A artrite induzida por pristane (PIA) em camundongos HIII (resistentes) e LIII (suscetíveis) foi usada para estudar mecanismos inflamatórios e imunes atuantes na fase pré-clínica da doença, os quais são pouco conhecidos. Estudos anteriores mostraram diferenças significativas na produção de citocinas nos animais HIII e LIII na fase pré-clínica da PIA, sugerindo forte influênica no fenótipo de PIA. A PIA foi induzida apenas por via intraperitoneal nos animais LIII, com intensa infiltração de neutrófilos, linfócitos, monócitos e macrófagos, altos níveis de IL-12p40 e maior expressão de genes de citocinas inflamatórias após a injeção de pristane. Por outro lado, na linhagem HIII houve aumento de eosinófilos e neutrófilos, mas redução de monócitos e linfócitos. Não observamos diferenças nos níveis de TNF-<font face=\"Symbol\">&#945;, IFN-<font face=\"Symbol\">g, IL-12p70, IL-17, IL-10. Concluímos que a intensidade e o tipo de resposta inflamatória na fase inicial da PIA podem ser mecanismos envolvidos na diferença de resistência/ susceptibilidade entre as linhagens HIII e LIII. / Pristane-induced arthritis (PIA) in HIII (resistant) and LIII (susceptible) mice was used in this work to characterize the cellular and molecular alterations of the pre-clinical phase of the disease, of which little is known. Previous reports showed significant differences in cytokine production of HIII and LIII mice in the pre-clinical phase of PIA, suggesting a strong influence on PIA phenotype. PIA was induced only by the intraperitoneal route in LIII animals, which showed intense infiltration of neutrophils, lymphocytes, monocytes and macrophages, with high levels of IL-12p40 after pristane injection. Inflammatory cytokine genes were also upregulated in LIII mice. On the other hand, HIII strain had increased eosinophils and neutrophils, but reduced monocytes and lymphocytes. No significant differences were found in TNF-<font face=\"Symbol\">&#945;, IFN-<font face=\"Symbol\">g, IL-12p70, IL-17, IL-10 levels. We conclude that the intensity and type of inflammatory response in the initial phase of PIA may be different mechanisms involved in resistance / susceptibility between HIII and LIII mice.

O presente estudo discute o papel dos miRNAs na fisiopatologia molecular de Esclerose Múltipla Recorrente Remitente (EMRR). O estudo demonstrou que em linfócitos T CD4+ de pacientes com EMRR em surto ocorre a diminuição da expressão do miR-15a e do miR16-1 em contraposição ao aumento de seu gene alvo BCL-2, um importante gene regulador da apoptose. Esses achados sugerem a participação desses miRNAs no controle da apoptose na EM. Para explorar essa associação, foi analisado a expressão global de miRNAs nas subpopulações de linfócitos T de pacientes com EMRR no estágio de remissão. O resultado dessa análise determinou de forma inédita o aumento significativo da expressão de 9 miRNAs (miRNAs-16, miRNAs-20a, miRNAs-21, miRNAs-24, miRNAs-155, miRNAs-221, miRNAs-222, miRNAs-720 e miRNAs-1281) nos linfócitos T CD8+ de memória central. A análise in silico dos alvos desses miRNAs indicou que três vias canônicas, relacionadas à ativação da apoptose, eram enriquecidas com alvos preditos e validados experimentalmente desses miRNAs. Desse modo sugerimos a forte relação desses miRNAs no controle da apoptose nos linfócitos T dos pacientes com EMRR. A fim de aprofundar nossos estudos, selecionamos os miRNAs miR-21 e miR-24, para a realização de experimentos funcionais in vivo. Foi verificada a indução da expressão miR-21 somente nos linfócitos T CD4+ de modelo experimental da EM. Adicionalmente, experimentos in vitro demonstraram que a expressão do miR-21 e restrita as populações de células Th2 e Th17. Nesse caso, miR-21 parece ser regulado pelo fator de transcrição STAT3, sugerindo assim que o aumento da expressão do miR-21 verificada no modelo animal possa estar relacionada com a presença de linfócitos T CD4+ de perfil Th17 nesse tecido. Em resumo, o conjunto desses resultados demonstra a relevância dos miRNAs na fisiopatologia da EMRR, principalmente no controle da apoptose. / This study discusses the role of miRNA in the Molecular Pathophysiology of Relapse Remitting Multiple Sclerosis (RRMS). The study has shown that CD4+ lymphocytes from relapsed RRMS patients had lower expression of miR15a and miR-16-1 in contraposition of higher expression of the target gene BCL-2, a key regulator of apoptosis. These findings suggest the role of those on the control of apoptosis in MS. In order to explore this association, the global expression of miRNAs was analysed in T lymphocyte subpopulations from remission RRMS patients. The result of this analysis has demonstrated for the first time a significant higher expression of 9 miRNAs (miRNAs-16, miRNAs-20a, miRNAs-21, miRNAs-24, miRNAs-155, miRNAs-221, miRNAs-222, miRNAs-720 e miRNAs-1281) in central memory T CD8+ lymphocytes. In silico analysis of the miRNAs targets indicates that three canonical pathways related to the activation of apoptosis were enriched with predicted and experimental validated gene targets for those miRNAs. In this way, we suggest the strong relation of these miRNAs in the control of apoptosis in the lymphocytes from RRMS patients. In order to intensify our studies we selected miR-21 and miR-24 to perform in vivo functional experiments. It was verified miR-21 induction only in T CD4+ lymphocytes from MS animal model. Additionally, in vitro experiments have demonstrated that miR-21 expression was restricted to Th2 and Th17 cell populations. In this way, miR-21 seems to be regulated by the STAT3 transcription factor, thereby suggesting that the increase of miR-21 expression observed in vivo could be related with Th17 CD4+ present in this tissue. In summary, this set of results showed the relevance of miRNAs in the RRMS pathophysiology, mainly in the control of apoptosis.

Introdução: A artrite reumatóide (AR) é uma artropatia autoimune, de caráter inflamatório, com prevalência em torno de 1% da população. O tabagismo é considerado o principal fator de risco para o desenvolvimento da AR. O receptor de hidrocarbonetos de arila (AhR), um fator de transcrição intracelular ativado por hidrocarbonetos aromáticos componentes da fumaça do cigarro, foi identificado como alvo de regulação da diferenciação de células Th17. Objetivos: Avaliar se os polimorfismos genéticos do AhR estariam associados ao desenvolvimento da AR , e se este receptor estaria mais expresso em pacientes com AR. Pacientes e Métodos: Nós analisamos sete polimorfismos genéticos por mudança de única base (SNP) por PCR em tempo real utilizando sondas TaqMan em 138 pacientes com AR e 129 indivíduos saudáveis. A quantificação da expressão do mRNA do AhR em células mononucleares isoladas de pacientes com AR e indivíduos saudáveis foi realizada por PCR em tempo real. Resultados: Identificamos que haplótipos formados por SNPs no AhR estariam associados com desenvolvimento da AR, podendo ser fator protetor ou de risco para a doença. Em adição, os pacientes com haplótipos de risco apresentavam doença com índice de atividade elevado, principalmente quando o tabagismo estava presente. De fato, pacientes com AR apresentaram aumento na expressão de AhR (mRNA) em relação a indivíduos saudáveis. Conclusões: Em conjunto estes resultados sugerem que o AhR possui um papel importante para o desenvolvimento da artrite reumatóide. Possivelmente mutações neste receptor podem estar relacionadas com alterações na sua atividade e conseqüentemente na diferenciação de células Th17 e a susceptibilidade a AR. / Introduction: Rheumatoid arthritis (RA) is a chronic autoimmune arthropaty with inflammatory characteristics and prevalence around 1% in the population. Tabagism is the main risk factor to RA development. The aryl hydrocarbon receptor (AhR) is an intracellular transcription factor activated by aromatic hydrocarbons present in smoking, whichwas identified to be a target of regulation of Th17 differentiation. Purpose: Study the relationship of genetic polymorphisms in AhR with RA development, and if this receptor expression is upregulated in RA patients. Patients and Methods: We analyzed seven genetic single nucleotide polymorphisms by Real-Time PCR using TaqMan probes in 138 patients with Rheumatoid Arthritis and 129 healthy controls. The AhR mRNA quantization in mononuclear cells isolated from AR patients and healthy controls has been done by Realt-Time PCR. Results: We identified that AhR haplotypes were associated with RA development and that they could be protector or risk factors to disease. In addition, patients with risk haplotypes showed higher disease activity index, mainly when smoking was present. Indeed, patients with RA showed upregulation in the AhR expression (mRNA) when compared with healthy controls. Conclusions: These results suggest that AhR has an important role in AR development. Probably, mutations in this receptor could be related with alterations in its activity and consequently in the differentiation of Th17 cells and RA susceptibility.

Introdução: O lúpus eritematoso sistêmico (LES) é uma doença autoimune caracterizada por uma alteração no sistema imunológico e uma inflamação crônica. O exercício físico agudo e crônico têm sido apontados como uma estratégia capaz de atenuar os acometimentos da doença e os fatores de risco cardiovasculares em pacientes com LES. Entretanto, ainda não se sabe se o exercício físico poderia piorar o quadro inflamatório e imunológico de pacientes com LES em remissão (LESREM) e atividade da doença (LESATIV). Objetivos: Avaliar o efeito agudo e crônico do exercício aeróbio na resposta das citocinas (IFN-y, IL-10, IL-6 e TNF-alfa) e receptores solúveis de TNF (sTNFR1 e sTNFR2) séricos e na expressão gênica em leucócitos circulantes de pacientes com LESREM e LESATIV. Métodos: A resposta das citocinas e dos sTNFRs às sessões agudas de exercício moderado (~50% do VO2pico) e intenso (~70% do VO2pico) foram avaliadas em 11 pacientes com LESATIV, 12 pacientes com LESREM e 10 controles saudáveis (GC), os quais foram pareados por sexo, idade e índice de massa corporal. A resposta da expressão gênica em leucócitos circulantes à sessão aguda intensa de exercício foi avaliada em quatro voluntárias por grupo (LESATIV, LESREM e GC). O treinamento aeróbio (12 semanas, 2x/semana, 30 a 50 minutos, FC entre os limiares ventilatórios) foi realizado por oito pacientes com LESREM. As citocinas e os sTNFRs foram avaliados por multiplex e a expressão gênica pelo método de PCRarray, com subsequente análise bioinformática. Resultados: Em resposta a sessão aguda moderada de exercício não houve alteração na resposta das citocinas e receptores solúveis de TNF (P > 0,05), com exceção da redução da IL-6 e do sTNFR1 na recuperação nos grupos LESATIV e GC (P < 0,05), respectivamente. Após o exercício agudo intenso, apenas o sTNFR1 reduziu durante a recuperação (P < 0,05) no grupo LESREM. No GC, a IL-10, o TNF-alfa, o sTNFR1 e o sTNFR2 permaneceram inalterados (P > 0,05), enquanto o IFN-y reduziu ao final do exercício (P = 0,05) e a IL-6 apresentou um aumento transitório ao final do exercício (P = 0,028). No grupo LESATIV, houve um aumento transitório da IL-10, IL-6 e TNF-alfa (P < 0,05), porém, todos os valores estavam normalizados 24 horas após o término da sessão. A análise da expressão gênica mostrou que uma sessão aguda de exercício intenso pode modular a expressão de genes nos leucócitos circulantes. Ao final da sessão intensa de exercício, houve uma redução da expressão de genes relacionados a citocinas e seus receptores, bem como da via dos receptores do tipo toll e da JAK/STAT nos três grupos do estudo, porém, com uma menor quantidade de genes alterados nos grupos LESREM e LESATIV comparados ao GC. Em resposta ao treinamento aeróbio, o grupo LESREM apresentou uma redução da concentração basal do sTNFR2 (P = 0,025) e uma tendência para redução da IL-10 (P = 0,093). Além disso, a área sob a curva (ASC) da resposta da cinética da IL-10 às sessões agudas moderada e intensa de exercício reduziram após o treinamento aeróbio (P < 0,05). As ASCs da IL-10, IL-6, TNF-alfa e sTNFR1 em resposta a sessão moderada de exercício não reduziram, mas alcançaram os valores do GC (P > 0,05). Conclusão: As sessões agudas de exercício moderado e intenso não exacerbam o quadro inflamatório em pacientes com LESREM e LESATIV. Adicionalmente, uma sessão intensa de exercício parece modular a expressão gênica em leucócitos circulantes de pacientes com LESREM e LESATIV, porém, em menor quantidade comparados ao GC. Por fim, o treinamento aeróbio parece reduzir o milieu inflamatório em pacientes com LESREM / Background: Systemic lupus erythematosus (SLE) is an autoimmune disease characterized by an altered immune system and a chronic inflammation. Acute and chronic physical exercise has been emerged as a strategy to attenuate the disease outcomes and the cardiovascular risk factors in SLE patients. However, it is not known yet if physical exercise could dysregulate the inflammatory process and immune system in active (SLEACTIVE) and inactive SLE patients (SLEINACTIVE). Aims: to assess the effects of acute and chronic aerobic exercise training on the serum cytokines (IFN-y, IL-10, IL-6 e TNF-?) and soluble TNF receptors (sTNFR1 and sTNFR2) levels and in the gene expression of circulating leukocytes in SLEACTIVE and SLEINACTIVE patients. Methods: Cytokines and sTNFRs responses to acute moderate (~50% of VO2peak) and intense (~70% of VO2peak) aerobic exercise were assessed in 11 SLEACTIVE patients, 12 SLEINACTIVE patients and 10 healthy controls (HC), who were matched for age, sex and body mass index. Leucocytes gene expression responses to acute intense exercise were assessed in four subjects of each group (SLEACTIVE, SLEINACTIVE, and HC). Aerobic exercise training (12 weeks, twice a week, 30 to 50 minutes, HR between ventilatory thresholds) was performed by eight SLEINACTIVE patients. Cytokines and sTNFRs were assessed by multiplex technique and the gene expression by a PCRarray method, followed by bioinformatics analysis. Results: In response to an acute moderate exercise there were no significant differences in cytokines and sTNFRs (P > 0.05), except for the reduction in IL-6 and sTNFR1 during recovery in SLEACTIVE and HC (P < 0.05), respectively. After acute intense exercise, only sTNFR1 levels reduced during recovery (P < 0.05) in the SLEINACTIVE. In HC group, IL-10, TNF-?, sTNFR1 and sTNFR2 remained unchanged (P > 0.05), while IFN-y reduced at the end of exercise (P = 0.05) and IL-6 increased transitorily at the end of exercise (P = 0.028). In the SLEACTIVE group, there was a transitory increase in IL-10, IL-6 and TNF-alfa (P < 0.05), however, all cytokines were normalized 24 hours after the end of exercise. The analyses of gene expression showed that an acute intense aerobic exercise can modulate the gene expression in circulating leukocytes. At the end of acute intense exercise, there was a down-regulation of cytokines-cytokines receptor genes, and in the genes involved in the toll-like receptors and JAK/STAT pathways, however, with fewer genes altered in the SLEACTIVE and SLEINACTIVE groups compared with HC. In response to aerobic exercise training, SLEINACTIVE showed a reduction in the baseline sTNFR2 levels (P = 0.025) and a tendency to decrease in IL-10 levels (P = 0.093). Moreover, area under the curve (AUC) of the IL-10 kinetics to acute moderate and intense aerobic exercise reduced after the aerobic exercise training (P < 0.05). The AUCs of IL-10, IL-6, TNF-alfa and sTNFR1 in response to acute moderate exercise did not reduce, but reached the HC values (P > 0.05). Conclusion: Acute moderate and intense aerobic exercise did not exacerbate the inflammatory process in SLEINACTIVE and SLEACTIVE patients. Additionally, acute intense aerobic exercise seems to modulate the gene expression in leukocytes of SLEINACTIVE and SLEACTIVE patients, however, in fewer genes than in HC group. Finally, the aerobic exercise training seems to reduce milieu inflammatory in SLEINACTIVE patients

O timo é o órgão linfóide primário responsável pelo estabelecimento inicial de um repertório funcional de células T. A via de sinalização Notch é essencial para o desenvolvimento de células T a partir de células-tronco hematopoiéticas, e a distribuição de seus receptores e ligantes no timo humano ainda é desconhecida. A expressão de AIRE é crucial para a seleção de um repertório de receptores de linfócitos T (TCR) sem autorreatividade. Neste estudo, analisamos o padrão de expressão de AIRE e a distribuição de Notch em timos pacientes com cardiopatias congênitas, parte dos quais com síndrome de Down. Descrevemos a localização intratímica e os tipos celulares capazes de expressar os diferentes receptores e ligantes Notch. A expressão de AIRE em células epiteliais medulares foi significantemente reduzida em timos de crianças com síndrome de Down, deficiência esta que pode explicar a alta incidência de doenças autoimunes nesta cromossomopatia. / The thymus is a primary lymphoid organ which is essential for the initial establishment of a functional repertoire of T cells. Notch signaling is crucial for T-cell lineage development from hematopoietic stem cells; however, distribution of Notch ligands and receptors in human thymus is still unknown. AIRE is crucial for the selection of a T-cell-receptor (TCR) repertoire purged of self-reactive specificities. In this study, we analyzed the expression patterns of AIRE and Notch in human thymuses from children with congenital cardiopathies that undergo heart surgery, part of whom with Down syndrome. We described the intra-thymic localization and the cell types that express Notch receptors and ligands. AIRE expression in medullary epithelial cells is significantly decreased in Down syndrome patients. This deficiency could explain higher incidence of autoimmune disease in Down syndrome.

Submitted by Setor de Tratamento da Informa??o - BC/PUCRS (tede2@pucrs.br) on 2016-06-03T18:10:26Z No. of bitstreams: 1 DIS_TALITA_SIARA_ALMEIDA_BAPTISTA_COMPLETO.pdf: 9334172 bytes, checksum: c7b40886e364d19d530b0e1e52b4019c (MD5) / Made available in DSpace on 2016-06-03T18:10:26Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DIS_TALITA_SIARA_ALMEIDA_BAPTISTA_COMPLETO.pdf: 9334172 bytes, checksum: c7b40886e364d19d530b0e1e52b4019c (MD5) Previous issue date: 2016-03-28 / Rheumatoid arthritis (RA) is a chronic autoimmune and inflammatory disease characterized by the production of autoantibodies and the articular and extra articular events, including the Central Nervous System (CNS) of patients. Factors such as the chronic inflammation and the presence of autoantibodies against myelin proteins are potential mechanisms involved with cognitive dysfunction in other autoimmune diseases. Disorders such as mild cognitive impairment and Alzheimer's disease have high plasma levels of autoantibodies against myelin proteins well as important cognitive impairment and increased levels of S100? protein. Based on this, here we explore the relationship between cognitive performance, plasma levels of antibodies and S100? protein of patients with RA. Twenty patients with RA and nineteen healthy controls did not differ significantly by gender, age and schooling, were recruited in this study. Cognitive function, (MMSE, working memory, processing speed, inhibitory control and mental flexibility) declarative memory and depression were assessment through interviews where specific clinical questionnaires were apply. The plasma of patients and controls was obtained by centrifugation to investigate the levels of S100? protein and autoantibodies against Basic Myelin Protein (English MBP - Myelin Basic Protein) and against Glycoprotein Myelin oligodendrocyte (English MOG Myelin Oligodendrocyte Glycoprotein). RA patients had a lower cognitive performance in the MMSE, declarative memory, working memory, processing speed, inhibitory control and mental flexibility compared to healthy controls. Patients present S100? protein levels and anti - MBP and anti - MOG higher than controls which negatively correlated with cognitive performance of these individuals. In regression analyzes peripheral levels of anti - MOG and anti - MBP acted as predictors of executive function scores as declarative and working memory, processing speed and inhibitory capacity. In conclusion, when compared to healthy controls, RA patients have higher serum levels of autoantibodies and S100? protein which were negatively related and predicted the worst cognitive performance of these individuals. / A Artrite Reumatoide (AR) ? uma doen?a autoimune cr?nica e inflamat?ria caracterizada pela produ??o de auto anticorpos e por eventos articulares e extra articulares, atingindo inclusive o Sistema Nervoso Central (SNC) dos pacientes. Fatores como a inflama??o cr?nica a presen?a de auto anticorpos contra prote?nas da mielina s?o potenciais mecanismos envolvidos com a disfun??o cognitiva em outras doen?as autoimunes. Patologias como o dano cognitivo leve e doen?a de Alzheimer apresentam altos n?veis plasm?ticos de auto anticorpos contra prote?nas da mielina bem como altera??es cognitivas importantes e aumento dos n?veis da prote?na S100?. Com base nisto, neste trabalho n?s exploramos as rela??es entre desempenho cognitivo, n?veis de auto anticorpos e da prote?na S100? na circula??o perif?rica de pacientes com AR. Vinte pacientes com AR e dezenove controles saud?veis, que n?o diferiram significativamente em rela??o a sexo, idade e escolaridade, foram recrutados neste estudo. A fun??o cognitiva (MMSE, mem?ria de trabalho, velocidade de processamento, controle inibit?rio e flexibilidade mental) mem?ria declarativa e depress?o foram avaliados atrav?s de entrevistas onde foram aplicados question?rios cl?nicos espec?ficos. O plasma dos pacientes e controles foi obtido por centrifuga??o para investiga??o dos n?veis da prote?na S100? e de auto anticorpos contra Prote?na B?sica da Mielina (em ingl?s MBP ? Myelin Basic Protein), contra Glicoprote?na da Mielina de Oligodendr?citos (em ingl?s MOG Myelin Oligodendrocyte Glycoprotein). Os pacientes com AR tiveram um desempenho cognitivo inferior no MMSE, mem?ria declarativa, mem?ria de trabalho, velocidade de processamento, controle inibit?rio e flexibilidade mental se comparado a controles saud?veis. Embora todos os indiv?duos, de ambos os grupos, tiveram uma pontua??o superior ? estabelecida pelo cutoff do MMSE. Os pacientes apresentaram n?veis de prote?na S100? e de anticorpos anti ? MBP e anti ? MOG mais altos do que os controles o que se correlacionou negativamente com o desempenho cognitivo desses indiv?duos. Nas an?lises de regress?o os n?veis perif?ricos de anti ? MOG e anti ? MBP atuaram como preditores dos escores de fun??es executivas como mem?ria declarativa e de trabalho, velocidade de processamento e capacidade inibit?ria. Concluindo, quando comparados a controles saud?veis pacientes com AR tem n?veis plasm?ticos mais altos de auto anticorpos e prote?na S100?, que se correlacionaram e predisseram negativamente o pior desempenho cognitivo destes indiv?duos.

Introdução: A artrite reumatóide (AR) é uma artropatia autoimune, de caráter inflamatório, com prevalência em torno de 1% da população. O tabagismo é considerado o principal fator de risco para o desenvolvimento da AR. O receptor de hidrocarbonetos de arila (AhR), um fator de transcrição intracelular ativado por hidrocarbonetos aromáticos componentes da fumaça do cigarro, foi identificado como alvo de regulação da diferenciação de células Th17. Objetivos: Avaliar se os polimorfismos genéticos do AhR estariam associados ao desenvolvimento da AR , e se este receptor estaria mais expresso em pacientes com AR. Pacientes e Métodos: Nós analisamos sete polimorfismos genéticos por mudança de única base (SNP) por PCR em tempo real utilizando sondas TaqMan em 138 pacientes com AR e 129 indivíduos saudáveis. A quantificação da expressão do mRNA do AhR em células mononucleares isoladas de pacientes com AR e indivíduos saudáveis foi realizada por PCR em tempo real. Resultados: Identificamos que haplótipos formados por SNPs no AhR estariam associados com desenvolvimento da AR, podendo ser fator protetor ou de risco para a doença. Em adição, os pacientes com haplótipos de risco apresentavam doença com índice de atividade elevado, principalmente quando o tabagismo estava presente. De fato, pacientes com AR apresentaram aumento na expressão de AhR (mRNA) em relação a indivíduos saudáveis. Conclusões: Em conjunto estes resultados sugerem que o AhR possui um papel importante para o desenvolvimento da artrite reumatóide. Possivelmente mutações neste receptor podem estar relacionadas com alterações na sua atividade e conseqüentemente na diferenciação de células Th17 e a susceptibilidade a AR. / Introduction: Rheumatoid arthritis (RA) is a chronic autoimmune arthropaty with inflammatory characteristics and prevalence around 1% in the population. Tabagism is the main risk factor to RA development. The aryl hydrocarbon receptor (AhR) is an intracellular transcription factor activated by aromatic hydrocarbons present in smoking, whichwas identified to be a target of regulation of Th17 differentiation. Purpose: Study the relationship of genetic polymorphisms in AhR with RA development, and if this receptor expression is upregulated in RA patients. Patients and Methods: We analyzed seven genetic single nucleotide polymorphisms by Real-Time PCR using TaqMan probes in 138 patients with Rheumatoid Arthritis and 129 healthy controls. The AhR mRNA quantization in mononuclear cells isolated from AR patients and healthy controls has been done by Realt-Time PCR. Results: We identified that AhR haplotypes were associated with RA development and that they could be protector or risk factors to disease. In addition, patients with risk haplotypes showed higher disease activity index, mainly when smoking was present. Indeed, patients with RA showed upregulation in the AhR expression (mRNA) when compared with healthy controls. Conclusions: These results suggest that AhR has an important role in AR development. Probably, mutations in this receptor could be related with alterations in its activity and consequently in the differentiation of Th17 cells and RA susceptibility.

Introdução: O lúpus eritematoso sistêmico (LES) é uma doença autoimune caracterizada por uma alteração no sistema imunológico e uma inflamação crônica. O exercício físico agudo e crônico têm sido apontados como uma estratégia capaz de atenuar os acometimentos da doença e os fatores de risco cardiovasculares em pacientes com LES. Entretanto, ainda não se sabe se o exercício físico poderia piorar o quadro inflamatório e imunológico de pacientes com LES em remissão (LESREM) e atividade da doença (LESATIV). Objetivos: Avaliar o efeito agudo e crônico do exercício aeróbio na resposta das citocinas (IFN-y, IL-10, IL-6 e TNF-alfa) e receptores solúveis de TNF (sTNFR1 e sTNFR2) séricos e na expressão gênica em leucócitos circulantes de pacientes com LESREM e LESATIV. Métodos: A resposta das citocinas e dos sTNFRs às sessões agudas de exercício moderado (~50% do VO2pico) e intenso (~70% do VO2pico) foram avaliadas em 11 pacientes com LESATIV, 12 pacientes com LESREM e 10 controles saudáveis (GC), os quais foram pareados por sexo, idade e índice de massa corporal. A resposta da expressão gênica em leucócitos circulantes à sessão aguda intensa de exercício foi avaliada em quatro voluntárias por grupo (LESATIV, LESREM e GC). O treinamento aeróbio (12 semanas, 2x/semana, 30 a 50 minutos, FC entre os limiares ventilatórios) foi realizado por oito pacientes com LESREM. As citocinas e os sTNFRs foram avaliados por multiplex e a expressão gênica pelo método de PCRarray, com subsequente análise bioinformática. Resultados: Em resposta a sessão aguda moderada de exercício não houve alteração na resposta das citocinas e receptores solúveis de TNF (P > 0,05), com exceção da redução da IL-6 e do sTNFR1 na recuperação nos grupos LESATIV e GC (P < 0,05), respectivamente. Após o exercício agudo intenso, apenas o sTNFR1 reduziu durante a recuperação (P < 0,05) no grupo LESREM. No GC, a IL-10, o TNF-alfa, o sTNFR1 e o sTNFR2 permaneceram inalterados (P > 0,05), enquanto o IFN-y reduziu ao final do exercício (P = 0,05) e a IL-6 apresentou um aumento transitório ao final do exercício (P = 0,028). No grupo LESATIV, houve um aumento transitório da IL-10, IL-6 e TNF-alfa (P < 0,05), porém, todos os valores estavam normalizados 24 horas após o término da sessão. A análise da expressão gênica mostrou que uma sessão aguda de exercício intenso pode modular a expressão de genes nos leucócitos circulantes. Ao final da sessão intensa de exercício, houve uma redução da expressão de genes relacionados a citocinas e seus receptores, bem como da via dos receptores do tipo toll e da JAK/STAT nos três grupos do estudo, porém, com uma menor quantidade de genes alterados nos grupos LESREM e LESATIV comparados ao GC. Em resposta ao treinamento aeróbio, o grupo LESREM apresentou uma redução da concentração basal do sTNFR2 (P = 0,025) e uma tendência para redução da IL-10 (P = 0,093). Além disso, a área sob a curva (ASC) da resposta da cinética da IL-10 às sessões agudas moderada e intensa de exercício reduziram após o treinamento aeróbio (P < 0,05). As ASCs da IL-10, IL-6, TNF-alfa e sTNFR1 em resposta a sessão moderada de exercício não reduziram, mas alcançaram os valores do GC (P > 0,05). Conclusão: As sessões agudas de exercício moderado e intenso não exacerbam o quadro inflamatório em pacientes com LESREM e LESATIV. Adicionalmente, uma sessão intensa de exercício parece modular a expressão gênica em leucócitos circulantes de pacientes com LESREM e LESATIV, porém, em menor quantidade comparados ao GC. Por fim, o treinamento aeróbio parece reduzir o milieu inflamatório em pacientes com LESREM / Background: Systemic lupus erythematosus (SLE) is an autoimmune disease characterized by an altered immune system and a chronic inflammation. Acute and chronic physical exercise has been emerged as a strategy to attenuate the disease outcomes and the cardiovascular risk factors in SLE patients. However, it is not known yet if physical exercise could dysregulate the inflammatory process and immune system in active (SLEACTIVE) and inactive SLE patients (SLEINACTIVE). Aims: to assess the effects of acute and chronic aerobic exercise training on the serum cytokines (IFN-y, IL-10, IL-6 e TNF-?) and soluble TNF receptors (sTNFR1 and sTNFR2) levels and in the gene expression of circulating leukocytes in SLEACTIVE and SLEINACTIVE patients. Methods: Cytokines and sTNFRs responses to acute moderate (~50% of VO2peak) and intense (~70% of VO2peak) aerobic exercise were assessed in 11 SLEACTIVE patients, 12 SLEINACTIVE patients and 10 healthy controls (HC), who were matched for age, sex and body mass index. Leucocytes gene expression responses to acute intense exercise were assessed in four subjects of each group (SLEACTIVE, SLEINACTIVE, and HC). Aerobic exercise training (12 weeks, twice a week, 30 to 50 minutes, HR between ventilatory thresholds) was performed by eight SLEINACTIVE patients. Cytokines and sTNFRs were assessed by multiplex technique and the gene expression by a PCRarray method, followed by bioinformatics analysis. Results: In response to an acute moderate exercise there were no significant differences in cytokines and sTNFRs (P > 0.05), except for the reduction in IL-6 and sTNFR1 during recovery in SLEACTIVE and HC (P < 0.05), respectively. After acute intense exercise, only sTNFR1 levels reduced during recovery (P < 0.05) in the SLEINACTIVE. In HC group, IL-10, TNF-?, sTNFR1 and sTNFR2 remained unchanged (P > 0.05), while IFN-y reduced at the end of exercise (P = 0.05) and IL-6 increased transitorily at the end of exercise (P = 0.028). In the SLEACTIVE group, there was a transitory increase in IL-10, IL-6 and TNF-alfa (P < 0.05), however, all cytokines were normalized 24 hours after the end of exercise. The analyses of gene expression showed that an acute intense aerobic exercise can modulate the gene expression in circulating leukocytes. At the end of acute intense exercise, there was a down-regulation of cytokines-cytokines receptor genes, and in the genes involved in the toll-like receptors and JAK/STAT pathways, however, with fewer genes altered in the SLEACTIVE and SLEINACTIVE groups compared with HC. In response to aerobic exercise training, SLEINACTIVE showed a reduction in the baseline sTNFR2 levels (P = 0.025) and a tendency to decrease in IL-10 levels (P = 0.093). Moreover, area under the curve (AUC) of the IL-10 kinetics to acute moderate and intense aerobic exercise reduced after the aerobic exercise training (P < 0.05). The AUCs of IL-10, IL-6, TNF-alfa and sTNFR1 in response to acute moderate exercise did not reduce, but reached the HC values (P > 0.05). Conclusion: Acute moderate and intense aerobic exercise did not exacerbate the inflammatory process in SLEINACTIVE and SLEACTIVE patients. Additionally, acute intense aerobic exercise seems to modulate the gene expression in leukocytes of SLEINACTIVE and SLEACTIVE patients, however, in fewer genes than in HC group. Finally, the aerobic exercise training seems to reduce milieu inflammatory in SLEINACTIVE patients

Autoimmune diseases are a group of different diseases which are characterized by an immune disorder leading to decreased tolerance to components of the body itself. These diseases have many factors that trigger such as a decrease of the share or percentage of regulatory T cells (Tregs). The Transforming Growth Factor-beta 1 (TGF-&#946;1) is involved in the suppression of the inflammatory response during the pathogenesis of autoimmune diseases (juvenile idiopathic arthritis, multiple sclerosis, diabetes), through the activation of this cell type. This cytokine is also associated with modulation of an inflammatory response either by increasing Treg cells and by modulating proinflammatory cytokines such as tumor necrosis factor alpha (TNF-&#945;). The components found in both innate immune responses as adaptive must be considered potential targets for developing new drugs immune modulators. Thus, manipulation of Tregs is an attractive strategy for immunotherapy and hence, the use of mimetic peptide to TGF-&#946;1 can be adopted to reduce the effects of severe autologous response, then creating an additional therapy for autoimmunity as well as for the treatment of inflammatory diseases. Our results show that we can select TGF-&#946;1 mimetic peptides since we can prove by bioinformatics both bind to this receptor molecule. Thus, the peptides can be used as immunomodulators to combat inflammation and in the treatment of autoimmune diseases since they can modulate the production of TNF-&#945; and IL-10. / Doenças autoimunes são um grupo de doenças distintas que se caracterizam por uma desordem imunológica levando a diminuição da tolerância aos componentes do próprio organismo. Essas doenças possuem vários fatores que as desencadeiam como a diminuição da ação ou porcentagem de células T regulatórias (Tregs). O Fator Transformante de Crescimento-beta 1 (TGF-&#946;1) está envolvido na supressão da resposta inflamatória durante a patogênese de doenças autoimunes (artrite idiopática juvenil, esclerose múltipla, diabetes), por meio da ativação desse tipo celular. Esta citocina também está associada a modulação de uma resposta inflamatória, seja pelo aumento de células Tregs como pela modulação de citocinas pro-inflamatórias como o Fator de necrose tumoral alfa (TNF-&#945;). Os componentes encontrados em respostas tanto imune inatas quanto adaptativas devem ser considerados potenciais alvos para o desenvolvimento de novos fármacos imuno moduladores. Assim, a manipulação de Tregs é uma estratégia atraente para a imunoterapia e, desta forma, o uso de peptídeos miméticos ao TGF-&#946;1 poderá ser adotado para diminuir as consequências de uma resposta autóloga severa, criando, então, uma terapia complementar para a autoimunidade bem como para o tratamento de doenças inflamatórias. Nossos resultados mostram que conseguimos selecionar peptídeos miméticos a molécula do TGF- &#946;1, uma vez que conseguimos provar por bioinformática que ambos se ligam ao receptor desta molécula. Assim, os peptídeos podem ser utilizados como imunomoduladores para o combate de inflamação e no tratamento de doenças autoimune já que conseguem modular a produção de TNF- &#945; e IL-10. Experimentos in vivo realizados também demonstraram a sua capacidade de diminuir inflamação modulação a migração de neutrófilos e leucócitos. / Mestre em Genética e Bioquímica

Made available in DSpace on 2015-07-22T20:49:37Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-04-29 / O Lúpus Eritematoso Sistêmico (LES) é uma doença inflamatória crônica pertencente ao grupo das doenças reumáticas autoimunes sistêmicas, caracterizando- se por apresentar as mais variadas manifestações clínicas e laboratoriais. Seu mecanismo exato de etiopatogenia ainda permanece obscuro. Observações prévias avaliando o papel das células TREG CD4+ CD25+ nas doenças autoimunes, em que se tem detectado tanto alterações de freqüência como alterações funcionas e fenotípicas em modelos murinos e humanos, sugerem o papel significante dessa população celular na etiopatogenia da autoimunidade. No LES podemos observar a existência de uma complexa rede de interações que caracterizam a doença, em que muitos alvos para intervenção terapêutica podem ser considerados. Atualmente tem-se voltado bastante a atenção para o estudo das células TREG CD4+CD25+, a fim de que possam ser usadas como alvos potenciais para terapia imunomoduladora. Os dados sobre a freqüência e fenótipo das células TREG publicados ate o momento são controversos devido à heterogeneidade de marcadores fenotípicos e estratégias de análises utilizadas. Um alto nível de células efetoras ativadas contaminam as amostras de células selecionadas de acordo com as estratégias clássicas de identificação de células TREG no LES e este fenômeno é ainda mais acentuado quanto maior o grau de atividade da doença. Assim, o presente projeto pretendeu inicialmente validar uma estratégia de análise capaz de identificar e quantificar células TREG utilizando a combinação dos marcadores CD25 e CD127 associados à expressão de Foxp3 em pacientes com LES em atividade ou fora de atividade. Concluiu-se pelo painel CD4+CD25+/highCD127Æ/low como melhor marcador de células TREG em virtude de sua alta associação com Foxp3 tanto em sadios como em pacientes com LES. Num segundo momento avaliamos a freqüência de células TREG e células Tconvonde observamos níveis normais de células TREG e níveis elevados de células Tconv ativadas em pacientes com doença em atividade. Foi nosso objetivo, também, avaliar a expressão de marcadores fenotípicos importantes para biologia das células TREG. Foi avaliada a expressão dos marcadores: CTLA-4, GITR, PD-1, OX40, HLA-DR, CD95, CD45Ra, CD28, CD40L nas células CD4+CD25+/hiCD127Æ/low, em pacientes com LES em fase ativa e inativa. Avaliamos também a relação entre o balanço de células TREG versus células Tconv expressando estes marcadores mediante o calculo da razão de equilíbrio fenotípico TREG/Tconv. Em pacientes com doença ativa observamos níveis diminuídos de células TREG positivas para as moléculas CTLA-4 e CD28 e níveis elevados de células TREG CD40L+. Quando avaliada a razão TREG/Tconv observamos uma alteração no balanço TREG/Tconv positivas para GITR, HLA-DR, OX40, CD40L e CD45RO. Houve queda na razão TREG/Tconv para os marcadores GITR, HLADR, OX40 e CD45RO e ganho para o marcador CD40L em pacientes com LES quando comparado a controles sadios. Além da caracterização fenotípica ampla, o presente estudo tem um ponto original extra, que consiste na definição da população de células TREG a partir do fenótipo CD4+CD127lowCD25+, que tem se mostrado mais específico que o tradicional fenótipo CD4+CD25high altamente contaminado por células Teff. Estas informações, no futuro, poderiam levar a pistas importantes na busca de alternativas mais eficazes de imunoterapia, capazes de restabelecer os mecanismos normais de tolerância imunológica, evitando ou minimizando assim os danos causados pela resposta autoimune. / Systemic lupus erythematosus (SLE) is a chronic inflammatory disease that is part of the group of rheumatic autoimmune inflammatory diseases, being characterized by heterogeneous clinical and laboratory manifestations. The exact etiopathogenic mechanism underlying SLE still remains obscure. Previousr observations evaluating CD4+ CD25+ TREG cell function in auto-immune diseases detected alterations on frequency and on phenotypic and functional features in murine and human models that support the significant activity of this cell population on autoimmune pathophysiology. In SLE we can observe the existence of a complex interaction network that characterizes the disease, in which many targets for therapeutic intervention may be considered. The present study has focused on TREG cells, since they may represent putative targets for immunomodulatory therapy in this disease. Published data on frequency and phenotype of TREG cells is controversial due to heterogeneity of phenotypic markers and analytic strategies used. The present project aimed to validate an appropriate strategy to identify and quantify TREG in SLE. The CD4+CD25highCD127 low/- panel was validated as an appropriate strategy for identification of Foxp3+ TREG cells in healthy and in SLE patients. The frequency of TREG cells presented normal frequency in active and inactive SLE. In contrast, the frequency of conventional non-regulatory T cells was increased in patients with active disease. We also evaluated the expression of important phenotypic markers for TREG cells biology, including CTLA-4, GITR, PD-1, OX40, HLA-DR, CD95, CD45RO, CD28 and CD40L in patients with active and inactive disease. In addition we evaluated the relationship between the balance of TREG cells versus conventional non-regulatory T cells expressing these markers by means of deriving the TREG/Tconv rate for each surface marker. In patients with active disease we observe reduced levels of TREG cells expressing CTLA-4 and CD28 molecules, and elevated levels of CD40L+ TREG cells. There was an imbalance in TREG/Tconv for GITR, HLA-DR, OX40, CD40L and CD45RO: samples from active SLE patients depicted a decreased TREG/Tconv ratio for GITR, HLA-DR, OX40 and CD45RO and an increased ratto for CD40L when compared with healthy controls. The knowledge on the role of TREG cells in SLE may bring important contribution in devising therapeutic alternatives for this disease. / TEDE / BV UNIFESP: Teses e dissertações