC. (Asteraceae), popularmente conhecida como carqueja, é nativa da América sendo amplamente empregada na medicina popular para problemas hepáticos, digestivos, e como anti-inflamatória. Em sua composição química destaca-se maior acúmulo de flavonas, flavonóis e de diterpenos labdanos e clerodanos. Diversos estudos vêm sendo realizados, em especial para as atividades anti-inflamatórias e antimicrobianas. Com isso, iniciou-se o fracionamento do extrato de B. trimera visando à identificação da fração ou compostos responsáveis pela atividade anti-inflamatória. Das partes aéreas de B. trimera foram obtidas as frações diclorometano, acetato de etila, n-butanol e aquosa, além das frações saponinas e flavonóides. Essas seis frações foram avaliadas para a atividade anti-inflamatória através do modelo de inflamação aguda da pleurisia induzida por carragenina e foram avaliados os seguintes parâmetros no líquido pleural: volume de exsudato, contagem de leucócitos totais, diferencial citológico, concentração protéica e determinação de NO no exsudato. Todas as frações testadas diminuíram significativamente os parâmetros analisados quando comparados ao grupo carragenina (ANOVA, P < 0,05), evidenciando assim potencial atividade antiinflamatória. A determinação de fenóis totais e a atividade antioxidante foram avaliadas através dos métodos de Folin-Ciocalteu e através do ensaio espectrofotométrico com o radical 2,2 difenil-1-picril-hidrazil (DPPH.), respectivamente. As frações flavonóides e acetato de etila (1 mg/ml) apresentaram alto potencial antioxidante, não se diferenciando estatisticamente (ANOVA, P < 0,05) das substâncias de referência vitamina C, quercetina e luteolina nas mesmas concentrações, sugerindo dessa forma que a ação antioxidante destas frações devese à presença de flavonóides. A continuidade dos estudos fitoquímicos e a identificação do potencial antioxidante e anti-inflamatório de B. trimera, além de contribuir para a diferenciação química das espécies do gênero Baccharis poderão credenciá-la para o desenvolvimento de um fármaco com atividade anti-inflamatória e antioxidante. / Baccharis trimera (Less.) DC. (Asteraceae), popularly known as "carqueja", is native to America and it is widely used in traditional medicine for gastrointestinal treatments, for liver diseases, as digestive and to anti-inflammatory purposes. It presented accumulation of flavones, flavonols and diterpenes. Several studies have been performed to study its anti-inflammatory and antimicrobial activities. Considering this, we initiated the fractionation of B. trimera extract in order to identify the fraction or compounds responsible for its anti-inflammatory activity. From the aerial parts of B. trimera it were obtained the fractions: dichloromethane, ethyl acetate, n-butanol, aqueous and also saponins and flavonoids fractions. All fractions were characterized by TLC. These six fractions were evaluated for the anti-inflammatory activity using the carrageenan-induced pleurisy, as a model of acute inflammation via i.p. The following parameters were determined in the pleural fluid: the exudate volume, total leukocyte count, cytological differences, protein concentration and determination of NO. All tested fractions decreased significantly the analyzed parameters when compared to the carrageenan group (ANOVA, P < 0.05), showing potential antiinflammatory activity. The determination of total phenols and antioxidant activity were evaluated by the Folin-Ciocalteu spectrophotometric assay and by the radical 2.2- diphenyl-1-picryl-hidrazil (DPPH.) method, respectively. The flavonoid and ethyl acetate fractions (1 mg / ml) showed high antioxidant potential that were similar (ANOVA, P < 0.05) from that of the reference substances: vitamin C, quercetin and luteolin in the same concentrations, thus suggesting that the antioxidant activity of these fractions is due to the presence of flavonoids. The phytochemical studies and the identification of potential antioxidant and anti-inflammatory activities of B. trimera, will contribute to the chemical differentiation of Baccharis species and also it should support the development of a drug with anti-inflammatory and antioxidant activity.