Made available in DSpace on 2016-08-19T12:56:31Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Raphael Teixeira Verbinnen.pdf: 4011751 bytes, checksum: 6a77c544380be3240e2586a2ad753bff (MD5) Previous issue date: 2009-04-28 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Given the humanity perception of necessity to preserve the environment and the incessant search for sustainable development, today the preservation of natural water sources is by far one of the most worrying factors for the preservation of life. Besides the most common aquatics pollutants, also there is one called emerging pollutants, which in recent decades have been detected due the technological advances. These involve mainly the organic micropollutants, which present the endocrine disrupters (ED's) main group. Among the ED's, the natural and synthetic sex steroids hormones have significant importance because their daily use in medicine, in the replacement therapy and contraceptive methods, which has contributed to the continuous release in domestic sewage. There are several consequences of this effect, including fertility declining, occurrence of various cancers and disorders in the development and homeostasis of organisms. The domestic and industrial sewage and leaching from agricultural fields fertilized with sludge from sewage treatment plants (STP's) are the main sources of contamination. This study allowed the chromatographic separation of the hormones estriol (E3), 17 β-estradiol (E2), estrone (E1) and 17 α-ethynylestradiol (EE2) in relatively short duration (16,5 minutes), using the acetonitrile:water (ACN: H2O) mixture as mobile phase in gradient mode, constant flow of 1 mL min-1, injection volume of 20 μL, λ = 280 nm and temperature of 27 ºC. The method was developed in two laboratories, involving different instruments. Four procedures and two adsorbents (C18 e OPT) of SPE were tested. The sample preparation method, including dechlorination and the SPE procedure with C18 cartridge, resulted in the recovery values within the acceptable limit. The developed method was validated according to guidelines of the ANVISA`s Guide for Validation, and bioanalytical methods was adapted for this study. The method was then applied in the analysis of the natural (17β-estradiol, estrone and estriol) and the synthetic (17α-ethinylestradiol) hormone in drinking water from the city of São Luís Peaks were not identified for the substances studied, probably substances concentrations below the limits of detection and quantification of the method were found. / Diante da percepção do homem sobre a necessidade de se preservar o ambiente e da busca incessante pelo desenvolvimento sustentável, hoje a proteção das fontes de água natural é de longe um dos fatores mais preocupantes para a conservação da vida. Além dos poluentes aquáticos mais comuns, existem também os chamados poluentes emergentes, que nas últimas décadas vêm sendo detectados em função do aprimoramento de métodos e técnicas de detecção. Estes envolvem principalmente os micropoluentes orgânicos, que por sua vez apresentam os desreguladores endócrinos (DEs) como principal grupo. Dentre os DEs, os hormônios sexuais esteróides, naturais e sintéticos, têm significativa importância, devido ao seu uso diário na medicina, em terapias de reposição e métodos contraceptivos, o que tem provocado o contínuo lançamento em esgotos sanitários. Várias são as conseqüências do efeito destas substâncias, dentre elas: diminuição da fertilidade, ocorrência de cânceres diversos e perturbações no desenvolvimento e na homeostase de organismos. Os esgotos sanitários e industriais, além da lixiviação de campos de agricultura adubados com lodo proveniente de estações de tratamento de esgotos (ETEs) são as principais fontes de contaminação. Este trabalho possibilitou a separação cromatográfica dos hormônios estriol (E3), 17 β-estradiol (E2), estrona (E1) e 17 α-etinilestradiol (EE2) em tempo relativamente curto (16,5 min), utilizando como fase móvel a mistura acetonitrila:água (ACN:H2O), em modo gradiente, fluxo de 1 mL min-1, λ = 280 nm e temperatura de 27 ºC. O método foi desenvolvido em dois laboratórios, envolvendo dois instrumentos diferentes. Foram testados 4 procedimentos e 2 adsorventes de extração em fase sólida (C18 e OPT). O método de preparo da amostra, incluindo a descloração e o procedimento de EFS, com cartucho C18 resultou em valores de recuperação dentro dos limites considerados adequados. O método desenvolvido foi validado segundo as orientações do Guia para Validação de Métodos Analíticos e Bioanalíticos publicado pela ANVISA, tomando-se por base os procedimentos para os métodos bioanalíticos, os quais foram adaptados para este estudo. O método foi, então, aplicado na análise dos hormônios naturais (17β-estradiol, estrona e estriol) e o sintético (17α- etinilestradiol) em água potável distribuída na cidade de São Luís. Para as amostras analisadas, não foram identificados picos referentes às substâncias de interesse, portanto pode-se afirmar que estas foram encontradas em concentrações inferiores aos limites de detecção e de quantificação do método.

Made available in DSpace on 2016-08-19T12:56:32Z (GMT). No. of bitstreams: 1 VERONICA ALVES GONCALVES DA SILVA.pdf: 6289705 bytes, checksum: 1c73081d0d3faa6d1cdc03eef3a8bc0c (MD5) Previous issue date: 2008-06-16 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Honey is a natural substance produced by bees and by your nature it is considered a healthy product. Presence of additives and/or preserve agents is not permitted. On apiculture, sulfonamydes are largely used on prevention and control of beehive disease, such as American foulbrood caused by Paenibacillus larvae. A consequence of this practice is the presence of these residues in honey, that should cause allergy reactions on consumers. In the last years, some publicated works is discussing the presence of antibiotic and sulfonamides residues in honey. In Brazil, the presence of antibiotics residues in food is controled by the Agência Nacional de Vigilância Sanitária (ANVISA) an by the Ministério da Agricultura, Pecuária e do Abastecimento (MAPA). The realization of monitoring contaminants residues in food programs, as well as the Plano Nacional de Controle de Resíduos (PNCR) from MAPA are essentials to the sanitary vigilance actions development, preventing and controlling possible hazard to the consumer health. This work has the objective the development and validation of multiresidue analytical method to the sulfadiazine, sulfathiazole, sulfadimedine and sulfadimethoxine determination in bee honey using high performance liquid chromatography (HPLC) with diode array detector (DAD). The established methodology consisted on such conditions: solid phase extraction with Nexus sorbent, elution with acetonitrile 5 mL, and reconstitution with sodium acetate buffer (0,05 mol L-1) pH 4,5, with 1% methanol addition, separation on analytical column C18, acetonitrile and water mobile phase, on gradient elution mode and detection on 278 nm. The sample preparation consisted on the acid hydrolysis with hydrochloric acid 2 mol L-1 of a honey rate and adjust to pH 4,5 with sodium acetate buffer solution 0,05 mol L-1 pH 4,5. The method was validated and the results demonstrated accuracy and precision between the limits established by the current legislation. Good linearity range was encountered, obtaining recovery values varying from 41 to 89% and relative standard deviation estimative varying between 2,36 and 14% to the four studied compounds. The four sulfonamides detection limits in honey sample varying from 20 to 30 ^g kg-1 and the quantification limits varied from 60 to 90 ^g kg-1. Considering 100 ^g kg-1 the residue maximum limit established by the Brazilian legislation to the SDZ, STZ, SMZ and SDM total concentration, the described method permit suitable determination of the four sulfonamides in bee honey. / O mel é uma substância natural, produzida pelas abelhas e por sua natureza é considerado um produto saudável, não sendo permitido a presença de aditivos e/ou agentes conservadores. Na apicultura as sulfonamidas são muito utilizadas na prevenção e controle de doenças em colméias, como a cria pútrida americana causada pelo Paenibacillus larvae. Uma conseqüência desta prática é a presença destes resíduos no mel, o que pode causar reações alérgicas nos consumidores. Nos últimos anos, alguns trabalhos na literatura vêm discutindo a presença de resíduos de antibióticos e sulfonamidas no mel. No Brasil, a presença de resíduos de antibióticos nos alimentos é controlada pela Agência Nacional de Vigilância Sanitária (ANVISA) e pelo Ministério da Agricultura, Pecuária e do Abastecimento (MAPA). A realização de programas de monitoramentos de resíduos de contaminantes em alimentos, assim como o Plano Nacional de Controle de Resíduos (PNCR) do MAPA são essenciais para que ações de vigilância sanitária possam ser desenvolvidas, prevenindo e controlando possíveis danos à saúde do consumidor. Este trabalho tem por objetivo desenvolver e validar um método analítico multiresidual para a determinação de sulfadiazina, sulfatiazol, sulfadimidina e sulfadimetoxina em mel de abelhas usando cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE) com detector de arranjo de fotodiodos (DAD). A metodologia estabelecida consistiu nas seguintes condições: extração em fase sólida com sorvente Nexus, eluição com 5 mL de acetonitrila e reconstituição com solução-tampão acetato de sódio (0,05 mol L-1) pH 4,5, com adição de 1% de metanol, separação em coluna analítica C18, fase móvel acetonitrila e água, no modo de eluição em gradiente e detecção a 278 nm. O preparo de amostra consistiu na hidrólise ácida com ácido clorídrico 2 mol L-1 de uma alíquota de mel e ajuste para pH 4,5 com solução tampão acetato de sódio 0,05 mol L-1 pH 4,5. O método foi validado e os resultados demonstraram exatidão e precisão dentro dos limites estabelecidos pela legislação vigente. Foi encontrada boa faixa de linearidade, obtendo-se valores de recuperação que variaram de 41 a 89% e estimativa do desvio padrão relativo variando entre 2,36 e 14% para os quatro compostos estudados. Os limites de detecção das quatro sulfas em amostra de mel variaram de 20 a 30 ^g kg-1 e os limites de quantificação variaram de 60 a 90 ^g kg-1. Considerando o limite máximo de resíduo estabelecido pela legislação brasileira de 100 ^g kg-1 para as concentrações totais de SDZ, STZ, SMZ e SDM, o método descrito permite adequada determinação das quatro sulfas em amostras de mel de abelhas.

Made available in DSpace on 2016-08-19T12:56:49Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao Monica de Araujo Neves.pdf: 1987787 bytes, checksum: c4159e188bd8d08a6860a3f310618950 (MD5) Previous issue date: 2014-12-19 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Drugs in the planet have increased during last decades. Such compounds can cause adverse impact on ecosystems. Soon, more effective analytical methods are essential for the study of new pollutants, especially in magazines whose headquarters are very complex as mangrove sediments. Therefore, this study aimed to improve an analytical method to assess the occurrence of fluoroquinolone antibiotics, ciprofloxacin (CIP), levofloxacin (LEV) and norfloxacin (NOR), in sediment samples from the Paciência river located on the Maranhão island using the technique of ultrasound-assisted extraction, extraction phase solid and liquid chromatography (HPLC/FD). According to the study, the method was linear (r²> 0.99), recovery ranging from 73.73 to 88.85%, precise (RSD <20%), selective and sensitive (detection limit for CIP, LEV and NOR 9.32; 17.78 and 4.42 µg.kgˉ¹, respectively, and limit of quantitation of 20 µg.kgˉ¹ for all three drugs) for quantification of fluoroquinolones in estuarine sediments. Other relevant aspects of the method developed in this work were the simplicity, low cost and absence of interfering to a very complex environmental matrix as are the mangrove sediments. When evaluating the sediment at various points of the river there was contamination at three points by CIP ranging from 56.55 to 70.45 µg.kgˉ¹ These results are similar to those found around the planet to polluted regions and they are of concern due to the effects of these antibiotics in the ecosystem. / É crescente a utilização de fármacos no planeta nas últimas décadas. Tais compostos podem causar impacto negativo nos ecossistemas. Logo, métodos analíticos mais eficazes são fundamentais para o estudo de novos poluentes, especialmente em compartimentos cujas matrizes são muito complexas como sedimentos de manguezal. Sendo assim, este trabalho teve por objetivo aprimorar um método analítico para avaliar a ocorrência de antibióticos fluoroquinolônicos, ciprofloxacino (CIP), levofloxacino (LEV) e norfloxacino (NOR), em amostras de sedimento do rio Paciência localizadas na ilha do Maranhão utilizando a técnica de extração assistida por ultrassom, extração em fase sólida e a cromatografia líquida (CLAE/FL). Segundo o estudo, o método mostrou-se linear (r²>0,99), recuperação variando 73,73-88,85%, preciso (DPR < 20%), seletivo e sensível (Limite de detecção para CIP, LEV e NOR de 9,32; 17,78 e 4,42 µg.kgˉ¹, respectivamente e limite de quantificação de 20 µg.kgˉ¹ para todos os três analitos) para quantificação de fluoroquinolonas em sedimento estuarino. Outros aspectos relevantes do método desenvolvido nesse trabalho foram à simplicidade, o baixo custo e ausência de interferentes para uma matriz ambiental muito complexa como são os sedimentos de manguezal. Ao avaliar o sedimento em vários pontos do rio observou-se contaminação em três pontos por CIP variando entre 56,55 70,45 µg.kgˉ¹. Esses resultados são similares ao encontrados ao redor do planeta para regiões poluídas e são motivos de preocupação em função dos efeitos desses antibióticos no ecossistema.

As toxinas do envenenamento paralisante por moluscos (Paralytic Shellfish Poisoning – PSP) são compostos naturais bioativos conhecidos devido ao consumo acidental de frutos do mar contaminados. Estas moléculas, das quais a mais potente é a saxitoxina (STX), são uma classe de alcalóides neurotóxicos que possuem diferentes análogos e diferentes toxicidades, e são produzidas por algumas cianobactérias e algumas espécies de dinoflagelados do gênero Alexandrium, Gymnodinium e Pyrodinium. As toxinas paralisantes são neurotoxinas solúveis em água que agem sobre células nervosas e musculares através do bloqueio dos canais de sódio dependentes de voltagem, desta maneira, impedindo a condução do sinal no neurônio o que leva a uma paralisia muscular. Em casos graves, pode ocorrer morte por insuficiência respiratória. O envenenamento diarréico por moluscos (Diarrhetic Shelfish Poisoning – DSP) é caracterizado por problemas gastrointestinais com sintomas como diarréia, náusea, vômito, dor de cabeça, calafrios e dores abdominais. DSP é conseqüência do consumo de mariscos contaminados que ingeriram dinoflagelados do gênero Dynophysis e Prorocentrun através de sua alimentação por filtração da água. Contaminação de frutos do mar por toxinas PSP ou DSP coloca-se como sério problema para a indústria pesqueira e para a saúde pública. Neste estudo, estabeleceu-se um programa de monitoração para mexilhões (Perna perna) e para peixes (Sardinella brasiliensis, Anchoviella lepidentostole e Brevoortia aurea) coletados em peixarias e entrepostos de pesca no municípios de Caraguatatuba e São Sebastião, São Paulo. Os extratos para PSP foram preparados de duas maneiras: de acordo com a AOAC (Association of Official Analytical Chemists), através do aquecimento por 5 min de uma mistura de 100 g de tecidos homogeneizados com ácido acético 0,1 N; ou a partir da concentração de extratos etanólicos de músculo + pele dos peixes. Os bioensaios com camundongos para PSP consistem na injeção intraperitonial de 1 mL do extrato ácido em cada um dos três camundongos (~ 20 g). O animal é observado quanto aos sintomas clássicos de PSP e o tempo de morte é anotado e então a toxicidade é determinada (em mouse units, MU) pela tabela de Sommer. Para as toxinas causadoras de DSP, os extratos foram preparados pela extração com acetona do homogeneizado das glândulas digestivas, e a determinação da presença destas toxinas é feita através da injeção intraperitonial em camundongos. Nos bioensaios com os extratos preparados segundo o método da AOAC, não houve casos positivos. Para o bioensaio realizado com extratos etanólicos obtiveram-se resultados positivos para 77,8% dos extratos testados. A média de MU de todas as amostras, neste caso, foi de 0,147 MU/g. Nos bioensaios para DSP, três amostras resultaram em sinais que evidenciam a presença destas toxinas, pois os camundongos injetados apresentaram quadro diarréico. Os extratos etanólicos, com positividade para as toxinas de PSP, foram fracionados usando-se colunas Sep-Pak C18. A primeira eluição, com ácido acético 0,1 M, foi analisada usando-se o método de préderivatização e cromatografia líquida de alta eficiência com detecção de fluorescência. As analises em CLAE indicaram a presença de compostos semelhantes às toxinas paralisantes de PSP, confirmando os bioensaios. Portanto, pela primeira vez no Brasil demonstrou-se que as espécies S. brasiliensis, A. lepidentostole e B. aurea são portadoras de toxinas paralisantes, semelhantes às PSP, em pequenas concentrações e que um programa de monitoração é necessário em nosso país para verificação da presença dessas toxinas em organismos que são usados como alimento pela população. / The Paralytic Shellfish Poisoning (PSP) toxins are well-known natural bioactive compounds due to their accidental consumption in contaminated seafood. These molecules, of which the most potent representative is saxitoxin (STX), are a class of neurotoxic alkaloids, having different isoforms and varied toxicities, that are produced by some cyanobacteria and some species of dinoflagellates from the genus Alexandrium, Gymnodinium and Pyrodinium. PSP toxins are water-soluble neurotoxins that act on nerve and muscle cells by blocking sodium channels voltage-dependent, thus preventing the conductance of neuron signal leading to muscular paralysis. In severe cases, death may result due to respiratory failure. Diarrhetic Shellfish Poisoning (DSP) is a gastrointestinal illness with symptoms such as diarrhea, nausea, vomiting, headache, chills and moderate to severe abdominal pain. DSP is usually a consequence of consuming contaminated shellfish that have ingested dinoflagellates of the genera Dinophysis and Prorocentrun through their filter feeding activities. Contamination of seafood by PSP and DSP toxins has posed serious problems to the fisheries industry as well to public health. In this study, was stabilized a monitoring program to shellfish (Perna perna) and finfish (Sardinella brasiliensis, Anchoviella lepidentostole and Brevoortia aurea) collected in fish markets in Caraguatatuba and São Sebastião cities, São Paulo state. The extracts for PSP were prepared by two ways: according to AOAC (Association of Official Analytical Chemists), through the heating for 5 min of blend of 100 g of well mixed sample with 0.1 N HCl; or through of the concentration of ethanolic extracts from finfish’s muscle + skin. The PSP mouse bioassay for PSP toxins involves intraperitonial injection (i.p.) of 1 mL of the acid extract into each of three mice (~ 20 g). The mice were observed for classical PSP symptoms and the time to mouse death was recorded and the toxicity was determinate (in mouse units, MU) from the Sommer’s table. To DSP toxins, the extracts was prepared trough the extraction of digestive glands with acetone, and i.p injection in mice was used to determine the presence of theses toxins. In the mouse bioassay for the extracts prepared by AOAC method no positive results was obtained. For the mouse bioassay with ehtanolic extracts was obtained positive results to 77.8 % of the tested extracts. The media of MU of all samples, in this case, was 0,147 MU/g. To the mouse bioassay for the DSP toxins, three samples gives evidence of presence of the diarrhetic toxins, because the mice showed signal like diarrhea. The ethanolic extracts, that was positive to the PSP toxins, was fractionated by a Sep-Pak C18 cartridge. The first elution, with 0.1 M acetic acid, was analyzed by using prechromatographic oxidation and liquid chromatography with fluorescence detection. The HPLC analysis indicated the presence of the PSP toxins, confirming the bioassays. Therefore, in the first time in Brazil was demonstrated that the species S. brasiliensis, A. lepidentostole and B. aurea are carriers of toxins like PSP in little concentrations and that a monitoring program is necessary in our country to verify the presence of these toxins in organisms that are used as food by the population.

A citricultura brasileira apresenta números bastante significativos e expressivos, refletindo a grande importância social e econômica que essa atividade agrícola e industrial tem para a economia do país. O Brasil se destaca como o maior produtor de laranja do mundo. As plantas cítricas podem ser produzidas e multiplicadas de várias formas e a enxertia é a forma de propagação vegetativa mais utilizada comercialmente no Brasil. Dentre os porta-enxertos mais empregados, sobressaem-se o citrumeleiro Swingle e a tangerineira Sunki. Apesar das vantagens presentes nesses dois genótipos, a produção deles está sendo limitada por doenças causadas por fungos e estraminipilas. Em citros, as diversas espécies de Phytophthora são responsáveis pelas doenças gomose e podridões, principalmente de radicelas. P. nicotianae é a espécie que mais afeta as plantas cítricas no Brasil. Não obstante a grande importância de P. nicotianae para os porta-enxertos, alguns mecanismos de resistência ou susceptibilidade ainda requerem mais investigações cientificas. O presente trabalho visa a elucidação de alguns mecanismos de resistência dos citros a P. nicotianae, por meio de estudos fisiológicos e bioquímicos dos porta-enxertos, além da ação de meios de cultura e da qualidade da luz no estudo da fisiologia desse estraminipila. Para isso realizou-se a detecção de alguns equivalentes de compostos fenólicos através da técnica HPLC e o comportamento do genótipo resistente frente à possível inibição da síntese de compostos fenólicos através do tratamento das raízes do porta-enxerto Swingle com Pro-Ca; avaliou-se a atração de zoósporos de P. nicotianae por exsudatos radiculares provenientes dos dois porta-enxertos com o uso de uma armadilha adaptada; verificou-se o comportamento do zoósporo, a motilidade e a zoosporogênese frente à ação de vários compostos fenólicos e testou-se a ação de diferentes meios de culturas e da qualidade da luz no crescimento micelial e na esporulação de P. nicotianae. Os resultados revelaram que a tangerineira Sunki possui maiores quantidades de equivalentes em apigenina que o citrumeleiro Swingle nos dois períodos de avaliação, para o HPLC. O porta-enxerto resistente apresentou mais equivalentes de ácido clorogênico que o genótipo susceptível. Quanto ao Pro-Ca, os equivalentes de compostos fenólicos em raízes de plântulas do citrumeleiro Swingle não diferiram daquelas plantas tratadas com água. O Pro-Ca não inibiu e não desativou a síntese de compostos fenólicos. O uso do anticorpo contra a elicitina \"&alpha;-plurivorina\" teve resultados intermediários no consumo de água por plântulas de tangerineira Sunki e a atividade zoosporicida dos compostos fenólicos apresentou resultados variáveis no comportamento da motilidade de zoósporos. Os compostos fenólicos escopoletina e tricetinpentametoxi conseguiram paralisar a motilidade e proporcionaram as menores porcentagens de zoosporogênese. O meio de cultura AA permitiu a maior TCMD, seguido de CA e V8-CaCO3-Ágar. Os maiores valores de esporulação foram encontrados nesses dois últimos meios, respectivamente. Todas as faixas de luzes (e a ausência de luz) estudadas no presente trabalho podem ser avaliadas para o crescimento micelial, porém o tratamento claro foi aquele que mais induziu a esporulação de zoósporos de P. nicotianae. / The Brazilian citrus industry has very significant and expressive numbers, reflecting the great social and economic importance of this industrial and agricultural activity has for the economy. Brazil stands out as the world\'s largest orange producer. Citrus plants can be produced and multiplied in various ways and the bud is the form of vegetative propagation more commercially used in Brazil. Among the most commonly used rootstocks, stand up the Swingle citrumelo and Sunki mandarin. Despite the advantages these two genotypes present, their production is being limited by diseases caused by fungi and estraminipilas. In citrus, all species of Phytophthora are responsible for diseases gummosis and fibrous root rot, especially. P. nicotianae is the kind that affects citrus plants in Brazil. Regardless of the great importance of P. nicotianae for rootstocks, some mechanisms of resistance or susceptibility still require further scientific investigation. This study aims to elucidate some mechanisms of resistance of citrus to P. nicotianae, through physiological and biochemical studies of rootstocks, beyond of action culture media and quality of light in the physiological study of this estraminipila. To this was carried out to detect certain equivalent of phenolic compounds by HPLC and genotype resistant behavior against the possible inhibition of the synthesis of phenolic compounds by treatment of the roots of Swingle rootstock with Pro-Ca; evaluated the zoospores attraction P. nicotianae by exudates from the two rootstocks using an adapted trap; it was the zoospore behavior, motility and zoosporogenesis to the action of various phenolic compounds and tested the action of different culture media and quality of light on mycelial growth and sporulation of P. nicotianae. The results for HPLC revealed that Sunki mandarin has larger amounts of apigenin equivalents Swingle citrumelo in that the two periods. The sturdy rootstock had more chlorogenic acid equivalents of the susceptible genotype. As for the Pro-Ca equivalent of phenolic compounds in Swingle seedling roots not differ from those plants treated with water. The Pro-Ca not inhibited and not disabled the synthesis of phenolic compounds. The use of the antibody against elicitin \"&alpha;-plurivorin\" had intermediate results in water consumption by Sunki mandarin seedlings and zoosporicide activity of phenolic compounds showed variable results in the behavior of zoospore motility. The scopoletin and tricetinpentametoxi phenolic compounds managed to paralyze the motility and provided the smallest percentages of zoosporogenesis. The culture medium AA allowed greater DMGR, followed by CA and V8-CaCO3-Agar. The highest sporulation values were found in the last two media, respectively. All lights tracks (and the absence of light) studied in this work can be evaluated for mycelial growth, but the treatment light was that more induced sporulation of zoospores of P. nicotianae.

The diclofenac potassium (DPt) is a derivate of phenylacetic acid, with proprietary anti-inflammatory, analgesic and antipyretic, thus indicated for the relief of low back pain, rheumatoid arthritis and postoperative pain. The DPt is in the market for oral suspension dosage forms, dragee, suppository, injectable solution, dispersible tablet and tablet. However not been found in literature analytical method for determination of DPt in oral suspension. There are also no reports of methods for evaluating the in vitro dissolution of oral suspension containing the drug. Thus, in the present work were developed and validated methods by liquid chromatography high efficiency for the quantification and assessment of drug dissolution in oral suspension. Quantification of DPt was performed using column C8, mobile phase consisting of methanol and phosphate buffer pH 2.5 with a flow rate of 1.0 mL/min. The quantitative method was shown to be specific, even in the presence of possible degradation products, good linearity (r = 1.0), precise (RSD < 2.0%) and having adequate accuracy and robustness. The drug demonstrated to be stable under alkaline conditions and high temperature, but showed instability when exposed to conditions acid, oxidative and in the presence of ultraviolet radiation. To develop the method of dissolving the best conditions were 900 mL of aqueous solution containing 0.3% of sodium laurylsulfate, maintained at 37.0 ± 0.5 ºC, using paddle apparatus with rotation speed of 50 rpm. Thus, the release of DPt was greater than 85.0% at 30 minutes for both batches evaluated. The validated method proved to be specific, linear (r > 0.99), and showed precision and accuracy satisfactory. We also evaluated the stability of the drug in the dissolution medium selected, and the possible adsorption of the drug on the paper filter used. For both the test results were satisfactory. Thus, the methods developed and validated may be used as routine methods in quality control for the quantification and evaluation of the dissolution profile of DPt oral suspension. / O diclofenaco potássico (DPt), fármaco derivado do ácido fenilacético, apresenta propriedade anti-inflamatória, analgésica e antitérmica, sendo assim indicado para o alívio da dor na região lombar, artrite reumatoide e dor pós-operatória. O DPt encontra-se no mercado nas formas farmacêuticas de suspensão oral, drágea, supositório, solução injetável, comprimido dispersível e comprimido, no entanto não foram encontrados na literatura métodos analíticos para determinação de DPt em suspensão oral. Também não há relatos de métodos para avaliação da dissolução in vitro de suspensão oral contendo este fármaco. Desta forma, no presente trabalho foram desenvolvidos e validados métodos por cromatografia a líquido de alta eficiência para quantificação e avaliação da porcentagem dissolvida do fármaco. A determinação quantitativa foi realizada utilizando coluna C8, fase móvel composta de metanol e tampão fosfato pH 2,5 e fluxo de 1,0 mL/min. O método quantitativo apresentou ser especifico, mesmo na presença de possíveis produtos de degradação, boa linearidade (r = 1,0), preciso (DPR < 2,0%) ser exato e robusto. O fármaco demonstrou ser estável em condições alcalinas e a alta temperatura, porém demonstrou instabilidade quando exposto a condições ácidas, oxidativas e na presença da radiação ultravioleta. Para o desenvolvimento do método de dissolução utilizou-se como meio 900 mL de solução aquosa contendo 0,3% de laurilsulfato de sódio, mantida a 37,0 ± 0,5 ºC, utilizando aparato pá com velocidade de rotação de 50 rpm. Nestas condições, a liberação de DPt foi superior a 85,0% em 30 minutos para ambos os lotes avaliados. O método validado demonstrou ser específico, linear (r > 0,99), e apresentou precisão e exatidão satisfatórias. Também se avaliou a estabilidade do fármaco no meio de dissolução, assim como a possível adsorção do fármaco no papel de filtração utilizado. Para ambos os ensaios os resultados encontrados foram satisfatórios. Desta forma, os métodos desenvolvidos e validados podem ser utilizados como métodos de rotina no controle de qualidade para quantificação e avaliação do perfil de dissolução de DPt suspensão oral.

O difosfato de cloroquina é um fármaco antimalárico, de conhecida fotossensibilidade. O presente trabalho teve como objetivo desenvolver, caracterizar e avaliar a fotodegradação de complexos binários e ternários de difosfato cloroquina. Para tanto, foi desenvolvida uma metodologia analítica que permitiu identificar e quantificar o fármaco por CLAE com detecção UV, que mostrou seletividade, além de adequada especificidade, sensibilidade, linearidade, precisão exatidão, frente a seus respectivos produtos de degradação e fotodegradação. Os complexos com &#946;-ciclodextrina e HP-&#946;-ciclodextrina obtidos não foram capazes proteger o fármaco da degradação promovida pela luz nos meios água, HCI 0,1N e tampão fosfato pH 6,8. Em HCI 0,1N verificou-se que alguns complexos capazes, inclusive, de acelerar a degradação promovida pela luz. Foram também realizados estudos de recristalização do fármaco em diferentes solventes para avaliar o impacto sobre suas características físico-químicas, os quais resultaram possíveis modificações cristalinas observadas mediante técnica de DSC quando foram utilizados etanol e clorofórmio como solventes para o processo. / The chloroquine diphosphate is an antimalarial drug of know photosensibility. The present work had as objective to development, characterize and evaluate photodegradation of binary and ternary complex of chloroquine diphosphate. For such a way, an analytical methodology was developed that allowed to identify and quantify the drug for CLAE with detection UV, that showed good selectivity, beyond adjusted specificity, sensitivity, linearity, precision and accuracy, front its respective products of degradation and photodegradation. The complexes with &#946-ciclodextrin and HP-&#946-ciclodextrin had not been capable to protect the drug of the degradation promoted by the light in solvent water, HCl 0,1N and buffer phosphate pH 6,8. In HCl 0,1N is verified that some complex are capable to speed up the degradation promoted by the light. Also studies of recrystallization of the drug in different solvents were carried trough to evaluate the impact on its physical-chemistry characteristics, which had resulted in possible observed by DSC crystalline modifications technique when ethanol and chloroform had been used as solvent for the process.

O difosfato de cloroquina é um fármaco antimalárico, de conhecida fotossensibilidade. O presente trabalho teve como objetivo desenvolver, caracterizar e avaliar a fotodegradação de complexos binários e ternários de difosfato cloroquina. Para tanto, foi desenvolvida uma metodologia analítica que permitiu identificar e quantificar o fármaco por CLAE com detecção UV, que mostrou seletividade, além de adequada especificidade, sensibilidade, linearidade, precisão exatidão, frente a seus respectivos produtos de degradação e fotodegradação. Os complexos com &#946;-ciclodextrina e HP-&#946;-ciclodextrina obtidos não foram capazes proteger o fármaco da degradação promovida pela luz nos meios água, HCI 0,1N e tampão fosfato pH 6,8. Em HCI 0,1N verificou-se que alguns complexos capazes, inclusive, de acelerar a degradação promovida pela luz. Foram também realizados estudos de recristalização do fármaco em diferentes solventes para avaliar o impacto sobre suas características físico-químicas, os quais resultaram possíveis modificações cristalinas observadas mediante técnica de DSC quando foram utilizados etanol e clorofórmio como solventes para o processo. / The chloroquine diphosphate is an antimalarial drug of know photosensibility. The present work had as objective to development, characterize and evaluate photodegradation of binary and ternary complex of chloroquine diphosphate. For such a way, an analytical methodology was developed that allowed to identify and quantify the drug for CLAE with detection UV, that showed good selectivity, beyond adjusted specificity, sensitivity, linearity, precision and accuracy, front its respective products of degradation and photodegradation. The complexes with &#946-ciclodextrin and HP-&#946-ciclodextrin had not been capable to protect the drug of the degradation promoted by the light in solvent water, HCl 0,1N and buffer phosphate pH 6,8. In HCl 0,1N is verified that some complex are capable to speed up the degradation promoted by the light. Also studies of recrystallization of the drug in different solvents were carried trough to evaluate the impact on its physical-chemistry characteristics, which had resulted in possible observed by DSC crystalline modifications technique when ethanol and chloroform had been used as solvent for the process.

Lamivudina (3TC) e zidovudina (ZDV) são inibidores nucleosídeos da transcriptase reversa utilizados na terapêutica anti-HIV. Para avaliar a equivalência farmacêutica entre um medicamento teste contendo esta associação e o referência, foi desenvolvido um método para determinação cromatográfica simultânea de 3TC e ZDV em comprimidos. O método empregou coluna C8 Shim-pack&#174;(150 x 4,6 mm, 5 &#181;m), pré-coluna C18 Phenomenex&#174; (50x4,6 mm 5um), água e metanol 60:40 (v:v) como fase móvel e detecção a 266nm. Este mostrou-se específico, com linearidade entre 45 a 5000 ng/mL, precisão demonstrada por CV% inferior a 5%, exatidão entre 90,0 e 110,0% com recuperação superior a 90% para ambos os fármacos. Os testes de dissolução apresentaram porcentagem de cedência média superior a 85% em 30 minutos. A biodisponibilidade relativa dos produtos Biovir&#174; (referência) e Lamivudina + Zidovudina 150 + 300 mg (teste), foi avaliada por meio de um estudo quantitativo direto, cruzado e aberto. Para purificação das amostras biológicas contendo 3TC e ZDV foi realizada adição de acetato de amônio e dupla extração com acetato de etila. O método cromatográfico bioanalítico utilizou coluna C8 Shim-pack&#174; (150 x 4,6 mm 5 &#181;m) e pré-coluna C18 Phenomenex&#174; (50 x 4,6 mm; 5 &#181;m). Empregou-se sistema gradiente linear, combinando fase móvel A, tampão fosfato 0,01 M:acetonitrila (97:3 v/v) e fase móvel B, metanol, sob fluxo de 1,0 mL/min e detecção a 270 nm. Utilizou-se como padrão interno solução 10 &#181;g/mL de estavudina. O método mostrou-se linear na faixa de concentração de 80 a 2500 ng/mL para 3TC e 80 a 5000 ng/mL para ZDV, com adequada precisão e exatidão intra-corridas e inter-corridas. As amostras plasmáticas mostraram-se estáveis a pelo menos três ciclos de congelamento e descongelamento e 48 horas à temperatura ambiente, após preparação. Os parâmetros farmacocinéticos calculados para 3TC foram: ASCo-t de 4936,10 ng.h/mL e 4760,07 ng.h/mL, ASCo-&#8734; de 5305,76 ng.h/mL e 5069,16 ng.h/mL; Cmax de 1526,33 ng/mL e 1585,61 ng/mL e tmax 1,04 h e 0,97 h, respectivamente, para os produtos referência e teste. Para ZDV os valores obtidos foram ASCo-t de 2341,32 ng.h/mL e 2538,17 ng.h/mL, ASCo-&#8734; de 2561,68 ng.h/mL e 2770,21 ng.h/mL e Cmax de 2406,56 ng/mL e 2652,80 ng/mL e tmax 0,60 h e 0,55 h, respectivamente, para os produtos referência e teste. Os intervalos de confiança 90% para as relações entre os parâmetros Cmax, ASCo-t e ASCo-&#8734; em escala logarítmica obtidos para ambos os fármacos após administração dos produtos referência e teste a 24 voluntários sadios, estiveram compreendidos entre os limites de 80 a 125% exceto pelo Cmax para ZDV. O coeficiente de variação intra-sujeito de 47% demonstrou a alta variabilidade da ZDV em relação ao Cmax. Estudos de permeabilidade indicaram que a ZDV tem alta permeabilidade e alta solubilidade (Classe I) e a 3TC apresenta moderada permeabilidade e alta solubilidade (Classe III) . A absorção destes não é afetada significativamente pelas glicoproteínas-P, o que não pode explicar a alta variabilidade in vivo da absorção de ZDV. / Lamivudine (3TC) and zidovudine (ZDV) are the nucleoside reverse transcriptase inhibitors, They are used in combinations of antiretroviral therapy. The switchability between one test product and reference could be proved if they are pharmaceutically equivalents and bioequivalents. This research beginning with development and validation of chromatographic method to 3TC and ZDV simultaneous determination in tablet. The HPLC system were used to assay and 266nm wavelength ultraviolet detector. Separation was performed using a C8 column (150 x 4,6 mm, 5 &#181;m) Shim-pack&#174;protected by a C18 column (50 x 4,6 mm, 5 &#181;m) Phenomenex&#174;. The mobile phase is composed of water and methanol 60:40 (v:v). This method was successfully applied to simultaneous determination to 3TC and ZDV without interference. It was validated over the range of 45 a 5000 ng/mL for both drugs with accurate from 90 to 110% and precision with variation lower than 5%. Extraction recoveries of the analytes were higher than 90%. The mean dissolution data about 3TC and ZDV were above than 85% in 30 minutes of dissolution test. The relative bioavailability between Biovir&#174; (brand-name product) and Lamivudina + Zidovudina 150 + 300 mg (test product), was conducted for one direct quantitative, open and crossover study. The serial plasma sample of 3TC and ZDV collected after oral administration of brand-name product and test product, were analyzed using a validated high-performance liquid chromatography assay with UV detection in wavelength of 270 nm. The double liquid-liquid extraction was realized with additions of amonio acetat. A CLC-C8 (M) column (150 x 4,6 mm 5 &#181;m) Shim-pack&#174;and C18 column (50 x 4,6mm 5 &#181;m) Phenomenex&#174;, was eluted with two mobile phase in a linear gradient system at a flow-rate of 1 mL/min. The mobile phase A was composed by 0,01 M phosphate bufer:acetonitrile (97:3 v/v) and mobile phase B composed by methanol. A methanolic solution containing 10 &#181; g/mL of stavudine was used as internai standard. The method was linear over the range of 80 a 2500 ng/mL for 3TC and 80 a 5000 ng/mL for ZDV. It was shown adequate intra-day accuracy; inter-day accuracy and precision. The sample have been stable in three cycle of freezing and thawing and 48 hours in room temperature after thawing, purified and with mobile phase. The pharmacokinetic parameter estimates for 3TC, were: ASCo-t de 4936,10 ng.h/mL e 4760,07 ng.h/mL, ASCo-C/) de 5305,76 ng.h/mL e 5069,16 ng.h/mL; Cmax de 1526,33 ng/mL e 1585,61 ng/mL e tmax 1,04 h e 0,97 h, respectively for brand-name product and test product. The obtained values for ZDV were: ASCo-t de 2341 ,32 ng.h/mL e 2538,17 ng.h/mL, ASCo-if.l de 2561,68 ng.h/mL e 2770,21 ng.h/mL e Cmax de 2406,56 ng/mL e 2652,80 ng/mL e tmax 0,60 h e 0,55 h respectively for for brand-name product and test product. The 90% confidence intervals for Cmax, ASCo-t e ASCo-&#8734; for log¬transformed results for 3TC and ZDV after oral administration of brand-name product and test product to 24 health volunteers was between 80 to 125% except for Cmax of ZDV. The high variability of Cmax this was displayed by intra-individual coefficient of variation of 47%. Permeability results suggest that ZDV has a high permeability and high solubility (Class I) and Lamivudine presents moderate permeability and high solubility. (Class III). These results assume that P-gp do not affect significantly lamivudine and zidovudine absorption and can not explain the high variability of zidovudine absorption.

A circulação extracorpórea com hipotermia (CEC-H) é um procedimento comumente utilizado em cirurgias cardíacas, que representa um fator de risco para o paciente por promover extensa hemodiluição e profundas alterações fisiológicas. Nestas cirurgias, utiliza-se a cefuroxima como antimicrobiano para profilaxia de infecções, estando sua concentração inibitória mínima (CIM90) na faixa de 4 a 16 &#181;g/mL dependendo da espécie e cepa bacteriana. Vários esquemas posológicos tem sido propostos para a profilaxia com este antimicrobiano. Assim, o objetivo do presente estudo foi investigar a farmacocinética e a disponibilidade sistêmica da cefuroxima, administrada I.V., bolus, na dose de 1,5g a 17 pacientes submetidos à cirurgia cardíaca com ou sem CEC-H. Desenvolveu-se método analítico simples seletivo e sensível em CLAE-UV para determinar a cefuroxima no plasma e tecido subcutâneo destes pacientes. Os resultados evidenciaram que independente das alterações causadas pela CEC-H, obtiveram-se baixas concentrações plasmáticas, inferiores ao CIM90, a partir da 9a hora após a administração da medicação nos dois grupos de pacientes investigados. Esta baixa disponibilidade sistêmica da cefuroxima após administração de 1,5 g pode favorecer o desenvolvimento de infecções pós-cirúrgicas e o desenvolvimento de cepas bacterianas resistentes. Por outro lado, a disposição cinética da cefuroxima foi alterada pela CEC-H, evidenciando-se ligeiro mas significativo prolongamento da meia vida biológica e redução da depuração plasmática nos pacientes submetidos a este procedimento. A ausência de alterações no volume de distribuição está de acordo com a penetração do antibiótico no tecido, uma vez que a quantidade de cefuroxima presente no subcutâneo foi comparável em ambos os grupos de pacientes investigados. Os dados obtidos permitem recomendar mudanças no regime posológico para manter níveis plasmáticos adequados e garantir a profilaxia com cefuroxima. / Cardiopulmonary bypass and hypothermia (HCPB) is a procedure commonly used during heart surgery, representing a risk factor for the patient by promoting extensive hemodilution and profound physiological changes. Cefuroxime is used for the prophylaxis of infection after heart surgery and its minimum inhibitory concentration (MIC90) may vary from 4 to 16 &#181;g/mL depending on the bacterial species and strain. Several dose schemes have been suggested for prophylaxis with this antimicrobial agent. Thus, the objective of the present study was to assess in a comparative manner the systemic availability of cefuroxime administered intravascularly at the dose of 1.5 g in bolus to 17 patients submitted to heart surgery with or without HCPB. An improved, simple, selective and sensitive micromethod based on HPLC-UV is described to determine cefuroxime in plasma and fat tissue. Despite the differences recorded during the study period as a consequence of HCPB, antibiotic concentrations lower than MIC90 were obtained as early as after the 9th h for the surgical patients of the two groups of patients investigated. Thus, the low systemic availability of cefuroxime after the administration of a 1.5 g dose may be the factor responsible for postoperative infections and may favor the development of resistant bacterial strains. By the other hand, cefuroxime kinetic disposition was altered by HCPB showing a slight prolongation of biological half-life e reduction of plasma clearance. Unchanged apparent volume of distribution was according antibiotic tissue penetration since in both groups of patients the amount of cefuroxime obtained was comparable. The data obtained permit us to recommend a change in the dose scheme in order to maintain adequate plasma levels of the drug and thus guarantee prophylaxis with cefuroxime.