Essa tese compreende 4 estudos, com o objetivo de avaliar os fatores não-nutricionais que afetam as concentrações de nitrogênio uréico no leite (NUL) de vacas leiteiras de um rebanho comercial, desenvolvendo modelos para sua predição, assim como validando modelos de predição já existentes na literatura. O primeiro experimento foi conduzido para avaliar métodos e tempos de armazenamento das amostras nos resultados da análise do leite (concentração de gordura, proteína, lactose e sólidos totais (ST), contagem de células somáticas (CCS) e NUL). O leite foi coletado do tanque de expansão e colocado em 210 frascos. As amostras foram designadas a um arranjo fatorial de tratamentos 4X5+1. Os métodos de armazenamento foram: 1) refrigerado (R); 2) congelado (C); 3) armazenado em temperatura controlada (TC) e 4) armazenado em temperatura variável (TV). O tempo de armazenamento das amostras foi: 3, 6, 9, 12 e 15 dias, mais dia 0, como controle. Foram realizados análise de variância, análises de regressão até efeito quadrático e contrastes ortogonais. A CCS foi transformada em logaritmo natural (LCCS). A concentração de gordura sofreu diminuições lineares, em função do tempo, para TC e TV, assim como a de ST e o LCCS para todos métodos de armazenamento. O NUL apresentou falta de ajuste para as equações lineares e quadráticas para todos os métodos de armazenamento. Para os demais estudos, foram utilizadas 8.833 observações, provenientes de 855 vacas holandesas, de setembro/2000 a janeiro/2002. Dados zootécnicos foram coletados no dia da amostragem de leite, realizada mensalmente. As parições foram divididas em duas épocas: verão e inverno. O objetivo do segundo trabalho foi estudar a influência de fatores não-nutricionais sobre NUL. Foram realizadas análises de regressão linear simples, usando os dados coletados como variáveis independentes e NUL como variável dependente. A produção de leite e a concentração de proteína do leite foram os fatores que mais afetaram as concentrações de NUL. O terceiro estudo teve por objetivo desenvolver modelos para estimar NUL, em função dos dias em lactação, número de lactações e época de parição, em condições de campo. Para estimar NUL, foi utilizado o modelo proposto por Wood (1967) para descrever a curva de lactação. Os modelos foram ajustados por quadrados mínimos. As concentrações de NUL apresentaram comportamento semelhante à curva de lactação, em função dos dias em lactação, diferindo entre as 1ª, 2ª, 3ª e 4ª -5ª lactações, sendo influenciadas pela época de parição. A finalidade do quarto estudo foi validar três modelos de predição de NUL. O modelo 1 foi NUL = NU/12,54, o modelo 2 foi NUL = NU/17,6 e o modelo 3 foi NUL = NU/(0,0259 x PV), sendo NU = nitrogênio urinário e PV = peso vivo. Para avaliação dos modelos, foram medidas a acurácia, a precisão e a robustez. Considerando os três métodos de se estimar o consumo de matéria seca dos animais, é possível afirmar que os três modelos de predição de NUL diferem entre si quanto à acurácia, precisão e robustez, apresentando uso questionável no campo. / This thesis consists of 4 studies, with the objective to assess non-nutritional factors that may affect milk urea nitrogen concentration (MUN) of dairy cows from a commercial herd, developing models for their prediction, as well as, validating prediction models from the literature. The first trial was conducted to evaluate methods and time of storage on the results of milk analysis (concentration of fat, protein, lactose and total solids (TS), somatic cells count (SCC) and MUN). Milk was collected from a bulk tank, poured into 210 vials and preserved with bronopol. Samples were used in a completely randomized design with a 4X5+1 factorial arrangement of treatments. One factor was storage method: 1) refrigerated (R), 2) frozen (F), 3) stored at controlled temperature (CT) and 4) stored at variable temperature (VT). The other factor was storage time of samples: 3, 6, 9, 12 and 15 days after collection, plus day 0, used as control. Analysis of variance, regression analysis up to quadratic effect and orthogonal contrasts were done. Somatic cells count was analyzed as natural log transformation (LSCC). Fat concentration showed significant linear decreases, in function of time, for CT and VT, as well as, total solids concentration and LSCC for all storage methods. Milk urea nitrogen showed lack of fit, through time, for all storage methods. For the other 3 studies, 8,833 observations were used, coming from 855 Holstein cows, from September/2000 up to January/2002. Data were collected on the milk sampling day, which was done monthly. Calving seasons (CS) were divided in summer and winter. The objective of the second study was to investigate further the influence of non-nutritional factors on MUN. Simple linear regression analyses were done, using all other collected data as independent variable and MUN as dependent variable. Milk production and milk protein concentration were the most associated factors with MUN concentrations. The objective of the third study was to develop models to estimate MUN, in function of days in milk (DIM), lactation number and calving season, for field conditions. To estimate MUN, a model, proposed by Wood (1967) to describe the lactation curve, was used. Models were adjusted by least square methodology. Concentrations of MUN showed similar pattern to the lactation curve, in function of DIM, differing among 1 st , 2 nd , 3 rd and 4 th -5 th lactations and being influenced by calving season. The objective of the fourth study was to validate three models for predicting MUN. Model 1 was MUN = UN/12.54, model 2 was MUN = UN/17.6 and model 3 was MUN = UN/(0.0259 x BW), where UN = urinary nitrogen and BW = body weight. To evaluate those models, accuracy, precision and robustness were tested. Considering the three methods of estimating dry matter intake of animals, it’s possible to conclude that the three models for predicting MUN differ among themselves, regarding accuracy, precision and robustness, presenting questionable use in the field.

No presente estudo foram efetuados três ensaios. No primeiro, foram comparados os efeitos de teores crescentes de proteína metabolizável (PM), de acordo com o NRC (2001) para vacas lactantes mantidas em pastagens de capim Elefante. Os aumentos em PM foram obtidos com o aumento da proporção de farelo de soja na ração. Foram utilizadas 12 vacas, delineadas em quadrado latino 3 x 3 com quatro repetições, durante 60 dias de avaliação. Não foi observado efeito (P>0,05) sobre a produção de leite e leite corrigido para 3,5% de gordura, teores e produção de gordura, proteína e sólidos totais. Houve aumento linear (P<0,05) nos teores de nitrogênio uréico no leite (11,17; 13,17; 15,63 mg dL-1) e no plasma (18,57; 19,93; 21,99 mg dL-1). No segundo ensaio, foram avaliados os efeitos de dois diferentes intervalos entre desfolhas (95% de interceptação de luz pelo dossel – T1 e 27 dias fixos – T2) das pastagens de capim Elefante sobre o desempenho lactacional de vacas leiteiras. Foram utilizadas oito vacas lactantes, delineadas em cross-over, durante 80 dias. Os dados das pastagens foram analisados através de delineamento inteiramente casualizado com medidas repetidas no tempo. Foi observado maior (P<0,05) altura do dossel em pré (1,03 e 1,21m) e pós-pastejo (0,62 e 0,71m), interceptação de luz pelo dossel (95,47 e 97,91%), teor de fibra em detergente ácido (35,88 e 37,05%) e fibra em detergente neutro (65,08 e 66,99%). Não houve efeito dos tratamentos (P>0,05) sobre a massa de forragem em pré (6.270 e 6.310 kg de MS ha-1) e pós-pastejo (3.580 e 3.850 kg de MS ha-1). Houve tendência de maior produção de leite (16,72 e 14,09 kg dia-1), produção de gordura (0,64 e 0,54 kg dia-1), lactose (0,72 e 0,58 kg dia-1) e de sólidos totais (2,04 e 1,70 kg dia-1) para o T1 em comparação com o T2. No terceiro estudo, foram avaliados os efeitos de três estratégias de suplementação protéica nas rações (isoprotéicas) com cana-de-açúcar para vacas em lactação, em dois níveis de produção, 18 kg dia-1 (T1, T2 e T3) e 10 kg dia-1 (T4, T5 e T6). No T1 e T4, foi usado o teor de 1 kg de uréia para cada 100 kg de cana-de-açúcar in natura, no T2 e T5 as rações foram formuladas com teores ajustados de PM, enquanto no T3 e T6 havia teores excessivos de PM, conforme o NRC (2001), através do aumento em farelo de soja e redução na uréia. Para a análise dos dados foi utilizado o delineamento em quadrado latino 3 x 3 com três replicações. Não houve efeito dos tratamentos (P>0,05) sobre o consumo de matéria seca, produção de leite, teor de gordura, proteína e sólidos totais. Também não houve efeito dos tratamentos (P>0,05) sobre os teores de nitrogênio uréico no leite (13,42; 13,26; 14,03 e 13,62; 13,48; 14,12 mg dL-1) e no plasma (19,03; 19,22; 20,02 e 19,23; 19,32 e 20,12 mg dL-1), para ambos os grupos avaliados. / In the present study three trials were conducted. Trial 1: Three concentrates with increasing metabolizable protein (MP) contents were fed to lactating dairy cows grazing Elephant grass. Extra soybean meal was fed to increase MP in the diet beyond NRC (2001) recommendation. Twelve cows were used in a 3 x 3 latin square design, replicated four times, for 60 days. There were no effects (P>0.05) of treatments on milk yield, 3,5% fat corrected milk, on fat, protein and total solids contents and yields. Milk urea nitrogen and plasma urea nitrogen concentrations increased linearly (P<0.05)(11.17; 13.17; 15.63 and 18.57; 19.93; 21.99 mg dL-1) with increasing concentrate crude protein content. Trial 2: Two different intervals between defoliation (95% of light interception – T1 and 27 days fixed – T2) of Elephant grass pasture were compared for lactating dairy cows. Eight cows were used in a cross-over design during 80 days. The pasture data were analyzed in a complete random design with time repeated measurements. The sward heights pre-grazing (1.03 and 1.21m), and post-grazing (0.62 and 0.71m), light interception (95.47 and 97.91%), acid detergent fiber (35.88 and 37.05%) and neutral detergent fiber (65.08 and 66.99%) were higher for T2 compared to T1. Forage mass pre-grazing (6270 and 6310 kg DM ha-1) and post-grazing (3580 and 3850 kg DM ha-1) were not affected by treatments (P>0.05). There were tendencies for higher milk yield (16.72 and 14.09 kg day-1), fat yield (0.64 and 0.54 kg day-1), lactose yield (0.72 and 0.58 kg day-1) and total solids yield (2.04 and 1.70 kg day-1) for T1 in comparison with T2. Trial 3: Three strategies for protein adequacy in sugarcane based diets were compared for lactating dairy cows producing 18 kg milk day-1 (T1, T2 and T3), or 10 kg of milk day-1 (T4, T5 and T6). In treatment 1 (T1 and T4) urea was added to the diets in the dose of 1% of sugarcane (as fed), as traditionally done in Brazil. In treatment 2 (T2 and T5), diets were formulated according to NRC (2001) to be adequate in MP. In treatment 3 (T3 and T6), MP was fed in excess of NRC (2001) recommendation. All the three diets were isonitrogenous. Increasing soybean meal and decreasing urea in the diets was done to increase MP. Eighteen dairy cows, separated in two groups (10 and 18 kg milk-1 day-1) with nine cows each, were used during sixty days, in a 3 x 3 latin square design replicated three times. There were not effects of treatments (P>0.05) on DMI, milk yield, fat contents and yields, protein contents and yields and total solids contents and yields. There were not effects of treatments (P>0.05) on milk urea nitrogen (13,42; 13,26; 14,03 e 13,62; 13,48; 14,12 mg dL-1) and plasma urea nitrogen (19.03; 19.22; 20.02 and 19.23; 19.32 e 20.02 mg dL-1).

As afecções podais podem alterar negativamente o comportamento, bem estar e produtividade das vacas leiteiras, mas ainda é preciso explorar mais seus efeitos sobre os atributos fisiológicos, limiar da dor e as características físico-químicas do leite. Esse estudo teve por objetivo verificar os efeitos provocados pelo desconforto de vacas com problemas podais severos no escore de locomoção, atributos fisiológicos, limiar da dor, variáveis termográficas e características físico-químicas do leite, além de avaliar a melhoria nessas variáveis após o tratamento. Foram utilizadas 34 vacas lactantes claudicantes, as quais foram classificadas quanto à locomoção antes e depois do tratamento. Foram diagnosticadas as lesões, avaliados a composição do leite, limiar nociceptivo, realizadas as medidas fisiológicas e imagens termográficas nos membros com e sem lesão. O delineamento experimental utilizado foi o completamente casualizado com medidas repetidas no tempo, onde cada vaca foi considerada uma unidade experimental. Os dados foram submetidos à análise de variância, utilizando o procedimento Mixed do programa estatístico SAS versão 9.0. Vacas claudicantes apresentaram maior sensibilidade à dor. O tratamento reduziu o escore de locomoção e aumentou limiar nociceptivo, além de influenciar os valores de pH e cálcio iônico, pois maiores valores de pH foram observados no dia pré-tratamento enquanto maiores valores de cálcio iônico foram observados no dia 8. Houve pequena associação entre os valores termográficos e os escores de locomoção. Os maiores valores de pH foram encontrados no dia pré-tratamento, (dia -1), para vacas da raça Jersey, animais mais velhos ou para animais mais pesados; enquanto os valores de cálcio iônico foram superiores no 8° dia em relação aos demais dias. Não houve efeito de escores de locomoção alto x baixo sobre a composição do leite. Por outro lado, fatores ligados aos animais como estádio lactacional, peso, número de tratamentos anteriores, ordem de parto, raça e idade influenciaram as características físico-químicas do leite. / Lameness can negatively affect behavior, well-being and productivity, but it is still worthy to explore its effect on the nociceptive threshold, physiological attributes and the physicochemical characteristics of milk. This study aimed to verify the effects caused by the discomfort in severely lame cows on locomotion score, physiological attributes, pain threshold, thermographic variables and physicochemical characteristics of milk and assess improvement in these variables after corrective trimming and digital treatment. Thirty-nine severely lame lactating cows were classified according to locomotion score before and 1 week after trimming. In several days, injuries were diagnosed, milk composition evaluated, nociceptive threshold and physiological measurements were done, besides thermographic images of the hoofs with and without injury. The experimental design was a completely randomized design with repeated measurements over time, and each cow was considered an experimental unit. Data was subjected to analysis of variance using the mixed procedure of SAS statistical software version 9.0. Severely lame cows showed higher sensitivity to pain. Trimming and treatment reduced locomotion score and increased nociceptive threshold, as well as influence the pH and ionic calcium, because higher pH values were observed in the pre-trimming day while larger ionic calcium values were observed on day 8. Cows had higher thermographic values in the affected hoof. There was little association between thermographic values and locomotion scores. Higher pH values were found in the pre-trimming (day -1) in the milk of Jersey cows, older animals or heavier animals; while the ionic calcium values were higher on the 8th day compared to other days. There was no effect of high x low locomotion scores on milk composition. On the other hand, factors related to animals as lactation stage, weight, number of previous trimmings, calving order, breed and age influenced the physicochemical characteristics of milk.

Este trabalho teve por objetivo avaliar a dinâmica folicular de vacas de corte tratadas com protocolos para a sincronização da ovulação onde se utilizou implantes vaginais impregnados com progesterona ou com acetato de medroxi-progesterona e um implante auricular impregnado com norgestomet, além da utilização de ésteres de estradiol em diferentes doses. Foram utilizadas nove vacas Braford, multíparas, não-lactantes, cíclicas e com CC>=3. Os animais foram mantidos confinados e alimentados com feno e ração. Os animais foram divididos em três tratamentos, sendo que todos os animais passaram pelos três tratamentos em quatro repetições. Em cada repetição os animais foram divididos entre os três grupos de forma homogênea. No grupo 1 (n = 14), os animais receberam no dia 0, uma esponja vaginal impregnada com 250 mg de acetato de medroxi-progesterona (MAP) e uma aplicação intramuscular (i.m.) de 2 mg de benzoato de estradiol (BE); no dia 8, a esponja vaginal foi retirada e aplicado i.m. 0,5 mg de Cloprostenol e 24 horas após foi aplicado i.m. 1 mg de BE. No grupo 2 (n = 7), os animais receberam no dia 0, um implante vaginal de silicone impregnado com 1 g de progesterona e uma aplicação i.m. de 2 mg de BE; no dia 8, o implante foi retirado e aplicado i.m. 0,5 mg de Cloprostenol e 24 horas após foi aplicado i.m. 1 mg de BE. No grupo 3 (n = 8), os animais receberam no dia 0, um implante auricular de silicone impregnado com 3 mg de Norgestomet e uma aplicação i.m. de 3 mg de Norgestomet e 5 mg de Valerato de Estradiol (VE); no dia 9 o implante auricular foi retirado. Os animais foram examinados diariamente por via trans-retal com um ultra-som equipado com um transdutor linear de 8 MHz para monitorar a dinâmica folicular e luteal nos ovários. Após a retirada do implante auricular no grupo 3 e após a aplicação de 1 mg de BE nos grupos 1 e 2, os animais foram avaliados por ultra-sonografia duas vezes por dia até que a ovulação fosse detectada. No grupo 1, sete animais perderam a esponja vaginal impregnada com MAP e os dados foram retirados das análises. Os três tratamentos foram eficientes em promover uma nova onda de crescimento folicular sincronizada em 3,7 ± 1,1, 3,7 ± 0,7 e 4,9 ± 1,1 dias (P = 0,059) nos grupos 1, 2 e 3, respectivamente. Além de promover a ovulação de um folículo dominante com poucos dias de dominância e com diâmetro satisfatório em 66 ± 12, 66 ± 0 e 70,5 ± 12,7 horas após a retirada do implante (P = 0,62) nos grupos 1, 2 e 3, respectivamente. Portanto, os três protocolos foram eficientes em promover a sincronização da ovulação e são indicados para utilização em programas de inseminação artificial a tempo fixo em vacas de corte. / This experiment was done to evaluate the ovarian follicular dynamics in beef cows treated with protocols of synchronization of ovulation where were used vaginal implants impregnated with progesterone or with medroxi-progesterone acetate and an ear implant impregnated with norgestomet, than the use of estradiol esters in different doses. Nine Braford cows, multiparous non-lactating, cyclic and BCS>=3 where used in these trial. The animals were kept confined and fed with hay and concentrated. The animals were divided into three treatments, which all animals went for three treatments in four replicates. In each replicate the animals were divided among groups homogeneously. Group 1 (n = 14), animals received on day 0, a vaginal sponge impregnated with 250 mg medroxi-progesterone acetate (MPA) and an intramuscular (i.m.) application of 2 mg of estradiol benzoate (EB); on day 8, the vaginal sponge was removed and applied i.m. 0.5 mg cloprostenol and 24 hours latter was applied i.m. 1 mg of EB. Group 2 (n = 7), the animals received on day 0, a silicone vaginal implant with 1 g of progesterone and an application i.m. of 2 mg of EB; on day 8, the implant was removed and applied i.m. 0.5 mg cloprostenol and 24 hours latter was applied i.m. 1 mg of EB. Group 3 (n = 8), the animals received on day 0, a silicone ear implant impregnated with 3 mg norgestomet and an application i.m. of 3 mg norgestomet and 5 mg of estradiol valerate; on the 9th day the implant was removed. From day 0, animals were examined daily by trans-rectal ultrasound with an 8 MHz linear transducer to monitor follicular and luteal dynamics. After removal of the implant in group 3 and after application of 1 mg EB in the other groups, the animals were evaluated by ultrasound two times per day until ovulation was detected. In group 1, seven animals lost a vaginal sponge impregnated with MPA and the data were removed from analysis. The three treatments groups were effective in promoting a new follicular wave emergence synchronously in 3,7 ± 1,1, 3,7 ± 0,7 and 4,9 ± 1,1 days (P = 0,059) in the groups 1, 2 and 3, respectively. Besides promoting ovulation a dominant follicle with few days of dominance and with satisfactory diameter in 66 ± 12, 66 ± 0 and 70,5 ± 12,7 hours after implant removal (P = 0,62) in the groups 1, 2 and 3, respectively. Therefore, the three protocols were effective in promoting the synchronization of ovulation and are indicated for use in fixed-time artificial insemination programs in beef cows.

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The used treatments were: Control (M): Inclusion of 22,5mg / kg DM of Monensin Sodium; Barbatimão (B1000): inclusion of 1000mg / kg MS of active Ingredient of dry extract of barbatimão ; Barbatimão (B500): inclusion of 500mg / kg MS of active Ingredient of dry extract of barbatimão; Sucupira (S250): inclusion of 250 mg / kg DM of crude oil of Sucupira; Sucupira (S500): inclusion of 500mg / kg DM of crude oil of Sucupira. Where utilized five crossbred lactating cows. The design utilized was a 5x5 Latin square design with periods of 21 days, 14 for adaptation of animals and seven for data collection. For the variables consumption of crude protein (CP), ether extract (EE), non-fibrous carbohydrates (NFC), and total carbohydrate (TC), there was no statistically significant difference (p> 0.05) between neither treatment. The averages of dry matter intake for the B1000, S500 and S250 treatments did not differ (p <0.05) to the treatment M. For the variable percentage of dry matter intake relative to body weight all natural additives statistically similar means (p <0.05) M, except B500 treatment, which averaged more than M (p <0.05). The results of the fiber intake of neutral detergent fiber (NDF) and percentage of NDF intake in relation to body weight showed that only treatment S500 was able to affect these variables similarly to monensin (p <0.05). There was no statistically significant difference (p> 0.05) between treatments evaluated for the average pH and ammonia nitrogen concentration of rumen fluid. No statistically significant difference (p> 0.05) between the averages of DM, OM, CP, EE, TC and NDF in neither of the treatments. The digestibility of NFC was no statistical difference (p <005) only between treatment M and B500, in which the digestibility for B500 was smaller than M (78.62 vs 71.16). For the averages of milk production, corrected milk production and milk composition were no statistically significant differences (p> 0.05). There was also no statistically significant difference (P> 0.05) between the averages of treatments when evaluating production efficiency. / Vários aditivos sintéticos são utilizados na alimentação de ruminantes com intuito de melhorar a eficiência produtiva. No entanto, a sociedade consumidora vem cada vez mais criticando o uso desses produtos. A demanda cada vez mais crescente por alimentos saudáveis e seguros vem causando grande pressão em diversos setores da agropecuária. Deste modo, com o intuito de desenvolver tecnologias sustentáveis, foram utilizadas duas plantas do Cerrado, o Barbatimão e a Sucupira, que possuem atividade antimicrobiana comprovada. O objetivo do trabalho foi avaliar os efeitos dos aditivos naturais Barbatimão e Sucupira sobre o consumo e digestibilidade aparente total da matéria seca e nutrientes, fermentação ruminal, produção e composição do leite e eficiência produtiva. Os tratamentos utilizados foram: Controle(M): inclusão de 22,5mg/kg MS de Monensina Sódica; Barbatimão (B1000): inclusão de 1000mg/kg MS do Princípio Ativo do Extrato Seco de Barbatimão; Barbatimão (B500): inclusão de 500mg/kg MS do Princípio Ativo do Extrato Seco de Barbatimão; Sucupira(S250): inclusão de 250mg/kg MS de Óleo Bruto de Sucupira; Sucupira(S500): inclusão de 500mg/kg MS de Óleo Bruto de Sucupira. Foram utilizadas cinco vacas mestiças em lactação. O delineamento utilizado foi o quadrado latino 5x5, com períodos de 21 dias, sendo 14 para a adaptação dos animais e sete para coleta de dados. Para as variáveis consumo de proteína bruta(PB), extrato etéreo(EE), carboidrato não fibroso(CNF) e carboidrato total(CT), não foi encontrada diferença estatisticamente significativa (p>0,05) entre nenhum tratamento. As médias de consumo de matéria seca para os tratamentos B1000, S500 e S250 não diferiram (p<0,05) ao tratamento M. No entanto, para o tratamento B500 a média de consumo de MS e MO foi maior quando comprado ao M. Para a variável porcentagem de consumo de MS em relação ao peso vivo todos aditivos naturais apresentaram médias estatisticamente semelhantes (p<0,05) a M, com exceção do tratamento B500, cuja média foi superior a M (p<0,05). Os resultados do consumo de fibra em detergente neutro (FDN) e porcentagem de consumo de FDN em relação ao peso vivo mostraram que apenas o tratamento S500 foi capaz de afetar estas variáveis de maneira semelhante à monensina (p<0,05). Não foi observada diferença estatisticamente significativa (p>0,05) entre os tratamentos avaliados para as médias de pH e concentração de nitrogênio amoniacal do líquido ruminal. Não ocorreu diferença estatística significativa (p>0,05) entre as médias de digestibilidade da MS, MO, PB, EE, CT e FDN em nenhum dos tratamentos utilizados. Para a digestibilidade dos CNF houve diferença estatística (p<005) apenas entre o tratamento M e B500, em que a digestibilidade para B500 foi menor que M (78,62 vs 71,16). Para as médias de produção de leite, produção de leite corrigida e composição do leite não foram encontradas diferenças estatisticamente significativas (P>0,05). Também não foi encontrada diferença estatisticamente significativa (P>0,05) entre as médias dos tratamentos ao se avaliar a eficiência produtiva.

A presente tese foi dividida em 5 Experimentos. Os objetivos do Experimento 1 foram avaliar a utilização da gonadotrofina coriônica equina (eCG) e/ou do cipionato de estradiol (ECP) na dinâmica folicular e taxa de concepção de vacas holandesas submetidas a inseminação em tempo fixo (IATF). No D0, todos os animais (n = 782) receberam 2 mg de benzoato de estradiol (BE) e um dispositivo intravaginal de progesterona (CIDR). Oito dias depois, o CIDR foi retirado e todos os animais receberam PGF2?. Simultaneamente, os animais foram divididos em 4 grupos: G1) eCG + ECP no Dia 8; G2) eCG no Dia 8 + GnRH após 48h; G3) ECP no Dia 8; G4) GnRH após 48h. Amostras de sangue e exames utlra-sonográficos foram realizados frequentemente em um subgrupo de animais (n = 96). As análises estatísticas de todos os experimentos foram efetuadas com o proc GLIMMIX e proc MIXED do SAS. O uso de eCG e o escore de condição corporal (ECC) dos animais afetaram as concentrações circulantes de progesterona no diestro. Os animais do G2 apresentaram maior taxa de concepção que os do G4 (33,8% vs. 28,9%). Além disso, para animais de menor ECC, ficou evidente o benefício da aplicação de eCG (G2 = 44,4% vs. G4 = 6,1%). No Experimento 2 (n = 26), o objetivo foi comparar o efeito da administração da eCG no dia da remoção do CIDR em animais de menor (2,0-2,5) ou maior (3,0-3,5) ECC. Foram avaliadas algumas características do corpo lúteo (CL) como o volume e histologia, assim como as concentrações plasmáticas de progesterona no diestro. Independentemente da condição corporal dos animais, a eCG aumentou o volume do CL e a concentração plasmática de progesterona no diestro. O ECC afetou negativamente o volume e concentração de progesterona sérica no diestro. Não foi encontrado diferença na proporção de células grandes/pequenas, assim como no fluxo sanguíneo no CL entre os grupos experimentais. No Experimento 3, foi comparado a taxa de concepção em vacas de leite de alta produção (n = 388) após o uso do protocolo G2 do Experimento 1 (Capítulo I), com ou sem adição de ECP no momento da retirada do CIDR (novo ou usado). Não foi verificado efeito da adição do tratamento com ECP e nem do tipo do dispostivo na taxa de concepção. No Experimento 4 (n = 199), apesar no aumento verificado no diâmetro folicular no grupo tratado com GnRH 56h (17,8 mm) comparado com GnRH 48h (16,5 mm); e do atraso no momento da ovulação após a retirada do CIDR (GnRH 56h = 75,3h; GnRH 48h = 79,8h) não foi constatado qualquer diferença na concepção ao se atrasar a aplicação do GnRH de 48h para 56h em vacas inseminadas 16h depois do GnRH. No Experimento 5 (n = 185), a taxa de concepção não diferiu em animais que receberam o GnRH 48h ou 56h (momento da IATF) após a retirada do CIDR, indicando a possibilidade do emprego de um protocolo com apenas 3 manejos em vacas de leite de alta produção. / The current thesys has been divided in 5 Experiments. Objectives of Experiment 1 were to evaluate the effects of equine chorionic gonadotropin (eCG) and/or estradiol cypionate (ECP) on follicular dymanics and conception rate in Holstein cows receiving fixed timed artificial insemination (TAI). On D0, all cows (n = 782) received 2 mg of estradiol benzoate (EB) and one intravaginal progesterone device (CIDR). Eight days later, CIDR was removed and all animals were treated with PGF2?. Simultaneously, animals were divided in 4 groups: G1) eCG + ECP on Day 8; G2) eCG on Day 8 + GnRH 48h later; G3) ECP on Day 8; G4) GnRH 48h later. Blood samples and ultrasound exams were frequently performed in a subset of the animals (n = 96). All the statistical analyses for all experiments were performed with proc GLIMMIX and proc MIXED of SAS. Equine chorionic gonadotropin (eCG) treatment and body condition score (BCS) affected circulating progesterone in the diestrus. Cows in G2 had greater conception rates than cows in G4 (33,8% vs. 28,9%). In addition, in cows with lower BCS, eCG seems to be even more affective (G2 = 44,4% vs. G4 = 6,1%). In Experiment 2 (n = 26), the objective was to compare the effect of eCG the day of CIDR removal in animals with lower (2,0-2,5) or higher (3,0-3,5) BCS. Some variables such as corpus luteum (CL) volume, histology and circulating progesterone concentration in the diestrus were evaluated. Regardless of the body condition of the animals, eCG increased CL volume and circulating progesterone concentration in the diestrus. BCS negatively affected CL volume and circulating progesterone. There were no differences in large/small CL cell ratio, as well as CL blood flow between experimental groups. In Experiment 3, it was compared conception rate in dairy cows (n = 388) after using the same protocol G2 from Experiment 1 (Chapter I), with or without an ECP treatment at the time of CIDR (new or used) removal. Both ECP treatment and type of CIDR did not significantly affected conception rates. In Experiment 4 (n = 199), despite the fact that follicular diameter was increased in group GnRH 56h (17,8 mm) compared with GnRH 48h (16,5 mm); and of the delayed time of ovulation after CIDR removal (GnRH 56h = 75,3h; GnRH 48h = 79,8h), there were no differences in conception rates after delaying the GnRH treatment from 48h to 56h in cows inseminated 16h after GnRH. In Experiment 5 (n = 185), conception rate did not differ in animals that received GnRH 48h or 56h (at the time of TAI) after CIDR removal, indicating the possibility of using a protocol with only 3 handlings in high producing dairy cows.

Silagens são fontes abundantes de compostos orgânicos voláteis. Durante o processo de secagem de amostras em estufas de ventilação forçada, grande parte destes compostos é perdida. Não se conhece, entretanto, a magnitude de participação destes produtos de fermentação no conteúdo energético de silagens e seus efeitos no desempenho de animais. O objetivo deste trabalho foi dimensionar a contribuição da fração volátil no valor nutricional de silagens. No primeiro experimento, avaliaram-se os efeitos do etanol e do ácido lático no consumo de matéria seca e no processo de digestão de novilhos canulados alimentados com rações contendo silagem de milho. A maior concentração ruminal de amônia foi a única alteração noticiada para o tratamento etanol. O enriquecimento da ração com ácido lático elevou o pH ruminal e diminuiu a razão acetato/propionato. Quando o teor de matéria seca foi determinado em estufa, os valores de NDT foram, em média, 1,5 a 1,6 unidades percentuais inferiores àqueles obtidos pelos cálculos utilizando a matéria seca determinada por destilação com tolueno. O segundo experimento determinou os efeitos da fração volátil da silagem de cana-de-açúcar e da proporção de forragem no consumo de matéria seca e no processo de digestão de novilhos canulados. Cerca de 21% da matéria seca da silagem de cana constituiu-se de compostos voláteis. A presença destes compostos na ração não alterou o consumo de matéria seca, mas aumentou as taxas fracionais de absorção de valerato e etanol com o ruminorretículo evacuado. O menor teor de forragem alterou a maior parte das variáveis tradicionalmente associadas aos acréscimos de concentrados na dieta. A fração volátil representou contribuição equivalente a 10% do valor energético da silagem de cana-de-açúcar determinado por digestibilidade. O terceiro ensaio foi delineado para verificar os efeitos do etanol na cinética de degradação ruminal in vitro. A inclusão de etanol nas doses 0, 5, 10, 15 ou 20% da MS diminuiu linearmente a degradação da cana-de-açúcar. No quarto experimento, avaliaram-se os efeitos do etanol e do ácido acético no desempenho de vacas leiteiras de alta produção. As vacas suplementadas com etanol produziram mais leite que àquelas alimentadas com as rações controle e ácido acético, por causa do maior consumo de MS. A razão ELl leite/CMS (Mcal/kg) foi similar entre os tratamentos. A composição química e a qualidade sensorial do leite não foram alteradas pelos compostos voláteis suplementados. A fração volátil representou 11 a 21 % da matéria seca das silagens estudadas e pode ser responsável por até 10% do valor nutricional, com base nas respostas de animais. / Silages are abundant sources of volatile organic compounds. At drying of samples by using forced ventilated oven, most of those compounds disappear. There is no agreement on the contribution of these fermentation end-products on energy content of silage and its effects on animal performance. The objective of this work was to rescale the contribution of the volatile fraction to the nutritional value of silages. In the first trial, the effects of ethanol and lactic acid on dry matter intake and digestion were studied in cannulated steers fed corn silage based diets. The highest concentration of rumen ammonia was the only change reported for the ethanol treatment. Diet enrichment with lactic acid increased the rumen pH and decreased acetate/propionate ratio. When the dry matter content was determined by oven, the TDN value averaged 1.5 to 1.6 units lower than those obtained by toluene distillation. In the second trial, the effects of the volatile fraction from sugarcane silage and forage proportion were determined. About 21% of dry matter of sugarcane silage consisted of volatile compounds. The fate of these compounds did not alter the DM intake but increased the fractional absorption rate of valerate and ethanol within empty reticulorumen. The lower content of forage changed most of variables traditionally associated with high concentrate diets. The contribution of volatile fraction represented 10% of the energy value of sugarcane silage determined by digestibility. The third trial was designed to determine the effects of ethanol on the rumen degradation kinetics in vitro. The addition of 0, 5, 10, 15 or 20% of ethanol (DM bases) linearly decreased the sugarcane degradation. In the fourth experiment, we evaluated the effects of ethanol and acetic acid on performance of high producing dairy cows. Cows supplemented with ethanol yielded more milk per day than that fed acetic acid and control diets, due to the higher DM intake. The NEl milk/ DMI (Mcal/kg) was similar across treatments. The chemical composition and sensory quality of milk were not altered by the compounds. Volatile compounds represented a range from a 11 a 21% of the DM from the studied silge sources and they might be responsable for additional 10% on the nutritional value based on animal performance.

Objetivou-se avaliar diferentes níveis de utilização de monensina sódica na ração de vacas em lactação e seus efeitos sobre o consumo e digestibilidade aparente total da matéria seca e dos nutrientes, produção e composição do leite, fermentação ruminal, síntese de proteína microbiana, parâmetros sanguineos e resíduos de monensina no leite. Foram utilizadas 12 vacas da raça Holandesa, distribuídas em quatro quadrados latinos 3x3 balanceados, alimentadas com as seguintes rações: 1) Controle (C), composto por ração basal sem adição de monensina, 2) Monensina 24 (M24), adição de 24 mg/kg MS de monensina na ração, adicionada ao concentrado, e 3) Monensina 48 (M48), adição de 48 mg/kg MS de monensina, adicionada ao concentrado. Diariamente foram realizadas pesagens das quantidades dos volumosos e concentrados fornecidos e das sobras de cada animal, para estimativa do consumo. Nas amostras de sobras e alimentos fornecidos foram determinados os teores dos principais nutrientes para posterior cálculo do consumo. Na determinação da digestibilidade aparente total dos nutrientes a quantidade total de matéria seca fecal excretada foi estimada pela concentração de fibra em detergente ácido indigestível (FDAi). As fezes foram coletadas no 13º e 16º dias de cada período experimental, sempre antes das ordenhas da manhã e da tarde, e armazenadas em sacos plásticos em freezer à -20°C, e posteriormente submetidas a análises químico-bromatológicas. As amostras utilizadas para análise da composição do leite foram coletadas de dois dias alternados, sendo provenientes das duas ordenhas diárias. As amostras de líquido ruminal foram coletadas com a utilização de sonda esofágica em dois tempos, antes (tempo zero) e três horas (tempo três) após a alimentação matinal. Foram determinados no líquido ruminal o pH, as concentrações de nitrogênio amoniacal e as concentrações dos ácidos graxos de cadeia curta. As amostras utilizadas para análise de alantoína no leite foram coletadas de dois dias alternados, sendo provenientes das duas ordenhas diárias. As amostras spot de urina foram obtidas de todas as vacas no 16º dia de cada período experimental, quatro horas após a alimentação matinal, durante micção estimulada por massagem na vulva. As amostras de sangue foram coletadas em tubos vacuolizados (vacutainer) por punção da veia e/ou artéria coccígea, sendo posteriormente obtidos o soro ou plasma para as análises laboratoriais. A monensina nas rações resultou em redução (P<0,05) do consumo de matéria seca (kg/dia e %PV) e de nutrientes, especialmente para a ração M48. Não houve efeito (P>0,05) dos níveis de monensina sódica utilizados sobre os coeficientes de digestibilidade aparente total da matéria seca e dos nutrientes analisados. Com a utilização de monensina sódica nas rações houve aumento da produção de leite (P<0,05), sem e com correção, e aumento da eficiência produtiva (P<0,05). Não houve diferença (P>0,05) entre a rações avaliadas para os teores de gordura, proteína, lactose e extrato seco desengordurado, havendo, no entanto, aumento da produção de gordura e lactose no nível intermediário de utilização de monensina. As rações avaliadas não influenciaram (P>0,05) o peso e o escore de condição corporal. Não houve efeito (P>0,05) das rações utilizadas nos valores de pH e nitrogênio amoniacal nos tempos avaliados, no entanto, houve efeito linear (P<0,05) com redução da porcentagem e concentração molar dos ácidos acético e butírico nos tempos avaliados, e na relação acetato/propionato. Em relação à porcentagem e a concentração molar do ácido propiônico, foi observado desvio da linearidade (P<0,05), sendo as maiores concentrações encontradas para a ração M24, comportamento semelhante para a concentração total de ácidos graxos de cadeia curta. Não houve efeito (P>0,05) das rações utilizadas nas excreções diárias totais de urina, e dos teores de alantoína e de acido úrico na urina, de alantoína no leite, e de derivados de purinas totais. Não houve diferença (P>0,05) na porcentagem de alantoína nos derivados de purina, das purinas absorvidas e do nitrogênio microbiano para as rações experimentais. Houve efeito linear (P<0,05) para eficiência microbiana para as rações contendo monensina sódica. Não houve efeito (P>0,05) das rações experimentais sobre as concentrações dos parâmetros sanguíneos analisados. As rações experimentais influenciaram (P>0,05) a eficiência de uso da energia líquida de lactação. Também foi observado efeito linear (P<0,05) das rações experimentais sobre ao consumo de energia bruta, digestível, metabolizável e líquida, e da produção de energia líquida de ganho. Foi observado desvio da linearidade (P<0,05) para a produção de energia líquida de lactação e para o balanço energético. Observou-se efeito das rações (P<0,05) para o consumo de nitrogênio total, para a excreção de nitrogênio nas fezes (g/dia) e a eficiência da utilização do nitrogênio. Em relação à excreção de nitrogênio no leite (g/dia), observou-se desvio da linearidade (P<0,05), com maiores valores para a ração M24. No entanto, não foi observado efeito das rações experimentais (P>0,05) sobre o balanço de nitrogênio, em g/dia ou em porcentagem do nitrogênio total. Os resíduos de monensina sódica detectados no leite estão dentro do limite máximo estabelecido pela FAO/WHO. A utilização de monensina sódica nas rações de vacas leiteiras no terço médio de lactação, tendo como volumoso a silagem de milho, melhorou consideravelmente o desempenho produtivo dos animais e não deixou resíduos no leite capazes de prejudicar a saúde humana. / The objective of this study was to evaluate the use of sodic monensin in ration for dairy cows on nutrients intake, total apparent digestibility of dry matter and nutrients, milk yield and composition, ruminal fermentation parameters, microbial protein synthesis, blood parameters and milk monensin residues. Twelve Holstein cows were allocated in four balanced Latin squares 3x3, and fed with the following rations: 1) control (C), basal diet without sodic monensin addition, 2) monensin 24 (M24), addition of 24 mg/kg DM of monensin in the ration, added to concentrate, and 3) monensin 48 (M48), addition of 48 mg/kg DM of monensin in the ration, added to concentrate. Daily weights of the amounts of corn silage and concentrated supplied, and the orts refused of each animal, were recorded for estimate the nutrient intake. Samples of orts and feedstuffs were analyzed for composition and subsequent nutrient intake calculation. For determination of total apparent digestibility of nutrients, the total amount of fecal dry matter excreted was estimate by indigestible detergent acid fiber (ADFi). The feces were collected in the 13th and 16th days of each experimental period, always before milking at morning and at afternoon, and frozen in freezer at -20°C , and in the end of the collection period it was made composed sample by animal with base in the dry matter, and analyzed. The milk yield and dry matter intake were measured daily during the experimental period. The samples used for analysis of milk composition were collected from two alternated days, and from the two daily milkings. Samples of ruminal fluid were collected with use of esophageal probe into two times, before (zero time) and three hours after morning fed (three time). Were determining pH, ammonia nitrogen and short chain fatty acids in ruminal fluid. The samples used for analysis of allantoin in milk were collected from two alternate days, and from the two daily milkings. The spot samples of urine were obtained from all cows in the 16th day of each experimental period, four hours after the morning feeding during urination stimulated by massage on the vulva. The samples of blood were collected in tubes vacuolizade (vacutainer) for puncture of the vein and/or artery coccygeal. The monensin use in the rations resulted in decrease (P<0.05) of dry matter and nutrients intake, especially for the M48 ration. There were not effect (P>0.05) of the experimental rations on the coefficients of total apparent digestibility of the dry matter and nutrients. The sodic monensin in the rations were reduced (P<0.05) the dry matter intake (kg/day and %BW), increased milk yield (P<0.05), corrected or not for fat percent, and increased production efficiency (P<0.05). Not difference (P>0.05) were observed between rations for milk fat, protein, lactose, total dry and non fat extract composition, and body weight and body condition score (P>0.05). The pH and concentrations of ruminal ammonia nitrogen were not different (P>0.05) for different levels of sodic monensin used in rations, in both times of collection. However, there was effect (P<0.05) of experimental rations on percentage and molar concentration of acetic and butyric acids in the both times, as well as for the acetate/propionate relation. The percentage and molar concentration of propionic acid was observed different between experimental rations (P<0.05), with the major concentrations found for ration M24. Similar results were obtained for total concentration of short chain fatty acids. There was no effect (P>0.05) in total daily excretion of urine, allantoin and uric acid in urine, allantoin in milk, and total purine derivatives. Not was observed effect (P>0.05) of experimental rations on the percentage of allantoin on total purines, purines absorbed, and in microbial nitrogen. It was observed effect (P<0.05) of microbial efficiency for the experimental rations that content sodic monensin. The experimental rations had no effect (P>0.05) in the blood parameters. It was observed effect (P<0.05) of sodic monensina rations on the efficiency of use of lactation net energy, and also were observed effect (P<0.05) in the intake of crude, digestible, metabolizable and liquid energy, as well as for production of net energy of gain. Was observed effect (P<0.05) of experimental rations on production of net lactation energy and for the energy balance. It was observed effect (P<0. 05) of experimental rations on total nitrogen intake, excretion of nitrogen in feces (g/day) and nitrogen efficiency. In relation to the excretion of nitrogen in milk (g/day), were observed effect (P<0.05) of monensina, with greater values for M24 ration. However, not were observed effect (P>0.05) of experimental rations for nitrogen balance, in g/day or in percentage of total nitrogen. The detected residues of sodic monensin in milk was smaller that the maximum limit established for FAO/WHO. The utilization of sodic monensin in midlactaion dairy cow, feed corn silage, improves de productive performance and do not result in residues in milk that prejudiced the human health.

O objetivo do presente estudo foi: a) comparar dois métodos de detecção e contagem de S. agalactiae, (cultura microbiológica e qPCR) em leite de vacas e de tanques; b) determinar a sensibilidade analítica e a repetibilidade do diagnóstico por qPCR em relação à cultura microbiológica para detecção de S. agalactiae em amostras compostas de leite de vaca e de tanque. Foram utilizadas amostras de leite de vaca (n=31) e de tanque (n=150), as quais foram submetidas à cultura microbiológica e contagem de S. agalactiae por cultura de microbiologia convencional e qPCR. Para avaliar a sensibilidade analítica, foi construída uma curva padrão com amostras de leite desnatado reconstituído estéril contaminado artificialmente com S. agalactiae (ATCC 13813). Em apenas duas amostras não foi possível amplificação de DNA, o que indica que a qPCR foi capaz de detectar S. agalactiae, em 96% e 97%, do leite de vaca e de tanque, respectivamente. Embora a técnica qPCR tenha apresentado alta sensibilidade analítica, não houve equivalência de resultados de contagem S. agalactiae entre os dois métodos propostos. Os coeficientes de variação interensaio utilizados para avaliar a técnica qPCR foram < 5%, o que demonstra que a técnica possui repetibilidade adequada. Portanto, não houve equivalência entre a contagem de S. agalactiae por cultura microbiológica padrão e a técnica de qPCR, provavelmente pela alta sensibilidade da técnica qPCR em quantificar DNA de células inviáveis. No entanto, a qPCR apresentou-se como uma técnica sensível para identificação de S. agalactiae em amostras de leite de vaca e de taque. / The aim of this study was to: a) to compare two methods of detection and enumeration of S. agalactiae (microbiological culture and qPCR) in cow`s milk and bulk tank milks, b) to determine the analytical sensitivity and repeatability of the diagnosis by qPCR in relation to microbiological culture for detection of S. agalactiae on composite samples of cow\'s milk and bulk tank milk. Samples of cow\'s milk (n = 31) and bulk tank milk (n = 150), which were submitted to microbiological culture and enumeration of S. agalactiae by conventional microbiology culture and qPCR. To evaluate the analytical sensitivity, a standard curve was made with samples of sterile reconstituted skim milk artificially contaminated with S. agalactiae (ATCC - 13813). In two samples was not possible the amplification of DNA, indicating that qPCR was able to detect S. agalactiae, 96% and 97% cow\'s milk and bulk tank milk, respectively. Although the technique has presented qPCR high analytical sensitivity, there was no equivalent result of counting S. agalactiae between the two proposed methods. The interassay coefficients of variation technique used to evaluate the qPCR were <5%, which demonstrate that the technique has adequate repeatability. So there was no equivalence between the counts of S. agalactiae by standard microbiological culture and qPCR technique, probably due to the high sensitivity of qPCR technique to quantify DNA of unviable cells. However, the qPCR presented as a sensitive technique for identifying S. agalactiae in samples of cow\'s milk and bulk tank milk.

Vacas em lactação apresentam capacidade de síntese endógena de ácido ascórbico para suprir os seus requerimentos, no entanto, sob condições estressantes como altas temperaturas e umidade, elevadas produções de leite, parasitoses e incidência de doenças, pode haver produção insuficiente de ácido ascórbico para as demandas metabólicas do animal. Foram objetivos do presente estudo avaliar o efeito do estágio de lactação e número de lactações sobre a concentração plasmática de ácido ascórbico de 153 vacas em lactação e 40 vacas no período seco em 3 fazendas leiteiras, e sua correlação com: a contagem de células somáticas (CCS) no leite, níveis de glicose plasmática, níveis de ácidos graxos não-esterificados (AGNE), níveis de insulina plasmática, níveis de beta-hidroxibutirato (BHBA) plasmático, níveis de aspartato-aminotransferase (AST) plasmática, níveis de produção de leite e escore de condição corporal. Os animais foram escolhidos ao acaso e agrupados em 5 grupos de acordo com o estágio de lactação (estágio 1: 1-28 dias; estágio 2: 29-56 dias; estágio 3: 57-140 dias; estágio 4: 141-280 dias e estágio 5: vacas secas) e de acordo com o número de lactações (primíparas ou multíparas). Amostras de sangue foram coletadas para determinação de ácido ascórbico plasmático utilizando técnica de cromatografia líquida de alta pressão. A análise estatística foi realizada com o uso do programa computacional SAS. A concentração média (mg/L) de ácido ascórbico plasmático foi de 2,67; 2,60; 2,46; 2,63 e 2,60 para os estágios de 1 a 5 respectivamente, e de 2,52 e 2,63 para multíparas e primíparas. Foi identificada correlação negativa entre o ácido ascórbico plasmático e glicose e AGNE plasmáticos, e correlação positiva entre ácido ascórbico plasmático e produção de leite. Não foram registradas correlações entre ácido ascórbico plasmático e demais parâmetros. Baseado nos resultados do presente estudo, foi possível concluir que o ácido ascórbico plasmático não sofreu efeito de estágio de lactação ou número de lactações, e ainda que identificada correlação entre ácido ascórbico plasmático e as variáveis glicose, AGNE e produção de leite não foi possível identificar o fator determinante da variabilidade do ácido ascórbico plasmático em vacas leiteiras. / Dairy cows are totally dependent of endogenous synthesis of ascorbic acid to meet their requirements. Therefore, any condition that decrease the availability of ascorbic acid precursors like glucose and galactose, may result in insufficient synthesis of ascorbic acid. High producing dairy cows may be predisposed to subclinical ascorbic acid deficiency due to the elevated demand for glucose to lactose synthesis by mammary gland. The purpose of this study was to determine the effects of stage of lactation and number of lactations on plasma ascorbic acid concentration, and to establish the association between plasma ascorbic acid level and glucose, insulin, non-esterified fatty acids (NEFA), beta-hydroxybutyrate (BHBA), aspartate-amino transferase (AST), milk somatic cell count (SCC), milk yield and body condition score in dairy cows. One hundred and ninety three dairy cows (153 lactating and 40 dry cows) from 3 different herds were used in this study. Animals were randomly selected, and assigned to 5 groups according the stage of lactation (stage 1: 1-28 days; stage 2: 29-56 days; stage 3: 57-140 days; stage 4: 141-280 days and stage 5: dry cows) and the number of lactation (primiparous or multiparous). Blood samples were taken for ascorbic acid determination by HPLC technique. Statistical analysis was performed using the SAS program. Statistical significance was declared at the 5% level. Average plasma ascorbic acid concentration (mg/L) for Group 1 to 5 were 2.67; 2.60; 2.46; 2.63 and 2.60, respectively, and 2.63 and 2.52 for primiparous and multiparous cows. A negative correlation was observed between ascorbic acid and both glucose and NEFAs and a positive correlation between ascorbic acid and milk yield. No correlation was found between ascorbic acid and other parameters. Results of this study demonstrated that plasma ascorbic acid concentration did not change in response to stage of lactation and number of lactations and eventhough plasma ascorbic acid was correlated to glucose, NEFAs and milk yield, it was not possible to identify the factor that determine ascorbic acid variability in dairy cows.