A Terra Preta Antropogênica (TPA) é considerada um dos solos mais férteis do mundo e recebe essa denominação por ser originada da ação antrópica, provavelmente de populações pré-colombianas que viveram nestes sítios arqueológicos. O crescente aumento por agricultura sustentável torna a utilização de bactérias produtoras de antibióticos uma alternativa de controle para doenças de plantas. Pirrolnitrina (PRN) é um antibiótico que tem ampla atividade antimicrobiana produzida por várias estirpes de Burkholderia e Pseudomonas que foram isoladas de diferentes solos. Entretanto, não se tem conhecimento de isolados bacterianos de TPA que produzem PRN, assim com, sobre a ecologia e freqüência do gene para este antibiótico. A PRN é codificada por um operon composto por 4 genes sendo o gene prnD responsável por catalisar a oxidação que forma a pirrolnitrina. Neste trabalho, foi estudado o gene prnD através de métodos dependente e independente de cultivo. Foram utilizados isolados bacterianos para detectar o gene prnD através de PCR convencional e a identificação feita pelo seqüenciamento. As bactérias com amplificação positiva tiveram suas sequências do gene analisadas no programa MOTHUR o qual reuniu as em 10 grupos. Um representante de cada grupo foi empregado no teste de antagonismo contra o fitopatógeno Fusarium oxysporum. Amostras de solo de TPA e seus solos adjacentes foram coletados de dois sítios: Caldeirão Capoeira (floresta secundária por mais de 20 anos) e Cultivado (cultivado com mandioca por pelo menos 30 anos). Os DNAs totais das amostras de solo extraído foram usados como molde nas reações de PCR quantitativo em tempo real para verificar a abundância do gene prnD nas amostras de solo. Em amostras de solo também foi quantificado o gene 16S rRNA. No estudo dependente de cultivo, do total de 219 isolados (175 Burkholderia e 44 Pseudomonas), 60 isolados do gênero Burkholderia e 3 de Pseudomonas exibiram amplificação positiva. A análise filogenética do gene prnD mostrou que a maioria das seqüências obtidas deste estudo não agruparam com as seqüências do banco de dados do GenBank indicando que há diversidade do gene prnD nos isolados de solos amazônicos e que podem ser distintos dos descritos anteriormente. O teste de antagonismo demonstrou que isolados com potencial genético para produção de pirrolnitrina também são bioativos contra Fusarium oxysporum, apresentando forte atividade antimicrobiana. No estudo independente de cultivo, no sítio Caldeirão Cultivado, solo de TPA apresentou maior número de cópias do gene prnD e do gene 16S rRNA em relação ao solo ADJ. No sítio Caldeirão Capoeira, o solo adjacente apresentou maior quantidade do gene prnD (1,74x105 cópias/g solo) que o solo de TPA (2,48x104 cópias/ g de solo), no entanto, na TPA as bactérias totais foram mais abundante. Estes resultados evidenciam que a metodologia de PCR quantitativo em tempo real desenvolvida foi altamente sensível e específica permitindo a detecção de diferenças sensíveis e significativas entre os solos na quantificação do gene prnD. A abundância do gene prnD correlacionou significativamente com parâmetros químicos do solo tais como pH, fósforo, cálcio, magnésio e micronutrientes / Anthropogenic Dark Earth (ADE) is considered one of the world\'s most fertile soils and receives this name because it originated from human action, probably by pre-Columbian populations who lived in these archaeological sites. Because of the common trend in agriculture towards sustainability antibiotic-producing bacteria is an alternative for biocontrol to plant diseases. Pyrrolnitrin (PRN) is a broad-spectrum antibiotic produced by various strains of Burkholderia and Pseudomonas that have been isolated from different soils. However, little is known about PRN-producing bacteria screened from ADE, even as the ecology and frequency of pyrrolnitrin gene. PNR is encoded by an operon comprised by four genes and prnD gene is responsible for catalyze the oxidation to form pyrrolnitrin. In this work, we studied the gene prnD through culture dependent and independent methods. Conventional PCR were established to detect prnD gene in bacterial isolates screened in ADE and their adjacent soils (ADJ) and identification were done by sequencing. Based on the results generated by MOTHUR prnD sequences from isolates were grouped into 10 groups. A representative of each group was used in the test of antagonism against the plant pathogen Fusarium oxysporum. Soil samples of ADE and its adjacent soils were collected from two sites: Caldeirão Capoeira (secondary forest for over 20 years) and Caldeirão Cultivado (cultivated with cassava for at least 30 years). The total DNA extracted from soil samples was used as template in quantitative PCR reactions to determine the abundance of prnD gene. In soil samples was also quantified the 16S rRNA. In the study culture-dependent, in a total of 219 isolates (175 Burkholderia and 44 Pseudomonas), 60 isolates of Burkholderia and 3 Pseudomonas exhibited positive amplification for prnD gene. Phylogenetic analysis of prnD gene showed that most of the sequences obtained in this study grouped distinctly from sequences of the GenBank database. It indicates that there is diversity in prnD gene of isolates from amazonian soils and they may differ from those previous described. The antagonism test showed that isolates with genetic potential for production of pyrrolnitrin are also bioactive against Fusarium oxysporum, exhibiting strong antimicrobial activity. In culture-independent study, the site Caldeirão Cultivado, ADE soil showed higher copies number of prnD gene and 16S rRNA gene than in ADJ soil. At the site Caldeirão Capoeira, surrounding soil had a higher amount of prnD gene (1.74 x105 copies / g soil) than ADE soil (2.48 x104 copies / g soil), however, in ADE total bacteria was more abundant. These results show that the real-time PCR assay developed in this study was highly sensitive and specific enabling the detection of sensitive and significant differences between soils in the quantification of prnD gene. Soil variables such as pH, phosphorus, calcium, magnesium and micronutrients significantly correlated with abundance of prnD gene

Made available in DSpace on 2015-05-14T12:56:01Z (GMT). No. of bitstreams: 1 arquivototal.pdf: 944601 bytes, checksum: c211a613a7ca088bee34c901c685111c (MD5) Previous issue date: 2011-12-16 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / The objective of this research was to investigate the existence of antimicrobial plant compounds and anti-quorum sensing in oral biofilms. The plants used in this study were: Schinus terebinthifolius Raddi (aroeira da praia); Lippia sidoides Scham (alecrim pimenta); Abarema cochiliacarpos (Gomes) B. & J.W. Grimes (barbatimão); Anacardium occidentale Linn (cajueiro); Psidium guajava Linn (goiabeira); Tabebuia avellanedae Lorentz ex Griseb (ipê-roxo); Hymenaea courbaril L. (jatobá) e a Bowdichia virgiloides Kunth (sucupira), Anadenanthera macrocarpa Benth (angico), Abarema cochiliacarpos (Gomes) B. & J.W. Grimes (barbatimão), Ziziphus joazeiro Mart (joazeiro), Sida cordifolia L. (malva branca), Chenopodium ambrosioides L. (mastruz), Punica granatum L. (romã) and Zingiber officinale (gengibre). The extracts were submitted in good yield to the partition with solvents in order of increasing polarity, hexane, dichloromethane and ethyl acetate. The antimicrobial activity was determined by the techniques of minimum inhibitory concentration (MIC) and minimum bactericidal concentration (MBC) and use the model QSIs (Quorum Sensing Inhibitor System) proposed by Rasmussen and colleagues (2005). The results proved promising for the development of phytomedicines. The anti-quorun sensing was significant for Abarema cochiliacarpos (Gomes) B. & JW Grimes (barbatimão), Anacardium occidentale Linn (cajueiro), Psidium guajava Linn (goiabeira) and the fruit of Hymenaea courbaril L. (Jatobá). The results support the hypothesis that extracts and partitions of some medicinal plants have anti-quorum sensing activity as a mechanism of antimicrobial activity. / O objetivo desta pesquisa foi investigar a existência de compostos vegetais que apresentem atividade antimicrobiana e anti-quorum sensing em micro-organismos formadores de biofilmes bucais. As plantas utilizadas nesta pesquisa foram: Schinus terebinthifolius Raddi (aroeira da praia); Lippia sidoides Scham (alecrim pimenta); Abarema cochiliacarpos (Gomes) B. & J.W. Grimes (barbatimão); Anacardium occidentale Linn (cajueiro); Psidium guajava Linn (goiabeira); Tabebuia avellanedae Lorentz ex Griseb (ipê-roxo); Hymenaea courbaril L. (jatobá) e a Bowdichia virgiloides Kunth (sucupira), Anadenanthera macrocarpa Benth (angico), Abarema cochiliacarpos (Gomes) B. & J.W. Grimes (barbatimão), Ziziphus joazeiro Mart (joazeiro), Sida cordifolia L. (malva branca), Chenopodium ambrosioides L. (mastruz), Punica granatum L. (romã) e Zingiber officinale (gengibre). Os extratos de Schinus terebinthifolius Raddi (aroeira da praia); Lippia sidoides Scham (alecrim pimenta); Abarema cochiliacarpos (Gomes) B. & J.W. Grimes (barbatimão); Anacardium occidentale Linn (cajueiro); Psidium guajava Linn (goiabeira); Tabebuia avellanedae Lorentz ex Griseb (ipê-roxo); Hymenaea courbaril L. (jatobá) e a Bowdichia virgiloides Kunth (sucupira), Abarema cochiliacarpos (Gomes) B. & J.W. Grimes (barbatimão), Ziziphus joazeiro Mart (joazeiro) foram submetidos à partição com solventes em ordem crescente de polaridade, hexano, diclorometano e acetato de etila. A atividade antimicrobiana foi determinada pela técnica da microdiluição em caldo e utilizou o modelo de QSIs (sistema Inibidor de Quorum Sensing) proposto por Rasmussen e colaboradores (2005). Os resultados obtidos revelaram-se promissores para o desenvolvimento de fitomedicamentos. A atividade anti-quorun sensing foi significante para Abarema cochiliacarpos (Gomes) B. & J.W. Grimes (barbatimão); Anacardium occidentale Linn (cajueiro); Psidium guajava Linn (goiabeira); e o fruto do Hymenaea courbaril L. (jatobá). Os resultados suportam a hipótese que extratos e partições de algumas plantas medicinais possuem atividade anti-quorum sensing como mecanismo de atividade antimicrobiana.

Made available in DSpace on 2015-05-14T12:59:48Z (GMT). No. of bitstreams: 1 arquivototal.pdf: 5951876 bytes, checksum: 7dd555c26dc7254b2e08815bdfe2bd1e (MD5) Previous issue date: 2012-11-19 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / The family Euphorbiaceae is the sixth largest family of plants in the world represented by 300 genera and 8000 species. Among the many genres that make up this family, the genus Croton stands as the second largest, with about 1300 species, having a neotropical distribution. This genus has been the most studied, due in large part to the chemical compounds produced by this promising group. To contribute to the chemotaxonomic study of the genus Croton and family Euphorbiaceae, the extract of C. polyandrus was subjected to a phytochemical study to isolate chemical constituents through usual chromatographic methods, and then to identify them by means of spectroscopic methods, such as IR, 1H-NMR and 13C and uni-dimensional, spectometryc such as spectrometry mass, and compared with literature data. The chemical study of the aerial parts and roots of C. polyandrus resulted in the identification of nine substances: oxide β-caryophyllene (Cp-1), β-sitosterol (Cp-2), sitosterol-3-O-β-D-glucopyranoside (Cp-3); pheophytin A (Cp-4); Carvacrol (Cp-5), 5-β-hydroxy-2-oxo-p-ment-6 (1)-ene (Cp-6), 3-methoxy-4-hydroxy-benzaldehyde (Cp-7), 1,2,3,4-tetrahidroxi-p-mentano (Cp-8); Sucrose (Cp-9), being the nine first reported in this species. The chemical composition of essential oil had thirty-three components, among which p-cymene (12.4%) showed a major compound with. The essential oil of C. polyandrus were tested against strains of gram positive and gram negative strains of Candida, and cancer cell lines. The essential oil of C. polyandrus tested showed no antibacterial activity, however, showed considerable antifungal and cytotoxic to all cell lines only at the highest concentration tested, using the values of TGI, the essential oil was inactive against the tumor cell lines. / A família Euphorbiaceae é a sexta maior família em número de espécies vegetais identificadas no mundo representada por 300 gêneros e 8000 espécies. Dentre os inúmeros gêneros que compõe esta família, o gênero Croton se destaca como o segundo maior, com cerca de 1300 espécies, possuindo uma distribuição neotropical. Esse gênero tem sido um dos mais estudados, em grande parte devido aos compostos químicos produzidos por este grupo. Visando contribuir para o estudo quimiotaxonômico da família Euphorbiaceae e do gênero Croton, o extrato de C. polyandrus foi submetido a um estudo fitoquímico para isolar seus constituintes químicos, através de métodos cromatográficos usuais, e depois para identificá-los por meio de métodos espectroscópicos, tais como Infravermelho, Ressonância Magnética Nuclear de 1H e 13C uni e bidimensionais e espectométricos, como espectometria de massas, além de comparação com dados da literatura. O estudo químico das folhas e raiz de C. polyandrus resultou na identificação de nove substâncias: óxido de β-cariofileno (Cp-1); β-sitosterol (Cp-2); sitosterol-3-O-β-D-glicopiranosídeo (Cp-3); feofitina A (Cp-4); carvacrol (Cp-5); 5-β-hidroxi-2-oxo-p-ment-6(1)-eno (Cp-6); 4-hidroxi-3-metoxi-benzaldeído (Cp-7); 1,2,3,4-tetrahidroxi-p-mentano (Cp-8); sacarose (Cp-9), sendo as nove relatadas pela primeira vez na espécie. A composição química do óleo essencial apresentou trinta e três componentes, dentre os quais, p-cimeno (12.4%), mostrou-se como composto majoritário. O óleo essencial de C. polyandrus foi testado frente cepas de bactérias gram positivas e gram negativas, cepas de fungos do gênero Candida, e linhagens de células tumorais. O óleo essencial de C. polyandrus testado não mostrou qualquer atividade antibacteriana, no entanto, apresentou uma considerável atividade antifúngica e efeito citotóxico para todas as linhagens celulares apenas na maior concentração testada, ao utilizar os valores de TGI, o óleo essencial se mostrou inativo frente as linhagens celulares tumorais.

Beekeeping is an activity known worldwide. In Brazil, it has found favorable conditions for its establishment. In the State of Alagoas, where it is still a practicing of beekeeping craft, require official data on the quality of their products to become more professional. Among the bee products, bee pollen resulting from the agglutination of flower pollen and nectar with salivary substances, emerge as food for worker-bees, with therapeutic properties given its composition. It is rich in protein, carbohydrates, lipids, minerals and vitamins, phenols and growth factors. In apiaries, bee pollen is the main source of food and protection for the larvae of bees. As human food, it requires for marketing monitoring of its physico-chemical and microbiological quality, with limits established by the health legislation. In this work, it was assessed the floral origin and the physico-chemical, and possible antioxidant and antimicrobial activity, of bee pollen from three experimental apiaries representative of the mesoregions of Zona da Mata , Backlands and Seaside of Alagoas State, in the dry season of 2008/09. Physico-chemical data were submitted to tests of normality of Kolmogorov-Smirnov and Shapiro-Wilk, and then the non-parametric test of Kruskal-Wallis. The pollen spectrum was more abundant in the Zona da Mata region, where 28 plant species were represented in the bee pollen - 36% of the herbaceous layer and 64% of shrub and tree strata. In the bee pollen of the Seaside and Backlands predominated, respectively, tree and shrub strata, with sampling generally monofloral in the Backlands. The total contents of protein, glucose and lipids were measured respectively by the methods of Lowry, Antrona and Bligh & Dyer. The levels of total carbohydrates did not differ significantly between the bee pollen of the different mesoregions studied. The average content of total lipids and phenols in the bee pollen of the Backlands were the largest among the three mesoregions (respectively, 4.92-7.74% and 16.22- 46.25 eq. mg Ac. Galic.g-1). The total content of flavonoids varied considerably, but was higher in samples of Backlands (45.62 ± 32.19 eq. quercetine.g mg-1), although near the sampling of the Zona da Mata (41.22 ± 21.95 eq. quercetine.g mg-1). The antioxidant potential of samples of bee pollen of Backlands was much higher than that of other samples of other mesoregions, ranging from 53.22 to 250.19 eq. mg ac. galic.g-1. The samples of bee pollen from the Seaside were the ones that showed higher protein content (1.21-3.32 eq. mg BSA.mL-1) and lower antioxidant content (10.0-103.22 eq. mg ac. galic.g-1), although in the qualitative point of view all the samples had similar flanonoid substances. The tested did not show activity against the microorganisms Staphylococcus aureus, Salmonella Typhimurium, Escherichia coli, Helicobacter pylori concentrations of the extracts of bee pollen of the dry season (2008/09) from all mesoregions studied. / Fundação de Amparo a Pesquisa do Estado de Alagoas / A apicultura é uma atividade mundialmente conhecida e, no Brasil, tem encontrado condições climáticas favoráveis para seu estabelecimento. Configura-se neste espaço o Estado de Alagoas, onde ainda é uma prática artesanal que requer dados oficiais sobre a qualidade de seus produtos para se tornar mais profissional. Dentre os seus produtos, o pólen apícola é o resultante da aglutinação do pólen floral com néctar e substâncias salivares das abelhas operárias, e desponta como alimento com propriedades terapêuticas, face à sua composição rica em proteínas, carboidratos, lipídios, sais minerais e vitaminas, além de compostos fenólicos e fatores de crescimento. No apiário, é a principal fonte de alimento e proteção das larvas de abelhas. Como alimento humano, o pólen apícola requer monitoramento de sua qualidade físico-química e microbiológica, segundo limites estabelecidos pela legislação sanitária, para sua comercialização. Neste trabalho, portanto, efetuou-se a avaliação da origem floral e da qualidade físico-química, bem como possível atividade antioxidante e antimicrobiana do pólen apícola de três apiários experimentais de municípios representativos das mesorregiões do Sertão, Zona da Mata e Litoral do Estado de Alagoas, na estação seca de 2008/09. Os dados físico-químicos foram submetidos aos testes de normalidade de Kolmogorov-Smirnov e Shapiro-Wilk e, em seguida, ao teste nãoparamétrico de Kruskal-Wallis. O espectro polínico se mostrou mais abundante na Zona da Mata, sendo identificadas 28 espécies vegetais no pólen apícola dessa região, 36 % do estrato herbáceo e 64 % dos estratos arbustivo e arbóreo. No espectro polínico do Litoral e do Sertão identificaram-se como predominantes respectivamente os estratos arbustivo e arbóreo, sendo a amostragem do Sertão em geral monofloral. Os conteúdos de proteínas, glicídeos e lipídeos totais, foram mensurados respectivamente pelos métodos de Lowry, Antrona e Bligh & Dyer. Os teores de glicídios totais do pólen apícola de distintas mesorregiões não diferiram significativamente entre si. As médias do conteúdo de lipídios e de fenóis totais no pólen apícola do Sertão foram as maiores dentre as três mesorregiões (respectivamente 4,92-7,74 % e 16,22-46,25 eq. mg ác. gálico.g-1). O conteúdo total de flavonóides oscilou bastante, mas também foi superior nas amostras do Sertão (45,62 ± 32,19 eq. mg quercetina.g-1), embora próximo ao das amostragens da Zona da Mata (41,22 ± 21,95 eq. mg quercetina.g-1). O potencial antioxidante das amostras de pólen apícola do Sertão foi bem superior ao das demais amostras, variando de 53,22-250,19 eq. mg ác. gálico.g-1 . As amostras de pólen apícola provenientes do Litoral foram as que apresentaram maior teor em proteínas (1,21-3,32 eq. mg ASB.mL-1) e menor conteúdo antioxidante (10,0-103,22 eq. mg ác. gálico.g-1), embora do ponto de vista qualitativo todas as amostras apresentaram, praticamente, as mesmas substâncias, ainda que em quantidades diferentes. Não se constatou atividade contra os microrganismos Staphylococcus aureus, Salmonella Typhimurium, Escherichia coli, Helicobacter pylori na concentração testada dos extratos de pólen apícola da estação seca (2008/09) de todas as mesorregiões estudadas.

Medicinal plants have been growing in their social, cultural and economic importance in Brazil, which has the greatest biodiversity of the planet. Caatinga is the main ecosystem in the northeastern region and the only biome exclusively Brazilian. There is a great diversity of species popularly used for medicinal purposes in communities in the semiarid region of Alagoas. However, research proving their therapeutic efficacy is still insufficient. Ethanol extracts of two endemic species of the Caatinga, Bauhinia cheilantha (Bong.) Steud. and Lippia gracilis Schauer, known popularly as "mororó" and " alecrim-da-chapada", underwent in vitro assays to evaluate its antimicrobial and antioxidant potential, as well as identification of the class of its constituents through phytochemical screening. The bacterial strains Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermidis, Enterococcus faecalis, Escherichia coli, Klebisiella pneumoniae, Pseudomonas aeruginosa and the fungal strain Candida albicans were used in the Agar diffusion method and broth microdilution, which determined the minimum inhibitory concentration (MIC) of extracts. For the evaluation of the scavenging capacity of antioxidants free radicals present in the extracts, the method of measuring the reduction of the synthetic radical 2,2- diphenyl - 1 - picryl - hidrazila (DPPH) was used. The results demonstrated the antioxidant potential of the leaves, stem bark and stem of B. cheilantha and antimicrobial potential of stem and aerial parts of the specie L. gracilis with MIC values comparatively lower than essential oils from other species of Lippia already studied. These findings can be attributed to the presence of flavonoids, tannins and steroids and flavonoids and terpenes, respectively, detected in phytochemical screening. Results support the popular use of B. cheilantha for the treatment of diabetes and L. gracilis for infectious processes, and provide direction for phytochemical studies to identify the constituents responsible for the verified biological activities. / As plantas medicinais vêm se destacando pela sua importância social, cultural e econômica no Brasil, o qual detém a maior biodiversidade do planeta. A Caatinga é o principal ecossistema da região Nordeste e o único bioma exclusivamente brasileiro. Há uma grande diversidade de espécies utilizadas popularmente de forma medicinal em comunidades do semiárido de Alagoas. No entanto, pesquisas que comprovem sua eficácia terapêutica são ainda incipientes. Extratos etanólicos de duas espécies endêmicas da Caatinga, Bauhinia cheilantha (Bong.) Steud. e Lippia gracilis Schauer, conhecidas popularmente como “mororó” e “alecrim-da-chapada”, foram submetidos à ensaios in vitro para avaliação de seu potencial antimicrobiano e antioxidante, além da identificação da classe dos constituintes através de prospecção fitoquímica. As cepas bacterianas Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermidis, Enterococcus faecalis, Escherichia coli, Klebisiella pneumoniae, Pseudomonas aeruginosa e a cepa fúngica Candida albicans foram utilizadas no método de difusão em Agar e na microdiluição em caldo, o qual determinou a concentração inibitória mínima (CIM) dos extratos. Para a avaliação da capacidade sequestradora de radicais livres por antioxidantes presentes nos extratos, foi utilizado o método de mensuração da redução do radical sintético 2,2-difenil-1-picril-hidrazila (DPPH). Os resultados demonstraram o potencial antioxidante das folhas, casca do caule e caule de B. cheilantha e o potencial antimicrobiano das partes aéreas e caule da espécie L. gracili, com valores de CIM menores que constituintes de óleos essenciais de outras espécies de Lippia já estudadas, em uma avaliação comparativa. Esses achados podem ser atribuídos à presença de flavonoides, taninos e esteroides e flavonoides e terpenos, respectivamente, evidenciados na prospecção fitoquímica realizada. Os resultados obtidos oferecem suporte ao uso popular de B. cheilantha para o tratamento do diabetes e L. gracilis para processos infecciosos, e fornecem direção para estudos fitoquímicos que identifiquem os constituintes responsáveis pelas atividades biológicas verificadas.

Plants have been utilized for treatment of diseases throughout human existence and, culturally have been the bases for treatment of several diseases, both in traditional way, due to knowledge of the certain plant properties, passed from generation to generation, as well as by the Its use as a source of bioactive compounds, derived from scientific research. The present study aimed to investigate cytotoxicity, antimicrobial and wound healing potential of leaves, twigs and steam extracts of Jatropha gossypiifolia L. Leaves, twigs and stems were separated and dried at room temperature and the extracts were obtained by maceration in ethanol, concentrated on a rotary evaporator and dried in a vacuum desiccators. These extracts were submitted to fractionation to obtain hexane, chloroform, ethyl acetate and methanolic fractions. Phytochemical screening were performed; the citotoxicity were analyzed by MTT (3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide) tetrazolium reduction assay; Antimicrobial activity by Broth Microdilution Method; Evaluation of in vitro healing potential by the Scratch Assay method, with 3T3 fibroblasts. Phytochemical screening identified the presence of tannins, steroids, flavonoids, flavones, xanthones, coumarins and anthraquinones. The results indicated that the stem extract presented cell viability above 80% in all tested concentrations; the leaves presented moderated cytotoxicity while twig extract at the concentrations of 62.5, 125 and 250 μg/mL exhibited a severe cytotoxicity, hindering the continuation of the study with this part of the plant. Antimicrobial activity evaluation of leaves extract presented MIC of 500 μg/mL to S. aureus, S. epidermidis and P. aeruginosa. Already, twig ethanolic extract exposed a MIC of 1000, 500 and 250 μg/mL, concomitantly. And for stem ethanolic extract a MIC of 1000, 500 e 1000 μg/mL was observed, respectively. It was also observed that the extracts tested were not capable at any of tested concentrations, of promoting the inhibition of E. coli microorganism. The MIC performed with the fractions from leaves and stems ethanolic extracts did not present inhibitory activity for these bacteria. In vitro assay for healing evaluation was performed utilizing the Scratch assay, and evidenced that methanolic fraction of the leaves favoured cell migration in an average of 45% more than the control. Studies with this plant species should be continued for isolation of the active principle aiming the production of a wound healing. / As plantas vêm sendo utilizadas para o tratamento de doenças ao longo da existência humana e, culturalmente, constituíram as bases para tratamento de diversas doenças, tanto na forma tradicional, decorrente do conhecimento das propriedades de determinada planta, passado de geração a geração, quanto pela sua utilização, como fonte de moléculas bioativas, oriundas de pesquisas científicas. O objetivo do estudo foi investigar o potencial citotóxico, antimicrobiano e cicatrizante de extratos das folhas, galhos e caule da Jatropha gossypiifolia L. As folhas, galhos e caules foram separados e secos em temperatura ambiente e os extratos obtidos por maceração em etanol, concentrados em evaporador rotatório e secos em dessecador à vácuo. Esses extratos foram submetidos ao fracionamento para obtenção das frações hexânica, clorofórmica, acetato de etila e metanólica. Em seguida foram realizados testes de prospecção fitoquímica; citotoxidade pelo MTT; atividade antimicrobiana pelo método de microdiluição em caldo; avaliação do potencial cicatrizante in vitro pelo método do Scratch assay, com fibroblastos 3T3. A prospecção fitoquímica identificou a presença de taninos, esteroides, flavonoides, flavonas, xantonas, cumarinas e antraquinonas. Os resultados indicaram que o extrato do caule apresentou viabilidade celular acima de 80% em todas as concentrações testadas, as folhas apresentaram-se moderadamente citotóxicas enquanto o extrato dos galhos nas concentrações de 62,5; 125 e 250 μg/mL exibiu uma citotoxicidade severa, inviabilizando o prosseguimento do estudo com essa parte da planta. A avaliação da atividade antimicrobiana dos extratos das folhas exibiu CIM de 500 μg/mL para as bactérias S. aureus, S. epidermidis, e P. aeruginosa. Já, o extrato etanólico dos galhos expôs uma CIM de 1000, 500 e 250 μg/mL, concomitantemente. E para extrato etanólico do caule a CIM observada foi de 1000, 500 e 1000 μg/mL, respectivamente. Observou-se também que, os extratos testados não foram capazes, em nenhuma das concentrações usadas, de promover a inibição do microrganismo E. coli. A CIM realizada com as frações oriundas dos extratos em etanol das folhas e caules não apresentaram atividade inibitória para estas bactérias. A avaliação cicatrizante pelo bioensaio in vitro com uso da técnica Scratch assay, evidenciou que a fração metanólica das folhas propiciou a migração celular em média de 45% a mais do que o controle. Estudos com esta espécie vegetal devem ser continuados para isolamento do princípio ativo visando a produção de um cicatrizante de feridas.

Esta investigação objetivou a eficácia antimicrobiana de agentes desinfetantes utilizados na desinfecção dos instrumentos endodônticos, durante o período transoperatório do tratamento endodôntico. A atividade antimicrobiana dos desinfetantes álcool isopropílico, acetona e ácido peracético (PAA) foi avaliada sobre microrganismos planctônicos através de teste de contato (time kill assay), utilizando inóculo de 9,9 X 109 a 1,2 X 1012 unidades formadoras de colônia (UFC) e por determinação da concentração bactericida mínima (CBM), usando inóculo de aproximadamente 106 UFC. Os agentes químicos também foram avaliados sobre Enterococcus faecalis (E. faecalis) ATCC 29212 cultivada em matriz de dentina (ex vivo) visando a formação de biofilme. O biofilme (organismos sésseis) microbiano foi removido com limas tipo Kerr (LK), até as lâminas estarem visualmente preenchidas. As LK contaminadas foram usadas como carreadores (logo após a contaminação ou secas dentro de uma câmara de fluxo laminar por 10 minutos). As LK carreadoras foram imersas em álcool isopropílico ou acetona ambos a 80%, ou em Ácido peracético 2%, por 30 ou 60 segundos. As limas foram posteriormente colocadas em tubos de ensaio contendo caldo Enterococcosel para observar o crescimento dos enterococos viáveis. Depois, os experimentos in vivo foram realizados com LK contaminadas por material necrótico pulpar da região cervical de dentes indicados para tratamento endodôntico. As LK contaminadas foram imersas, por 30 ou 60 segundos, em 80% de acetona ou 80% de álcool isopropílico ou 2% de PAA. As limas foram então inoculadas em tubos de ensaio contendo meio tioglicolato. Os organismos que cresceram, foram identificados após o tratamento com PAA. A corrosão mediada pelos agentes químicos também foi testada, após a incubação de LK de aço inoxidável e de NiTi por 60 minutos, medindo o peso das LK antes e depois da imersão e por microscopia eletrônica de varredura (MEV). Todos os agentes químicos foram capazes de eliminar ou reduzir a viabilidade das bactérias de espécies planctônicas Gram-negativas e Gram-positivas, embora a atividade dos produtos químicos sobre E. faecalis sésseis em testes de carreadores de LK demonstrou que o álcool isopropílico ou acetona foram incapazes de eliminar a contaminação bacteriana, especialmente, quando as limas foram secas previamente à exposição aos produtos químicos, por 15 ou 30 segundos. O PAA demonstrou a melhor atividade antimicrobiana e eliminou a viabilidade das células sésseis E. faecalis de ambas as limas endodônticas tipo K úmidas ou secas, após exposição por 15 segundos (100% de eliminação). Os experimentos desenvolvidos in vivo demonstraram que o PAA foi o agente mais eficaz (p<0,05), capaz de eliminar a viabilidade dos organismos em 92% das LK imersas depois de 60 segundos, quando comparado com acetona (64%) ou com álcool isopropílico (50%). O crescimento microbiano após o contato com o PAA demonstrou que somente o grupo dos Lactobacillus sp foi resistente a essa substância química. Os agentes químicos não demonstraram ser corrosivos, após a imersão por 1 hora, tanto por pesagem quanto por MEV. Foi observado que o PAA foi o agente mais eficaz para ser utilizado como desinfetante de instrumentos, durante o período transoperatório do tratamento endodôntico. / This investigation aimed to evaluate the antimicrobial efficacy of disinfectant agents used to maintain the disinfection of endodontic instruments during the transoperatory period in endodontic treatment. The antimicrobial activity of disinfectants isopropyl alcohol, acetone and peracetic acid were evaluated upon planktonic micro-organisms by time kill assay (contact test) using inoculums from 9,9 X 109 to 1,2 X 1012 colony forming units (CFU) and determination of minimal bactericidal concentration (MBC), using inoculums of 106 CFU. Chemical agents were also evaluated upon Enterococcus faecalis (E. faecalis) ATCC 29212 strain grown on matrix dentin (ex vivo) for biofilm formation. Biofilm (sessile organisms) were removed with Kerr files until the blades were visually filled and contaminated K files used as carriers (shortly after contamination or dried inside a flow chamber for 10 minutes). K files carriers were immersed in 80% isopropyl alcohol, 80% acetone or in 2% peracetic acid for 30 or 60 seconds. The files were subsequently dispensed into test tubes containing Enterococcosel broth to observe the growth of viable enterococci. Thereafter, in vivo experiments were performed with K files contaminated with pulp necrotic material from cervical region of teeth indicated to endodontic treatment. The contaminated K files were immersed for 30 or 60 seconds in 80% acetone, 80% isopropyl alcohol and 2% peracetic acid. The files were then inoculated into test tubes containing tioglycolate medium. The organisms that grew after peracetic acid treatment were identified. The corrosion mediated by the chemical agents was also tested after incubation of stainless steel and NiTi K files for 60 minutes, by measuring the weight of K-files before and after immersion, and by scanning electron microscopy (SEM). All chemical agents were capable to eliminate or reduce bacterial viability of planktonic Gram-negative and Gram-positive species, though the activity of chemicals upon sessile E. faecalis in K-file carrier tests demonstrated that isopropyl alcohol or acetone were incapable to eliminate bacterial contamination, especially when the files were dried previously to the exposition to the chemicals for 15 or 30 seconds. Peracetic acid demonstrated the best antimicrobial activity, and eliminated the viability of sessile E. faecalis cells from both wet and dried K-endodontic files after exposition for 15 seconds (100% elimination). The experiments developed in vivo demonstrated that peracetic acid was the most effective agent (p<0,05), capable of eliminating the viability of organisms in 92% of K files immersed after 60 seconds, when compared to acetone (64%) or isopropyl alcohol (50%). The microbial grown after contact with peracetic acid demonstrated that only Lactobacillus sp group was resistant to this chemical. The chemical agents demonstrated to be non-corrosive after immersion for 1 hour, by both weighing and SEM. The results indicated that peracetic acid was the most effective agent to be used as disinfectant of instruments during transoperatory period of endodontic treatment.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The main groups of secondary metabolites of Glechon spathulata Benth. were evaluated by a phytochemical screening and the volatile oil obtained by hydrodistillation was analyzed by GC-MS. Volatile oil, ethanolic crude extract and hexanic, chloroformic, ethyl acetate and butanolic fractions of G. spathulata were submitted to the lethality test against Artemia salina Leach., to the antimicrobial activity by bioauthographic assay and broth microdilution. Antioxidant activity by DPPH in thin-layer chromatography (TLC) and spectrophotometric assay were also evaluated. Flavonoids, tannins, sterols and/or triterpenoids, saponins, anthocyanic pigments, volatile and fixed acids were found in G. spathulata. The GC of the oil revealed the presence of 9 constituents. All samples presented Artemia salina toxicity (LC50<1000 μg/ml). The volatile oil showed antimicrobial activity evaluated by bioauthographic assay against Gram-positive and Gram-negative bacteria and against Candida albicans, the crude extract didn t show activity against the tested microorganisms in same conditions of assay with volatile oil. Volatile oil, hexanic and ethyl acetate fractions showed good inhibitory activity against Gram-positive and Gram-negative bacterial cultures. Through DPPH method all the samples showed antioxidant activity by TLC, by spectrophotometric method, ethyl acetate, butanolic fractions and volatile oil showed excellent antioxidant activity with IC50 7,99 μg/ml; 11,75 μg/ml and 20,59 μg/ml respectively. / Os principais grupos de substâncias de Glechon spathulata Benth. foram avaliados por uma análise fitoquímica e o óleo volátil obtido por hidrodestilação foi analisado por CG-EM. O óleo volátil, o extrato bruto etanólico e as frações hexânica, clorofórmica, acetato de etila e butanólica de G. spathulata foram submetidos ao teste de letalidade frente a Artemia salina Leach., à atividade antimicrobiana por bioautografia e microdiluição em caldo. A atividade antioxidante pelo DPPH em cromatografia em camada delgada (CCD) e pelo ensaio espectrofotométrico também foi avaliada. Flavonóides, taninos, esteróis e/ou triterpenos, saponinas, pigmentos antociânicos, ácidos voláteis e fixos foram encontrados em G. spathulata. A CG do óleo revelou a presença de 9 constituintes. Todas as amostras apresentaram toxicidade frente à Artemia salina (CL50<1000 μg/ml). O óleo volátil apresentou atividade antimicrobiana avaliada por bioautografia contra bactérias Gram-positivas e Gram-negativas e contra Candida albicans, o extrato bruto não apresentou atividade contra os microrganismos testados nas mesmas condições do ensaio com o óleo volátil. O óleo volátil, as frações hexânica e acetato de etila mostraram boa atividade inibitória contra bactérias Gram-positivas e Gram-negativas. Através do método do DPPH, todas as amostras mostraram atividade antioxidante por CCD e pelo método espectrofotométrico, as frações acetato de etila, butanólica e o óleo volátil demonstraram excelente atividade antioxidante com CI50 de 7,99 μg/ml; 11,75 μg/ml e 20,59 μg/ml respectivamente.

Verbena litoralis Kunth belongs to the family Verbenaceae is native to South America and can be found in tropical and subtropical regions, mainly in temperate regions of the southern hemisphere and some temperate regions of the northern hemisphere. It is popularly known as gervãozinho of field or herb-of-father-caetano and used in traditional medicine against diarrhea, against fever and gastrointestinal disorders. It is a herbaceous perennial has erect stems, ovate leaves and quadrangular, ovate-lanceolate, lanceolate, spatulate or linear, its inflorescences are long and sparcely lilac. The aim of this study was to control physical and chemical quality of the aerial parts of the plant drug, perform the assay of polyphenols, flavonoids and tannins from the four seasons, extract essential oil, as well as submit these extracts together with the oil of V. litoralis to test antimicrobial activity. In quality control physicochemical conducted in four seasons found that the loss on drying and the percentage of foreign matter are in agreement with the values established for herbal drugs. The collection realized in the autumn had the highest content of total ash, insoluble ash and sulphated ash. The swelling index was higher in autumn and bitter index was higher in the winter. Dosages of polyphenols and tannins showed higher values in winter, while the flavonoid content was higher in the fall. In determination the in vitro antimicrobial activity of hydroethanolic extracts and essential oil of V. litoralis front of Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa, Providencia rettgeri, Streptococcus agalactiae, Micrococcus luteus, Staphylococcus intermedius, Proteus mirabilis, Klebisiella pneumoniae, Salmonella pullorum, Listeria monocytogenes, Enterococcus faecalis, Candida albicans, Cryptococcus neoformans and Aspergillus fumigatus were found that all bacteria showed sensitivity to the extracts of the four seasons, with the exception of Aspergillus fumigatus. The greater sensitivity of micro-organisms to the extracts was collection in the winter. The oil of V. litoralis showed antimicrobial activity against the Providence rettgeri, Streptococcus agalactiae, Micrococcus luteus, Staphylococcus intermedius and Klebisiella pneumonia and cis-chrysanthenol, neo-verbanol, isobornyl propanate, myrac aldehyde, ternine, isophyllocladene, phenyl ethyl anthranilate are the major compounds of the oil. / Verbena litoralis Kunth pertence à família Verbenaceae é nativa da América do Sul, podendo ser encontrada nas regiões tropicais e subtropicais, principalmente nas regiões temperadas do hemisfério sul e pouco nas regiões temperadas do hemisfério norte. É conhecida popularmente como gervãozinho-do-campo ou erva-de-pai-caetano e utilizada na medicina tradicional como antidiarréico, antifebrífugo e em desordens gastrintestinais. É uma planta herbácea perene, possui caule ereto, quadrangular e folhas ovadas, ovado-lanceoladas, lanceoladas, espatuladas ou lineares, suas inflorescências são longas e pouco densas de cor lilás. O objetivo deste trabalho foi realizar o controle de qualidade físico-químico das partes aéreas da droga vegetal, realizar o doseamento de polifenóis, flavonóides e taninos provenientes das quatro estações do ano, extrair o óleo essencial, assim como submeter esses extratos juntamente com o óleo de V. litoralis ao ensaio de atividade antimicrobiana. No controle de qualidade físico-químico realizado nas quatro estações do ano verificou-se que a perda por dessecação e a porcentagem de matéria estranha estão de acordo com os valores estabelecidos para drogas vegetais. A coleta realizada no outono apresentou o maior teor de cinzas totais, cinzas insolúveis e cinzas sulfatadas. O índice de intumescência foi mais elevado no outono e o índice de amargor foi maior no inverno. As dosagens de polifenóis e taninos apresentaram valores mais elevados no inverno, enquanto que o teor de flavonóides foi maior no outono. Na determinação da atividade antimicrobiana in vitro dos extratos hidroetanólicos e do óleo essencial de V. litoralis frente à Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa, Providência rettgeri, Streptococcus agalactiae, Micrococcus luteus, Staphylococcus intermedius, Proteus mirabilis, Klebisiella pneumoniae, Salmonella pullorum, Listeria monocytogenes, Enterococcus faecalis, Candida albicans, Cryptococcus neoformans e Aspergillus fumigatus foram verificadas que todas as bactérias apresentaram sensibilidade frente aos extratos das quatro estações do ano, com exceção de Aspergillus fumigatus. A maior sensibilidade dos micro-organismos para os extratos foi na coleta de inverno. O óleo de V. litoralis apresentou atividade antimicrobiana frente à Providência rettgeri, Streptococcus agalactiae, Micrococcus luteus, Staphylococcus intermedius e Klebisiella pneumoniae, sendo cis-crisantenol, neo-verbanol, isobornil propanato, mirac aldeído, ternine, isofilocladeno e fenil etil antranilato os compostos majoritários do óleo.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / This study aimed to investigate the influence of different parameters (concentration of solvent, time, temperature and power) in extraction methods (focused microwave, conventional and ultrasound) bioactive compounds in blueberries, seeking higher yield of compounds biativos, antioxidant and antimicrobial activity of the extracts.The extracts were characterized regarding the phenolic compounds, flavonoid and anthocyanins content. The in vitro antioxidant activity was quantified by the methods of DPPH, ABTS, FRAP, and β-carotene, was calculed the IC50 and evaluated the antimicrobial activity.The results for focused microwave extraction generally indicated that the antioxidant activity (FRAP, ABTS and DPPH), total phenolics and total anthocyanins showed a positive linear trend in relation to the extraction temperature, with no significant difference between the solvent concentrations (60 and 80%). The IC50 and β-carotene showed the greatest inhibition at 60°C at solvent concentrations of 60% and 80%, respectively. The flavonoids showed no significant difference in terms of the extraction temperature or the concentration of solvent that was used. No antimicrobial activity was detected in the extracts in relation to the tested microorganisms. In the conventional method of extracting the best extraction conditions for phenolic compounds, flavonoids and anthocyanin employed 60% solvent, 60 minutes at 40ºC; however, the anthocyanins did not suffer any influence from time and temperature. The best results for the antioxidant activity using the DPPH and FRAP methods were obtained with 60% solvent, 30 minutes at 30ºC, and the DPPH was not influenced by temperature. Regarding ABTS+ the best results were reached with 60% solvent, 120 minutes, at 40ºC, while the β-carotene required 80% solvent at 40ºC, regardless of the time. The different extracts tested did not show antimicrobial activity. Ultrasound provided better phenolic extraction conditions, flavonoids and anthocyanins using 60% solvent, 20 minutes and 80 watts of power, and phenolic compounds not influenced by the power and flavonoids were not affected by the solvent. The antioxidant activity by DPPH and IC50 showed the best results com 60% solvent, 60 minutes and 80 W of power, the same conditions were found for β-carotene, but with 20 minutes of extraction. FRAP methodology is presented more efficient solvent 60%, 60 minutes and 220W power, whereas for the ABTS assay was 80% solvent and 80 W of power, independent of the extraction time. The extracts obtained through different methods of extraction showed no antimicrobial activity. However, the study confirms the antioxidant capacity of blueberries, which can be used as a functional ingredient or as a natural antioxidant in the preparation of food products. / Este trabalho teve como objetivo investigar a influência de diferentes parâmetros (concentração de solvente, tempo, temperatura e potência) nos métodos de extração (assistida por micro-ondas focalizada, convencional e por ultrassom) de compostos bioativos de mirtilo, visando maior rendimento dos compostos biativos, atividade antioxidante e antimicrobiana dos extratos. Os extratos foram caracterizados quanto o teor de fenólicos totais, flavonoides totais e antocianinas totais. As atividades antioxidante in vitro foram quantificadas pelos métodos de DPPH, ABTS, FRAP e β-caroteno, foi calculado o IC50 e avaliada a atividade antimicrobiana. Os resultados encontrados para a extração através das micro-ondas focalizadas apontam que as atividades antioxidantes medidas por FRAP, ABTS+ e DPPH, compostos fenólicos totais e antocianinas totais apresentaram uma tendência linear positiva em relação à temperatura de extração, sem diferença significativa entre as concentrações dos solventes (60 e 80%). O IC50 e o β-caroteno apresentaram maior inibição na temperatura de 60°C, porém estes somente nas condições de solvente 60% e 80%, respectivamente. Os flavonóides não tiveram diferenças significativas na temperatura de extração e nem no solvente utilizado. No método convencional de extração as melhores condições de extração para os compostos fenólicos, flavonóides e antocianinas foi utilizando 60% de solvente, 60 minutos e à 40ºC, porém as antocianinas, não sofreram influencia do tempo e da temperatura. O melhores resultados para as atividades antioxidantes, pelos métodos DPPH e FRAP, foram obtidos com solvente 60%, 30 minutos e à 30ºC, sendo que o DPPH não foi influenciado pela temperatura. Para o ABTS+ os melhores rendimentos foram com 60% solvente, 120 minutos e à 40ºC, enquanto que para o β-caroteno, 80% de solvente a 40ºC, independentemente do tempo. O ultrassom proporcionou melhores condições de extração de fenólicos, flavonóides e antocianinas utilizando 60% de solvente, 20 minutos e 80 W de potência, sendo que os compostos fenólicos não sofreram influência da potência e os flavonoides não foram influenciados pelo solvente. A atividade antioxidante pelo método DPPH e o IC50 apresentaram os melhores resultados com 60% de solvente, 60 minutos e 80 W de potência, as mesmas condições foram encontradas para o β-caroteno, porém com 20 minutos de extração. A metodologia de FRAP apresentou-se mais eficiente com solvente 60%, 60 minutos e 220W de potência, enquanto que para o método ABTS+ foi com 80% de solvente e 80 W de potência, independente do tempo de extração. Os extratos obtidos através das diferentes metodologias de extração não apresentaram atividade antimicrobiana. Contudo, o estudo confirma a capacidade antioxidante do mirtilo, podendo este ser utilizado como ingrediente funcional ou como antioxidante natural na elaboração de produtos alimentícios.