Made available in DSpace on 2014-06-11T19:32:53Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-03-06Bitstream added on 2014-06-13T19:03:36Z : No. of bitstreams: 1 mota_mto_dr_sjrp_parcial.pdf: 431294 bytes, checksum: 8a35b5af948a58fd8c5f376fcc74b121 (MD5) Bitstreams deleted on 2015-03-16T11:30:19Z: mota_mto_dr_sjrp_parcial.pdf,Bitstream added on 2015-03-16T11:31:02Z : No. of bitstreams: 1 000713800.pdf: 10464868 bytes, checksum: 10d57c4036fc47b2a12a948347926dfe (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O carcinoma de pênis (CEP) é um tumor epitelial invasivo raro com alta morbidade decorrente da própria doença e/ou de seu tratamento. O perfil socioeconômico e cultural dos pacientes dificulta o diagnóstico precoce, tratament o e seguimento dos enfermos. Pacientes sem tratamento geralmente morrem dentro de dois anos após diagnóstico devido à proliferação celular regional ou a metástases distantes. Não há padrão nos sistemas de estadiamento e nas condutas clínicas, resultando em dificuldades na abordagem terapêutica. Comparado ao câncer cervical, poucos estudos moleculares em CEP foram realizados. O presente projeto teve como objetivo geral identificar genes diferencialmente expressos em tecidos penianos tumorais e normais e o possível papel do vírus do papiloma humano (HPV) no desenvolvimento de CEP. Diferenças na expressão gênica entre tecidos tumorais e normais foram verificadas pela metodologia de RaSH (rapid subctration hybridization), que selecionou 5 genes possivelmente rel acionados à carcinogênese ( KIAA1033, NAMPT, RPL6, CDKN2A e ANXA1) com expressão alterada em tecidos tumorais. A validação das alterações de expressão destes genes foi realizada por polymerase chain reaction (reação em cadeia da polimerase, PCR) em tempo real. Tanto os genes como as proteínas de ANXA1 como CDKN2A apresentaram aumento de expressão em pacientes com presença de HPV de alto risco em comparação com tecidos negativos para HPV. Por imunohistoquímica foi possível estabelecer correlação entre alterações na expressão da proteína anexina A1 e a presença de HPV de alto risco. Pacientes portadores de CEP provenientes de duas regiões (São Paulo e Pará) foram avaliados para a presença de HPV por PCR convencional. Amostras positivas foram genotipadas por hib ridização... / Penile carcinoma is a rare epithelial tumor with high morbidity due to own disease and/or treatment. The socio -economic and cultural profile of the patients hampers early diagnosis, treatment and follow-up. Without treat ment patients usually dies within two years after first diagnosis due to regional cellular proliferation or distant metastasis. There is no standard in staging systems or in clinical procedures, resulting in difficulties in the therapeutic approach. Compar ed to cervical cancer, there are few molecular studies about this tumor. The present work aimed to identify differentially expressed genes in tumor and normal penile tissues and the role of human papillomavirus (HPV) in the development of this tumor. Differences in gene expression between tumoral and normal tissues were accessed by RaSH (rapid subctration hybridization) methodology, which selected five possibly carcinogenesis related genes (KIAA1033, NAMPT, RPL6, CDKN2A and ANXA1) with altered expression in tumor tissues. The validation of gene expression changes was performed by real time polymerase chain reaction (PCR). The ANXA1 and CDKN2A, both genes and proteins, showed superexpression in patients with high-risk HPV compared to HPV negative tissues. Immunohistochemical assays established a correlation between alterations in the superexpression of annexin A1 and the presence of high risk HPV. Penile cancer harboring patients from two regions (São Paulo and Pará) was assessed for HPV presence by conventional PCR. Positive samples were genotyped by reverse hybridization-based line probe assay (INNO -LiPA). The overall HPV prevalence in single or multiple infections was significantly greater in Pará (81.67%) than in São Paulo (64.10%). A wilder range of genotypes were found in Pará, suggesting that the genotypes circulating in the population of Pará... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2015-04-09T12:28:07Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-07-30Bitstream added on 2015-04-09T12:48:22Z : No. of bitstreams: 1 000814908.pdf: 2391041 bytes, checksum: 13d22f38c1b9f1872035e29fa1940b72 (MD5) / Projetam-se que mais de 80 milhões de pessoas no mundo e um número significativo de animais serão atingidos pelo glaucoma até o final desta década. A doença perpetra-se como sem solução, obrigando a que se desenvolvam alternativas terapêuticas mais eficazes. A perda de visão decorre da morte de células ganglionares da retina (CGR) e de seus axônios, que compõem as fibras do nervo óptico. Avanços na compreensão da fisiopatologia evidenciam que isquemia local e que anormalidades de perfusão são condições decisivas na patogênese da neuropatia. Mostrou-se que o Sildenafila, fármaco vasodilatador, inibe a fosfodiesterase do tipo 5 (PDE-5), aumenta os níveis de guanosina monofosfato cíclica, prolonga efeitos do óxido nítrico (ON) e aumenta a sobrevida celular em modelos de lesão isquêmica. Objetivou-se avaliar o efeito neuroprotetor do tratamento citrato de sildenafila em ratos com hipertensão ocular aguda induzida, à histopatologia e à morfometria da retina e quanto à avaliação da expressão de marcadores relacionados à sobrevivência das CGR, empregando-se a imunohistoquímica (IHC) e a marcação TUNEL. Os Parâmetros histológicos observados foram: alterações celulares, vasculares e teciduais e os morfométricos foram: espessura das camadas da retina e contagem de células ganglionares. À IHC, observou-se a marcação da caspase-9, da caspase-3, do Bcl-2, da NOS-2, da PDE- 5, e da PDE-6. Foram avaliados olhos de 27 ratos, machos, adultos (Lewis/SsNHsd). Compuseram-se cinco grupos, um grupo controle composto por 3 animais, sem glaucoma e sem tratamento, e quatro grupos tratados compostos, cada um, por 6 animais com glaucoma agudo unilateral induzido, dos quais 3 foram tratados com Sildenafila e 3 tratados com placebo. Esses grupos foram separados conforme dia de indução do glaucoma até a eutanásia, em 1, 13, 14 e 20 dias, e receberam diferentes doses e períodos de tratamento. A indução do glaucoma ... / Protrude more than 80 million people worldwide and a significant number of animals are affected by glaucoma by the end of this decade. The disease perpetrates as unresolved, forcing them to develop more effective therapeutic alternatives. Vision loss results from the death of retinal ganglion cells (RGCs) and their axons, the fibers that make up the optic nerve. Advances in understanding the pathophysiology show that local ischemia and perfusion abnormalities are critical in the pathogenesis of neuropathy conditions. It has been shown that sildenafil drug vasodilator, inhibits phosphodiesterase type 5 (PDE -5) increases the levels of cyclic guanosine monophosphate extends effects of nitric oxide (NO) and increases cell survival in models of ischemic injury. Aimed to evaluate the neuroprotective effect of sildenafil citrate treatment in rats with induced acute ocular hypertension, by histopathological and morphometric examination of the retina and the evaluation of the expression of markers related to RGC survival , using immunohistochemistry (IHC) and TUNEL labeling. The observed histological parameters: cellular , tissue and vascular and morphometric changes were: thickness of the layers of the retina and ganglion cell count , IHC, there was labeling of caspase-9, caspase-3, Bcl-2, NOS-2, PDE-5, and PDE-6. Eyes of 27 rats, adult (Lewis/ SsNHsd) were evaluated after acute unilateral elevation of intraocular pressure (IOP). Composed by five groups , a control group of 3 animals without glaucoma and untreated and four treated groups consisting of 6 animals with induced unilateral acute glaucoma, of which 3 were treated with Sildenafil and 3 with placebo, these groups were separated by days of glaucoma´s induction to euthanasia, and they received districts dose and period of treatment. The induction of glaucoma was made by anterior chamber paracentesis needle attached to a bottle of saline solution 0.9 %, provided the height of 150 cm ...

Orientador: Bruno Watanabe Minto / Banca: Sheila Canevese Rahal / Banca: Luís Gustavo Gosuen Gonçalves Dias / Resumo: Diante das necessidades médicas e potenciais propriedades biológicas, as células-tronco mesenquimais (CTM) têm emergido como ferramenta terapêutica no âmbito da medicina veterinária. Objetivou-se neste estudo, avaliar a utilização das células-tronco mesenquimais autólogas derivadas de tecido adiposo (CTM-AD), associadas ou não a hidroxiapatita sintética absorvível (HAP-91®), na regeneração óssea em coelhos. Para isso, foram utilizados 34 coelhos fêmeas, da raça Nova Zelândia Branco. Os grupos experimentais foram divididos de acordo com o preenchimento do defeito ósseo de 1 cm de extensão criado na diáfise distal do rádio, em: GCTM na qual utilizou-se 0,15 mL de solução salina 0,9% com 2 milhões de CTM-AD autólogas; GCTMH, hidroxiapatita associada aos 2 milhões de CTM-AD autólogas; e GC (grupo controle), 0,15 mL de solução salina 0,9%. Obtiveram-se radiografias no período pós-operatório imediato, e aos 15, 30, 45 e 90 dias. Realizou-se análise histológica de metade dos animais de cada grupo, 45 dias após a cirurgia, e o restante aos 90 dias. No período de acompanhamento não foram observadas fístulas ou secreções. O GCTM apresentou menor intensidade de edema comparado aos demais grupos (p<0,05). O GCTMH apresentou escore médio de avaliação radiográfica maior em relação aos demais para os parâmetros reação periosteal, volume do calo ósseo e qualidade da ponte óssea, em todos os momentos de avaliação (p<0,05). Nas avaliações histológicas, o GCTM apresentou reparação óssea mais rá... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Mesenchymal stem cells (MSCs) have been emerging as therapeutic tool in the Veterinary practice, specially due to their biological properties and medical needs. The aim of this study was to evaluate the use of autologous adipose-derived mesenchymal stem cells (AD-MSC), with or without absorbable synthetic hydroxyapatite (HAP-91), in bone regeneration in rabbits. Thirty four New Zealand White female rabbits were used. The experimental groups were divided according to the 1.0 cm- bone gap filling created in the distal radial diaphysis: GCTM, 0.15 mL of 0.9% saline solution with 2 million autologous AD-MSC; GCTMH, hydroxyapatite associated with 2 million autologous AD-MSC; and GC (control group), 0.15 mL of 0.9% saline solution. Radiographs were taken on the immediate postoperative period and at 15, 30, 45 and 90 days postoperatively. Histological analysis was performed on one half of the animals in each group 45 and 90 days after the procedure. Fistulas or secretions were not seen in any animal. The GCTM showed less edema compared to other groups (p <0.05). The GCTMH showed a higher average score of radiographic evaluation compared to other groups for periosteal reaction parameters, the callus volume and bone bridge quality at all time points (p <0.05). In the histological evaluations, GCTM presented faster and more efficient bone repair compared to GCTMH and both were significantly superior to the control group. Therefore, it was concluded that the autologous CTM-AD, associated or not with hydroxyapatite, were beneficial to the bone regeneration process of the experimentally induced critical size segmental defect, and the GCTM presented superior results compared to GCTMH. / Mestre

Resumo: O presente trabalho apresenta um estudo de produção de ácido lático a partir de Lactobacillus rhamnosus imobilizado por aprisionamento em alginato de cálcio, com a utilização de soro de queijo como fonte de carbono alternativa à glicose encontrada tradicionalmente no meio MRS para bactérias láticas. A imobilização foi efetiva com 2 % de alginato, tendo eficiência de 99,99 %, e taxa de saída de células de 0,25 %, utilizando MRS como meio de cultivo. Estudou-se também o uso de fontes alternativas de nitrogênio como água de maceração de milho, Pro-Floo®, autolisado de levedura e sulfato de amônio. Os melhores resultados de produção e rendimento foram obtidos a partir da utilização de soro de queijo com as fontes de nitrogênio do MRS (extrato de levedura, peptona e extrato de carne), chegando a um rendimento (Yp/s) de 0,83, com produtividade de 0,90 g.L-1.h-1, seguido do cultivo com água de maceração de milho (AMM) e Pro-Floo®, com Yp/s de 0,72 e 0,57 respectivamente. No cultivo com água de maceração de milho a produção de ácido lático atingiu 119,04 g/L em 48 h. Com células livres, o melhor resultado de rendimento foi 0,73 quando de utilizou água de maceração de milho, com produtividade de 2,25 g.L-1.h-1 e produção de ácido lático de 107,89 g/L. Foram realizados dois ensaios utilizando uma modificação no alginato com ácido palmítico, para melhoria na viabilidade das células imobilizadas. Houve melhora no Yp/s quando se utilizou a alginato modificado com ácido palmítico passando de 0,72 para 0,79 no cultivo com AMM e de 0,57 para 0,67 quando se utilizou Pro-Floo®. Outro cultivo foi conduzido em reator de leito empacotado com imobilização em alginato recoberto de polietilenoimina, utilizando meio MRS. No reator pode-se observar a produção contínua de ácido lático até 72 horas com rendimento de 0,88 em 4 horas de cultivo atingindo uma concentração de 11,79 g/L de ácido lático. / Abstract: This work presents a study of lactic acid production by Lactobacillus rhamnosus immobilized by entrapment technique in calcium alginate, using whey as alternative carbon source, avoiding glucose use in the traditional MRS medium for lactic acid bacteria. Cell immobilization was effective using 2% of alginate, with efficiency of 99.99% and rate of cell release of 0.25 %. Alternative nitrogen sources like corn steep liquor (CSL), Pro-Floo®, autolyzed yeast and ammonium sulfate was also studied. The higher values of production and yield (Yp/s) were obtained in the cultivation with whey and the MRS nitrogen sources (yeast extract, peptone and meat extract), reaching an Yp/s of 0.83, and productivity of 0.90 g.L-1.h-1, followed by the cultivation with corn steep liquor and Pro-Floo®, with Yp/s of 0.72 and 0.57 respectively. With corn steep liquor, the lactic acid production reached 119.04 g/L in 48 h. In the culture with free cells the yield was 0.73 with corn steep liquor in 48 h, the productivity was 2.25 g.L-1.h-1 and production 107.89 g/L. Two experiments were done with a palmitolation of alginate to improve of immobilized cell viability. Increase in yield was obtained when palmitolation was employed; the yield increased from 0.72 to 0.79 in the cultivation using corn steep liquor, and from 0.57 to 0.67 when Pro-Floo® was used an alternative nitrogen source. Another experiment was realized in a packed-bed continuous reactor, with polyethyleneimine coated alginate beads, using MRS as culture medium. It was observed continuous lactic acid production until 72 h, with a yield of 0.88 in 4 hours reaching a lactic acid concentration of 11.79 g/L. / Orientador: Jonas Contiero / Coorientador: Cristina Jacques Bolner de Lima / Banca: Rubens Monti / Banca: Eliana Setsuko Kamimura / Mestre

Orientador: Josemeri Hebling / Banca: / Co-orientador: Fernanda Gonçalves Basso / Banca: Carla Raquel Fernanda mendonça / Banca: Francisco Wanderley Garcia de Paula e Silva / Banca: Andréa Abi Rached Dantas / Banca: Patrícia Petromilli Nordi Sasso Garcia / Resumo: Objetivou-­‐se  avaliar  os  efeitos  da  fototerapia  de  baixa  intensidade  realizada  com   diodos  emissores  de  luz  (LEDs)  nos  comprimentos  de  onda  azul  (455  nm)  e  vermelho   (630  nm)  sobre    o  metabolismo  de  células  pulpares.   Quatro  estudos  foram   desenvolvidos.  No  estudo  1  foi  avaliado  o  efeito  do  LED  vermelho  sobre  células   MDPC-­‐23,  utilizando-­‐se  dose  de  energia  fixa  (DE)  de  2J/cm2,  com  variação  da   densidade  de  potência  (DP)  em  20  e  40mW/cm2  e  frequência  de  exposição.  Vinte  e   quatro  horas  após  a  irradiação  foram  avaliadas  a  viabilidade  celular,  o  número  de   células  viáveis  e  a  dosagem  de  proteína  total.  No  estudo  2  investigou-­‐se  o  efeito  da   luz  azul  sobre  células  MDPC-­‐23.  Foram  utilizadas  DE  de  2J/cm2  e  4J/cm2  e  DP  de  20   mW/cm2    e  foram  avaliadas  a  viabilidade,  número  de  células  viáveis,  morfologia   celular  em  MEV  e  expressão  gênica  de  fosfatase  alcalina  (Alp),  colágeno  (Col-­‐I)  e   proteína  da  matriz  dentinária  (Dmp-­‐1).  O  estudo  3  deterrminou  os  efeitos   transdentinários  da  luz  azul  e   vermelha  sobre  células  MDPC-­‐23.  As  DPs  foram   ajustadas  em  40  e  80mW/cm2  para  luz  vermelha  e  azul,  respectivamente.  Após   irradiação  foram  avaliadas  a  viabilidade  celular,  atividade  de  fosfatase  alcalina,   produção  de  proteína  total  e  colágeno.  No  estudo  4  foram  investigados  os  efeitos   bioestimuladores  da  luz  azul  sobre  cultura  primária  de  polpa  humana.  Foram   utilizadas  DE  de  2  e  4J/cm2  com  DP  de  20mW/cm2... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The  overall  aim  of  this  work  was  to  evaluate  the  effects  of  the  low  level   phototherapy  using  light  emitting  diodes  (LEDs)  at  the  blue  (455nm)  and  red   (630nm)  wavelengths  on  the  metabolism  of  pulp  cells  in  culture.  Four  studies  were   performed.  In  the  first  study,  the  effect  of  red  LEDs  on  MDPC-­‐23  cells  was   investigated,  using  a  fixed  energy  dose  of  2J/cm2  and  varying  the  density  of  potency   in  20  and  40mW/cm2  and  the  frequency  of  irradiation.  Cell  viability,  number  of  viable   cells  and  production  of  total  protein  were  analyzed  after  24h  from  the  irradiation.  In   the  second  study  it  was  evaluated  the  effect  of  the  blue  light  on  MDPC-­‐23  cells.  The   energy  doses  of  2  or  4J/cm2  with  a  dose  of  potency  of  20mW/cm2  were  delivered  to   the  cells.  Cell  viability,  number  of  viable  cells,  cell  morphology  in  SEM  and  gene   expression  for  alkaline  phosphatase  (Alp),  collagen  (Col-­‐I)  and  dentin  matrix  protein   (Dmp-­‐1)  were  analyzed.  The  third  study  investigated  the  transdentinal  effects  of  a   blue  and  red  light  on  MDPC-­‐23  cells.  The  densities  of  potencies  were  adjusted  in  40   and  80mW/cm2  for  the  blue  and  red  lights,  respectively.  After  irradiation  of  the  cell   culture,  cell  viability,  alkaline  phosphatase  activity,  production  of  total  protein  and   collagen  were  determined.  Lastly,  the  biostimulatory  effect  of  the  blue  light  on  a   primary  culture  of  human  pulp  was  investigated  in  the  fourth  study. .. (Complete abstract electronic access below) / Doutor

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro Tecnológico. Programa de Pós-Graduação em Engenharia de Produção / Made available in DSpace on 2012-10-18T03:26:19Z (GMT). No. of bitstreams: 1 185089.pdf: 803035 bytes, checksum: a79f4fbfb38ffb211f3aff6c18b35f2e (MD5) / Diante da competitividade mundial, os produtos e seus processos de fabricação estão em constante evolução tecnológica para melhoria da qualidade e redução de custos. Com isso, o tempo utilizado pelas empresas na elaboração do dimensionamento de sua mão-de-obra, é um dos fatores que tem levado os responsáveis pelo dimensionamento a usarem grande parte das suas jornadas de trabalho na busca das melhores alternativas operacionais do sistema produtivo. Este trabalho apresenta um modelo de dimensionamento e distribuição dos operadores polivalentes em células de manufatura, o qual contempla toda cadeia interna de informações desde o Plano Mestre de Produção - PMP até a operação da célula. Baseado em planilhas eletrônicas, o modelo é desenvolvido a partir de um software simples e de fácil operação. O caráter prático da presente proposta de dimensionamento de operadores polivalentes constitui-se numa opção simples e de baixo custo para as empresas com processos repetitivos em lotes e que utilizam a polivalência dos operadores em células de manufatura apoiada na filosofia JIT/TQC

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Farmácia, Florianópolis, 2009 / Made available in DSpace on 2012-10-24T15:01:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 269228.pdf: 3161392 bytes, checksum: a6b36af7dc8cdedeb5b8793059d1a68e (MD5) / Os Herpes Simplex Virus tipos 1 e 2 (HSV-1 e HSV-2) são vírus envelopados de DNA, que causam várias infecções em humanos. O HSV-1 é geralmente associado a infecções orofaciais e encefalites, ao passo que o HSV-2 comumente causa infecções genitais. Ambos estabelecem infecções latentes em neurônios sensoriais e, durante a reativação, causam lesões na pele e mucosas. O aciclovir, um análogo de nucleosídeo, vem sendo muito utilizado para o tratamento sistemático de infecções pelos HSV. Ele é um fármaco antiviral altamente seletivo, pois é fosforilado pela timidina quinase somente em células infectadas. No entanto, o uso indiscriminado do aciclovir e de fármacos correlatos provocou o surgimento de cepas resistentes aos HSV, principalmente, em pacientes imunocomprometidos. Este fato ressalta a necessidade de desenvolver novos fármacos anti-herpéticos frente a cepas virais primitivas e/ou cepas fármaco-resistentes. Os produtos naturais são uma fonte rica de compostos com potenciais atividades farmacológicas, incluindo efeitos antivirais. Uma estratégia que pode ser utilizada para a pesquisa e o desenvolvimento de tais fármacos é a triagem de extratos de plantas, seguida pelo fracionamento bioguiado dos extratos bioativos visando à purificação de frações e subfrações bioativas e/ou ao isolamento do(s) composto(s) bioativo(s). As folhas da erva-mate (Ilex paraguariensis) são amplamente empregadas no Brasil, Argentina, Paraguai e Uruguai para a preparação de várias bebidas não alcoólicas, como o chimarrão. Considerando seus aspectos culturais e econômicos, o objetivo deste estudo foi avaliar a ação anti-HSV-1 e anti-HSV-2 do extrato bruto hidroetanólico e de frações e subfrações de folhas da erva-mate, através de um fracionamento bioguiado. Assim, este extrato bruto e seis subfrações, obtidas a partir da extração do mesmo com n-butanol seguida de outros processos extrativos e cromatográficos, foram avaliados frente ao HSV-1 (cepa KOS) e ao HSV-2 (cepa 333), através de diferentes estratégias metodológicas, utilizando as técnicas do MTT e de inibição da formação das placas de lise virais. Todas as amostras demonstraram baixos efeitos citotóxicos nas concentrações avaliadas em células VERO e GMH AH1 pelo ensaio do MTT. Esta triagem preliminar indicou que a subfração 5A (obtida da extração do resíduo NaOH com AcOEt) foi a mais ativa (IS=187.62, HSV-1 e IS=263,63, HSV-2) e seu mecanismo de ação foi investigado. Adicionalmente, foi então avaliada sua atividade virucida, sua ação antiviral em função do tempo de adição da mesma nas células, sua influência sobre a adsorção e a penetração dos vírus nas células, e sua interferência na dispersão viral intercelular e na síntese protéica viral. A partir dos resultados obtidos, concluiu-se que a atividade anti-herpética detectada parece ser mediada pela redução da infecciosidade viral, inibição da adsorção e da penetração dos vírus nas células e da difusão radial viral, diminuindo ou bloqueando a expressão das proteínas virais ICP27, ICP4, gD e gE. Esses resultados sugerem que a subfração 5A possui atividade anti-HSV-1 e anti-HSV-2, provavelmente correlacionada com as saponinas triterpênicas e os compostos fenólicos (flavonóides e ácidos fenólicos) existentes nesta subfração, através de um efeito sinérgico.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Bioquímica, Florianópolis, 2010 / Made available in DSpace on 2012-10-25T03:52:44Z (GMT). No. of bitstreams: 1 289110.pdf: 1050925 bytes, checksum: e297bbf3d275514b4ad96dad01cd52a3 (MD5) / O câncer está entre as causas mais freqüentes de morte no mundo. É considerado um importante problema de saúde pública em países desenvolvidos e em desenvolvimento, sendo a segunda causa de morte no Brasil e no mundo, superado somente pelas doenças do sistema cardiovascular. Apesar disto até o momento não existe uma terapia efetiva para o tratamento de todos os tipos de câncer além de que a maioria dos quimioterápicos em uso apresentam elevada toxicidade. Esforços vêm sendo dirigidos no sentido de desenvolver fármacos antitumorais tão ou mais eficazes do que os quimioterápicos já disponíveis, porém com menor toxicidade e potencial para desenvolver resistência terapêutica. Muitos dos medicamentos utilizados atualmente resultaram da purificação de produtos naturais, principalmente vegetais. Neste contexto, o presente projeto objetivou avaliar o potencial antitumoral de Cordia verbenacea planta medicinal brasileira, vulgarmente conhecida como erva baleeira que é popularmente utilizada em Santa Catarina para tratamento de tumores e inflamações. Para se atingir tal objetivo foram realizados experimentos para avaliar a atividade citotóxica e antiproliferativa in vitro e antitumoral in vivo. Para tanto, realizou-se os ensaios de viabilidade celular (MTT) em células de tumor ascítico de Ehrlich (TAE) e MCF-7, proliferação celular (incorporação de [3H] timidina) e capacidade pró-poptótica (Brometo de etídio/Laranja de acridina (BE/LA)) em células TAE. Além disso, verificou-se o possível efeito dos extratos sobre o DNA plasmidial (atividade nucleásica) assim como a capacidade protetora do extrato sobre o DNA (com a geração de espécies reativas de oxigênio com Fe-EDTA). Foi avaliada a expressão da COX-2 através de Wertern blot em células MCF-7. A determinação da atividade antitumoral in vivo foi realizada em camundongos Balb/c inoculados com o TAE e tratados com extrato bruto (EB) e supercrítico (ESC) nas concentrações de 37,5; 75 e 150 mg/Kg. Nos ensaios do MTT e incorporação de timidina triciada os resultados demonstraram que o EB e ESC reduziram de maneira significativa a viabilidade e proliferação celular. A coloração com BE/LA revelou que o provável tipo de morte celular induzida pelos tratamentos trata-se de apoptose, uma vez que a grande maioria das células adquiriram uma coloração laranja-avermelhada, característica de células apoptóticas. Os extratos mostraram-se ineficazes no teste de ativação nucleásica. O ESC foi capaz de reduzir significativamente a expressão da COX-2 em células MCF-7. Os ensaios in vivo demonstram que tanto EB quanto ESC apresentaram efeitos antitumorais, sendo os melhores resultados observados para a dose de 150 mg/Kg. O tratamento com os extratos também causou importante inibição do crescimento tumoral nos camundongos, principalmente o ESC. EB e ESC elevaram a proporção de células inviáveis/viáveis em mais de duas vezes quando comparado ao controle negativo. EB e ESC aumentaram o tempo médio de sobrevida e a concentração de GSH. De acordo com os resultados podemos concluir que ESC apresentou atividade antitumoral mais potente que o extrato bruto. Os resultados obtidos foram favoráveis à validação da utilidade de C. verbenacea como potencial agente antitumoral. Além disso, foi considerado que o método de extração supercrítica pode aprimorar a atividade antitumoral de C. verbenacea, como demonstrado com os resultados apresentados acima, uma vez que estes efeitos provavelmente se devam à presença de ?-humuleno e ?-cariofileno presente nos extratos, especialmente no extrato supercrítico. Também a partir dos resultados obtidos podemos supor que um possível mecanismo de ação antitumoral dos extratos possa ser a redução da expressão da COX-2, o que poderia levar a um bloqueio da sobrevivência celular e indução da apoptose.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Bioquímica, Florianópolis, 2010 / Made available in DSpace on 2012-10-25T06:10:24Z (GMT). No. of bitstreams: 1 280965.pdf: 2701870 bytes, checksum: a5029b89d148f5b308ec22279f8fb877 (MD5) / O desenvolvimento de novas alternativas terapêuticas, como as terapias que utilizam as plantas medicinais, tem despertado grande interesse no tratamento do câncer, pois as terapias disponíveis não são capazes de regredir totalmente a evolução da patologia e/ou apresentam elevada toxicidade. A C. sylvestris, planta medicinal que possui vários usos populares no Brasil e outros paises americanos, tem sido indicada para o tratamento de tumores. Nesse contexto, o presente trabalho propôs avaliar as atividades citotóxica, antiproliferativa, pró-apoptótica, antiangiogênica e antitumoral do extrato bruto (EB-ETOH), e das frações metanólica (f-MeOH), acetato de etila (f-AcOEt) e clorofórmica (f-CHCl3) de Casearia sylvestris utilizando modelos experimentais in vitro e in vivo. Nos ensaios do MTT e incorporação de timidina triciada realizados respectivamente, para investigar a citotoxicidade e influência dos extratos sobre a proliferação celular, os resultados demonstraram que EB-ETOH, f-CHCl3 e f-AcOEt reduziram de maneira significativa a viabilidade e proliferação de células do carcinoma de Ehrlich, sendo a citotoxicidade promovida pelo tratamento com esses extratos, tempo e concentração dependente. Diante do efeito citotóxico promovido por EB-ETOH, f-CHCl3 e f-AcOEt sobre células do carcinoma de Ehrlich, avaliou-se o tipo de morte celular promovida pelos tratamentos. A coloração com brometo de etídeo/laranja de acridina (BE/LA) revelou que o provável tipo de morte celular induzida pelos tratamentos trata-se de apoptose, uma vez que a grande maioria das células, após terem entrado em contato com a referida solução corante, adquiriram uma coloração laranja-avermelhada, característica da ocorrência do fenômeno apoptótico. Entretanto, em relação à avaliação da atividade nucleásica, verificada através da realização do teste de dano ao DNA plasmidial, observou-se que os efeitos antiproliferativo e citotóxico induzidos por EB-ETOH, f-CHCl3 e f-AcOEt, não são mediados por uma interação e dano direto ao DNA. Além disso, a realização desse ensaio permitiu observar que os extratos têm a capacidade de proteger o DNA do ataque induzido por EROs, excluindo-se portanto, a possibilidade de estarem exercendo seus efeitos citotóxico e antiproliferativo através da indução de estresse oxidativo no núcleo. As avaliações morfológicas e bioquímicas realizadas nas amostras obtidas de camundongos portadores do tumor ascítico de Ehrlich mostraram que os animais tratados com EB-ETOH e f-CHCl3 apresentaram menor ganho de peso corporal (26 e 31%, respectivamente) e de circunferência abdominal (52 e 58%, respectivamente), menor volume de líquido ascítico (46 e 43%, respectivamente), aumento do percentual de longevidade (48 e 40%, respectivamente) e da proporção de células inviáveis/viáveis (70 e 78%, respectivamente), quando comparados ao grupo controle negativo. Com a realização do modelo in vivo do TAE, observou-se ainda que o efeito antitumoral promovido por esses extratos é dose-dependente, uma vez que se apresentou-maior, quanto mais elevada a concentração de extrato administrada ao animal. A realização do ensaio do CAM, permitiu verificar que tanto o EB-ETOH, como f-CHCl3 de C. sylvetris, exercem um significativo efeito antiangiogênico, de maneira dose-dependente, onde a administração de 3,25; 7,5 e 15 µg/disco de EB-ETOH e f-CHCl3 foram capazes de diminuir o percentual de vasos, em torno de 54,5; 61,4 e 71% e 42,1; 59,1 e 70,9%, respectivamente. Por fim, cabe ressaltar que a realização da biometria dos embriões possibilitou observar que o tratamento dos mesmos com extrato bruto e fração clorofórmica não se apresentou tóxico, uma vez que não alterou o desenvolvimento embrionário nem a morfogênese externa, avaliados pelo comprimento total do embrião, razão comprimento cefálico/comprimento truncal e razão comprimento cefálico/comprimento total. Dessa forma, conclui-se que EB-ETOH e f-CHCl3 de C. sylvestris apresentaram efeito citotóxico, antiproliferativo, pró apoptótico e antitumoral in vitro e in vivo, sobre as células do carcinoma de Ehrlich. Tal efeito antitumoral mediado por esses extratos, não envolvem sua intercalação ao DNA, e sugere-se que se deva, pelo menos em parte, à inibição da formação de vasos e a conseqüente supressão nutricional das células tumorais.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde, Programa de Pós-graduação em Farmácia, Florianópolis, 2010 / Made available in DSpace on 2012-10-25T14:09:03Z (GMT). No. of bitstreams: 1 282615.pdf: 1949422 bytes, checksum: 590c4d341ae6a1774c58a4fb5020771a (MD5) / A mielofibrose primária (MP) é uma desordem mieloproliferativa crônica caracterizada pela hiperplasia e fibrose medular. A fibrose característica dessa desordem está relacionada à liberação de fatores de crescimento hematopoiéticos, dentre eles o fator derivado de plaquetas, que estimula a proliferação de fibroblastos, com conseqüente depósito de fibras colágenas e reticulínicas. O desenvolvimento de fibras de colágeno no lugar do tecido hematopoiético normal é o responsável pela maioria dos sintomas da doença. O exame histopatológico revela o aumento da reticulina fibrilar, do colágeno e dos fibroblastos na medula óssea (MO). O tratamento da doença é paliativo, visando amenizar os sintomas e melhorar a qualidade de vida do paciente. Atualmente não existe nenhuma terapia capaz de inibir o processo fibrótico. O objetivo desse trabalho é verificar o efeito do fármaco imatinibe em linhagens de células provenientes do estroma da MO de camundongos e linhagem celular fibroblástica S17 sob estímulo do PDGF in vitro na busca de uma terapia eficaz para a MP. Este fármaco foi desenvolvido para o tratamento da leucemia mielóide crônica e atualmente tem sido alvo de estudo para outras doenças. A partir da realização de cultura primária da medula óssea de camundongos (CP) e cultura das células S17 foi avaliada: a viabilidade celular do estroma medular e das células hematopoéticas pelo método de azul de tripan e 3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide, a yellow tetrazole (MTT), a viabilidade celular/apoptose das células S17 pelo método de laranja de acridina/brometo de etídio (LA/BE) e o ciclo celular pelo iodeto de propídio (IP) das células S17. O imatinibe exerceu um efeito inibitório sobre a viabilidade celular em CP a partir da concentração de 2,5 ?M em células do estroma e em células hematopoéticas e sob o estímulo do PDGF o efeito inibitório foi a partir de 2,5 ?M e 1,0 ?M respectivamente. O tipo celular predominantemente afetado pelo imatinibe nas CP foi os fibroblastos. O imatinibe exerceu um efeito inibitório sobre a viabilidade celular em células fibroblásticas S17 a partir da concentração de 2,5 ?M sem estímulo e 1,0 ?M com estímulo de PDGF. As IC50 calculada para as CP sem estímulo foi 14,2 ?M e com estímulo 13,5 ?M; para as células S17 sem estímulo foi 9,1 ?M e com estímulo 8,8 ?M. Na concentração de 7,5 ?M, o efeito inibitório foi de 48% e 55% para células S17 com e sem estimulo de PDGF, respectivamente. Com auxílio da técnica LA/BE confirmou-se os resultados anteriores de viabilidade da célula S17 sob ação do Imatinibe e mostrou que, em 5,0 ?M não houve processo de apoptose, porém em 7,5 ?M induziu apoptose.O imatinibe exerceu bloqueio do ciclo celular das células S17 nas fases G0/G1 e G2/M sem estímulo e com estímulo do PDGF. Com estímulo de PDGF houve aumento de células na fase S, sugerindo que o PDGF estimula as células S17 e que o fármaco atua principalmente nos fibroblastos em proliferação. / The antineoplastic agents affect cells that are in the process of cell division, thus rapid rate of cell renewal and differentiation of bone marrow (BM) makes the hematopoietic system a susceptible target toxicity by these agents. The BM is formed by a stroma composed of many cell types (fibroblasts, macrophages, endothelial cells and adipocytes) and an extracellular matrix that together form an ideal microenvironment favoring the modulation of quiescence, self-renewal and commitment of mesenchymal stem cells (MSCs), as well as proliferation, maturation and apoptosis of hematopoietic cells. In this context, the objective this work was to evaluate the effects of Imatinib Mesylate (IM), a drug inhibitor of tyrosine kinase proteins and receptors as c-Kit, platelet derived growth factor (PDGF), stem cell factor (SCF), c-Abl, BCR-ABL, involved in different signaling pathways of hematopoietic progenitor cells (CFU-GM) and stromal cells from BM of healthy mice. By clonogenic assays in semisolid medium and culture of adherent stromal cells from the BM, we evaluated the potential myelosuppressive of IM through the test cell viability MTT and Acridine Orange/Ethidium Bromide (AO/EB), cytochemistry to identify of adipocytes, cell cycle, cell proliferation by incorporation of BrdU and expression of alpha-smooth muscle actin (a-SMA). As for hematopoietic cells, the results showed that the MI gradually reduced the growth of colonies of granulocytes/macrophages (CFU-GM), the IC50 obtained was 26.5µM and total inhibition occurred at 60µM. The stromal cells in 4 and 8 days of culture, no significant difference in the percentage of proliferation measured by BrdU incorporation, and in 10µM there was a tendency to increase proliferation. In 14 days the proliferation decreased gradually and at 7.5 µM proliferation was reduced to about 5%. The percentage of viable cells by MTT was similar at 7 and 14 days, rising to 10µM and then reducing to reach 0% at 25µM. The morphology of most cells untreated and cells treated with low concentrations of IM (2.5µM) was typically fibroblastic, and in more elevated concentrations of IM (mainly from 10µM), the predominant cells were rounded morphology of type macrophages, which were inhibited only at high concentrations (20-25µM). Fluorescence with AO/EB showed the same results seen in the MTT and revealed the presence of apoptotic bodies, especially in 20µM, confirming the drug effect on cell viability. The cell cycle of stromal cells from the BM on day 14 of culture indicates the occurrence of blockage of cells in G0/G1 phase (66.3% in control to 91.5% in 15µM) and decreased the percentage of cells in S phase and G2/M. At 2.5µM, the expression of a-SMA decreased to 45.74% and was almost completely inhibited from 10µM. The presence of adipocytes stained with Oil Red was observed only in the control group. These results together suggest a myelossupressive effect of IM on healthy cells of the BM, which is undesirable since the majority of patients of will be exposed for a long time with this drug.