Submitted by Alisson Mota (alisson.davidbeckam@gmail.com) on 2015-07-22T18:33:12Z No. of bitstreams: 1 Tese - Arlena Maria Guimarães Gato.pdf: 2067444 bytes, checksum: a858fc3c2c47508ee175666940ad0251 (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2015-07-23T14:23:02Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Tese - Arlena Maria Guimarães Gato.pdf: 2067444 bytes, checksum: a858fc3c2c47508ee175666940ad0251 (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2015-07-23T14:26:09Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Tese - Arlena Maria Guimarães Gato.pdf: 2067444 bytes, checksum: a858fc3c2c47508ee175666940ad0251 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-07-23T14:26:09Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese - Arlena Maria Guimarães Gato.pdf: 2067444 bytes, checksum: a858fc3c2c47508ee175666940ad0251 (MD5) Previous issue date: 2009-12-10 / SUFRAMA - Superintendência da Zona Franca de Manaus / The flowers and ornamental plants cultivation stands out as an important agronomical activity. But despite the economical and market potential of these regional native species: helicônia, bastão, sorvetão and other plants, is necessary more basic studies about the use of advanced techniques in getting propagated material with quality assurance and good phytosanitary aspect. The objective of this study was to obtain plantlets from floral apices of Heliconia rauliniana and embryos rescue of H. marginata, identifies, inoculation of bacterial isolates and evaluate the effect of these microorganisms in the development of micropropagated plants. Established the plants micropropagation process, it was isolated from matrices root, bacterial isolates and, according to the classification criteria of activity levels of nitrogen biological fixation, phosphate solubilisation and auxin production, it was selected six Heliconia rauliniana isolates and eight of Heliconia marginata. The first experiment were inoculated in in vitro plants of H. rauliniana, the B4, B5, B8, B13, B16 and B18 bacterial isolates and on H. marginata micropropagated plants, the B1, B2, B4, B6, B7, B10, B12, B14 and B16 isolates and, then transferred to plastic boxes containing sterilized substrate Plantmax (Horticulture) and maintained under greenhouse. After 60 days of inoculation, it was realized the evaluation of root growth promotion, selecting the three isolates that showed the best results: B18, B5 and B13 (H. rauliniana) and B7, B6 and B10 (H. marginata). In the second experiment we used the B18, B5, B13 and B6, B7, B10 selected in the first experiment and inoculated in 60 plants, distributed on five treatments: control, B18, B5 and B13, cocktail x plant and control, B6, B7, B10, cocktail x plant with 12 plants per treatment. The results presented after 60 days, don’t were significant on the level of 0.05% and one good faith coefficient of 95% (ANOVA) for root growth promotion, number of leaves, plant height, fresh weight and dry weight. The plants survive was 83.3%. For microorganisms identify, it was used the analysis of the fragment about 800 bp of the 16S rDNA (Primer 27f). The sequencial analysis via Blast showed three bacterial groups: Burkholderia, Ralstonia e Enterobacteriaceae (Pantoea/Erwinia). / O cultivo de flores e plantas ornamentais tropicais destaca-se como importante atividade agrícola. Mas, apesar das potencialidades econômicas e de mercado dessas espécies nativas da região: helicônia, bastão, sorvetão e outras, são necessários mais estudos básicos sobre a utilização de técnicas avançadas na obtenção de material de propagação com garantia de qualidade e bom aspecto fitossanitário. O objetivo deste trabalho foi obter mudas micropropagadas a partir de ápice floral de Heliconia rauliniana e de resgates de embriões de H. marginata, identificação, inoculação dos isolados de bactérias e avaliar o efeito desses microrganismos no desenvolvimento das plantas micropropagadas. Estabelecido o processo de micropropagação das plantas foram isolados das raízes das matrizes, isolados bacterianos e, de acordo com os critérios de classificação dos níveis de atividades em fixação biológica de nitrogênio, solubilização de fosfato e produção de auxina, foram selecionados seis isolados da Heliconia rauliniana e oito da Heliconia marginata. No primeiro experimento, foram inoculados nas plantas micropropagadas de H. rauliniana, os isolados bacterianos B4; B5 (Enterobacter); B8; B13 (Ralstonia); B16; B18 (Enterobacter) e nas plantas micropropagadas de H. marginata, os isolados B1; B2; B4; B6 (Enterobacter); B7 (Enterobacter); B10 (Burkholderia); B12; B14 e; B16 e, posteriormente transferidas para caixas plásticas contendo substrato esterilizado PlantMax (Horticultura) e mantidas em casa de vegetação. Após 60 dias de inoculação foi realizada a avaliação de promoção de crescimento de raiz, selecionando-se os três isolados que apresentaram os melhores resultados por espécie: Heliconia rauliniana, Enterobacteriaceae (Pantoea/Erwinia), B18 e B5 Enterobacteriaceae (Pantoea/Erwinia e B13 (Ralstonia) e Heliconia marginata B7 Entereobacteriaceae (Pantoea/Erwinia), B6 Entereobacteriaceae (Pantoea/Erwinia) e B10 Burkholderia. No segundo experimento foram utilizados os isolados bacterianos B18 Enterobacteriaceae (Pantoea/Erwinia): B5 Enterobacteriaceae (Pantoea/Erwinia, B13 Ralstonia e B6, Entereobacteriaceae (Pantoea/Erwinia), B7, Entereobacteriaceae (Pantoea/Erwinia), B10, Burkholdeia selecionados no primeiro experimento e inoculados em 60 plantas, distribuídas em cinco tratamentos: controle, B18 Entereobacteriaceae (Pantoea/Erwinia: B5 Entereobacteriaceae (Pantoea/Erwinia e B13 Ralstonia, coquetel x planta e controle, B6 Entereobacteriaceae (Pantoea/Erwinia), B7 Entereobacteriaceae (Pantoea/Erwinia), B10 (Burkholderia), coquetel x planta com 12 plantas por tratamento. Os resultados apresentados após 60 dias, não foram significativos a nível de 0,05 % e um coeficiente de confiança de 95 % (A NOVA) para promoção de crescimento de raiz, número de folhas, altura de planta, peso fresco e peso seco. A sobrevivência das plantas foi de 83,3 %. Para identificação dos microrganismos foi usado o seqüenciamento de fragmento de aproximadamente 800 pb do gene 16S rDNA (“primer 27f). A análise das sequencias via Blast mostrou três grupos de bactéria: Burkholderia, Ralstonia e Enterobacteriaceae (Pantoea/Erwinia).

O objetivo deste estudo foi determinar o papel do GDF-9 sozinho ou em combinaÃÃo com FSH sobre a viabilidade, crescimento e expressÃo do RNAm para PCNA, HAS 1, HAS 2, versican e perlecan em folÃculos secundÃrios bovinos cultivados in vitro. Para estudos in vitro, folÃculos secundÃrios bovinos foram isolados e cultivados por doze dias, na presenÃa de MEM sozinho ou suplementado com GDF-9 (200 ng/mL), FSH (D0-D6: 100 ng/mL e de D7-D12: 500 ng/mL) ou ambos. DiÃmetro folicular, viabilidade e formaÃÃo de antro foram avaliados durante o cultivo. Para avaliar os nÃveis de RNAm para PCNA, HAS 1, HAS 2, perlecan e versican em folÃculos apÃs 12 dias de cultivo, o RNA total foi extraÃdo e o cDNA foi sintetizado. Os nÃveis de RNAm foram quantificados por PCR em tempo real. O teste Kruskal-Wallis foi usado para comparar o diÃmetro folicular. O teste Qui-quadrado foi utilizado para comparar a porcentagem de viabilidade e formaÃÃo de antro de folÃculos apÃs o cultivo in vitro (p<0,05), enquanto ANOVA seguido pelo teste de Tukey foram utilizados para avaliar os dados de expressÃo do RNAm nos folÃculos cultivados (p<0,05). Os resultados mostram que apÃs 6 dias de cultivo, FSH sozinho ou associado com GDF-9 aumentaram o diÃmetro folicular em relaÃÃo ao meio controle. AlÃm disso, apÃs 12 dias de cultivo, FSH promoveu um aumento no diÃmetro folicular, enquanto a associaÃÃo de FSH com GDF-9 reduziu significativamente o diÃmetro folicular quando comparado com folÃculos cultivados em MEM acrescido de FSH. AlÃm disso, FSH e GDF-9 aumentaram a formaÃÃo de antro apÃs 12 dias de cultivo (P<0,05). Apesar de GDF-9 ter reduzido significativamente os nÃveis de RNA para HAS 1 quando comparado ao MEM, esse fator aumentou os nÃveis de versican e perlecan. AlÃm disso, a presenÃa de ambos FSH e GDF-9 aumentaram os nÃveis de RNAm para HAS 2, porÃm, reduziu os nÃveis de RNAm para PCNA. AlÃm disso, FSH tambÃm atua reduzindo os nÃveis de RNAm para o PCNA. Em conclusÃo, FSH e/ou GDF-9 promovem o crescimento folicular e formaÃÃo de antro, e GDF-9 estimula a expressÃo de versican e perlecan e interage positivamente com FSH para o aumento da expressÃo de HAS 2. / The aim of this study was to determine the role of GDF-9 alone or in combination with FSH on growth, viability and on the mRNA expression of PCNA, HAS 1, HAS 2, versican and perlecan in bovine secondary follicles cultured in vitro. For in vitro studies, bovine secondary follicles were isolated and cultured for twelve days in the presence of MEM alone or supplemented with GDF-9 (200 ng/mL), FSH (D0-D6: 100 ng/mL and of D7-D12: 500 ng/mL) or both. Follicular diameter, viability and antrum formation were evaluated during culture. To evaluate the mRNA levels for PCNA, perlecan, versican, HAS 1 and 2 in follicles after 12 days of culture, total RNA was extracted and cDNA was synthesized. The levels of mRNA were quantified by real time PCR. Kruskal-Wallis test were used to compare the follicular diameter. The chi-square test was used to compare the percentage of viability and antrum formation of follicles after in vitro culture (p<0.05), whereas ANOVA followed by Tukey's test were used to evaluate the mRNA expression data in cultured follicles (p<0.05). The results show that after 6 days of culture, FSH alone or associated with GDF-9 increased follicular diameter in relation to control medium. Moreover, after 12 days of culture, FSH promoted an increase in follicular diameter, while the association of FSH with GDF-9 significantly reduced follicular diameter when compared with follicles cultured in MEM plus FSH. Furthermore, FSH and GDF-9 increased the antrum formation after 12 days of culture (P<0.05). Despite GDF-9 had significantly reduced the levels of mRNA for HAS 1 when compared to MEM, this factor has increased the levels of versican and perlecan. In addition, the presence of both FSH and GDF-9 increased mRNA levels for HAS 2, but reduced level those for PCNA. In addition, FSH also acts by reducing mRNA levels for PCNA. In conclusion, FSH and/or GDF-9 promotes the follicular growth and antrum formation, and GDF-9 stimulates the expression of versican and perlecan and interact positively with FSH to the increased expression of HAS 2

Submitted by Cibele Nogueira (cibelenogueira@ufgd.edu.br) on 2016-05-18T19:15:37Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) GISELESOUSA.pdf: 887544 bytes, checksum: 13afd905cf042644a131924f5ef22690 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-05-18T19:15:37Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) GISELESOUSA.pdf: 887544 bytes, checksum: 13afd905cf042644a131924f5ef22690 (MD5) Previous issue date: 2013-11-22 / In vitro propagation of orchids has been used for the production of commercially important plants and for the conservation of endangered species, while the storage of orchid seeds preserves genetic variability. Objectives of this research were: 1 – to study the effect of the concentration of 6-benzylaminopurine (BAP) (0.0, 0.1, 1.0 or 2.0 mg L-1), fruit maturation (60, 90, 120, 150, 180 or 210 days after pollination - DAP) and the three culture time (15, 30 or 45 days) in the asymbiotic seed germination of Brassavola tuberculata, from three types of pollination (hand self-pollination, hand cross-pollination or natural pollination); 2 - evaluate the initial in vitro stages of development of B. tuberculata, in response to the use of 6- benzylaminopurine (BAP) (0.0 , 0.1, 1.0 or 2.0 mg L- 1), fruit maturation (60, 90, 120, 150, 180 or 210 days after pollination - DAP) and the three types of pollination (hand self-pollination, hand cross-pollination or natural pollination); 3 - evaluate the storage time and agar concentrations in vitro germination of B. tuberculata and 4 - to evaluate the effect of different concentrations of MS medium, the initial growth of B. tuberculata. The research was performed at the Laboratory for in vitro cultivation of the Faculty of Agricultural Sciences (FCA) of the Federal University of Grande Dourados (UFGD), during the period from august 2010 to 2013. Were used for the research of germination and development in vitro, seeds of B. tuberculata from different types of pollination and ages of maturation, and for the growth, plants 180 days after sowing. The cultures were kept in a growth room at 25±2ºC and photoperiod of 12h, in completely randomized design. Being evaluated germination percentage; number of protocorm, protocorm percentage at different stages of development and number of dead protocorms; survival percentage, number of tillers and roots, length of leaf and greater root mass fresh plant. Every variables and vegetal attributes were submitted to variance analysis and of the regression. The hand self-pollination produced seeds that did not germinate in vitro, whereas the seeds produced by hand crosspollination or natural pollination, produced seeds that germinated in vitro, when the fruits were harvested after 150 DAP. Germination percentages above 90% were recorded in fruits from the hand cross-pollination or natural pollination, harvested at 210 DAP and cultured for more than 30 days. The germination of B. tuberculata is more linked to the maturation of the fruit, since there was little influence of exogenous supply of cytokinin on seed germination in vitro. The number of protocorm of hand cross-pollination and natural pollination is higher in the fruits collected at 180 DAP. The percentage of protocorms in stage 1 (% P1) formed by hand cross-pollination and natural pollination is higher in fruit collected at 150 DAP. The percentage of protocorms in stage 4 (%P4) is higher in fruits collected at 150 DAP derived from natural pollination, and at 210 DAP, those derived from hand cross-pollination. The use of liquid and solid media favors the germination of B. tuberculata. Seeds of B. tuberculata stored for 90 days resulted in germination above 70%. The plants of B. tuberculata, have higher initial growth when cultured on MS medium with concentration between 70 and 75 %. Use of MS 50% medium is promising when the objective is the in vitro multiplications of B. tuberculata. / A propagação in vitro de orquídeas tem sido utilizada para produção de plantas comercialmente importantes e para a conservação de espécies ameaçadas de extinção, enquanto que o armazenamento de sementes de orquídeas preserva a variabilidade genética. Foram objetivos desta pesquisa 1 – estudar o efeito da concentração de 6-Benzilaminopurina (BAP) (0,0; 0,1; 1,0 ou 2,0 mg L-1), da maturação dos frutos (60, 90, 120, 150, 180 ou 210 dias após polinização - DAP) e de três tempos de cultivo (15, 30 ou 45 dias) na germinação assimbiótica de sementes de Brassavola. tuberculata Hook., oriundas de três tipos de polinização (autopolinização manual, polinização cruzada manual ou polinização natural); 2 - avaliar os estádios de desenvolvimento inicial in vitro de B. tuberculata, em resposta à utilização de 6-Benzilaminopurina (BAP) (0,0; 0,1; 1,0 ou 2,0 mg L-1), da maturação dos frutos (60, 90, 120, 150, 180 ou 210 dias após polinização - DAP) e de três tipo de polinização (autopolinização manual, polinização cruzada manual ou polinização natural); 3 - avaliar o tempo de armazenamento e as concentrações de ágar na germinação in vitro de B. tuberculata e 4 – avaliar o efeito de diferentes concentrações do meio MS, no crescimento inicial de plantas de B. tuberculata. Os trabalhos foram realizados no Laboratório de cultivo in vitro da Faculdade de Ciências Agrárias (FCA) da Universidade Federal da Grande Dourados (UFGD), durante o período de agosto de 2010 a agosto de 2013. Foram utilizadas para os estudos de germinação e desenvolvimento in vitro, sementes de B. tuberculata provenientes de diferentes tipos de polinização e épocas de maturação, e para o crescimento, plantas com 180 dias após a semeadura. As culturas foram acondicionadas em sala de crescimento, com temperatura média 25±2ºC, fotoperíodo de 12h, em delineamento experimental inteiramente casualizado. Sendo avaliados porcentagem de germinação; número de protocormos, porcentagem de protocormos em diferentes estádios de desenvolvimento e número de protocormos mortos; porcentagem de sobrevivência, número de perfilhos e de raízes, comprimento da maior folha e da maior raiz, massa fresca da planta. Todas as variáveis e atributos vegetais foram submetidos às análises de variância e de regressão. A autopolinização manual produziu sementes que não germinaram in vitro, enquanto que as sementes produzidas por polinização cruzada manual ou polinização natural produziram sementes que germinaram in vitro quando os frutos foram colhidos após 150 DAP. Porcentagem de germinação superior a 90% foram registradas em frutos oriundos de polinização cruzada manual e polinização natural, colhidos aos 210 DAP e cultivados por período superior a 30 dias. A germinação de B. tuberculata está mais vinculada ao estádio de maturação dos frutos uma vez que houve pouca influência do fornecimento exógeno de citocinina sobre a sua germinação in vitro. O número de protocormos da polinização cruzada manual e da polinização natural é maior em frutos coletados aos 180 DAP. A porcentagem de protocormos em estádio 1(%P1) formada pela polinização cruzada manual e polinização natural é maior em frutos coletados aos 150 DAP. A porcentagem de protocormos em estádio 4 (%P4) é maior em frutos coletados aos 150 DAP oriundos de polinização natural e, aos 210 DAP, naqueles oriundos de polinização cruzada manual. O emprego dos meios líquido e sólido favorecem a germinação de B. tuberculata. Sementes de B. tuberculata armazenadas por 90 dias apresentam germinação acima de 70%. As plantas de B. tuberculata apresentam maior crescimento inicial quando cultivadas em meio MS com concentração entre 70 e 75%. A utilização do meio MS 50% é promissor quando o objetivo for a multiplicação in vitro de B. tuberculata.

Made available in DSpace on 2014-08-20T13:59:09Z (GMT). No. of bitstreams: 1 dissertacao_marcia_vaz_ribeiro.pdf: 3498598 bytes, checksum: 7e2417006373e96bad648e6cfe508c8a (MD5) Previous issue date: 2008-07-08 / Maytenus ilicifolia Mart. ex Reis., popularly known as espinheira-santa, is an autochthonous specie belonging to Celastraceae family. Presents high medicinal value for treatment of ulcers, chronicle gastritis, dyspepsia and indigestion. Due its medicinal importance, have been an increase of extractivism in natural populations. So, this specie is priority for conservation, to avoid the risk of genetic erosion. The tissue culture is important because allows massive production of plants free from pathogenic agents and genetically uniforms. The in vitro establishment is the first phase of the micro propagation process, where the plant material used can vary according to the finality of the work. Studies evidence that genetic flux by seeds or pollen grains, and also the environment, mainly the habitats, has the potential to improve the genetic variability of populations from one locality. The objective of this work was to establish and evaluate the capacity of in vitro multiplication of M. ilicifolia plantlet, and also analyze by AFLP the genetic variability of 20 accessions collected in different localities from Rio Grande do Sul State. For the in vitro establishment previously disinfected seeds were inoculated in three different media: MS; MS + Active Coal (1g L-1) and MS + Vermiculite. The variables analyzed were plantlet height and root length. For the molecular analysis it was tested eight primers combinations. Values of genetic similarities were calculated by Simple-matching coefficient and used to generate a similarity dendrograma by UPGMA method. The analyzed variables showed significant differences. The greater media for plantlet height (5.06 cm) and root x length (3.4 cm) were obtained in the MS medium with Vermiculite. The morphological aspect of the roots must be considered, because the roots from plantlets germinated in MS medium was very fibrous and without root hairs, differently from plantlets germinated the MS medium + Vermiculite, were presented roots adequate for absorption of nutrients from the medium culture. The eight primers generate 455 eletrophoretical profiles, obtaining 100% of polymorphism. The primers E-ACC/M-CAA, E-ACG/M-CTA and E-ACG/M-CTC presented the greater number of eletrophoretical profile, 71 each, totalizing 46.80% of the total polymorphism. Dendrograma analysis showed a high coefficient of correlation (r = 0.94), demonstrating high representativity from the data of genetic similarity and those of groupings. By AMOVA it was verified that 89.33% of the total variability happened among individuals from the same population. Based on the discussed can be concluded that the more adequate medium for the in vitro establishment is the MS medium added of Vermiculite and AFLP molecular markers allow the characterization and genetic variability estimative of M. ilicifolia populations. / Maytenus ilicifolia Mart. ex Reis., popularmente conhecida como espinheira-santa, é uma espécie autóctone pertencente à família Celastraceae que apresenta alto valor medicinal para o tratamento de úlceras, gastrites crônicas, dispepsias e indigestão. Devido a sua importância medicinal, houve um aumento no extrativismo em populações naturais, tornando-a prioritária para a conservação, a fim de evitar o risco de erosão genética. A cultura de tecidos tem importante papel por proporcionar produção massiva de plantas, livres de agentes patogênicos e geneticamente uniformes, sendo o estabelecimento in vitro a primeira fase do processo de micropropagação, onde o material vegetal utilizado pode variar de acordo com a finalidade do estudo. Estudos evidenciam que o fluxo gênico por sementes ou dispersão de grãos de pólen, bem como o ambiente, principalmente o habitat, tem o potencial de aumentar a variabilidade genética de populações de uma mesma localidade. O objetivo deste trabalho foi estabelecer e avaliar a capacidade de multiplicação in vitro de plântulas de M. ilicifolia, bem como, analisar a variabilidade genética de 20 acessos coletados em diferentes localidades no estado do Rio Grande do Sul, através da técnica AFLP. Para o estabelecimento in vitro, sementes previamente desinfestadas foram inoculadas em três meios diferentes: MS; MS + Carvão Ativado (1g L-1) e MS + Vermiculita. As variáveis analisadas foram altura das plântulas e comprimento de raiz. Para a viii análise molecular foram testadas oito combinações de primers AFLP. Os valores de similaridade genética foram calculados pelo Simple-matching coefficient e utilizados para gerar o dendrograma de similaridade pelo método UPGMA. As variáveis analisadas apresentaram diferença significativa, onde as maiores médias para altura das plântulas (5,06 cm) e comprimento de raiz (3,4 cm), foram obtidas no meio MS acrescido de Vermiculita. Observou-se que o aspecto morfológico das raízes deve ser considerado, pois as raízes das plântulas germinadas em meio MS apresentaram-se bastante fibrosas e com ausência de pêlos radiculares, diferentemente das plântulas germinadas em meio MS + Vermiculita, onde apresentaram raízes adequadas para a absorção de nutrientes do meio de cultura. As oito combinações de primers geraram 455 perfis eletroforéticos, com 100% de polimorfismo. Os primers E-ACC/M-CAA, E-ACG/MCTA, E-ACG/M-CTC apresentaram o maior número de perfis eletroforéticos, 71 cada, totalizando 46,80% do polimorfismo total. Na análise do dendrograma foi observado um alto coeficiente de correlação (r = 0,94), demonstrando elevada representatividade dos dados de similaridade genética e os de agrupamento. Pela AMOVA verificou-se que 89,33% da variabilidade total ocorreu entre indivíduos da mesma população. Com base no exposto conclui-se que o meio mais adequado para o estabelecimento in vitro é o meio MS acrescido de Vermiculita e marcadores moleculares tipo AFLP permitem a caracterização e a estimativa da variabilidade genética de populações de M. ilicifolia.

Submitted by Samira Ramos (samira.ramos@unifenas.br) on 2018-04-25T21:05:10Z No. of bitstreams: 1 TAIS APARECIDA PATROCINIO.pdf: 726977 bytes, checksum: 8cef7ddcd6970bf3d2ccd912eb038060 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-04-25T21:05:10Z (GMT). No. of bitstreams: 1 TAIS APARECIDA PATROCINIO.pdf: 726977 bytes, checksum: 8cef7ddcd6970bf3d2ccd912eb038060 (MD5) Previous issue date: 2017-02-20 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Minas Gerais - FAPEMIG / This study evaluated the effect of AR33 (patent-pending formula), a resveratrol analogue, in the culture of in vitro fertilized embryos. Cumulus-oocyte complexes (COCs) recovered from bovine ovaries collected at the slaughterhouse were matured in vitro for 24 h and fertilized in vitro for 20 h, both at 38.8 °C under 5% CO2 in air and high humidity. Probably partially nude zygotes were randomly distributed in two experiments. Experiment 1: 0 (control, n = 347), 0.1 μM (n = 337), 0.5 μM (n = 277) and 2.5 μM AR33 (n = 343) with 2.5% fetal bovine serum (FBS) and experiment 2: 2.5 μM AR33 (n = 381), 0.5 μM resveratrol (n = 381), both with 2.5% SFB and 0 (control, n = 341) with 10% FBS. The base medium for all treatments was SOFaa and incubation conditions were 38.8 °C under 5% CO2 in air and high humidity. Half of the culture medium was fed on days 3 and 5 after fertilization. The cleavage rate was evaluated on day 3 and the blastocyst rate (B1) on days 7 and 8 post-fertilization. At day 8, the blastocysts were fixed and subsequently submitted to analysis of the number of cells and apoptotic index. Cleavage and blastocyst rates were analyzed by logistic regression models (Proc Logistic), and the number of cells and apoptotic index by mixed linear models (Proc Mixed) using the SAS statistical package. In experiment 1, the cleavage rate (P <0.05) was higher at 2.5 μM (69.0 ± 4.4%) than at 0, 0.1 and 0.5 μM AR33 (62.1 ± 2.0%, 60.7 ± 5.9% and 56.7 ± 5.8%, respectively). At day 7, the Bl rate was similar (P> 0.05) between 0.1, 0.5 and 2.5 μM (18.1 ± 5.4%, 17.5 ± 2.9% and 19.4 ± 3.3%, respectively) and all were higher (P <0.05) 05) at 0 μM AR33 (12.4 ± 2.5%). At day 8, only 0.1 and 2.5 μM (21.0 ± 5.0% and 24.6 ± 3.3%) were higher than 0 μM AR33 (15.2 ± 2.5%). There was no difference (P> 0.05) between treatments regarding total cell number (TC) and internal cell mass (MCI); However, the apoptotic index in CT and MCI was higher for 0 and 2.5 μM (11.36 and 9.89%, 20.52 and 15.85%) than in 0.1 and 0.5 μM AR33 (4.66 and 4.82%, 8.47 and 10.92%). In the experiment 2 the cleavage rate (P <0.05) was higher in the control (80.8 ± 3.4%) than in the treatment with 0.5 μM resveratrol (76.4 ± 3.6%), but similar to 2.5 μM AR33 (76.9 ± 1.2%). There were no differences (P> 0.05) for the Bl rate on days 7 and 8. The apoptotic index in the CT and MCI was higher in the control (8.9 and 14.9%, respectively) than in the 2.5 μM AR33 and 0.5 μM resveratrol (6.4 and 5.5%, 11.1 and 8.8%, respectively). In conclusion, resveratrol and its synthetic analogue tested in this study improve bovine embryonic development in culture medium supplemented with 2.5% FBS under 5% CO2 in air. / Este estudo avaliou o efeito de AR33 (fórmula com patente-pendente), um análogo de resveratrol, no cultivo de embriões fecundados in vitro. Complexos cumulus-oócitos (COCs) recuperados de ovários bovinos coletados no matadouro, foram maturados in vitro durante 24 h e fertilizados in vitro por 20 h, ambos em 38.8 °C sob 5% de CO2 em ar e alta umidade. Prováveis zigotos parcialmente desnudos foram distribuídos aleatoriamente em dois experimentos. Experimento 1: 0 (controle, n=347), 0.1 µM (n=337), 0.5 µM (n=277) e 2.5 µM de AR33 (n=343) com 2,5% de soro fetal bovino (SFB), e experimento 2: 2.5 µM de AR33 (n=381), 0.5 µM de resveratrol (n=381), ambos com 2,5% SFB e 0 (controle, n=341) com 10% SFB. O meio base para todos os tratamentos foi SOFaa e as condições de incubação foram de 38.8 °C sob 5% de CO2 em ar e alta umidade. Metade do meio de cultura foi renovado (feeding) nos dias 3 e 5 após a fertilização. A taxa de clivagem foi avaliada no dia 3 e a taxa de blastocisto (Bl) nos dias 7 e 8 pós-fecundação. No dia 8, os blastocistos foram fixados e posteriormente submetidos a análise do número de células e índice apoptótico. As taxas de clivagem e de blastocistos foram analisadas por modelos de regressão logística (Proc Logistic), e o número de células e índice apoptótico por modelos lineares mistos (Proc Mixed) usando o pacote estatístico SAS. No experimento 1, a taxa de clivagem (P<0.05) foi maior para 2.5 µM (69.0±4.4%) do que para 0, 0.1 e 0.5 µM de AR33 (62.1±2.0%, 60.7±5.9% e 56.7±5.8%, respectivamente). No dia 7, a taxa de Bl foi semelhante (P>0.05) entre 0.1, 0.5 e 2.5 µM (18.1±5.4%, 17.5±2.9% e 19.4±3.3%, respectivamente) e todos eles foram superiores (P<0,05) à 0 µM AR33 (12.4±2.5%). No dia 8, apenas 0.1 e 2.5 µM (21.0±5.0% e 24.6±3.3%) foram maiores do que 0 µM AR33 (15.2±2.5%). Não houve diferença (P>0,05) entre tratamentos quanto ao número de células totais (CT) e da massa celular interna (MCI); contudo, o índice apoptótico nas CT e na MCI foram maiores para 0 e 2.5 µM (11.36 e 9.89%; 20.52 e 15.85%) do que em 0.1 e 0.5 µM AR33 (4.66 e 4.82%; 8.47 e 10.92%). No experimento 2 a taxa de clivagem (P<0,05) foi maior no controle (80.8±3.4%) do que no tratamento com 0.5 µM resveratrol (76.4±3.6%), e este último semelhante à 2.5 µM AR33 (76.9±1.2%). Não houve diferenças (P>0,05) para a taxa de Bl nos dias 7 e 8. O índice apoptótico nas CT e MCI foi maior no controle (8.9 e 14.9%, respectivamente) do que para 2.5 µM AR33 e 0.5 µM resveratrol (6.4 e 5.5%; 11.1 e 8.8%, respectivamente). Em conclusão, o resveratrol e o seu análogo sintético testado neste estudo melhoram o desenvolvimento embrionário bovino em meio de cultura suplementado com 2,5% SFB sob 5% de CO2 em ar.

Orientador: Fernanda da Cruz Landim-Alvarenga / Banca: Sony Dimas Bicudo / Banca: José Antonio Visintin / Resumo: O primeiro sucesso na clonagem de eqüídeos através do uso de transferência nuclear foi relatado em maio de 2003 após o nascimento de uma mula clonada a partir de células fetais. Acredita-se que a utilização de células diplóides em fase do ciclo celular G0 ou G1 facilite a coordenação entre o ciclo celular e a reprogramação nuclear após a transferência de núcleo. Sendo assim, este experimento objetivou estudar o comportamento de fibroblastos de eqüinos adultos em cultura, analisando o estado do ciclo celular e a viabilidade das células em cultivo pré- e pós-descongelação. Fragmentos de pele de 6 eqüinos adultos, sendo 3 machos e 3 fêmeas, foram divididos em pedaços de aproximadamente 1mm3 e acondicionados (10 fragmentos/garrafa) no fundo de duas garrafas de cultivo (25cm2) umedecidas com 1mL SFB. As garrafas foram inclinadas para a posição vertical e adicionado 5ml de meio DMEM alta glicose + 10% SFB, 100UI/mL Penicilina / 100æg/mL Estreptomicina e 3,0æg/mL Anfotericina B. Após 30 minutos em estufa com 5% CO2 em ar, as garrafas foram dispostas em posição horizontal, para que o meio de cultivo entrasse em contato com os fragmentos teciduais. Todas as garrafas permaneceram por sete dias em estufa com 5% CO2 em ar até o início do crescimento celular. Com 70% de confluência, foi realizada a tripsinização e a primeira passagem. O mesmo procedimento foi repetido para a segunda passagem. Para os grupos de privação de soro (0,5% de SFB) foram produzidas garrafas de cultivo em duplicata para a análise da viabilidade e do ciclo celular nos períodos de 24, 48, 72, 96, 120, 144 e 168 horas de cultivo. Para os grupos de confluência foram produzidas duas garrafas de cultivo para a análise da viabilidade e do ciclo celular no período em que o tapete celular atingisse a confluência...(Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The first success in equine cloning, using nuclear transfer, was reported in May of the 2003 after the birth of a cloned mule obtained from fetal cells. Nowadays there is an agreement, in the literature, that diploid cells in phase G0 or G1 of the cell cycle facilitate coordination between the cell cycle and the nuclear reprogramming after the nuclear transfer. This experiment aimed to study the behavior of equine fibroblasts in culture though the analysis of the cellular cycle and the viability of cells pre- and post-freezing. Skin fragments were obtained from 6 adult horses (3 females and 3 males) and divided in pieces of about 1 mm3. For culture, the bottoms of two culture bottles were moistened with 1 mL of FCS, 10 fragments of skin were deposited, and 5 ml of DMEM high glucose + 10% FCS, 100 IU/mL penicillin, 100 g/mL streptomycin and 3 g/ml amphotericin B were added with the bottles raised vertically. After 30 min incubation in 5% CO2 in air, the bottles were moved to a horizontal position allowing the culture media to make contact with the tissue fragments. All bottles were cultured for 7 days in 5% CO2 in air until the beginning of confluence. The complete culture media was replaced weekly and, at 70% of confluence, trypsinization (ATV Vernese, Adolfo Lutz Institute) and the first passage were performed. Two passages were performed before freezing. For the second passage, the culture and trypsinization were repeated. For cells subjected to serum starvation (0.5% FCS), culture bottles were produced in duplicate for viability and cellular cycle analysis at 24, 48, 72, 96, 120, 144 and 168 hours of culture. For the confluence groups bottles were produced for the analysis of viability and cellular cycle at the moment cells achieved confluence...(Complete abstract, click electronic address below) / Mestre

Nas abordagens biotecnológicas de propagação de plantas, os meios de cultura devem ter uma composição química adequada à essa finalidade permitindo a otimização da produção. Como a bananeira (Musa sp.) é exigente em potássio, a busca do nível adequado desse macronutriente envolve não somente o comprometimento com o nível dos outros nutrientes (balanço iônico), mas também a relação entre eles. Para acompanhar os efeitos fisiológicos das relações de vários teores de K com os outros macro e micronutrientes é que explantes caulinares dos cvs. Nanica e Prata Anã foram cultivados em meio MS modificado em presença de BAP, sacarose, vitaminas, agar, suplementado com 6 diferentes doses de K: 5, 10, 15, 20, 25 e 30 mM, sendo que a dose 20 mM corresponde à concentração de K existente no MS básico, que foi adotado como controle.Foram feitas análises de massa de matéria seca (MMS),macro e micronutrientes na parte aérea, raiz e plântulas inteiras. Ao final do experimento foi determinado o número de plântulas e calculado o valor das relações N/K, K/P, K/Ca, K/Mg, K/Ca+Mg, K/S, K/Cu, K/Fe, K/Mn, K/Zn.Foram também dosados os teores da diamina putrescina e de poliaminas, e calculada a relação K/putrescina. Todos os parâmetros foram analisados segundo um delineamento experimental inteiramente casualizado. As plântulas que se desenvolveram em baixas concentrações de K apresentaram sintomas visuais de deficiência, como clorose e necrose das folhas mais velhas. Os cultivares apresentaram diferenças quantitativas entre si tanto em relação aos valores de MMS como em número de plântulas, relacionados às doses de K presentes nos meios de cultura. Em ambos os cultivares foi observada uma relação direta entre o desenvolvimento das plântulas e as concentrações de K com otimização ao redor de K 15 a 20 mM. Os teores de putrescina e de poliaminas foram maiores nos níveis mais baixos de K, atingindo o máximo na dose de K 5 mM. Em K 20 mM ocorreram maiores valores de MMS e em K 15 mM maior número de plântulas regeneradas. O íon K em geral foi mais intensamente absorvido do que os outros macro e micronutrientes sendo que estes tiveram sua absorção diminuída devido provavelmente a um efeito de diluição de seus teores pelo crescimento das plântulas in vitro. Esses resultados, inclusive os obtidos nas demais relações entre K e os outros macro e micronutrientes, as quais sempre foram crescentes (de K 5 a 30 mM), corroboram a essencialidade desse nutriente para os cvs. Nanica e Prata Anã. / Potassium is required in high dosis by the banana plant (Musa sp.) and interacts with other macro and micronutrients present in the medium in which banana tissues are maintained in vitro condition,with consequent modifications in the plant cell metabolism, mainly in nitrogen compounds, such as proteins and amino acids. When K is present in concentrations lower than the required, diamines such as putrescine, and polyamines, such as spermidine and spermine are formed. In order to establish the best dosis of K and follow the physiological consequences of the relationships N/K, K/P, K/Ca, K/Mg, K/Ca+Mg, K/S, K/Cu, K/Fe, K/Mn, K/Zn and K/putrescine, shoot apex of two banana cvs. Nanica and Prata Anã were maintained in asseptic conditions in modified MS media in the presence of 6 different dosis of K: 5, 10, 15, 20, 25 and 30 mM, K 20 mM being the K concentration in basic MS medium, and then transferred to rooting media with the same different K dosis. Dry wt., macro and micronutrients were measured in the shoots, roots and the intire plantlet, and number of plantlets produced determined, the data being analysed estatistically. Putrescine and polyamines were also determined. Visual symptoms of K deficiency such as clorosis and necrosis in the older leaves of all plantlets under low dosis of K were observed. The levels of putrescine and polyamines increased as K decreased in the medium, reaching the maximum value at K 5 mM, both cultivars presenting similar bahavior in relation to the diamine in some K concentrations. Quantitative differences were obtained among the two cultivars pertained to dry wt. values, number of in vitro regenerated banana plantlets and K concentration with optimization around K 15 and 20 mM. In general K absorption was more intense than the other nutrients, the absorption of the later being decreased probably due to a dilution effect of their values as the banana plantlets developed in vitro. These results, including those pertained to the relationships between K and the other nutrients, which always were high (from K 5 to 30 mM), corroborate the importance of potassium ion to the banana cvs. Nanica and Prata Anã.

Sistemas de produção in vitro de embriões mamíferos muitas vezes requerem que o cultivo embrionário seja realizado de forma individualizada. Entretanto, os resultados obtidos com o cultivo in vitro (CIV) individual são inconstantes e, por vezes, inferiores ao CIV em grupo. Entre os sistemas que requerem o CIV individual, a técnica de handmade cloning (HMC) se destaca por produzir embriões sem zona pelúcida que não podem ser cultivados agrupados em protocolos convencionais de CIV. O objetivo deste experimento foi determinar as taxas de desenvolvimento in vitro e in vivo de embriões bovinos clonados pela técnica de HMC e submetidos a três diferentes sistemas de CIV em micropoços (Well of the well – WOW), sendo um industrial, confeccionado em polidimetilsiloxano (PDMS), que visou à padronização da configuração do sistema de CIV. Após 11 replicações, de 3.876 complexos cumuli-oócito bovinos maturados in vitro, 3.437 (88,6%) oócitos apresentaram a extrusão do 1º corpúsculo polar. Após a digestão da zona pelúcida, 2.992 estruturas foram bisseccionadas manualmente, com a produção de 2.288 hemi-citoplastos. Reconstruiram-se 1.011 embriões pela adesão de dois hemi-citoplastos a uma célula somática (célula-tronco mesenquimal bovina de uma fêmea adulta da raça Nelore), dos quais 751 (74,2%) embriões fusionaram após eletrofusão, sendo 715 ativados quimicamente. Os embriões clonados (n=705) foram então alocados aleatoriamente em três grupos experimentais para o CIV: Grupo 1 (G1) – micropoço modificado (WOW-modificado, FELTRIN et al., 2006a); Grupo 2 (G2) – micropoço convencional (WOW-convencional , VATJA et al., 2000); e Grupo 3 (G3) – micropoço – PDMS (WOW-PDMS) . Como grupo controle (FIV, Grupo 4, G4), 594 oócitos foram colocados em maturação, fecundação e cultivo in vitro, em paralelo aos grupos clonados. Os resultados das taxas de clivagem no Dia 2, de blastocisto no Dia 7 e de prenhez no Dia 30 de desenvolvimento foram analisados pelo teste do χ2 com nível de significância de 5%. Não houve diferença significativa quanto à taxa de clivagem nos diferentes grupos. Entretanto, a taxa de blastocisto (BL) no G1 (99/239; 41,4%) foi significativamente superior à observada no G2 (72/232; 31,0%) e no G3 (68/234; 29,1%), sendo estas últimas semelhantes entre si. A taxa de BL do grupo controle (315/594; 53,0%) foi superior aos três grupos experimentais. Finalmente, o desenvolvimento in vivo até o Dia 30 de prenhez não diferiu entre os grupos G1 (7/15; 46,7%), G2 (7/13; 53,9%) e G3 (6/16; 50,0%). O sistema em micropoço modificado promoveu melhores condições de CIV a embriões clonados por HMC, traduzido por maiores taxas de BL, não se refletindo, entretanto, em diferenças no desenvolvimento in vivo subseqüente à transferência para fêmeas receptoras. / In vitro production systems for mammalian embryos quite often require embryos to be cultured individually. However, results obtained after individual embryo in vitro culture (IVC) are frequently inconsistent and inferior to IVC in groups. The Handmade Cloning (HMC) procedure is among the systems that require individual IVC, since zona-free embryos cannot be grouped for culture by standard IVC protocols. The aim of this study was to evaluate the in vitro and in vivo development of bovine embryos cloned by HMC, after the IVC in three distinct microwell arrangements, including an industrial chip, manufactured in polydimethylsiloxane (PDMS), which aimed to standardize the pattern of the IVC system. After 11 replications, 3,437 (88.6%) oocytes were selected based on the extrusion of the first polar body, out of 3,876 in vitro-matured bovine cumuli-oocyte complexes. Following zona pellucida digestion, 2,992 structures were manually bisected, generating 2,288 hemi-cytoplasts. A total of 1,011 embryos were reconstructed by the adhesion of two hemi-cytoplasts to a somatic cell (bovine mesenchymal stem cells from an adult Nelore female), with 751 fusing (74.2%) following electrofusion, and 715 being chemically activated. Cloned embryos (n=705) were then randomly allocated to one of three IVC experimental groups: Group 1 (G1) – modified microwells (FELTRIN et al., 2006a); Group 2 (G2) – conventional microwells (VATJA et al., 2000); and Group 3 (G3) – microwells in PDMS. As control group (IVF, Group 4, G4), 594 oocytes were in vitro-matured, fertilized and cultured in parallel to the cloned groups. Cleavage, blastocyst and pregnancy rates evaluated on Days 2, 7 and 30 of development were analyzed by the χ2 test, for a significance level of 5%. No differences in cleavage rates were observed between groups. However, blastocyst rates in G1 (99/239; 41.4%) were significantly higher than in G2 (72/232; 31.0%) and in G3 (68/234; 29.1%), which did not differ between one another. Blastocyst rates in the IVF control group (315/594; 53.0%) were in turn higher than in all cloned experimental groups. Finally, in vivo development to Day 30 of pregnancy was not different between G1 (7/15; 46.7%), G2 (7/13; 53.9%) and G3 (6/16; 50.0%). In summary, the modified microwell system promoted superior development to the blastocyst stage than both the conventional and the DMPS-based microwell systems, with no impact on the subsequent in vivo development after transfer to female recipients.

Submitted by (lucia.rodrigues@ufrpe.br) on 2017-02-20T14:28:26Z No. of bitstreams: 1 Adriano Marcio Freire da Silva.pdf: 233973 bytes, checksum: 8365664074820b5955fb940c37b47616 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-02-20T14:28:26Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Adriano Marcio Freire da Silva.pdf: 233973 bytes, checksum: 8365664074820b5955fb940c37b47616 (MD5) Previous issue date: 2009-02-26 / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / Bacterial canker (Xanthomonas campestris pv. viticola) (Xcv) caused great damage to the grapevine cultivation in the Vale do Submédio São Francisco. In the first paper techniques of in vitro tissue culture in modified Galzy medium (MGM) were studied in order to eliminate Xcv from ‘Red Globe’ grapevine plants. The first experiment aimed to select the ideal length of apex and axillary’s buds for cultivation in MGM; the second to verify the effect of the thermotherapy (38ºC/four weeks) associated to the MGM cultivation; and the third intended to test antibiotics to eliminate Xcv from explants taken from infected grapevines. All plants obtained without contamination in vitro and culture media contaminated were indexed by using the semi-selective culture media nutrient agar-dextrose-yeast extract-ampicilin (NYDAM) followed by a pathogenicity test. The cultivation of 3 mm explants permitted to obtain plants free of bacteria with regeneration 14.3 times higher than 1 mm explants. The thermotherapy of infected plants associated to the in vitro culture did not eliminate the pathogen. The cultivationof 10 mm explants for 40 days in MGM+cefotaxime (300 mg L-1) eliminated Xcv from grapevine plants. The indexation in NYDAM permitted the visualization of specific Xcv growing. The indexation of in vitro regenerated grapevine plants for Xcv infection by using NYDAM medium is an economic and efficient alternative for production of selected plants. It is known that pruning residues of infected plants abandoned in the grapevine plantations are important source of disease primary inoculum and that burning is recommended as control measure. Thus the second paper investigated the survival of Xcv in infected tissues and the use of composting to eradicate Xcv associated with crop residues. Plants of grapevine “Festival’ were inoculated with a mutant resistant to rifampicin Xcv2Rif and at the time they presented high disease severity, fragmented shoots and entire leaves were placed in mesh bags. These bagswere placed on the surface of microplots in experimental area (experiment 1) and inside compost piles of grapevine pruning residues (experiment 2). The survival of Xcv2Rif in grapevine infected tissue was monitored in the culture medium NYDAM + rifampicin (0,1g L-1) + azoxystrobim (0,16 g L-1), at 8 and 10 days intervals from 1 and 2 experiment setting, respectively. In the experiment 1 tissue decomposition was also evaluated and in the experiment 2, pile temperature curves, phenolyc content, and fungi and bacteria antagonistic to Xcv2Rif were analyzed. The pathogen survived in high densities (104 a 106 CFU g-1) for at least 80 days in grapevine-infected tissues on soil surface. Then grapevine-pruning residues are important inoculum source for other plants in the vineyard. The composting process eliminated Xcv2Rif from crop residues in 10 days due to high temperatures in piles, liberation of phenolyc compounds during the process and microbial antagonism. Therefore the composting is a viable and safemethod to manage pruning residues in grapevine plantations without problems of Xcv survival and without losing of an important source of organic matter for the culture. / O cancro-bacteriano causado por Xanthomonas campestris pv. viticola (Xcv) é responsável por grandes prejuízos ao cultivo de videira no Vale do Submédio São Francisco. No primeiro trabalho, técnicas de cultura de tecidos em meio de Galzy modificado (MGM) foram estudadas visando eliminar Xcv de mudas de videira ‘Red Globe’. O primeiro experimento visou selecionar o tamanho ideal de ápices e gemas axilares para o cultivo em MGM; o segundo, verificar o efeito da termoterapia de mudas (38ºC/quatro semanas) associada ao cultivo em MGM; e o terceiro, testar antibióticos para eliminação de Xcv em explantes oriundos de videiras infectadas. Todas as plantas obtidas sem contaminação in vitro e meios de cultivo contaminados foram indexados utilizando o meio ágar nutritivo-dextrose-extrato de leveduraampicilina (NYDAM) seguindo-se teste de patogenicidade. O cultivo de explantes com 3 mm possibilitou a obtenção de plantas livres da bactéria, com regeneração 14,3 vezes maior que explantes de 1 mm de comprimento. A termoterapia de mudas infectadas associada ao cultivo in vitro não eliminou o patógeno. O cultivo de explantes com 10 mm durante 40 dias em MGM+cefotaxima (300 mg L-1) proporcionou limpeza clonal das mudas. A indexação em NYDAM permitiu a visualização do crescimento de Xcv. A indexação de plantas de videira regeneradas in vitro quanto à infecção por Xcv utilizando NYDAM é uma alternativa econômica e eficiente para produção de plantas selecionadas. Sabe-se que restos de poda de plantas infectadas deixados no parreiral são importante fonte de inóculo primário da doença, recomendando-se a queima como medida de controle. No segundo trabalho, investigou-se a sobrevivência de Xcv em tecidos de videira infectados e o uso da compostagem para erradicação de Xcv em associação com restos culturais. Mudas de videira ‘Festival’ foram inoculadas com omutante resistente a rifampicina Xcv2Rif e quando apresentavam alta severidade da doença, ramos fragmentados e folhas inteiras foram acondicionados em bolsas de malha plástica. Estas foram alocadas na superfície de microparcelas em área experimental (experimento 1) e no interior de pilhas de compostagem de restos de poda de videira (experimento 2). A sobrevivência de Xcv2Rif em tecidos infectados de videira foi monitorada em meio NYDAM + rifampicina (0,1g L-1) + azoxystrobim (0,16 g L-1), a intervalos de 8 e 10 dias a partir do início do experimento, respectivamente nos experimentos 1 e 2. No experimento 1, foi também avaliada a decomposição de tecidos e no experimento 2, as curvas de temperatura das pilhas, conteúdo de fenóis, e presença de microbiota fúngica e bacteriana antagonista a Xcv2Rif. O patógeno sobreviveu em altas densidades (104 a 106 UFC g-1) por pelo menos 80 dias em tecidos infectados de videira na superfície do solo. Portanto, restos de poda de videira constituem importante fonte de inóculo primário para infecção de outras plantas no parreiral. O processo de compostagem eliminou Xcv2Rif de restos culturais em 10 dias, devido às altas temperaturas alcançadas pelas pilhas, liberação de compostos fenólicos durante o processo e antagonismo microbiano. Desta forma, a compostagem constitui uma maneira viável e segura de manejar os restos de poda em parreirais, sem perigo de sobrevivência de Xcv e sem que haja a perda de uma importante fonte de matéria orgânica para a cultura.

Submitted by Cássio da Cruz Nogueira (cassionogueirakk@gmail.com) on 2017-01-26T14:15:37Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_ProducaoAvaliacaoAtividade.pdf: 1531568 bytes, checksum: fa545ee0497fdfbb6c535111d161a8bc (MD5) / Approved for entry into archive by Edisangela Bastos (edisangela@ufpa.br) on 2017-01-27T13:40:46Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_ProducaoAvaliacaoAtividade.pdf: 1531568 bytes, checksum: fa545ee0497fdfbb6c535111d161a8bc (MD5) / Made available in DSpace on 2017-01-27T13:40:46Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_ProducaoAvaliacaoAtividade.pdf: 1531568 bytes, checksum: fa545ee0497fdfbb6c535111d161a8bc (MD5) Previous issue date: 2015-08-06 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Muitas espécies do gênero Piper apresentam ampla distribuição na Amazônia e diversas aplicações biológicas devido a grande diversidade estrutural de seus metabólitos secundários. A espécie Piper divaricatum, é endêmica da Amazônia e produz em seu óleo essencial elevadas concentrações de metileugenol (50 – 90%), um fenilpropanóide com propriedade antioxidante e fungicida. Devido às suas potenciais aplicações, o objetivo deste estudo foi o estabelecimento do cultivo in vitro e a comparação da biossintese dos metabólitos secundários e propriedades antioxidantes com o cultivo in vivo. Para o estabelecimento do cultivo in vitro foram utilizados ápices caulinares cultivados em meio Murashige e Skoog , acrescido do regulador de crescimento BAP 0,5 mg.mL-1. Para o cultivo in vivo, foram propagadas microestacas em casa de vegetação no substrato vermiculita e adição de solução nutritiva de Murashige e Skoog. Os compostos voláteis identificados nas folhas das plântulas cultivadas in vivo foram metileugenol, β-elemeno e E-β-ocimeno, os quais não diferiram do cultivo in vivo, com exceção dos 90 dias. O cultivo in vitro das raízes não se mostrou eficiente para produção de fenilpropanóides e apresentou um perfil bastante diferenciado em relação ao cultivo in vivo de terpenos. De uma maneira geral, para as plantas cultivadas in vitro não houve diferença estatística significativa no teor de compostos fenólicos e na atividade antioxidante das folhas. No entanto, a atividade antioxidante das raízes foi bastante expressiva. Os resultados obtidos reforçam a hipótese de que plantas regeneradas in vitro podem sintetizar metabólitos semelhantes a planta-mãe e manter suas propriedades biológicas. / Many species of the genus Piper are widely distributed in the Amazon and various biological applications because of large structural diversity of its secondary metabolites. The species Piper divaricatum, is endemic in the Amazon and produces in its essential oil high concentrations of methyleugenol (50-90%), an phenylpropanoid with antioxidant and fungicidal properties. Because of its potential applications, the objective of this study was to establish the in vitro cultivation and comparing the biosynthesis of secondary metabolites and antioxidant properties with the in vivo cultivation. For establish the in vitro culture were used shoot apexes on Murashige e Skoog medium with addition of regulator BAP 0.5 mg.mL-1. For in vivo cultivation, micropiles were propagated in the greenhouse in vermiculite and adding nutritious Murashige e Skoog solution. The volatile compounds identified in the leaves of seedlings grown in vivo were methyleugenol, β-elemene and E-β-ocimene, which did not differ from in vivo cultivation, with the exception of 90 days. The in vitro culture of roots was not efficient to produce phenylpropanoids and presented a very different profile compared to the in vivo cultivation of terpenes. In general, for plants in vitro cultivated there was no statistically significant difference in the phenolics compounds content and antioxidant activity in the leaves. However, the antioxidant activity of roots was significant. The results support the hypothesis that in vitro regenerated plants can synthesize metabolites similar the matrix plant and maintain their biological properties.