Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Dentre as espécies florestais nativas da Amazônia utilizadas por populações tradicionais na terapêutica de diversos problemas de saúde estão a Geissospermum argenteum Woodson, uma Apocynaceae, e a Minquartia guianensis Aubl., da família Olacaceae. Entre os problemas de saúde está a malária, que no Brasil e no mundo ainda é um grave problema de saúde pública. Outro agravo à saúde de importância são infecções microbianas, pois os micro-organismos têm desenvolvido resistência aos agentes antimicrobianos. Neste trabalho, foram coletadas amostras de cascas, folhas e galhos de G. argenteum e M. guianensis, em área de floresta, na Vila Apiaú, município de Mucajaí RR. As amostras foram submetidas à extração metanólica a quente e extração aquosa, Amostra de extrato metanólico de cascas de G. argenteum foi submetida a particionamento líquido-líquido, resultando nas frações hexânica, clorofórmica, acetato de etila e metanol/água. A fração clorofórmica foi selecionada para cromatografia em coluna com sistema gradiente de solventes, obtendo-se 38 frações, as quais foram analisadas através de CCD e destas a fração Cr10 foi selecionada para cromatografia preparativa, a partir da qual foi obtida a fração F6, que analisada em CCD mostrou-se positiva para alcalóides. Os extratos metanólicos e aquosos de ambas as espécies, e frações primárias provenientes de extratos G. argenteum foram testados em ensaios in vitro para atividade antimalárica frente à cepa cloroquino-resistente, K1, de Plasmodium falciparum, nas concentrações de 50 e 5 μg/mL. Posteriormente, amostras ativas foram avaliadas em 7 diluições para estabelecer a relação dose-resposta e valores de concentração inibitória mediana (CI50). Amostras provenientes das duas espécies também foram testadas contra as cepas bacterianas, Staphylococcus aureus, Streptococcus mutans e Escherichia coli, e contra a levedura Candida albicans. A atividade antimicrobiana foi avaliada através de difusão em ágar e a concentração inibitória mínima (CIM) por microdiluição em placas. Para as frações acetato de etila, clorofórmica, hexânica e hidroalcoólica obtida de cascas de G. argenteum e a fração Cr10 foi realizada a bioautografia para S. aureus. Na atividade antimalárica o extrato metanólico de casca foi ativo, com CI50 de 4,6 μg/mL e a fração clorofórmica obtida de casca de G. argenteum também foi ativa com CI50 de 2,0 μg/mL. Os extratos de M. guianensis foram considerados inativos para a atividade antimalárica. Na atividade antimicrobiana, através de difusão em ágar, extratos de G. argenteum foram parcialmente ativos contra S. aureus, S. mutans e inativos contra E. coli e C. albicans. A CIM para S. aureus foi de 0,63 mg/mL para a fração metanol/água, para S. mutans, CIM de 0,63 mg/mL e C. albicans com CIM de 0,63 mg/mL. Para cepa de E. coli os extratos foram inativos. Extratos de M. guianensis mostraram-se ativos frente à S. aureus e C. albicans através de difusão em ágar e apresentaram a CIM superior a 1mg/ml para S. aureus, S. mutans e C. albicans. Os extratos de M. guianensis foram inativos contra E. coli. Na autobiografia para S. aureus as frações testadas apresentaram atividade. / Among the natives species from the Amazon Forest used by traditional populations in the treatment of various health problems, including, malaria, wich in Brazil and in the world remains a serious public health problem, are Geissospermum argenteum Woodson, an Apocynaceae, and Minquartia guianensis Aubl, Olacaceae family. Another important health problem is the microbial infections, because the microorganisms have developed resistence to antimicrobial agents. In this work, samples were collected from bark, leaves and twigs of G.argenteum and M. guianensis in a forestall area in Apiaú village, city of Mucajaí RR. The samples were extracted by hot methanol and water extraction, resulting in methanol and aqueous extracts. Sample of methanol extract of bark of G.argenteum was submitted to liquid-liquid partitioning, resulting in fractions hexane, chloroform, ethyl acetate and methanol/water. The chloroform fraction was selected for fractionation using chromatography colunn and solvent gradient system, resulting in 38 fractions, which were analyzed by TLC and the fraction Cr10 was selected for preparative chromatography, from which the fraction F6 was obtained, analyzed in CCD was positive for alkaloids. The methanol and aqueous extracts of both species and fractions of extracts from primary G.argenteum were tested in vitro assays for antimalarial activity against the chlroquine-resistant K1 Plasmodium falciparum at concentrations of 50 and 5 mg/mL. Subsequently, active samples were evaluated in 7 diluitions to establish the dose-response and median inhibitory concentration values (IC50). Samples from two species were also tested against bacterial strains, Staphylococcus aureus, Streptococcus mutans and Escherichia coli, and against the yeast Candida albicans. Antimicrobial activity was evaluated by agar diffusion and minimum inhibitory concentration (MIC) by microdilution plates. For fractions of ethyl acetate, chloroform, hexane and water-alcohol obtained from barks of G.argenteum, fraction Cr10 and bioautography was performed fo S. aureus. Antimalarial activity in the methanol extract of bark was active, with IC50 of 4,6 mg/mL and chloroform fraction obtained from bark of G.argenteum was also active with IC50 of 2,0 mg/mL. The extracts of M. guianensis were considered inactive for antimalarial activity. In antimicrobial activity by agar diffusion, extracts of G.argenteum were partially active against S. aureus, S. mutans and inactive against E. coli and C. albicans. The MIC for S. aureus was 0,63 mg/mL per fraction methanol/water, S. mutans, MIC of 0,63 mg/mL and C. albicans with an MIC of 0,63 mg/mL. For the strain of E.coli there was no activity. Extracts of M. guianensis were active against the S. aureus and C. albicans by agar diffusion and presented more than 1 mg/mL MIC for S aureus, S.mutans and C. albicans. The extracts of M. guianensis were inactive against E. coli.

Made available in DSpace on 2016-08-19T12:56:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Francisco Reivilandio.pdf: 1587328 bytes, checksum: 64f5702f7917c2248cddce09472cef03 (MD5) Previous issue date: 2011-06-10 / Jamaican pepper, Pimenta dioica Lindl, is a species belonging to the family of Myrtacea, measuring 6m to 15m high, very aromatic in all its parts. It is originally from Central America and West India and with great economic importance in the market of essential oils. The extraction of the essential oil of Pimenta dioica L seeds was carried out by using the method of hydrodistillation known as Cleverger system. It was extracted from a maximum volume of oil in the period of four hours with a yield of 2.8% m/m. The UV spectrophotometric techniques, mass spectrometry and gas chromatography, as well as the physical constants, density, color and appearance were used to identify the compound eugenol and other constituents of the essential oil of P. dioica L. Through the technique of external standard and standard addition it was quantified with a eugenol percentage of 76.98%, forming the major component. The essential oil of Pimenta dioica L was applied to the phyto pathogenic fungi species Fusarium oxysporum f. sp. lycopersici, Fusarium oxysporum f. sp. passiflorae, Fusarium subglutinans f. sp ananas., Fusarium oxysporum f. sp. vasinfectum and Fusarium oxysporum f. sp. cubense resulting in a total inhibition of mycelial growth of all species tested for a period of ten days of evaluation. / A pimenta da Jamaica, Pimenta dioica Lindl, é uma espécie vegetal pertencente à família Mirtacea, medindo de 6 a 15 m de altura, muito aromática em todas as suas partes. É originaria da América Central e Oeste da Índia e com grande importância econômica no mercado de óleos essenciais. A extração do óleo essencial das sementes da P. dioica foi realizada pelo método da hidrodestilação utilizando o sistema Cleverger. Foi extraído um volume máximo de óleo no tempo de quatro horas com um rendimento de 2,8 %m/m. As técnicas espectrofotométricas de UV, espectrometria de massa e cromatografia gasosa, assim como as constantes físicas, densidade, cor e aparência foram utilizadas para identificar o composto eugenol e os demais constituintes do óleo essencial da P. dioica. Através da técnica de padrão externo e adição de padrão quantificou-se o eugenol com um percentual de 76,98 %, constituindo-se o componente majoritário. O óleo essencial da P. dioica foi aplicado em fungos fitopatogênicos das espécies Fusarium oxysporum f. sp. lycopersici, Fusarium oxysporum f. sp. passiflorae, Fusarium subglutinans f. sp. ananas, Fusarium f. sp. vasinfectum e Fusarium oxysporum f. sp. cubense, obtendo-se uma inibição total do crescimento micelial de todas as espécies testadas por um período de dez dias de avaliação.

O uso de plantas na cura de enfermidades tem sido objeto de muitos estudos e desde épocas remotas está ligado ao desenvolvimento cultural de civilizações. Estudos anteriores em espécies de Myristicaceae descrevem a ocorrência da classe de lignóides como principal metabólito secundário. Variedades de estruturas químicas e de atividades biológicas são atribuídas aos lignóides. Estes metabólitos encontram-se acumulados em todas as partes da planta, principalmente nos frutos, onde os compostos predominantes são neolignanas. O presente trabalho foi realizado com Virola molissima que se encontra dispersa na Reserva Adolpho Ducke, situada nas proximidades de Manaus-AM. Os frutos foram coletados durante o mês de novembro, estação de seca na região. Não existe registro de estudo fitoquímico desta espécie. A partir de extratos de pericarpos, arilos, tegumentos e amêndoas dos frutos da Virola molissima foram isoladas por fracionamento cromatográfico as neolignanas tetrahidrofurânica, ariltetralônica e diarilbutânica. As neolignanas isoladas foram identificadas por comparação de seus dados de Ressonância Magnética Nuclear de Hidrogênio e de Carbono Treze, com aqueles descritos na literatura. A atividade antifúngica da neolignana ariltetralônica, pura ou em mistura, foi testada contra basidiomicetos Pycnoporus sanguineus, Trametes villosa e Lenzites trabeas. Estes fungos são xilófagos e causam o apodrecimento da madeira. / The use of plants in the treatment of diseases has been object of many studies, and since remote ages, the issue is linked to the cultural development of civilizations. Previous studies on Myristicaceous species described the occurrence of lignoids as its main secondary metabolites, which are known by varieties of chemical structures and biological activities. These lignoids are accumulated in all parts of the plant, mainly in the fruits, where the major constituent are neolignans. Present work was carried out on Virola molissima dispersed in Adolpho Ducke Reserve, located around Manaus, Amazon State, Brazil. Its fruits were collected during November, a month of dry season in this region. This species has not been phytochemically studied. Tetrahydrofuran, aryltetralone and dibenzylbutane neolignans were isolated from the extracts of pericarps, arils, seed coats and seeds of V. molissima fruits, by chromatographic fractionations. The structures of the isolated neolignans were elucidated through a Nuclear comparison between Magnetic Resonance of 1Hidrogen and 13Carbon data, and those described in the literature. The antifungal activity of the aryltetralone neolignan, pure or in mixture, was assayed against basidiomycetes Pycnoporus sanguineus, Trametes villosa and Lenzites trabeas. These fungi are xylophagus and they cause the decay of the wood.

Submitted by Renata Lopes (renatasil82@gmail.com) on 2016-04-15T19:16:37Z No. of bitstreams: 1 edilenebolutaribaptista.pdf: 6189497 bytes, checksum: 9b5a9896c31c59b43d9001520bb0f8c9 (MD5) / Approved for entry into archive by Adriana Oliveira (adriana.oliveira@ufjf.edu.br) on 2016-04-24T03:18:16Z (GMT) No. of bitstreams: 1 edilenebolutaribaptista.pdf: 6189497 bytes, checksum: 9b5a9896c31c59b43d9001520bb0f8c9 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-04-24T03:18:16Z (GMT). No. of bitstreams: 1 edilenebolutaribaptista.pdf: 6189497 bytes, checksum: 9b5a9896c31c59b43d9001520bb0f8c9 (MD5) Previous issue date: 2015-12-11 / As dermatofitoses são doenças fúngicas que nos animais são causadas principalmente por microrganismos dos gêneros Microsporum spp e Trichophyton spp. Afetam os tecidos queratinizados resultando no aparecimento de lesões em anel e alopecia e podem ser transmissíveis ao homem. Na busca por tratamentos naturais alternativos aos fármacos sintéticos de toxicidade conhecida, os óleos essenciais destacam-se por possuírem uma composição química complexa e diversas ações farmacológicas conhecidas. O objetivo do presente trabalho foi desenvolver uma formulação veterinária de uso tópico com óleo essencial para tratamento da dermatofitose e avaliar a sua estabilidade. Foram realizadas a caracterização morfológica dos fungos Trichophyton mentagrophytes ATCC 11480, Microsporum canis ATCC 32903 e Microsporum gypseum ATCC 14683; a identificação e quantificação dos componentes químicos dos óleos essenciais da Pimenta pseudocaryophyllus (Gomes) L.R. Landrum e do Eucalyptus smithii e, posteriormente, a análise de seus potenciais antifúngicos. Uma formulação tópica (creme aniônico tipo O/A) com o óleo da P. pseudocaryophyllus foi desenvolvida e submetida a 50 °C e 90% de Umidade Relativa - UR por 3 meses para o estudo de estabilidade acelerada. Durante esse período, foram avaliados os parâmetros organolépticos e físico-químicos da formulação, além do estudo termoanalítico, espectroscópico na região do infravermelho e de cromatografia gasosa (CG). Os resultados para a P. pseudocaryophyllus foram mais promissores indicando uma concentração inibitória mínima (CIM) de 250 μg/mL para os três fungos e uma concentração fungicida mínima (CFM) de 250 μg/mL para o M. canis e de 1000 μg/mL para T. mentagrophytes e M. gypseum. A formulação contendo o óleo da P. pseudocaryophyllus na concentração de 1% (m/m) mostrou-se eficaz no combate fúngico e, por meio da microscopia eletrônica de varredura (MEV), foram observadas as principais alterações morfológicas nas hifas e macroconídeos dos fungos causadas pelos óleos e pela formulação. Durante o estudo de estabilidade a formulação manteve-se estável em relação aos parâmetros organolépticos e físicoquímicos, apresentando apenas uma perda na concentração de eugenol (composto majoritário do óleo essencial) comprovada por CG. Por meio de técnicas termoanalíticas foi possível verificar a estabilidade térmica e avaliar a compatibilidade entre os excipientes e o óleo essencial. De forma geral, os resultados encontrados para a formulação foram satisfatórios, porém vale ressaltar que os estudos termoanalíticos ainda não substituem os estudos convencionais de estabilidade e que para avaliar a real toxicidade dessa formulação, testes de segurança precisam ser realizados antes da comercialização do produto. / Dermatophytosis are fungal diseases and they are caused in animals by microorganisms of the genus Microsporum spp and Trichophyton spp. Tissues containing keratin are affected resulting in ring lesions and alopecia and it can be transmitted to humans.Trying to find alternative natural treatments, the essential oils are notable for having a complex chemical composition and many known pharmacological actions. The objective of this study was to develop a veterinary formulation for topical use with essential oil to treat the dermatophytosis and evaluate its stability. A morphological characterization of the fungi Trichophyton mentagrophytes ATCC 11480, Microsporum canis ATCC 32903 and Microsporum gypseum ATCC 14683 was performed and also the identification and quantification of chemical components of the essential oils of Pimenta pseudocaryophyllus (Gomes) L.R. Landrum and the Eucalyptus smithii and, subsequently , the analysis of their potential antifungal. A topical formulation (anionic cream type O/A) with the oil of P. pseudocaryophyllus was developed and submitted to 50 °C and 90% relative humidity for 3 months to study of accelerated stability. During this period, physical, chemical and organoleptic parameters of the formulation were evaluated, in addition to thermoanalytical, infrared spectroscopic and gas chromatography (GC) study. The results for P. pseudocaryophyllus were more promising indicating a minimum inhibitory concentration (MIC) of 250 μg mL-1 for all three fungi and minimum fungicidal concentration (MFC) of 250 μg mL-1 for M. canis and 1000 μg mL-1 for T. mentagrophytes and M. gypseum. The formulation containing the oil of P. pseudocaryophyllus with a concentration of 1% (w/w) was effective in combating fungal and, by scanning electron microscopy (SEM), the main morphological changes in hyphae and fungal macroconidia caused by oils and the formulation were observed. During stability study, the formulation was stable in relation to physical, chemical and organoleptic parameters, with only a loss in eugenol concentration (major compound of the essential oil) confirmed by GC. It was possible to verify, by thermoanalytical techniques, the thermal stability and to evaluate the compatibility of the excipients and the essential oil. In general, the results of formulation were satisfactory, but it´s important to emphasize that the thermoanalytical studies does not replace conventional stability studies. To evaluate the real toxicity of this formulation, safety tests need to be performed before to marketing the product.

Submitted by Renata Lopes (renatasil82@gmail.com) on 2016-09-20T12:27:34Z No. of bitstreams: 1 suzanameiraribeiro.pdf: 1332777 bytes, checksum: b4c35efe19a33f78ca2cec41c685e844 (MD5) / Approved for entry into archive by Diamantino Mayra (mayra.diamantino@ufjf.edu.br) on 2016-09-26T20:24:02Z (GMT) No. of bitstreams: 1 suzanameiraribeiro.pdf: 1332777 bytes, checksum: b4c35efe19a33f78ca2cec41c685e844 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-09-26T20:24:02Z (GMT). No. of bitstreams: 1 suzanameiraribeiro.pdf: 1332777 bytes, checksum: b4c35efe19a33f78ca2cec41c685e844 (MD5) Previous issue date: 2010-06-12 / Doenças causadas por patógenos, incluindo bactérias e fungos podem gerar muitos problemas à saúde humana e à agricultura. Em cultivares economicamente importantes, tais patógenos podem contribuir para perdas significativas no rendimento da produção agrícola. Um fator agravante para esses dois cenários é o uso intensivo de compostos convencionais para combater esses patógenos, levando à seleção de microrganismos extremamente resistentes. Além disso, tais compostos podem trazer severas conseqüências ao meio ambiente bem como à saúde humana e animal. Desta forma, a busca por novos compostos capazes de controlar efetivamente bactérias e fungos patogênicos resistentes, têm sido prioritária. Por estas razões, este trabalho reporta o isolamento de uma nova proteína heterodimérica (Pa-AFP1) de sementes de Passiflora alata com propriedades antifúngicas. Pa-AFP1 foi purificada utilizando precipitação com sulfato de amônio 70-100%, subseqüente cromatografia de troca aniônica em Q-Sepharose e cromatografia de HPLC fase reversa em coluna C4. Análise da massa molecular por meio de gel Tricina-SDS-PAGE revelou uma massa molecular de aproximadamente 4.500 Da para a cadeia menor e cerca de 7.000 Da para cadeia maior totalizando um heterodímero com cerca de 11.500 Da. A massa da forma oligomérica também foi obtida por espectrometria de massa (11569. 63 Da). Análise da seqüência N-terminal mostrou alta identidade entre Pa-AFP1 e albuminas 2S, adicionando assim uma nova proteína à pequena lista de albuminas 2S com atividade antimicrobiana. Além disso, Pa-AFP1 foi capaz de inibir eficientemente o fungo filamentoso Colletotrichum gloeosporiodes, mas foi incapaz de inibir bactérias e fungos leveduriformes. Em suma, Pa-AFP1 poderá futuramente contribuir para o desenvolvimento de produtos biotecnológicos contra fungos fitopatogênicos. / Diseases caused by pathogens, including bacteria and fungi can generate many problems to human health and agriculture. In important economically cultivars, such pathogens may contribute to significant losses in yield of agricultural production. The aggravating factor for these two scenarios is the intensive use of conventional compounds to combat these pathogens, leading to selection of highly resistant microorganisms. Furthermore, these compounds can bring severe consequences to the environment, human and animal health. Thus the search for new compounds capable of effectively controlling bacteria and fungi resistant has been a priority. In this report a heterodimeric antifungal protein named Pa-AFP1, showing higher identity with the 2S albumin family, was purified by using 70-100% ammonium sulfate saturation and further purification steps such as anionic exchange Q-Sepharose chromatography associated with HPLC reversed-phase C4 chromatography. Analysis by Tricine-SDS-PAGE revealed two peptide molecular masses of approximately 4,500 Da and 7,000 Da, in the presence of β-mercapthoetanol, while by removing the reducing agent, a single protein with molecular mass of about 11,500 Da was obtained. Moreover, dimeric mass was confirmed by MALDI-TOF analyses (11,569.76 Da). The antifungal protein, named Pa-AFP1, efficiently inhibited the growth of filamentous fungi Colletotrichum gloeosporiodes, and was added to a short list of 2S albumins with antimicrobial properties. Otherwise, this same peptide showed no activity toward bacteria and yeasts. In summary, this compound could be used in the future to develop biotechnological products for the control of phytopathogenic fungi.

Submitted by Renata Lopes (renatasil82@gmail.com) on 2017-04-17T13:33:41Z No. of bitstreams: 1 rebecamollima.pdf: 1811573 bytes, checksum: 85964eefdd3a90513fcac0f172c11491 (MD5) / Approved for entry into archive by Adriana Oliveira (adriana.oliveira@ufjf.edu.br) on 2017-04-18T13:41:24Z (GMT) No. of bitstreams: 1 rebecamollima.pdf: 1811573 bytes, checksum: 85964eefdd3a90513fcac0f172c11491 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-04-18T13:41:24Z (GMT). No. of bitstreams: 1 rebecamollima.pdf: 1811573 bytes, checksum: 85964eefdd3a90513fcac0f172c11491 (MD5) Previous issue date: 2017-01-24 / A esporotricose é uma micose subcutânea de evolução subaguda a crônica capaz de afetar seres humanos e animais. Distribuída mundialmente, possui maior prevalência nas áreas de clima tropical e temperado, sendo a micose subcutânea mais comum na América do Sul. Seus agentes etiológicos são fungos do complexo Sporothrix schenckii, saprófitas e dimórficos, encontrados no ambiente. No Brasil, o aumento exponencial dos casos em humanos e animais vem sendo observado nas últimas décadas. Nos arredores do estado do Rio de Janeiro, já é observada uma epidemia de origem zoonótica. Aliado a isso, o tratamento desta micose vem sendo motivo de preocupação. O alto custo e toxicidade dos medicamentos, o tempo prolongado de tratamento, e o surgimento de linhagens resistentes aos fármacos de escolha justificam a demanda crescente pela descoberta de novos fármacos. Neste contexto, o presente estudo tem como objetivo identificar os componentes dos óleos essenciais de Myrtus communis L. e Thymus vulgaris L., investigar seus potenciais antifúngicos in vitro frente às principais linhagens causadoras de esporotricose no Brasil, e determinar a citotoxicidade preliminar dos óleos essenciais. Os óleos essenciais de mirta e tomilho foram obtidos comercialmente. O perfil cromatográfico obtido por CG para os dois óleos indicou elevados valores de monoterpernos, 87,1% para a mirta e 98,8% para o tomilho, tendo como componentes majoritários o 1-8 cineol e o timol, respectivamente. Para a avaliação da atividade antifúngica foram utilizadas as seguintes linhagens fúngicas: Sporothrix schenckii ATCC 1099-18, Sporothrix schenckii IPEC 15383, Sporothrix brasiliensis ATCC 5110 e Sporothrix brasiliensis IPEC 17943 e duas linhagens clínicas de Sporothrix schenckii, denominadas genericamente como A e B. O óleo essencial de mirta apresentou atividade antifúngica frente a todas as linhagens em concentrações que variaram de 31,25 a 62,5 µg/mL. Foi observada atividade fungicida frente a todas as linhagens em concentrações acima de 62,5 µg/mL. O óleo essencial de tomilho foi capaz de inibir todas as linhagens em concentrações que variaram de 125 a 250 µg/mL. Foi observada atividade fungicida frente a todas as linhagens em concentrações acima de 250 µg/mL. A anfotericina B e o itraconazol foram utilizados como fármacos de referência. Para estes foi observado que somente duas das linhagens estudadas apresentaram susceptibilidade à anfotericina B e ao itraconazol, todas as linhagens estudadas foram consideradas resistentes, com valores de CIM > 16 µg/mL. Estes resultados sugerem indícios de resistência fúngica das linhagens estudadas em relação aos fármacos de referência empregados no tratamento da esporotricose. As microscopias eletrônicas de varredura das linhagens fúngicas revelaram que, tanto nos fungos expostos aos tratamentos experimentais, quanto naqueles expostos aos fármacos de referência, deformidades na estrutura fúngica quando comparadas ao grupo não tratado foram observadas. Em relação aos ensaios de citotoxicidade realizados com queratinócitos humanos (HACAT) pelo método de redução do MTT, os óleos não apresentaram citotoxicidade nas concentrações equivalentes a seus valores de CIM. / Sporotrichosis is a subcutaneous mycosis with subacute to chronic evolution that can affect humans and animals. Distributed worldwide, it is more prevalent in tropical and temperate climates, being the most common subcutaneous mycosis in South America. Its etiological agents are fungi of the Sporothrix schenckii complex, saprophytic and dimorphic, found in the environment. In Brazil, the exponential increase in cases in humans and animals has been observed in recent decades. In the surroundings of the state of Rio de Janeiro, an epidemic of zoonotic origin is already observed. Allied to this, the treatment of this mycosis has been cause of concern. The high cost and toxicity of the drugs, the prolonged treatment time, and the emergence of resistant strains on drugs of choice justify the growing demand for the discovery of new drugs. In this context, the present study aims to identify the components of the essential oils of Myrtus communis L. and Thymus vulgaris L., to investigate their antifungal potentials in vitro against the main sporotrichosis strains in Brazil, and to determine the preliminary cytotoxicity of essential oils. The essential oils of myrtle and thyme were obtained commercially. The chromatographic profile obtained by GC for the two oils showed high values of monoterpere, 87.1% for myrtle and 98.8% for thyme, with 1-8 cineole and thymol, respectively. The following fungal strains were used: Sporothrix schenckii ATCC 1099-18, Sporothrix schenckii IPEC 15383, Sporothrix brasiliensis ATCC 5110 and Sporothrix brasiliensis IPEC 17943 and two clinical strains of Sporothrix schenckii, referred as A and B. Myrtle essential oil showed antifungal activity against all strains at concentrations ranging from 31.25 to 62.5 μg / mL. Fungicidal activity against all strains was observed at concentrations above 62.5 μg / mL. Thyme essential oil was able to inhibit all lineages at concentrations ranging from 125 to 250 μg / ml. Fungicidal activity was observed against all strains at concentrations above 250 μg / mL. Amphotericin B and itraconazole were used as standard drugs. For these, it was observed that only two of the studied strains showed susceptibility to amphotericin B and itraconazole, all strains studied were considered resistant, with MIC values > 16 μg / mL. These results suggest evidence of fungal resistance of the lines studied in relation to the reference drugs used in the treatment of sporotrichosis. Scanning electron microscopy of fungal lines revealed that, both in the fungi exposed to the experimental treatments and in those exposed to the reference drugs, deformities in the fungal structure when compared to the untreated group were observed. In relation to the cytotoxicity assays performed with human keratinocytes (HACAT) by the MTT reduction method, the oils did not present cytotoxicity at concentrations equivalent to their MIC values.

Made available in DSpace on 2014-08-20T14:37:53Z (GMT). No. of bitstreams: 1 dissertacao_claudia_giordani.pdf: 2276944 bytes, checksum: 55ee4444fa59202346411910205995d3 (MD5) Previous issue date: 2013-02-28 / The rescue and use of medicinal plants have been gaining space in human and veterinary medicine, as treatment and prophylaxis of diseases. In the treatment of mycosis, there is still issues regarding the limited amount of drugs and the occurrence of resistance, adverse reactions and relapses. Thus, the objective was to conduct a survey of medicinal plants and toxic found in the region of the Veterinary Clinic-Federal University of Pelotas, organize an instructional manual of the studied plants and uses in animal health, and to determine the antifungal effect of plant extracts on clinical isolates of Malassezia pachydermatis. In the survey, animal owners in the Veterinary Ambulatory were interviewed and visited. There were 111 interviews, which 74 species cited for medical use but the minority used them in animals. With respect to toxic plants 20 species were observed, but only six were reported by the population, and from the results in the survey was made a manual on plants. To evaluate the antifungal activity were tested six hydroalcoholic extracts of Aroeira, Carqueja, Erva-de-bicho, Lanceta, Pitangueira e Rabo-de-lagarto, the techniques microdilution and disk diffusion against M. pachydermatis isolated from dogs (dermatitis=38, otitis=10). The extracts that resulted in higher activity were Aroeira, Erva-de-Bicho and Pitangueira. From these results, we can see the importance of further studies of the activities of plants to determine more precisely its action and toxicity. With this study concludes that there are many medicinal and toxic species distributed in the region of the Veterinary Clinic-UFPel, but is still scarce use of medicinal plants in animal, and that the hydroalcoholic extracts of Aroeira, Erva-de-bicho and Pitangueira had action on M. pachydermatis, opening the possibility of numerous studies in veterinary medicine. / O resgate e uso das plantas medicinais vêm ganhando espaço na medicina e veterinária, como tratamento e profilaxia de doenças. No tratamento das micoses, ainda observa-se uma quantidade limitada de medicamentos e a ocorrência de resistência, reações adversas e recidivas. Assim, objetivou-se realizar um levantamento das plantas medicinais e tóxicas encontradas na região do Ambulatório Veterinário-Universidade Federal de Pelotas, organizar um manual didático das plantas estudadas e usos na saúde animal, e determinar a ação antifúngica de extratos vegetais sobre isolados clínicos de Malassezia pachydermatis. No levantamento, foram entrevistados e visitados proprietários de animais atendidos no Ambulatório Veterinário. Foram 111 entrevistas, citando 74 espécies medicinais, porém a minoria usava-as em animais. Com relação às plantas tóxicas foram observadas 20 espécies, porém apenas seis eram relatadas pela população; e por fim, confeccionado um manual informativo das plantas. Para avaliação da atividade antifúngica foram testados extratos hidroalcoólicos de Aroeira, Carqueja, Erva-de-bicho, Lanceta, Pitangueira e Rabo-de-lagarto, pelas técnicas de microdiluição em caldo e difusão em disco frente a M. pachydermatis isolada de cães (dermatite=38; otite=10). Os extratos com maior atividade foram Aroeira, Erva-de-bicho e Pitangueira. Assim, percebe-se a importância de aprofundar os estudos sobre as plantas, determinando mais precisamente sua ação e toxicidade. Com o estudo conclui-se que existem muitas espécies medicinais e tóxicas na região do Ambulatório Veterinário-UFPel, porém ainda é escasso o uso das plantas medicinais em animais; e que os extratos hidroalcoólicos de Aroeira, Erva-de-bicho e Pitangueira apresentaram ação sobre M. pachydermatis, abrindo a possibilidade de inúmeras pesquisas em veterinária.

Made available in DSpace on 2014-08-20T14:38:01Z (GMT). No. of bitstreams: 1 tese_isabel_madrid.pdf: 2158071 bytes, checksum: 0cdf6bd60773cb623d04e6df539e8aa9 (MD5) Previous issue date: 2011-02-25 / Sporotrichosis has been receiving attention in any world in the several areas of the health as an important fungal disease. So, this work aimed: (i) to study cases of sporotrichosis diagnosed in the south region of Rio Grande do Sul in a period of ten years, (ii) to study the morphological and pathogenicity characteristics of S. schenckii isolates, (iii) to determine the sensitivity of S. schenckii isolates to the commercial disinfectants. Sporotrichosis cases were analysed as for geographical distribution, it clinical forms of the disease, presence of the fungus in different anatomical sites and tecidual inflammatory response. The 42 S. schenckii isolates originating from clinical cases, environment isolates and reference strains used in the phenotypic study were evaluated as for macromorphology in Sabouraud agar added of chloramphenicol, potato agar and ágar lactrimel, incubated 25ºC and 35ºC for 21 days. The micromorphology was analyzed in potato agar to 25ºC whereas the termotholerance was evaluated in ágar Sabouraud added of 1% yeast extract, incubated 41ºC for seven days. Ultraestructural study of nine clinical isolates and two reference strains of S. schenckii were carried by transmission electron microscopy. Susceptibility of 12 S. schenckii isolates to disinfectants was performed by the techniques of broth microdilution, agar diffusion and direct exposute test. The 103 cases of sporotrichosis in animals demonstrated that this is an endemic mycosis in the south region of Rio Grande do Sul being more frequent in young felines and adult dogs. The felines developed disseminated cutaneous form with more frequency. Therefore, in canines, the fixed cutaneous form was predominant though it has taken place in 18.2% of the dog to respiratory form with absence of cutaneous lesions. Research of the S. schenckii in nails, oral cavity, conjunctival mucosa, blood and testicles demonstrated high fungal positivity in samples of oral cavity (45.2%) and testicles (46.6%). The study of the hematological alterations related with the clinical form of the disease demonstrated that animals with the cutaneous fixed form of the mycosis do not present alterations in the blood count. However, animals with the cutaneous disseminated form develop important alterations characterized mainly for leucocytosis with neutrophilia and anaemia. Morphological analyzes of 42 clinical and environmental isolates of S. schenckii demonstrated macro and micromorphogical differences in the different culture medium utilized. In the thermotolerance evaluation 26.2% isolates were capable of growth at 41oC, specially isolates of feline sporotrichosis. The ultraestructural study showed presence of granules of melanin in all S. schenckii isolates of canine sporotrichosis and correlation among melanin and cell wall thickness. In vitro evaluation of disinfectants demonstrated chlorexidine digluconate antifungal activity in the microdilution broth and agar diffusion techniques and the sodium hypochlorite showed best performance in the direct exposure test. The presence of the organic matter interfered in the antifungal action of both disinfectants. Sodium hypochlorite showed better results with total elimination of the fungal load in the absence of organic matter and a reduction of 60 % of the fungal load in the presence of this. / A esporotricose tem se destacado mundialmente nas diversas áreas da saúde como uma importante doença fúngica. Assim, este trabalho teve como objetivos: (i) estudar casos de esporotricose diagnosticados na região sul do Rio Grande do Sul num período de dez anos, (ii) estudar as características morfológicas e de patogenicidade de isolados de Sporothrix schenckii, (iii) determinar a suscetibilidade de S. schenckii a desinfetantes comerciais. Os casos de esporotricose foram analisados quanto a distribuição geográfica, forma clíinica da doença, presença do fungo em diferentes sítios anatômicos e resposta tecidual. Os 42 isolados de S. schenckii provenientes de casos clínicos, isolados do ambiente e cepas de referência utilizados no estudo fenotípico foram avaliados quanto a macromorfologia em ágar Sabouraud acrescido de cloranfenicol, ágar batata e ágar lactrimel incubados a 25ºC e 35ºC por 21 dias. A micromorfologia foi avaliada em ágar batata a 25ºC enquanto que a termotolerância foi avaliada em ágar Sabouraud acrecido de extrato de levedura 1% incubado a 41ºC por sete dias. O estudo ultraestrural dos nove isolados clínicos e duas cepas de referência de S. schenckii foi realizado por microscopia eletrônica de transmissão. A suscetiblidade de 12 isolados de S. schenckii a desinfetantes foi realizada pelas técnicas de microdiluição em caldo, difusão em agar e teste de exposição direta. Os 103 casos de esporotricose em animais demonstraram que esta é uma micose endêmica na região sul do Rio Grande do Sul ocorrendo com mais freqüência em felinos jovens e cães adultos. Os felinos desenvolveram principalmente a forma cutânea disseminada enquanto que em caninos, a forma cutânea fixa foi a mais freqüente embora tenha ocorrido em 18,2% dos caninos, a forma respiratória com ausência de lesões cutâneas. A pesquisa do fungo S. schenckii em unhas, cavidade oral, mucosa conjuntival, sangue e testículos revelou alta positividade fúngica em amostras de testículos (46,6%) e cavidade oral (45,2%). O hemograma de animais com a forma cutânea fixa não apresentou alterações nos valores hematológicos enquanto que aqueles com a forma cutânea disseminada apresentaram alterações tanto no leucograma como no eritrograma, caracterizadas por leucocitose por neutrofilia e anemia normocítica e normocrômica. A análise morfológica de 42 isolados clínicos e do ambiente de S. schenckii demonstrou diferenças macro e micromorfológicas nos diferentes meios de cultivo utilizados. Na avaliação da termotolerância obteve-se 26,2% dos isolados termotolerantes, sendo a maioria proveniente de casos de esporotricose felina. O estudo ultraestrutural revelou presença de grânulos de melanina em todos os isolados de S. schenckii originados de esporotricose canina e correlação entre presença de melanina e espessura da parede celular. A avaliação in vitro de desinfetantes demonstrou maior ação antifúngica do digluconato de clorexidina nas técnicas de microdiluição em caldo e difusão em agar enquanto que o hipoclorido de sódio apresentou melhor eficácia na técnica de exposição direta. A presença de matéria orgânica interferiu na ação antifúngica de ambos os desinfetantes, entretanto, o hipoclorito de sódio apresentou melhores resultados com inativação total da carga fúngica na ausência de matéria orgânica e redução de 60% da carga fúngica na presença desta.

Submitted by Renata Lopes (renatasil82@gmail.com) on 2016-01-27T09:53:10Z No. of bitstreams: 1 camilasoaresfurtadocouto.pdf: 1669181 bytes, checksum: 87973d12c5cb4fed37df8f6a9afc5413 (MD5) / Approved for entry into archive by Adriana Oliveira (adriana.oliveira@ufjf.edu.br) on 2016-01-27T11:08:10Z (GMT) No. of bitstreams: 1 camilasoaresfurtadocouto.pdf: 1669181 bytes, checksum: 87973d12c5cb4fed37df8f6a9afc5413 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-01-27T11:08:10Z (GMT). No. of bitstreams: 1 camilasoaresfurtadocouto.pdf: 1669181 bytes, checksum: 87973d12c5cb4fed37df8f6a9afc5413 (MD5) Previous issue date: 2014-07-10 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / A esporotricose é uma importante micose subcutânea, que pode afetar seres humanos e animais, cujo principal agente etiológico é o Sporothrix schenkii. O tratamento de micoses vem sendo motivo de preocupação, devido à ocorrência de recidivas e surgimento de linhagens resistentes aos antifúngicos convencionais (sintéticos). Desta forma, há uma crescente busca por novos fármacos de origem sintética ou oriundo de fontes naturais eficazes e com novos mecanismos de ação. O objetivo deste trabalho foi identificar os componentes dos óleos essenciais de Baccharis trimera e Origanum vulgare por meio da cromatografia gasosa, investigar seus potenciais antifúngicos in vitro frente a quatro linhagens de Sporothrix schenckii e duas de S. brasiliensis. A anfotericina B e o cetoconazol foram utilizados como fármacos de referência. Os ensaios antifúngicos foram realizados por meio da triagem microbiológica e estabelecidas as concentrações inibitórias mínimas (CIM) e fungicidas mínimas (CFM) para as substâncias de interesse. A análise cromatográfica do óleo essencial de B. trimera demonstrou que o β-pineno (23,4%) foi o componente majoritário e no óleo de O. vulgare foi o γ-terpineno (30,5%) . Os valores de CIM e de CFM para o óleo de B. trimera e O. vulgare foram, respectivamente, 125 μg/mL e 62,5 μg/mL para a linhagem A; 500 μg/mL e 62,5 μg/mL para a linhagem B; 125 μg/mL e 125 μg/mL para o isolado S. schenckii ATCC 1099-18; 32,25 μg/mL e 125 μg/mL para o S. brasiliensis ATCC 5110; 62,5 μg/mL e 250 μg/mL para S. brasiliensis IPEC 17943 e 125 μg/mL e 500 μg/mL para o S. schenckii IPEC 15383. A ação dos dois óleos essenciais foi caracterizada como fungicida. Através das imagens de microscopia eletrônica de varredura (MEV), pode ser observado que os óleos essenciais provocam os mesmos tipos de alterações que os fármacos de referência, e em alguns casos em maior intensidade. Os resultados obtidos até o momento revelaram-se promissores e estimulam a continuidade da pesquisa. / Sporotrichosis is an important subcutaneous mycosis, that can affect humans and animals, which is the main etiological agent Sporothrix schenkii. The treatment of fungal infections has been of concern due to the occurrence of relapses and the emergence of strains resistant to conventional antifungal drugs (synthetic). Thus, there is a growing search for new and effective natural products with novel mechanisms of action. The objective was to identify the components of the essential oils of Origanum vulgare and Baccharis trimera and investigate their potential antifungal in vitro against four strains of S. schenckii and two of S. brasiliensis. Amphotericin B and ketoconazole were used as reference drugs. Antifungal assays were performed by means of microbiological screening and established the minimum inhibitory concentration (MIC) and minimum fungicidal concentration (MFC) for the substances of interest. The chromatographic analysis of the essential oil of B. trimera demonstrated that β - pinene (23.4%) was the major component and in O. vulgare oil was the γ - terpinene (30.5%) . The MIC and MFC values for oil B. trimera and O. vulgare were, respectively, 125 μg/mL and 62.5 μg/mL for strain A; 500 μg/mL and 62.5 μg/mL for strain B; 125 μg/mL e 125 μg/mL for S. schenckii ATCC 1099-18; 32.25 μg/mL and 125 μg/mL for strain S. brasiliensis ATCC 5110; 62.5 μg/mL and 250 μg/mL for S. brasiliensis IPEC 17943; 125 μg/mL and 500 μg/mL for S. schenckii IPEC 15383. The action of the essential oil was characterized as a fungicide. Through the images of scanning electron microscopy may be noted that the essential oils cause the same kinds of changes that reference drugs, and in some cases greater intensity. The results obtained so far have shown promise and stimulate continuing research.

O presente trabalho visou a avaliação do potencial antifúngico de extratos brutos das diferentes partes do vegetal (folha, caule e raiz) de espécies de Piperaceae, os quais foram submetidos ao ensaio de bioautografia frente aos fungos Cladosporium cladosporioides e Cladosporium sphaerospermum. Após a triagem biológica, os extratos brutos das espécies Piper mollicomum, Piper marginatum, Peperomia alata e Peperomia glabella foram selecionados para etapas posteriores de fracionamento e purificação, utilizando-se técnicas cromatográficas. O estudo fitoquímico biomonitorado das espécies selecionadas identificou como metabólitos ativos dois cromenos e uma di-hidrochalcona; duas flavanonas e três fenilpropanóides, sendo um de estrutura inédita, denominado marginatumol; dois policetídeos inéditos, alatanona A e alatanona B; quatro acilresorcinóis e quatro secolignanas, incluindo a peperomina G inédita. Todos os metabólitos isolados apresentaram potencial atividade antifúngica, sendo os policetídeos alatanona A e alatanona B os mais ativos, com atividade superior às substâncias controle (nistatina e miconazol). Assim, os dados obtidos neste estudo permitiram descrever diferentes classes de produtos naturais a partir de uma coleção de extratos de espécies de Piperaceae, com potencial para estudos de relações estrutura-atividade. / The present study was addressed to evaluate the antifungal activity of crude extracts from Piperaceae species in which different parts of the plant (leaves, stems and roots) were assessed by means of bioautography against Cladosporium cladosporioides and Cladosporium sphaerospermum. After antifungal assay, the extratcs from Piper mollicomum, Piper marginatum, Peperomia alata and Peperomia glabella displayed higher growth inhibitory potency and thus were selected for further fractionation and purification using chromatographic techniques. Such dereplication using the bioautographic assay yielded two chromenes and one dihydrochalcone; two flavanones and three phenylpropanoids, including the novel compound marginatumol; two new polyketides, alatanone A and alatanone B; four acylresorcinols and four secolignans, including the novel peperomin G, respectively. The bioautography indicated potential antifungal activity for all isolated metabolites and compounds alatanone A and alatanone B were found the most active in comparison to positive controls (nystatin and miconazole). The bioprospecting approach was proven to be very effective when the isolation of bioactive compounds from a collection of crude extracts is concerned, although not necessarily unraveling the major biosynthetic pathways in each plant species.