Orientador: Hélio José Montassier / Banca: Camillo Del Cistia Andrade / Banca: Janete Apparecida Desidério Sena. / Resumo: Anticorpos monoclonais se constituem na base de vários testes usados na detecção e na identificação de antígenos. Nesse contexto, tais imuno-reagentes têm sido extensivamente empregados na identificação de estirpes virais envolvidas na etiologia de surtos de bronquite infecciosa a campo, permitindo o aperfeiçoamento das técnicas de detecção e caracterização antigênica do vírus da bronquite infecciosa das galinhas (VBI). No presente estudo, uma biblioteca de fragmentos de anticorpos de galinha originalmente preparada por "phage display" contra a estirpe vacinal (H120) do VBI, foi usada para a seleção de fragmentos de anticorpos recombinantes com reatividade cruzada para as estirpes heterólogas IBVPR01, IBVPR05, isoladas de surtos a campo no Brasil e SE-17, isolada nos Estados Unidos. Após três ciclos de "panning", foi identificado pelo ELISA um conjunto de 15 anticorpos scFv expressos em fagos e com reatividade cruzada para essas mesmas estirpes do VBI. A análise por Western-blotting revelou que três desses clones apresentavam fagos expressando fragmentos de anticorpos monoclonais com reatividade cruzada para a nucleoproteína N das três estirpes do VBI e também para a forma recombinante dessa nucleoproteína derivada da estirpe M41. Concluindo, os fragmentos de anticorpos monoclonais recombinantes scFv-N produzido em fagos interagem com um epítopo mais conservado da proteína N do VBI e apresentam um grande potencial para utilização na detecção e no diagnóstico direto desse vírus e no estudo de evolução de variantes desse vírus. / Abstract: Monoclonal antibodies are the basis of various techniques used for antigen detection or characterization, and their use is specially recommended for the identification of viral strains involved in the etiology of outbreaks of infectious bronchitis, because these antibodies are homogeneous, highly specific and fully characterized, allowing the improvement of detection of immunological techniques and antigenic characterization of avian infectious bronchitis virus strains (IBV). We used a phage display library prepared previously against the IBV vaccine strain (H120) for the selection of new scFv antibody fragments reacting with heterologous IBV strains isolated from outbreaks in Brazil (IBVPR01, IBVPR05) and USA (SE-17). After three cycles of panning a set of 15 scFv antibodies was expressed in phages and exhibited crossreaction in ELISA with these three viral strains. Western-blotting analysis showed that three of this clone set were expressing scFv specific for the nucleoprotein of these IBV strains, as well as to the recombinant form of this protein derived from M41 strain of IBV. In conclusion, the recombinant fragments of monoclonal antibodies expressed by phage-display technique have a great potential for future use in immunodiagnostic techniques and study the evolution of variant strains of this virus. / Mestre

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:28:23Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-08-04Bitstream added on 2014-06-13T18:57:30Z : No. of bitstreams: 1 alarcon_mff_me_jabo.pdf: 1406127 bytes, checksum: 842dbbaa540dbb4b860fec0374842606 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Foram avaliados parâmetros fisiológicos e imunológicos de matrizes de corte vacinadas ou não contra o vírus da bronquite infecciosa das galinhas (VBIG), submetidas a diferentes períodos de jejum após a eclosão, seguido de alimentação até a terceira semana de vida. No Capítulo 2, encontram-se os resultados do desempenho zootécnico e o desenvolvimento de órgãos gastrintestinais. No Capítulo 3, estão descritos os resultados de parâmetros hematológicos e bioquímicos. O Capítulo 4 apresenta as cinéticas de decaimento dos anticorpos maternos e os perfis cinéticos da reposta imune humoral nos compartimentos local e sistêmico. A vacina contra a BIG influenciou parâmetros de desempenho, de morfometria intestinal, o hematócrito, parâmetros bioquímicos, percentuais de heterófilos e linfócitos e induziu a resposta imune humoral na secreção lacrimal. O jejum pós-eclosão prolongado seguido de alimentação influenciou negativamente o desempenho, o desenvolvimento das vísceras gastrintestinais, as variáveis bioquímicas, imunológicas e a maioria das variáveis hematológicas. Os dados indicam que períodos de jejum pós-eclosão superiores a 48 h devem ser evitados, pois ao afetar negativamente parâmetros hematológicos, intestinais e imunológicos, podem comprometer o crescimento das matrizes e inferir negativamente sobre sua resposta imune. No entanto, o jejum moderado pode favorecer a resposta imune vacinal / Immunological and physiological parameters were evaluated in broiler breeder vaccinated or not against infectious bronchitis virus (IBV), submitted to different periods of fasting post-hatching, followed by feed until the third week of life. In Chapter 2, are the results of zootechnical performance and development of gastrointestinal organs. The Chapter 3 describes the results of hematological and biochemical parameters of blood. Chapter 4 presents the kinetics of decay of maternal antibodies and the kinetic profiles of humoral immune response in local and systemic compartments. The IBV vaccine influenced parameters of performance, intestinal morphology, hematocrit, biochemical parameters, percentage of heterophils and lymphocytes, and induced humoral immune response in tear secretion. Prolonged fasting post-hatching, followed by feeding, negatively affected the performance, the development of gastrointestinal organs, biochemical variables, immunological and the most of hematological variables. The data indicate that periods of fasting post-hatching over 48 h should be avoided as they adversely affect the hematological, gastrointestinal and immunologic, may compromise the growth of broiler breeder and infer a negative effect on their immune response. However, moderate fasting can promote the immune response vaccine

Made available in DSpace on 2016-06-02T19:48:25Z (GMT). No. of bitstreams: 1 6073.pdf: 40231952 bytes, checksum: 3e6c1696ca88228a8cad910f54e09688 (MD5) Previous issue date: 2014-02-11 / Financiadora de Estudos e Projetos / Asthma is one of the most common chronic diseases and its prevalence is increasing, especially among children. The care demands from this situation impacts the entire family, with repercussions in several of its members, including the sibling. Therefore, this work aimed to understand the sibling s experience that lives with children with asthma or bronchitis on the voice of the sibling. It is an exploratory, qualitative research, based on the theoretical and methodological framework of Gadamer s philosophical hermeneutics. Philosophical hermeneutics seeks understanding, the apprehension of the senses through horizons that are mediated through dialogue with the purpose of understanding. And the understanding demands to face the fore-meanings and prejudices about the phenomenon that is about to be understood. This process involves language, which makes it possible to achieve understanding of the being. The language allows consciousness of being affected by history, where it is noted that the past is always present in human thoughts in order to be revealed through dialogue. It is the dialogue that there is the true birth of the truth. Eight children and teenagers, older siblings of children with asthma or bronchitis, ages six to 16 years old were the participants of this study. Data collection was done through open interviews integrated to the strategies of drawing, letter or photograph. Five steps proposed by researchers in Glasgow were followed, where is adopted the Gadamer's perspective as a framework for data analysis. The dialogue analysis allows understanding that siblings appreciates the fraternal relationship and overrides the effects of the child s asthma or bronchitis in his/her life. Union, fellowship, friendship and protection mark the relationship between siblings, where the mere presence of the child in the sibling s life is understood as happiness. In their daily lives, the siblings are engaged in actions of care and protection to the chronic ill child that is determined by the dynamics of the family. In this situation, they count on few sources of information about the child's illness and wish for having more information about it. They take responsibilities for the child s care such as give medicine, keep vigil, take care of the environmental and try to prevent possible risks that may exacerbate the disease. They feel that parents treat them and the sick child differently. And although they have their own demands, those are not perceived and coping is held in solitary way, sustained by the action to consider its own situation and find nurturing for what makes them suffer. This process allows the sibling to understand his/her life as "normal". The findings highlight the invisibility of the sibling of children with asthma or bronchitis, which implies a need for professional practice transformation aiming a comprehensive, meaningful and complete care. That requires changes in teaching, training and research scenarios. There is no way to care in a complete and humane way walking paths that are "straight" or " predetermined " and absents of fusions of horizons, without opening to the encounter with other through dialogue. / A asma é uma das doenças crônicas mais comum, e sua prevalência está crescendo, especialmente entre crianças. As demandas de cuidado advindos desta patologia impacta toda a família, com repercussões a vários de seus membros, inclusive o irmão. Com vistas à compreender a experiência fraterna na voz do próprio irmão, e no intuito de agregar conhecimento neste sentido, foi desenvolvida esta pesquisa. Desta maneira, o objetivo deste trabalho foi compreender a experiência de irmãos que convivem com crianças com asma ou bronquite. É uma pesquisa exploratória, qualitativa, pautada no referencial teórico e metodológico da hermenêutica filosófica de Gadamer. A hermenêutica filosófica busca a compreensão, a apreensão dos sentidos por meio de horizontes que são mediados no diálogo com vista ao entendimento. E o compreender exige colocar o preconceito ou pré-compreensão em relação ao fenômeno que se deseja entender. Esse processo envolve a linguagem, sendo nela que se dá a compreensão do ser, e através dela retoma-se a historicidade, onde denota-se o passado estar sempre presente no pensamento humano de forma a ser retomado no diálogo. Pois é no diálogo que há o verdadeiro nascimento da verdade. Oito crianças e adolescentes, irmãs(ãos) mais velhos de crianças com asma ou bronquite, com idades entre seis e 16 anos, integraram o estudo. A coleta dos dados deu-se por meio de entrevistas abertas integradas às estratégias de desenho, carta ou fotografia. Foram seguidas as cinco etapas propostas por pesquisadores em Glasgow, que adotam a perspectiva gadameriana como estrutura para analisar dados. A análise dos diálogos permitiu compreender que o irmão valoriza a relação fraterna e a sobrepõe às repercussões da asma ou bronquite da criança em sua vida. A irmandade é marcada pela união, companheirismo, amizade e proteção, onde a simples presença da criança na vida do irmão é entendida como felicidade. Em seu cotidiano, os irmãos exercem ações de cuidado e proteção à criança doente crônica determinadas pela dinâmica da família. Nesta situação, contam com escassas fontes de informação sobre a doença da criança, e anseiam por poder obter mais conhecimento da mesma. Eles assumem responsabilidades de cuidado à criança como medicar, vigiar, cuidado ambiental e prevenção de riscos de agudização da doença. Sentem diferenças no tratamento ofertado pelos pais em relação a ele e ao irmão. E apesar de terem suas próprias demandas, estas não são percebidas e o enfrentamento das mesmas é realizado de forma solitária, sustentada por um movimento de ponderar sua situação e encontrar acalento para aquilo que o faz sofrer. Tal processo permite a ele entender sua vida como normal . Os achados ressaltam a invisibilidade do irmão de crianças com asma ou bronquite, o que implica em necessidade de transformação de práticas profissionais, com vistas ao cuidado integral. Isso demanda transformações em cenários de ensino, formação e pesquisa. Não há como cuidar de forma humanizada percorrendo caminhos retilíneos , pré-determinados e isentos de fusões de horizontes, sem abertura para o encontro com o outro através do diálogo.

Submitted by CAREN PAVANI null (caren_pavani@hotmail.com) on 2017-08-29T17:29:24Z No. of bitstreams: 1 Dissertacao-POS-Caren-DEFINITIVO-V-2-HJM-AGO-23-17.pdf: 1281724 bytes, checksum: 16544949d05b1aee20711a16abcbfdac (MD5) / Rejected by Luiz Galeffi (luizgaleffi@gmail.com), reason: Solicitamos que realize uma nova submissão seguindo as orientações abaixo: A lombada de seu trabalho só é necessária na versão impressa, para encadernação. Por favor, exclua a lombada da versão digital. Corrija estas informações e realize uma nova submissão contendo o arquivo correto. Agradecemos a compreensão. on 2017-08-29T18:44:21Z (GMT) / Submitted by CAREN PAVANI null (caren_pavani@hotmail.com) on 2017-08-29T18:51:55Z No. of bitstreams: 1 Dissertacao-POS-Caren-DEFINITIVO-V-2-HJM-AGO-23-17.pdf: 1278516 bytes, checksum: 04ce7b2fc7a143ce39b6187b81ee676f (MD5) / Approved for entry into archive by Luiz Galeffi (luizgaleffi@gmail.com) on 2017-08-29T18:59:47Z (GMT) No. of bitstreams: 1 pavani_c_me_jabo.pdf: 1278516 bytes, checksum: 04ce7b2fc7a143ce39b6187b81ee676f (MD5) / Made available in DSpace on 2017-08-29T18:59:47Z (GMT). No. of bitstreams: 1 pavani_c_me_jabo.pdf: 1278516 bytes, checksum: 04ce7b2fc7a143ce39b6187b81ee676f (MD5) Previous issue date: 2017-08-02 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Em plantéis avícolas, é frequente a ocorrência de doenças infecciosas respiratórias e dentre estas, destaca-se a Bronquite Infecciosa (BI), uma doença aguda e altamente contagiosa de aves. A BI é causada pelo vírus da bronquite infecciosa (VBI), cujo processo infeccioso geralmente provoca perdas econômicas significativas para as criações avícolas. A extensa variação genética, especialmente nas regiões hipervariáveis (HVRs) do gene S1, é uma das principais características da evolução do VBI, e resulta no surgimento de diversas variantes, que requerem um diagnóstico molecular que inclua a detecção dessas novas estirpes, como o genótipo brasileiro (BR-VBI), pois a detecção e identificação do agente etiológico são essenciais para o controle dessa enfermidade. Para tanto, é necessário que os métodos de diagnóstico empregados sejam sensíveis, específicos e de baixo custo. Foi então desenvolvida e avaliada neste estudo uma técnica de Nested-RT-PCR (BR-Nested-RT-PCR) utilizando um conjunto de oligonucleotídeos iniciadores desenvolvido dentro da região HVR3 do gene S1 de estirpes variantes brasileiras do VBI para a detecção e identificação de linhagens do genótipo brasileiro do VBI presentes em amostras biológicas de aves e comparada com a Nested-RT-PCR universal, utilizando oligonucleotídeos iniciadores universais para a mesma região do gene S1. Os resultados demonstraram que a técnica BR-Nested-RT-PCR apresentou uma elevada sensibilidade na detecção de estirpes do genótipo BR-I do VBI e não gerou produtos amplificados a partir de amostras de vírus heterólogos testados (vírus da doença de Newcastle, metapneumovírus aviário, reovírus e vírus da doença de gumboro), nem de estirpes do VBI classificadas em outros genótipos.). Ademais, quando foram comparadas as técnicas BR-Nested-RT-PCR com a técnica universal de Nested-RT-PCR foram obtidas boa concordância (k = 0,67), sensibilidade relativa de 85,4% e especificidade relativa de 81,6% para a detecção direta e identificação de estirpes do genótipo BR em amostras de campo. Em conclusão, a técnica de BR-Nested-RT-PCR desenvolvida no presente estudo, oferece uma opção de menor custo e menor complexidade do que a técnica de RT-PCR em tempo real para detectar e diferenciar estirpes do genótipo BR-I do VBI, sem comprometer a especificidade ou a sensibilidade, tendo, assim, o potencial de viabilizar a adoção de meios mais efetivos para o diagnóstico direto de estirpes do genótipo BR-I do VBI em amostras colhidas de aves mantidas em criações comerciais. / Infectious bronchitis (IB) is an acute and highly contagious disease of birds. IB is caused by infectious bronchitis virus (IBV), which usually results in significant economic losses for poultry farms. The extensive genetic variation, especially in the hypervariable regions (HVRs) of the S1 gene, is one of the main characteristics of the evolution of IBV, and results in the appearance of several variants that require a molecular diagnosis which includes the detection of these new strains, such as Brazilian I genotype (BR-I), since the detection and identification of the causative agent are essential for the control of the disease. Therefore, the diagnostic methods used must be sensitive, specific and inexpensive. A Nested-RT-PCR (BR-Nested-RT-PCR) technique was developed and evaluated in this study using a set of primers designed for the HVR3 region of the S1 gene for the detection and identification of Brazilian genotype strains of IBV present in biological samples from birds and compared with universal Nested-RT-PCR using universal primers for the same region of the S1 gene. The results demonstrated that the BR-Nested-RT-PCR technique had a high sensitivity to detect IBV strains from BR-I genotype and did not generate amplified products from heterologous virus samples tested (Newcastle disease virus, avian metapneumovirus, Reovirus and Gumboro disease virus), neither from IBV strains of other genotypes. In addition, the comparison between BR-Nested-RT-PCR techniques with the universal Nested-RT-PCR technique revealed good agreement (k = 0.67), relative sensitivity of 85.4% and relative specificity of 81.6 % for the direct detection and identification of BR-I genotype strains in field samples. In conclusion, the BR-Nested-RT-PCR technique developed in the present study offers a lower cost and less complex option than the real-time RT-PCR technique to detect and differentiate strains of the BR-I genotype of IBV without compromising specificity or sensitivity, and has the potential to provide a more effective mean for the direct diagnosis of BR-I IBV strains in samples collected from birds reared in commercial flocks. / CNPq: 132790/2015-7

Mais de 60% dos pacientes com Doença Pulmonar Obstrutiva Crônica (DPOC) podem apresentar hiper-responsividade brônquica. Entretanto, não se sabe se, além das vias aéreas, o tecido pulmonar periférico também apresenta uma resposta exagerada a um agonista na DPOC. No presente estudo foi investigado o comportamento mecânico in vitro e as alterações estruturais e inflamatórias do tecido pulmonar periférico de 10 pacientes com DPOC comparados com 10 controles não fumantes. Foram realizadas medidas de resistência (R) e elastância (E) de fatias pulmonares em situação basal e após desafio com Acetilcolina. Também foram analisados no tecido alveolar as densidades de neutrófilos, eosinófilos, macrófagos, mastócitos e linfócitos CD8+ e CD4+, além do conteúdo de células positivas para -actina de músculo liso, fibras elásticas e colágenas. Os valores de R após o tratamento com Acetilcolina (RACh) e a porcentagem de aumento de resistência (%R) foram significativamente maiores no grupo DPOC comparado ao grupo controle (p0,03). O grupo DPOC também apresentou densidade de macrófagos (p=0,04) e linfócitos CD8+ (p=0,017) significativamente maior e conteúdo de fibras elásticas significativamente menor (p=0,003) comparado ao grupo controle. Foi observada uma correlação positiva significativa entre a %R e a densidade de eosinófilos e linfócitos CD8+ (r=0,608, p=0,002; e r=0,581, p=0,001, respectivamente), e também uma correlação negativa significativa entre a %R e a relação VEF1/ CVF (r=-0,451, p<0,05). Concluímos que a resposta colinérgica de fatias de parênquima pulmonar está aumentada em pacientes com doença pulmonar obstrutiva crônica e parece estar relacionada tanto à densidade de eosinófilos e de linfócitos CD8+ no tecido alveolar quanto ao grau de obstrução determinado pela prova de função pulmonar. / Up to 60% of COPD patients can present airway hyperresponsiveness. However, it is not known whether the peripheral lung tissue also presents an exaggerated response to agonists in COPD. In this study we investigated the in vitro mechanical behavior and structural and inflammatory changes of peripheral lung tissue of 10 COPD patients and compared to 10 non-smoking controls. We measured resistance (R) and elastance (E) of lung strips at baseline and after acetylcholine (ACh) challenge. We further assessed the alveolar tissue density of neutrophils, eosinophils, macrophages, mast cells and CD8+ and CD4+ cells, and the content of -smooth muscle actin+ cells, elastic fibers and collagen fibers. Values of R after ACh treatment (RACh) and percent increase of tissue resistance (%R) were significantly higher in COPD group compared to controls (p0.03). There was a significantly higher density of macrophages (p=0.04) and CD8+ cells (p=0.017) and a lower elastic fiber content (p=0.003) in COPD group compared to controls. We observed a significant positive correlation between %R and eosinophil and CD8+ cells density (r=0.608, p=0.002; and r=0.581, p=0.001, respectively), and also a negative correlation between %R and FEV1/FVC (r=-0.451, p<0.05). We conclude that the cholinergic responsiveness of parenchymal lung strips is increased in COPD patients and seems to be related to alveolar tissue eosinophilic and CD8 lymphocytic inflammation and also to the degree of airway obstruction at pulmonary function test.

Introdução - As doenças respiratórias - asma, doença pulmonar obstrutiva crônica (DPOC), rinite alérgica, sinusite e bronquite aguda - estão entre as principais causas de morbidade, mortalidade e de encargos financeiros para população e para o sistema de saúde. Objetivo - Estimar a prevalência e os fatores associados às doenças respiratórias no município de São Paulo entre 2008 e 2009. Métodos - Estudo transversal, de base populacional, utilizando-se os dados do Inquérito de Saúde no Município de São Paulo 2008 (ISA-Capital 2008), conduzido de 2008 a 2009, com amostra total de 3.271 pessoas de ambos os sexos. As informações foram coletadas por entrevistas domiciliares e os participantes foram selecionados por amostragem probabilística, estratificada por sexo e idade e por conglomerados em dois estágios: setores censitários e domicílios. Associação entre variáveis independentes e dependentes foi verificada na análise bivariada pelo teste 2 com nível de significância de 5 por cento. Foram utilizadas razões de prevalência e intervalos de confiança de 95 por cento e para análise ajustada utilizou-se regressão múltipla de Poisson. Resultados - A prevalência estimada para asma foi 9,1 por cento (IC95 por cento: 7,0-11,7 por cento), DPOC 4,2 por cento (IC95 por cento: 3,1-5,4 por cento), bronquite aguda 7,3 por cento (IC95 por cento: 5,5-9,8 por cento), rinite 22,6 por cento (IC95 por cento: 19,3-26,2 por cento), e para sinusite 15,3 por cento (IC95 por cento: 12,6-18,5 por cento). Após análise ajustada, identificaram-se os seguintes fatores independentemente associados à asma: idade entre 5 e 9 anos, alergia, rinite, problemas de saúde nos últimos 15 dias à entrevista, número menor de cômodos no domicílio e raça/cor da pele preta/parda; à DPOC: idade acima de 60 anos, número de cigarros fumados na vida, cansar-se com facilidade, problemas de saúde nos últimos 15 dias à entrevista e inatividade física; à bronquite aguda: idade entre 5 e 9 anos, alergia, raça/cor da pele preta/parda, número menor de cômodos no domicílio; à rinite: alergia, asma, idade entre 10 e 14 anos e residir em apartamento; à sinusite: alergia, idade entre 15 e 19 anos e obesidade. Conclusões - Os achados do presente estudo apontam para importância da abordagem integrada da asma com rinite e alergias, considerando o conceito da \"via aérea única\". Deve-se considerar idades de maior prevalência de asma (5 a 9 anos) e a cor da pele preta/parta, e ainda, residências com poucos cômodos, devido aglomeração e baixo padrão de moradia; para DPOC, considerando a tendência de seu aumento em virtude da crescente longevidade da população, o diagnóstico precoce e a necessidade de abordagem educacional para cessação do tabagismo e prática de atividades físicas, são importantes para qualidade de vida destes indivíduos e redução do impacto econômico da doença para o sistema de saúde; os fatores associados à bronquite aguda foram presença de alergia, cor da pele preta e parda, e morar em domicílios com poucos cômodos; a rinite alérgica associou-se com asma e residir em apartamento; e a sinusite esteve associada com alergia e obesidade / Introduction - Respiratory diseases - asthma, chronic obstructive pulmonary disease (COPD), allergic rhinitis, sinusitis and acute bronchitis - are among the leading causes of morbidity, mortality and financial burden for the population and the health system in Brazil and worldwide. Objective - To assess the prevalence of and the risk factors for respiratory diseases in São Paulo City, 2008-2009. Methods - A population based cross-sectional study, using data from the São Paulo City Health Survey 2008 (ISA-Capital 2008), conducted in this city along 2008 and 2009, with total sample of 3271 people of both sex. A two stage cluster sampling stratified by sex and age was used. Descriptive statistics were produced and associations were investigated through chi-square tests and prevalence ratios with 95 per cent confidence intervals. Multiple Poisson regression allowed adjustment of effect estimates. Results - The estimated prevalence of asthma was 9.1 per cent (95 per centCI: 7.0-11.7 per cent), COPD 4.2 per cent (95 per centCI: 3.1-5.4 per cent), acute bronchitis 7.3 per cent (95 per centCI: 5.5-9.8 per cent), rhinitis 22.6 per cent (95 per centCI: 19.3-26.2 per cent), and sinusitis 15.3 per cent (95 per centCI: 12.6-18.5 per cent). After adjustment, the following were identified as risk factor to asthma: age, allergy, rhinitis, health problems in the preceding fortnight, homes with few rooms and black and mixed individuals; to COPD: number of cigarettes smoked in life, easily weary, age, health problems in the preceding fortnight and free-time physical activity; to acute bronchitis: age, allergy, black and mixed individuals and homes with few rooms; to rhinitis: allergy, asthma, age and living in flats; and to sinusitis: allergic, age and obesity. Conclusions - The findings of this study indicate the importance of the integrated approach to asthma, rhinitis and allergies, considering the concept of air only, and seek preventive and treatment options that work in a systematic way with respect to these conditions, when present simultaneously. One must consider the age group that has a higher prevalence of asthma, between 5 to 9 years, and black and mixed individuals, and also consider homes with few rooms, because of household crowding and the low standard of housing; for COPD, considering the trend of its increase due to increasing longevity, the need for early diagnosis and educational approach to smoking cessation and physical activity are extremely important for quality of life related to health of these individuals and reducing the economic impact of disease to the health system; factors associated with acute bronchitis were the presence of allergy, black and mixed individuals and those who lived in homes with fewer rooms; rhinitis was associated with asthma and lived in an apartment; and sinusitis was associated with allergies and obesity

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Um dos objetivos do presente trabalho foi realizar um estudo exploratório, afim de conhecer a opinião de diferentes segmentos da avicultura sobre a situação atual da ocorrência de BI nos planteis brasileiros e os custos que ela representa. Diante disso, surge então a necessidade do desenvolvimento de vacinas alternativas e seguras para controle da BI, entre elas a utilização de vacinas vetoriais. Dessa forma, com o objetivo de desenvolver uma vacina efetiva no controle da BI, amostras variantes de VBI foram clonadas em adenovírus humano recombinante e utilizadas para transfectar células HEK293, originando adenovírus recombinantes carreadores do gene N do VBI. Estes vírus foram purificados e utilizados como vacinas recombinantes para imunização de aves SPF. Com base nos dados obtidos, observou-se que apesar das diferentes estratégias de vacinação, a BI ainda é considerada uma doença de alta prevalência que continua causando significativas perdas econômicas na produção avícola de corte e postura no Brasil. Os resultados obtidos demonstraram que a vacina recombinante não induziu uma resposta sorológica detectável pelo teste de Elisa comercial utilizado, bem como não reduziu os escores de lesões nos tecidos das aves vacinadas e desafiadas. Assim, a vacina recombinante carreada por adenovírus defectivo expressando o gene N do VBI foi construída e caracterizada, porém se mostrou ineficaz e não induziu suficiente proteção às aves experimentalmente imunizadas frente ao desafio com VBI. / The infectious bronchitis virus (IBV) is the etiologic agent of Infectious bronchitis (IB), a highly contagious disease that causes great economic losses in the poultry industry. The IBV is an enveloped virus that has RNA single strand genome, encoding four structural proteins, among them Nucleoprotein (N), which is produced abundantly in viral infection and is known immunogenic. The IB control is done by immunization of birds by applying live attenuated vaccine, followed by vaccination using inactivated antigen, wherein the Massachusetts serotype is the only released for use in Brazil. One of the goals of the present work was to conduct an exploratory study in order to know the opinion of different segments of the poultry industry on the current situation of the occurrence of BI in Brazilian squads and the costs that it represents. Therefore, the development of alternative and safe vaccines to BI control is necessary, including the use of vectors. In order to develop an effective vaccine to IB control, samples from IBV field variants were cloned into recombinant human adenovirus and used to transfect HEK293 cells, resulting in recombinant adenovirus carriers of the N gene of the IBV. These recombinant viruses were purified and used as vaccines to immunization of SPF chickens. Based on the obtained data, it was observed that despite the different vaccination strategies, IB is still considered highly prevalent disease that causes significant economic losses in Brazilian poultry industry. The results here obtained showed that the recombinant vaccine does not causes detectable positive serological responses by commercial Elisa test in vaccinated chickens and does not reduce the tissues damage in vaccinated and challenged chickens. Thus, the recombinant vaccine carried by defective adenovirus expressing N gene of IBV was constructed and characterized, but seemed to be ineffective and did not induce sufficient protection to experimentally immunized chickens against IBV challenge.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:57Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2007-02-26Bitstream added on 2014-06-13T19:57:05Z : No. of bitstreams: 1 okino_ch_me_jabo.pdf: 1181305 bytes, checksum: cf91a5205aface873e536d06ccd0eb78 (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / A bronquite infecciosa das galinhas (BIG) é uma doença infecciosa que está amplamente disseminada entre as criações avícolas brasileiras e é uma das enfermidades virais que mais têm causado perdas econômicas na atualidade. Portanto, a rápida detecção e identificação do agente causal são imprescindíveis para que medidas eficazes de controle sejam prontamente tomadas. Para tanto, é necessário que os métodos de diagnóstico empregados sejam sensíveis, específicos, rápidos e também de baixo custo. Nesse contexto, a técnica de RTPCR em tempo real abordada no presente estudo permitiu a amplificação de duas regiões de hipervariabilidade do gene S1 de 17 estirpes diferentes do vírus da BIG (VBI), que foram testadas, mas não foi capaz de amplificar nenhum dos RNAvírus heterólogos analisados (vírus da doença de Newcastle, pneumovírus aviário e vírus da doença de Gumboro). Com essa mesma técnica foi possível fazer a diferenciação em grupos geneticamente distintos, de estirpes do VBI através de análises das curvas de dissociação de fragmentos amplificados a partir das regiões de hipervariabilidade gênica I e II do gene S1. A RT-PCR em tempo real desenvolvida apresentou maior sensibilidade na detecção do VBI em amostras teciduais, quando comparada à técnica padrão de Isolamento Viral em ovos embrionados de galinha... / The avian infectious bronchitis virus (IBV) is an infectious disease widely spread in Brazilian commercial poultries where causes significant economical losses. Rapid and accurate diagnosis of the IBV strain involved in a field outbreak is necessary to establish an effective control of this disease. The real-time RT-PCR performed in this study to amplify two hypervariable regions of S1 gene, was able to detect 17 IBV strains, e.g., nine reference strains (including Massachussets, Connecticut, JMK, SE 17 and Iowa serotypes) and eight Brazilian field isolates, whilst non-related avian viral pathogens such as Newcastle disease virus, Avian Pneumovirus and Gumboro disease virus were not detected. The differentiation between IBV strains was accomplished using the melting curve analysis of the amplified fragments corresponding to the hypervariable regions I and II of S1 gene. The real-time RT-PCR developed here showed a higher rate of IBV detection in tissue samples of experimentally infected chickens, when compared to the goldstandard technique of Viral Isolation in embryonated chicken eggs, and the same rate of detection was found for the conventional RT-PCR... (Complete abstract, click electronic access below)

Introdução - As doenças respiratórias - asma, doença pulmonar obstrutiva crônica (DPOC), rinite alérgica, sinusite e bronquite aguda - estão entre as principais causas de morbidade, mortalidade e de encargos financeiros para população e para o sistema de saúde. Objetivo - Estimar a prevalência e os fatores associados às doenças respiratórias no município de São Paulo entre 2008 e 2009. Métodos - Estudo transversal, de base populacional, utilizando-se os dados do Inquérito de Saúde no Município de São Paulo 2008 (ISA-Capital 2008), conduzido de 2008 a 2009, com amostra total de 3.271 pessoas de ambos os sexos. As informações foram coletadas por entrevistas domiciliares e os participantes foram selecionados por amostragem probabilística, estratificada por sexo e idade e por conglomerados em dois estágios: setores censitários e domicílios. Associação entre variáveis independentes e dependentes foi verificada na análise bivariada pelo teste 2 com nível de significância de 5 por cento. Foram utilizadas razões de prevalência e intervalos de confiança de 95 por cento e para análise ajustada utilizou-se regressão múltipla de Poisson. Resultados - A prevalência estimada para asma foi 9,1 por cento (IC95 por cento: 7,0-11,7 por cento), DPOC 4,2 por cento (IC95 por cento: 3,1-5,4 por cento), bronquite aguda 7,3 por cento (IC95 por cento: 5,5-9,8 por cento), rinite 22,6 por cento (IC95 por cento: 19,3-26,2 por cento), e para sinusite 15,3 por cento (IC95 por cento: 12,6-18,5 por cento). Após análise ajustada, identificaram-se os seguintes fatores independentemente associados à asma: idade entre 5 e 9 anos, alergia, rinite, problemas de saúde nos últimos 15 dias à entrevista, número menor de cômodos no domicílio e raça/cor da pele preta/parda; à DPOC: idade acima de 60 anos, número de cigarros fumados na vida, cansar-se com facilidade, problemas de saúde nos últimos 15 dias à entrevista e inatividade física; à bronquite aguda: idade entre 5 e 9 anos, alergia, raça/cor da pele preta/parda, número menor de cômodos no domicílio; à rinite: alergia, asma, idade entre 10 e 14 anos e residir em apartamento; à sinusite: alergia, idade entre 15 e 19 anos e obesidade. Conclusões - Os achados do presente estudo apontam para importância da abordagem integrada da asma com rinite e alergias, considerando o conceito da \"via aérea única\". Deve-se considerar idades de maior prevalência de asma (5 a 9 anos) e a cor da pele preta/parta, e ainda, residências com poucos cômodos, devido aglomeração e baixo padrão de moradia; para DPOC, considerando a tendência de seu aumento em virtude da crescente longevidade da população, o diagnóstico precoce e a necessidade de abordagem educacional para cessação do tabagismo e prática de atividades físicas, são importantes para qualidade de vida destes indivíduos e redução do impacto econômico da doença para o sistema de saúde; os fatores associados à bronquite aguda foram presença de alergia, cor da pele preta e parda, e morar em domicílios com poucos cômodos; a rinite alérgica associou-se com asma e residir em apartamento; e a sinusite esteve associada com alergia e obesidade / Introduction - Respiratory diseases - asthma, chronic obstructive pulmonary disease (COPD), allergic rhinitis, sinusitis and acute bronchitis - are among the leading causes of morbidity, mortality and financial burden for the population and the health system in Brazil and worldwide. Objective - To assess the prevalence of and the risk factors for respiratory diseases in São Paulo City, 2008-2009. Methods - A population based cross-sectional study, using data from the São Paulo City Health Survey 2008 (ISA-Capital 2008), conducted in this city along 2008 and 2009, with total sample of 3271 people of both sex. A two stage cluster sampling stratified by sex and age was used. Descriptive statistics were produced and associations were investigated through chi-square tests and prevalence ratios with 95 per cent confidence intervals. Multiple Poisson regression allowed adjustment of effect estimates. Results - The estimated prevalence of asthma was 9.1 per cent (95 per centCI: 7.0-11.7 per cent), COPD 4.2 per cent (95 per centCI: 3.1-5.4 per cent), acute bronchitis 7.3 per cent (95 per centCI: 5.5-9.8 per cent), rhinitis 22.6 per cent (95 per centCI: 19.3-26.2 per cent), and sinusitis 15.3 per cent (95 per centCI: 12.6-18.5 per cent). After adjustment, the following were identified as risk factor to asthma: age, allergy, rhinitis, health problems in the preceding fortnight, homes with few rooms and black and mixed individuals; to COPD: number of cigarettes smoked in life, easily weary, age, health problems in the preceding fortnight and free-time physical activity; to acute bronchitis: age, allergy, black and mixed individuals and homes with few rooms; to rhinitis: allergy, asthma, age and living in flats; and to sinusitis: allergic, age and obesity. Conclusions - The findings of this study indicate the importance of the integrated approach to asthma, rhinitis and allergies, considering the concept of air only, and seek preventive and treatment options that work in a systematic way with respect to these conditions, when present simultaneously. One must consider the age group that has a higher prevalence of asthma, between 5 to 9 years, and black and mixed individuals, and also consider homes with few rooms, because of household crowding and the low standard of housing; for COPD, considering the trend of its increase due to increasing longevity, the need for early diagnosis and educational approach to smoking cessation and physical activity are extremely important for quality of life related to health of these individuals and reducing the economic impact of disease to the health system; factors associated with acute bronchitis were the presence of allergy, black and mixed individuals and those who lived in homes with fewer rooms; rhinitis was associated with asthma and lived in an apartment; and sinusitis was associated with allergies and obesity

Mais de 60% dos pacientes com Doença Pulmonar Obstrutiva Crônica (DPOC) podem apresentar hiper-responsividade brônquica. Entretanto, não se sabe se, além das vias aéreas, o tecido pulmonar periférico também apresenta uma resposta exagerada a um agonista na DPOC. No presente estudo foi investigado o comportamento mecânico in vitro e as alterações estruturais e inflamatórias do tecido pulmonar periférico de 10 pacientes com DPOC comparados com 10 controles não fumantes. Foram realizadas medidas de resistência (R) e elastância (E) de fatias pulmonares em situação basal e após desafio com Acetilcolina. Também foram analisados no tecido alveolar as densidades de neutrófilos, eosinófilos, macrófagos, mastócitos e linfócitos CD8+ e CD4+, além do conteúdo de células positivas para -actina de músculo liso, fibras elásticas e colágenas. Os valores de R após o tratamento com Acetilcolina (RACh) e a porcentagem de aumento de resistência (%R) foram significativamente maiores no grupo DPOC comparado ao grupo controle (p0,03). O grupo DPOC também apresentou densidade de macrófagos (p=0,04) e linfócitos CD8+ (p=0,017) significativamente maior e conteúdo de fibras elásticas significativamente menor (p=0,003) comparado ao grupo controle. Foi observada uma correlação positiva significativa entre a %R e a densidade de eosinófilos e linfócitos CD8+ (r=0,608, p=0,002; e r=0,581, p=0,001, respectivamente), e também uma correlação negativa significativa entre a %R e a relação VEF1/ CVF (r=-0,451, p<0,05). Concluímos que a resposta colinérgica de fatias de parênquima pulmonar está aumentada em pacientes com doença pulmonar obstrutiva crônica e parece estar relacionada tanto à densidade de eosinófilos e de linfócitos CD8+ no tecido alveolar quanto ao grau de obstrução determinado pela prova de função pulmonar. / Up to 60% of COPD patients can present airway hyperresponsiveness. However, it is not known whether the peripheral lung tissue also presents an exaggerated response to agonists in COPD. In this study we investigated the in vitro mechanical behavior and structural and inflammatory changes of peripheral lung tissue of 10 COPD patients and compared to 10 non-smoking controls. We measured resistance (R) and elastance (E) of lung strips at baseline and after acetylcholine (ACh) challenge. We further assessed the alveolar tissue density of neutrophils, eosinophils, macrophages, mast cells and CD8+ and CD4+ cells, and the content of -smooth muscle actin+ cells, elastic fibers and collagen fibers. Values of R after ACh treatment (RACh) and percent increase of tissue resistance (%R) were significantly higher in COPD group compared to controls (p0.03). There was a significantly higher density of macrophages (p=0.04) and CD8+ cells (p=0.017) and a lower elastic fiber content (p=0.003) in COPD group compared to controls. We observed a significant positive correlation between %R and eosinophil and CD8+ cells density (r=0.608, p=0.002; and r=0.581, p=0.001, respectively), and also a negative correlation between %R and FEV1/FVC (r=-0.451, p<0.05). We conclude that the cholinergic responsiveness of parenchymal lung strips is increased in COPD patients and seems to be related to alveolar tissue eosinophilic and CD8 lymphocytic inflammation and also to the degree of airway obstruction at pulmonary function test.