Orientador: Fábio Erminio Mingatto / Banca: Flavia Thomas Verechia Pereira / Banca: Ana Angélica Henrique Fernandes / Resumo: O fipronil é um inseticida de amplo-espectro de ação utilizado extensivamente para o controle de pragas. Existem relatos descritos na literatura de intoxicação em animais e humanos provocada pelo composto, causando até a morte. Assim, torna-se bastante relevante elucidar os mecanismos de hepatotoxicidade do inseticida para o auxílio no tratamento em caso de intoxicação por parte dos mamíferos. O objetivo desse estudo foi caracterizar o mecanismo de toxicidade do fipronil em hepatócitos isolados de rato e o efeito da biotransformação sobre o seu potencial toxicológico. As concentração do fipronil utilizada foi de 5, 10, 15 e 25 μM em células permeabilizadas com digitonina e de 25, 50, 75 e 100 μM nas não permeabilizadas. A toxicidade do fipronil aos hepatócitos foi avaliada pelo consumo de oxigênio, potencial de membrana mitocondrial, concentração intracelular de ATP hepatócitos isolados de ratos normais ou previamente tratados com proadifen, homeostase intracelular do Ca 2+ e viabilidade celular. A viabilidade celular foi avaliada por meio da exclusão do azul de tripan em hepatócitos isolados de ratos normais e atividade das enzimas alanina transaminase (ALT) e aspartato transaminase (AST) em hepatócitos isolados de ratos normais ou previamente tratados com proadifen, um inibidor do citocromo P450. O fipronil reduziu a respiração mitocondrial em células energizadas com glutamato mais malato de maneira dose dependente, e diminuiu o potencial de membrana mitocondrial e esses efeitos foram acompanhados pela redução da concentração celular de ATP e pelo rompimento da homeostase intracelular do Ca 2+ . A viabilidade celular foi afetada pelo fipronil com maior potência nos hepatócitos isolados de ratos normais, indicando que os metabólitos do inseticida aumenta seu potencial toxicológico. Os resultados deste estudo indicam que a toxicidade do fipronil aos hepatócitos está... / Abstract: Fipronil is an insecticide of broad-spectrum action used extensively for pest control. There are reports in the literature of animals and humans poisoning caused by the compound, ocacioning. Thus, it becomes quite important to elucidate the mechanisms of hepatotoxicity of the insecticide for treatment in case of intoxication by mammals. The aim of this study was to characterize the mechanism of toxicity of fipronil in isolated rat hepatocytes and the effect of biotransformation on its toxicological potential. The toxicity of fipronil was assessed by monitoring oxygen consumption and mitochondrial membrane potential, intracellular ATP concentration, Ca 2+ homeostasis and cell viability. The cell viability was evaluated by the tripan blue exclusion in hepatocytes isolated from normal rats and the activity of the enzyme alanine transaminase (ALT) and aspartate transaminase (AST) in hepatocytes isolated from normal rats or rats pretreated with proadifen, a cytochrome P450 inhibitor. Fipronil reduced mitochondrial respiration in cells energized with glutamate plus malate in a dose- dependent manner, and dissipated the mitochondrial membrane potential accompanied by reductions in ATP concentration and a disruption of intracellular Ca 2+ homeostasis. Cell viability was affected by fipronil with higher potency in hepatocytes isolated from normal rats, indicating that the metabolism of insecticide increases its toxicological potential. The results of this study indicate that the toxicity of fipronil to the hepatocytes is related to the inhibition of mitochondrial activity, leading to a decreased ATP synthesis and consequent alteration in intracellular Ca 2+ homeostasis, resulting in cell death / Mestre

To identify the origin of pain and relieve of it is, certainly, important part of the treatment of any pathology. Unfortunately, nor all pain modalities possess an adequate treatment at a moment. Many patients do not obtain pain relief in response to drugs available or, they present serious adverse effects that hinder the continuity of treatment. So, a search for new drugs that are more efficient and that produce little undesired effect is necessary. Pyrazole derivatives are known for their excellent effectiveness as analgesics. In this context, the NUQUIMHE and LABNEURO have joined efforts for synthesize and evaluate the biological effects of several pyrazole compounds. In the present study, was evaluated the antinociceptive and antiedematogenic effect of one series of 5-trifluoromethyl-4,5-dihidro-1H-pyrazole-1- carboxiamide (2a-j) derivatives on acute and chronic nociception models in mice and rats. A preliminary evaluation of the toxicity for more active compounds, after their chronic administration, was carried out too. Some biochemistry parameters relationships to inflammation were also evaluated. Eight of ten compounds analyzed present antinociceptive effect on formalin test in mice. The two most efficient derivatives (2c and 2j) were also evaluated on hot plate, carrageenan and arthritis induced by Complete Freund Adjuvant (CFA). These compounds caused no effect against thermal nociception, but were effective for decrease the edema carrageenaninduced in mice. In the arthritis model in rats, 2c and 2j compounds caused antinociception, but do not antiedematogenic action. This antinociceptive effect occurred after acute and chronic administration and has long duration. Parameters indicators of liver and kidney lesion (urea, creatinine, aspartate aminotransferase and alanine aminotransferase) were not altered and were neither detected signals of gastric mucosa lesion nor evidences of tolerance development to antinociceptive effect in rats chronically treated with 2c or 2j. The serum level of haptoglobin and the tissue myeloperoxidase activity of the animals that received treatment indicate that these compounds did not present anti-inflammatory effect. None compounds evaluated caused alteration on locomotors activity of mice and rats. The results obtained in the present work suggest that this new class of pyrazole derivatives seems promising for development of new analgesic drugs. / Identificar a causa da dor e aliviá-la é, com certeza, parte importante do tratamento de qualquer patologia. Infelizmente, nem todas as modalidades de dor possuem um tratamento adequado atualmente. Muitos pacientes não respondem aos fármacos disponíveis ou, então apresentam efeitos adversos graves que impedem a continuidade do tratamento. Desta forma, existe a necessidade de pesquisar novas drogas que sejam mais eficazes e que produzam menos efeitos indesejados. Os derivados pirazolínicos são conhecidos pela sua excelente eficácia como analgésicos. Por esse motivo, o NUQUIMHE e o LABNEURO têm unido esforços na intenção de sintetizar e avaliar os efeitos biológicos de vários compostos pirazolínicos. No presente trabalho, foi avaliado o efeito antinociceptivo e antiedematogênico de uma série de derivados 5-trifluormetil-4,5-diidro-1H-pirazol carboxiamida (2a-j) em modelos de nocicepção aguda e crônica em camundongos e ratos. Também foi feita uma avaliação preliminar da toxicidade dos compostos mais ativos, após administração crônica, além da avaliação de alguns parâmetros bioquímicos relacionados à inflamação. Oito dos 10 compostos testados apresentaram efeito antinociceptivo no teste da formalina em camundongos. Os dois compostos de maior eficácia (2c e 2j) foram também avaliados nos testes da placa quente, da carragenina e da artrite induzida por adjuvante completo de Freund (CFA). Tais compostos não causaram efeito na nocicepção térmica, mas foram eficazes na diminuição do edema induzido por carragenina em camundongos. No modelo de artrite em ratos, os compostos 2c e 2j causaram antinocicepção, mas não diminuição do edema. Esse efeito foi observado após administração aguda e crônica, e teve longa duração. Os níveis séricos de haptoglobina e a atividade tecidual da mieloperoxidase não se apresentaram alterados nos ratos tratados cronicamente com 2c e 2j, indicando que esses compostos, provavelmente, não possuem ação antiinflamatória. Os parâmetros de toxicidade renal e hepática (uréia, creatinina, aspartato aminotransferase e alanina aminotrasferase) não se apresentaram alterados, bem como não foram encontrados sinais de lesão da mucosa gástrica, nem evidências de desenvolvimento de tolerância ao efeito antinociceptivo nos ratos tratados cronicamente com 2c e 2j. Nenhum dos compostos testados causou alteração na atividade locomotora de camundongos e ratos. Os resultados encontrados neste trabalho sugerem que essa nova classe de derivados pirazolínicos parece promissora no que diz respeito ao desenvolvimento de novas drogas analgésicas.

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Ethanol is one of the most used substance in different societies. This study was performed in order to clarify the acute and chronic effects of ethanol on biochemical and behavioral parameters in male Wistar rats. The acute treatment consisted of oral administration by gavage of 0.8, 2.0, 4.0, 6.0 and 8.0 g ethanol/kg. All rats were sacrificed one hour and thirty minutes post treatment. The results showed that acute treatment induced a biphasic or hormetic effect in platelet NTPDase and 5'-nucleotidase activities. The activity of the enzyme acetylcholinesterase was inhibited in cerebral cortex, cerebellum, hypothalamus, hippocampus and striatum in 6.0g/kg and 8.0g/kg treated-groups. Moreover the acute treatment increased lipid peroxidation in the blood serum, liver, kidney and brain structures. The open-field and elevated plus-maze behavior was few altered by acute treatment. The chronic treatment consisted of oral administration of 20% ethanol solution during 31 weeks as only source of fluid. Rats were sacrificed 48 hours after the end of the treatment. The results showed reduction of the weight of treated group and initial hepatic injury in histological evaluation. There was a reduction in platelet NTPDase activity with ATP or ADP as substrate, while the 5'-nucleotidase activity was increased. The activity of the enzyme acetylcholinesterase was increased in cerebellum, hypothalamus, hippocampus and striatum. Lipid peroxidation was increased in the blood serum, liver and kidney. Besides we observed that interruption of the treatment for 48 hours elicited an anxiogenic effect in open-field and elevated plus-maze. / O etanol é uma das substâncias mais utilizadas nas diferentes sociedades. Esse estudo foi realizado com a finalidade de se esclarecerem os efeitos agudos e crônicos do etanol sobre parâmetros bioquímicos e comportamentais em ratos machos Wistar. O tratamento agudo consistiu na administração oral por gavagem de 0.8, 2.0, 4.0, 6.0 e 8.0 gramas de etanol/kg de peso corporal. Todos os ratos foram sacrificados uma hora e meia pós-tratamento. Os resultados demonstraram que o tratamento agudo com etanol induziu um efeito bifásico ou hormético sobre a atividade das enzimas NTPDase e 5'-nucleotidase de plaquetas. A atividade da enzima acetilcolinesterase foi inibida em córtex cerebral, cerebelo, hipotálamo, hipocampo e estriado nos grupos tratados com 6.0 g/kg e 8.0 g/kg. Além disso, o tratamento agudo aumentou a peroxidação lipídica em soro, fígado, rim e estruturas cerebrais. O comportamento em campo-aberto e no labirinto em cruz elevado foi pouco alterado pelo tratamento agudo. O tratamento crônico consistiu na administração de uma solução alcoólica 20% durante 31 semanas de tratamento, como única fonte de líquido. Os ratos foram sacrificados após 48 horas de interrupção do tratamento. Os resultados demonstraram redução do peso do grupo tratado e ocorrência de injúria hepática inicial na avaliação histológica. Houve uma diminuição da atividade da NTPDase, com os substratos ATP e ADP, enquanto que a atividade da 5'-nucleotidase foi aumentada. A atividade da enzima acetilcolinesterase aumentou em cerebelo, hipotálamo, hipocampo e estriado. A peroxidação lipídica aumentou em soro, fígado e rim. Além disso, observou-se que a interrupção por 48 horas induziu uma resposta ansiogênica evidenciada no campo-aberto e no labirinto em cruz elevado.

Made available in DSpace on 2016-06-02T19:22:55Z (GMT). No. of bitstreams: 1 339.pdf: 774192 bytes, checksum: 2d266b57fe228577b1c539171e1d2321 (MD5) Previous issue date: 2004-10-28 / Financiadora de Estudos e Projetos / The fish farm is becoming a promising commercial activity, however, in Brazil only 1% of the fish culture potential is explored, meanly due to the lack of studies on our Neotropical fish. The matrinxã, Brycon cephalus, is very appreciated species for many qualities as fast growth, easy adaptation to commercial food and exquisite tasty fillet. Like reofilic fishes, the rapids are their natural environment, making these species an ideal subject for studies that correlate exercise and growth. There are many kinds of activities in which fish can swim against water current at different speeds and length of time. The strenuous exercises, besides few experienced in vivo, present serious metabolic disturbances. On the other hand, the sustained swimming can improve the feed conversion rate and the growth. Such modifications are also expected for less active fish, since adequate speeds are reached for them. In this kind of exercise aerobic metabolism is preferential and it can be maintained for long periods without present fatigue. For all such, the purpose of this work was to appraise the effects of sustained swimming on the performance of matrinxã, submitted to sustained swimming for 37 and 72 days at 42 cm.s-1. Eighty matrinxãs were randomly divided in four groups of twenty fish (45 ± 17g; 14 ± 2cm). Two of these groups were exercised in circulating-water tanks (E37 and E72), swimming counter current for 37 and 72 days, respectively, at 42cm.s-1. The other two groups (C37 and C72) remained in static-water tanks for the same trial periods. At the end of each trial period, 13 fish from each group were weighed, the size was gauged, and blood samples were collected for growth, hematological, ions and metabolite determinations. After these procedures, fish were killed and liver, white and red muscles were excised, in order to determine the metabolite responses, the metabolic enzyme activities and the RNA/protein rate. The matrinxãs presented different responses for different periods of exercise. However, the exercise improved the growth rates for both exercised groups, with decrease of protein consume for energetic demands. The hematological responses of both exercised groups point to a better oxygen and nutrient transport, in spite of the major energy cost. Spite of E72 group had consumed proteins, matrinxãs incorporated more amino acids and protein in their white muscle, which improved the matrinxã growth rate. The reduced levels of sugars, glycogen and lipids in E72 white muscle indicate that matrinxã exercised for 72 days, utilizes preferentially the glycolytic and lipid pathways. The better-feed conversion rates plus the major growth of exercised matrinxãs, meanly in E72, make us sure that moderate exercise is recommended as a good practice for matrinxã farming. / A comercialização de peixes vem se tornando um mercado muito promissor, entretanto o Brasil explora apenas 1% do seu potencial devido principalmente à falta de estudos concernentes as espécies brasileiras. O matrinxã, Brycon cephalus, é uma espécie muito apreciada tanto pelo seu rápido crescimento como pela sua fácil adaptação à ração e por sua carne saborosa. Por ser um peixe de piracema, tem como habitat natural águas de correnteza, tornando-se ideal para estudos concernentes a exercício e crescimento. Existem vários tipos de atividades onde os peixes nadam contra corrente, a velocidades e tempos variáveis. Os exercícios a velocidades extenuantes, além de serem eventos pouco vivenciados por peixes in vivo, podem apresentar sérios distúrbios metabólicos, inclusive taxas menores de crescimento. Entretanto, quando o peixe é exposto ao exercício moderado de longa duração ele pode ser bastante beneficiado, apresentando melhores taxas de conversão alimentar e de crescimento. Neste tipo de exercício o peixe utiliza o metabolismo aeróbico e pode manter a atividade por longos períodos sem resultar em fadiga muscular. Mesmo peixes considerados sedentários podem ser beneficiados por este tipo de atividade, desde que nadem dentro da velocidade apropriada para sua espécie. Considerando tais pontos, o objetivo deste trabalho foi avaliar as respostas metabólicas e de crescimento de exemplares jovens de matrinxã, submetidos ao exercício contínuo de longa duração pelo período de 37 e 72 dias, à velocidade constante de natação de 42cm/seg. Oitenta exemplares de juvenis de matrinxãs foram divididos em quatro grupos experimentais com 20 exemplares por lote (45 ± 17g; 14 ± 2cm). Dois destes grupos foram colocados em tanques de exercício (E37 e E72) onde permaneceram nadando contra corrente por 37 e 72 dias, a velocidade contínua de 42 cm/seg. Os outros dois grupos permaneceram em tanques de água estática pelo mesmo período (C37 e C72). Após os respectivos períodos experimentais, 13 peixes de cada grupo foram aleatoriamente amostrados, submetidos à biometria corporal e coleta de sangue, a fim de se determinar o crescimento, os parâmetros hematológicos, os íons plasmáticos e os intermediários metabólicos. Posteriormente, os animais foram sacrificados e foi feita a excisão de fígado, músculo branco e músculo vermelho, para determinação dos intermediários metabólicos, das enzimas do metabolismo e da taxa RNA/proteína. Os matrinxãs responderam de forma diferente ao tempo de exercício, mas em ambos os casos o exercício foi benéfico aos peixes, pois eles apresentaram melhores taxas de crescimento com menores gastos protéicos para manutenção energética. As alterações hematológicas de E37 e E72 apontam para um melhor transporte de oxigênio e nutrientes, apesar da maior demanda imposta pelo exercício. O grupo E72 pôde incorporar mais aminoácidos e proteínas no músculo branco em vez de somente oxidá-los, o que favoreceu seu maior crescimento. Os níveis reduzidos de açúcares redutores, de glicogênio e de lipídios em músculo branco em E72, indicam que os matrinxãs utilizaram preferencialmente as vias glicolítica e lipídica. As melhores taxas de CAA associadas ao maior crescimento, principalmente para E72, fazem do exercício de longa duração uma boa prática para o cultivo de Brycon. cephalus.

Methylmercury (MeHg) is related to several deleterious effects on the vertebrate tissues, mainly on central nervous system, and part of these effects are through of interaction with sulfhydryl group found in cellular proteins. MeHg interacts with low and high molecular weight thiols in the blood and tissues and this fact, in some cases will allow a better absorption and tissue uptake of mercury. In this regard, the purpose of this study was to examine the effect of MeHg-Cysteine (MeHg-Cys) complex administration on cerebral areas, liver and kidney on Hg-uptake and to analyze possible behavioral changes associated with mercury accumulation in adult s mice. Adult male Swiss albino mice were divided into four groups; control (1 mL/Kg distilled water), MeHg (2 mg/kg), Cys (2 mg/kg) and MeHg-Cys complex (2 mg/kg equimolar concentration). All the animals received one injection per day (i.p.), for 60 consecutives days. The initial set of experiments was designed to analyze possible neurobehavioral changes (locomotor performance and/or exploratory activity) caused by treatments. Administration of MeHg or MeHg-Cys complex caused a significant reduction on total locomotor activity in adult s mice, when compared to control group. In contrast to locomotor activity, rearing frequency was decreased only in MeHg group. The final set of experiments was designed to determine the mercury concentration into the brain areas (cortex and cerebellum), liver and kidney in adult s mice. Treatment with MeHg significantly increased mercury concentrations in all tissues analyzed, when compared to control group. The accumulation of mercury on cerebral areas and in liver was further increased in animals treated with MeHg-Cys complex, when compared to MeHg alone group. However, the concentration of mercury found in kidney was lower in the MeHg-Cys treated group, than in the group treated only with MeHg. In conclusion, the present study shows, for the first time, that treatment with MeHg-Cys complex allow better absorption and tissue uptake of mercury than the treatment with MeHg alone, in the cerebral areas and in liver of mice. Furthermore, this study reinforces the view that MeHg causes impairment in motor performance and exploratory activity and suggests that the different forms of MeHg exposure affect its distribution in the tissues of mice, as well as, it can leads to the distinct neurobehavioral consequences. / O metilmercúrio (MeHg) é relatado por ter vários efeitos deletérios sobre tecidos de vertebrados, principalmente no sistema nervoso central, e parte desses efeitos está relacionado a sua capacidade de interagir com grupos sulfidrílicos encontrados em proteínas. O MeHg reage com tióis de baixo e alto peso molecular no sangue e outros tecidos permitindo, em alguns casos uma melhor absorção e captação de mercúrio pelo tecido. Nesse contexto, o objetivo desse trabalho foi examinar os efeitos da administração do complexo MeHg-Cisteína (MeHg-Cys) na captação de mercúrio sobre áreas cerebrais, fígado e rim; e analisar possíveis mudanças comportamentais associadas ao acúmulo de mercúrio em camundongos adultos. Camundongos machos Swiss albino foram divididos em quatro grupos: Controle (1 mL de água destilada), MeHg (2 mg/kg), Cys (2 mg/kg) e Complexo MeHg-Cys (2 mg/kg concentração equimolar). Todos os animais receberam uma injeção (i.p. por dia) durante 60 dias consecutivos. A parte inicial dos experimentos foi designada para analisar possíveis mudanças neuro-comportamentais (desempenho locomotor e/ou atividade exploratória) causadas pelos tratamentos. A administração do MeHg ou do complexo MeHg-Cys reduziu significativamente a atividade locomotora total dos camundongos adultos quando comparado ao grupo controle. Em contraste à atividade locomotora, a freqüência de levantar-se (rearing) diminuiu apenas no grupo que recebeu MeHg. A parte final dos experimentos foi designada para determinar a concentração de mercúrio nas áreas cerebrais (córtex e cerebelo), fígado e rins dos camundongos tratados. O MeHg aumentou significativamente a concentração de mercúrio em todos os tecidos analisados, quando comparado ao grupo controle. O acúmulo de mercúrio sobre as áreas cerebrais e fígado foi acentuadamente aumentado nos animais que receberam o complexo MeHg-Cys, quando comparado ao grupo que recebeu apenas MeHg. Entretanto, a concentração de mercúrio encontrada no rim foi menor no grupo tratado com o complexo MeHg-Cys quando comparado ao grupo tratado apenas com MeHg. Concluindo, o presente estudo mostrou, pela primeira vez, que o tratamento com o complexo MeHg-Cys permite maior absorção e captação de mercúrio pelos tecidos cerebrais e hepático, do que o tratamento apenas com MeHg. Além disso, esse estudo reforça a idéia que o MeHg causa prejuízo na performance motora e atividade exploratória dos animais e também sugere que diferentes formas de exposição ao MeHg afetam a sua distribuição nos tecidos de camundongos, bem como pode levar a conseqüências neuro-comportamentais distintas.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The peptide bradykinin is one of the most potent algogenic substances and its role in nociception has been intensively studied in the peripheral nervous system. However, its action in pain transmission in central nervous system remains unclear. In this work, we studied the action of this peptide into amygdala, a limbic structure highly involved on pain modulation, in the thermal noxious threshold of rats. Administration of bradykinin (0.025-0.5 nmol/site) into right amygdala of rats promoted a thermal hyperalgesia, verified by a reduction in paw withdrawal latency produced by noxious heat, only in the ipsilateral paw. The hyperalgesic effect of bradykinin (0.25 nmol/site) was not due to an unspecific effect on locomotor activity, visualized on open-field test. The hyperalgesia induced by intra-amygdala injection of bradykinin (0.25 nmol/site) was abolished by co-administration of this peptide with the B2 receptor antagonist Hoe 140 (5 pmol/site), but not by its co-administration with the B1 receptor antagonist des- Arg9-[Leu8]-bradykinin (0.05 nmol/site). This hyperalgesic effect was also inhibited by co-administration of bradykinin (0.25 nmol/site) with the glutamatergic NMDA antagonist MK-801 (5 nmol/site), with the cyclooxygenase inhibitor indomethacin (10 nmol/site) or with the glial metabolic inhibitor fluorocitrate (1 nmol/site) into amygdala of the rats. The results showed that intra-amygdalar administration of bradykinin induces pain sensitization through the release of cyclooxygenase products and the activation of NMDA and B2 receptors present in amygdala s neurones and glia. These findings provide evidence that bradykinin participates of the central pain-modulating circuit. / O peptídeo bradicinina está entre as mais potentes substâncias algogênicas, e seu papel na nocicepção tem sido intensamente estudado no sistema periférico. No entanto, sua participação na transmissão da dor no sistema nervoso central permanece obscura. Neste trabalho avaliou-se a ação desse peptídeo na amígdala, uma estrutura límbica que está amplamente envolvida na modulação da dor, através de um modelo de dor por estimulação térmica. A administração de bradicinina (0,025- 0,5 nmol/sítio) na amígdala direita de ratos promoveu hiperalgesia térmica, verificada como uma redução na latência do reflexo de retirada da pata causado por estimulação térmica nociva, apenas na pata ipsilateral á amígdala injetada. O efeito hiperalgésico da bradicinina (0,25 nmol/sítio) não foi mediado por alteração na atividade locomotora dos animais, avaliada no teste do campo aberto. A hiperalgesia produzida pela injeção intra-amígdalar de bradicinina (0,25 nmol/sítio) foi abolida pela sua co-administração com o antagonista do receptor B2, Hoe 140 (5 pmol/sítio), mas não pela sua coadministração com o antagonista do receptor B1 , des-Arg9-[Leu8]-bradicinina (0,05 nmol/sítio). Esse efeito hiperalgésico também foi inibido pela co-administração de bradicinina (0,25 nmol/sítio) com o antagonista do receptor glutamatérgico do tipo NMDA, MK-801 (5 nmol/sítio), com o inibidor da ciclooxigenase, indometacina (10 nmol/sítio), ou com inibidor do metabolismo da glia, fluorocitrato (1 nmol/sítio), na amígdala de ratos. Os resultados demonstraram que a administração intra-amigdalar de bradicinina induz sensibilização à dor através da liberação de produtos da ciclooxigenase e da ativação dos receptores NMDA e B2 presentes em células neuronais e gliais da amígdala. Esses achados fornecem evidências da participação da bradicinina na modulação central da dor.

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Heme pathway enzyme δ-aminolevulinate dehydratase (δ-ALA-D) is a good marker for oxidative stress and metal intoxication. This sulfhydrylic enzyme is inhibited in several oxidative pathologies like lead, mercury and aluminum intoxication, selenium organic species exposition and diabetes. Oxidative stress is one of cause of diabetes complications. This occurs due non-enzymatic glucose-mediated reaction, which can change structure of proteins and impair enzymes function. In our study, influences of high glucose, fructose and ribose concentrations on δ-ALA-D activity were evaluated in vitro. The possible mechanism, which underlies δ-ALA-D inhibition, was investigated using lysine, DTT, and t-butylamine. Reducing sugars (glucose, fructose and ribose) inhibit δ-ALA-D and inhibition order was fructose>ribose=glucose. Enzyme inhibition did not involve oxidation of its critical sulfhydryl groups because DTT and sodium borohydride did not modify enzyme inhibition. Furthermore, medium TBARS were not modified by exposition to monosaccharide. Authors diverge to mechanism inhibition of δ-ALA-D by glucose. Either glycosilation or oxidative stress are implicated in model of enzyme impairment. We concluded that δ-ALA-D inhibition caused by high concentrations of reducing sugar is mediated by enzyme glycosilation that lead to conformational changes, which can impair enzyme catalytic function. / A metaloenzima δ-aminolevulinato desidratase (δ-ALA-D) participa da rota biossintética dos compostos tetrapirrólicos como o heme. Ela é considerada um bom marcador de estresse oxidativo e de intoxicação por metais. Essa enzima sulfidrílica encontra-se inibida em várias patologias como a intoxicação por chumbo, mercúrio e alumínio, a exposição a alguns compostos orgânicos de selênio e no diabetes. O estresse oxidativo é apontado como um dos causadores das chamadas complicações crônicas ou tardias da síndrome diabética. Segundo a literatura, uma das causas centrais responsáveis pelo desenvolvimento do estresse oxidativo no diabetes é o aumento dos níveis sangüíneos de glicose. Esse monossacarídeo sofre reações não-enzimáticas, as quais provocam produção de radicais livres, modificação da estrutura de proteínas e prejuízos ao funcionamento de algumas enzimas. Neste estudo, a enzima δ-ALA-D de eritrócitos humanos foi exposta a altas concentrações de glicose, frutose e ribose in vitro para avaliar o papel desses açúcares redutores na inibição da enzima. Esses monossacarídeos inibiram a δ-ALA-D e a ordem de inibição foi frutose > ribose = glicose. A inibição não foi modificada pelo uso de compostos com grupamentos aminas tais como lisina e t-butilamina. Além disso, a inibição não foi revertida com uso de zinco e ditiotreitol (DTT) nem tão pouco ocorreu um aumento significativo dos níveis de espécies reativas de oxigênio (TBARS). De acordo com a literatura, de maneira geral existem dois mecanismos para a inibição da enzima δ-ALA-D por concentrações anormais de glicose. O primeiro baseia-se na existência de estresse oxidativo e oxidação dos grupamentos tiólicos da enzima enquanto que o segundo é devido à glicosilação dos resíduos de lisina do sitio ativo da enzima. Nós concluímos então que a inibição da δ-aminolevulinato desidratase não é mediada pela oxidação dos grupamentos tiólicos do sitio ativo da enzima, pois o emprego de zinco e DTT no meio reacional não preveniu a inibição. Além disso, no curto período de pré-incubação e incubação, não houve aumento de espécies reativas de oxigênio. O mecanismo da inibição envolve, provavelmente, glicosilação do sítio ativo da enzima, o que causa uma modificação conformacional deletéria impedindo a sua ação catalítica.

Made available in DSpace on 2016-08-17T18:39:38Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Retido.pdf: 19733 bytes, checksum: 6aad255badc436a06364517de2344ab6 (MD5) Previous issue date: 2011-08-12 / The development of the productive chain of agribusiness açaí depends on the proper disposal of by-products generated. The fruit is used currently only the mesocarp for human consumption, creating an environmental problem, since the core represents approximately 75-81% of the total weight of the fruit. The stone of açaí literature reports the presence of inulin, polyphenols and other carbohydrates. Among these inulin stands out for its low calorie and therefore applied in food production light in fat or low fat, as a substitute for fat and sugar. Despite being distributed worldwide, is not produced in Brazil and its imports makes it a product of high cost. Thus the design goal was to develop a method for extraction of inulin on a laboratory scale, aiming its industrial production. In the first stage of the project was undertaken to adapt the methodology for aqueous extraction of açai and the core of analytical methods for quantification of compounds. In the second stage of the project was carried out an experimental design to evaluate the effect of variables in the process of extracting the content of polysaccharides: temperature, particle size of the lump, mass / volume ratio and stirring speed of the mixture. In the third step, through the hydrolysis and HPLC analysis, was not found the polysaccharide inulin. By NMR analysis and infrared is proposed that this polysaccharide is a galactomannan. The content of the core polysaccharide, soluble in water, ranged 2-7%. The insoluble fraction of the core, obtained by extracting basic, representing 15% of the total mass. / O desenvolvimento da cadeia produtiva da agroindústria de açaí depende da correta destinação dos subprodutos gerados. Do fruto utiliza-se atualmente apenas o mesocarpo para consumo humano, criando um problema ambiental, uma vez que o caroço representa aproximadamente 75 a 81% do peso total do fruto. Do caroço de açaí a literatura relata a presença de inulina, polifenóis e outros carboidratos. Dentre estes a inulina destaca-se por apresentar baixo teor calórico e por esse motivo aplicado na produção de alimentos light, no fat ou low fat, como substituto da gordura e o açúcar. Apesar de ser difundida mundialmente, não é produzida no Brasil e sua importação a torna um produto de custo elevado. Dessa forma o objetivo do projeto foi desenvolver uma metodologia de extração da inulina em escala de laboratório visando à sua produção industrial. Na primeira etapa do projeto foi feita a adaptação da metodologia de extração aquosa para o caroço de açaí e de métodos analíticos para a quantificação dos compostos. Na segunda etapa do projeto foi feito um planejamento experimental para avaliar o efeito das variáveis do processo de extração no teor de polissacarídeos: temperatura, granulometria do caroço, relação massa/volume e velocidade de agitação da mistura. Na terceira etapa, através das reações de hidrólise e análise HPLC, não foi encontrado o polissacarídeo inulina. Pela análise de RMN e infravermelho propõe-se que o polissacarídeo presente seja uma galactomanana. O teor de polissacarídeos do caroço, solúveis em água, variou de 2 a 7%. A fração insolúvel do caroço, obtida por extração básica, corresponde a 15% da massa total. Palavras-chaves:.

Made available in DSpace on 2016-08-17T18:39:39Z (GMT). No. of bitstreams: 1 3826.pdf: 1893652 bytes, checksum: cca227d41858b50ad19ca341e725b6d3 (MD5) Previous issue date: 2011-08-31 / Financiadora de Estudos e Projetos / The expression system of recombinant proteins in insect cells/baculovirus (BEVS) was described and introduced in 1983 and since then has become a powerful tool for the production of recombinant proteins of biotechnological interest. This work studied the kinetics of Bac-to-BacR Baculovirus Expression System (Invitrogen ) used for the production of recombinant proteins, evaluating growth patterns and consumption of nutrients from Sf-9 insect cells infected with this commercial bacmid and determining the effect of viral inoculum. For this, Sf-9 cells grew at 29oC in T flasks containing 5 mL of SF-900 II medium or Schott bottles with working volume of 15 mL and orbital shaking at 90 rpm. UFLAG-286 cells were also tested at 29°C in TC-100 medium supplemented with 10% bovine fetal serum. The baculovirus used were the Autographa californica nuclear polyhedrosis virus (AcMNPV) as a wild baculovirus infection model, the bacmid extracted from DH10Bac bacteria and transposed with the transfer vector empty (pFastBac 1), called Bac sprec and the bacmid recombinant AcNPV with the GUS coding sequence of the gene β- glucuronidase, used as a standard for transposition experiments and transfection. Cells were infected at different times (TOI), on the initial phase, the exponential phase or stationary phase of cell growth, and with different multiplicities of infection (MOI) (0.01, 0.1, 1 and 10). It was observed that the MOI does not influence the viral replication, because even with the low MOI the cell growth was completely inhibited. TOI had already affected the production of total cell proteins, and infection in the early exponential phase was that obtained the highest number of total proteins. The supplementation of the cultivation with Bac sprec with serine and glutamine did not lead to increased viral production. The supernatant of cultures infected with Bac sprec was able to inhibit cell death where there was induction of apoptosis by terbutyl, indicating contain some protein with anti-apoptotic activity. This effect was not observed on wild baculovirus. / O sistema de expressao de proteinas recombinantes em celulas de inseto/baculovirus (BEVS) foi descrito e introduzido em 1983, e desde entao tornou-se uma ferramenta poderosa para a producao de proteinas recombinantes de interesse biotecnologico. O objetivo deste trabalho foi estudar os parametros cineticos do sistema Bac-to-BacR Baculovirus Expression (Invitrogen ) utilizado para a producao de proteinas recombinantes, avaliando os padroes de crescimento e consumo de nutrientes de celulas de inseto Sf-9 infectadas com este bacmideo comercial e determinando o efeito do inoculo viral. Para isso celulas Sf-9 foram cultivadas a 29oC em frascos T contendo 5 mL de meio SF-900 II, ou em frascos Schott com volume de trabalho de 15 mL e agitacao orbital a 90 rpm. Celulas UFLAG-286 tambem foram testadas a 29oC em meio TC-100 suplementado com 10% de soro fetal bovino. Os baculovirus utilizados foram o Autographa californica nuclear polyhedrosis virus (AcMNPV), como modelo de infeccao de baculovirus selvagem, o bacmideo extraido da bacteria DH10BacTM e transposto com o vetor de transferencia vazio (pFastBac 1), chamado de Bac sprec e o bacmideo recombinante AcMNPV-GUS com a sequencia codificante do gene β glucuronidase, utilizado como um padrao para experimentos de transposicao e transfeccao. As celulas foram infectadas em diferentes momentos (TOI), seja na fase inicial, na fase exponencial ou fase estacionaria do crescimento celular e com diferentes multiplicidades de infeccao (MOI) (0,01; 0,1; 1 e 10). Observou-se que o MOI nao influencia a replicacao viral, pois mesmo com baixo MOI o crescimento celular foi inibido. Ja o TOI teve influencia na producao de proteinas totais da celula, sendo que a infeccao no inicio da fase exponencial foi que obteve maior numero de proteinas totais. A suplementacao do cultivo de Bac sprec com serina e glutamina nao levou a uma maior producao viral. O sobrenadante de cultivos infectados com o Bac sprec foi capaz de inibir a morte celular onde houve inducao de apoptose por terbutil, indicando conter alguma proteina com atividade antiapoptotica. Este efeito nao foi observado com o baculovirus selvagem.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:23:46Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2007-02-23Bitstream added on 2014-06-13T18:51:20Z : No. of bitstreams: 1 rosato_pn_me_jabo.pdf: 278204 bytes, checksum: 7e31f2ef6f6e0d1fcc37105f0b827ad6 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Os exames laboratoriais são reconhecidos como importantes meios de auxilio diagnóstico na prática médico-veterinária, especialmente no esclarecimento de diversas enfermidades que acometem animais de companhia, particularmente cães. Dentre tais exames, destacam-se os bioquímico-séricos, não só pela sua utilidade clínica, como também pela praticidade de realização e por estarem incorporados à rotina dos laboratórios de análises cHnicas veterinárias. Diante da importãncia e da grande demanda por provas bioquímico-séricas, na rotina da clínica de pequenos animais, além da falta de estudos em relação à viabilidade dos constituintes séricos, quando se faz imperiosa a necessidade de estoque do soro sangüíneo sob diferentes condições, planejou-se o presente projeto de pesquisa com o escopo de se verificar a estabilidade de alguns metabolitos séricos frente a diferentes temperaturas e períodos de estoque. Para tanto, foram analisadas amostras de soro sanguíneo de 10 cães sadios, as quais foram submetidas à análise de sódio, potássio, cálcio total, fósforo, colesterol, triglicérides, proteína total, albumina, creatinina, uréia e a atividade das enzimas aspartato aminotransferase, alanino aminotransferase, fosfatase alcalina, gamaglutamiltransferase e creatina quinase, estocadas em diferentes temperaturas (25°C, 4°C, -4°C, -20°C e -70°C) e analisadas em diferentes períodos (logo após a colheita, 12 horas, 24 horas, 36 horas, 7 dias, 15 dias, 30dias, 60 dias e 90 dias após a colheita). Dentre os resultados obtidos, foi possível observar, principalmente, que a temperatura de congelamento de -20°C propiciou uma maior estabilidade dos parãmetros estudados sendo quinze destes, estáveis durante todo o protocolo experimental. / The laboratory tests are known as important diagnostic tools in veterinary medicine, regardering the diagnosis of many diseases, specially in dogs. Among ali these tests, the biochemical ones can be brought out, not only for their clinical importance, but also for their easy performance and because they are inserted as ordinary tests in the veterinary laboratories. Due to the lack of information as for the viability of blood components in dogs, and the need of blood storage under different conditions, the aim of this study was to check out the stability of some blood components under different temperatures and storage periods. Therefore, the blood samples of 10 healthy dogs were evaluated regardering sodium, potassium, calcium, phosphorus, colesterol, tryglicerides, total protein, albumine, creatinine, urea and enzyme activities of asparatate aminotransferase, alanine aminotransferase, alkaline phosphatase, gama glutamyl transferase and creatine quinasa stored under different temperature (25°C, 4°C, -4°C, -20°C e -70°C) and assessed in different intervals (just after collection, 12 hours, 24 hours, 36 hours, 7 days, 15 days, 30 days, 60 days and 90 days after collection). Among ali the results, it was inferred that the freezing temperature (-20°C) provided the best stability of the evaluated parameters, and 15 out of them showed to be stable during the whole protocol.