Made available in DSpace on 2014-12-02T11:16:38Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-02-17Bitstream added on 2014-12-02T11:21:06Z : No. of bitstreams: 1 000773377_20160227.pdf: 491041 bytes, checksum: f98e8637abbf3b0b2af46cc71882d907 (MD5) Bitstreams deleted on 2016-02-29T12:16:24Z: 000773377_20160227.pdf,. Added 1 bitstream(s) on 2016-02-29T12:17:23Z : No. of bitstreams: 1 000773377.pdf: 4008553 bytes, checksum: 946bb9dcb59b5183dfd4e4b97e56739d (MD5) / Com o advento dos bens de consumo industrializados, tornou-se maior a demanda por compostos minerais, sendo o cobre um dos metais mais utilizados para a produção de componentes tecnológicos, o que confronta a atual capacidade das mineradoras, uma vez que as jazidas vem se esgotando progressivamente e portanto apresentam teores cada vez menores. Neste contexto, a Biohidrometalurgia, processo que utiliza micro-organismos que promovem a dissolução de minérios sulfetados para otimização da extração do metal de interesse, apresenta-se como alternativa promissora e mais ambientalmente adequada para a recuperação de metais a partir de minérios de baixo teor. A maior parte do cobre presente na natureza encontra-se na forma de calcopirita, mas esse sulfeto mineral é altamente refratário ao ataque químico e biológico. Atualmente não há processo biohidrometalúrgico comercial em operação para a extração do cobre da calcopirita. A maior limitação para isso não está nos aspectos operacionais do processo, mas nos micro-organismos envolvidos nele. Desta maneira, o objetivo deste trabalho foi obter novas linhagens mutantes utilizando técnicas da genética clássica (radiação ultravioleta) a partir de uma das principais bactérias envolvida neste processo a Acidithiobacillus ferrooxidans e disponível em nosso banco de linhagens e avalia-las quanto à alguns dos parâmetros envolvidos no processo. Por meio da aplicação de radiação ultravioleta em diferentes tempos (0, 10, 15, 30, 60, 120, 300, 600, 1800 e 7200 segundos) na linhagem selvagem de A. ferrooxidans foram obtidos dezoito linhagens mutantes para cada fonte energética. Estes mutantes foram avaliados quanto à capacidade de produção de ácido na presença de enxofre elementar e quanto às velocidades iniciais (v0) na cinética de oxidação dos íons ferrosos. As linhagens mutantes que se destacaram nestes aspectos foram utilizadas em ensaios de frascos agitados... / Recent industrialization has demanded great amounts of mineral compounds copper is one of the most utilized in technological components manufacturing. The large increase in mining activities has resulted in lower grade mineral deposits. As a consequence, the demand for technical and economical solutions became critical. In this context, biohydrometalurgy, a process that uses microorganisms to perform mineral sulphide dissolution for improving metal extraction, has been pointed as a promising and environmentally safer solution for metal recovery from low grade mineral deposits. In its natural conditions most of copper is found as chalcopyrite, but this mineral sulphide is recalcitrant to chemical and biological dissolution. Nowadays, there is no commercial biohydrometalurgic processes for extracting copper from chalcopyrite. The biggest issue for this is not in the operational aspects of the process, but the microrganisms involved in it. The aims of this study were to obtain new mutant strains of Acidithiobacillus ferrooxidans, the main bacterium involved in this process, (available in our strains collection) using classical genetics tools (ultraviolet radiation) and study some parameters involved. By means of ultraviolet radiation directed to the wild strain of Acidithiobacillus ferrooxidans in different exposure periods (0, 10, 15, 30, 60, 120, 300, 600, 1800 and 7200 seconds), eighteen mutant strains were obtained for each energy source. These strains were evaluated regarding their capacity of acid production in the presence of elemental sulphur and initial velocities in the kinetics of ferrous ions oxidation. The cell suspensions with higher performances were submitted to shake flasks experiments in the presence of chalcopyrite. The selective pressure of UV radiation over the wild strain resulted in mutant bacteria that presented different behaviors towards kinetics consumption of its energetic sources. Nine strains from ferrous ions...

Made available in DSpace on 2014-12-02T11:16:38Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-04-01Bitstream added on 2014-12-02T11:21:05Z : No. of bitstreams: 1 000777381_20151101.pdf: 335580 bytes, checksum: 320f77e5c5865613fa8703a80223014c (MD5) Bitstreams deleted on 2015-11-03T14:39:13Z: 000777381_20151101.pdf,. Added 1 bitstream(s) on 2015-11-03T14:40:15Z : No. of bitstreams: 1 000777381.pdf: 3018222 bytes, checksum: d974504f28696fef1888197540e512b4 (MD5) / Cefamicina C é um antibiótico produzido por Streptomyces clavuligerus de grande interesse, em virtude de seu maior grau de resistência a enzimas do tipo β-lactamases comparativamente a outros antibióticos beta-lactâmicos. Cefamcina C é produzida em pequenas concentrações na natureza assim como acontece com todos os metabólitos secundários. Assim, investimentos em programas de melhoria de linhagens e de otimização de meios de cultura e operação de biorreatores são aspectos-chave para o aumento da produção industrial. Porém, a eficácia de tais estratégias pode ser limitada, o que requer o uso de novas abordagens. Neste sentido, a engenharia metabólica é uma área importante que alia ferramentas de quantificação de fluxos metabólicos e de técnicas de biologia molecular para melhoria de linhagens. O estudo dos fluxos metabólicos permite, por meio de análise criteriosa do metabolismo do micro-organismo, identificar gargalos metabólicos na rota biossintética de um produto de interesse para, posteriormente, propor possíveis soluções para o aumento da produção. No presente projeto realizou-se o estudo dos fluxos metabólicos de S. clavuligerus com vistas a encontrar formas de operação do metabolismo que conduzam a aumentos da produção de cefamicina C. Para isto, primeiramente foi desenvolvido um meio de cultivo quimicamente definido contendo maltose como fonte de carbono e lisina como fonte de nitrogênio, para que análises do caldo fermentado não tivessem interferência de componentes desconhecidos. Tal meio possibilitou a obtenção de biomassa em torno de 9 g.L-1 e cefamicina C ao redor de 200 mg.L-1 em processo contínuo. Este modo de operação foi possível somente em biorreator devido ao controle de pH, pois em shaker as variações deste parâmetro inviabilizaram o processo. Paralelamente, foi construído um modelo metabólico com 78 reações e 81 metabólitos, sendo 10 externos e 71 internos, que ... / Cephamycin C is an antibiotic produced by Streptomyces clavuligerus of great interest due to its higher degree of resistance to β-lactamases as compared to other beta- lactam antibiotics. Cephamycin C is produced in small concentrations in nature as with all secondary metabolites. Therefore, investments in improvement of strains and optimization, of culture media and operation of bioreactors are key aspects to increase the production. However, the effectiveness of such strategies may be limited, requiring the use of new approaches. In this aspect, the metabolic engineering is an important field that combines quantification of metabolic fluxes and molecular techniques for improving strains. The study of metabolic fluxes enables one to identify metabolic bottlenecks through careful analysis of metabolism of the microorganism, and to suggest ways to increase production. In this project we carried out the study of metabolic fluxes in S. clavuligerus aiming to find ways to increase the production of cephamycin C. For this, first we developed a chemically defined culture medium because this kind of media does not cause interference in the analyses. The developed medium contained maltose as carbon source and lysine as nitrogen source and resulted in 9 g.L-1 of biomass and 200 mg.L-1 of cephamycin C in the continuous process. This mode of operation was only possible in the bioreactor due to its pH control. Due to variations in the pH, the continuous process in shaken-flasks became unviable. The metabolic model was constructed with 78 reactions and 81 metabolites (10 external and 71 internal) which suitably described the metabolism of S. clavuligerus. This model was simulated with the aid of Optflux, a multi-task software developed for this purpose. The profiles of maltose, lysine, biomass, cephamycin C, clavulanic acid, external protein and CO2 evolution were monitored. These data were used for the model simulations. The results allowed...

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Programa de Pós-Graduação em Química, 2011. / Submitted by Alaíde Gonçalves dos Santos (alaide@unb.br) on 2012-04-24T15:48:21Z No. of bitstreams: 1 2011_LeandroAndradeMoreira.pdf: 8210868 bytes, checksum: 61a0ec79a5b533c7f9d3c4a970f0ce06 (MD5) / Approved for entry into archive by Jaqueline Ferreira de Souza(jaquefs.braz@gmail.com) on 2012-04-27T14:00:14Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2011_LeandroAndradeMoreira.pdf: 8210868 bytes, checksum: 61a0ec79a5b533c7f9d3c4a970f0ce06 (MD5) / Made available in DSpace on 2012-04-27T14:00:14Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2011_LeandroAndradeMoreira.pdf: 8210868 bytes, checksum: 61a0ec79a5b533c7f9d3c4a970f0ce06 (MD5) / A potencialidade do Cerrado Brasileiro (Savana), como fonte de substâncias interessantes sob o ponto de vista químico e farmacológico, tem estimulado uma série de pesquisas visando à descoberta de novas entidades químicas e o desenvolvimento de fármacos. A quantidade do alcalóide indólico bufotenina em sementes de espécies de Anadenanthera vem despertando especial atenção quanto ao seu potencial como matéria-prima para preparação de derivados triptamínicos capazes de agir sobre sistema nervoso central, de exibir propriedade antimicrobiana, antitumoral ou de atuar como capturadores de radicais livres. Neste trabalho, sementes de duas árvores nativas do gênero, A. peregrina (var. peregrina) e A. peregrina (var. falcata), foram coletadas em dois períodos distintos. O alcalóide bufotenina foi isolado das sementes Anadenanthera com elevado padrão de pureza empregando uma adaptação do método de Stromberg. O alcalóide bufotenina foi isolado das sementes com elevado pureza empregando uma adaptação do método de Stromberg. Transformações químicas realizadas na bufotenina forneceram diversos derivados triptamínicos, os quais foram caracterizados por meio de técnicas de CG-EM, IV, RMN 1H e 13C (uni e bidimensionais). A triagem citotóxica realizada em diferentes linhagens de células tumorais humanas HCT-8 (cólon), SF295 (glioblastoma) e MDA-MB435 (melanoma) por meio do método do MTT mostrou que a bufofetina não é citotóxica enquanto que alguns dos seus derivados exibem potente e seletivo efeito antiproliferativo MDA-MB435, merecendo investigação adicional. Esses dados sugerem que modificações químicas na bufotenina podem fornecer substâncias com atividade antitumoral. A bufotenina juntamente com seus derivados estão sob investigação quanto ao perfil antioxidante. _____________________________________________________________________________ ABSTRACT / The potentiality of the Brazilian Cerrado (Savannah), as source of interesting substances from the point of view chemical and pharmacological, has stimulated a series of researches aiming the discovery of new chemical entities and the development of drugs. The amount of indole alkaloid bufotenin in seeds of Anadenanthera species has attracted special attention regarding its potential as starting material for the preparation of tryptamine derivatives able to act on central nervous system, to exhibit antimicrobial and antitumoral properties or to work like catchers of free radical. In this work, seeds of two native plant of the genus, A. peregrina (var. peregrina) e A. peregrina (var. falcata), were collected in two distinct periods. The alkaloid bufotenine was isolated from the seeds of Anadenanthera in high purity by using a modification of Stromberg method. Chemical modifications performed on bufotenin furnished several tryptamine derivatives, which were characterizated by GC-EM, FT-IR and RMN 1H and 13C (one and two-dimensional) techniques. The cytotoxicity screening performed in different human cancer cell lines HCT-8 (colon), SF295 (glioblastoma) and MDA-MB435 (melanoma) by the MTT method showed no activity for bufotenin whereas some of its derivatives exhibited potent and selective antiproliferative effect against MDA-MB435, deserving further investigation. These data suggest that chemical modification on bufotenin can provide substances antimural activity. Bufotenin together with its precursors are under investigation concerning the antioxidant profile.

A família das serino proteases inclui diversas proteínas envolvidas em uma variedade de processos fisiológicos, como digestão protéica, regulação da pressão arterial e da coagulação sanguínea, entre outros. Quando disfuncionais, relacionam-se à condições patológicas graves como trombose vascular, embolismo pulmonar, infarto agudo do miocárdio, isquemia cerebral, bem como com o quadro da hemofilia B, ocasionada pela deficiência de fator IX. A investigação dos mecanismos de ação e a compreensão do funcionamento de serino proteases e de seus inibidores, as serpinas, é essencial para desvendar mecanismos de doenças e para a modelagem de fármacos mais específicos e eficientes. A pesquisa de fármacos anti-trombóticos busca desenvolver produtos capazes de interferir no processo hemostático que pode resultar no grave quadro trombo-embólico. A nitroforina-2 (NP-2), produzida na secreção salivar do inseto barbeiro Rhodnius prolixus, é uma proteína dotada de potente ação anti-hemostática, atuando como um inibidor específico do complexo tenase intrínseco (TF/FVIIa/FIX). Em trabalho anterior, nosso grupo identificou que o fragmento correspondente ao segmento 90-110 de NP-2 possui atividade anticoagulante. Um modelo do complexo fator IXa (fIXa)-NP-2 foi gerado a partir do “docking” do peptídeo de NP-2 na provável região de ligação com fIXa. Este complexo foi usado como ponto de partida para a simulação por dinâmica molecular e refinamento da estrutura. Novos peptídeos foram propostos como o objetivo de gerar estruturas com maior afinidade por fIXa. Identificamos o hexapeptídeo LKEADE como apresentando melhor afinidade por fIXa, o qual sugerimos como “template” para o planejamento racional de fármacos com ação anticoagulante e anti-trombótica. Numa outra vertente de nosso trabalho, estudamos a superfamília de proteínas denominada serpinas (serpins, ou “SERine Protease INhibitors”) que engloba um grande conjunto de proteínas dotadas de estruturas similares e provenientes de vários e distintos organismos. A função inicialmente identificada para as serpinas foi de inibição de serino proteases da coagulação sangüínea; entretanto, muitas serpinas perderam esta função.Nestes estudos foram usados modelos ocultos de Markov para criar modelos e descrições possibilitando classificar as serpinas em relação à sua função biológica. Foram criadas assinaturas para cada grupo: seqüências consenso e padrões de aminoácidos distintos para cada modelo/função correspondente. Um modelo específico para serpinas da coagulação sangüínea foi criado. Para este modelo, foi gerada a expressão regular [IVTLM]-[FLVA]- F-S-P-[VLWYF]-[SG]-[IV] que descreve tal função. Além disso, ela codifica a seqüência de uma importante região envolvida na mudança conformacional e no funcionamento da serpina. Tanto esta seqüência quanto a estrutura secundária correspondente podem ser melhor investigadas, por sugerirem um alvo para inibição ou ativação. / The protein family of serine proteases comprises molecules involved in a wide range of physiological processes, such as regulation of blood pressure and coagulation. Dysfunctional serine proteases are related to pathological conditions such as embolism, heart failure, cerebral ischemia and also hemophilia B (the latter being a consequence of factor IX deficiency). The understanding of serine proteases mechanism of action, as well as of their inhibitors is a key step to the discover and develop new drugs. In the study of homeostasis, the search for anti-thrombotic drugs seek to avoid thrombosis and related conditions. The protein nitrophorin-2 (NP-2), found in the salivary glands of the hematophagous insect Rodnius prolixus, is a specific inhibitor of the intrinsic tenase complex (TF/fVIIa/fIX). In previous studies, we identified the NP-2 fragment (amino acid sequence 90-110) showing anticoagulant activity. Models of the complex factor IXa (fIXa) – NP-2 were created. This complex was used as a starting point for the molecular dynamic simulations and structure refinement. New NP-2 peptides were suggested, in order to achieve higher affinity complexes. We identified the hexapeptide LKEADE as showing higher affinity for fIXa, which we suggest to be used on rational drug design studies for anticoagulant drugs. The superfamily of proteins known as serpins (“Serine Protease Inhibitors”) involve a number of similar structures, found in a wide variety of organisms. Its function was initially identified as an inhibitor of blood clotting serine proteases. However, many serpins have lost that function in the course of natural evolution. Hidden Markov models were then used to create profiles classifying those proteins due to their biological function. We created signatures for each group of functional serpins in the form of consensus sequences and distinct amino acid patterns. A blood clotting-specific model was generated, which has yielded the regular expression [IVTLM]-[FLVA]-F-S-P-[VLWYF]-[SG]-[IV]. Such pattern also codes for a region of the structure involved in an extensive conformational change. The change is related to the activation of the serpin, and, therefore, both pattern and sequence should be investigated. Combined, these information suggest a powerful target for blood clotting inhibition.

O filoplano do Hibiscus rosa-sinensis abriga uma enorme biodiversidade de leveduras e fungos semelhantes a leveduras cujo potencial biotecnológico ainda é desconhecido. Foram isoladas 84 cepas de leveduras de filoplano desta planta, sendo identificadas pela metodologia clássica. Do total de isolados 37% são de afinidade ascomicética, 36% de afinidade basidiomicética e 27% de fungos semelhantes a leveduras.

Os cestódeos são agentes etiológicos de doenças parasíticas em humanos e em animais domesticados. Estamos utilizando Mesocestoides corti como um sistema modelo para estudar a biologia do desenvolvimento dos cestódeos, particularmente a transição da fase larval para a fase adulta segmentada. Com o propósito de isolar seqüências diferencialmente expressas durante o processo de segmentação, aplicamos a metodologia de análise das diferenças de representações de cDNA (cDNA RDA) utilizando RNA total extraído de larvas e vermes segmentados em cultivos in vitro de M. corti. Duas bibliotecas de cDNA subtraídas, enriquecidas com seqüências diferencialmente expressas das formas larvais ou segmentadas, foram construídas usando uma razão de driver:tester de 100:1 e 800:1 no 1º e 2º ciclos de subtração, respectivamente. A eficiência de subtração foi avaliada com experimentos de hibridização, utilizando as seqüências subtraídas como sondas contra os produtos de cDNA amplificados por PCR, com análise de macroarranjos e com confirmação individual, em experimentos de Northern virtual, de clones selecionados. Uma estratégia de RT-PCR em tempo real para confirmação dos resultados está sendo otimizada e resultados preliminares são apresentados. Após o seqüenciamento de 1036 clones de cDNA independentes e adoção de uma estratégia de seqüenciamento de alta qualidade, foram identificadas 190 seqüências, preferencialmente expressas em tetratirídeos (49) ou em vermes segmentados (141). Entre os genes identificados, 71 foram funcionalmente anotados, incluindo seqüências relacionadas a reguladores de estrutura de cromatina e controle de transcrição, cujos ortólogos estão implicados em processos de desenvolvimento em Drosophila e em vertebrados.

Orientador: Hideko Yamanaka / Banca: Fernando Luis Fertonani / Banca: Silvia Helena Pires Serrano / Banca: Neiva Sellan Lopes Gonçales / Banca: Eduardo Mathias Richter / Resumo: O presente trabalho descreve estudos de construção de biossensores modificados com DNA para detecção de vírus da hepatite C. Utilizaram-se como superfície eletródica substratos de ouro oriundos de CDs graváveis, já descritos na literatura. O procedimento de construção deste tipo específico de eletrodo foi modificado e esta modificação foi avaliada por meio de técnicas eletroquímicas, de microscopias de varredura eletrônica de fluorescência. Duas propostas de imobilização foram avaliadas, sendo: a construção de monocamadas auto organizadas com moléculas de ácido mercaptopropiônico, com posterior ligação de material biológico via metodologia biotina estreptavidina e a construção de monocamadas a partir de moléculas de DNA modificadas com grupamentos tióis. As metodologias foram comparadas e a que fez uso do DNA tiolado foi escolhida para efetuar os procedimentos de imobilização, que foram então otimizados. Para monitorar o sinal de hibridização do genossensor, dois métodos foram estudados, sendo: detecção via oxidação da base nitrogenada guanina e detecção via interação do material genético com indicadores eletroanalíticos, sendo este último o que apresentou melhores resultados sendo selecionado. Como indicadores foram avaliados os corantes azul de metileno e azul de meldola e os compostos de cobre Cu(NO3)2(en)2 e Cu(NO3)2(NN)2, que foram caracterizados e avaliados por técnicas eletroanalíticas e espectrofotométricas. Estes foram estudados frente aos processos de interação com o material genético nativo e degradado, por meio do método da razão molar. O azul de metileno e o Cu(NO3)2(en)2 apresentaram forte interação com o DNA de Calf Thymus, com constantes de interação de 1,5 x 10 4 e 1,0 x 10 5 L mol -1. Estes foram utilizados como indicadores eletroanalíticos na etapa de hibridização, sendo eficientes para detecção de genótipos da hepatite C em amostras amplificadas de soro sanguineo. / Abstract: This paper describes a studies of biosensors modified DNA construction for hepatitis C virus detection. It was used gold from recordable CDs as a electrodic substrates just described in the literature. The procedure of construction of this particular electrode was modified and this modification was evaluated using electrochemical, scanning electron microscopy and fluorescence techniques. Two detention proposals were evaluated: first, the construction of self assembly monolayers with mercaptopropionic acid and subsequent binding of biological material by streptavidin biotin method and second, the construction of monolayers from molecules of DNA modified with thiol groups. The methods were compared and the DNA thiol was chosen to perform the detention procedures, which were then optimized. To monitoring the hybridization signal genosensor, two methods were studied,: guanine oxidation detection and interaction of genetic material with electroanalytical indicators, the latter being the one with better results, and selected. As indicators were evaluated the methylene blue and meldola blue dye, and copper compounds Cu(NO3)2(en)2 and Cu(NO3)2(NN)2, which were characterized and evaluated by spectrophotometric and electroanalytical techniques. These coumpounds were studied before the interaction process with the native and degraded material by the molar ratio method. The methylene blue and Cu(NO3)2(en)2 showed strong interaction with the Calf Thymus DNA with constant of 1.5 x 10 4 and 1.0 x 10 5 L mol -1. These were used as indicators of hybridization in electroanalytical step and they were efficient for detection of hepatitis C genotypes in amplified blood serum samples. / Doutor

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:23:04Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-03-08Bitstream added on 2014-06-13T20:29:46Z : No. of bitstreams: 1 savassa_sm_me_araiq_parcial.pdf: 560908 bytes, checksum: 7322d6c1907899887286e7c9514807e4 (MD5) Bitstreams deleted on 2015-07-02T12:36:14Z: savassa_sm_me_araiq_parcial.pdf,. Added 1 bitstream(s) on 2015-07-02T12:37:34Z : No. of bitstreams: 1 000719185_20180101.pdf: 541449 bytes, checksum: 71b832c9a74978e0b6356b081a51d520 (MD5) Bitstreams deleted on 2018-01-02T17:04:40Z: 000719185_20180101.pdf,. Added 1 bitstream(s) on 2018-01-02T17:05:45Z : No. of bitstreams: 1 000719185.pdf: 3296921 bytes, checksum: 3209de8217c724ff260135d1572d7752 (MD5) / O fungo filamentoso Neurospora crassa é um organismo modelo muito utilizado para estudos de diversos aspectos da biologia dos eucariotos. Nosso laboratório tem utilizado este fungo para o estudo dos mecanismos moleculares e bioquímicos da regulação do metabolismo de glicogênio. A presente proposta de trabalho é uma consequência de experimentos anteriores realizados com o objetivo de identificar proteínas (fatores de transcrição ou não) que se ligam à região promotora do gene gsn, o qual codifica a enzima glicogênio sintase, regulatória do processo de síntese do carboidrato. Esses estudos combinaram experimentos de ensaios de retardamento em gel utilizando fragmentos do promotor gsn e proteínas do extrato total do fungo, acoplados à análise proteômica e identificação das proteínas por espectrometria de massas. Os experimentos resultaram na identificação de algumas proteínas do fungo, as quais podem ou não estar envolvidas na regulação da expressão do gene. Alguns estudos preliminares com estas proteínas foram anteriormente realizados no laboratório e apontaram um provável papel das mesmas na regulação do metabolismo do carboidrato em N. crassa. Duas dessas proteínas, as codificadas pelas ORFs NCU3482 e NCU06679 foram objeto de estudo neste trabalho. Portanto, o objetivo deste trabalho foi realizar a caracterização das linhagens mutantes nestas ORFs, além da produção e purificação das proteínas na forma recombinante. Foram realizadas análises morfológicas da linhagem mutante na ORF NCU06679, tais como: crescimento colonial e radial, crescimento linear e análise microscópica das extremidades das hifas. Esses experimentos foram realizados em comparação com a linhagem selvagem do fungo e, mostraram esta proteína está envolvida no processo de desenvolvimento do... / The fungus Neurospora crassa has been widely used as a model organism for fundamental aspects of eukaryotic biology. We have been studying the biochemical and molecular mechanisms involved in glycogen metabolism regulation in this fungus. The present work is a consequence of previous experiments performed in the laboratory to identify proteins that bind to the promoter region of the gsn gene which encodes glycogen synthase, the regulatory enzyme in glycogen synthesis. Previous studies were performed by using a combination of DNA gel shift assay coupled to proteomic analysis, followed by identification of proteins by mass spectrometry. The assays resulted in the identification of proteins likely involved in the regulation of gene expression. Preliminary studies with these proteins have previously been carried out and suggested that they might have a role in the regulation of glycogen metabolism in N. crassa. Two of them, the ORFs NCU3482 and NCU06679 gene products were object of study in this work. The main objective was to characterize the mutant strains in both proteins and to produce and purify the recombinant proteins. Morphological analyzes were performed in the ORF NCU06679 mutant strain such as colony and radial linear growth and microscopic examination of the ends of the hyphae. These experiments showed that this protein is involved in the fungus development since growth and ability to conidiate were deficient when compared to the wild-type strain. The expression of gsn and gpn (encodes glycogen phosphorylase, the regulatory enzyme in glycogen degradation) genes were analyzed by qPCR and the results showed differences in gene expression of both genes during vegetative growth of the NCU06679 mutant strain when compared to the wild-type strain. The protein encoded by ORF NCU06679 was produced as a recombinant protein and the purification... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:23:05Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-02-27Bitstream added on 2014-06-13T19:28:58Z : No. of bitstreams: 1 goncalves_am_me_araiq.pdf: 787474 bytes, checksum: 139bd29c3e4939fc72732e4ef1db4333 (MD5) / Durante a metamorfose dos anuros, além da natação, a cauda tem como função fornecer nutrientes necessários para as transformações morfofisiológicas da fase larval aquática em adultos terrestres, pois os animais não se alimentam durante esse período. A fosfatase alcalina é uma enzima importante na mobilização do fosfato necessário para o anabolismo de biomoléculas essenciais à vida, enquanto a fosfatase ácida é uma marcadora lisossomal. Nesse sentido, o objetivo desse estudo foi avaliar a atividade das fosfatases ácida e alcalina obtidas da cauda de girinos de rã-touro (Lithobates catesbeianus), visando fornecer informações acerca do processo de mobilização de nutrientes durante o desenvolvimento e a metamorfose. Os animais foram mantidos em aquários a 27 °C, e separados por estádios de desenvolvimento. As caudas foram coletadas de animais em cada estádio e homogeneizadas em tampões acetato, TRIS.HCl ou 2-amino-2-metil-1-propanol, contendo MgCl2 2 mM e ZnCl2 1 μM, centrifugadas a 10000 g, durante 10 minutos, a 4°C, congeladas em nitrogênio líquido e armazenadas a -70 °C. A atividade de p-nitrofenilfosfatase foi estável quando as amostras homogeneizadas foram armazenadas em diferentes valores de pH, contudo, a atividade da fosfatase alcalina reduziu aproximadamente 70% após 12 horas de armazenamento no pH 4. O pH ótimo aparente para a hidrólise do p-nitrofenilfosfato pelas fosfatases ácida e alcalina foi 5,0 e 10,5, respectivamente, enquanto a hidrólise do pirofosfato de sódio e do ATP para as atividades de pirofosfatase e ATPase foram de 7,5 e 7,0. A temperatura ótima para a atividade das fosfatases ácida e alcalina foi 45°C por 15 minutos de reação. O estudo da ação de compostos sobre a atividade da fosfatase alcalina revelou que o arsenato, EDTA, metavanadato, teofilina, levamisol, íons fosfato e o p-hidroximercuriobenzoato agem... / During anurans metamorphosis, besides swimming, the tail has the function to supply with nutrients the morphophysiological changes of the larval aquatic stage to terrestrial adults, because the animals do not eat during this period. Alkaline phosphatase is an important enzyme in phosphate mobilization required to the anabolism of essential biomolecules, whereas the acid phosphatase is a lysosomal marker. Thus, the aim of this study was to evaluate the activity of acid and alkaline phosphatase obtained from the tail of bullfrog tadpoles (Lithobates catesbeianus), to provide information about the process of nutrients mobilization during development and metamorphosis. The animals were kept in aquaria at 27 °C, and separated by stages. The tails were collected from animals at each stage and homogenized in acetate buffers, Tris.HCl or 2-amino-2-methyl-1-propanol, containing 2 mM MgCl2 and 1 mM ZnCl2, centrifuged at 10000 g for 10 minutes at 4 °C, frozen in liquid nitrogen and stored at -70 °C. The activity of p-nitrophenylphosphatase was stable when the homogenized samples were stored at different pH values, however, alkaline phosphatase activity decreased about 70% after 12 hours of storage at pH 4. The apparent optimum pH for the hydrolysis of p-nitrophenylphosphate by acid and alkaline phosphatase was 5.0 and 10.5, respectively, while the hydrolysis of sodium pyrophosphate and ATP by the activities of pyrophosphatase and ATPase were 7.5 and 7.0. The optimum temperature for the activity of acid and alkaline phosphatases was 45 ° C for 15 minutes of reaction. The study of the action of compounds on the activity of alkaline phosphatase revealed that arsenate, EDTA, metavanadate, theophylline, levamisole, phosphate ions and p-hydroxymercurybenzoate act as inhibitors, and arsenate showed greater inhibition... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:23:05Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-07-05Bitstream added on 2014-06-13T19:29:00Z : No. of bitstreams: 1 rodrigues_df_me_araiq_parcial.pdf: 287985 bytes, checksum: 745e0d74baf9b8af73dcadbcf68303c8 (MD5) Bitstreams deleted on 2015-06-03T11:42:47Z: rodrigues_df_me_araiq_parcial.pdf,. Added 1 bitstream(s) on 2015-06-03T11:44:11Z : No. of bitstreams: 1 000721789_20150705.pdf: 273804 bytes, checksum: 6b0dcf84e23f604b58d132de43270cc2 (MD5) Bitstreams deleted on 2015-07-06T11:21:03Z: 000721789_20150705.pdf,. Added 1 bitstream(s) on 2015-07-06T11:21:36Z : No. of bitstreams: 1 000721789.pdf: 662258 bytes, checksum: 70171a16c9156e988c31ced996731fd6 (MD5) / Protozoários como Trypanosoma brucei são causadores de importantes doenças que acometem os seres humanos e animais, como a doença do sono. A distribuição desses tripanosomas é exclusiva da África (região central, oeste e leste), sendo transmitidos por moscas do gênero Glossina, mais conhecidas como moscas tsé-tsé. Cerca de 60 milhões de pessoas estão sob risco de contrair a doença, e muitos casos novos ocorrem a cada ano. Atualmente, os fármacos disponíveis apresentam um número elevado de efeitos colaterais, tornando indispensável à busca pelo desenvolvimento de novos medicamentos. Nesse contexto, a prospecção por substâncias tripanocidas a partir de plantas é uma estratégia válida e importante. Melampodium divaricatum é uma planta nativa da América do Sul, conhecida popularmente como falsa-calêndula e por apresentar atividade antimalárica. Hedychium coronarium conhecida como lírio-do-brejo; é uma planta bem adaptada no Brasil e apresenta atividade anti-helmíntica. A planta Polygonum ferrugineum também encontrada na América do Sul apresenta atividades antibióticas e antifúngicas, e é popularmente conhecida como fumo-bravo. No presente trabalho, avaliou-se a atividade tripanocida dos óleos essenciais obtidos das partes aéreas de M. divaricatum, dos rizomas e folhas de H. coronarium e os seus compostos majoritários 8 (1,8 cineol/eucaliptol) e 9 (óxido de cariofileno), respectivamente; dos extratos e substâncias isoladas de Polygonum ferrugineum frente a duas cepas de T. brucei (método colorimétrico de MTT). Também, utilizando a técnica de RT-PCR (transcriptase reversa), foram avaliados se alguns dos compostos selecionados apresentariam interferência no processamento de RNA mensageiro (mRNA) do parasito, uma vez que, diferente de outros eucariotos... / Protozoa such as Trypanosoma brucei are causative important diseases affecting humans and animals, such as sleeping sickness. The distribution of these trypanosomes is unique to Africa (central, west and east), being transmitted by flies of the genus Glossina, better known as tsetse flies. About 60 million people are at risk of contracting the disease, and many new cases occur each year. Currently, available drugs have a high number of side effects, making it essential to search for new drug development. In this context, the prospect for trypanocidal substances from plants is an important and valid strategy. Melampodium divaricatum is a plant native to South America, popularly known as “falsa-calêndula” and display antimalarial activity. Hedychium coronarium known as “lírio-do-brejo”; is a plant well adapted in Brazil and has anthelmintic activity. The plant Polygonum ferrugineum also found in South America has antibiotic and antifungal activities, and is popularly known as “fumo-bravo” In the present work, evaluated the trypanocidal activity of essential oils obtained from aerial parts of M. divaricatum, rhizomes and leaves of H. coronarium and its major compounds 8 (1.8 cineole / eucalyptol) and 9 (caryophyllene oxide), respectively; of extracts and substances of Polygonum ferrugineum against two strains of T. brucei were evaluated (MTT colorimetric method). Also, using the technique of RT-PCR (reverse transcription), were evaluated if any of the selected compounds would show interference in the processing of messenger RNA (mRNA) of the parasite, since, unlike other eukaryotes, mRNA processing which is carried out by a mechanism cis-splicing called the trypanosomatids using the trans-splicing. The results for the cytotoxic assays demonstrated varying degrees of cytotoxicity in the parasite, and one extract... (Complete abstract click electronic access below)