Orientador: Lourdes Campaner dos Santos / Banca: Maysa Furlan / Banca: Marcelo Aparecido da Silva / Resumo: As espécies da família Eriocaulaceae apresentam estudos químicos na literatura que descrevem a presença de substâncias com potencial biológico, com destaque para a planifolina em Paepalanthus planifolius. Apesar disso, existem poucos dados sobre a química dos microrganismos associados a essas espécies, como fungos endofíticos. Para esse estudo, selecionamos o fungo endofítico Microsphaeropsis arundinis, isolado dos capítulos de P. planifolius. O endófito foi cultivado em meios de cultivo líquido (Caldo Batata Dextrose, Caldo YM, Extrato de Malte, Caldo Nutrient e Caldo Czapek-Dox) e sólido (arroz parboilizado e milho canjica) e os extratos acetato de etila obtidos foram analisados quimicamente quanto a seu perfil cromatográfico por HPLC-PDA e biologicamente a partir da atividade antitumoral contra linhagens de câncer de mama e de câncer de pulmão. O extrato acetato de etila cultivado em arroz parboilizado demonstrou-se o mais ativo frente as linhagens de adenocarcinoma de mama murino (IC50 = 39,91 μg mL-1) e adenocarcinoma de mama humano (IC50 = 51,93 μg mL-1), sendo cultivado em escala ampliada e estudado fitoquimicamente buscando-se o isolamento das substâncias produzidas. A utilização de técnicas espectroscópicas e espectrométricas permitiu a identificação de oito substâncias, sendo as substâncias 1, 2, 3 e 7 inéditas na literatura e a substância 5 descrita pela primeira vez como produto natural. Uma análise biossintética mostra que as substâncias são provenientes da via d... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Species of Eriocaulaceae family showed some chemical studies that describe the presence of compounds with biological potential, such as planifolin in Paepalanthus planifolius . Despite these compounds, there are few data about the chemistry of the microorganisms associated with these species, such as endophytic fungi. For this study, we selected the endophytic fungus Microsphaeropsis arundinis, isolated from P. planifolius capitula. The endophyte was cu ltivate in liquid culture media (Potato Dextrose Broth, YM Broth, Malt Extract, Nutrient Broth and Czapek - Dox Broth) and solid culture media ( parboiled rice and corn) and the ethyl acetate extracts were chemically analyzed by HPLC - PDA and biologically eval uated against adenocarcinoma cell lines using MTT assay. The ethyl acetate extrac t cultivated in parboiled rice was the most active one against murine breast adenocarcinoma (IC 50 = 39,91 μg mL - 1 ) and human breast adenocarcinoma (IC 50 = 51,93 μg mL - 1 ), being select to cultivated on an enlarged scale and fractionated result in the isolation of major compounds . The use of spectroscopic and spectrometric techniques result in the ide ntification of eight compounds, with 1 ( 2Z, 5E ) - 4,7,9 - trihydroxy - 2,5 - decadienoic acid) 2 ( ( 2Z, 5E ) - 4 - acetoxy - 7,9 - dihydroxydeca - 2,5 - dienoic acid ), 3 ( ( 2Z,5E ) - 7 - acetoxy - 4,9 - dihydroxydeca - 2,5 - dienoic acid) and 7 ( 1 - (2,5 - dihydroxypheny l) - 3' - oxobutan - 2' ' - yl acetate) unpublished in ... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Marcelo Coelho Goiato / Coorientador: Sandra Helena Penha de Oliveira / Banca: Aimée Guiotti / Banca: Rafael Consani / Resumo: A prótese ocular é utilizada para a reabilitação estética e funcional da ausência ocular. O conhecimento da sua biocompatibilidade é importante para a utilização sem reações danosas aos usuários. O objetivo neste estudo foi avaliar a citotoxicidade de materiais utilizados na confecção de próteses oculares, por meio da análise da proliferação celular e da produção de citocinas pró-inflamatórias e de proteínas de matriz extracelular por células da conjuntiva humana. Inicialmente, foi analisada a influência de diferentes períodos de formação e de exposição dos extratos de resina acrílica branca (N1), termopolimerizada em água aquecida, sobre culturas de células da conjuntiva. Foram confeccionados 24 corpos de prova em resina, sendo 12 para cada período de exposição de células da conjuntiva aos extratos da resina testada (24 e 72 horas). Após a formação dos extratos por 24, 48 e 72 horas de imersão em meio de cultura e, 24 horas em água seguido de 24 horas de imersão em meio, os ensaios propostos foram realizados (n=3). Em seguida, foi avaliado o efeito citotóxico de diferentes métodos de polimerização de resina acrílica N1 em células da conjuntiva. Foram confeccionados 9 corpos de prova em resina (n=3), termopolimerizados em água aquecida, por energia de microondas ou ativados quimicamente, utilizados para a formação dos extratos dessas resinas. Os extratos foram obtidos após 72 horas de imersão dos corpos de prova em meio de cultura e, então, expostos às células da conjuntiva por 72 horas para a realização dos ensaios propostos. Adicionalmente, foi analisada a influência da presença do pigmento acrílico na confecção da prótese de resina acrílica N1, termopolimerizada em água aquecida... / Abstract: Ocular prosthesis is a treatment option for esthetical and functional rehabilitation of ocular absence. The knowledge of ocular prosthesis material's biocompatibility is important to ensure a safe use in patients. The aim of this study was to evaluate the cytotoxic effect of ocular prosthesis materials, through the analysis of the cell proliferation, and the production of proinflammatory cytokines and extracellular matrix proteins by a human conjunctival cell line. Initially, the influence of different preparation and exposition periods of eluates from heat-polymerized ocular prosthesis N1 color acrylic resin in human conjunctival cell line was evaluated. A total of 24 acrylic resin samples were manufactured and divided into 2 groups, according to the eluate exposition period to conjunctival cell line (24 and 72 hours). Eluates corresponding to 24, 48 and 72 hours of resin sample immersion in medium and, 24 hours of resin sample immersion in water followed by 24 hours of immersion in medium, were prepared (n=3) for the proposed tests. Then, the cytotoxic effect of different polymerization methods of ocular prosthesis N1 color acrylic resin was analyzed. A total of 9 acrylic resin samples were manufactured (n=3), according to the polymerization method: heat-polymerization in water bath, polymerization by microwave energy and auto-polymerization. Eluates corresponding to 72 hours of resin sample immersion in medium were prepared for proposed tests and exposed to conjunctival cell line for 72 hours. Additionally, the influence of pigment incorporation on the cytotoxicity of heat-polymerized ocular prosthesis N1 color acrylic resin was evaluated... / Mestre

Submitted by Lara Oliveira (lara@ufersa.edu.br) on 2017-08-09T21:59:31Z No. of bitstreams: 1 NaamaJAM_DISSERT.pdf: 599336 bytes, checksum: 04da1dc529b48d474733360a8a76b477 (MD5) / Approved for entry into archive by Vanessa Christiane (referencia@ufersa.edu.br) on 2017-08-17T22:39:28Z (GMT) No. of bitstreams: 1 NaamaJAM_DISSERT.pdf: 599336 bytes, checksum: 04da1dc529b48d474733360a8a76b477 (MD5) / Approved for entry into archive by Vanessa Christiane (referencia@ufersa.edu.br) on 2017-08-17T22:41:33Z (GMT) No. of bitstreams: 1 NaamaJAM_DISSERT.pdf: 599336 bytes, checksum: 04da1dc529b48d474733360a8a76b477 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-08-17T22:41:40Z (GMT). No. of bitstreams: 1 NaamaJAM_DISSERT.pdf: 599336 bytes, checksum: 04da1dc529b48d474733360a8a76b477 (MD5) Previous issue date: 2015-02-11 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The species Allium cepa is widely used in studies such as biological indicator of toxicity and can be affected by other plant extracts through allelopathy. Many toxic plants of livestock interest have allelopathic compounds and cause damage to animal health. Among these plants is Licania rigida (oiticica). The objective of this study was to evaluate the toxic and cytotoxic effects of L. rigida extracts in bulbs of A. cepa. The bulbs were incubated in distilled water (negative control) and at concentration 5 mg/L, 50 mg/L and 300 mg/L of aqueous extracts of dried and fresh leaves. It was evaluated the root growth and relative inibition. With the bulbs blades were made of meristematic root cells for the evaluation of cytotoxicity. The extracts of the dry and fresh leaves in bulbs caused inhibition at concentrations of 5 mg/L and 300 mg/L, while the concentration of 50 mg/L stimulated. It was not observed cytotoxic activity of the aqueous extracts of dried and fresh leaves, because there were no statistically significant differences / Plantas tóxicas de interesse pecuário ocasionam prejuízos relevantes aos produtores. No Nordeste brasileiro, essas plantas causam perdas econômicas diretas e indiretas por prejudicarem a saúde dos animais. Entre estas plantas está incluída a espécie Licania rigida, popularmente denominada oiticica. É encontrada na maioria dos estados do Nordeste e suas folhas podem ser utilizadas na alimentação de caprinos e ovinos na região do semiárido. Foram avaliados os efeitos tóxico, citotóxico e mutagênico de extratos aquosos de folhas de L. rigida em Allium cepa (cebola) e em camundongos Swiss (Mus musculus). Para avaliações em bulbos de cebola (crescimento de raízes e índice mitótico) foram utilizados folhas secas e frescas, no seguinte delineamento experimental: controle negativo: (água destilada); concentração de 5 mg/L, 50 mg/L e 300 mg/L do extrato. E para camundongos foram utilizadas apenas o extrato de folhas secas para avaliação comportamental, de mortalidade (DL50), mutagenicidade (teste do micronúcleo) e citotoxicidade (células binucleadas). Não houve citotoxicidade, mas sim efeito subletal na concentração de 300 mg/L do estrato de folhas frescas e pode ter ocorrido efeito alelopático dos dois tipos de extratos sobre os bulbos de cebola. Em camundongos, o extrato de folhas secas ocasionou mudanças comportamentais e apresentou toxicidade (DL50=502,76 mg/kg). Não foram evidenciadas mutagenicidade e citotoxicidade, pois os resultados entre os tratamentos não apresentaram diferenças estatisticamente significativas (α=0,05) / 2017-08-09

Orientador: Carlos Roberto Gandini / Banca: Rondinelli Donizetti Herculano / Banca: Mirian de Lourdes Noronha Motta Melo / Banca: Walter José Botta Filho / Banca: Arnaldo Rodrigues dos Santos Junior / Resumo: As ligas compostas por titânio, molibdênio e nióbio integram uma nova classe de ligas às base de titânio, sem a presença de alumínio e vanádio (que apresentam citotoxidade) e que possuem baixo valores do módulo de Young (abaixo de 100 GPa). Isto ocorre pelo fato destas ligas possuírem estrutura B, bastante atraentes para o emprego como biomateriais. Neste tipo de ligas, as variáveis de processamento podem ser controladas mais facilmente em relação às ligas a w a-B, objetivando a obtenção de propriedades melhoradas como menor módulo de elasticidade, aumento da resistência corrosão e melhor resposta do tecido ósseo. Neste trabalho foi estudado o efeito de tratamentos térmicos nas propriedades mecânicas, eletroquímicas e biocompatibilidade de ligas do sistema Ti-15%pMo-XNb(0,5, 10, 15 e 20% em peso). As ligas foram fundidas em forno a arco e caracterizadas por difração de raios X e análise pelo Método de Rietveld, microscopia eletrônica de varredura, espectroscopia por energia dispersiva (EDS), microdureza, módulo de elasticidade, resistência à corrosão e citoxidade. Com a adição de nióbio, diminui-se consideravelmente a microdureza e o mesmo ocorreu com o módulo de elasticidade, com valores em torno 80 GPa, bem abaixo do materiais metálicos comercialmente para este tipo de aplicação. Com adição de oxigênio existe uma tendência de aumento da microdureza e do módulo de elasticidade. A resistência à corrosão das ligas aumentou consideravelmente com a adição de nióbio, possuindo uma baixa densidade de corrente de corrosão. Os ensaios de citotoxidade in vitro mostraram aumento na viabilidade celular com base nos ensaios de MTTe Cristal de Violeta. Das ligas produzidas, destaca-se a Ti-15Mo-20Nb, pois possui menor microdureza e módulo de elasticidade, além de ter aumentado a viabilidade celular / Abstract: Alloys composed by titanium, molybdenum and niobium are part of a new class of titanium-based alloys, without the presence of aluminum and vanadium (which exhibit cytotoxicity) and that have low values of Young's Modulus (below 100 GPa). This occurs because these alloys have B structure, very attractive for employment as biomaterials. In this type of alloys, processing variables can be controlled more easily in relation to a - B alloys, aiming improved properties like lower modulus of elasticity, increased corrosion resistance and better response of bone tissue. In this work, we studied the effect of the addition of oxygen and heat treatments on the mechanical and electrochemical properties, and cytotoxicity, of Ti-15wt%Mo-XNb (X= 0,5, 10, 15 and 20 w%) alloys system. The alloys were melthed in arc-furnace and characterized by x-ray diffraction techniques and analysis by Rietveld method, optical and scanning electron microscopy, energy dispersive spectroscopy, (EDS), microhardness, modulus of elasticity, resistance to corrosion and cytotoxicity, The results showed promising results with the addition of niobiu. With the addition of niobium, occurs considerably decreases in the microhardness and the same occurred with the modulus of elasticity, with values around 80 GPa, below the metallic materials used commercially for this type of application. With the addition of oxygen there is a trend of increasing microhardness and modulus of elasticity. The corrosion resistance of alloys that has increased considerably with the additoion of niobium, prossessing a low corrosion current density. Cytotoxicity assays demonstrated in vitro cell viability based on MIT assay and Crystal Violet. Alloys produced, highlight the Ti-15Mo-20Nb, because it has lower hardness and modulus of elasticity, in addition to cell viability / Doutor

Submitted by Hiolanda Rêgo (hiolandarego@gmail.com) on 2017-05-24T18:47:40Z No. of bitstreams: 1 Tese_Med_Taís Menezes Cerqueira Campos de Brito.pdf: 1736787 bytes, checksum: 003a13a8467c51581b7ceeef54973d9e (MD5) / Approved for entry into archive by Delba Rosa (delba@ufba.br) on 2017-07-03T14:43:37Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Tese_Med_Taís Menezes Cerqueira Campos de Brito.pdf: 1736787 bytes, checksum: 003a13a8467c51581b7ceeef54973d9e (MD5) / Made available in DSpace on 2017-07-03T14:43:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese_Med_Taís Menezes Cerqueira Campos de Brito.pdf: 1736787 bytes, checksum: 003a13a8467c51581b7ceeef54973d9e (MD5) / CNPq;NIH;INCT-DT / Introdução: Leishmaniose cutânea (LC) devido à infecção por L. braziliensis é caracterizada pelo desenvolvimento de lesões cutâneas ulcerativas. Recentemente, atenção tem sido dada à participação das células T CD8+ para a resposta inflamatória deletéria observada em pacientes com LC. Foi demonstrado que estas células contribuem para a imunopatologia através da produção de citocinas pró-inflamatórias, granzima e perforina. Em adição às células T CD8+, células NK e NKT são também importantes fontes de citocinas pró-inflamatórias, granzima e perforina, e o papel destas células na infecção por L. braziliensis ainda não foi investigado. Objetivo: Avaliar o papel das células NK na infecção por L. braziliensis. Métodos: As células mononucleares de sangue periférico foram obtidas a partir de indivíduos saudáveis e de pacientes com LC para a marcação ex-vivo com CD56, CD8, CD3, e marcação intracelular para granzima e perforina. As células derivadas de biópsias foram obtidas para imunofenotipagem por citometria de fluxo e imunohistoqímica. Resultados: Identificamos quatro sub-populações de células citotóxicas: células NK (CD8-CD3-), células NK (CD8dimCD3-), células NKT-like (CD8brigthCD3+) e células T CD8+. Observamos que as frequências de sub-populações de células NK (CD8- e CD8+) estavam aumentadas no sangue periférico de pacientes com LC quando comparadas com IS, e estas duas populações expressam mais granzima e perforina do que as células T CD8+ em pacientes com LC. Observamos ainda que as células NK derivadas de lesões de pacientes com LC expressam mais CD107a, marcador de degranulação, do que as células T CD8+. E que as células NK contribuem para destruição de parasitos na infecção por L. braziliensis Conclusão: Os nossos dados sugerem uma dicotomia funcional das células NK na leishmaniose cutânea, participando tanto na patogênese da doença quanto na destruição de parasitos.

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Bioquímica, Florianópolis, 2016. / Made available in DSpace on 2017-05-23T04:20:46Z (GMT). No. of bitstreams: 1 345668.pdf: 3466947 bytes, checksum: 8f8acf54e8d086bb86ac5ce18eb535fa (MD5) Previous issue date: 2016 / A relevância etnofarmacológica de Piper nigrum L. (Piperaceae) (pimenta preta) se revela nas preparações herbais da medicina tradicional usadas para tratamento inflamação, febre, asma e câncer. No Brasil, o conhecimento tradicional quilombola atribui à pimenta preta efeitos benéficos sobre a saúde incluindo redução de inflamação. Nesta pesquisa buscou-se validar tal uso tradicional através de estudos fitoquímicos e bioquímicos realizados após tratamentos com extrato etanólico (ET) e supercríticos (ESC) produzidos com pimenta preta (Piper nigrum L. cultivar Bragantina). Estes extratos foram considerados como melhor tecnologia disponível para extrair metabólitos secundários. O extrato etanólico (ET) foi obtido por maceração (72 h) com rendimento de 6,40 ± 0,03 %. Os extratos supercríticos foram produzidos com dióxido de carbono supercrítico mantido na pressão de 150 bar (ESC150); de 200 bar (ESC200 ou ESC200+EtOH com etanol como cossolvente; 7,5 %) ou de 300 bar (ESC300). Cromatografia de camada delgada revelou piperina, pepirilina e retrofractamida C nos extratos. Após a purificação das bandas foram confirmados fragmentos de massa destas alcamidas (Espectrometria de massas por eletronebulização). Análise por cromatografia líquida de alta eficiência mostrou que o extrato ESC200 teve maior conteúdo de piperina (60,3 ± 0,1 %) comparativamente ao ET (32,12 ± 0,11 %). Análise por cromatografia gasosa acoplada à espectrômetro de massa revelou em ESC200 a presença de sesquiterpenos majoritários ß-cariofileno, a-humuleno e ß-copaeno. Enquanto que ET apresentou principalmente ß-cariofileno, a-copaeno e ß-bisaboleno. Todos extratos foram ativos in vitro contra células de tumor de mama (MCF-7; 24 ou 72 h), mas ESC200 foi mais citotóxico (1 ? 100 µg/ml; CE50=14,4 ± 3,3 µg/ml; 72 h), inibindo de maneira dose-dependente a proliferação clonogênica (MCF-7) após tratamento com ESC200 (20 ou 40 µg/ml; 24 h) causando maior diminuição da área das colônias. Houve considerável aumento na geração intracelular de EROS após tratamento com o extrato ET. Observou-se intercalação e danos oxidativos ao CT DNA causados por compostos presentes nos extratos. ESC200 (20 µg/ml) causou mais danos oxidativos comparativamente ao ET (p<0,001). O extrato ET (1000 e 2000 µg/ml) causou quebras duplas no DNA plasmidial. Na primeira parte do estudo realizado in vivo os camundongos (Balb/c; machos; n=12) foram inoculados com células do carcinoma ascítico de Ehrlic (TAE) e tratados por via i.p. com ET (100 mg/kg/dia; 9 dias). Este tratamento causou inibição do crescimento tumoral (60 %) com aumento de sobrevida (76 %) associados ao aumento de morte por apoptose destas células. ET (100 mg/kg/dia) determinou maior expressão de proteínas pró-apoptose Bax e p53 com diminuição da expressão de proteína anti-apoptose Bcl-xL. ET (100 mg/kg/dia) causou parada do ciclo celular em G1 das células de TAE devida à diminuição da expressão de ciclina A nestas células. Adicionalmente, o tratamento com ET (100 mg/kg/dia) estabeleceu condições pró-oxidantes nas células de TAE com maior atividade da CAT, da SOD e da glutationa redutase; com depleção de GSH e elevação dos níveis de peroxidação de lipídios e carbonilação proteica. Tal efeito antitumoral observado com o extrato ET (100 mg/kg/dia) sugere ser parcialmente decorrente do aumento da geração de EROs e condições pró-oxidantes citotóxicas estabelecidas nas células tumorais. Enquanto que na segunda etapa (Parte II) de estudos realizados in vivo os camundongos Balb/c (machos, n=16) foram tratados via i.p. com ET e ESC200 (10 ou 20 mg/kg/dia; 9 dias). Os melhores resultados foram obtidos com 10 mg/kg/dia para ESC (200 bar) com inibição no crescimento tumoral (76 %) e aumento da sobrevida (67 %) comparativamente aos tratamentos com ET (42 % de inibição tumoral e 56 % de sobrevida). Nos tratamentos com ET observou-se parada do ciclo das células de TAE na fase G1 enquanto houve parada do ciclo na fase G2/M para as células de TAE coletadas dos animais tratados com ESC (200 bar). Houve aumento de apoptose das células de TAE que foi significativamente maior nas células de TAE dos animais tratados com ESC (200 bar). Assim, a extração supercrítica realizada para produzir o extrato ESC (200 bar; 40 oC, 240 min) pode ser considerada como melhor tecnologia apropriada para a obtenção de piperina, alcamidas e terpenóides. Ademais, o sinergismo entre estes compostos provavelmente promoveu as atividades antiproliferativa e antitumoral observadas in vitro e in vivo.<br> / Abstract : Ethnopharmacological relevance of Piper nigrum L. (Piperaceae) could be revealed through herbal formulations used to inflammation, fever, asthma and cancer. Brazilian quilombola traditional knowledge links black pepper with health recovery and inflammation reduction. The aim of the current work was to validate such traditional uses through phytochemical and biochemical studies after treatments done with ethanolic extract (ET) and supercritical extracts (SFE). Extracts were produced with black pepper (Piper nigrum L. cultivar Bragantina). Both were the best available postharvest technology to extract secondary metabolites. ET (ethanolic maceration; 72 h) had highest yield (6.40 ± 0.03 %). Supercritical carbon dioxide delivered at same temperature (40 oC) and at increased pressure allowed to produce extracts at 150 bar (SFE150); at 200 bar (SFE200 or SFE200+EtOH done with ethanol as co-enhancer; 7.5 %) and 300 bar (SFE300). Thin layer chromatography (TLC) showed piperine, piperyline and retrofractamide C in the extracts. Further purification of TLC bands allowed confirming alkamide key mass spectra fragments (Electro Spray Ionization Mass Spectrometry). HPLC analysis showed SFE200 higher content of piperine (60.3 ± 0.1 %) comparatively to ET (32.12 ± 0.11 %). SFE200 GC/MS analysis showed sesquiterpenes caryophyllene, alpha-humulene and ß-copaene. While ET had caryophyllene and germacrene D. All extracts were cytotoxic against breast cancer cells (MCF-7; 24 or 72 h), but SFE200 was more cytotoxic (1 ? 1000 µg/ml; EC50=14.4 ± 3.3; 72 h), and inhibited dose-dependently MCF-7 cells clonogenic proliferation with area reduction (SFE200; 20 or 40 µg/ml, 24 h) (p<0.001). All treatments enhanced considerably intracellular ROS generation. Extracts compounds were capable to intercalate and cause CT DNA oxidative damage. SFE200 mainly at 20 µg/ml caused significant CT DNA oxidative damage comparatively to ET (p<0.001). Treatment (24 h) with higher ET concentrations (1000 and 2000 µg/ml) caused plasmid DNA fragmentation with double strand brakes. First part of this thesis (Part I) showed in vivo studies done with Balb mice (male, n=12) bearing Ehrlich ascites carcinoma cells (EAC) treated intraperitoneally with ET (100 mg/kg/day; 9 days). ET induced inhibition of tumor growth (60 %) and improved mice survival (76 %). Also increased apoptotic EAC cells correlated with increased expression of Bax and p53 and decreased of anti-apoptotic Bcl-xL. Additionally, ET (100 mg/kg/day) caused EAC cells cycle arrest at GI with reduction in S related to decreased expression cyclin A. EAC cells oxidative stress status was increased by treatment (ET, 100 mg/kg/day) augmenting the activity of catalase, superoxide dismutase and glutathione reductase, followed by GSH depletion and increased levels of lipoperoxidation and protein carbonylation. These findings suggests ET (100 mg/kg/day) antitumor activity could be partially due to increased ROS generation and cytotoxic pro-oxidant conditions in tumor cells. Comparative in vivo studies done at Part II showed mice (Balb/c; male; n=16) treated intraperitoneally with ET or SFE (200 bar) at 10 or 20 mg/kg/day (9 days). Mice treatment with ET or ESC 200 bar (10 mg/kg/day) caused EAC cells growth inhibition (40 and 76 %, respectively) and increased mice survivor time by 56 e 67 %, respectively. EAC cells cycle was arrested at G1 for treatment with ET and at G2/M for ESC (200 bar). Both treatments increased EAC cells death through apoptosis but ESC (200 bar) was more significant (p<0.001). ESC (200 bar; 40 oC; 240 min) was the best available technology to the extraction of alkamides and terpenoids. Moreover, synergism between extracted phytocompounds probably promoted antiproliferative and anti-tumor activities observed in vitro and in vivo.

CARVALHO, Edinilton Muniz. Reatividade do Nitrosilo Complexo de Ferro trans-[Fe(cyclam)(NO)Cl]Cl2. 2015. 169 f. Dissertação (Mestrado em Química)-Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2015. / Submitted by Jairo Viana (jairo@ufc.br) on 2017-04-27T23:10:01Z No. of bitstreams: 1 2015_dis_emcarvalho.pdf: 6115679 bytes, checksum: c7683c81230542c04a08aa6928f54ec7 (MD5) / Approved for entry into archive by Jairo Viana (jairo@ufc.br) on 2017-04-27T23:10:16Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2015_dis_emcarvalho.pdf: 6115679 bytes, checksum: c7683c81230542c04a08aa6928f54ec7 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-04-27T23:10:16Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2015_dis_emcarvalho.pdf: 6115679 bytes, checksum: c7683c81230542c04a08aa6928f54ec7 (MD5) Previous issue date: 2015 / Nitric oxide (NO), produced endogenously, is responsible for vasodilation of blood vessels and other physiological processes. The nitroxyl ion (NO-), a species generated by monoeletronic reduction of NO, has rised the interest of the scientific community due to its distinct biological activity of nitric oxide. Sodium nitroprusside (SNP) is part of a class of compounds that release NO, being the only metal complex used clinically, but there are problems associated with their use, including photosensitivity and release of cyanide. Therefore, alternative compounds including iron-based ones have been studied, such as trans-[Fe(cyclam)(NO)Cl]Cl2, whose studies of chemical reactivity as well as its precursor (trans-[Fe(cyclam)Cl2](PF6)), were investigated in this work. In addition, we evaluated the potential anticancer and microbicides these complexes. The nitrosyl complex showed the ability to release NO under physiological conditions and spontaneously when stimulated by light. The NO released by nitrosyl complex thermally and photochemically was probed by the reaction with selective traps at different. The half-life values (t1/2) for reaction of nitrosyl complex with cPTIO were 115 (k = 0.1 x 10-3 s-1) and 385 (k = 3.0 x 10-5 s-1) minutes to photochemical and thermal reactions, respectively, being well known that light accelerates the process of release. The photochemical test using myoglobin is indicated release of NO, however it was not possible to determine the rate of this reaction. The reaction of the complex with glutathione (GSH) was monitored by electron paramagnetic resonance (EPR) and suggested the production of HNO. Kinetic results for this reaction indicates that there is the formation of a reactive intermediate with band at 541 nm, likely the adduct trans-[Fe(cyclam)(Cl)N(O)SG]+. The rate constants indicate that the first intermediate rapidly forms (kobs = 2.79 s-1) and decays slowly (kobs = 7.17 x 10-5 s-1). The high stability of this intermediate can be related to its ability to engage in intramolecular interactions. Vasodilation assay showed that complex trans-[Fe(cyclam)(NO)Cl]2+ has vasodilating activity with EC50 = 910 nmol L-1. It was also found that the nitrosyl complex presented scavenging activity toward O2•⎯ ions, thus having antioxidant potential. Electrophoresis experiments employing plasmid DNA and the complex trans-[Fe(cyclam)Cl2]+ and trans-[Fe(cyclam)(NO)Cl]2+, showed nuclease activity stimulated by light (350 and 460 nm) or stimulated by biologically relevant agents (H2O2 and GSH). However, cell viability assays with cancer cells showed that both complexes have low cytotoxic activity, the complex trans-[Fe(cyclam)Cl2]+ and trans-[Fe(cyclam)(NO)Cl]2+, respectively, showed IC50 values equal to: 8.5 and 144.2 mol L-1 against strain B16-F10 cells, and 130.4 and 142.9 mol L-1 against HUH-7 cell line. Additionally, preliminary tests of bactericidal activity in Escherichia coli strains indicated that the compounds were effective at inhibiting bacterial growth. These studies support a synergistic action as releasing NO/HNO and vasodilating action, anticancer and microbicide, which deserve further pharmacological and biochemical investigations for a better description of the mechanisms of action. / O óxido nítrico (NO), espécie produzida endogenamente, é responsável pela vasodilatação dos vasos sanguíneos entre outros processos fisiológicos. O íon nitroxila (NO-), espécie gerada por redução monoeletrônica do NO, tem despertado o interesse da comunidade científica graças às suas atividades biológicas distintas do óxido nítrico. O nitroprussiato de sódio (SNP) faz parte de uma classe de compostos que liberam NO espontaneamente, sendo o único complexo metálico usado clinicamente, porém existem problemas associados ao seu uso, incluindo fotossensibilidade e liberação de cianeto. Desta forma, compostos alternativos a base de ferro tem sido estudados, tal como o trans-[Fe(cyclam)(NO)Cl]Cl2, cujos estudos de reatividade química, bem como de seu precursor (trans-[Fe(cyclam)Cl2](PF6)), foram investigados nesta dissertação. Adicionalmente, avaliou-se as potencialidades anticancerígenas e microbicidas destes complexos. O nitrosilo complexo exibiu a capacidade de liberar NO espontaneamente em condições fisiológicas e quando estimulado por luz. O NO liberado termicamente e fotoquimicamente reagiu com traps seletivos, em diferentes taxas de velocidade. Os valores de meia-vida (t1/2) para reação do nitrosilo complexo com cPTIO foram 115 (k = 0,1 x 10-3 s-1) e 385 (k = 3,0 x 10-5 s-1) minutos para reação fotoquímica e térmica, respectivamente, sendo notório que a luz acelera o processo de liberação. O ensaio fotoquímico empregando mioglobina indicou liberação de NO, contudo não foi possível determinar a taxa de reação entre as espécies. A reação do complexo de NO com glutationa (GSH), monitorada por espectroscopia de ressonância paramagnética electrónica (EPR), sugeriu a produção de HNO. Os resultados cinéticos para essa reação indicam que há a formação de um intermediário reativo com banda em 541 nm, referente ao aduto trans-[Fe(cyclam)(Cl)N(O)SG]+. As constantes de velocidade indicaram que o primeiro intermediário se forma rapidamente (kobs = 2,79 s-1) e decai lentamente (kobs = 7,17 x 10-5 s-1). A grande estabilidade desse intermediário pode estar relacionada a capacidade do mesmo apresentar interações intramoleculares que o estabilizam. Ensaios de vasodilatação, mostraram que o complexo trans-[Fe(cyclam)(NO)Cl]2+ possui atividade vasodilatadora com EC50 = 910 nmol L-1. Também foi verificado que o nitrosilo complexo apresentou atividade sequestradora de íons O2•⎯, tendo assim potencial anti-oxidante. Experimentos de eletroforese, empregando DNA plasmidial e os complexos trans-[Fe(cyclam)Cl2]+ e trans-[Fe(cyclam)(NO)Cl]2+, mostraram atividade nuclease estimulados por luz (350 e 460 nm), ou estimulados por agentes biologicamente relevantes (H2O2 e GSH). Todavia, ensaios de viabilidade celular com células cancerígenas indicaram que os dois complexos possuem baixa atividade citotóxica, os complexos trans-[Fe(cyclam)Cl2]+ e trans-[Fe(cyclam)(NO)Cl]2+, respectivamente, apresentaram valores de IC50 iguais a: 8,5 e 144,2 mol L-1 frente a linhagem de células B16-F10, e 130,4 e 142,9 mol L-1 frente a linhagem de células HUH-7. Adicionalmente, ensaios preliminares de atividade bactericida em cepas de Escherichia coli mostraram que os complexos foram eficientes na inibição do crescimento bacteriano. Estes estudos dão suporte a uma ação sinergística como liberador de NO/HNO e ação vasodilatadora, anticancerígena e microbicida, os quais merecem posteriores investigações farmacológicas e reatividade bioquímica para uma melhor descrição dos mecanismos de ação dos complexos.

Submitted by Ana Maria Fiscina Sampaio (fiscina@bahia.fiocruz.br) on 2012-09-04T17:32:14Z No. of bitstreams: 1 Vanessa Investigacao do efeito cititóxico....pdf: 1637760 bytes, checksum: 53a0a5f0c495bc04a29d54e8f4415870 (MD5) / Made available in DSpace on 2012-09-04T17:32:14Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Vanessa Investigacao do efeito cititóxico....pdf: 1637760 bytes, checksum: 53a0a5f0c495bc04a29d54e8f4415870 (MD5) Previous issue date: 2011 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Gonçalo Moniz. Salvador, Bahia, Brasil / Investigar a capacidade antitumoral do extrato metanólico de Bixa orellana em células neoplásicas de Glioblastoma multiforme (GL-15) e Glioma murino (C6), sem toxicidadade para as células astrocitárias normais in vitro. Métodos e resultados: Caracterização do extrato por espectrofotometria por absorção de luz visível apresentou picos em 286, 363 e 435 nm. Determinou-se os teores de bixina e compostos fenólicos – 0,17 mg/mg e 0,05 mg por equivalência de pirogalol/mg de extrato seco, respectivamente. A citoxicidade foi investigada pelo teste de Brometo de 3-(4,5-dimetiltiazol-2-il)-2,5-difeniltetrazolium. A Mínima Concentração Citotóxica (MCC) para GL-15 foi 180 e 80 μg/mL para C6, para astrócitos foi 240 μg/mL, após 48 horas de tratamento. O teste de exclusão com azul tripan confirmou a EC50 para GL-15 após 24 horas. A análise morfológica foi realizada por microscopia de contrataste de fase e fluorescência. Comprovou-se a diminuição de células neoplásicas e alterações celulares na MCC em astrócitos. A capacidade de fluorescência foi comprovada em GL-15. A citotoxicidade não depletou GSH. Investigou-se alterações de ciclo celular e morte celular por citometria de fluxo. Alterações de ciclo celular não foram evidenciadas. O tipo de morte celular foi investigado com marcação para anexina V e Iodeto de Propídio comprovou morte por necrose em GL-15 e por apoptose tardia em C6, os astrócitos apresentaram valores pequenos de morte por apoptose tardia e necrose. Conclusão: Os dados indicam um potencial antitumoral das substâncias presentes neste extrato para células neoplásicas sem ser tóxico para células normais. / This work investigated the hypothesis that the methanol extract of Bixa orellana decreases the viability of GL-15 and C6 cells, without being toxic to normal astrocytes in vitro. Methods: The methanol extract of B. orellana seeds was obtained and characterized by UV-Vis spectrophotometry. The cytotoxic effects were assayed in vitro using the 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)- 2,5-diphenyltetrazolium bromide method. The cell morphology was investigated by phase contrast and fluorescence microscopy. The depletion of reduced glutathione (GSH) was observed by fluorescence microscopy. The effects on cell cycle and the mode of cell death was studied by flow cytometry. Results: The contents of bixin and phenol were 0.17 mg/mg of extract and 0.05 mg of pyrogallol equivalent/mg of extract, respectively. Three peaks were observed at 286, 363, and 435 nm. The extract killed cells in a dose-dependent manner. The minimum cytotoxic concentrations in the two tumoral cells (GL-15 and C6) were respectively: 180 μg/mL and 80 μg/mL, meanwhile in astrocytes it was 240 μg/mL after 48 hours. The trypan blue assay confirmed the cytotoxic effect to GL-15 cells. Morphological degeneration of treated glioma cells was observed. The same was observed with astrocytes, but at a higher concentration. Treated cells became fluorescent, probably due to incorporation of bixin. The treatment neither depleted GSH, nor interfered on the cell cycle. The main kind of cell death was necrosis. Conclusions: Compounds present in B. orellana seeds are potentially cytotoxic to glioma cells, meanwhile primary astrocytes are more resistant.

Made available in DSpace on 2014-12-05T18:38:23Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) ana_fernandes_ipcec_dout_2011.pdf: 1168893 bytes, checksum: 8127e15ae5d45011b8d8ba254de4a33d (MD5) Previous issue date: 2014-11-18 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto de Pesquisa Clínica Evandro Chagas, Rio de Janeiro, RJ, Brasil / A citotoxicidade mediada por células desempenha um importante papel na regulação da infecção pelo HPV e na formação de tumores. Apoptose é regulada por diferentes vias envolvendo genes que promovem (BAX) ou inibem (BCL2) a morte celular. Avaliamos a presença de células cervicais inflamatórias, marcadores apoptóticos (BAX, BCL-2, FasL, NOS2, perforina) e o marcador de degranulação (CD107a) em mulheres HPV e HPV/HIV através da técnica de imunohistoquimca. Uma alta porcentagem de células T CD4+ e CD8+ foram observadas em ambos os grupos, com baixa contagem de células T CD4+ em mulheres HPV/HIV. Houve poucas células expressando FasL, BAX e BCL-2 em ambos os grupos. A expressão de NOS2 estava presente especialmente em queratinócitos na camada basal do epitélio em ambos os grupos. Perforina foi idenficada em poucas células cervicais. Contudo, CD107a foi detectado na camada basal do epitélio e estroma, principalmente em mulheres HPV. Determinamos se os SNPs em promotores dos genes BCL2 (-938C>A) e BAX (-248G>A) estariam associados com o risco de neoplasia intraepitelial cervical (NIC) A frequência observada desses SNPs estavam em equilíbrio de Hardy\2013Weinberg nos casos e controles. Nenhuma diferença estatística na frequência genotípica e alélica do polimorfismo de BCL-2 (-938C>A) foi observada entre casos e controles. Contudo, uma forte associação foi identificada na freqüência do genótipo GG de BAX (-248G>A) entre os casos e controles. Quando os grupos de LSIL e HSIL foram comparados, nenhuma diferença estatística foi observada, indicando que o genótipo GG pode influenciar no aparecimento de lesões cervicais, mas não na gravidade da doença. Analisamos a expressão de RNAm de genes associados a apoptose (BAX, BCL2, p53 e pRb) e citotoxicidade (perforina e Fas). Quando a expressão de RNAm de Perforina e Fas foram avaliadas, diferença estatística foi observadas em pacientes portadoras de NIC III e câncer Observamos diferença estatística entre os controles e todos os casos, quando analisamos a expressão de RNAm de p53, mas não de pRb, sendo observada diferença apenas nos controles e NIC II e III. Na analise de RNAm de BCL2, notamos uma baixa expressão no grupo de câncer quando comparado com NIC II, III e controle. Em conclusão, a infecção pelo HIV pode induzir redução na degranulação de células inflamatórias, corroborando para a progressão de infecção pelo HPV, e que carreadoras do alelo G na região promotora de BAX (-248G>A) pode estar associado ao desenvolvimento de NIC quando comparado com as carreadoras do alelo A, possuindo papel protetor; contudo o alelo G não está correlacionado com a gravidade da doença / Cell - mediated cytotoxicity plays an important role in the regulation of HPV infection, and in tu mor formation. Apoptosis is regulated by different pathways involving a number of genes that either prom ote ( BAX gene)or inhibit ( BCL2 gene) the cell death. We evaluated the presence of cervical inflammatory cells, apoptotic (Bax, Bcl - 2, FasL, NOS2, perforin) markers and the degranulating expressing cell marker (CD107a) from HPV and HPV/HIV women. Higher per centage of cervical CD4 + and CD8 + T cells were observed in both groups, with lower CD4 + T cells count observed in HPV/HIV women. There were few FasL, Bax and Bcl - 2 inflammatory cervical expressing cells in both groups. NOS2 expression was present especially in the epithelium basal layer on keratinocytes in both groups. Perforin was identified in few cervical cells. However, CD107a was detected in the epithelium basal layer and stroma, meanly on HPV women. We determined whether the SNPs of BCL2 ( - 938C>A) and BAX ( - 248G>A) promoters are associated with risk of cervical intraepithelial neoplasia (CIN) outcome. The observed genotype frequencies of these SNPs were in agreement with Hardy – Weinberg equilibrium in cases and control groups. No statistical difference i n genotype and allelic frequency of BCL - 2 ( - 938C>A) polymorphism was observed between all cases and control groups. However, a strong association was identified in GG genotype frequency of BAX ( - 248G>A) polymorphism between cases and controls. When LSIL an d HSIL groups were compared, no statistical difference was observed, indicating that GG genotype may influence the risk of CIN but not the lesion severity. We analyzed the mRNA expression of apoptosis - associated genes ( BAX, BCL2, p53 and pRb ) and cytotoxic ity - related genes ( perforin and Fas ). When Fas and Perforin mRNA expressions were evaluated, the statistical difference between CIN III and cancer was seen. We observed a statistical difference between control and all cases, when we analyzed p53 mRNA, but in pRb mRNA, we observed difference between control group and CIN II or CIN III. In BCL2 mRNA evaluation, we observed low expression in cancer group when compare with CIN II, III and control. In relation to BAX mRNA, a statistical difference was evaluated with all cases and control. In conclusion, HIV infection may induce reduction on inflammatory cervical cells degranulation corroborating to HPV progression and allele G carriers in the promoter regions of BAX ( - 248G>A) can be related to CIN development whe n compared with allele A carriers that play a protective role; however, allele G was not correlated with the disease severity

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro Tecnológico, Programa de Pós-Graduação em Engenharia Química, Florianópolis, 2016. / Made available in DSpace on 2017-06-27T04:08:43Z (GMT). No. of bitstreams: 1 346010.pdf: 2085302 bytes, checksum: 99549ec52928f201e606c2cf4121f97b (MD5) Previous issue date: 2016 / Diversas culturas se baseiam na utilização de plantas para o tratamento de doenças. Plantas do gênero Aloe vem sendo utilizadas a séculos na medicina tradicional para cicatrização de feridas, como agente antibacteriano, como laxante e até mesmo para o tratamento do câncer. O extrato do parênquima clorofiliano (EPC) da Aloe barbadensis Miller é excretado quando a folha é cortada ou quebrada, este líquido de cor amarelada é rico em antronas, cromonas e seus derivados. Estudos com compostos isolados do EPC, aloína e Aloe emodina, mostram uma promissora atividade antitumoral dos mesmos. A incidência do melanoma cutâneo vem aumentando nos últimos anos, o que gera uma grande preocupação, uma vez que esse câncer é altamente agressivo apresentando alta possibilidade de metástase. Neste trabalho o EPC foi padronizado por HPLC, apresentando 5,6% em massa seca do isômero aloína B. A citotoxicidade foi avaliada do EPC em linhagens de fibroblastos L-929, assim como o efeito do EPC sobre a viabilidade, proliferação, morfologia e migração de duas linhagens de melanoma (SK-MEL-28 e B16-F10). De acordo com a ISO 10993-5, concentrações superiores a 185 µg·mL-1 de EPC são citotóxicas (decréscimo na viabilidade maior que 30%), sendo esse valor maior que o valor de IC50 de ambas as linhagens de melanoma, 125 e 165 µg·mL-1 para a SK-MEL-28 e B16-F10, respectivamente. Análise morfológica mostrou ponto de alta fluorescência, indicando uma reorganização dos filamentos de actina presentes no citoesqueleto. O resultado do ensaio de migração para ambas linhagens de melanoma mostrou que o EPC é mais eficaz em inibir a migração do melanoma humano SK-MEL-28. Células endoteliais (HUVEC) foram expostas ao EPC e os parâmetros de viabilidade celular, proliferação, morfologia, migração e formação de tubos foram avaliados. O EPC inibiu a migração de HUVECs mesmo em concentrações que não apresentaram efeito de decréscimo na atividade metabólica e proliferação celular. Pôde-se observar a retração das fibras de estresse em células tratadas com as concentrações de 10 e 100 µg·mL-1 de EPC. A formação de tubos em células endoteliais foi inibida na maior concentração testada (100 µg·mL-1), contudo ainda se observa a formação de brotos vasculares. Em suma o EPC proveniente de Aloe barbadensis Miller causou um decréscimo na viabilidade e proliferação celular assim como uma diminuição da capacidade de migração e alterações morfológicas de células de melanoma e endoteliais, influenciando também na formação de tubos vasculares por células endoteliais. / Abstract : Several cultures are based on the use of plants for the treatment of diseases. Plants of the genus Aloe has been used for centuries in traditional medicine, in wound healing, such as antibacterial agent, laxative and even for the treatment of cancer. The chlorophyll parenchyma extract (EPC) from Aloe barbadensis Miller is excreted when the sheet is cut or broken, this yellowish liquid is rich in anthrones, chromones and their derivatives. Studies on compounds isolated EPC, aloin and Aloe emodin, showed promising antitumor activity. The incidence of melanoma has increased in recent years, creating a great concern, since this cancer is highly aggressive and presents high possibility of metastasis. In this work the EPC was standardized by HPLC, showing 5.6% of dry weight of aloin B isomer. The EPC cytotoxicity was evaluated on fibroblast L-929 cell line, as well as the effect of EPC in cell viability, proliferation, morphology alterations and migration on two melanoma cell lines (SK-MEL-28 and B16-F10). According to ISO 10993-5, concentrations higher than 185 µg·mL-1 EPC are cytotoxic (decrease in viability was greater than 30%), this value being higher than the IC50 value of both melanoma cell lines, 125 and 165 µg·mL- 1 to SK-MEL-28 and B16-F10, respectively. Morphological analysis showed high fluorescence spots, indicating a reorganization of actin filaments present in the cytoskeleton. The result of the migration test for both melanoma cell lines showed that the EPC is more effective to inhibit the migration of human melanoma SK-MEL-28. Endothelial cells (HUVEC) were exposed to the EPC and parameters of cell viability, proliferation, morphology alterations, migration and tube formation was evaluated. The EPC inhibited HUVEC migration even at concentrations that has not shown effect in decrease of metabolic activity and cellular proliferation. It was observed the decrease of stress fibers in cells after treated with concentrations of 10 and 100 µg·mL-1of EPC. The tube formation on endothelial cells was inhibited at the highest concentration tested (100 µg·mL-1), however it was still possible to observe the formation of vascular sprouts. In short, the EPC from Aloe barbadensis Miller caused a decrease in cell viability and proliferation as well as reduced migration ability and morphological changes on melanoma and endothelial cells, also influencing the vascular tube formation by endothelial cells.