O consumo lícito e ilícito de derivados anfetamínicos tem aumentado significativamente nos últimos anos, acentuando a necessidade de métodos analíticos adequados para a determinação dessas substâncias pelos laboratórios de toxicologia forense. Este trabalho teve como objetivo o desenvolvimento de métodos cromatográficos para a análise simultânea de anfepramona (DEP), femproporex (FEM), metilfenidato (MPH), 4-bromo-2,5-dimetoxi-anfetamina (DOB) e 4-bromo-2,5-dimetoxi-fenetilamina (2-CB) em amostras não-biológicas. Foram desenvolvidos métodos de detecção por cromatografia a gás com detector de ionização de chama (CG/DIC), de confirmação por cromatografia a gás com detector de espectrometria de massas (CG/EM) e de detecção e quantificação por cromatografia líquida de alta eficiência com detector ultravioleta (CLAE/UV). Os derivados anfetamínicos estudados foram identificados e quantificados simultaneamente através do método CLAE/UV utilizando uma coluna C-18, comprimento de onda 206 nm e modo isocrático. DEP, FEM, MPH e DOB foram detectados simultaneamente por CG/DIC e CG/EM utilizando colunas capilares, sem derivatização e com um tempo de corrida inferior a 10 minutos. Os métodos desenvolvidos foram validados através da avaliação dos parâmetros de linearidade, especificidade, precisão, exatidão, limite de detecção, limite de quantificação e robustez. Os métodos desenvolvidos são de fácil execução, rápidos e adequados para a utilização na rotina laboratorial. / The consumption of both licit and illicit amphetamine derivatives has grown increasingly in recent years, emphasizing the need for analytical methods suitable for identification and quantification of these substances by forensic toxicology laboratories. This aim of this work was to develop and validate methods for the simultaneous chromatographic analysis of amfepramone (diethylpropione, DEP), fenproporex (FEM), methylphenidate (MPH), 4-bromo-2,5-dimethoxyamphetamine (DOB), and 4-bromo-2,5 dimethoxyphenetylamine (2-CB) in non-biological samples. Methods of detection by gas chromatography with flame ionization detector, (GC/FID), confirmation by gas chromatography with mass spectrometry detection (GC/MS), and detection and quantification by high performance liquid chromatography with ultraviolet detection (HPLC/UV) were developed. The amphetamine derivatives studied were identified and quantified simultaneously by HPLC/UV using a RP-C18, 206 nm wavelength and isocratic conditions. DEP, FEM, MPH and DOB were detected both by GC/FID and GC/MS using capillary columns, without derivatization and running times lower than 10 minutes. The validation parameters accessed were linearity, specificity, precision, accuracy, limit of detection, limit of quantification and robustness. The developed methods are easy to implement, fast and suitable for use in routine laboratory analysis.

O presente estudo teve como objetivos: determinar o teor dos polifenóis: flavonóides e antocianos totais presentes nos extratos de mirtilo (Vaccinium ashei) e amora preta (Rubus sp) por espectrofotometria; desenvolver e validar uma metodologia analítica para a caracterização dos extratos por cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE), identificar, isolar e quantificar os principais compostos; avaliar a atividade anticolinesterásica, antioxidante frente à difenilpicrilhidrazol (DPPH) e anti-quimiotática in vitro; realizar a dosagem de aminas biogênicas no cérebro, investigar as possíveis atividades antinociceptiva, antiinflamatória, antiepiléptica, cognitiva e neuroprotetora do extrato de Vaccinium ashei, e o efeito neuroprotetor de um composto isolado a partir de Rubus: a cianidina, em vários modelos experimentais in vivo, em ratos e camundongos. Os perfis cromatográficos apresentaram compostos comuns às duas amostras; onde foram identificados 4 flavonóides, sendo hiperosídeo, quercitrina e isoquercitrina comuns a ambos extratos, e a rutina confirmada apenas em Rubus. Cinco antocianidinas foram identificadas em Vaccinium: delfinidina, cianidina, petunidina, peonidina e malvidina, e a cianidina em Rubus. Os resultados demonstraram, diferenças nas quantidades totais de polifenóis, flavonóides e antocianos. Todos os extratos, apresentaram atividade seqüestradora do radical DPPH in vitro. A atividade antiquimiotática in vitro foi comprovada para a fração flavonoídica. Os ensaios biológicos realizados in vivo demonstraram que o extrato preparado a partir de uma mistura de diferentes cultivares de Vaccinium ashei apresentou efeitos antinociceptivos nos testes da formalina sub-plantar, contorções abdominais, placa quente e tail flick. Produziu também efeito neuroprotetor, avaliado pelo ensaio cometa e pelo método de TOSC. Também causou aumento da atividade locomotora, assim como exerceu um efeito ansiolítico em roedores adultos. Facilitou a memória de curta duração e a Memória de longa duração e produziu um aumento de 5-HT no estriado e hipocampo de ratos adultos. Foi observado também que a cianidina isolada exerceu atividade neuroprotetora conforme avaliado pelo método de TOSC em ratos adultos. Não foram observadas diferenças significativas no modelo de epilepsia, entre o grupo tratado e o grupo controle, assim como não foram detectadas alterações no sistema dopaminérgico. Em síntese, os dados analisados em conjunto, permitem sugerir que o extrato de Vaccinium ashei e compostos isolados a partir de Rubus sp., como a cianidina, apresentam importante efeito neuroprotetivo, antinociceptivo e cognitivo, e nesta ação está envolvida a participação direta ou indireta dos receptores serotonérgico, acetilcolinérgicos, opióides e de citocinas pró-inflamatórias. Neste sentido, foram obtidos avanços significativos acerca dos mecanismos de ação de ambos gêneros o que torna o seu extrato e seus princípios ativos interessantes para o aproveitamento e desenvolvimento de novos alimentos funcionais e/ou nutracêuticos. / The objectives of this study were: comparing total phenolics, total anthocyanins and antioxidant capacity in appropriate berry samples from selected cultivars of the Vaccinium ashei and Rubus. A reliable HPLC procedure for determining the profile, quantifying and isolating of major compounds present in the extracts have been developed. The potential effects of the extracts were observed by chemotaxis assay, by acetilcholinesterasic inhibition, and their antioxidant properties evaluated using 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl (DPPH) in vitro. Otherwise, we examined the antinociceptive, antiinflammatory, cognitive, anti-epileptic and neuroprotective effects of the extract of Vaccinium ashei in several experimental models in vivo, as well as biogenic amine concentration, in specific brain regions in rats and mice. In addition, it was tested the efficacy of oral administration of cyanidin-3-glucoside extracted from Rubus sp. in lipid peroxidation in brain rats (TOSC). An HPLC method for the analysis of anthocyanidins and flavonoids in berries extracts have been developed. The data obtained show that various compounds are common in the fruits analyzed, and four flavonoids were identified: hyperoside, quercetrin and isoquercitrin occurring in both fruits, and rutin occurring only in Rubus. Five anthocyanidins were identified in Vaccinium: delphinidin, cyanidin, peonidin, petunidin, and malvidin, and in Rubus cyanidin 3-glucoside was the major anthocyanin. We found that the flavonoids fractions significantly have inhibited migration celullar and acetilcholynestarase, and both total extract and fractions exhibited strong antioxidant activity. The extract (a mixture from the different cultivars) significantly enhanced short and long-term memory in the inhibitory avoidance task, induced an increase in the number of crossings during open field habituation, and had an anxiolytic effect in the elevated plus-maze task. These processes are accompanied by alterations in serotonin (5-HT) in the striatum, and the hippocampus. Cyanidin 3-glucoside isolated significantly reduced lipid peroxidation in hippocampal tissue in rats. In conclusion, the data from the current study show that the Vaccinum extract produce an important neuroprotective, cognitive and antinociceptive effect, which could be related with a direct or indirect interaction with the serotonergic, cholinergic, opioids receptors and pro-inflammatory cytokines. On the other hand, the extract don’t have protected the pentilenotetrazole-induced convulsions in mice, or influenced the memory retention in old rats when accessed in the step-down inhibitory avoidance, and showed no anxiolytic action in an elevated plus maze. The Vaccinium ashei extract did not alter locomotor activity, and the dopamine concentration in adult or old rats.

Fungal growth on food and subsequent contamination with mycotoxins is a public health problem. Ochratoxin A (OTA) is a important mycotoxin, with nephrotoxic effects and carcinogenic properties. Decreasing the fungal contamination and consequently preventing toxin development is the most efficient action to reduce human exposure through the diet. The use of organic acids as preservatives in foods is an excellent alternative. The aim of this study was to investigate the influence of acetic, citric and sorbic acid on the growth of Aspergillus species at different acidic pH values, and the influence of these organic acids on OTA production. To evaluate the susceptibility of the isolates in the analyzed acids a factorial arrangement was used with nine fungi, four pH levels (4.5, 5.0, 5.5, and 6.0) and three types of acids in different concentrations: acetic acid (0, 12.5, 25, 50, 100, 200, 400 and 800mm), citric acid (0, 50, 100, 200, 400 and 800mm) and sorbic acid (0, 0.5, 1, 2, 4, 8, 16 and 32mm). The experiments were incubated for six days and conducted in triplicate. The inhibitory concentrations (IC) were the lowest acid concentration tested where the fungi was not able to grow. To determine the influence of these acids on mycotoxin production, a factorial arrangement was used with two fungi (A. carbonarius and A. niger) and two pH (4.5 and 5.0). The acid concentrations were the same as those used in the susceptibility experiments. The experiment was carried out in duplicate by incubation for seven days at 25°C for the determination of IC for each isolate. Controls and two concentrations below the IC (0, 25 and 50% IC) were selected for the analysis of OTA. OTA quantification was performed by high performance liquid chromatography (HPLC) with fluorescence detection. Differences were found on the sensitivity of the species tested between the analyzed acids. A. flavus, A. parasiticus and A. carbonarius were more sensitive to acetic and sorbic acids whereas A. niger and A. tubingensis were the most resistant. A direct correlation between pH and the inhibitory concentration was observed. Generally, for every increase in pH by 0.5 the level of acetic acid and sorbic acid required to inhibit the growth of the same isolate doubled. In the other side, citric acid did not show an important antifungal power. It was also observed that sub-lethal dosages of sorbic acid did not prevent fungal growth, and in addition can stimulate the production of ochratoxin A on A. carbonarius and A. niger isolates. The result shows the importance of considering both the pH and the predominant fungal species in the product, when calculating the acid dosages for prevention of fungal food spoilage. / O desenvolvimento de fungos em alimentos e a subsequente possibilidade de contaminação destes por micotoxinas constituem um problema de saúde pública. Dentre as micotoxinas mais importantes temos a ocratoxina A (OTA), com ação nefrotóxica e propriedades carcinogênicas. Diminuir a contaminação fúngica e consequentemente prevenir a formação desta toxina é a medida mais eficiente para reduzir a exposição dos seres humanos através da dieta. O uso de ácidos orgânicos como conservante em alimentos representa uma alternativa frente a este problema. Assim, o objetivo deste trabalho foi investigar a influência dos ácidos acético, cítrico e sórbico sobre o crescimento de espécies do gênero Aspergillus em meio de cultura sob diferentes valores de pH, além de determinar a influência destes ácidos orgânicos na produção de OTA. Para avaliar a suscetibilidade dos isolados aos ácidos testados foi utilizado um arranjo fatorial com nove cepas de Aspergillus, quatro níveis de pH (4,5; 5,0; 5,5; e 6,0) e três tipos de ácidos nas concentrações: ácido acético (0; 12,5; 25; 50; 100; 200; 400 e 800 mM), ácido cítrico (0; 50; 100; 200; 400 e 800mM) e ácido sórbico (0; 0,5; 1; 2; 4; 8; 16; 32 mM). Os experimentos foram conduzidos em triplicata, incubados por seis dias. As concentrações inibitórias (CI) foram as menores concentrações de ácido testadas onde não houve crescimento fúngico. Para determinar a influência destes ácidos na produção de micotoxinas, utilizou-se um arranjo fatorial com dois fungos ocratoxigênicos (A. carbonarius e A. niger), dois valores de pH (4,5 e 5,0), sendo as concentrações de ácido as mesmas utilizadas para o ensaio de suscetibilidade. O experimento foi conduzido em duplicata, incubando-se por sete dias à 25 ºC e determinando-se as CI para cada isolado selecionado-se para a análise de OTA os controles e duas concentrações abaixo da CI (ou seja, 0; 25 e 50% da CI). A quantificação da OTA foi realizada através de cromatografia líquida de alta eficiência com detector de fluorescência. Houve diferença quanto à sensibilidade das espécies testadas para os ácidos avaliados. A. carbonarius, A. parasiticus e A. flavus foram mais sensíveis aos ácidos acético e sórbico e os mais resistentes foram A. niger e A. tubingensis quando comparados com os demais isolados. Por outro lado, o ácido cítrico não exibiu poder antifúngico importante. Foi verificada uma relação direta entre os valores de pH e a concentração inibitória observou-se, de maneira geral, que a cada acréscimo de 0,5 no valor de pH dobram as concentrações de ácido acético e sórbico necessárias para inibir o crescimento de um mesmo isolado. Também foi observado que dosagens sub-letais de ácido sórbico além de não impedirem o crescimento fúngico podem estimular a produção de OTA em isolados de A. carbonarius e A. niger. Demonstra-se assim a importância de se considerar tanto o pH quanto as espécies fúngicas predominantes no produto ao se calcular a dosagens destes ácidos a ser aplicada para garantir a estabilidade dos alimentos frente à deterioração fúngica e segurança toxicológica.

The following work presents an evaluation of the antimycobacterial activity (against Mycobacterium smegmatis) of the extracts, fractions and some phenolic compounds present in the leaves of Ficus benjamina L. and Ficus luschnathiana (Miq.) Miq., along with an estimation of the total phenolic content and the quantification of some of these compounds by High Performance Liquid Chromatography (HPLC). The phenolic estimation (Folin-Ciocalteu method) revealed that the crude extracts and the high polarity fractions from these extracts (ethyl acetate and n-butanol) are rich in polyphenols, although, its amount are not directly related to the antimycobacterial activity. The evaluation of this biological activity was performed by broth microdilution method, furnishing the minimum inhibitory concentration (MIC) of the extracts, fractions and tested compounds. The better biological activity was verified with butanolic fraction from F. luschnathiana (MIC = 156,25 μg/mL) and ethyl acetate fraction from F. benjamina (MIC = 312,50 μg/mL). However, the correlation of these good results with specific compounds was not possible, since technical difficulties prevented the isolation of substances from these fractions; and concerning the screened polyphenols only quercetin was encountered in butanolic fraction. In addition, quercetin exerted weak antimycobacterial activity against M. smegmatis (MIC = 625,00 μg/mL), much weaker than that observed for the fraction. The other investigated standards that were encountered in the extracts and fractions (caffeic and chlorogenic acids, rutin and kaempferol), also exhibited weak inhibitory effect. Thus, the good antimycobacterial activity observed for the fractions above mentioned are probably not related to these phenolics, still it may be related to compounds of the same nature. Many polyphenols, such as flavonoids, have been reported as mycobacterial growth inhibitors, thus it is also possible to conclude that the structural characteristics of quercetin, rutin and kaempferol do not support the biological activity studied. / A seguinte dissertação apresenta uma avaliação da atividade antimicobacteriana (frente à Mycobacterium smegmatis) de extratos, frações e substâncias fenólicas presentes nas folhas de Ficus benjamina L. e Ficus luschnathiana (Miq.) Miq., juntamente com uma estimativa do teor de polifenóis totais e a quantificação de alguns destes compostos por Cromatografia Líquida de Alta Eficiência (CLAE). O doseamento de polifenóis (método de Folin-Ciocalteu) revelou que os extratos brutos e as frações mais polares destes extratos (acetato de etila e n-butanol) são bastante providos de substâncias fenólicas, ainda que este teor não esteja diretamente relacionado à atividade antimicobacteriana. A avaliação desta atividade biológica foi realizada por método de microdiluição em caldo, que fornece a concentração inibitória mínima (CIM) dos extratos, frações e substâncias testadas. Uma boa atividade inibitória foi constatada para a fração butanólica de F. luschnathiana (MIC = 156,25 μg/mL) e para a fração acetato de etila de F. benjamina (MIC = 312,50 μg/mL). Entretanto, não foi possível correlacionar estes bons resultados a compostos em específico, visto que por dificuldades técnicas não foi realizado o isolamento de substâncias destas frações; e dos polifenóis pesquisados, somente a quercetina foi encontrada na fração butanólica. Esta por sua vez apresentou fraca atividade inibitória sobre M. smegmatis (MIC = 625,00 μg/mL), inferior a própria fração. Outros padrões investigados e que foram encontrados nos extratos e frações (ácidos cafeico e clorogênico, rutina e canferol), também apresentaram fraca atividade antimicobacteriana. Desta forma, a boa atividade inibitória das frações citadas acima possivelmente não se deve a estes polifenóis, ainda que possa estar relacionada a substâncias de natureza semelhante. Diversos polifenóis, como os flavonóides, têm sido reportados como inibidores do crescimento de micobactérias, de forma que também se pode concluir que as características estruturais da quercetina, rutina e canferol não favoreçam esta atividade biológica aqui apresentada.

Made available in DSpace on 2014-12-17T14:03:29Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DanielleSB.pdf: 977139 bytes, checksum: 8435c2a5e1927080b529352e7ed8ae63 (MD5) Previous issue date: 2008-07-03 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior / Vitamin A deficiency (VAD) is a serious public health problem in developing countries, and as a therapeutic and prophylactic measure retinil palmitate is being supplemented. Nevertheless its efficacy has been questioned. The objective of the study was to evaluate the supplementation of two retinil palmitate megadosis on the serum retinol levels of post partum healthy mothers from Dr. Jos? Pedro Bezerra (Hospital Santa Catarina) hospital, Natal - RN. The enrolled women (n=199) were randomly distributed into three studied groups and supplemented with retinil palmitate immediately after delivery with a single 200,000 IU dose (group S1), two 200,000 IU dose (group S2) with 24h difference between the doses, or no supplementation (group C). Among women selected, 143 remained until the end of the study. The influence of vitamin A dietary intake was evaluated during pregnancy and after 30 days of delivery. The average intake of the population was reasonable, but a high prevalence of inadequate intake was found. Retinol in colostrums and mature milk was determined by high performance liquid chromatography (HPLC). The retinol average in colostrums and mature milk in the supplemented and control groups were adequate according to the reference values. In colostrums, women from groups C, S1 and S2 presented retinol averages by milk volume of 94.8 ? 40.2 ?g/dL, 92.2 ? 50.0 ?g/dL and 91.8 ? 53.7 ?g/dL, respectively. No difference was found between these averages (p=0.965), this was also seen when the values where expressed as ?g/g of fat (p=0.905). After 30 days of delivery, retinol per milk volume differed between the control group (36.6 ? 17.5 ?g/dL) and groups supplemented with 200,000 IU (51.0 ? 28.8 ?g/dL) or 400,000 IU (55.2 ? 31.6 ?g/dL) of retinil palmitate (p<0,05). Nevertheless, when S1 and S2 groups where compared, no significant difference was found (p=0.97). Considering retinol/g of fat, the means were 12.7 ? 6.7 ?g/g, 15.6 ? 8.3 ?g/g and 17.2 ? 8.9 ?g/g for groups C, S1 and S2, respectively, with significant difference between groups S2 and C (p=0,01). Subclinical VAD prevalence showed a serious public health problem in the study population (32% in colostrums and 31.5% in mature milk). When analyzing the groups separately, the group which received two doses (200,000 IU + 200,000 IU) presented the lowest VAD prevalence (20.7%). Retinil palmitate supplementations of 200,000 IU and 400,000 IU (divided in two doses) in the immediate post partum showed no significant difference. Nevertheless, the 400,000 IU (divided in two doses) supplementation showed a reduction in VAD / A defici?ncia de vitamina A (DVA) ? um grave problema de sa?de p?blica nos pa?ses em desenvolvimento e por este motivo tem-se implementado a suplementa??o com retinil palmitato como medida terap?utica e profil?tica. Entretanto, a sua efic?cia tem sido questionada. O estudo objetivou avaliar o efeito da suplementa??o materna de duas megadoses de retinil palmitato (200.000 UI cada uma) no p?s-parto, sobre os n?veis de retinol no leite materno de lactantes saud?veis do hospital Dr. Jos? Pedro Bezerra (Hospital Santa Catarina), Natal - RN. As mulheres recrutadas (n=199) foram distribu?das aleatoriamente em tr?s grupos de estudo e suplementadas com retinil palmitato no p?s-parto imediato com dose ?nica de 200.000 UI (grupo S1), dose dupla de 200.000 UI espa?adas de 24h (grupo S2) ou n?o receberam suplementa??o (grupo C). Dentre as mulheres originalmente selecionadas, 143 permaneceram at? o fim do experimento. Foi verificada a influ?ncia do consumo alimentar de vitamina A durante a gesta??o e ap?s 30 dias do parto. O consumo m?dio da popula??o foi satisfat?rio, por?m ainda foi encontrada uma expressiva preval?ncia de consumo inadequado. O retinol no leite colostro e no leite maduro de 30 dias foi determinado por Cromatografia L?quida de Alta Efici?ncia (CLAE). As m?dias de retinol nos leites colostro e maduro dos grupos suplementados e controle, apresentaram-se adequadas em rela??o aos valores de refer?ncia. No leite colostro, as mulheres dos grupos C, S1 e S2 apresentaram m?dias de retinol por volume de leite de 94,8 ? 40,2 ?g/dL; 92,2 ? 50,0 ?g/dL e 91,8 ? 53,7 ?g/dL, respectivamente, n?o sendo encontrada diferen?a entre estas (p=0,965), o que tamb?m ocorreu quando expresso em ?g/g gordura (p=0,905). No p?s-parto de 30 dias, o retinol por volume de leite diferiu entre o grupo controle (36,6 ? 17,5 ?g/dL) e os grupos suplementados com 200.000 UI (51,0 ? 28,8 ?g/dL) ou 400.000 UI (55,2 ? 31,6 ?g/dL) de retinil palmitato (p<0,05). Por?m, quando S1 e S2 foram comparados entre si, n?o foi encontrada diferen?a significativa (p=0,97). Considerando-se o retinol/g de gordura, as m?dias foram 12,7 ? 6,7 ?g/g; 15,6 ? 8,3 ?g/g e 17,2 ? 8,9 ?g/g para os grupos C, S1 e S2, respectivamente, havendo diferen?a significativa entre S2 e C (p=0,01). A preval?ncia de defici?ncia subcl?nica de Vitamina A revelou um grave problema de sa?de p?blica (32% no leite colostro e 31,5% no leite maduro) na popula??o. Analisando-se os grupos separadamente, aquele que recebeu dose dupla (200.000 UI + 200.000 UI) apresentou o menor percentual de DVA (20,7%). As suplementa??es de 200.000 UI e 400.000 UI de retinil palmitato (dividida em duas doses) no p?s-parto imediato, n?o mostraram diferen?a significativa. Entretanto, considerando o ?ltimo tratamento, foi observada uma diminui??o da preval?ncia de DVA

Made available in DSpace on 2014-12-17T14:03:42Z (GMT). No. of bitstreams: 1 HeleniAC_DISSERT.pdf: 2512013 bytes, checksum: e69e375e25ebb38b43385a02d5ecc6c7 (MD5) Previous issue date: 2013-06-10 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Cient?fico e Tecnol?gico / The Vitamin E consists of eight chemically homologous forms, designated alpha, beta, gamma and delta tocopherols and tocotrienols. Biologically, the alpha-tocopherol (&#945;-TOH) is the most important. Commercially, are found two types of &#945;-TOH a natural (RRR-alpha-tocopherol) and another synthetic (all-rac-alpha-tocopherol). Both forms are absorbed in the intestine, the liver is a preference in favor of forms 2R, due to transfer protein &#945;-TOH. It has higher affinity to these stereoisomers. Newborns are considered high risk for vitamin E deficiency, mainly premature, these have breast milk as a food source for maintenance of serum &#945;-TOH. Clinical signs such as thrombocytosis, hemolytic anemia, retrolental fibroplasia, intraventricular hemorrhage, bronchopulmonary dysplasia and spinocerebellar degeneration can be found in case of a low intake of &#945;-TOH. Thus, maternal supplementation on postpartum with &#945;-TOH can be an efficient way to increase levels of vitamin E in breast milk and thus the consequently increase the supply of micronutrient for the newborn. However, most studies with vitamin E supplementation have been conducted in animals and little is known about the effect of maternal supplementation in humans, as well as on its efficiency to increase levels of &#945;-TOH in human milk, depending on the shape natural or synthetic. The study included 109 women, divided into three groups: control without supplementation (GC) (n=36), supplemented with natural capsule (GNAT) (n=40) and the synthetic capsule (GSINT) (n=33). Blood samples were collected for determination of maternal nutritional status, and colostrums at initial contact and after 24 hours post-supplementation. Analyses were performed by High Performance Liquid Chromatography. Values of &#945;-TOH in serum below 499.6mg/dL were considered deficient. We used the Kruskal-Wallis test and Tukey test to confirm the increase of alpha-tocopherol in milk and efficiency of administered capsules. Daily consumption of &#945;-TOH was based on daily intake of 500 mL of colostrum by the newborn and compared with the nutritional requirement for children from 0 to 6 months of age, 4 mg / day. The mothers had mean concentration of serum &#945;-TOH in 1016 ? 52, 1236 ? 51 and 1083 ? 61 mg / dL, in CG, GNAT and GSINT respectively. There were no women with deficiiency. The GC did not change the concentrations of &#945;-TOH in colostrum. While women supplemented with natural and synthetic forms increased concentrations of &#945;-TOH colostrum in 57.6% and 39%, respectively. By comparing supplemented groups, it was observed a significant difference (p=0.04), the natural capsule more efficient than the synthetic, approximately 49.6%. Individually, 21.1% of the women provided below 4mg/day of &#945;-TOH, after supplementation for this index declined4.1%. Thus, maternal supplementation postpartum raised the levels of alpha-tocopherol in colostrum, and increased efficiency was observed with the natural form / A vitamina E consiste em oito formas quimicamente hom?logas, denominadas, alfa, beta, gama e delta, tocofer?is e tocotrien?is. Biologicamente, o alfa-tocoferol (&#945;-TOH) ? o mais importante. Comercialmente s?o encontradas duas formas de &#945;-TOH, uma natural (RRR-alfa-tocoferol) e outra sint?tica (all-rac-alfa-tocoferol). Ambas as formas s?o absorvidas no intestino, entretanto, no f?gado ocorre uma prefer?ncia em favor das formas 2R, devido ? prote?na de transfer?ncia de &#945;-TOH, apresentar maior afinidade a estes estereois?meros. Os neonatos s?o considerados grupo de risco para defici?ncia de vitamina E, principalmente os pr?-maturos, estes t?m o leite materno como a fonte alimentar para manuten??o dos n?veis s?ricos de &#945;-TOH. Sinais cl?nicos como trombocitose, anemia hemol?tica, fibroplasia retrolental, hemorragia intraventricular, displasia bronco pulmonar e degenera??o espinocerebelar podem ser encontrados caso ocorra uma baixa ingest?o de &#945;-TOH. Sendo assim, a suplementa??o materna nos p?s-parto com &#945;-TOH pode ser uma forma eficiente de aumentar os n?veis de vitamina E no leite materno e, consequentemente aumento no fornecimento do micronutriente para o rec?m-nascido. Entretanto, a maioria dos estudos com suplementa??o de vitamina E foram realizados em animais e s?o escassos os conhecimentos de sua suplementa??o em humanos, bem como, sobre sua efici?ncia para aumentar os n?veis de &#945;-TOH no leite humano, em fun??o da forma natural ou sint?tica. Participaram do estudo 109 mulheres, distribu?das em tr?s grupos: controle sem suplementa??o (GC) (n=36), suplementadas com a c?psula natural (GNAT) (n=40) e com a c?psula sint?tica (GSINT) (n=33). Foram coletadas amostras de sangue para determina??o do estado nutricional materno, e de colostro no contato inicial e ap?s 24 horas p?s-suplementa??o. As an?lises foram realizadas por Cromatografia L?quida de Alta Efici?ncia. Valores de &#945;-TOH no soro inferiores a 499,6 &#956;g/dL foram considerados como deficientes. Foram utilizados o teste de Kruskal Wallis e teste de Tukey para confirmar o aumento de alfa-tocoferol no leite e a efici?ncia das c?psulas administradas. O consumo di?rio de &#945;-TOH foi baseado na ingest?o di?ria de 500 mL de colostro pelo rec?m-nascido e comparada com o requerimento nutricional para crian?as de 0 ? 6 meses de idade, 4 mg/dia. As parturientes apresentaram concentra??o m?dia de &#945;-TOH no soro de 1016 ? 52, 1236 ? 51 e 1083 ? 61 &#956;g/dL, nos grupos GC, GNat e GSINT, respectivamente. N?o foram encontradas mulheres com defici?ncia. O GC n?o apresentou varia??o nas concentra??es de &#945;-TOH no colostro. Enquanto mullheres suplementadas com as formas natural e sint?tica aumentaram as concentra??es de &#945;-TOH no colostro em 57,6% e 39%, respectivamente. Ao comparar os grupos suplementados foi observado uma diferen?a significativa (p=0,04), sendo a c?psula natural mais eficiente que a sint?tica em aproximadamente 49,6%. Individualmente 21,1% das mulheres forneceram valores inferiores as 4mg/dia de &#945;-TOH, ap?s a suplementa??o este ?ndice declinou para 4,1%. Sendo assim, a suplementa??o materna no p?s-parto elevou os n?veis de alfa-tocoferol no colostro e maior efici?ncia foi observada com a forma natural

Made available in DSpace on 2014-12-17T14:16:30Z (GMT). No. of bitstreams: 1 AnneCOC_DISSERT.pdf: 1977864 bytes, checksum: 512fa415d2a3e86643a5d0929e22bccf (MD5) Previous issue date: 2012-06-05 / Kalanchoe brasiliensis Cambess (Crassulaceae), commonly known as sai?o , coirama branca , folha grossa , is originally from Brazil and commonly found in S?o Paulo to Bahia, mainly in the coastal zone. Regarding of biological activities, most preclinical studies were found in the literature, mainly about the anti-inflammatory activity of extracts obtained from leaves and / or aerial parts of K. brasiliensis. As regards the chemical constitution, it has been reported mainly the presence of flavonoids in the leaves of the species, but until this moment did not knows which are the active compounds. Although it is a species widely used in traditional medicine in Brazil, there is no monograph about the quality parameters of the plant drug. In this context, this study aims to characterize and quantify the chemical markers of hydroethanolic extract (HE) from the leaves of K. brasiliensis, which can be used in quality control of plant drug and derivatives obtained from this species. The methodology was divided into two parts: i. Phytochemical study: to fractionate, isolate and characterizate of the chemical (s) marker (s) of the HE from the leaves of K. brasiliensis; ii. To Developed validate of analytical method by High Performance Liquid Chromatography (HPLC)-diode array detector (DAD) to quantify the chemical (s) marker (s) of the EH. i. The EH 50% was prepared by turbo extraction method. It was then submitted to liquid-liquid partition, obtaining dichloromethane, n-butanol and ethyl acetate (AcOEt) fractions. The AcOEt fraction was selected to continue the fractionation process, because it has a chemical profile rich in flavonoids. The acOEt fraction was submitted to column chromatography using different systems for obtaining the compound Kb1. To identify this compound, it was submitted to UV analysis ii. For quantitative analysis, the EH was analyzed by HPLC, using different methods. After selecting the most appropriate method, which showed satisfactory resolution and symmetrical peaks, it was validated according to parameters in the RE 899/2003. As result, it was obtained from the AcOEt fraction the compound Kb1 (2.7 mg). Until this moment, the basic nucleus was characterized by UV analysis using shift reagents. The partial chemical structure of the compound Kb1 was identified as a flavonol, containing hydroxyls in 3 , 4 position (ring A), 5 and 7 free (ring B) and a replacement of the C3 hydroxyl by a sugar. As the analysis were performed in the HPLC coupled to a DAD, we observed that the UV spectrum of the major peaks of EH from K. brasiliensis shown similar UV spectrum. According to the literature, it has been reported the presence of patuletin glycosydes derivatives in the leaves of this species. Therefore, it is suggested that the compound Kb1 is glycosylated patuletin derivative. Probably the sugar (s) unit(s) are linked in the C3 in the C ring. . Regarding the development of HPLC analytical method, the system used consists of phase A: water: formic acid (99,7:0,3, v / v) and phase B: methanol: formic acid (99,7:0,3, v / v), elution gradient of 40% B - 58% B in 50 minutes, ccolumn (Hichrom ?) C18 (250x4, 0 mm, 5 ?m), flow rate 0.8 mL / min, UV detection at 370 nm, temperature 25 ? C. In the analysis performed with the co-injection of thecompound Kb1 + HE of K. brasiliensis was observed that it is one of the major compounds with a retention time of 12.47 minutes and had a content of 15.3% in EH of leaves from K. brasiliensis. The method proved to be linear, precise, accurate and reproducible. According to these results, it was observed that compound Kb1 can be used as a chemical marker of EH from leaves of K. brasiliensis, to assist in quality control of drug plant and its derivatives / Kalanchoe brasiliensis Cambess (Crassulaceae), conhecida popularmente como sai?o, coirama branca e folha grossa, ? origin?ria do Brasil e comumente encontrada de S?o Paulo at? a Bahia, principalmente na zona litor?nea. Quanto ? atividade microbiol?gica, estudos pr?-cl?nicos foram realizados no sentido de investigar a atividade antiinflamat?ria, para os extratos obtidos a partir folhas e/ou partes ?reas de K. brasiliensis. Em rela??o ? constitui??o qu?mica, h? relatos principalmente da presen?a de flavonoides nas folhas da esp?cie. Embora seja uma esp?cie utilizada amplamente na medicina tradicional no Brasil, n?o h? monografia que especifique os par?metros de qualidade da droga vegetal. Dentro deste contexto, o presente trabalho tem como objetivo caracterizar e a quantificar os marcadores qu?micos do extrato hidroetan?lico (EH) das folhas de K. brasiliensis, que possam ser utilizados no controle de qualidade de derivados obtidos a partir dessa esp?cie. A metodologia do estudo foi dividida em duas partes: i. Estudo fitoqu?mico: fracionamento, isolamento e caracteriza??o de marcador(es) qu?mico(s) do extrato hidroetan?lico das folhas de K. brasiliensis; ii.Desenvolvimento e valida??o de metodologia anal?tica por Cromatografia L?quida de Alta Efici?ncia (CLAE) para quantificar (o)s marcador(es) qu?mico(s) do EH. i. O EH 50% foi obtido pelo m?todo de turboextra??o. Em seguida foi submetido a uma parti??o l?quido-l?quido, obtendo-se as fra??es diclorometano, n-butanol e acetato de etila (FAcOEt). A fra??o acetato de etila foi selecionada para dar continuidade ao fracionamento, e por apresentar um perfil qu?mico rico em flavonoides, uma vez que esses metab?litos parecem estar relacionados ? atividade farmacol?gica. ii. Para a an?lise quantitativa, o EH foi analisado por CLAE, utilizando diferentes m?todos. Ap?s selecionado o m?todo mais adequado, que apresentou picos sim?tricos e resolu??o satisfat?ria, foi realizada a valida??o segundo par?metros da RE No 899/2003. Como resultados, foi obtido a partir da fra??o acetato de etila o composto Kb1 (2,7mg). Neste composto, foi caracterizado o n?cleo b?sico flavono?dico por an?lise por UV utilizando reagentes de deslocamento. O composto Kb1 foi identificado como um flavonol, com hidroxilas em 3 , 4 (anel B) e 5 e 7 livres (anel A), al?m de uma hidroxila substitu?da em C3. Como foi utilizado a CLAE acoplada a um detector de arranjo de diodos, foi poss?vel observar que os espectros UV dos picos majorit?rios do EH de K. brasiliensis s?o similares. Em estudos anteriores foi descrita a presen?a de derivados glicosilados da patuletina nas folhas dessa esp?cie. Portanto, sugere-se que Kb1 seja um derivado glicosilado na posi??o C-3 da patuletina. Quanto ao desenvolvimento anal?tico por CLAE, o sistema utilizado foi constitu?do de fase A: ?gua:?cido f?rmico (99,7:0,3, v/v) e fase B: metanol:?cido f?rmico (99,7:0,3, v/v) em elui??o gradiente de 40%B - 58%B em 50 minutos, coluna cromatogr?fica (Hichrom) C18 (250x4,0mm, 5?m), fluxo 0,8 mL/min, detec??o em UV a 370 nm, temperatura de 25oC. Por meio de co-inje??o do padr?o + extrato foi observado que Kb1 trata-se de um dos compostos majorit?rios, com tempo de reten??o de 12,47 minutos e apresentou um teor de 15,3% no EH de K. brasiliensis O m?todo apresentou-se linear, preciso, exato e reprodut?vel. De acordo com os resultados obtidos, foi observado que Kb1 pode ser utilizado como marcador qu?mico do EH das folhas de K. brasiliensis, para auxiliar no controle de qualidade da droga vegetal e seus derivados

Made available in DSpace on 2014-12-17T14:16:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 WanessaAB_DISSERT.pdf: 3799185 bytes, checksum: ce77744774059676a04175b60c73d121 (MD5) Previous issue date: 2014-03-26 / The synthetic guanylhydrazones WE010 (3,5-di-tert-butil-4-hidroxibenzaldehyde-guanylhydrazone), WE014 (4-bifenilcarboxialdehydeguanylhydrazone) and WE017 (3,4-diclorobenzaldehydeguanylhydrazone) showed high cytotoxic activity in terms of percentage inhibition of cancer cells growth. However, further progress in the development of these drug candidates requires precise and convenient methods for their qualitative and quantitative analyses. The aim of this study was to develop and validate High Performance Liquid Chromatography with diode-array detection (HPLC-DAD) and Ultra Fast Liquid Chromatography with diode-array detection (UFLC-DAD) methods suitable for as simultaneous as isolated determination of studied guanylhydrazones, based on the optimization of chromatographic parameters and obtaining reduced detection times. The chromatographic analyses of analytes by HPLC were performed on C18 ACE analytical column (150 mm x 4.6 mm), with a particle size of 5.0 ?m. Among all the conditions assayed, the best results of separation were obtained with a mixture of methanol:water (60:40, v/v) as the mobile phase at a flow rate 1.5mL/min and pH of 3.5 adjusted at acetic acid. The UFLC method was developed by experimetal desing techniques in order to find optimal chromatographic analytical conditions, which were achieved on XR-ODS analytical column (50 mm x 3.0 mm), with a particle size of 2,2 ?m, maintained at 25 ?C. The mobile phase was consisted of methanol:water (65:35, v/v) with 0.1% triethylamine (TEA) and pH of 3.5 adjusted at acetic acid, at a flow rate 0.5 mL/min. The procedure were validated following evaluating parameters such as specificity, linearity, limits of detection (LD) and quantification (LQ), precision, accuracy and robustness, giving results within the acceptable range. Although the UFLC method shows better sensitivity (lower values of LD and LQ), robustness (lower rates of relative standard deviation) and minimize spending time and solvent, both developed methods were adequately applied to the analysis of guanylhydrazones molecules, may be used in routine of quality control laboratories. Keywords: guanylhydrazones, HPLC/DAD, UFLC/DAD, validation of analitical method / As guanilhidrazonas sint?ticas WE010 (3,5-di-tert-butil-4-hidroxibenzalde?do-guanilhidrazona), WE014 (4-bifenilcarboxialde?doguanilhidrazona) e WE017 (3,4-diclorobenzalde?doguanilhidrazona) apresentaram alta atividade citot?xica em rela??o a inibi??o do crescimento de c?lulas cancer?genas. Contudo, o avan?o no desenvolvimento desses candidatos a f?rmacos necessitam de m?todos precisos para suas adequadas an?lises quantitativas e qualitativas. O objetivo desse estudo foi desenvolver e validar m?todos por Cromatografia L?quida de Alta Efici?cia com Detector de Arranjo Diodo (CLAE-DAD) e Cromatografia L?quida de Ultra Efici?cia com Detector de Arranjo Diodo (CLUE-DAD) adequados para a determina??o simult?nea, bem como isolada das guanilhidrazonas em estudo, baseado na otimiza??o de par?metros cromatogr?ficos e obten??o de tempos reduzidos de detec??o. As an?lises cromatogr?ficas por CLAE foram realizadas numa coluna anal?tica C18 ACE (150 mm x 4,6 mm), com tamanho de part?cula de 5,0 ?m. Dentre as condi??es analisadas, os melhores resultados de separa??o foram obtidos com uma fase m?vel composta por metanol:?gua (60:40), em um fluxo de 1,5 mL/min. e um pH de 3,5 ajustado com ?cido ac?tico. O m?todo por CLUE foi desenvolvido a partir de t?cnicas de planejamento fatorial, com o objetivo de se encontrar as melhores condi??es anal?ticas, que foram obtidas a partir de an?lise em uma coluna XR-ODS (50 mm x 3,0 mm), com tamanho de part?cula de 2,2 ?m, mantida a 25 ?C. A fase m?vel foi constitu?da por metanol:?gua (65:35) com 0,1% de Trietilamina (TEA) e pH de 3,5 ajustado com ?cido ac?tico. Os procedimentos foram validados a partir da avalia??o de par?metros de especificidade, linearidade, limites de detec??o (LD) e quantifica??o (LQ), precis?o exatid?o e robustez, obtendo-se resultados dentro do intervalo aceit?vel. Embora o m?todo por CLUE tenha mostrado melhor sensibilidade (menores valores de LD e LQ), robustez (menores ?ndices de desvio padr?o relativo) e minimizado gastos de tempo e solvente, ambos os m?todos desenvolvidos foram adequadamente aptos para as an?lises das mol?culas de guanilhidrazonas, podendo ser utilizados na rotina de laborat?rios de controle de qualidade

Made available in DSpace on 2015-05-14T13:00:08Z (GMT). No. of bitstreams: 1 arquivototal.pdf: 4886781 bytes, checksum: 77da1f8dad17f8c8f812258fa8a8dd89 (MD5) Previous issue date: 2012-04-18 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Yangambin, a furofuran lignan isolated from Ocotea duckei Vattimo (Lauraceae) has important pharmacological activities, such as selective antagonist of platelet activating factor (PAF), cardiovascular protective effects, CNS depressant, and others. Besides, it is presented as a phytochemical marker of the specie and a promising substance for a herbal drug development. Thus, this study aimed at the development and validation of an analytical method on HPLC-DAD for simultaneous quantitative determination of yangambin and its epimer, epi-yangambin, in extracts and fractions of Ocotea duckei. For method development, a synthetic approach was made in order to obtain the lignans with high purity. The synthetic route includes a biotransformation process with coconut water peroxidase for a stereoseletive synthesis of yangambin. The chromatographic conditions for the study were: reverse phase column C-18 (250 x 4,6 mm x 5 μm), mobile phase was a mixture of water and acetonitrile (50:50) at a flow rate of 1,0 mL/min, detection at a wavelength of 215 nm. Lignans were isolated from crude ethanolic extract of the plant (leaves and stem bark) through a lignoids isolation procedure. Epimers were separated by semi-preparative HPLC-DAD to yield compounds free from impurities, being characterized by spectroscopic methods (1H and 13C NMR), infrared (IR), mass spectrometry (MS), optical rotation, circular dichroism, and thermal analysis. Validation of analytical method was performed in accordance with Resolution nº 899/2003, from ANVISA, proving to be: selective for the two epimers, linear at the concentration range of 1,0 60,0 μg/mL, precise (CV ≤ 5% ), accurate (99-101%) and robust. Application of the validated analytical method in a quantitative study allowed to determine that each 1,0g of crude ethanolic extract from stem bark and leaves presents 58,07 mg of yangambin and 88,94 mg of epi-yangambin. In total lignoids fraction, each 1,0g has 188,75 mg of yangambin and 250,02 mg of epi-yangambin. / A iangambina, lignana furofurânica isolada de Ocotea duckei Vattimo (Lauraceae), possui importantes atividades farmacológicas, como antagonista seletivo do fator de agregação plaquetária (PAF), ações protetoras cardiovasculares, depressora do SNC, dentre outras. Além disso, se apresenta como o marcador fitoquímico da espécie e é uma substância promissora para o desenvolvimento de um fitofármaco. Dessa forma, este trabalho teve como objetivo o desenvolvimento e validação de metodologia analítica em CLAE-DAD para a quantificação simultânea da iangambina e seu epímero, epi-iangambina, nos extratos e frações de Ocotea duckei. Para o desenvolvimento do método, elaborou-se uma proposta sintética para obtenção das lignanas com grau de pureza elevado. A rota sintética utiliza processo de biotransformação através da peroxidase da água de coco para a síntese da iangambina de modo estereoseletivo. As condições do método cromatográfico desenvolvido foram: coluna de fase reversa C-18 (250 x 4,6 mm x 5 μm), como fase móvel uma mistura de água e acetonitrila (50:50), a um fluxo de 1 mL/min, detecção no comprimento de onda de 215 nm. As lignanas foram isoladas do extrato etanólico bruto da planta (folhas e casca do caule) através de metodologia de isolamento para lignóides. Os epímeros foram separados através de CLAE-DAD semi-preparativa, obtendo-se os marcadores livres de impurezas, sendo caracterizados por métodos espectroscópicos (RMN de 1H e 13C), Infravermelho (IV), espectrometria de massas (EM), rotação ótica, dicroísmo circular, além de técnicas termoanalíticas. A validação da metodologia analítica foi realizada de acordo com a Resolução RE nº 899/2003 da ANVISA, mostrando-se ser: seletivo para os dois epímeros, linear na faixa de concentração de 1-60 μg/mL, preciso (CV ≤ 5%), exato (99-101%) e robusto. A aplicação da metodologia analítica num estudo quantitativo permitiu estabelecer que em 1,0g do extrato das cascas do caule e folhas tem-se cerca de 58,07 mg de iangambina e 88,94 mg de epi-iangambina. Na fração de lignóides totais, para cada 1,0g tem-se 188,75 mg de iangambina e 250,02 mg de epi-iangambina.

Considerando a atividade antifúngica demonstrada, o óleo de Cymbopogon citratus apresenta-se como uma promissora matéria-prima no desenvolvimento de produtos farmacêuticos. Para a utilização em formulações, é necessário que se verifique a qualidade do óleo, determinada pelo teor de citral, seu componente majoritário. Além disso, cuidados relacionados à sua estabilidade devem ser considerados. Na busca por método alternativo à técnica de cromatografia a gás, comumente utilizada para óleos voláteis, um dos objetivos deste trabalho foi desenvolver e validar método analítico por cromatografia líquida de alta eficiência para quantificar o citral presente no óleo de C. citratus, na forma de seus isômeros geométricos, o neral e o geranial. Em virtude da volatilidade e suscetibilidade à degradação apresentadas pelo óleo de C. citratus, foram preparadas micropartículas contendo essa substância, a fim de melhorar sua estabilidade. Foram avaliadas duas técnicas de preparação, a secagem por aspersão e a precipitação, além de dois materiais encapsulantes, a beta-ciclodextrina e a hidroxipropil-beta-ciclodextrina. As micropartículas preparadas foram caracterizadas em relação ao teor de umidade, rendimento, porcentagem de inclusão, espectrofotometria na região do infravermelho e a morfologia foi avaliada por microscopia eletrônica de varreduta. Para determinar os teores de neral e geranial presentes nas micropartículas, método por CLAE foi validado. As micropartículas foram incorporadas em emulsões não-iônicas e géis hidrofílicos e estas formulações foram avaliadas quanto às suas propriedades físico-químicas e em relação a sua estabilidade. Os teores de neral e gernanial foram determinados utilizando-se método por CLAE adapatado do método descrito para as micropartículas. / Considering the antifungal activity demonstrated the oil of Cymbopogon citratus presents as a promising raw material for the development of pharmaceutical products. For use in pharmaceutical formulations, it is necessary to verify the quality of the oil, determined by the citral content, its major compound. Moreover, precautions related to its stability should be considered. In the search for alternative method to the technique of gas chromatography, commonly used for volatile oils, one of the purposes of this work was to develop and to validate analytical method by high performance liquid chromatography for quantitation of the citral contents in the C. citratus oil, as its geometric isomers, neral and geranial. Because of the volatility and susceptibility to degradation presented by C. citratus oil, microparticles containing this oil were prepared in order to improve its stability. Two techniques of preparations were evaluated; spraydrying and precipitation, and also two materials of encapsulation, betacyclodextrin and hydroxypropyl-beta-cyclodextrin were tested. The microparticles were characterized by their content of water, yielding, percentage of inclusion, infrared spectroscopy (IV), and the morphology was evaluated by scanning electronic microscopy (SEM). For the determination of neral and geranial contents present into microparticles an HPLC method was validated. The microparticles were incorporated in nonionic emulsions (NIE) and hydrophilic gels (HG), and physico-chemical properties as well as stability of these formulations were evaluated. The neral and geranial contents were determined using the HPLC method adapted from that described for the microparticles.