Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biotecnologia, Florianópolis, 2010 / Made available in DSpace on 2012-10-25T12:52:49Z (GMT). No. of bitstreams: 1 276701.pdf: 456277 bytes, checksum: f1e57a4cfe2ff60dac2a7cb840b882a2 (MD5) / A demanda de etanol tem crescido ultimamente devido ao esgotamento das reservas mundiais de petróleo e à necessidade de utilização de combustíveis menos agressivos ao meio ambiente. Após o sucesso do etanol, recentemente o bioetanol vem ganhando destaque, em virtude da busca por uma maior produção deste combustível por hectare, através do aproveitamento da biomassa lignocelulósica, sendo que no caso do Brasil o bagaço da cana-de-açúcar constitui uma interessante matéria prima para este fim. Para vencer este desafio, no entanto é preciso disponibilizar os açúcares da biomassa para que possam ser fermentados. Neste sentido o presente trabalho utilizou esta biomassa lignocelulósica que foi submetida a um pré-tratamento por cozimento a vapor, este material foi então submetido à hidrolise enzimática por um consórcio de enzimas produzidas pelos fungos Trichoderma reesei RUT C30 e Aspergillus awamori. Embora os hidrolisados obtidos tenham alcançado razoáveis concentrações de açúcares fermentescíveis (~18 g L-1), o mesmo possibilitou boa produção de etanol pelas diferentes linhagens de leveduras fermentadoras de pentose e hexose aqui avaliadas. Entre as linhagens industriais de Saccharomyces cerevisiae estudadas a que obteve melhor desempenho foi a linhagem PE-2 com produções máximas de 10g L-1 de etanol em ensaios fermentativos em batelada com reciclos de célula. Entretanto, a análise da vitalidade das células apontou para uma perda na capacidade fermentativa desta cepa, principalmente nas fermentações em batelada com reciclos, levando a hipótese, corroborada pelas fermentações em meio definido contendo glicose e xilose, de que algo presente no hidrolisado foi responsável por essa queda na capacidade fermentativa desta levedura. Entre as cepas com habilidade de fermentar pentose (xilose) Candida shehatae (linhagem HM 52.2) e Spathaspora arborariae (linhagem HM 19.1a) obtiveram os melhores resultados em produção de etanol e consumo de xilose, com produções máximas de até 11g L-1 de etanol. Além das fermentações em batelada do hidrolisado, foi realizado também uma sacarificação e fermentação simultânea com a cepa PE-2, onde a produção de etanol (9 g L-1 ) só não foi maior devido à baixa concentração inicial de glicose no meio, aliado à baixa atividade enzimática das celulases utilizadas. / The demand for ethanol has increased lately due to the depletion of world oil reserves and the need to use fuels that are less harmful to the environment. After the success of ethanol, bioethanol has been recently gaining attention, due to the need for greater ethanol production per hectare through the use of lignocellulosic biomass. In the case of Brazil, bagasse from sugar cane is an interesting raw material for this purpose. However, it is necessary that the sugars from the biomass should be made available, so that they can be fermented. For these means, the present study used this lignocellulosic biomass subjected to a pre-treatment by steam cooking, this material was then submitted to enzymatic hydrolysis by a consortium of enzymes produced by the fungi T. reesei RUT C30 and A. awamori. Although the hydrolysates did not reach high concentrations of fermentable sugars (~18g L-1), it allowed good ethanol production by different strains of yeast fermenting pentose and hexose studied here. Among the industrial strains of S. cerevisiae studied, the one that achieved the best performance was strain PE-2, with maximal production of ethanol of 10 g L-1 in batch fermentations with cell recycle. However, vitality assays showed a drop in the fermentation capacity of this strain, specially during batch fermentations with cell recycle, leading to the hypothesis, supported by fermentations in defined medium containing glucose and xylose, that something present in the hydrolyzate was responsible for this decrease in the fermentation capacity of this yeast. Among the strains with the ability to ferment pentose (xylose), C. shehatae (strain HM 52.2) and S. arborariae (strain HM 19.1a) were the ones that obtained the best results for ethanol production and xylose consumption, with maximal production of up to 11 g L-1 of ethanol. Besides the batch fermentations of the hydrolyzates, a simultaneous saccharification and fermentation with strain PE-2 was also performed, where the production of ethanol (9 g L-1) was not higher due to a low initial glucose concentration in the medium, with a low enzymatic activity of the cellulases employed.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Programa de Pós-Graduação em Biotecnologia, Florianópolis, 2010 / Made available in DSpace on 2012-10-25T14:08:13Z (GMT). No. of bitstreams: 1 281335.pdf: 2427402 bytes, checksum: fcd04bec714a61e4eedf82f41ef096c9 (MD5) / Candida glabrata é considerado um importante patógeno fúngico emergente devido principalmente ao incremento de pacientes imunossuprimidos, e ao uso indiscriminado de compostos azólicos, resultando em altas taxas de mortalidade pela resistência inata desta levedura aos antifúngicos normalmente utilizados. Estratégias que objetivam a pronta identificação deste patógeno são extremamente importantes já que permitem a pronta implementação de um tratamento medicamentoso apropriado. A utilização de trealose por C. glabrata é apontada como importante metodologia diagnóstica na pratica laboratorial, já que é característica marcante desta levedura a utilização de apenas glicose e trealose como fontes de carbono. Resultados prévios indicavam que esta levedura cresce em trealose graças à secreção no meio de cultura de uma trealase ácida que prontamente hidrolisa o dissacarídeo, permitindo a rápida fermentação da glicose liberada. No genoma de C. glabrata encontramos a ORF CAGL0K05137g, similar ao gene (ATH1) que codifica para a trealase ácida de S. cerevisiae. No intuito de verificar a identidade do gene postulado no genoma de C. glabrata como sendo da trealase ácida, utilizamos tanto estratégias de deleção da ORF do genoma, como subclonagem e expressão heteróloga dessa sequência gênica em S. cerevisiae. A deleção em C. glabrata confirmou a identidade do gene, não só pela ausência de crescimento em meios de cultura contendo trealose como fonte de carbono, como também pela perda da atividade trealase ácida periplasmática e/ou secretada pelas células. Além disso, nossos resultados indicam o envolvimento deste gene na manutenção da homeostase celular durante o estresse salino. A seqüência de DNA correspondente foi também subclonada de forma a sobrexpressar este gene em S. cerevisiae, confirmando o gene CgATH1 como sendo o responsável pela síntese de uma trealase ácida. A ORF clonada foi seqüenciada e comparada à ORF CAGL0K05137g, mostrando uma identidade de 98% entre as sequências. Acreditamos que a caracterização molecular da trealase ácida em C. glabrata permitirá melhorias no diagnóstico laboratorial, bem como uma melhor compreensão do papel desta enzima, e do metabolismo de trealose, na fisiopatologia deste importante patógeno oportunista e de outros fungos de interesse médico. / Candida glabrata is considered an important and emergent fungal pathogen due mainly to an increase in immunosuppressive patients, and to the indiscriminate use of azolic compounds, resulting in high mortality rates by the innate resistance of this yeast towards the normally used antifungals. Strategies that objectify the fast identification of this pathogen are extremely important, because they will allow the immediate implementation of an appropriate medical treatment. The utilization of trehalose by C. glabrata is pointed out as an important diagnostic methodology in the laboratorial practice, since it is a striking feature of the yeast to use only glucose and trehalose as carbon sources. Previous results indicate that this yeast grows in trehalose thanks to the secretion of an acid trehalase in the culture media that promptly hydrolyses the disaccharide, allowing the fast fermentation of the released glucose. In the genome of C. glabrata we found the ORF CAGL0K05137g, similar to the gene (ATH1) encoding for the acid trehalase of S. cerevisiae. In order to verifying the identity of the postulated gene in the genome of C. glabrata as an acid trehalase, we thus utilized strategies for the deletion of the ORF from the genome, as well as cloning and heterologous expression of this genetic sequence in S. cerevisiae. The deletion in C. glabrata confirmed the identity of the gene, not only because of absence of growth in culture media containing trehalose as a carbon source, but also to the loss of periplasmic and/or secreted acid trehalase activity by the cells. Besides, our results indicate the involvement of this gene in the maintenance of cellular homeostasis during a saline stress. The corresponding DNA sequence was also subcloned so that the gene could be overexpressed in S. cerevisiae, confirming the CgATH1 gene as being responsible for the synthesis of an acid trehalase. The cloned ORF was sequenced and compared to the ORF CAGL0K05137g, showing 98% identity between the sequences. We believe that the molecular characterization of the acid trehalase in C. glabrata will allow improvements in the laboratorial diagnostic, as well as a better understanding of this enzyme#s role, and of trehalose metabolism, in the physiopathology of this important opportunistic pathogen and of other fungi of medical interest.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Programa de Pós-Graduação em Biotecnologia, Florianópolis, 2011 / Made available in DSpace on 2012-10-25T21:58:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 287559.pdf: 517631 bytes, checksum: ec350fa2e545cb38f933d0b6feb4f38b (MD5) / O presente trabalho propôs desenvolver uma metodologia in vitro simples, sensível e reprodutível para a prospecção de compostos obtidos de produtos naturais ou seus derivados sintéticos com potencial atividade imunomodulatória sobre linfócitos B, principal célula efetora da resposta imune humoral, como alternativa ao uso de sistemas experimentais in vivo. O planejamento do estudo fundamentou-se na utilização da linhagem linfoblastóide B humana SKW 6.4, imortalizada via EBV, como modelo preditivo in vitro; na padronização do método ELISA para a titulação de imunoglobulinas totais secretadas em cultura, empregada como parâmetro inicial de avaliação; e na definição de condições experimentais e padrões comparativos que propiciem a análise do modelo selecionado quanto à modulação de suas funções imunes. O protocolo de cultivo celular e demais variáveis foram determinados para placas de cultura de 96 micropoços. Células SKW 6.4 foram fortemente imunoestimuladas em tratamento com PMA ou LPS nas concentrações ótimas de 100ng·mL-1 ou 100µg·mL-1, respectivamente. Condições referenciais de imunossupressão foram estabelecidas após ensaio com 25µg·mL-1 de AZA, 50ng·mL-1 de MPA ou 10ng·mL-1 de RAPA. A secreção de IL-6 pelo modelo in vitro foi claramente modulada na presença de LPS e DEX, possibilitando sua dosagem como parâmetro avaliativo adicional de resposta imunológica. A análise de diferentes extratos polissacarídicos de Agaricus subrufescens conforme o ensaio padronizado revelou significativa atividade imunoestimulatória sobre células SKW 6.4 para frações com maior peso molecular médio (~630kDa), permitindo especular sobre possíveis rotas de ativação e sugerir um método ótimo de purificação para futura aplicação biotecnológica. Os resultados globais alcançados neste estudo demonstraram a sensibilidade e eficácia do ensaio in vitro desenvolvido, viabilizando sua utilização na pesquisa e triagem de compostos com potencial atividade imunomodulatória sobre linfócitos B como possível método substitutivo ao uso de animais de experimentação.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas. Programa de Pós-graduação em Biotecnologia / Made available in DSpace on 2012-10-23T14:16:58Z (GMT). No. of bitstreams: 0Bitstream added on 2013-07-16T20:11:09Z : No. of bitstreams: 1 243683.pdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / O lupus eritematoso sistêmico (LES) é o protótipo das doenças autoimunes, caracterizada pela produção de anticorpos contra componentes do núcleo celular em associação com diversas manifestações clínicas. As complicações patológicas primárias em pacientes com LES são a inflamação, vasculite, depósito de imunocomplexos e outras manifestações que contribuem para um quadro patológico sistêmico, grave e crônico. A doença ocorre principalmente em mulheres (proporção de 9:1) em idade reprodutiva. A etiologia exata do LES ainda permanece desconhecida e provavelmente envolve interações complexas e multifatoriais entre diversos fatores genéticos e ambientais. A interação entre muitos genes pode atenuar ou acentuar a susceptibilidade à doença. Foram descritas associações do LES com genes do complexo principal de histocompatibilidade (MHC), genes que codificam receptores Fc e genes que codificam citocinas. Foram descritas também associações positivas com o alelo 4887A (CYP1A1*4), envolvido na metabolização de hormônios e xenobióticos e com o alelo +7146A (PD1.3), receptor que regula negativamente células auto-reativas. Este trabalho teve como objetivo investigar a associação entre o LES e polimorfismos nos genes CYP1A1, GSTM1, GSTT1, IL18 e PDCD1 em um estudo caso-controle com 98 pacientes e 108 indivíduos controles, na população do estado de Santa Catarina. Também foram analisados os diferentes alelos em relação ao desenvolvimento de nefrite, grave manifestação clínica do LES. Foram utilizadas técnicas de PCR-RFLP e PCR-SSP, seguidas de eletroforese em gel de agarose para determinar os genótipos individuais. Os resultados obtidos não demonstraram nenhuma associação entre o LES e as variantes alélicas de IL18 -137C, 4889G (CYP1A1*2C), 6235C (CYP1A1*2A), GSTM1 e GSTT1. O alelo +7146A (PD1.3) embora não tenha apresentado significativamente uma associação positiva, provavelmente, devido à baixa freqüência desse alelo e ao reduzido tamanho da amostra, mostra uma tendência à associação. Foi encontrada uma associação negativa (de proteção) entre a variante 4887A (CYP1A1*4) e o LES (OR = 0,355 IC 95% 0,161 - 0,774, p= 0,008). A interação entre os SNPs IL18 -607A e 4887A (CYP1A1*4) demonstrou uma associação de proteção em relação ao LES (OR= 0,318 IC 95% 0,133 - 0,758; p= 0,010). Foi encontrada uma associação positiva entre o alelo 4889 (CYP1A1*2C) e a ocorrência de nefrite (OR= 3,645 IC 95% 1,39 - 9,58; p=0,009). A freqüência alélica de 6235C (CYP1A1*2A) encontrada em pacientes com nefrite foi maior do que a encontrada em pacientes sem nefrite (OR= 2,270 IC95% 1,96 - 6,278; p= 0,015). Esses dados mostram um papel importante do gene CYP1A1, na susceptibilidade e prognóstico do LES.

Resumo: YacG é uma pequena proteína (65 resíduos de aminoácidos) ligada ao zinco codificada pelo gene yacG de Escherichia coli. Seu papel fisiológico não está bem caracterizado, porém acredita-se que ela exerça ação inibitória sobre a atividade catalítica da DNA girase, enzima responsável por alterações no estado topológico do DNA bacteriano. Com base nas informações da estrutura primária desta proteína, uma série constituída de oito seqüências peptídicas foram projetadas e sintetizadas pela metodologia da fase sólida, objetivando-se avaliar e melhor entender o efeito da coordenação do íon zinco no seu mecanismo de ação. As sequências foram projetadas de maneira a resultar em uma substituição parcial ou integral dos resíduos de cisteína da sequência nativa da YacG, por resíduos de serina, além da variação da carga efetiva da molécula, por amidação ou acetilação das extremidades C e N terminais, respectivamente. Os peptídeos obtidos e purificados foram ensaiados quanto à estequiometria de coordenação empregando titulação com íon cobalto, bem como na capacidade inibitória frente à DNA girase, empregando eletroforese em gel de agarose. YacGAG4, inibiu a atividade de superenovelamento do DNA, catalisada pela girase, somente na ausência de íons zinco em concentrações inferiores a 120 μmol.L-1. Os demais peptídeos não apresentaram capacidade inibitória, tanto na presença quanto na ausência de zinco. Ensaios de susceptibilidade bacteriana, empregando algumas espécies de bactérias da família Enterobacteriaceae, confirmaram os resultados in vitro,com exceção das sequências YacGAG1-AC e YacGAG2-AC que mostraram inibição no crescimento bacteriano, sem porém resultarem em atividade in vitro. Com base nos resultados obtidos, é possível concluir que o domínio estrutural relacionado à coordenação do zinco, bem como a presença... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: YacG is a small protein (65 amino acid residues) bounded to zinc and encoded by the Escherichia coli yacG gene. Its physiological role is not well characterized, but it is believed that YacG is an inhibitor of the catalytic activity of DNA gyrase, an enzyme responsible for changes in the topological state of bacterial DNA. Based on information from the primary structure of this protein, a series of eight peptide sequences were designed and synthesized by solid phase methodology, aiming to evaluate and better understand the effect of zinc coordination of in their mechanism of action. The sequences were designed so as to result in a partial or full replacement of the cysteine residues of the native YacG sequence by serine residues and to change the effective charge of the molecule by amidation or acetylation of C and N terminal ends, respectively. The obtained peptides were purified and tested by titration with cobalt ion (coordination stoichiometry), as well as by inhibitory effect against the DNA gyrase, using agarose gel electrophoresis. YacGAG4 inhibited DNA supercoiling activity catalyzed by gyrase only in the zinc ions absence at concentrations below of 120 μmol.L-1. The other peptides showed no inhibitory effect in both the presence and absence of zinc. Bacterial susceptibility tests, using some species of bacteria of the Enterobacteriaceae, confirmed in vitro results, with the exception of the sequences YacGAG1-AC and YacGAG2-AC that showed inhibition of bacterial growth, but no in vitro activity. Based on these results, we conclude that the structural matters related to the coordination of zinc as well as the presence of this ion, showed no significant importance in the activity of DNA gyrase inhibition. In this case, the inhibition of activity recently proposed, should be linked to any other region of the protein molecule, structurally organized when the zinc ion is bound... (Complete abstract click electronic access below) / Orientador: Reinaldo Marchetto / Coorientador: Saulo Santesso Garrido / Banca: Clarice Queico Fujimura Leite / Banca: Vani Xavier de Oliveira Junior / Mestre

Os cestódeos são agentes etiológicos de doenças parasíticas em humanos e em animais domesticados. Estamos utilizando Mesocestoides corti como um sistema modelo para estudar a biologia do desenvolvimento dos cestódeos, particularmente a transição da fase larval para a fase adulta segmentada. Com o propósito de isolar seqüências diferencialmente expressas durante o processo de segmentação, aplicamos a metodologia de análise das diferenças de representações de cDNA (cDNA RDA) utilizando RNA total extraído de larvas e vermes segmentados em cultivos in vitro de M. corti. Duas bibliotecas de cDNA subtraídas, enriquecidas com seqüências diferencialmente expressas das formas larvais ou segmentadas, foram construídas usando uma razão de driver:tester de 100:1 e 800:1 no 1º e 2º ciclos de subtração, respectivamente. A eficiência de subtração foi avaliada com experimentos de hibridização, utilizando as seqüências subtraídas como sondas contra os produtos de cDNA amplificados por PCR, com análise de macroarranjos e com confirmação individual, em experimentos de Northern virtual, de clones selecionados. Uma estratégia de RT-PCR em tempo real para confirmação dos resultados está sendo otimizada e resultados preliminares são apresentados. Após o seqüenciamento de 1036 clones de cDNA independentes e adoção de uma estratégia de seqüenciamento de alta qualidade, foram identificadas 190 seqüências, preferencialmente expressas em tetratirídeos (49) ou em vermes segmentados (141). Entre os genes identificados, 71 foram funcionalmente anotados, incluindo seqüências relacionadas a reguladores de estrutura de cromatina e controle de transcrição, cujos ortólogos estão implicados em processos de desenvolvimento em Drosophila e em vertebrados.

A indústria coureira tem se deparado com novos desafios e a necessidade de melhorar e otimizar processos, a fim de atingir a qualidade exigida em seus artigos finais bem como atender a legislação ambiental. A utilização de enzimas na produção de couros é uma alternativa para a redução do impacto ambiental desta atividade. As enzimas comerciais existentes, ainda não possuem especificidade suficiente, tampouco suas características são conhecidas em detalhes. Além disso, sua atividade é determinada utilizando caseína como substrato, sendo que as peles bovinas não possuem esta proteína. Desta forma, é importante que características tais como atividade sobre colágeno e queratina sejam conhecidas, bem como que sejam buscadas novas enzimas para aplicação na indústria do couro e avaliada detalhadamente sua ação nos processos de ribeira. Neste trabalho, foram caracterizadas cinco enzimas comerciais, normalmente, aplicadas às etapas de remolho, caleiro e purga. Para tanto, foram testadas diferentes temperaturas, valores de pH, a estabilidade térmica das mesmas, bem como a ação de inibidores e produtos químicos comumente utilizados em conjunto com as enzimas. A temperatura ótima de ação das enzimas ficou em torno de 55°C, em valores de pH que variaram de 9 a 12, as enzimas se mostraram estáveis a 37°C e perderam totalmente sua atividade quando expostas durante 120 min. a 55°C. Com base nestes dados, foram isoladas e selecionadas, a partir de lodo da estação de tratamento de efluentes de um curtume, 10 bactérias produtoras de enzimas com possibilidade de aplicação na produção mais limpa de couros, isto é, como substituintes de produtos químicos no processo. Dentre estas 10, duas bactérias com morfologias distintas foram escolhidas para estudos mais detalhados, porém, as duas colônias foram identificadas como Bacillus subtilis e serão chamadas neste trabalho de BLBc 11 e BLBc 17. O meio de cultivo, o pH e a temperatura foram otimizados através do planejamento experimental. Para a seleção das variáveis significativas para a produção de proteases, uma variedade de fontes de carbono (glicose, maltose, glicerol), fontes de nitrogênio (extrato de levedura, peptona, farelo de soja), sais inorgânicos (sulfato de magnésio, cloreto de cálcio, sulfato de ferro heptahidratado) foram testados e identificados através do planejamento experimental Plackett-Burmann. Para a bactéria BLBc 11, os fatores que apresentaram efeito significativo para o meio de cultivo foram extrato de levedura, peptona e farelo de soja, os quais foram otimizados através de um planejamento composto central rotacional (CCR). O pH e a temperatura foram otimizados através da utilização de um planejamento fatorial, ambos apresentaram efeito significativo sobre a produção de proteases. Para a bactéria BLBc 17 o pH e a temperatura foram otimizados através de um planejamento CCR. Após estas etapas, as enzimas produzidas pelas bactérias BLBc 11 e 17 foram caracterizadas e aplicadas na etapa de depilação de peles bovinas. A ação enzimática foi avaliada com base na quantificação de proteínas interfibrilares e hidroxiprolina liberados para o banho residual, além da avaliação das amostras obtidas em microscópio óptico e de varredura. Análises comparativas (DQO, BDO e nitrogênio total) entre o processo convencional e o processo usando enzimas foram realizadas e demonstraram que o processo proposto neste trabalho tem grandes perspectivas de sucesso. / Leather industry has been facing with new challenges and the need to improve and optimize processes in order to achieve required quality in their final articles as well as meet the environmental legislation. The enzymatic treatment of leather is a promising technology. However, the reaction kinetics of commercial enzymes available to the leather industry are not fully understood and their activities have been mainly determined over model proteins such as casein as substrate, which is absent in cattle hides. Therefore, it is important to determine their activities on collagen and keratin, the main proteins of skin; and also the screening and isolation of new enzymes in order to use these enzymes in leather processing. In this work, were tested five commercial proteases, normally applied during soaking, liming and bating operations. Thus, were tested different temperatures, pH values, the thermal stability of the enzymes and the action of inhibitors and chemicals commonly used together with them. Kinetics of temperature and pH of enzymes were very similar for all five enzymes, with maximal activities around 55°C and 9 to 12, respectively. The enzymes were stable at 37 °C and lost completely its activity when exposed for 120 min. at 55 °C. Based on these data, were isolated and selected from a tannery treatment effluent, 10 bacteria producing enzymes with potential application in cleaner leather production. Among these 10, two bacteria with different morphologies were chosen for detailed study; however, the two colonies were identified as Bacillus subtilis and will be called in this work BLBc 11 and BLBc 17. The culture medium, pH and temperature of cultivation were optimized through experimental design. For the selection of significant variables for protease production, a variety of carbon sources (glucose, maltose, glycerol), nitrogen sources (yeast extract, peptone, soybean meal), inorganic salts (magnesium sulfate, calcium chloride, heptahydrate ferrous sulfate) were tested and identified via Plackett-Burmann design experiments. For bacterium BLBc 11, the factors that presented significant effect for protease culture medium were yeast extract, peptone and soybean meal, these were optimized using a central composite design (CCD). The pH and the temperature were optimized using factorial design, both presented significant effect. For bacterium BLBc 17 pH and temperature were optimized using a CCD. After these steps, the enzymes produced by bacteria BLBc 11 and 17 were characterized and applied in cattle hide unhairing. This step was evaluated measuring inter-fibrillary proteins and hydroxyproline released into the bath, and also using optical and scanning electronic microscopy. Comparative analysis (COD, BOD and total nitrogen) between conventional and enzymatic process were made and show that the proposed process have excellent prospects of success.

Submitted by Programa de Pós-graduação em Biotecnologia (mebiotec.ufba@gmail.com) on 2017-03-28T13:03:11Z No. of bitstreams: 1 DISSERTAÇÃO FINAL CABANELAS, ITD.pdf: 4803170 bytes, checksum: 7ce3e85d909a7c425ee026d9f925290d (MD5) / Approved for entry into archive by Uillis de Assis Santos (uillis.assis@ufba.br) on 2017-03-28T13:16:55Z (GMT) No. of bitstreams: 1 DISSERTAÇÃO FINAL CABANELAS, ITD.pdf: 4803170 bytes, checksum: 7ce3e85d909a7c425ee026d9f925290d (MD5) / Made available in DSpace on 2017-03-28T13:16:55Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DISSERTAÇÃO FINAL CABANELAS, ITD.pdf: 4803170 bytes, checksum: 7ce3e85d909a7c425ee026d9f925290d (MD5) / CNPQ / No atual cenário energético mundial é notória a insustentabilidade do uso continuado de combustíveis fósseis, devido à projetada diminuição do suprimento de petróleo, e à contribuição destes combustíveis para o acúmulo de dióxido de carbono na atmosfera. Como, da demanda bruta por energia, no mínimo 60% é absorvida pelo setor de transportes, torna-se lógico propor a substituição dos combustíveis fósseis pelos biocombustíveis como alternativa para redução de emissões poluidoras. As microalgas são uma possibilidade versátil uma vez que podem dar origem a, além de biodiesel (óleo), etanol (fermentação de amido), bioquerosene (hidrocarbonetos líquidos), bioplásticos (biopolímeros), biohidrogênio, biogás (metano) e outros derivados químicos. O uso de resíduos domésticos vem se destacando como opções economicamente viável e efetivamente eco-compatível para o cultivo de microalgas. A presente proposta teve o objetivo de avaliar o potencial de efluentes domésticos urbanos como fonte alternativa de nutrientes para o cultivo de microalgas. O desenvolvimento do presente trabalho foi dividido em dois artigos científicos elaborados com os dados experimentais. Os artigos mostram (i) o efeito de diferentes águas residuárias sobre a microalga Chlorella vulgaris e (ii) os efeito da adição de diferentes concentrações de glicerina sobre o metabolismo das espécies Chlorella vulgaris e Botryococcus terribilis cultivadas em água residuária. A microalga Chorella vulgaris apresentou crescimento satisfatório em diferentes efluentes domésticos tratados, alcançando produtividades entre 50 e 150 mg L-1 d-1. Em todas as amostras foi observada a remoção de nutrientes. A suplementação de CO2 é uma importante variável para a produção de biomassa e eficiente remoção de nutrientes. Chlorella vulgaris foi capaz de fixar como biomassa entre 56 e 242 mg por litro por dia de CO2. Modificações artificiais da razão N/P não aumentou a produção de biomassa nem a taxa de remoção de nutrientes, para os cultivos com efluente da secagem dos lodos. Para os experimentos com adição de glicerina não foi possível estabelecer correlação linear entre as concentrações de glicerina e a produção de biomassa. Contudo, foi observado aumento significativo de biomassa com 25 e 50 mM de glicerina. Tais resultados indicam a possibilidade de aplicar a glicerina como fonte de carbono orgânico para a produção de biomassa microalgal. Também foi possível observar altos valores de remoção de nutrientes, acima de 70% para DQO, nitrogênio e fósforo. Contudo, as produtividades lipídicas, embora não correlacionadas com a disponibilidade de glicerina foram reduzidas com a disponibilidade deste nutriente. Tais resultados apontam a glicerina como indicada para produção de biomassa de microalgas, porém não visando altas produtividades lipídicas.

Submitted by Programa de Pós-graduação em Biotecnologia (mebiotec.ufba@gmail.com) on 2017-04-04T13:24:02Z No. of bitstreams: 1 Dissertação Final- WILIAN OLIVEIRA.pdf: 1510952 bytes, checksum: 9058b21042c585177d09b07cc902395e (MD5) / Approved for entry into archive by Delba Rosa (delba@ufba.br) on 2017-07-06T12:57:28Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissertação Final- WILIAN OLIVEIRA.pdf: 1510952 bytes, checksum: 9058b21042c585177d09b07cc902395e (MD5) / Made available in DSpace on 2017-07-06T12:57:28Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertação Final- WILIAN OLIVEIRA.pdf: 1510952 bytes, checksum: 9058b21042c585177d09b07cc902395e (MD5) / CAPES / Lectinas são proteínas que se ligam especificamente a resíduos de açúcar e estão envolvidas no processo de reconhecimento celular e sinalização em diversas vias metabólicas. O objetivo deste estudo foi isolar, purificar e investigar a atividade biológica das lectinas de Crotalaria spectabilis R. quanto a sua capacidade de hemaglutinação e aglutinação das linhagens bacterianas: Leptospira biflexa e L. interrogans. Para extração das proteínas, as sementes foram moídas e suas células lisadas em solução NaCl 0,15 M. Após essa etapa, as proteínas foram precipitadas com acetona e sulfato de amônio, dialisadas, liofilizadas e purificadas por cromatografia de filtração e troca iônica. A quantificação proteica foi realizada pelo método de Bradford e o perfil eletroforético obtido por SDS-PAGE. Para testar a atividade biológica das lectinas foram utilizados ensaios de hemaglutinação bem como de aglutinação das linhagens bacterianas. Em nossos resultados, o método de precipitação proteica por acetona resultou em maior extração quando comparado ao método por sulfato de amônio. A lectina de C. spectabilis R. apresentou um peso molecular de 30 kDa e os ensaios de hemaglutinação foram positivos para a proteína. Assim, concluimos que nas sementes de C. spectabilis R. existem lectinas com capacidade de reconhecer receptores presentes na membrana de eritrócitos humanos e promover aglutinação celular. Por fim, as lectinas da planta C. spectabilis R. também foram capazes de aglutinar L. interrogans e L. biflexa, sendo esta reposta mais acentuada na linhagem patogênica. / Lectins are proteins that bind carbohydrate residues with affinity and are involved in the process of cell recognition and signaling in different metabolic pathways. The aim of this study was to isolate, purify and investigate the biological activity of the Crotalaria spectabilis R. lectins in terms of hemagglutination and agglutination capacity of the bacterial strains: Leptospira biflexa and L. interrogans. For protein extraction, the seeds were milled and their cells lysed in 0,15 M NaCl solution. After this step, the proteins were precipitated with acetone and ammonium sulfate, dialyzed, lyophilized and purified by filtration chromatography and ion exchange, respectively. Protein quantification was performed by the Bradford method and the electrophoretic profile by SDS-PAGE. For testing the biological activities of lectins, hemagglutination assays were used as well agglutination of the bacterial strains. In our results, protein precipitation method by acetone resulted in higher yield when compared to ammonium sulfate. The C. spectabilis R. lectin presented a molecular weight of 30 kDa and the hemagglutination assays were positives for the protein. Thus, we conclude that in the C. spectabilis R. seeds there are lectins with capacity to recognize receptors present in the human erythrocytes membrane and to promote cell agglutination. At last, the seed lectin C. spectabilis R. was also able to agglutinate L. interrogans and L. biflexa, this response being stronger in the pathogenic strain.

Submitted by Renorbio (renorbioba@ufba.br) on 2017-08-15T16:15:18Z No. of bitstreams: 1 tese Dellane Martins Tigre 75folhas 2017.pdf: 1616856 bytes, checksum: a34a008544e31d63c94fa0cf795cc2ff (MD5) / Approved for entry into archive by Delba Rosa (delba@ufba.br) on 2017-08-28T13:03:56Z (GMT) No. of bitstreams: 1 tese Dellane Martins Tigre 75folhas 2017.pdf: 1616856 bytes, checksum: a34a008544e31d63c94fa0cf795cc2ff (MD5) / Made available in DSpace on 2017-08-28T13:03:56Z (GMT). No. of bitstreams: 1 tese Dellane Martins Tigre 75folhas 2017.pdf: 1616856 bytes, checksum: a34a008544e31d63c94fa0cf795cc2ff (MD5) / O vírus da Anemia Infecciosa Equina (EIAV), membro da família Retroviridae, gênero Lentivirus, causa uma doença de curso crônico e latente em equídeos. A infecção é limitada a equinos, asininos e muares e caracteriza-se por episódios febris, perda de peso, debilidade progressiva, mucosas ictéricas, edemas subcutâneos e anemia. A AIE não tem tratamento nem vacina eficaz. O diagnóstico clínico é difícil pelo fato que os sinais da doença não são específicos, além disso, após a fase aguda da infecção a maioria dos animais se torna portador assintomático do vírus. Neste estudo nós detectamos e caracterizamos filogeneticamente o vírus isolado na Bahia, Brasil. A partir de amostras de sangue e soro de animais de diferentes municípios do estado utilizamos a técnica de referência pela Organização Mundial para Sanidade Animal (OIE), a prova sorológica de IDGA, e as técnicas moleculares de nested-PCR e nested-RT-PCR. No total 82 animais foram examinados neste estudo por IDGA e PCR. Primers para o gene gag foram utilizados para amplificar o DNA proviral/RNA do EIAV, nos ensaios de nested-PCR e nested-RT-PCR respectivamente. Amplicons de 15 amostras positivas por nested-PCR foram submetidas ao sequenciamento e análise filogenética. As sequencias de EIAV analisadas neste estudo formam um clado com as cepas WSU5, EIAVUK e EIAVwyoming, todas dos EUA. 51 amostras (62,2%) foram positivas por nested-PCR, enquanto apenas 31 amostras (37,8%) foram positivas por IDGA. No presente estudo utilizando técnicas moleculares foi possível demonstrar que animais portadores assintomáticos do EIAV, com diferentes status sorológico apresentam vírus e/ou DNA proviral detectável por PCR, em PBMC e plasma, demonstrando que o vírus se replica mesmo na presença de mecanismos de defesa imunológicos do hospedeiro, sendo o animal portador assintomático e sorologicamente negativo, importante reservatório do vírus no plantel, e sugerindo que o controle da AIE baseado apenas no IDGA precisa ser revisto pelos órgãos fiscalizadores no Brasil. / The Equine Infectious Anemia Virus (EIAV), a member of the family Retroviridae, genus Lentivirus, causes a disease of chronic and latent course in equidae. Infection is limited to horses, asinines and mules and is characterized by febrile episodes, weight loss, progressive weakness, icteric mucous, subcutaneous edema and anemia. The equine infectious anemia (EIA) has no effective treatment or vaccine. The clinical diagnosis is difficult due to the fact that the signs of the disease are not specific; moreover, after the acute phase of infection, most animals become asymptomatic carriers of the virus. In this study we detected and characterized phylogenetically the virus isolated in Bahia, Brazil. We used the reference technique from the World Organization for Animal Health (OIE), the serological test of AGID, and the molecular techniques of nested-PCR and nested-RT-PCR from blood and serum samples from different municipalities of the state. In total, 82 animals were examined in this study by AGID and PCR. Primers for the gag gene were used to amplify the EIAV proviral DNA/RNA in the nested-PCR and nested-RT-PCR assays, respectively. Amplicons of 15 samples positive by nested-PCR were submitted to sequencing and phylogenetic analysis. The EIAV sequences analyzed in this study form a clade with strains WSU5, EIAVUK and EIAVwyoming, all from the USA. 51 samples (62.2%) were positive by nested-PCR, whereas only 31 samples (37.8%) were positive by AGID. In the present study using molecular techniques, it was possible to demonstrate that asymptomatic carriers of EIAV, with different serological status, have virus and/or DNA proviral detectable by PCR, in PBMC and plasma, demonstrating that the virus replicates even in the presence of immunological defense mechanisms of the host, being the asymptomatic and serologically negative carrier animal, an important reservoir of the virus in the establishment, and suggesting that the control of the EIA based only on the AGID test needs to be reviewed by the inspection agencies in Brazil.