Submitted by Fabio Sobreira Campos da Costa (fabio.sobreira@ufpe.br) on 2015-05-28T13:25:14Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) DISSERTAÇÃO Moema Peisino Pereira.pdf: 1262854 bytes, checksum: b39023a4955c0cd7657e6a690fd40be5 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-05-28T13:25:14Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) DISSERTAÇÃO Moema Peisino Pereira.pdf: 1262854 bytes, checksum: b39023a4955c0cd7657e6a690fd40be5 (MD5) Previous issue date: 2015-03-25 / Introdução: Drogas antiepilépticas (DAEs) podem repercutir em marcadores de risco cardiovascular e promover aterosclerose. Neste estudo, propomos avaliar a influência de DAEs de primeira geração no perfil lipídico, espessura médio-intimal carotídea (EMIC) e outros marcadores de risco cardiovascular em pacientes com epilepsia. Métodos: Esta dissertação é dividida em Apresentação e quatro capítulos. No primeiro capítulo, intitulado: Drogas antiepilépticas: repercussões no perfil lipídico e espessura médio-intimal carotídea, apresentamos uma revisão crítica de artigos científicos relacionados a este tema nas bases de dados Medline/PubMed, Scientific Eletronic Library online (Scielo) e Literatura Latino- América e do Caribe em Ciências da Saúde (LiLacs). O segundo capítulo, sob título Metodologia, esteve dedicado ao detalhamento dos métodos empregados no estudo transversal, com grupo controle, realizado entre março de 2013 a outubro de 2014 no Hospital Universitário Oswaldo Cruz (HUOC)- UPE e Hospital das Clínicas da UFPE. Para este estudo 138 pacientes e 63 indivíduos controles tiveram amostras de sangue coletadas para obtenção de perfil lipídico, VHS e ácido úrico. Foram excluídos indivíduos em uso de qualquer outra droga não antiepiléptica, com antecedente de eventos cardiovasculares, tabagistas, etilistas, hepatopatas e renais crônicos. A EMIC foi obtida por ultrassonografia realizada por um único radiologista. O programa SPSS 13.0 foi utilizado para análise estatística. Verificou-se a existência de associação para variáveis categóricas pelo teste quiquadrado ou teste exato de Fisher. Para variáveis quantitativas, o teste de Normalidade de Kolmogorov-Smirnov foi utilizado para verificar a distribuição de normalidade, seguindo-se o teste t (paramétrico) ou Mann Whitney (não paramétrico) para comparação entre dois grupos e ANOVA para comparação entre grupos. A correlação entre resultados foi efetuada através do coeficiente de correlação de Pearson (paramétrico) ou Spearman (não paramétrico). Resultados: No capítulo 1, artigo de revisão, discutimos que as DAEs de primeira e segunda geração podem estar associadas a modificações no perfil lipídico e indução de aterosclerose. O mecanismo e tipo desta interferência não estão totalmente estabelecidos. No terceiro, artigo original sob título: DAEs de primeira geração: repercussões no perfil lipídico e aterosclerose em pacientes com epilepsia, dos 138 pacientes incluídos, 39,85% (n = 55) faziam uso de carbamazepina (CBZ), 15,94% (n = 22) de ácido valpróico (VPA), 18,11% (n = 25) de fenobarbital (PB) e 26,08% (n = 36) politerapia. Os pacientes em uso de PB tiveram colesterol total com níveis séricos elevados com relação ao grupo controle (p = 0,007, teste t) e LDL colesterol (LDL-c) que tendeu à significância estatística (p = 0,077, teste t), o número de indivíduos neste grupo com colesterol total, LDL-c e triglicerídeos acima dos valores de referência também foi maior em relação ao grupo controle. Pacientes em uso de VPA tiveram HDL colesterol significativamente menor (p = 0,004, teste t) e valores de ácido úrico (p = 0,004, teste t) e VHS (p = 0,026, teste t) elevados, comparados ao grupo controle. Os grupos em uso CBZ, VPA ou politerapia não apresentaram modificações significativas no perfil lipídico. Nenhuma das drogas promoveu aumentos de EMIC. Idade e tempo de DAE tiveram correlações com perfil lipídico e EMIC. Conclusões: As DAEs de primeira geração estudadas tiveram diferenças de seus efeitos em marcadores de risco cardiovascular, mesmo entre as indutoras enzimáticas. Sugerimos monitorização do perfil lipídico, principalmente em indivíduos com alto risco cardiovascular e idosos.

Made available in DSpace on 2014-06-12T16:24:05Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo1337_1.pdf: 3750251 bytes, checksum: 0d14df5a66e4baeb198a350bfa19b5ec (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2010 / Indivíduos infectados pelo vírus da imunodeficiência humana (HIV) têm morbi-mortalidade aumentada por aterosclerose precoce e eventos cardiovasculares a ela associados. As alterações na parede arterial ocorrem silenciosamente, mas podem ser visualizadas no modo-B da ultrassografia, através da medida do complexo médio-intimal (CMI). Estas precedem os eventos clínicos, que já são conseqüência da doença aterosclerótica avançada. A mortalidade aumentada em indivíduos com HIV por eventos cardiovasculares em jovens, muitas vezes sem fatores de risco clássicos para a aterosclerose, é motivo de preocupação. Não está claro, porém qual a real contribuição da terapia antiretroviral potente (TARV) e do HIV no aumento do risco de doença cardiovascular. A medida do CMI e do índice tornozelo-braço (ITB) por meio da ultrassonografia (USG) são marcadores não-invasivos e precoces da aterosclerose e podem refletir no aumento do risco cardiovascular global. Foram selecionados 70 pacientes com HIV em uso de antirretroviral (ARV) por mais de cinco anos (casos) e 70 indivíduos sem HIV (controles), pareados por sexo e idade. Todos os indivíduos foram avaliados através da medida do CMI em carótidas comuns, internas, femorais e subclávia direita (origem e segmento médio). Foram realizadas as medidas manual e automática do CMI nas carótidas comuns e também foi calculado o ITB. Os fatores de risco clássicos de aterosclerose e as características específicas dos infectados pelo HIV (tempo de doença, tempo de tratamento, tipo de tratamento ARV, uso de inibidor de protease - IP) foram avaliados. O ITB foi aumentado em um único paciente do grupo de casos (0,7%). A média do ITB no membro inferior direito foi de 1,082 e no membro inferior esquerdo de 1,077. Não houve alteração do ITB no grupo controle. O CMI em carótida comum não foi espessado em nenhum indivíduo. A média do CMI na carótida comum direita (CCD) foi de 0,51mm e na carótida comum esquerda foi de 0,53mm. A média automática do CMI da CCD nos casos mostrou-se significantemente menor do que a manual em diversos sítios de medição (subclávia direita origem, segmento médio e femoral), sendo clinicamente significativa apenas a diferença em relação à origem da subclávia direita (0,51mm vs 0,91mm) (p<0,001). Não existiu corelação significante da média automática do CMI da CCD com nenhuma das variáveis analisadas (tempo de HIV, tempo de tratamento com antirretroviral (ARV), uso de IP, uso irregular de ARV, uso de IP por mais de seis meses, classe atual de ARV, tipo de equema atual de tratamento, carga viral (CV) atual, maior CV, CD4 recente, menor CD4 e número de esquemas já utilizados), ou seja, nenhuma dessas variáveis interferem no valor do CMI. Os achados permitem concluir que os indivíduos infectados pelo HIV não apresentam risco mais elevado de aterosclerose do que a população controle, levando em consideração os fatores de risco clássicos da aterosclerose e as características específicas dos infectados pelo HIV nesta população. Comparando a média automática da CCD com as manuais não houve variação clinicamente significativa (menos de 0,1mm). Comparando a média automática da CCD com outros sítios (subclávia origem, segmento médio e femoral comum) a diferença foi estatisticamente e clinicamente significante na origem da subclávia direita. Como o espessamento do CMI em origem de subclávia direita ocorreu em casos e controles estudos complementares são necessários para confirmar se este é realmente um sítio de detecção mais precoce

Orientadores: Maria Heloisa Souza Lima Blotta, Fábio Hüssemann Menezes / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-16T09:30:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Oliveira_RomuloTadeuDiasde_D.pdf: 6549447 bytes, checksum: 24fbe2753f341d2925f429da63a49b0f (MD5) Previous issue date: 2010 / Resumo: A presença de células T ativadas em lesões ateroscleróticas confirma a sua participação na progressão da doença. Recentemente, um novo subtipo de linfócitos TCD4+ produtores de IL-17 (TH17) foi descrito e a sua associação a doenças de caráter inflamatório, bem como a sua capacidade de induzir a produção de mediadores frequentemente encontrados em lesões ateroscleróticas (IL-1?? TNF-? ??TGF-? ??CCL2 e MMP) sugerem que possam ter uma participação na aterosclerose. O objetivo do presente estudo foi investigar componentes da resposta TH17 em lesões ateroscleróticas humanas e relacioná-los a outros integrantes da resposta imunológica. Como controle foram utilizados fragmentos da artéria aorta de 3 doadores de órgãos. Para tal, avaliamos fragmentos de placas ateroscleróticas obtidas de 41 pacientes com estenose crítica de carótida, submetidos à endarterectomia. A expressão gênica e protéica de diversos mediadores foi avaliada pelo método de RT-PCR em tempo real e imunoistoquímica, respectivamente. Em alguns experimentos fragmentos de placa aterosclerótica foram submetidos à estimulação in vitro com IL-23, IL-2, LPS, PHA ou ?CD3+?CD28, para posterior análise da expressão gênica (RT-PCR) e protéica (ELISA e citometria de fluxo) de mediadores relacionados à resposta TH17. A detecção do RNAm de IL-17 se restringiu a um pequeno número de amostras e em baixa concentração, enquanto a marcação imunoistoquímica foi negativa em todas as placas analisadas. Entretanto, observamos maior expressão relativa do RNAm de mediadores relacionados à resposta TH17 (IL-23, RorC, CCR4, IL-1?, TNF-? MMP-9), à resposta TH1 e TH2 (IFN-? e GATA-3), à resposta anti-inflamatória (FoxP3, IL-10, EBI3 e IL-27R) e a mediadores com potencial citotóxico (granzima A, perforina e granulisina) em placas de pacientes do que em amostras controle. Células positivas para IL-23, IL-1?, IL-18, ICAM-1, IL-10 e TGF- ? foram encontradas com maior frequência em placas classificadas como instáveis, ricas em macrófagos, células espumosas, cristais de colesterol e focos de necrose. Finalmente, a análise da suspensão celular obtida de fragmento de lesão revelou a presença de 1% de células IL-17+, enquanto a estimulação in vitro resultou em pequena produção de IL-17 apenas após estímulo com anti?CD3+ anti-CD28. Em conjunto, os resultados mostraram a expressão de componentes da resposta TH17, em associação com mediadores da resposta TH1, TH2 e Treg em lesões ateroscleróticas humanas / Abstract: The detection of activated T cells in human atherosclerotic plaques confirms their participation in the disease progression. In this scenario, IFN-? -producing T cells (TH1) are well recognized as having a pro-atherogenic role. Recently, a new subtype of IL-17-producing T helper (TH17) lineage of cells has been described and their association with inflammatory diseases, as well as their capacity to induce mediators frequently found in atherosclerotic lesions (IL-1? ? TNF-? ,?TGF-?,??CCL2 e MMP) suggest that they may have a role in atherosclerosis. The aim of this study was to investigate whether components of the immune response mediated by TH17 cells are present in human atherosclerotic lesions and their association with other immune mediators. For this purpose, 41 patients with critical stenosis of carotid submitted to endarterectomy were evaluated. Aortic fragments from organ donors were used as control. Carotid specimens were analyzed for mRNA and protein expression by real time RT-PCR and immunohistochemistry, respectively. In some experiments fragments of atherosclerotic plaques were incubated in vitro with IL-23, IL-2, LPS, PHA or ?CD3+?CD28 to further evaluate mRNA and protein expression. A low number of samples showed a small expression of IL-17 mRNA, while no staining for IL-17 was detected in any of the analyzed plaques. Up-regulation of IL-17 related genes (IL-23, RorC, CCR4, CCR4, IL-1?, TNF-?, MMP-9), as well as TH1 e TH2 (IFN-? e GATA-3), anti-inflammatory mediators (FoxP3, IL-10, EBI1 e IL-27R) and cytotoxic molecules (granzyme A, perforin e granulysin) mRNA expression were detected in patients plaques compared to control arteries. In addition, unstable plaques showed a high number of IL-23, IL-1?, IL-18, ICAM-1, IL-10 e TGF- ? ??granzyme B and perforin positive cells. Finally, the analysis of plaque derived cell suspensions revealed only 1% of IL-17+ cells, while in vitro stimulation resulted in IL-17 production only in the presence of anti-CD3+anti-CD28. Altogether our results showed components of TH17 response in association with mediators of TH1, TH2 and Treg response in human atherosclerotic lesions. Further studies are ongoing to elucidate the interaction, balance and collaborative potential among these effectors lineages in atherosclerosis control / Doutorado / Ciencias Biomedicas / Doutor em Ciências Médicas

Orientadores : Lucia Nassi Castilho, Eliana Cotta de Faria / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-07-28T08:29:12Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Albuquerque_EdilmaMariade_M.pdf: 5338268 bytes, checksum: 47a0c82372a67b0400496bc5e45503e8 (MD5) Previous issue date: 2000 / Resumo: As terapias com drogas anti-retrovirais altamente potentes produzem uma rápida diminuição plasmática da carga' viral do vírus da imunodeticiência humana (IDV) até torna-la negativa, com concomitante reconstituição do sistema imunológico. A potência e eficácia das terapias com anti-retrovirais de alta atividade aumentaram a expectativa de vida dos pacientes infectados pelo HIV. Entretanto, resultados de vários estudos e relatos de casos sugerem que estas terapias também podem produzir modificações metabólicas, tais como hiperlipidemia, hiperglicemia, resistência à insulina e alterações na composição corporal, como aumento da circunferência abdominal, giba de búfalo, lipodistrofia total ou periférica, lipomatoses e. aumento da mama (no sexo feminino). Algumas modificações do perfillipídico e de carboidratos, como a resistência à insulina e hiperglicemia, além da obesidade central constituem fatores de risco para o desenvolvimento de doença cardiovascular aterosclerótica que modificam a expectativa de vida destes pacientes. Neste trabalho, objetivamos estudar os perfis séricos lipídico, apoproteico e lipoprotéico de 257 pacientes IDV positivos (IDV+) e compará-los aos de 56 indivíduos saudáveis, que constituíram o grupo controle e classificar fenotipicamente as dislipidemias dos indivíduos HIV+. Os pacientes HIV positivos e os indivíduos controles foram submetidos a exame clínico e às seguintes medidas bioquímicas séricas, após 12 horas de jejum: colesterol total (Col T), HDL-colesterol (HDL-col), triglicérides (TO), LDLcolesterol, fosfolípides (FL), ácidos graxos livres (AOL), apolipoproteínas AI (Apo AI), B (Apo B) e lipoproteína "a" (Lp a). No grupo HIV positivo foi realizada a separação eletroforética das lipoproteínas e a leitura densitométrica das bandas. A avaliação imunológica dos pacientes IDV+ foi feita através da contagem dos linfócitos CD4 e CD8 e da quantificação da carga viral. Observaram-se correlações negativas significativas entre o tempo de uso do inibidor da protease e as concentrações de HDL-col e Apo AI. A colesterolemia correlacionou-se de forma inversa com a carga viral. Modificações lipídicas e apoproteicas foram observadas nos pacientes mv+ com relação aos controles: diminuição dos níveis HDL-col e Apo AI com aumento da razão' COL T/HDL-coI; aumento da concentração sérica de: VLDL-col, TO e AOL. Estes resultados demonstram que grande parte dos pacientes HIV+ apresenta alterações lipídicas características de dislipidemia, com um perfil pró-aterogênico / Abstract: Treatment with highly active anti-retrovkal therapy drugs (HAART) has resulted in decrease of the viralload of human immunodeficiency virus (IDV) until its negativatio~ with concomitant rebuilding of the immune system. Potency and effectiveness of anti-retroviral therapies of high activity increase the life expectation of mv infected patients. However, results of several studies and case reports suggest that these therapies can a1so produce metabolic disorders such as hyperlipidemia, hyperglycemia and insulin resistance, as well as body composition abnormalities like enlargement of the abdominal circumference, buffalo hump, total or out1ying lipodystrophy, lipomatoses and fat deposition in the breasts.ofwomen. Some modifications of the lipidic and carbohydrate profiles, such as insulin resistance and hyperglycemia, in addition to the central-type obesity constitute risk factors for the development of cardiovascular atherosclerotic diseases that modifY the life expectancy of these patients. In this work we aimed to study the serum lipid, apoprotein and lipoprotein profiles of 257 mv -positive patients (HIV +) and compare them to 56 healthy individuaIs, normolipidemic, which constituted the control group, and to classify the dyslipoproteinemias according to phenotypes in the mv + individuaIs. The mv -positive patients and the control individuaIs were previously submitted to a general clínical exam and the following serum biochemical ana1yses were done, after a 12-hour fast: total cholesterol (Tchol), HDL-cholesterol (HDL-chol), triglycerides (TG); LDL-chole~terol (LDL-chol), phospholipids (PL), free fatty acids (FFA), apolipoproteins AI (Apo AI) and B (Apo B) and lipoprotein "a" (Lp a). In the mv positive group the eletrophoretic separation of lipoproteins, followed by densitometric scanning of the LP bands, were carried out. The mv+ patient's innnunological evalyation was made through the counting of the lymphocytes CD4 and CD8 and quantification ofthe vkalload. Significant negative correlations were observed between the time of use of protease inhibitors and the concentrations of HDL-chol and Apo AI. The cholesterolemia was correlated in an inverse way with the viral load. Lipid and apoprotein modifications were observed in HIV+ patients regarding the controls: decrease of HDL-chol and Apo AI leveIs with increase of Tcho1/HDL-chol ratio; increase of VLDL-chol, TG and FFA concentrations. These results demonstra te that a greatpart of the HIV+ patients present lipidic alterarions characteristic of dyslipidemia, with a pro-atherogenic profile / Mestrado / Ciencias Biomedicas / Mestre em Ciências Médicas

Orientador: Lucia Nassi Castilho / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-08T17:01:42Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Vasconcelos_EdilmaMariadeAlbuquerque_D.pdf: 990594 bytes, checksum: ec1dc188f8613c4270257732116a5e8b (MD5) Previous issue date: 2007 / Resumo: Atualmente, a aterosclerose é definida como uma doença crônica inflamatória caracterizada por elevado estresse oxidativo gerado por células da parede vascular. Neste estudo foi avaliada, em monócitos humanos, a contribuição de espécies reativas de oxigênio (EROs) mitocondrial nos processos do estresse oxidativo e inflamatório de pacientes dislipidêmicos. Vinte e nove indivíduos hiperlipidêmicos primários, sendo catorze portadores de hipercolesterolemia e quinze com hiperlipidemia mista (ambos sem uso de fármacos) e dezoito indivíduos normocolesterolêmicos, não tabagistas foram selecionados para este estudo. A geração de EROs e o potencial de membrana mitocondrial foram determinados em células mononucleares intactas, por meio de citometria de fluxo e a concentração plasmática de LDL oxidada (LDL-ox) por meio de ELISA. Apenas os monócitos isolados de indivíduos hipercolesterolêmicos apresentaram maior geração de EROs, porém ambos os grupos apresentaram concentração sérica de colesterol da LDL, LDL-ox e apolipoproteína B maiores do que o grupo-controle. Presença de LDL pequenas e densas também foi encontrada nos hiperlipidêmicos. Nos pacientes com hiperlipidemia mista igualmente foram detectadas, adicionalmente, concentrações significativamente maiores de insulina, triglicérides, colesterol de VLDL e ácidos graxos livres. Correlações positivas e significativas entre a geração de EROs mitocondrial com as concentrações séricas de LDL-oxidada e da proteína quimiotática para monócito-1 (MCP-1), foram encontradas. Esses resultados sugerem que a geração de EROs mitocondrial por monócitos circulantes em pacientes hiperlipidêmicos primários contribui para o estresse oxidativo e, portanto, para o desenvolvimento da aterosclerose, patologia comum nestes indivíduos. A hiperlipidemia está também acompanhada da elevação de marcadores inflamatórios séricos (ácido úrico e contagem global dos leucócitos). A correlação negativa encontrada entre a concentração sérica da interleucina 6 (IL-6) e da proteína induzida pelo IFN-? 10 (IP-10), nos pacientes hiperlipidêmicos, sugere que a IL-6 possa estar agindo como uma citocina antiinflamatória / Abstract: Actually, atherosclerosis is characterized like an inflammatory chronic disease due to a high oxidative stress state generated by vascular wall cells. In present study, we investigated the contribution of reactive oxygen species (ROS) generation by circulating monocyte mitochondria to the oxidative stress frequently observed in high risk hyperlipidemic subjects. Twenty-nine primary hyperlipidemic subjects (14 hypercholesterolemic and 15 combined hyperlipidemic) and 18 normolipidemic individuals, without any drug treatment and non-smokers, were enrolled in this study. The mitochondrial monocyte ROS generation and the mitochondrial electrical transmembrane potential in intact polymorphonuclear cells were estimated by flow cytometry and plasma oxidized LDL (ox-LDL) was measured by ELISA. The hypercholesterolemic, but not the combined hypelipidemic subjects presented higher levels of monocyte ROS generation when compared to control group. Both hyperlipidemic subjects presented elevated plasma levels of total LDL, oxidized LDL and apolipoprotein B. Combined hyperlipidemic individuals presented additionally increased levels of small dense LDL particles, insulin, triglycerides, VLDL-cholesterol and free fatty acids. Furthermore, highly significants positives correlations between monocyte ROS generation with oxidized LDL and monocyte chemotactic protein 1 (MCP-1) levels, were found. These data suggest that mitochondrial ROS production by circulating monocytes from primary hyperlipidemic subjects can contribute to the oxidative stress and hence to atherosclerosis, disease frequently found in this group. The hyperlipidemia is also associated with high levels of inflammatory markers (uric acid and leukocyte global count). A significant negative correlation between interleukin-6 (IL-6) and interferon-inducible protein 10 (IP-10) levels found in hyperlipidemic individuals may suggest an antinflamatory propertie of citokine IL-6 / Doutorado / Ciencias Biomedicas / Doutor em Ciências Médicas

A aterosclerose é uma doença crônico-inflamatória multifatorial com o envolvimento do sistema imunológico, sendo o resultado da interação de diferentes elementos celulares. A lipoproteína de baixa densidade eletronegativa [LDL(-)], capaz de induzir o acúmulo de ésteres de colesterol em macrófagos e a subsequente formação de células espumosas, desempenha um papel-chave na doença. Anticorpos recombinantes têm sido gerados nas últimas décadas, como o scFv (single chain fragment variable), com o intuito de serem utilizados como uma novas alternativas de prevenção para o surgimento da lesão. Diante do papel da LDL(-) na aterosclerose, este projeto avaliou o efeito da imunização passiva de camundongos LDLr-/-- com scFv anti-LDL(-) em solução e scFv anti-LDL(-) conjugado a nanocápsulas, em relação ao desenvolvimento e progressão da aterosclerose. Após obtenção do scFv e sua conjugação à nanocápsulas (NC-scFv), ensaios in vitro determinaram a diminuição da captação de LDL(-) em macrófagos tratados com o scFv 2C7 anti-LDL(-) em solução. No entanto, o tratamento com NC-scFv promoveu o aumento da internalização de LDL(-) em relação ao controle, possivelmente por um mecanismo de endocitose mediada por receptor específico. Estudos in vivo determinaram que camundongos LDLr-/- com idade entre 2 e 3 meses tratados com o scFv em solução apresentaram menor área de lesão aterosclerótica (p<0,05) quando comparados ao controle e que animais com 3 a 4 meses de idade tratados com NC-scFv demonstraram uma tendência à diminuição do mesmo parâmetro. Na análise da expressão de proteínas por imunohistoquímica, ambos os grupos tratados com scFv 2C7 anti-LDL(-) em solução e NC-scFv demostraram redução significativa da expressão dos receptores CD14 e TLR-4 no local da lesão. Esse achado tem grande importância, uma vez que dados da literatura apresentam ambos os receptores como possíveis candidatos ao reconhecimento da LDL(-). Diante dos dados obtidos, o estudo evidenciou a eficácia do scFv 2C7 anti-LDL(-) em solução e da formulação NC-scFv no contexto da aterosclerose, possibilitando a sua utilização como estratégias terapêuticas na intervenção precoce para prevenir o desenvolvimento e a progressão da doença. / Atherosclerosis is a chronic inflammatory multifactorial disease related to the immune system and being the result of interaction of different cellular elements. The electronegative LDL, since the changes undergone by this particle are able to induce the accumulation of cholesterol esters in macrophages and the subsequent formation of foam cells, plays a key role in atherosclerosis. Recombinant antibodies have been generated in recent decades, such as scFv, (single chain fragment variable), and they may be used as a new alternative treatment for atherosclerosis treatment or prevention. Considering the role of LDL(-) in atherosclerosis, this project evaluated the effects of the treatment with anti-LDL(-) scFv 2C7 solution and anti-LDL(-) scFv conjugated to nanocapsules as a passive immunization strategy on atherosclerosis induced in LDL receptor knockout mice. After obtaining the anti-LDL(-) scFv 2C7 solution and its conjugation to nanocapsules (NC-scFv), in vitro tests led to the decrease in LDL(-) uptake in macrophages treated with anti-LDL(-) scFv 2C7. However, the treatment of macrophages with NC-scFv promoted increased internalization of LDL(-) as compared to control, possibly due to a mechanism of specific receptor-mediated endocytosis. In vivo studies have determined that LDLR-/- mice aged 2 and 3 months treated with anti-LDL(-) scFv 2C7 solution showed less atherosclerotic lesion area (p <0.05) compared to control and animals aged 3 to 4 months treated with NC-scFv showed a decreasing tendency of the same parameter. In the analysis of protein expression by immunohistochemistry, both groups treated with anti-LDL(-) scFv 2C7 solution and NC-scFv showed significant reduction of CD14 receptor expression and TLR-4 at the lesion site. This finding is of great importance, since the literature has both receptors as candidates for recognition of the LDL(-). From the data obtained, the study demonstrated the efficacy of treatments anti-LDL(-) scFv 2C7 in solution and NC-scFv in the context of atherosclerosis, enabling their use as therapeutic strategies in the early intervention to prevent the development and progression of the disease.

INTRODUÇÃO: A angiotomografia computadorizada com múltiplos detectores (ATCMD) apresenta alta acurácia para a detecção de estenose luminal significativa das artérias coronárias ( 50%) quando comparada à angiografia coronária invasiva (ACI). Recentemente, esse método vem sendo investigado na avaliação de pacientes com dor torácica aguda de baixo risco. No entanto, poucos estudos investigaram a capacidade da ATCMD na avaliação de pacientes com maior risco para síndrome coronária aguda (SCA). OBJETIVOS: Investigar a acurácia diagnóstica da ATCMD com 64 colunas de detectores para a detecção de estenose luminal coronária 50% definida pela ACI em indivíduos com suspeita de SCA sem supradesnível do segmento ST e comparar estes resultados com a acurácia encontrada em pacientes com suspeita de doença coronária crônica; avaliar a capacidade da ATCMD em predizer revascularização miocárdica nos 30 primeiros dias de seguimento. Adicionalmente objetivamos verificar a prevalência e a acurácia da presença de calcificação coronária para detecção de estenose luminal coronária significativa. MÉTODOS: Pacientes que participaram do estudo multicêntrico internacional CorE64 foram classificados nos grupos SCA e não-SCA de acordo com critérios clínicos, incluindo a presença de angina ao repouso, alterações isquêmicas ao ECG e elevação de marcadores de necrose miocárdica. Todos os pacientes foram submetidos à ATCMD e posteriormente à ACI e para a análise primária foram considerados apenas aqueles com escore de cálcio (EC) 600. RESULTADOS: Dos 291 pacientes incluídos, 80 (27%) foram classificados no grupo SCA. A prevalência de estenose coronária 50% foi de 68% neste grupo e de 52% no grupo não-SCA (p=0,015). A acurácia diagnóstica da ATCMD, em análise por paciente, para detecção de estenose coronária significativa demonstrada pela análise da área sob a Curva de Características Operacionais (AUC) foi de 0,95 (IC 95%: 0,90-0,99) e 0,92 (IC 95%: 0,89-0,96) nos grupos SCA e não-SCA, respectivamente (p=0,44). Nos 30 dias de seguimento, 98 pacientes foram submetidos à revascularização miocárdica (48 do grupo SCA e 50 do grupo não-SCA). A AUC da ATCMD e da ACI para predição de revascularização foi de 0,91 (95% IC: 0,83-0,99) e 0,89 (95% IC: 0,80-0,98), respectivamente, no grupo SCA (p=0,61) e 0,80 (95% IC: 0,74-0,86) e 0,79 (95% IC: 0,73-0,85) no grupo não-SCA, p=0,75. Comparando os dois grupos estudados, a ATCMD foi melhor preditora de revascularização no grupo SCA (p=0,035). No grupo SCA, 6 pacientes (7,5%) tinham EC zero e estenose coronária significativa, comparado a 8 indivíduos (3,8%) do grupo não-SCA (p=0,22). Considerando pacientes com EC baixo (0 a 9), 12 (15%) do grupo SCA e 11 (5,2%) do não- SCA apresentaram estenose coronária 50% (p=0,012). A acurácia do EC para detecção de estenose coronária significativa nos grupos SCA e não- SCA foi de 0,73 (IC 95%: 0,63-0,82) e 0,70 (IC 95%: 0,64-0,76), respectivamente (p=0,75), sendo que o valor preditivo negativo no grupo SCA foi estatisticamente menor que no grupo não-SCA [0,63 (IC95%: 0,39- 0,86) e 0,86 (IC 95%: 0,77-0,95), respectivamente, p=0,038]. CONCLUSÕES: A ATCMD apresentou alta acurácia diagnóstica para detecção de estenose coronária significativa nos grupos SCA e não-SCA, não havendo diferença significativa entre ambos. A ATCMD obteve acurácia semelhante à ACI na predição de revascularização, sendo maior no grupo SCA que no não-SCA. A acurácia do EC para a detecção de estenose coronária 50% foi moderada em ambos os grupos, sendo que um EC zero ou baixo não excluiu a ocorrência de estenose significativa, especialmente no grupo SCA / BACKGROUND: Multi-detector computed tomography angiography (MDCTA) has shown high accuracy to detect obstructive coronary luminal stenosis ( 50%) compared to invasive coronary angiography (ICA). Recently, this technology has been investigated in the evaluation of patients with low-risk acute chest pain. However, few studies investigated its diagnostic performance in higher-risk patients with suspected acute coronary syndrome (ACS). OBJECTIVES: To estimate the diagnostic accuracy of 64- row computed tomography angiography to detect significant coronary stenosis defined by ICA in a per-patient analysis and its ability to predict coronary revascularization in patients with suspected acute coronary syndrome and in those with chronic, stable coronary artery disease; to identify the prevalence and the diagnostic accuracy of coronary calcification to detect significant luminal stenosis in both groups. METHODS: Patients included in the international multicenter trial CorE64 were categorized as suspected ACS or non-ACS based on clinical data. A 64-row coronary MDCTA was performed before ICA and both exams were evaluated by blinded, independent core laboratories. RESULTS: From 291 patients with coronary calcium score (CCS) 600 included in the primary analysis, 80 were categorized as suspected ACS. The prevalence of obstructive coronary disease was 68% in suspected ACS and 52% in non-ACS group (p=0.015). Patient-based analysis showed an area under the receiver-operatingcharacteristic curve (AUC) for detecting coronary stenosis 50% of 0.95 (95% CI: 0.90-0.99) in ACS and 0.92 (95% CI: 0.89-0.96) in non-ACS group (p=0.44). After 30 days of follow-up, 98 patients were submitted to coronary revascularization (48 from the ACS and 50 from the non-ACS group). MDCTA was similar to ICA to predict coronary revascularization in both groups with AUC of 0.91 (95% CI: 0.83-0.99) for MDCTA versus 0.89 (95% CI: 0.80-0.98) for ICA in the ACS group (p=0.61) and 0.80 (95% CI: 0.74- 0.86) for MDCTA versus 0.79 (95% CI: 0.73-0.85) for ICA in non-ACS group (p=0.75). MDCTA was better to predict revascularization in ACS than in non- ACS group (p=0.035). In the suspected ACS group, 6 patients (7.5%) had no coronary calcification and coronary stenosis 50%, compared with 8 patients (3.8%) in the non-ACS group (p=0.22). Considering patients with zero or low (0 to 9) CCS, 12 (15%) in the ACS and 11 (5.2%) in the non-ACS group had significant coronary stenosis (p=0.012). The accuracy of CCS to detect obstructive coronary stenosis in the ACS and non-ACS groups were 0.73 (95% CI: 0.63-0.82) e 0.70 (95% CI: 0.64-0.76), p=0.75, and its negative predictive value in the suspected ACS group was lower than in non-ACS patients [0.63 (95% CI: 0.39-0.86) and 0.86 (95% CI: 0.77-0.95), respectively, p=0.038]. CONCLUSIONS: Coronary MDCTA diagnostic accuracy was high and comparable for both ACS and non-ACS patients. MDCTA predicted revascularization similarly to ICA and its prediction ability was significantly better in the ACS than in non-ACS group. The diagnostic accuracy of a positive CCS to detect luminal stenosis 50% was moderate in both groups and a zero or low CCS could not exclude reliably significant coronary stenosis, particularly in suspected ACS patients

A aterosclerose é caracterizada como uma doença imune-inflamatória crônica das artérias devido ao grande acúmulo de lipídios na íntima. Um dos fatores envolvidos na progressão da aterosclerose é a presença de uma subfração de partículas de lipoproteína de baixa densidade (LDL) com um grau mínimo de modificação, denominada LDL eletronegativa [LDL(-)], que possui propriedades pró-inflamatórias, apresenta maior retenção na íntima das artérias e maior tempo de permanência na circulação sanguínea, gerando respostas imuno-inflamatórias. Epítopos de anticorpos monoclonais importantes no reconhecimento das partículas de LDL(-) foram mapeados por phage display, gerando peptídeos mimotopos (P1A3 e P2C7) com potencial para acompanhamento da progressão da aterosclerose, sendo excelentes candidatos como radiotraçadores marcados com emissores de pósitrons para obtenção de imagens moleculares por tomografia por emissão de pósitrons (PET) associada à tomografia computadorizada (PET/CT). O peptídeo P1A3 foi radiomarcado com 64Cu através da complexação com o quelante DOTA, obtendo-se imagens por PET/CT da captação do peptídeo na região do arco aórtico de camundongos knockout para a apolipoproteína E (Apoe-/-) comparados com animais controle sem lesões ateroscleróticas. Antes da obtenção das imagens PET/CT, os peptídeos radiomarcados foram validados através de estudos de estabilidade e biodistribuição, acumulando-se rapidamente nos rins. Também foi sintetizado um nanocluster de ouro, marcado com 64Cu e funcionalizado com P1A3 em sua superfície, observando-se o maior direcionamento dos nanoclusters de ouro ligados ao P1A3 para a região das lesões ateroscleróticas do arco aórtico de camundongos Apoe-/-, comparado ao nanocluster controle. Os peptídeos P1A3 e P2C7 radiomarcados com 68Ga, foram também avaliados por imagens PET/CT em camundongos knockout para o gene do receptor da LDL (LDLr-/-) tratados ou não com dieta hipercolesterolêmica. As imagens PET/CT mostraram que os peptídeos marcados com 68Ga tiveram um aumento de captação na região do arco aórtico de camundongos LDLr-/- hipercolesterolêmicos em relação ao controle. Além disso, P2C7 foi radiomarcado com 99mTc e sua biodistribuição demonstrou uma relação maior de % atividade injetada (AI)/órgão da aorta/coração nos camundongos hipercolesterolêmicos, em concordância com a imagem obtida por SPECT (tomografia computadorizada por emissão de fóton único) que revelou maior captação no arco aórtico.

Estudos envolvendo cultura de células, animais e humanos tem sido extensivamente aplicados no monitoramento da aterosclerose, visando seu controle ou mesmo reversão. Entre os modelos animais atualmente utilizados, tem-se observado uma resposta adequada à indução de dislipidemia e inflamação, porém elevada resistência à indução de estresse oxidativo. Uma alternativa para superar essa limitação seria a ingestão de dietas contendo ácidos graxos oxidados. Entretanto, os estudos que investigaram o efeito do consumo de peróxidos e produtos secundários da oxidação lipídica na progressão da aterosclerose têm mostrado resultados inconclusivos. Portanto, o objetivo deste estudo foi de alterar um modelo animal de referência para desenvolvimento de aterosclerose, visando elevar a variação de biomarcadores de estresse oxidativo, através do consumo crônico de ácidos graxos poli-insaturados parcialmente oxidados, em concentrações naturalmente presentes na dieta humana. Camundongos \"knockout\" para receptores LDL (C57BL/6), foram divididos em 4 grupos experimentais. Todos os grupos receberam uma dieta hiperlipídica modificada composta por 30% de lipídios durante 90 dias. Três níveis de oxidação foram induzidos no óleo de linhaça, representando neste estudo um nível baixo, moderado e elevado, caracterizados por uma concentração de hidroperóxidos de 2,47 ± 0,02 (LOW), 3,87 ± 0,04 (MED) e 4,69 ± 0,04 meq LOOH/Kg (HIGH), respectivamente. O grupo que recebeu a ração LOW pode ser considerado o grupo controle negativo, pois o óleo utilizado na formulação de sua ração não sofreu o processo de oxidação. O quarto grupo recebeu a dieta LOW, além da indução de diabetes mellitus do tipo 1 através de estreptozotocina no inicio do estudo sendo esse o grupo controle positivo (CONT+). O óleo de linhaça pré-oxidado utilizado no preparo das rações foi mantido a 4ºC. A peletização das rações alterou a concentração dos marcadores primários e secundários, porém de forma proporcional, mantendo assim a diferença entre os três níveis. O grupo CONT+ apresentou menor ganho de peso que os demais. Nenhuma diferença foi observada entre os grupos em relação ao perfil lipoproteico. Os grupos CONT+ e HIGH apresentaram menor concentração de ácidos graxos no fígado, em especial de ácidos graxos poli-insaturados. Igualmente, ambos os grupos CONT+ e HIGH apresentaram maior concentração de MDA hepático que os grupos MED e LOW, sugerindo um aumento do estresse oxidativo decorrente da ingestão de ácidos graxos poli-insaturados parcialmente oxidados. O grupo HIGH também apresentou um aumento da espessura da parede vascular e do tamanho do lúmen da aorta. Este perfil de resultados sugere que a ingestão crônica de ácidos graxos poli-insaturados parcialmente oxidados contribui para o aumento do estresse oxidativo em camundongos LDLr (-/-), promovendo um aumento na concentração de MDA hepático similar àquele obtido com modelos que utilizam formas mais agressivas de indução. Considerando-se a tendência de aumento no consumo de ácidos graxos poli-insaturados Omega 3, os resultados deste estudo realizados com o óleo de linhaça apontam para a necessidade controle da estabilidade oxidativa desses óleos durante seu processamento e armazenamento, visto que níveis moderados de oxidação já poderiam apresentar potencial aterogênico. / Studies involving cell culture, animals and humans have been extensively applied in the monitoring of atherosclerosis, aiming its control or even this reversal. Among the animal models, it has been observed an appropriate response to the induction of dyslipidemia and inflammation, but a high resistance to oxidative stress induction. An alternative to overcome this limitation would be by the intake of diets containing oxidized fatty acids. However, studies that investigated the effect of consumption of peroxides and secondary products of lipid oxidation in the progression of atherosclerosis have shown controversial results. Therefore, the aim of this study was to alter an animal model for the development of atherosclerosis, aiming to raise the variation in biomarkers of oxidative stress through chronic consumption of polyunsaturated fatty acids partially oxidized under concentrations naturally present in the human diet. LDL receptor \"knockout\" mice (C57BL / 6) were divided into 4 experimental groups. All groups received a modified fat diet containing 30% fat for 90 days. Three levels of oxidation were induced in flaxseed oil, representing low, moderate and high levels, characterized by a hydroperoxide concentration of 2.47 ± 0.02 (LOW), 3.87 ± 0.04 (MED) and 4.69 ± 0.04 LOOHs meq / kg (HIGH), respectively. The fourth group received the LOW diet, beyond diabetes mellitus type 1 through induction by streptozotocin at baseline (CONT +). The pre-oxidized flaxseed oil used to prepare the diets was maintained at 4 °C. The pelletization changed the concentration of primary and secondary products, but proportionally, maintaining the difference between the three levels. CONT + group showed less weight gain than the others. No differences were observed between groups in relation to the lipoprotein profile. The CONT + and HIGH groups showed lower concentration of fatty acids in the liver, especially polyunsaturated fatty acids. In addition both CONT+ and HIGH groups showed higher concentrations MDA in the liver than MED and LOW groups, suggesting increased oxidative stress resulting from the intake of polyunsaturated fatty acids partially oxidized. The HIGH group also showed an increase in the thickness of the vascular wall and the size of the aorta lumen. This profile suggests that the chronic ingestion of partially oxidized polyunsaturated fatty acids contributes to increase oxidative stress in mice LDLr (-/-) , similar to that obtained with models using more aggressive forms of induction. Considering the trend of increased consumption of polyunsaturated fatty acids Omega 3, the results of this study conducted with flaxseed oil highlight to the need of controlling the oxidative stability of these oils during processing and storage, since moderate oxidation levels already present atherogenic potential.

Orientadores: Andrei Carvalho Sposito, Eliana Cotta de Faria / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-25T13:48:30Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Panzoldo_NataliaBaratella_D.pdf: 2220803 bytes, checksum: b1c1a7df4771466e6a32411bceb02387 (MD5) Previous issue date: 2014 / Resumo: Doenças cardiovasculares constituem a principal causa de mortalidade no Brasil e no mundo. Baixas concentrações de HDL - colesterol são consideradas um fator de risco cardiovascular independente. Esta relação inversa tem sido atribuída às diferentes propriedades protetoras da HDL, dentre as quais podemos destacar seu papel no transporte reverso de colesterol, por meio do efluxo de colesterol, sua habilidade de inibir a agregação plaquetária, e suas atividades antioxidantes e anti-inflamatórias. No entanto, estudos recentes indicam que baixas concentrações de HDL - colesterol constituem um preditor significante de doença aterosclerótica somente em indivíduos assintomáticos e que a capacidade de efluxo de colesterol é um melhor preditor de carga aterosclerótica do que HDL - colesterol. Em conjunto, estes achados sugerem que a função da HDL poderia ser um fator chave na relação entre concentrações de HDL - colesterol e o desenvolvimento de doença aterosclerótica. Se o for, alterações das funções da HDL podem discernir melhor, entre os indivíduos com hipoalfalipoproteinemia, aqueles com maior propensão a desenvolver doença aterosclerótica. Assim, investigamos, em indivíduos sem doença cardiovascular previamente manifesta, se funções da HDL estão associadas a concentrações de HDL - colesterol e carga aterosclerótica. Participantes foram classificados em HDL - colesterol baixo (LH; HDL-C? 32 mg/dL; n=33), intermediário (IH; HDL-C= 40-67 mg/dL; n=33), ou alto (HH; HDL-C?78mg/dL; n=35). Nós avaliamos composição química da HDL, tamanho da partícula, capacidade de efluxo de colesterol, atividade antioxidante, susceptibilidade à oxidação, atividade anti-inflamatória, e habilidade de inibir agregação plaquetária. O grupo LH foi associado à espessura intimo-medial de carótidas (IMT) aumentada (p?0,001), maior conteúdo de triglicérides (4±2% vs. 4±2% em IH e 3±1% em HH, p?0,001), menor conteúdo de fosfolípides (12±4% vs. 14±5% em IH e 13±3% em HH, p=0,035), menor tamanho de partículas (7,33±0,33nm vs. 7,72±0,45nm em IH e 8,49±0,42nm em HH, p?0,001) e menor capacidade de efluxo de colesterol celular (9±3 % vs. 12±3 % em IH e 11±4 % em HH, p?0,001). Indivíduos HH apresentaram menor atividade antioxidante (37(53)% vs. 48(35)% em IH e 55(41)% em LH, p=0,003), maior suscetibilidade à oxidação (57±22% vs. 45±20% em IH e 46±25% em LH, p=0,017) e maior habilidade de inibir agregação plaquetária (45±25% vs. 31±18% em IH e 37±24 % em LH, p=0,0026). Indivíduos com IMT acima de 1 mm apresentaram partículas com menor tamanho (7,55±0,49 nm vs. 7,89±0,64 nm, p?0,001), atividade antioxidante (37(23)% vs. 49(42)%, p=0,018) e capacidade de efluxo de colesterol (31±14% vs. 40±14%, p=0,02). Nenhuma diferença foi encontrada para as outras características ou propriedades funcionais da HDL. Nós concluímos que, em um contexto de prevenção primária, o menor tamanho da partícula, o conteúdo reduzido de fosfolípides, e capacidade de efluxo de colesterol diminuída são relacionados com ambos LH e magnitude da doença aterosclerótica subclínica. Nestes indivíduos, estas características podem explicar a associação entre HDL - colesterol e o desenvolvimento da doença aterosclerótica. / Abstract: Cardiovascular diseases are the main cause of death in Brazil and worldwide. Low HDL-C levels are considered an independent cardiovascular risk factor. This inverse relationship has been attributed to different protective properties described for HDL, such as its role in the reverse cholesterol transport, through cholesterol efflux, its ability to inhibit platelet aggregation, and its antioxidant and anti-inflammatory effects. However, recent studies indicate that low HDL-cholesterol is a significant predictor of atherosclerotic disease in healthy individuals and that cholesterol efflux capacity is a better predictor of carotid atherosclerotic burden as compared to HDL-cholesterol. Altogether these findings have suggested that HDL function would be the key factor for the link between HDL-cholesterol concentration and the subclinical disease in a primary prevention setting. If so, changes in HDL function could help to discriminate, among individuals with hypoalphalipoproteinemia, those who are prone to develop atherosclerotic disease. Hence, in a primary prevention setting, we investigated whether HDL dysfunction is associated with HDL-cholesterol concentration and atherosclerotic burden. Participants were classified as low (LH; HDL-C? 32 mg/dL; n=33), intermediate (IH; HDL-C= 40-67 mg/dL; n=33), or high HDL-cholesterol (HH; HDL-C?78mg/dL; n=35). We measured HDL chemical composition, particle size, cholesterol efflux capacity, antioxidant activity, susceptibility to oxidation, anti-inflammatory activity, and ability to inhibit platelet aggregation. LH was associated to enhanced carotid intima-media thickness (IMT;p?0.001), high HDL triglyceride (4±2% vs. 4±2% in IH and 3±1% in HH, p?0.001), low HDL-phospholipids (12±4% vs. 14±5% in IH and 13±3% in HH, p=0.035), decreased particle size (7.33±0.33nm vs. 7.72±0.45nm in IH and 8.49±0.42nm in HH, p?0.001) and reduced cholesterol efflux capacity (9±3 % vs. 12±3 % in IH and 11±4 % in HH, p?0.001). The HH group presented reduced antioxidant activity (37(53)% vs. 48(35)% in IH and 55(41)% in LH, p=0.003), and increased susceptibility to oxidation (57±22% vs. 45±20% in IH and 46±25% in LH, p=0.017) and ability to inhibit platelet aggregation (45±25% vs. 31±18% in IH and 37±24 % in LH, p=0.0026). Carotid IMT>1mm was associated with reduced HDL size (7.55±0.49 nm vs. 7.89±0.64 nm, p?0.001), antioxidant activity (37(23)% vs. 49(42)%, p=0.018), and cholesterol efflux capacity (31±14% vs. 40±14%, p=0.02). No differences were found for the other HDL characteristics or functional properties. We conclude that in a primary prevention setting, small particle size, reduced HDL-phospholipids content, and diminished cholesterol efflux capacity are related to both LH and carotid IMT. In these individuals, these characteristics may underlie the association between HDL-cholesterol and atherosclerotic burden / Doutorado / Ciencias Biomedicas / Doutora em Ciências Médicas