RESUMO O objetivo deste estudo foi comparar a citotoxicidade in vitro dos solventes utilizados em terapia de retratamento endodôntico: óleo de casca de laranja, eucaliptol, xilol, clorofórmio e halotano através da avaliação da citotoxicidade de cada solvente em diferentes concentrações finais e condições de contato com as células de fibroblastos de linhagem NIH 3T3. O experimento foi dividido em 4 etapas: etapa 1- os solventes foram misturados em meio de cultura (DMEM) nas concentrações finais de 0, 5, 10, 25, 50 e 100% e depositados sobre a cultura de células para o tempo de 5 minutos; etapa 2-os solventes foram misturados em meio de cultura nas concentrações finais de 0, 10 e 25% e depositados sobre a cultura de células para os tempos de 10 e 15 minutos; etapa 3a- os solventes foram depositados sobre as células de fibroblastos (contato direto) e acrescido de meio de cultura; etapa 3b-onde os fibroblastos receberam o meio de cultura e sobre este depositado os solventes testes (contato indireto) nas concentrações finais de 0, 5 e 10% para o tempo de 5 minutos; etapa 4- os solventes foram previamente solubilizados com o álcool absoluto na proporção de 1:1 e depois misturados ao meio de cultura na concentração final de 5% para o tempo de 5 minutos. A avaliação foi realizada pela contagem celular através de método de exclusão de células coradas pelo azul Trypan. Os resultados obtidos nos permitiram concluir que todos os solventes testados são citotóxicos in vitro, sendo que o óleo de laranja foi o menos tóxico, ao permitir alguma viabilidade celular. Observou-se ainda que o preparo prévio dos solventes influenciou no percentual de células viáveis. / SUMMARY The aim of this study was to compare in vitro solvents used in endodontic retreatment therapy: orange oil, eucalyptol, xylene, chloroform and halothane through cytotoxicity evaluation of each solvent in different final concentration and contact conditions to NIH 3T3 fibroblasts cells lines. The experiment was divided in four stages: stage 1- the solvents were mixed in culture medium (DMEM) in final concentrations of 0, 5, 10, 25, 50 and 100% placed on the cells in culture for periods of 5 minutes; stage 2- the solvents were mixed in culture medium in finals concentrations of 0, 10 and 25% placed on the cells in culture for periods of 10 and 15 minutes; stage 3a- the solvents were placed on the fibroblasts cells (direct contact) and added culture medium; stage 3b- the fibroblasts cells get first culture medium and after that solvents were placed (indirect contact), in bouth the finals concentrations were 0, 5 and 10% for periods of 5 minutes; stage 4- solvents were previously solubilized in absolut alcohol in 1:1 proportion and mixed in culture medium in 5% final concentration for periods of 5 minutes. The evaluation were achieved by cellular counting through dyed exclusion method-Trypan blue. The results showed that all solvents were toxic in vitro, and orange oil was less toxic and it allowed some cellular viability. And we could observe that a previous solvents preparation influenced in the viable cells percentage.

Diante da presença de microrganismos resistentes à terapêutica endodôntica, novas formulações e alternativas medicamentosas têm sido investigadas. Desse modo, esse estudo teve como objetivo avaliar a citotoxicidade de diferentes medicações indicadas como medicação intracanal. Culturas de células de fibroblastos foram estimuladas de acordo com os seguintes grupos experimentais: Grupo I: controle; Grupo II: cloridrato de ciprofloxacina; Grupo III: cloridrato de clindamicina e Grupo IV: metronidazol. Para tal, as concentrações utilizadas para cada antibiótico foram de 5, 50, 150 e 300 mg/L, nos tempos experimentais de 24, 48, 72 e 96 horas. A citotoxicidade dessas substâncias foi avaliada usando a técnica de análise do MTT e leitura em espectrofotômetro de ELISA. Os resultados obtidos foram analisados pelo software BioEstat 4.0, por meio do teste de Kruskal-Wallis, complementado pelo teste de Dunn, com nível de significância de 5%. A viabilidade celular foi analisada diante da relação entre as diferentes concentrações e uma mesma concentração nos diferentes tempos experimentais. Diante dos resultados obtidos, foi possível concluir que: todos os antibióticos testados apresentaram citotoxicidade dosedependente. As concentrações de 5 e 50 mg/L, de todos os antibióticos, permitiram a viabilidade dos fibroblastos em todos os tempos avaliados. Independente da medicação avaliada, a viabilidade celular em 24 horas foi mais elevada em comparação aos demais tempos experimentais. A comparação entre os antibióticos nas mesmas concentrações, em diferentes tempos experimentais demonstrou que o gel de metronidazol apresentou menor citotoxicidade em 72 e 96 horas no confronto com os dois outros antibióticos, enquanto que o cloridrato de clindamicina apresentou maior viabilidade celular em relação ao cloridrato de ciprofloxacina em 72 horas. / New medicaments have been assessed due to the presence of resistantmicroorganism to therapeutic procedures. Thus, this study aimed to evaluate the citotoxicity of differents drugs indicated as intracanal medicament. The human gingival fibroblasts were estimulated according to the following experimental groups: Group I: control; Group II: Ciprofloxacin Hydrochloride; Group III: Clindamicin Hydrochloride and Group IV: Metronidazole. The concentration used for each drugs were 5, 50, 150, and 300 mg/L, in the experimental time of 24, 48, 72, and 96 hours. The citotoxicicty were evaluated with MTT analysis and ELISA spectrophotometer reading. The results were evaluated by BioEstat 4.0 software, according to Kruskal- Wallis test supplemented by Dunn test with significance level of 5%. Cell viability analysis has been assessed in different concentrations in each experimental period. According to the results, it is possible to conclude that: all the tested drugs showed dose-dependent citotoxicity. The concentrations of 5 and 50mg/L of all groups allowed fibroblast viability in all evaluated periods. The cell viability in 24 hours was higher than the others experimental periods. The comparing between the antibiotics at the same concentrations, in different times showed the gel metronidazole obtained lowest citotoxicity at 72 and 96 hours when compared with the others antibiotics, meanwhile, the Clindamicin Hydrochloride showed the highest cell viability compared to Ciprofloxacin Hydrochloride, at 72 hours.

Submitted by Ramon Santana (ramon.souza@ufpe.br) on 2015-03-10T19:00:38Z No. of bitstreams: 2 DISSERTAÇÃO Elany Barbosa da Silva.pdf: 3944795 bytes, checksum: 728f42b755d4ced3250c864b0161f5b1 (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-03-10T19:00:38Z (GMT). No. of bitstreams: 2 DISSERTAÇÃO Elany Barbosa da Silva.pdf: 3944795 bytes, checksum: 728f42b755d4ced3250c864b0161f5b1 (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Previous issue date: 2014-06-17 / FACEPE / Doença de Chagas, também conhecida como tripanossomíase americana, é uma doença protozoária causada por um parasita hemoflagelado, o Trypanosoma cruzi. É uma infecção parasitária crônica e debilitante que afeta milhões de pessoas no México, América Central e América do Sul. Aproximadamente 25% da população da América Latina está em risco de contrair a infecção. Embora o nifurtimox ainda seja utilizado em alguns países, o único fármaco atualmente disponível no Brasil é o nitro-heterocíclico benznidazol. Este medicamento é eficaz na fase aguda da doença, mas a sua eficácia durante a fase crônica é discutível, o que torna imprescindível a busca por novas drogas anti-T. cruzi. Neste trabalho, realizou-se a concepção, síntese e avaliação da atividade tripanocida de alguns derivados piridil-1,3-tiazol. Estes derivados heterocíclicos foram estruturalmente planejados, explorando o conceito de hibridização molecular entre os anéis piridina e tiazol, que tem revelado propriedades tripanocida. Neste contexto, foi planejada a síntese de uma série de 26 inéditos piridil-1,3-tiazol (LpQM 2a-m; 3a-m) por meio da modificação dos substituintes no nitrogênio do anel tiazol e variação dos substituintes ligados ao anel aromático. A elucidação estrutural foi realizada por meio da utilização de técnicas espectroscópicas de RMN 1H, RMN 13C e IV. A fim de avaliar o potencial antichagásico destes compostos, avaliou-se o efeito anti-proliferativo sobre a forma epimastigota do Trypanosoma cruzi (cepa DM28c) e atividade citotóxica frente as formas tripomastigota da Cepa Y, assim como a citotoxicidade deles sobre esplenócitos de camundongos BALB/c, tendo como drogas de referência o benznidazol e nifurtimox. À exceção dos compostos LpQM 2h e 2k, todas as piridil-1,3-tiazol exibiram atividade citotóxica contra a forma evolutiva tripomastigota superior ao medicamento referência benznidazol. Os derivados LpQM 3d e 3k foram os compostos destaques, CC50 = 1.2 e 1.6 μM, respectivamente. Estes compostos não apresentaram efeitos citotóxicos nas suas concentrações tripanocidas, sendo considerado um bom ponto de partida para o desenvolvimento de novos fármacos antichagásicos.

Submitted by Chaylane Marques (chaylane.marques@ufpe.br) on 2015-03-12T18:31:26Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) aDissertação (2).pdf: 2483953 bytes, checksum: f63c561468eb11598704cc10d8d42fc9 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-03-12T18:31:26Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) aDissertação (2).pdf: 2483953 bytes, checksum: f63c561468eb11598704cc10d8d42fc9 (MD5) Previous issue date: 2012-05-18 / O gênero Croton pertencente a família Euphorbiaceae é encontrado em áreas tropicais e subtropicais de todo o mundo. No Brasil, os representantes deste gênero, são utilizados por possuírem atividades biológicas conhecidas. De acordo com a literatura, a espécie estudada no presente trabalho, Croton pulegioides, conhecido popularmente como Zabelê, não possui estudos fitoquímicos nem biológicos anteriores. Portanto, este trabalho contribui para a elucidação dos grupos de metabólitos presentes na planta, bem como para o conhecimento sobre as atividades biológicas testadas. No trabalho foi feito um estudo fitoquímico, onde foram investigados e identificados os grupos de metabólitos secundários dos extratos da raiz, do caule e das folhas da planta, através de cromatografia em camada delgada. Foram evidenciada a presença de alcalóides, flavonóides, monoterpenos, sesquiterpenos, triterpenos, esteróides e proantocianidinas, já citadas na literatura para outras espécies do mesmo gênero. Na analise do óleo essencial, foram identificadas 6 possíveis moléculas, sendo algumas delas, já relatadas para outras espécies de Croton. A atividade antimicrobiana, já relatada para outras espécies do mesmo gênero, foi confirmada para o C. pulegioides através de testes com os três extratos já mencionados para as cepas de Staphylococcus aureus AM 103, Staphylococcus epidermidis AM 235, Staphylococcus saprophyticus AM 245, Enterococcus faecalis AM 1056, Pseudomonas aeruginosa AM 206, Escherichia coli AM 1050, Klebsiella pneumoniae AM 410, Bacillus subtilis AM 04, Candida krusei AM 1168, Candida tropicalis AM 1181, Candida albicans AM 1140, utilizando-se a técnica de diluição em poços. O teste de citotoxicidade foi realizado utilizando-se 3 linhagens especificas de células tumorais: HT29 (carcinoma de cólon - humano), HEp-2 (carcinoma de laringe - humano) e NCI H-292 (câncer de pulmão– humano. Os três extratos, bruto e seco da raiz, caule e folhas, testados obtiveram percentual de inibição do crescimento celular (IC%) das amostras nas 3 linhagens tumorais testadas. Para as atividades farmacológicas, foi testado extrato bruto seco da raiz da planta. Para cada teste foram utilizadas 3 doses em diferentes concentrações. Foi realizado o teste de toxicidade aguda. Nenhuma dose apresentou toxicidade nos animais. Após essa avaliação, foram feitos testes anti-inflamatórios - edema de pata e peritonite, os quais obtiveram resultados satisfatórios.

Submitted by Daniella Sodre (daniella.sodre@ufpe.br) on 2015-04-17T15:32:03Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) TESE MILENA FERRAZ.pdf: 2392331 bytes, checksum: 0f370019507d97e9bd0e3ba3f3322bda (MD5) / Made available in DSpace on 2015-04-17T15:32:03Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) TESE MILENA FERRAZ.pdf: 2392331 bytes, checksum: 0f370019507d97e9bd0e3ba3f3322bda (MD5) Previous issue date: 2013-02 / MCTI; CNPq; CAPES; PROPESQ-UFPE / O presente estudo objetivou sintetizar um polímero sítio-específico de ácido d,l-láctico e glicólico (PLGA) conjugado ao polietileno glicol (PEG) e ao folato (FOL), desenvolver nanocápsulas furtivas e sítio-específicas contendo β-lapachona (β-lap), validar um método analítico simples, rápido e específico para quantificação da β-lapachona em plasma de ratos através da cromatografia líquida de alta eficiência e analisar o perfil farmacocinético da β-lap encapsulada em nanocápsulas em comparação ao fármaco livre. Primeiramente, o PLGA-PEG-FOL foi sintetizado com um percentual de conjugação de 97% e caracterizado por espectroscopia ¹H RMN e FTIR. A -lapachona foi encapsulada em nanocápsulas convencionais (NC/lap), PEGuiladas (NC-PEG/lap) e sítio-específicas (NC-FOL/lap), as quais foram preparadas pelo método de deposição interfacial de polímero pré-formado. As nanocápsulas foram caracterizadas por tamanho de partícula, índice de polidispersão, eficiência de encapsulação, potencial zeta e estudo de cinética de liberação in vitro. Os resultados demonstraram que o método de preparação permitiu a formação de nanocápsulas sítio-específicas nanométricas, monodispersas e com uma alta eficiência de encapsulação do fármaco. Uma redução do potencial zeta em módulo foi observada nas NC-PEG/lap e NC-FOL/lap em relação às NC/lap, provavelmente devido à presença do PEG e folato na superfície destes sistemas. Uma liberação de -lapachona em torno de 80% a partir das nanocápsulas foi alcançada em 24 h. No estudo de citotoxicidade celular frente às linhagens celulares KG-1 e HeLa, as nanocápsulas sítio-específicas exibiram um efeito antiproliferativo relevante quanto comparados ao fármaco livre. Para a validação do método analítico, empregou-se cromatografia em fase reversa com fase móvel constituída por mistura de metanol e água (80:20, v/v), a um fluxo de 0,9 mL/min. Os analitos foram detectados por UV a 256 nm. A β-lapachona foi extraída das amostras de plasma após adição de metanol. O tempo de retenção foi de 4,5 min. Este método apresentou linearidade na faixa de concentração entre 0,5-16 g/mL ( r = 0,9996), com limite de quantificação de 0,2 g/mL e exatidão de aproximadamente 100%. O método analítico desenvolvido neste trabalho demonstrou especificidade, linearidade, precisão e exatidão. O perfil farmacocinético das NC-FOL/-lap foi avaliado e comparado ao da -lap livre, após injeção intraperitoneal (i.p.) em ratos. Os parâmetros farmacocinéticos foram estimados por uma abordagem não-compartimental utilizando equações clássicas. Neste estudo, as nanopartículas mostraram alterações significativas no perfil farmacocinético das NC-FOL/-lap. Diante dos resultados obtidos, sugere-se que as nanocápsulas PEGuiladas e sítio-específicas contendo -lapachona poderão proporcionar um maior benefício terapêutico através de sistemas de longa duração e específico para células cancerosas.

Made available in DSpace on 2014-06-12T15:51:10Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo1569_1.pdf: 1645034 bytes, checksum: 133b99be1981cae36ade02800e5c6a81 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2009 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / A cisplatina é um quimioterápico altamente potente comumente usado em muitos tipos de neoplasias humanas, porém devido a muitas limitações, há a necessidade de busca de novos agentes anticâncer menos tóxicos e mais seletivos, sendo assim, uma variedade de complexos de platina (II) com ligantes contendo nitrogênio, tem sido alvo de intensa avaliação biológica. Os complexos contendo derivados hidantoínicos como ligantes, tem sido relatados possuir atividade citotóxica/antitumoral Os compostos das Séries Cx, LPSF/NN, LPSF/MS foram sintetizados e submetidos à avaliação citotóxica utilizando 4 diferentes linhagens de células cancerígenas. Também foi realizada avaliação da atividade hemolítica. Dos compostos avaliados os da série LPSF/MS apresentaram-se mais ativos, os valores de IC50 para o composto LPSF/MS-6 demonstraram atividade citotóxica para todas as linhagens celulares testadas, superando a IC50 do fármaco antitumoral de referência, a doxorrubicina (Dox). Foi observado pelas análises de SAR que os fatores eletrônicos e lipofílicos influenciaram na resposta biológica. A análise da atividade hemolítica sugere que a atividade citotóxica, não é devido a danos diretos sobre a membrana plasmática

Made available in DSpace on 2014-06-12T16:29:50Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo2745_1.pdf: 2335531 bytes, checksum: 46923e28bada0a6739d825d859629a2c (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2011 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / A RDC 10/10, visa à padronização e o aumento da qualidade do uso popular de drogas vegetais, a exemplo da Passiflora edulis e da Erythrina mulungu, que são plantas utilizadas no tratamento da ansiedade. A distribuição granulométrica das drogas vegetais em pós deve ser considerada para caracterização física, química e biológica. O objetivo desse trabalho foi obter e padronizar pós de plantas medicinais com diferentes tamanhos de partículas de P. edulis e E. velutina e compará-los através de ensaios analíticos e bioensaios. Utilizou-se a microscopia eletrônica de varredura (MEV), termogravimetria (TG), análise térmica diferencial (DTA) e pirólise acoplada à cromatografia gasosa/espectrometria de massa (Pir-CG/EM), para caracterizar a morfologia e tamanho de partículas de drogas vegetais, decomposição térmica e análise da impressão digital. Para observar a atividade farmacológica do efeito ansiolítico do pó das drogas em diferentes tamanhos de partícula foi utilizado o ensaio de labirinto em cruz elevado. A citotoxicidade foi avaliada através do teste de vermelho neutro, investigando-se a viabilidade celular da linhagem celular NCTC 929. As imagens obtidas através da MEV detectaram divergências do resultado esperado pelo processo de granulometria. Os valores medianos e os limites inferiores e superiores mostraram a seguinte distribuição de tamanhos de partículas por amostra, MUF 01 (mulungu folha) 573,1 μm, variando de 234,2-1000 μm; MUF03 307,8 μm, variando de 236,2-854,1 μm e MUF05 62,3 μm, variando de 44,3-89,5 μm, respectivamente. Os perfis das curvas TG dinâmicas para MUF01, 03 e 05 foram distintas, para as partículas de diferentes tamanhos em atmosfera de N2 e de ar sintético, decompondo-se em três e quatro etapas, respectivamente. A perda de massa final foi crescente com a diminuição do tamanho das partículas para análises em N2, sendo de 69%, 79% e 82%, para MUF01, MUF03 e MUF05, respectivamente. As amostras MA01 e MA04 apresentaram três etapas de decomposição em atmosfera inerte. A 900 °C em atmosfera de nitrogênio a amostra MA04 manteve o resíduo em um valor maior que MA01. A média das energias obtidas por DTA para MA01 e MA04 foi de 8,7 e 11,5 μV. As temperaturas e as energias observadas por DTA para MUF e MUC foram: 335; 344; 354; 363 e 380 °C, com energias de 8,3; 9,3; 9,7, 10,1 e 9,7 uV para MUF01; 1,8; 2,5; 3,4; 3,7 e 4,15 uV para MUF 03 e 10,2; 11,3; 12,5, 14,0 e 13,4 uV para MUF05. Os pirogramas relativos às diferentes temperaturas e amostras de E. velutina mostraram-se possíveis de identificar cada uma das substâncias através dos seus tempos de retenção, conforme dados a seguir: Limoneno de 4,3-4,3 min; 1-Nonadeceno de 10,5-10,5 min; Neoftadieno 2,6,10- Trimetil, 14 de 11,3-11,3 min e 3- Eicosino de 11,6-11,6 min. As citotoxicidades dos pós das folhas de Passiflora edulis e folhas e cascas de Erythrina velutina demonstraram que as partículas apresentaram DL50 de 62,4; 42,5; 29,9 e 29,7 mg mL-1 para MA01,02,03 e 04, respectivamente. Para MUF 01,03 e 05 a DL50 foi de 50,08; 49,01 e 37,38 mg mL-1; e para MUC (mulungu casca) 02, 04 e 05 foi de 72,5; 66,7 e 53,0 mg mL-1, demonstrando citotoxicidade crescente de acordo com a diminuição do tamanho das partículas do pó. Quanto ao efeito ansiolítico, o ensaio de labirinto em cruz elevado demonstrou diferenças entre as amostras MA01 e MA04, nos tempos de permanência e número de entradas nos braços abertos e fechados. Os dados farmacológicos da E. velutina folhas e cascas mostraram diferentes atividades ansiolíticas para os diferentes tamanhos de partículas. Amostras de drogas vegetais em diferentes granulometrias demonstraram diferenças físicas, químicas e biológicas entre as amostras, de acordo com os parâmetros estudados

Made available in DSpace on 2014-06-12T16:32:37Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo6456_1.pdf: 1328130 bytes, checksum: c35527d933f665ea518f8ad49ba91fcb (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2006 / O ácido úsnico (AU) [2,6-diacetil-7,9-dihidroxi-8,9b-dimetil-1,3-(2H,9H)-dibenzofurano] é um composto derivado do metabolismo secundário de liquens e conhecido pela sua atividade antimicrobiana contra bactérias gram-positivas e micobactérias. A tuberculose pulmonar é caracterizada pelo envolvimento de macrófagos contendo no seu interior elevada quantidade de Mycobacterium tuberculosis. Os lipossomas têm sido usados como carreadores coloidais de fármacos direcionados às células. Há uma necessidade urgente de novos compostos para o tratamento de infecções causadas por micobactérias, uma vez que, nenhum novo antibiótico tem sido desenvolvido desde a década de 70. O objetivo desse estudo foi avaliar a atividade antimicrobiana in vitro do AU encapsulado em liposomas contra o M. tuberculosis e investigar sua interação com macrófagos. Os lipossomas foram preparados usando a técnica de hidratação do filme lipídico com subseqüente sonicação. A concentração inibitória mínima (CIM) e a concentração bactericida mínima (CBM) contra o M. tuberculosis H37Rv foram determinadas segundo o ensaio de microdiluição utilizando Alamar blue. A citotoxicidade do AU foi avaliada para macrófagos J774 e a viabilidade celular foi detectada pelo ensaio padrão de MTT. O estudo de interação celular foi realizado com macrófagos J774 usando a espectroscopia de fluorescência. Os valores de CIM e CBM para o AU livre foram 6,5 e 32 &#956;g/ml, respectivamente. Por outro lado, AU lipossomal exibiu uma CIM de 5,85 &#956;g/ml e CBM de 16 &#956;g/ml. A concentração requerida para inibir 50% da proliferação celular (CI50) foram 22,5 e 12,5 &#956;g/ml para o AU livre e encapsulado, respectivamente. Um incremento do conteúdo intracelular de lipossomas contendo AU foi verificado pela maior emissão de fluorescência detectada (21,57 x 104 c.p.s) em comparação a do AU livre (9,54 x 104 c.p.s). Além disso, a formulação lipossomal proveu uma quantidade intracelular de AU praticamente invariável durante longo período de tempo (30 h, p < 0,05). Estes resultados indicaram uma forte interação entre lipossomas e macrófagos J774, facilitando a penetração do AU nessas células de defesa, como também, considerável aumento de sua atividade contra o M. tuberculosis

Submitted by Fabio Sobreira Campos da Costa (fabio.sobreira@ufpe.br) on 2016-04-29T13:51:27Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Dissertação de Albert Rocha (versão final corrigida).pdf: 2822167 bytes, checksum: 2ad296bc0aaac078346eddd44a047b0f (MD5) / Made available in DSpace on 2016-04-29T13:51:27Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Dissertação de Albert Rocha (versão final corrigida).pdf: 2822167 bytes, checksum: 2ad296bc0aaac078346eddd44a047b0f (MD5) Previous issue date: 2015-02-27 / CAPEs / Câncer é o nome dado a uma grande variedade de doenças que possuem como principal característica um crescimento celular contínuo e desordenado. A quimioterapia é uma das alternativas terapêuticas no combate ao câncer, entretanto as atuais opções terapêuticas são frequentemente acompanhadas de fortes efeitos colaterais. Inúmeros trabalhos vêm sendo desenvolvidos nos últimos anos, relacionando as moléculas tiazolidínicas com atividades antineoplásicas. No presente trabalho, foram realizadas a síntese e a caracterização estrutural de cinco derivados da série 5-benzilideno-3-benzil-tiazolidina-2,4-diona, seguidas da avaliação da citotoxicidade de dois desses compostos sobre células mononucleares do sangue periférico (PBMCs) e sobre as linhagens de células neoplásicas DUO-145, HepG2, K562 e RAJI, utilizando ensaios de MTT. Inicialmente, realizou-se a síntese da tiazolidina-2,4-diona, a partir da reação entre ácido monocloroacético e tiouréia. Em seguida, realizaram-se N-alquilações, em uma solução equimolar de hidróxido de sódio, utilizando a tiazolidina-2,4-diona e diferentes haletos de benzila substituídos, obtendo-se intermediários 3-benzil-tiazolidina-2,4-diona substituídos. Os compostos finais foram sintetizados a partir de reações de condensação na posição 5 do anel tiazolidínico, reagindo-se os intermediários, anteriormente sintetizados, com benzaldeídos, obtendo-se os compostos tiazolidínicos finais, com rendimentos entre 52 e 70%. A estrutura química dos compostos sintetizados foi determinada por espectroscopia de ressonância magnética nuclear de 1H e de 13C, espectroscopia de infravermelho e por espectrometria de massas. A avaliação da seletividade citotóxica dos compostos 5-(3-cloro-benzilideno)-3-(2-cloro-6-flúor-benzil)-tiazolidina-2,4-diona (LPSF/GQ-103) e 5 - (2,4-dimetóxi-benzilideno) - 3 - (2-cloro-6-flúor-benzil)-tiazolidina-2,4-diona (LPSF/GQ-106) foi realizada sobre PBMC’s, através de ensaios MTT, apresentando resultados com viabilidade acima de 90%. Nos ensaios de citotoxicidade tumoral, a linhagem DUO-145 apresentou melhor suceptibilidade aos compostos testados, com valores de IC50 18,18 μM para o LPSF/GQ-103 e IC50 24,13 μM para o LPSF/GQ-106. / Cancer is the name given to a variety of diseases that have a major feature a continuous and disorderly cell growth. Chemotherapy is one of therapeutic alternatives to fight cancer, but the current therapeutic options are often accompanied by severe side effects. Numerous studies have been developed in recent years talking about the thiazolidine molecules with antineoplastic activities. In this study, we realized the synthesis and structural characterization of five derivatives of the series 5-benzylidene-3-benzyl-thiazolidine-2,4-dione, followed by evaluation of cytotoxicity of two such compounds on peripheral blood mononuclear cell (PBMCs) and on the tumor cell lines DUO-145, HepG2, K562 and RAJI, using MTT assays. Initially we realized the synthesis of thiazolidine-2,4-dione, from the reaction between monochloroacetic acid and thiourea. Then, it were realized N-alkylations using thiazolidine-2,4-dione and various substituted benzyl halides obtaining the intermediates 3-benzyl-thiazolidine-2,4-dione substituted. The final compounds were synthesized from condensation reaction in position 5 of the thiazolidine ring, by reacting intermediates previously synthesized with benzaldehydes obtaining tiazolidínicos final compounds in yields between 52 and 70%. The chemical structure of the synthesized compounds was determined by 1H and 13C nuclear magnetic resonance spectroscopy, by infrared spectroscopy and by mass spectrometry. The evaluation of selective cytotoxicity of the compounds 5-(3-chloro-benzylidene)-3-(2-chloro-6-fluoro-benzyl)-thiazolidine-2,4-dione (LPSF/GQ-103) and 5-(2,4-dimethoxy-benzylidene)-3-(2-chloro-6-fluoro-benzyl)-thiazolidine-2,4-dione (LPSF/GQ-106) was performed on PBMC’s by MTT assay, presenting results viability above 90%. In the tumor cytotoxicity assays, the tumor cell line DUO-145 had better cytotoxic susceptibility to the tested compounds, with 18.18 μM IC50 value for the compound LPSF/GQ-103 and 24.13 μM IC50 value for the LPSF/GQ-106.

Submitted by Fabio Sobreira Campos da Costa (fabio.sobreira@ufpe.br) on 2016-06-13T14:01:27Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Thiago Ubiratan Lins e Lins - Tese de Doutorado.pdf: 3503659 bytes, checksum: 9ffe7a8c957730db868f05707e01fef4 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-06-13T14:01:27Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Thiago Ubiratan Lins e Lins - Tese de Doutorado.pdf: 3503659 bytes, checksum: 9ffe7a8c957730db868f05707e01fef4 (MD5) Previous issue date: 2014-01-23 / FACEPE / Os derivados tiazacridínicos (Z/E)-5-(acridin-9-il) metileno-3-(3-cloro-benzil)-tiazolidin-2,4-diona (LPSF/AC-34) e (Z)-5-(acridin-9-il) metileno-3-(3-cloro-benzil)-4-tioxo-tiazolidin-2-ona (LPSF/AC-129) foram sintetizados. O produto da reação continha 72% do derivado (Z) LPSF/AC-129 e 22% do derivado (Z/E) LPSF/AC-34, com rendimento de 94%. As estruturas químicas dos derivados foram determinadas por espectroscopia no infravermelho, espectroscopia de ressonância magnética nuclear de hidrogênio e espectrometria de massas e a pureza por HPLC-MS. A citotoxicidade da mistura LPSF/AC-34 + LPSF/AC-129 foi avaliada frente a linhagens de células tumorais aderentes e não-aderentes pelo método de MTT. Os valores obtidos para o IC50 foi de 3,98 μM (linfoma de Burkitt - RAJI); 35,6 μM (leucemia de células T - Jurkat); 8,05 μM (leucemia promielocítica aguda - HL-60); 14,27 μM (leucemia linfoblástica aguda - CCRF-CEM); 55,77 μM (glioblastoma - NG97); >100 μM (mama - T47D). A seletividade dos compostos foi avaliada em células mononucleadas do sangue periférico (PBMC) de voluntários sadios e apresentou uma IC50>100μM. Em seguida, avaliou-se por citometria de fluxo o efeito dos derivados no ciclo celular e indução de morte. Observou-se que a mistura LPSF/AC-34 + LPSF/AC-129 na dose de 3,98 μM não causou alterações significativas no ciclo celular e induziu a morte por apoptose na linhagem de linfoma RAJI. Em paralelo, avaliou-se por RT-PCR o efeito dos derivados na expressão dos genes GADD153, PPARγ, Bcl-2, SOD1, Beclin, Bid, p21 e RIP3 nas linhagens HL-60 e CCRF-CEM em comparação às células não tratadas. Após 10 horas de exposição da linhagem HL-60 aos derivados, na dose de 8,05 μM (n=3), observou-se a modulação dos genes GADD153 (12,47 vezes, p=0,0808) e PPARγ (4,82 vezes, p=0,2277). Na linhagem CCRF-CEM (dose de 14,27 μM; n=3) observou-se a modulação dos genes Bcl-2 (0,97 vezes, p=0,4409), Bid (1,62 vezes, p=0,3911), RIP3 (0,97 vezes, p=0,3722) e SOD1 (1,29 vezes, p=0,0172) indicando interferência no estresse oxidativo. Avaliou-se também o efeito dos derivados na expressão protéica de NFkB, Bax, pPTEN e GADD153 por Western Blotting. Observou-se na linhagem HL-60 a modulação de NFkB (p=0,3012; n=3) e de Bax (p=0,9221; n=3). Na linhagem CCRF-CEM observou-se o aumento de NFkB (p=0,0053; n=3) e Bax (p=0,6956; n=3). Os resultados mostraram que os derivados LPSF/AC-34 + LPSF/AC-129 apresentam atividade frente às linhagens de tumores hematopoiéticos e sólidos, modulando expressão gênica e proteica. / The (Z / E) -5- (acridin-9-yl) methylene-3- (3-chloro-benzyl) thiazolidin-2,4-dione (LPSF / AC-34) and (Z) -5 - (acridin-9-yl) methylene-3- (3-chloro-benzyl) -4-thioxo-thiazolidin-2-one (LPSF / AC-129) thiazacridinic derivatives were synthesized. The reaction product contained (Z) LPSF / AC-129 (72%) and (Z / E) LPSF / AC-34 (22%), with 94% of yield. The derivatives chemical structures were determined by infrared spectroscopy, nuclear magnetic resonance spectroscopy and mass spectrometry hydrogen and the purity was determined by HPLC-MS. The mixture LPSF / AC-34 + LPSF / AC-129 cytotoxicity was evaluated against adherent and non-adherent tumor cell lines throught MTT method. The IC50 values obtained was 3,98 μM (Burkitt lymphoma - RAJI); 35,6 μM (T-cell leukemia - Jurkat); 8,05 μM (acute promyelocytic leukemia - HL-60); 14,27 μM (acute lymphoblastic leukemia - CCRF-CEM); 55,77 μM (glioblastoma - NG97); > 100 μM (breast - T47D). The compounds selectivity was assessed in peripheral blood mononuclear cells (PBMC) of healthy volunteers and showed an IC50> 100μM. Then, the derivative effect on cell cycle and induction of death was assayed by flow cytometry. It was observed that the 3,98 μM dose of mixture LPSF / AC-34 + LPSF / AC-129 caused no significant changes in cell cycle and induce death by apoptosis in lymphoma cell line RAJI. In parallel through RT-PCR, it was evaluated the derivatives effect on GADD153, PPAR gamma, Bcl-2, SOD1, Beclin, Bid, RIP3, p21 genes expression in HL-60 and CCRF-CEM tumor cell lines compared to untreated cells . After submitting HL-60 line to 10 hours exposure of 8.05 μM derivatives dose (n = 3), we observed the modulation of GADD153 (12,47 fold, p=0.0808) and PPAR gamma (4,82 fold, p=0.2277) genes. On CCRF-CEM cell line (14,27 μM dose; n=3) it was observed modulation of Bcl-2 (0,97 fold, p = 0,4409), Bid (1,62 fold, p = 0,3911), RIP3 (0,97 fold, p=0,3722) and SOD1 (1,29 fold, p=0,0172) genes indicating interference on oxidative stress. It is also evaluated the derivatives effect on protein expression of NFkB, Bax, GADD153 and pPTEN by Western blotting. It was observed, in HL-60 cell line, the NFkB (p=0,3012; n=3) and Bax (p=0,9221; n=3) modulation. In CCRF-CEM cell line was observed NFkB (p=0,0053; n=3) and Bax (p=0.6956; n=3) increase. The results showed that the derivatives LPSF / AC-34 + LPSF / AC-129 had activity against hematopoietic and solid tumor cell lines by modulating gene and protein expression.