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Análise Morfoquantitativa do Plexo Intramural da Bexiga Urinária de Cobaias Jovens e Idosas / A morphoquantitative study on the intramural neurons of the urinary bladder of young and elderly guinea-pigMárcia Sanae Mizuno 04 December 2000 (has links)
Um estudo morfoquantitativo foi realizado no plexo intramural de bexigas urinárias de cobaias (Cavia porcelus) jovens (GI) e idosas (GII). As bexigas foram submetidas aos métodos da NADH-diaforase e da detecção da atividade da acetilcolinesterase. Os neurônios intramurais apresentaram-se isolados ou reunidos em gânglios de pequeno a grande número entre os feixes musculares lisos que constituem o músculo detrusor. O número médio de neurônios NADH-diaforase positivos por bexiga urinária foi de 1.433±187 em GI e de 1.107±120 em GII. Foram observados neurônios arredondados ou ovalados em ambos os grupos, porém o perfil citoplasmático apresentou-se com aspecto relativamente denteado em GII. Em relação a colinesterase, os neurônios de GI apresentaram-se com marcação menos intensa do que em GII. A área média do perfil celular dos neurônios intramurais NADH-diaforase positivos foi de 711,01±28,14µm2 em GI e de 873,30±60,25µm2 em GII, sendo esta a principal diferença morfológica encontrada entre os grupos. / A morphoquantitative study was carried on intramural plexus of the urinary bladder of the young (GI) and old (GII) guinea-pigs (Cavia porcelus). The specimens were stained with NADH-diaphorase and AChE methods. The intramural neurons were observed both isolated or in small and large clusters lying between the bundles of smooth muscle fibers of the detrusor muscle. The mean number of NADH-diaphorase staining neurons per urinary bladder was 1.433±187 in the GI and 1.107±120 in the GII. In both groups, round or elongated neurons were observed. The citoplasmatic contour was indented the animals of GII. The AChE method evidenced intensely reactive neurons in GII when compared with those of the GI. The mean of neuronal profiles was 711,01±28,14mm2 in the GI and 873,30±60,25mm2 in the GII. This observation was the main morphological difference between the GI and GII.
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Análise histológica e funcional de xenotransplante de células-tronco da orelha interna de camundongos em cócleas de cobaias com perda auditiva induzida / Histological and functional analysis of inner ear stem cell xenotransplantation in the cochlea of guinea pigs with induced hearing lossBarboza Junior, Luiz Carlos de Melo 05 September 2012 (has links)
Introdução: Em mamíferos, a morte das células sensoriais (células ciliadas) da orelha interna acarreta perda auditiva neurossensorial permanente. Neste estudo, investigou-se se, após o transplante, as células-tronco (CT) da orelha interna de camundongos neonatos podem sobreviver e integrar nos giros basais das cócleas de cobaias submetidas à surdez induzida por neomicina. O potencial efeito do transplante celular na função auditiva também foi avaliada. Métodos: Oito cobaias foram submetidas à injeção de neomicina transtimpânica para indução de surdez. Após 7 dias, os animais foram aleatoriamente divididos em dois grupos. No grupo estudo (n=4), as CT da orelha interna de camundongos neonatos (meio de cultura com 105 CT LacZ+) foram transplantadas através de uma cocleostomia no giro basal de cobaias surdas. O grupo controle (n=4) recebeu somente meio de cultura. Após 14 dias do transplante, o efeito funcional foi avaliado por meio de pesquisa dos potenciais evocados auditivos e os animais foram sacrificados. A presença e a distribuição das CT transplantadas foram avaliadas por imunofluorescência dos cortes longitudinais das cócleas do grupo estudo. Testes não paramétricos foram usados para a análise estatística. Resultados: A ação da neomicina na cavidade timpânica proporcionou dano às células ciliadas e aumento significativo dos limiares auditivos antes do transplante celular. Não houve diferenças significantes dos limiares auditivos antes e após o transplante celular nas cobaias individualmente. Algumas CT transplantadas foram observadas em todas as escalas dos giros basais das cócleas lesadas, e parte destas células expressaram Miosina VIIA, um marcador de célula ciliada. Algumas CT transplantadas se integraram na membrana basilar da cóclea hospedeira. Nenhuma evidência de infiltração inflamatória nas cobaias transplantadas foi observada, apesar do uso de xenotransplante. Conclusões: Embora, após o transplante, os limiares auditivos não tenham sido alterados, os experimentos mostraram sobrevivência, migração, expressão de marcadores de células ciliadas e integração das CT transplantadas / Background: In mammals, damage to sensory receptor cells (hair cells) of the inner ear results in permanent sensorineural hearing loss. Here we investigate whether, after transplantation, neonatal mouse inner ear stem cells (mIESCs) can survive and integrate into basal turns of neomycin-injured guinea pig cochleas. We also studied the potential effects of the cell transplantation on the auditory function. Methods: Eight adult guinea pigs were deafened by intratympanic neomycin delivery. After 7 days, the animals were randomly divided in two groups. Study group (n=4) received transplantation to the scala tympani of 1 X 105 LacZ-positive mIESCs in culture medium. Control group (n=4) received culture medium only. Fourteen days after the transplantation, functional analyses were performed by auditory brainstem responses (ABR) and the animals were sacrificed. The presence and distribution of mIESCs were evaluated by immunohistochemistry of longitudinal sections of the cochlea from the study group. Non-parametric tests were used for statistical analysis. Results: The intratympanic neomycin delivery damaged hair cells and increased auditory thresholds prior to cell transplantation. There were no significant differences between auditory brainstem thresholds before and after transplantation in individual guinea pigs. Some mIESCs have been observed in all scalae of basal turns of the injured cochleas, and a proportion of those cells expressed the hair cell marker myosin VIIa. Some transplanted mIESCs integrated in the cochlear basilar membrane. There was no evidence of inflammatory infiltration in any of the guinea pigs. Conclusions: Although implanted mIESCs showed no obvious effect on auditory thresholds, our experiments showed survival, migration, expression of hair cell marker and integration of transplanted cells
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Estudo do papel de receptores CB1, 5-HT1A e canais iônicos TRPV1 da divisão dorsomedial do hipotálamo ventromedial nas respostas defensivas inatas evocadas por Cavia porcellus ameaçadas por serpentes / Study of the role of CB1 and 5-HT1A receptors, and and TRPV1 ion channels of the dorsomedial division of ventromedial hypothalamus on innate defensive responses evoked by Cavia porcellus threatened by snakesPaiva, Yara Bezerra de 07 October 2016 (has links)
Há evidências de que os endocanabinoides e os receptores CB1 estejam envolvidos em diversos transtornos emocionais, dentre eles a ansiedade e a depressão. A interação deste sistema endocanabinoide com outros neurotransmissores, como a serotonina (5-HT), tem sido alvo de diversos estudos, uma vez que o aumento na atividade deste sistema promove respostas ansiolíticas e antidepressivas. Alguns estudos mostraram que a porção ventromedial do hipotálamo modula algumas respostas defensivas, como fuga e a imobilidade tônica, respostas estas eliciadas pelos animais frente a situações de medo intenso, como ocorre em um confronto com um dado predador. Dentro desta perspectiva, o presente estudo teve por objetivos avaliar o efeito do tratamento crônico durante 21 dias com canabidiol (CBD) sobre as respostas defensivas em cobaias (Cavia porcellus), evocadas diante de um predador natural. Avaliamos, ainda, o efeito da microinjeção intradiencefálica de AM251 (antagonista de receptores CB1; 100pmol/0,2µl), de 6-I-CPS (antagonista de canais iônicos TRPV1; 9nmol/0,2µl), de WAY-100635 (antagonista 5-HT1A; 0,37nmol/0,2µl) e seus respectivos veículos em diferentes grupos de cobaias, após o tratamento crônico com canabidiol sobre as respostas defensivas evocadas diante do predador. Os resultados mostraram que, muito embora o tratamento crônico com CBD não tenha atenuado a resposta de imobilidade tônica (IT), devido ao fenômeno de habituação da resposta, diminuiu a expressão de outras respostas comportamentais, como a atenção defensiva e afuga orientada para a toca, promovendo, pois, um efeito anxiolítico e panicolítico. Ademais, a microinjeção de AM251 tendeu a abolir o efeito ansiolítico causado pelo tratamento crônico com CBD, potencializando as respostas defensivas diante de um predador natural. Tais resultados indicam que o CBD promove seu efeito farmacológico também mediante tratamento crônico, e que os receptores canabinoides do tipo CB1 do hipotálamo ventromedial parecem desmpenhar algum um papel nesse mecanismo de ação. / Evidence has shown that endocannabinoids and CB1 receptors are involved in several emotional disorders, including anxiety and depression. The endocannabinoid system and its interaction with other neurotransmitters such as serotonin (5-HT) has been the subject of several studies, since the increase in the activity of this system promotes anxiolytic and antidepressant responses. Some studies have shown that the ventromedial division of the hypothalamus modulates some defensive responses such as flight and tonic immobility, elicited by preys experiencing intense fear-like reactions when facing dangerous situations, as confrontation with a given predator. From this perspective, this study aimed to evaluate the effect of chronic treatment for 21 days with cannabidiol (CBD) on the defensive responses displayed by guinea pigs (Cavia porcellus), in the presence of a natural predator. We also studied the effect of intradiencephalic microinjection of AM251 (a CB1 receptor antagonist; 100pmol / 0.2?L), 6-PSC-I (TRPV1 ion channel antagonist; 9nmol / 0.2?L), or WAY- 100635 (antagonist 5- HT1A; 0.37nmol / 0.2?L) and their respective controls in different groups of mice after chronic treatment with cannabidiol on the defensive responses evoked in the presence of the predator. The results showed that although the chronic treatment with CBD attenuated tonic immobility response (IT) and other behavioural responses, such as defensive attention and oriented escape behaviour, promoting a significant anxiolytic and panicolytic effect. In addition, intra-hypothalamic microinjection of AM251 exert a potential impairment of the antipanic effect caused by chronic treatment with CBD, increasing the defensive responses displayed in the presence of the predator. These results indicate that the CBD also promotes its pharmacological effect upon chronic treatment, and that medial hypothalamus CB1 receptors seem to play a role in its mechanism of action.
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Comportamento e comunicação acústica em cobaias e em preás / Behavior and acoustic communication in domestic (Cavia porcellus) and in wild (C. aperea) caviesMonticelli, Patrícia Ferreira 03 February 2006 (has links)
Este é um estudo comparativo do comportamento e da comunicação acústica de cobaias Cavia porcellus - e de preás C. aperea - duas espécies muito próximas, uma com uma história recente de domesticação (há 6.000 anos nos Andes) e a outra selvagem. Inclui três etapas: (1) a elaboração de um etograma e a comparação entre cobaias e preás quanto à freqüência e duração dos comportamentos exibidos em contextos sociais particulares (encontros entre fêmeas, entre machos e entre macho e fêmea); (2) a categorização e análise sonográfica comparativa da estrutura dos sinais sonoros; e (3) a comparação entre espécies quanto ao uso dos chamados através de um estudo do comportamento do emissor e de um receptor, no momento anterior e subseqüente à emissão. Encontramos diferenças entre as espécies nas três etapas. (1) Cobaias exibiram mais comportamentos de contatos e sexuais; preás exibiram mais comportamentos de exploração. (2) Das emissões registradas, uma não foi exibida por cobaias. Analisamos 4 delas estatisticamente e todas revelaram diferenças estruturais entre espécies. (3) Houve diferença no uso do sinal de alerta e no nível de resposta eliciado por alguns sinais. Os resultados são discutidos principalmente como efeitos da domesticação. A seleção de animais maiores pode ter alterado a morfologia do trato vocal das cobaias, produzindo as mudanças na estrutura dos chamados. Ainda, com o relaxamento de seleção natural, por conta da proteção oferecida pelo cativeiro, características menos favoráveis podem ter sido mantidas e ganhado proporção na população. Como resultado, a espécie domesticada produz e reage menos aos sinais de alerta, gasta menos tempo com comportamentos de atenção ao meio e ganha tempo para os comportamentos socais e reprodutivos. / This is a comparative study of behavior and acoustic communication of wild (Cavia aperea) and domestic (C. porcellus) cavies. Animals were observed in the laboratory in three social situations (female-female, male-male and female-male pairings) and the following steps were performed: (1) comparison of the frequency and duration of behaviors, in both species; (2) description and comparison of the sonografic parameters of acoustic signals emitted by individuals of both species; and (3) identification of antecedent and subsequent behavioral contexts of such signals as an approach to the understanding of their social function. C. porcellus exhibited more contact and sexual categories of behaviors than C. aperea; C. aperea explored more than C. porcellus. Signal repertoire was almost the same (one, out of 7 calls was exclusively emitted by C. aperea). Statistical analysis revealed significant structural differences between species in four of the calls. Differences were also found in the context of use of alert vocalization and in the level of response elicited by some signals. Interspecific differences found may be partially attributed to domestication. Selection for meet production may have altered guinea pigs vocal tract and may have brought changes in acoustic signals structure. The absence of predatory pressure and the less demanding conditions of captivity may have favored the expression of some traits, such as the performance of long courtship bouts. The domestic cavies C. porcellus are less prone than the wild ones to emit and to respond to alert signals, spend less time with exploratory and patrolling and spend more time with social and reproductive interactions.
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Efeito do ácido ursodesoxicólico e o papel da mucosa no desenvolvimento de dismotilidade esofagiana: estudo experimental com cobaias / Effects of ursodeoxycholic acid and the role of mucosa in esophageal dysmotility. An experimental studyRocha, Marcelo Eustáquio Siqueira [UNIFESP] 26 May 2010 (has links) (PDF)
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Previous issue date: 2010-05-26 / Objetivo: Determinar o efeito do ácido ursodesoxicólico e o papel da mucosa no aparecimento de alterações motoras, na musculatura esofagiana de cobaias. Métodos: Trabalho experimental realizado com 18 cobaias albinas do sexo masculino pesando entre 200 e 250g. Os animais foram distribuídos em 03 grupos, sendo assim constituídos: Grupo (A)- 06 animais formaram o grupo experimental – Esôfago com mucosa, Grupo (B)- 06 animais formaram o grupo experimental – Esôfago sem mucosa e Grupo (C)- 06 animais formaram o grupo controle. Os animais foram sacrificados e o esôfago distal foi removido. Após identificação da transição epitelial escamo-colunar, foi realizada a secção ao nível da mesma desprezando-se a câmara gástrica. Os espécimes de esôfago foram encaminhados para prova de avaliação contrátil, utilizando-se câmaras de perfusão de órgãos e um sistema de aquisição de dados com o programa KITCAD 8. Os espécimes foram mantidos em solução salina oxigenada por 01 hora, com estiramento de 01 grama a fim de readquirirem sua tensão basal e foram estimulados com 40mM de KCl. Após a verificação da manutenção contrátil e avaliação da amplitude contrátil inicial, os fragmentos foram banhados na solução de 100 mM de ácido ursodesoxicólico, nos grupos A e B, e em solução salina fisiológica, no grupo C, por 01 hora, e, então, novamente estimulados com 40mM de KCl, e realizados cinco estímulos com intervalo de cinco minutos para o registro da amplitude contrátil. Resultados: A média da amplitude de contração antes da incubação (pré) variou entre os grupos (p=0,006) com médias de 1,319(A), 0,306(B) e 1,795(C). Após a incubação (pós), a média da amplitude de contração foi de 0,709 , 0,278 e 1,353 para os grupos A, B e C, respectivamente. Antes da incubação, não houve diferença na amplitude de contração entre os grupos A e C (p=0,633) e houve diferença entre os grupos A e B (p=0,039) e B e C (p=0,048). Após a incubação, quando comparamos as diferenças das médias dentro dos grupos nos momentos pré e pós, encontramos apenas diferenças no grupo A (p=0,030). Conclusões: A exposição esofagiana ao ácido ursodexosicólico, componente da bile, induz a uma diminuição da amplitude de contração esofagiana. A mucosa esofagiana desempenha importante papel na motilidade esofagiana. / Background and Aims: Esophageal motor abnormalities are frequently found in patients with gastroesophageal reflux disease. The role of bile in reflux-induced dysmotility is still elusive. Furthermore, it is questionable weather mucosal or muscular stimulation leads to motor modification. The aims of this study were: (a) analyze the effect of bile infusion in the amplitude of esophageal contractions and (b) analyze the effect of mucosal vs muscular stimulation. Methods: 18 guinea-pig esophagi were isolated and its contractility assessed with force transducers. Three groups were studied. In group A (n= 6) the entire esophagus was used and incubated in 100 ìML ursodeocycholic acid for 2 hours. In group B (n=6) the mucosal layer was removed and the muscular layer incubated in 100 ìML ursodeocycholic acid for 1 hours. In group C (n=6) (control group) the entire esophagus was used and incubated in saline solution. In all groups, five sequential contractions spaced by 1 minute were measured before and after incubation. Contractions were recorded after KCl 40 mM stimulation. Results: Contractions before incubation did differed among groups (p= 0,006) and averaged 1,319(A),0,306(B) and 1,795(C). After incubation amplitude of contraction was 0,709 , 0,278 and 1,353 for groups A, B and C respectively. Before incubation there were no diferrences between groups A and C (p=0,633) there was difference between groups A and B (p=0,039) and B and C (p=0,048). After incubation when we compare average within groups (before and after) there was difference only in group A (p=0,030). Conclusion: Our results show that bile exposure may induce ineffective esophageal motility and the mucosa seems to take an important role in esophageal motility. Disclosure Statement: No author has commercial associations that might create a conflict of interest. No competing financial interests exist. / TEDE / BV UNIFESP: Teses e dissertações
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Patogenia experimental da infecção pelo herpesvírus bovino tipo 2 em ovinos e cobaias / Experimental pathogenesis of bovine herpesvirus Type 2 infection in sheep and guinea pigsTorres, Fabrício Dias 03 March 2009 (has links)
The biology and epidemiology of bovine herpesvirus 2 (BoHV-2), the agent of bovine herpetic mammillitis (BHM), remain largely unknown. Thus, the present study aimed at addressing selected aspects of BoHV-2 epidemiology and pathogenesis in sheep and guinea pigs. A serological survey for BoHV-2 antibodies in 2.213 samples from cattle > 24-months-old from 136 counties of seven different
mesoregions of Rio Grande do Sul (RS) revealed an overall prevalence of 24.5% (543/2.213). These results demonstrate that BoHV-2 infection is widespread among cattle in RS, and potentially involved in cases of mammillitis frequently described in dairy cows. A second experiment was conducted to characterize the latent BoHV-2 infection in a sheep model. Lactating ewes inoculated with BoHV-2 in
the skin of the udder shed virus for up to five days, developed mammillitis and seroconverted. However, attempts to reactivate latent infection by dexamethasone (Dx) administration at day 40 post infection (pi) failed. Nevertheless, viral DNA was detected by PCR in several nerve ganglia and/or regional lymph nodes (LNs) of all animals at day 40 post-reactivation (pr). Lambs previously
inoculated with BoHV-2 in the nose also harbored latent viral DNA in trigeminal ganglia, tonsils and regional LNs. These results demonstrated that BoHV-2 establishes latent infection in nerve ganglia and in regional lymphoid tissues, yet virus reactivation is not easily achieved by standard protocols used for other alphaherpesvirus. A third experiment was conducted to evaluate guinea pigs (Cavia porcellus) as an experimental model to study the biology of BoHV-2 infection. Weanling (30-40 daysold)
guinea pigs inoculated into the genital area and over the skin of the udder and teats with a viral suspension developed moderate to severe clinical signs, noticeably more pronounced in the genital area. Infectious virus was recovered from swabs collected between days 3 and 7 from genital area (8/12) and less frequently (1/12) from teat skin. All animals seroconverted to BoHV-2 developing
neutralizing titers from 16 to 128 at day 30 pi. Histological examination of skin biopsies collected
from genital lesions showed intranuclear inclusion bodies and perivascular infiltrates composed by lymphocytes and plasmocytes. PCR examination of tissues collected from animals euthanized at day 35 pi revealed the presence of latent viral DNA in nerve ganglia and LNs. Dx administration at day 35 pi was followed by mild recrudescence of genital disease in some animals, yet virus isolation and/or seroconversion which are usually taken as indicators of virus reactivation were not observed. These results show that guinea pigs may be used as models to study BoHV-2 acute and latent infection
and confirm that BoHV-2 reactivation is not easily achieved by using the standard protocols for other
alphaherpesviruses. Taken together, these results demonstrate that both sheep and guinea pigs are
suitable animal models for BoHV-2 infection. / A biologia e a epidemiologia da infecção pelo herpesvírus bovino tipo 2 (BoHV-2), agente da mamilite herpérica bovina, são pouco conhecidas. Com isso, o presente estudo teve como objetivos elucidar alguns aspectos da epidemiologia e estudar a patogenia da infecção pelo BoHV-2 em ovinos e
cobaias. Um estudo sorológico pesquisando anticorpos para o BoHV-2 em 2.213 amostras de bovinos com mais de 2 anos, provenientes de 136 municípios distribuídos em 7 mesoregiões do Rio Grande do Sul (RS), determinou uma soroprevalência de 24,5% (543/2.213). Os resultados demonstram que o
BoHV-2 está disseminado no rebanho bovino no RS, com potencial envolvimento em casos de mamilite freqüentemente relatados em rebanhos leiteiros. Um segundo experimento visou caracterizar a infecção latente em ovinos, propostos como modelo experimental. Ovelhas lactantes inoculadas com
o BoHV-2 na pele do úbere excretaram o vírus por até 5 dias, desenvolveram mamilite e soroconverteram. Entretanto, a tentativa de reativar a infecção latente pela administração de
dexametasona (Dx) no dia 40 pós-infecção (pi) não resultou em reativação. Não obstante, o DNA viral latente foi detectado por PCR em gânglios neurais e/ou em diversos linfonodos (LNs) de todos os animais no dia 40 pós reativação (pr). Cordeiros que haviam sido inoculados com o BoHV-2 pela via nasal igualmente albergavam o DNA viral latente nos gânglios trigêmeos, tonsilas e LNs regionais. Esses resultados demonstram que o BoHV-2 estabelece infecção latente em gânglios neurais e tecidos linfóides regionais, embora a reativação viral não seja facilmente obtida com os protocolos usados em outros alfaherpesvírus. Um terceiro experimento foi realizado para validar cobaias (Cavia porcellus) como modelo experimental para estudo da biologia da infecção com o BoHV-2. Cobaias lactentes (30- 40 dias) inoculadas com o BoHV-2 nas regiões genital e intra-dérmico no tetos e úbere desenvolveram sinais clínicos moderados a severos, notadamente mais pronunciados na região genital. O vírus foi
isolado de suabes coletados entre os dias 3 e 7 pi da região genital (8/12) e em menor freqüência da região dos tetos (1/12). Todos os animais soroconverteram para o BoHV-2, apresentando títulos de anticorpos neutralizantes entre 16 e 128 no dia 30 p.i. A análise histológica de biópsias de pele
coletada de lesões revelou corpúsculos de inclusão e infiltrado linfocitário e plasmocitário perivascular. PCR realizada com DNA total extraído dos tecidos coletados no dia 35 pi revelou a
presença de DNA viral latente em gânglios neurais lombo-sacrais e LNs regionais. A administração de Dx no dia 35 pi cursou com recrudescência clínica na região genital, porém não foram detectados excreção viral nem soroconversão, indicadores de reativação da infecção latente. Estes resultados demonstram que cobaias podem ser usados como modelo para a infecção aguda e latente pelo BoHV-
2, e confirmam que a reativação viral não é facilmente obtida pelo uso de protocolos usuais para outros alfaherpesvírus. Em conjunto, os resultados demonstram a utilidade de ovinos e cobaias como modelo experimental para a infecção pelo BoHV-2.
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Expressão gênica de citocinas em cobaias resistentes a carrapatos Rhipicephalus sanguineus / IL-12 AND IFN-gamma mRNA EXPRESSION IS ENHANCED ON TICK-RESISTANT GUINEA PIGSAlessandra Mara Franzin 31 January 2005 (has links)
Carrapatos são artrópodes hematófagos de distribuição cosmopolita que parasitam vertebrados e transmitem uma grande variedade de agentes infecciosos para o homem e animais domésticos. Cobaias, diferentemente de cães e camundongos, são capazes de desenvolver resistência a carrapatos Rhipicephalus sanguineus após sucessivas infestações. Ao comparar o tipo de resposta imune desenvolvida por cobaias e cães frente a carrapatos observou-se que cobaias re-infestadas desenvolvem uma pequena reação de hipersensibilidade imediata e uma forte reação de hipersensibilidade tardia à inoculação cutânea com antígenos de carrapatos. Já em cães e camundongos, é notada somente uma forte reação de hipersensibilidade imediata. Também foi verificado que células dos linfonodos de cobaias infestadas três vezes com carrapatos (resistentes) proliferam intensamente na presença de saliva de carrapatos, diferentemente do que ocorre com células de cães e camundongos re-infestados (suscetíveis) que não proliferam. Esses achados sugerem o envolvimento de um padrão Th1 de resposta imune na aquisição de resistência, no entanto essa hipótese ainda não foi confirmada. Assim sendo, no atual trabalho procurou-se verificar a expressão de mRNA de citocinas na pele e linfonodos de cobaias infestadas e re-infestadas com carrapatos. Para tal foram delineados primers e padronizadas reações de PCR para detectar a expressão de mensagem das citocinas IL-12p40, IFN-gama e TNF-alfa, pertencentes a um padrão Th1, e IL-4, IL-5, IL-10 e TGF-beta, pertencentes a um padrão Th2 de resposta imune. Os resultados obtidos demonstraram que cobaias sucessivamente infestadas apresentaram um aumento significativo na intensidade de mensagem para IL-12p40 nos linfonodos, tanto comparado com animais uma vez infestados (aumento de 2,6 vezes), quanto comparado com os controles (aumento de 13 vezes). Embora a análise estatística não tenha apontado uma diferença significativa houve elevação consistente na intensidade de mRNA para IFN-gama nos linfonodos de cobaias re-infestadas comparadas às infestadas apenas uma vez (aumento de 2,4 vezes). Também foi observado um aumento significativo na intensidade da mensagem para IL-5 nos linfonodos de cobaias infestadas uma vez quando comparadas aos controles (aumento de 5 vezes). Não foi detectada expressão de mensagem para IL-4 e IL-10 nas amostras analisadas. Já a expressão de mensagem para TGF-beta foi observada em todos os animais (experimentais ou controles), sugerindo que essa citocina possa ter uma expressão constitutiva em cobaias. Tomados em conjunto, os resultados sugerem o envolvimento predominante de um perfil de citocinas de padrão Th1 na aquisição de resistência em cobaias a carrapatos. Nossos resultados poderão auxiliar o desenvolvimento de novas abordagens para o controle de carrapatos, como, por exemplo, sugerir adjuvantes mais adequados a serem utilizados em vacinas anti-carrapatos. O conhecimento gerado não se restringe à indução de proteção contra carrapatos como também a possibilidade de aumentar a resistência de hospedeiros a patógenos transmitidos por carrapatos que poderiam ser controlados por uma resposta tipo Th1. / Ticks are hematophagous arthropods of cosmopolitan distribution and are significant vectors of several diseases for humans and animals. Guinea pigs, unlike dogs and mice, develop resistance to Rhipicephalus sanguineus ticks after successive infestations. When the immune reaction between tick-infested guinea pigs and dogs/mice are compared, guinea pigs develop both immediate and strong delayed type hypersensitivity reactions while dogs and mice develop only a strong immediate reaction. Additionally was shown that lymph node cells from tick-infested guinea pigs (resistant hosts) proliferate intensely when cultured with tick saliva, differently to what is observed with cells from tick-infested dogs and mice (susceptible hosts). These findings propose the contribution of a Th1 cytokine pattern on the acquired immune response to ticks; however this hypothesis still has to be tested. This being so, in this study we investigated the expression profile of genes coding for selected cytokines on R. sanguineus infested guinea-pigs. Messenger RNA for IL-12-p40, IFN-gamma and TNF-alfa (Th1 cytokine pattern) and IL-4, IL-5, IL-10 and TGF-beta (Th1 cytokine pattern) was measured in skin and lymph nodes biopsies from tick-infested guinea pigs. Our results demonstrated that repeatedly tick-infested guinea pigs presented a significant increase on the intensity of message for IL-12p40 in the lymph nodes compared to both, one time tick-infested guinea pigs (raise of 2.6 times) or controls (raise of 13 times). Although the statistical analysis did not point out differences, there was a consistent increase on the mRNA intensity for IFN-gamma on the lymph nodes from re-infested guinea pigs compared to one time tick-infested animals (raise of 2.4 times). In addition, a significant enhance on the intensity of message for IL-5 on the lymph nodes from one time tick-infested guinea pigs compared to the controls (raise of 5 times). No message for IL-4 and IL-10 was detected on the analyzed tissues. In contrast, TGF-beta was detected on tissues collected from all animals (experimental or controls), suggesting a spontaneous production of this cytokine in guinea pigs. Taken together, these data suggest that a T helper 1-type pattern of cytokine production might be associated with the resistance expressed by guinea-pigs to ticks. Moreover, our results can provide new approaches to control ticks, i.e. suggest adjuvants to be added to anti-tick vaccines that preferably induce a Th1-type of response.
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Estudo da mecânica oscilatória e do remodelamento de tecido pulmonar periférico em modelo de inflamação alérgica em cobaias: efeitos da inibição da óxido nítrico sintase induzida / Oscillatory mechanics and periphery lung tissue remodeling study in an allergic inflammation model in guinea pigs: effects of inducible nitric oxide synthase inhibitionCláudia Miranda Starling 01 December 2008 (has links)
INTRODUÇÃO: A importância do parênquima pulmonar na piora funcional da asma tem sido recentemente investigada. Embora a ativação da enzima óxido nítrico sintase induzida (iNOS) amplifique a responsividade e o remodelamento das vias aéreas induzidos pela inflamação crônica, seu efeito no parênquima pulmonar não foi previamente estudado. OBJETIVO: Avaliar a influência do óxido nítrico derivado da iNOS na mecânica pulmonar, na inflamação e no processo de remodelamento no tecido pulmonar periférico de cobaias com inflamação pulmonar alérgica. MÉTODOS: Os animais foram submetidos a sete inalações com doses crescentes de ovalbumina (1~5 mg/mL) ou soro fisiológico por 4 semanas. As cobaias receberam 1400-W (inibidor específico de iNOS, intraperitoneal) ou veículo por 4 dias, iniciando 30 minutos antes da sétima inalação. Após 72h da sétima inalação, os animais foram anestesiados, exsanguinados e fatias de tecido pulmonar periférico foram retiradas e suspensas em banho orgânico de Krebs, e a resistência e elastância tecidual foram avaliadas em condição basal e após desafio com ovalbumina. Após, as fatias de tecido pulmonar periférico foram submetidas à avaliação histopatológica. RESULTADOS: Os animais expostos às inalações com ovalbumina apresentaram valores maiores de porcentagem de aumento da resistência e da elastância tecidual em relação ao basal após desafio com ovoalbumina no banho (p<0.05). Houve aumento no número de eosinófilos (p<0.001), nas células iNOS positivas (p<0.001), na deposição de fibras elásticas e colágenas (p<0.05), na densidade de actina (p<0.05) e na expressão de 8-epi-PGF2a (p<0.001) no septo alveolar. A administração de 1400-W reduziu todos estes parâmetros funcionais e morfológicos (p<0.05). CONCLUSÕES: Neste modelo experimental, o bloqueio específico da iNOS atenuou a constrição, a inflamação e o remodelamento no parênquima pulmonar. Estas alterações podem estar relacionadas aos efeitos do óxido nítrico na modulação da via do estresse oxidativo. O presente estudo sugere que a inibição específica da iNOS pode amplificar as estratégias terapêuticas utilizadas na abordagem de doenças inflamatórias crônicas pulmonares. / INTRODUCTION: The importance of lung parenchyma in functional asthma impairment has been recently addressed. Although the inducible nitric oxide synthase (iNOS) activation amplifies chronic inflammation-induced airway responsiveness and remodeling, its effect on lung parenchyma has not been previously investigated. OBJECTIVE: To evaluate the influence of iNOSderived NO in the pulmonary mechanics, inflammation, and remodeling processes in peripheral lung tissue of guinea pigs with pulmonary allergic inflammation. METHODS: Animals were submitted to seven ovalbumin exposures with increasing doses (1~5 mg/mL) or saline for 4 weeks. The guinea pigs received 1400-W (iNOS-specific inhibitor, intraperitoneal) or vehicle for 4 days, beginning 30 minutes before the 7th inhalation. At 72h after the 7th inhalation, animals were anesthetized, exsanguinated and peripheral lung tissue strips were retreat and suspended in a Krebs organ bath, and the tissue resistance and elastance were evaluated at baseline condition and after ovalbumin challenge. After that, strips were submitted to histopathological evaluation. RESULTS: The ovalbumin-exposed animals presented greater values of percentage of increase of tissue resistance and elastance related to baseline after ovalbumin challenge in the bath (p<0.05). There were increase in the number of eosinophils (p<0.001) and iNOSpositive cells (p<0.001), in collagen and elastic fiber deposition (p<0.05), in actin density (p<0.05) and in 8-epi-PGF2a expression (p<0.001) in the alveolar septa. The 1400-W administration reduced all these functional and morphological parameters (p<0.05). CONCLUSIONS: In this experimental model, the iNOS-specific blockage attenuated constriction, inflammation, and remodeling in the lung parenchyma. These alterations may be related to NO effects in the modulation of the oxidative stress pathway. The present study suggests that specific iNOS inhibition can amplify the therapeutics strategies used in the management in chronic inflammatory lung diseases.
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Estudo do papel de receptores CB1, 5-HT1A e canais iônicos TRPV1 da divisão dorsomedial do hipotálamo ventromedial nas respostas defensivas inatas evocadas por Cavia porcellus ameaçadas por serpentes / Study of the role of CB1 and 5-HT1A receptors, and and TRPV1 ion channels of the dorsomedial division of ventromedial hypothalamus on innate defensive responses evoked by Cavia porcellus threatened by snakesYara Bezerra de Paiva 07 October 2016 (has links)
Há evidências de que os endocanabinoides e os receptores CB1 estejam envolvidos em diversos transtornos emocionais, dentre eles a ansiedade e a depressão. A interação deste sistema endocanabinoide com outros neurotransmissores, como a serotonina (5-HT), tem sido alvo de diversos estudos, uma vez que o aumento na atividade deste sistema promove respostas ansiolíticas e antidepressivas. Alguns estudos mostraram que a porção ventromedial do hipotálamo modula algumas respostas defensivas, como fuga e a imobilidade tônica, respostas estas eliciadas pelos animais frente a situações de medo intenso, como ocorre em um confronto com um dado predador. Dentro desta perspectiva, o presente estudo teve por objetivos avaliar o efeito do tratamento crônico durante 21 dias com canabidiol (CBD) sobre as respostas defensivas em cobaias (Cavia porcellus), evocadas diante de um predador natural. Avaliamos, ainda, o efeito da microinjeção intradiencefálica de AM251 (antagonista de receptores CB1; 100pmol/0,2µl), de 6-I-CPS (antagonista de canais iônicos TRPV1; 9nmol/0,2µl), de WAY-100635 (antagonista 5-HT1A; 0,37nmol/0,2µl) e seus respectivos veículos em diferentes grupos de cobaias, após o tratamento crônico com canabidiol sobre as respostas defensivas evocadas diante do predador. Os resultados mostraram que, muito embora o tratamento crônico com CBD não tenha atenuado a resposta de imobilidade tônica (IT), devido ao fenômeno de habituação da resposta, diminuiu a expressão de outras respostas comportamentais, como a atenção defensiva e afuga orientada para a toca, promovendo, pois, um efeito anxiolítico e panicolítico. Ademais, a microinjeção de AM251 tendeu a abolir o efeito ansiolítico causado pelo tratamento crônico com CBD, potencializando as respostas defensivas diante de um predador natural. Tais resultados indicam que o CBD promove seu efeito farmacológico também mediante tratamento crônico, e que os receptores canabinoides do tipo CB1 do hipotálamo ventromedial parecem desmpenhar algum um papel nesse mecanismo de ação. / Evidence has shown that endocannabinoids and CB1 receptors are involved in several emotional disorders, including anxiety and depression. The endocannabinoid system and its interaction with other neurotransmitters such as serotonin (5-HT) has been the subject of several studies, since the increase in the activity of this system promotes anxiolytic and antidepressant responses. Some studies have shown that the ventromedial division of the hypothalamus modulates some defensive responses such as flight and tonic immobility, elicited by preys experiencing intense fear-like reactions when facing dangerous situations, as confrontation with a given predator. From this perspective, this study aimed to evaluate the effect of chronic treatment for 21 days with cannabidiol (CBD) on the defensive responses displayed by guinea pigs (Cavia porcellus), in the presence of a natural predator. We also studied the effect of intradiencephalic microinjection of AM251 (a CB1 receptor antagonist; 100pmol / 0.2?L), 6-PSC-I (TRPV1 ion channel antagonist; 9nmol / 0.2?L), or WAY- 100635 (antagonist 5- HT1A; 0.37nmol / 0.2?L) and their respective controls in different groups of mice after chronic treatment with cannabidiol on the defensive responses evoked in the presence of the predator. The results showed that although the chronic treatment with CBD attenuated tonic immobility response (IT) and other behavioural responses, such as defensive attention and oriented escape behaviour, promoting a significant anxiolytic and panicolytic effect. In addition, intra-hypothalamic microinjection of AM251 exert a potential impairment of the antipanic effect caused by chronic treatment with CBD, increasing the defensive responses displayed in the presence of the predator. These results indicate that the CBD also promotes its pharmacological effect upon chronic treatment, and that medial hypothalamus CB1 receptors seem to play a role in its mechanism of action.
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Efeitos da inibição crônica das óxido nítrico sintases na mecânica de tecido periférico, no recrutamento eosinofílico e no remodelamento da matriz extracelular induzida por inflamação crônica pulmonar / Effects of chronic nitric oxide inhibition on lung tissue mechanics, eosinophilic and extracellular matrix responses induced by chronic pulmonary inflammationSilva, Patricia Angeli da 25 September 2008 (has links)
INTRODUÇÃO: A importância da resposta mecânica do parênquima pulmonar na fisiopatologia da asma tem sido recentemente reconhecida. O óxido nítrico é um mediador que controla o tônus muscular liso das vias aéreas, porém este efeito no parênquima pulmonar periférico ainda não foi previamente investigado. Nossa hipótese é que a inibição crônica das óxido nítrico sintases por meio do tratamento com L-NAME (falso substrato para todas as óxido nítrico sintases) pode modular a mecânica do parênquima pulmonar, o recrutamento eosinofílico e o remodelamento da matriz extracelular em modelo de inflamação alérgica crônica pulmonar em cobaias. MÉTODOS: Os animais foram expostos a sete inalações com soro fisiológico ou com ovoalbumina em doses crescentes (1~5mg/ml - 4 semanas) e tratadas ou não com L-NAME (60 mg/kg/ por dia /por animal) na água de beber. Setenta e duas horas após a sétima inalação os animais foram anestesiados, exsanguinados e a mecânica oscilatória do parênquima pulmonar foi medida na condição pré e após desafio (0.1%). Utilizando a técnica de morfometria foram avaliadas a densidade de eosinófilos, o número de células nNOS e iNOS positivas, a densidade de actina, das fibras colágenas e das fibras elásticas bem como a proporção de volume de 8-iso-PGF2 no septo alveolar. RESULTADOS: Os animais que foram expostos à ovoalbumina apresentaram um aumento da resistência e da elastância tecidual (resposta basal e após desafio antigênico), na densidade de eosinófilos, no número de células nNOS e iNOS positivas, na densidade de fibras colágenas e de fibras elásticas bem como na expressão de 8-isoPGF2 no septo alveolar comparativamente aos grupos controles (p<0,05). O tratamento com L-NAME em animais expostos à ovoalbumina atenuou todas as respostas de mecânica do tecido pulmonar periférico (p<0, 01), reduziu o número de células nNOS e iNOS positivas (p<0.01), o conteúdo de fibras elásticas (p<0,001) e de 8-iso-PGF2 no septo alveolar (p<0,001). No entanto, este tratamento não afetou o número total de eosinófilos e o conteúdo de fibras colágenas. Este trabalho sugere que o óxido nítrico contribui para a constrição do parênquima pulmonar e para a deposição de fibras elásticas neste modelo. Estes efeitos foram associados à ativação de iNOS e nNOS em células do parênquima distal e aumento na via do estresse oxidativo / The importance of lung tissue mechanical responses in asthma pathophysiology has been recently recognized. Although nitric oxide (NO) is a mediator that controls smooth muscle tonus control in the airways, its effects on lung tissue responsiveness has not been previously investigated. We hypothesized that chronic nitric oxide synthase inhibition by L-NAME (false substrate for all nitric oxide synthases) treatment may modulate lung tissue mechanics, eosinophilic recruitment and extracellular matrix remodeling in a model of chronic pulmonary allergic inflammation. Guinea pigs were submitted to seven normal saline or ovalbumin exposures with increasing doses (1~5mg/mL-4weeks) and treated or not with L-NAME in drinking water. Seventy-two hours after the seventh inhalation the animals were anesthetized, exsanguinated, and oscillatory mechanics of lung tissue strips was performed in baseline condition and after ovalbumin challenge (0.1%). Using morphometry, we assessed the density of eosinophils, the number of iNOS and nNOS-positive cells, the density of actin, the collagen and elastic fibers content and the volume proportion of 8-iso-PGF2 in the alveolar septa. Ovalbumin-exposed animals presented an increase in baseline and maximal tissue resistance and elastance responses, eosinophil density, in the number of iNOS and nNOS positive cells, in the amount of collagen and elastic fibers and in the volume proportion of 8-iso-PGF2 in the alveolar septa compared to controls (p<0.05). L-NAME treatment in ovalbumin-exposed animals attenuated all lung tissue mechanical responses (p<0.01), reduced the number of iNOS and nNOS positive cells (p<0.01), elastic fiber content (p<0.001) and 8-isoPGF2 in the alveolar septa (p<0.001). However, this treatment did not affect the total number of eosinophils and collagen deposition. These data suggest that NO contributes to distal lung parenchyma constriction and to elastic fibers deposition in this model. These effects were associated to iNOS and nNOS activation in pulmonary parenchyma and with an increase in oxidative stress pathway activation
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