O adequado manejo do DM Tipo 1 tem se tornado um desafio, principalmente para as próprias crianças, em virtude da presença de comportamentos, habilidades e conhecimentos inadequados que colaboram para a não adesão ao tratamento e para aumento de complicações em longo prazo. Estudos têm demonstrado que compreender as experiências de vida das crianças nos seus diversos espaços, valorizando-as e buscando maior aproximação com as mesmas, pode contribuir para a partilha do conhecimento sobre o manejo do diabetes e para o maior envolvimento da criança no cuidado. O objetivo deste trabalho foi compreender, na perspectiva de crianças com DM Tipo 1, os fatores que interferem no manejo da doença. Trata-se de uma pesquisa qualitativa, de natureza exploratória. Participaram do estudo 19 crianças. Utilizamos a entrevista semiestruturada e, como recurso facilitador da comunicação com a criança, os fantoches. Esses brinquedos foram confeccionados pelas próprias crianças e criou-se, também, um cenário que ilustrou e complementou a utilização dos fantoches no dia da entrevista. A análise dos dados empíricos foi feita por meio da análise de conteúdo. Os resultados evidenciaram a compreensão do que é ser criança com diabetes e dos fatores relacionados à sua existência, como seus sentimentos e percepções. A compreensão da interação da criança com os conhecimentos que possui sobre a sua doença, sua inserção no processo do autocuidado, as habilidades desenvolvidas e os recursos disponíveis para lidar com as demandas da doença constituem fatores que interferem de forma positiva ou negativa no manejo da doença e merecem ser foco de atenção dos profissionais de saúde. Todos esses elementos atuam dinamicamente nos espaços do cotidiano da criança, tais como o familiar, o escolar, o de amizades, o de lazer e o dos serviços de saúde, atuando como fatores que fragilizam ou potencializam o manejo da doença. O apoio de familiares, amigos, professores e profissionais de saúde que compartilham as experiências de ser uma criança com diabetes mostrou-se essencial para o alcance do adequado manejo. Além disso, o conhecimento adquirido por estes atores e pela própria criança interfere diretamente no manejo do DM Tipo 1. Os resultados deste estudo evidenciam ações que visam a fortalecer o trabalho da equipe multidisciplinar no cuidado da criança com diabetes e apontam cenários de atuação que podem ser incrementados pelos profissionais de saúde. O enfermeiro ocupa posição privilegiada para identificar e operacionalizar ações apropriadas ao estágio de desenvolvimento da criança e às suas necessidades, em todos os espaços em que vive, atuando, assim, em consonância com todos os envolvidos em prol do sucesso do manejo da doença. / The adequate handling of Type 1 DM has become a challenge, mainly for the children themselves, due to the presence of inadequate behaviors, skills and knowledge that contribute to non-adherence to treatment and increased complications in the long term. Research has demonstrated that understanding children\'s life experiences in their different spaces, valuing them and seeking greater approximation, can contribute to knowledge sharing on diabetes management and to the children\'s greater involvement in care. This research aimed to understand, from the perspective of children with Type 1 DM, the factors that interfere in the management of this disease. This is a qualitative and exploratory research. Study participants were 19 children. Semi-structured interviews were used and, to facilitate communication with the child, puppets, which the children made themselves. A scenario was also created to illustrate and complement the use of puppets on the day of the interview. Content analysis was used for empirical data analysis. Results evidenced the understanding of what it means to be a child with diabetes and the factors related to his/her existence, such as feelings and perceptions. Understanding of these children\'s interaction with their knowledge about their disease, their insertion in the self-care process, developed skills and resources available to deal with the demands of the disease constitute factors that interfere positively or negatively in disease management and deserve further attention from health professionals. All of these elements act dynamically in the child\'s daily spaces, such as the family, school, friendships, leisure and health services, as factors that weaken or strengthen disease management. Support from relatives, friends, teachers and health professionals who share the experiences of being a child with diabetes showed to be essential to achieve adequate management. Moreover, the knowledge these actors and the children themselves acquire interferes directly in Type 1 DM management. These study results evidence actions aimed at strengthening the work of the multidisciplinary team in care delivery to children with diabetes and indicate activity scenarios which health professionals can build upon. Nurses play a privileged role to identify and put in practice actions that are appropriate for the children\'s development stage and needs, in all spaces they live in. Thus, they act in line with all parties involved with a view to successful disease management.

Introdução: Diabetes tipo 1A(DM1A) é uma doença causada pela destruição autoimune das células beta. Em adição aos linfócitos T helper 1(Th1) e Th2, um subtipo específico de células T helper recentemente descrito, Th17, caracterizado pela produção da interleucina 17(IL-17A), IL-17F e IL-22, está também envolvido na imunidade adaptativa e autoimunidade, incluindo DM1A. A IL-23 tem função fundamental na expansão e sobrevivência das células Th17. A mesma é composta por 2 subunidades: a p19-específica (IL-23A) e a p40. Variantes dos genes IL-23A e de seu receptor (IL-23R) ou o aumento das concentrações séricas da IL-23 estão associados a várias doenças autoimunes, mas seus efeitos no DM1A não estão definidos. Com o intuito de avaliar a importância da IL-23 na patogênese do DM1A, as variantes dos genes IL23A e IL23R foram analisadas. Metodologia: A região codificadora e os regiões intrônicas proximais do gene IL23A, incluindo a região 5 proximal foram sequenciadas. Duas variantes do gene IL23A (rs2066808 e rs11171806) e duas do gene IL-23R (rs11209026 e rs10889677) foram também genotipadas. A amostra contou com 370 pacientes com DM1A e 314 indivíduos controles saudáveis. As medidas das concentrações séricas da IL-23 e os autoanticorpos pancreáticos e extra-pancreáticos foram determinados. Resultados: Nós observamos somente uma das seis variantes da IL-23 descritas nos bancos de dados (rs11171806 G>A localizada no exon 3) e descrevemos uma nova variante no gene IL-23A, que consistiu na substituição da citosina por timina na posição c.-403 (C>T) na região 5 proximal deste gene (encontrada em heterozigose em apenas uma paciente com DM1A, do sexo feminino, com 28 anos ao diagnóstico).Os alelos G dessas duas variantes estiveram em forte desequilíbrio de ligação (D\' = -0,825 para controles, p<2,0X10-6 e D\' = -0,902, p<2,0X10-17 para pacientes). Em consequência, a análise dos haplótipos destas variantes foi realizada. O haplótipo GG foi mais frequente nos controles (16.7%) do que nos pacientes com DM1A (9.5%), conferindo proteção à doença (pc = 0,0009, OR = 0,53) . A presença do haplótipo GG diferiu de acordo com a etnia no conjunto de pacientes e controles, sendo menor naqueles de etnia caucasóide (18%) em relação aos outros grupos (39%); p<0.0001. Entretanto, o efeito protetor da haplótipo GG foi independente da etnia. As duas variantes do gene IL23R (rs10889677 e rs11209026) tinham frequência alélica e genotípica semelhante entre pacientes com DM1A e controles. Não foi observada diferença significante nas concentrações da IL-23 entre 135 pacientes com DM1A (5,65 ± 14,0 pg/mL) e 112 indivíduos controles (9,06 ± 23,7pg/mL) (p =0,18). , mesmo quando analisamos apenas o pacientes com duração do diabetes inferior a dois anos, nos quais a resposta imune contra as células beta ainda está presente, (4.65 ± 6.94 pg/mL e 9.07 ± 23.62 pg/mL, p = 0.076). Não foi encontrada associação entre as variantes do gene IL23A com a idade diagnóstica, presença do peptídeo C residual e auto-anticorpo anti-descarboxilase do ácido glutâmico em pacientes com diagnóstico recente de DM1A. Estas variantes também não influenciaram na freqüência dos auto anticorpos extrapancreáticos: anti-tireoglobulina, anti-peroxidase, anti-21 hidroxilase, fator anti-núcleo, fator reumatóide e anti-citoplasma de neutrófilos. Conclusões: O haplótipo GG das variantes do gene lL23A (rs11171806 e rs2066808) foi associado a proteção ao DM1A. As variantes do gene IL23R (rs11209026 e rs10889677) não foram associadas ao DM1A. As concentrações séricas da IL-23 foram semelhantes entre os grupos. / Introduction: Type 1 diabetes mellitus (T1D) is a disorder caused by the immune-mediated destruction of insulin-secreting pancreatic beta cells. In addition to T helper 1 (Th1) and Th2 cells, a recently discovered subset of T helper cells, Th17, characterized by the production of interleukin 17 A (IL-17A), IL-17F, and IL-22 is also involved in adaptive immunity and autoimmunity, including T1D. The Interleukin IL-23 has a central role in the expansion and survival of Th 17 cells. It is composed of two subunits: p19-specific (IL-23A) and p40. Single nucleotide polymorphisms (SNPs) of IL-23A and IL-23 receptor (IL-23R) genes or increased IL-23 serum concentrations were associated with several autoimmune diseases, but their role in T1D has not been defined. We therefore searched for variants of IL-23A and IL-23R genes that could predispose to T1D. Methods:The coding regions and boundary intron sequences of IL-23A gene, including the 5 proximal region were sequenced. Two variants (rs2066808 and rs 11171806) of IL-23A and two of IL-23R (rs11209026 and rs10889677) genes were also genotyped. IL-23 serum levels and pancreatic and extra-pancreatic auto-antibodies were also determined. The cohort involved 370 patients with T1D and 314 healthy control subjects.Results: We observed only 1 out of 6 IL-23A coding variants (rs11171806 G>A localized in exon 3) described in a database repository . A new allelic variant of the IL-23A gene, consisting of the substitution of a cytosine by a thymine at position c.-403 (C>T) in the 5 proximal region of the IL-23A gene (found in heterozygosis in only 1 female patient with T1D) was described. The G alleles of rs11171806 and rs2066808 variants of IL-23A gene were in strong linkage disequilibrium (D\' = -0,825 for controls, p<2,0X10-6 and D\' = -0,902, p<2,0X10-17 for patients). So, further analyses were performed with the haplotypes instead of separated SNPs. The GG haplotype was more frequent in controls (16,7%) than in T1D patients (9,5%), conferring a protection to the disease (pc= 0,0009, OR = 0.53). The presence of haplotype GG was also different according to the ethnic group in the overall sample (patients+controls), when we pooled the Caucasians (18%) against the other groups (39%); p<0.0001. However, the lower susceptibility to T1D conferred by GG haplotype was independent of the ethnic group. Two IL-23R gene variants (rs10889677 and rs11209026) were also analyzed. The allelic and genotypic frequency of the variants did not differ between patients with T1D and control subjects. No significant differences were observed between the plasma IL-23 concentrations of 135 T1D patients (5.65 ± 14.0) and 112 control subjects (9.06 ± 23.7) (p = 0.18), even when we only the patients with less than 2 years disease duration (n = 43), when the immune attack to beta cells is still present, were included (4.65 ± 6.94 pg/mL and 9.07 ± 23.62 pg/mL, p = 0.076). No association was found between IL-23A variants with age at diagnosis of diabetes, presence of residual C-peptide levels or frequency of glutamic acid anti-decarboxilase antibody in patients with recent-onset T1D. Furthermore, these variants were not related to the presence of the extrapancreatic autoantibodies such as thyroid peroxidase (TPO) Ab, thyroglobulin (TG) Ab, 21-Hydroxilase (21OH) Ab, Anti nuclear factor (ANA) Ab, rheumatoid factor (FR) Ab and Neutrophil cytoplasmic (ANCA) Ab. Conclusions : The GG haplotype of lL23A gene variants( rs11171806 and rs2066808) was protective against T1D. The IL23R variants (rs11209026 and rs10889677) were not associated with susceptibility toT1D . IL-23 serum concentrations did not differ between T1D patients and controls.

Orientadores: Maria Cândida Ribeiro Parisi, Denise Engelbrecht Zantut Wittmann / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-26T05:08:24Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Bovi_TicianeGoncalez_M.pdf: 3137224 bytes, checksum: 8adaf0924763fa6c8dbae022b9ff6537 (MD5) Previous issue date: 2014 / Resumo: Avaliou-se a relação entre consumo alimentar de portadores de diabetes tipo 1 (DM1) seguidos em serviço de referência e de suas respectivas famílias. Trata-se de um estudo transversal no qual foram avaliados concomitantemente o consumo alimentar (Recordatório de 24 horas), o perfil nutricional (Índice de Massa Corporal), assim como, o nível socioeconômico de famílias e pacientes DM1. O controle glicêmico foi classificado pelo índice de hemoglobina glicada (HbA1c). Houve correlação positiva entre o consumo alimentar dos pacientes e familiares/acompanhantes para o consumo de carboidratos, proteínas e lipídios. O tempo de diagnóstico, tempo de acompanhamento no serviço, nº de avaliações da glicemia capilar, dose de insulina Kg/dia e parentesco dos familiares/acompanhantes mostraram-se relevantes sobre a HbA1c. O consumo alimentar tanto de pacientes quanto de familiares foi semelhante, inadequado e discordante das recomendações estabelecidas. Maior tempo de diagnóstico, maior tempo de acompanhamento no serviço, maior nº de avaliações da glicemia capilar, influenciaram positivamente a HbA1c. O parentesco sobre a HbA1c demanda mais estudos enfocando a influência parental no tratamento do Diabético tipo 1 adulto / Abstract: To evaluate the relationship between dietary intake of patients with type 1 diabetes (T1D) followed in reference to their families and service. Cross-sectional study in which were concomitantly evaluated the dietary intake (24-hour recall), the nutritional status (body mass index), as well as the socioeconomic status of families and T1DM. Glycemic control was classified by the index of glycated hemoglobin (A1C). There was a positive correlation between inadequate dietary intake of patients and family members / caregivers to the consumption of carbohydrates, proteins and lipids. The time of diagnosis, follow-up time in the service, number of reviews of capillary blood glucose, insulin dose kg / day and kinship of family members / caregivers were relevant on HbA1c. Dietary intake of both patients and relatives was similar, inappropriate and discordant set of recommendations. Delayed diagnosis, longer follow-up in the service, the greater number of assessments of blood glucose, HbA1C positively influenced. Kinship on A1C demand more studies focusing on parental influence in the treatment of type 1 diabetic adult / Mestrado / Clinica Medica / Mestra em Clínica Médica

Orientador: Ricardo de Lima Zollner / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-21T01:15:46Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Silva_LuisGuilhermeStivanin_M.pdf: 3878753 bytes, checksum: bb8270f964b31680efc65e277f167c0a (MD5) Previous issue date: 2012 / Resumo: Empregando as linhagens de camundongos NOD (non-obese diabetic) de desenvolvimento espontâneo do diabetes mellitus tipo 1 e BALB/c como linhagem controle, administrou-se exogenamente gangliosídeo GM1, mistura de gangliosídeos (GGs) (GM1 21%, GD1a 40%, GD1b 16%, GT1b 19%) e solução salina (0,9% NaCl) estéril da 4ª à 28ª semana de vida. Os efeitos da administração dos gangliosídeos sobre a frequência da manifestação do diabetes, índice de insulite, imunofenotipificação e atividade apoptótica de células presentes em ilhotas pancreáticas de NOD foram verificados por meio de análise glicêmica semanal, técnica colorimétrica com Eosina-Hematoxilina, imunofluorescência e TUNEL. A expressão gênica e os níveis séricos de insulina, além das expressões celular protéica e gênica dos fatores de regeneração GLP-1, PDX-1 e Ngn3 nos tecidos pancreáticos de BALB/c e NOD foram analisados por meio de ELISA, imunofluorescência e RT-PCR em tempo real. Após 28 semanas de tratamento, pôde-se verificar que os animais tratados com GM1 reduziram o diabetes de 70% observado nos animais controle salina, para 38%. Os animais tratados com GGs não apresentaram diabetes. O índice de insulite estava diminuído nos animais tratados com GM1 (p=0.09), GGs (p=0.004) e salina não-diabético (ND) (p=0.02) em relação ao grupo salina diabético (DM). O número de células apoptóticas nas ilhotas dos grupos NOD salina ND e NOD DM estava aumentado em relação aos grupos tratados com GM1 e GGs. Os níveis de insulina sérica estavam aumentados nos grupos BALB/c GGs (p=0.01) e BALB/c GM1 (p=0.03) em relação ao grupo BALB/c salina e nos grupos NOD GGs (p=0.008) e NOD salina ND (p=0.01) em relação ao grupo diabético. Por outro lado, os níveis de expressão gênica de insulina no grupo NOD GM1 (p=0.02) estavam aumentados em relação ao grupo salina. Quanto às expressões protéicas de GLP-1, PDX-1 e Ngn3, em ilhotas pancreáticas e tecido acinar, verificamos aumento no grupo NOD tratado com GGs. O conjunto dos resultados demonstra que os gangliosídeos diminuem a manifestação do diabetes espontâneo na linhagem NOD. Hipotetizamos que uma das propriedades dos gangliosídeos estudados é a de estimular a expressão de GLP-1, PDX-1 e Ngn3 em células do tecido acinar e em células da linhagem endócrina nas ilhotas pancreáticas dos animais tratados seja NOD ou BALB/c. Desta forma abrem-se novas frentes de estudos das propriedades antiinflamatórias e possivelmente regenerativas dos gangliosídeos / Abstract: In the present study we evaluate the properties of GM1 and GGs (21% GM1, 40% GD1a 16% GD1b, 19%GT1b) in NOD (non-obese diabetic) mice and BALB/c as a control lineage. Animals of both lineages were treated with GM1, GGs or saline from 4th to the 28th weeks of life. The ganglioside-treated NOD mice demonstrated a decrease in insulitis compared with saline-treated mice: 70% of saline control animals, 38% of GM1 group and 0% of GGs group. GLP-1 gene expression was increased in GM1-treated BALB/c and in GGs-treated NOD groups in comparison to the saline groups. Insulin gene expression was increased only in the GM1-treated NOD group. Serum insulin levels were increased in ganglioside-treated BALB/c and NOD groups. In the islets, the cell co-labeling of Insulin/GLP1 and somatostatin/GLP1 was increased in NOD and BALB/c gangliosides-treated mice compared to saline-treated mice. PDX-1 and Ngn3 protein expression were increased in pancreatic islets and exocrine tissues of GGs treated NOD mice in comparison to the saline treated group. Results suggest that gangliosides have modulatory properties, decreasing the insulitis score, maintaining of insulin levels, increasing GLP-1 protein expression in ? and ? pancreatic cells and retarding diabetes onset in NOD mice. Similarly to observation in neural tissue, the gangliosides studied could contribute to islets survival. We hypothesize that ganglioside play a role stimulating growth factor expression GLP-1, PDX-1 and Ngn3 in the cells from acinar tissue and islets cells / Mestrado / Clinica Medica / Mestre em Clinica Medica

Memoria para optar al título profesional de Bioquímico / En el origen de la nefropatía diabética (ND) intervienen factores genéticos. La proteína nefrina es esencial para la constitución de la barrera de filtración glomerular, y cuando está alterada en su excreción es indicador de compromiso renal. Esta proteína está codificada en el gen NPHS1 ubicado en el cromosoma 19 humano. En este gen están descritos 82 SNPs (Single Nucleotide Polymorphisms) en su gen, 8 de los cuales se encuentran en zonas codificantes y sólo 3 de éstos son no sinónimos (E117K, K447E y N1077S). El objetivo principal de esta tesis es identificar SNPs del gen de nefrina en diabéticos chilenos tipo 1 (DM1) y tipo 2 (DM2) y relacionarlos con ND. Otro objetivo es pesquisar la presencia de nefrinuria y relacionarla con la presencia de SNPs en el gen de nefrina. Para realizar estos análisis seleccionamos al azar 67 pacientes DM1, 94 pacientes DM2 (distribuidos: 32 y 36 normoalbuminúricos, 22 y 36 microalbuminúricos, 13 y 28 macroalbuminúricos, respectivamente), 22 nefrópatas no diabéticos y 36 individuos sanos. A estos pacientes se les extrajo ADN de sangre periférica, se amplificaron 2 segmentos específicos del gen de nefrina mediante PCR (Polymerase Chain Reaction), los cuales contenían 2 de los 3 polimorfismos no sinónimos descritos para este gen (E117K y N1077S). Los amplificados se analizaron mediante SSCPPCR (Single-Strand Conformational Polymorphism) y se secuenciaron. También se tomaron muestras de orina de todos los individuos incorporados al estudio, las cuales fueron analizadas con anticuerpos anti-nefrina, para pesquisar la presencia de nefrinuria. Mediante SSCP-PCR se encontraron diferencias en la migración electroforética que sugirieron la presencia de polimorfismos para uno de los segmentos analizados, que contenía el polimorfismo SNP rs#4806213 (N1077S). Se detectó la presencia de una variante electroforética en el 26,8% de los pacientes DM1, 19,1% de los DM2, 18,2 % de los nefrópatas no diabéticos y 5,6% controles sanos (p<0,05 DM vs controles sanos y diferencias no significativas en DM1 y DM2, normo-, micro- o macroalbuminúricos). Mediante la secuenciación del ADN se detectó que en el 95% de los casos, la variación detectada corresponde al SNP rs#466452 ubicado en el intrón 24, que también se encuentra en la región amplificada por PCR, y sólo el 5% correspondía al SNP rs#4806213 (exón 24). En el análisis de nefrinuria no se logró detectar nefrina por medio de tres anticuerpos anti-nefrina distintos en los diversos grupos de pacientes. En conclusión, la técnica SSCP-PCR es sensible, confiable y de bajo costo, es un buen método de barrido o screening para detectar SNPs, aunque es importante ajustar en forma especifica electroforéticas en cada caso y verificar los polimorfismos mediante secuenciación. Los SNPs rs#3814995 y rs#4806213 del gen de nefrina se encuentran presentes en la población chilena, pero no tendrían asociación con diabetes ni ND. El SNP rs#466452 es más frecuente en diabéticos y la presencia de este polimorfismo intrónico determina la aparición de una secuencia tipo ESE (Exon Splicing Enhancer), cuya funcionalidad debe ser corroborada por medio de RT-PCR / Genetic factors are involved in the development of diabetic nephropathy (DN). Nephrin protein is essential of the glomerular filtration slit, and is an indicator of renal damage. Human nephrin is encoded by the NPHS1 gene located on chromosome 19. 82 SNPs (Single Nucleotide Polymorphisms) have been described in its gene, 8 of which are found in coding zones and only 3 of these are non-synonymous (E117K, K447E and N1077S). The main subject of this thesis is to identify nephrin non-synonymous SNPs in Chilean diabetic type 1 (DM1) and type 2 (DM2) patients and its relationship with DN. Another aim is to detect nephrinuria and relate it to the presence/frequency of these SNPs in the nephrin gene. In order to carry out these analysis, 67 DM1 patients, 94 DM2 patients (32 and 36 normoalbuminurics, 22 and 36 microalbuminurics, 13 and 28 macroalbuminurics, respectively), 22 non-diabetic nephropaths and 36 healthy individuals were selected. DNA was extracted from peripheral blood to amplify 2 specific segments of the nephrin gene by PCR (Polymerase Chain Reaction) which contained 2 of the 3 described nonsynonymous polymorphisms for this gene (E117K and N1077S). The PCR-fragments were analyzed by SSCP-PCR (Single-Strand Conformational Polymorphism-PCR) and sequenced. Also urine samples were taken from all individuals incorporated into the study and analyzed using polyclonal anti-nephrin antibodies to study the presence of nephrinuria. In the segment that contained SNP rs#4806213 (N1077S) polymorphism analyzed by SSCP-PCR, differences in electrophoretical migration were found, suggesting the presence of a polymorphism. This difference was found in 26.8% of DM1 patients, 19.1% of DM2, 18.2% in non-diabetic nephropaths and 5.6% in healthy controls (p<0.05 DM1 vs healthy individuals, differences were not significant between DM1 and DM2, normo-, micro- or macroalbuminurics). When the SSCP-PCR samples positive for a variation in electrophoretic migration were sequenced to verify results, two SNPs were detected: in 95% of the cases the detected variation corresponded to SNP rs#466452 located in intron 24, also found in the PCR amplified region, and only 5% corresponded to SNP rs#4806213 in exon 24. The use of three different antibodies in nephrinuria analyses was not able to detect nephrin, in the different group of patients. SSCP-PCR is a sensitive and reliable technique, and it is a good method for screening and detecting SNPs; however it is important to verify results by direct sequencing. SNP´s rs#3814995 and rs#4806213 are present in the Chilean population, but may have no association with diabetes or DN. SNP rs#466452 is more frequent in DM1 patients and the presence of this intronic polymorphism determines the appearance of an ESE site (Exon Splicing Enhancers), but the existence of a functional ESE site must be corroborated by RT-PCR

Orientador: Carlos Eduardo Steiner / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-07T13:53:01Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Assis_NilmaAlmeidade_M.pdf: 1405023 bytes, checksum: 12e3861c31dae0e759ab571d2d029476 (MD5) Previous issue date: 2006 / Resumo: A retinopatia diabética é uma complicação freqüente no diabetes melito tipo 1, acometendo quase a totalidade de pacientes, em graus variados, após 20 anos de doença. A interferência de fatores ambientais como a manutenção de um estado hiperglicêmico na sua fisiopatologia já foi comprovada, mas ainda não foi esclarecido porque alguns pacientes desenvolvem essa complicação de maneira grave e precoce. Nos últimos anos, diversos estudos têm sugerido a participação de fatores genéticos nesse processo. O fator de crescimento endotelial vascular (VEGF), potente indutor da angiogênese, foi associado à retinopatia diabética por alguns autores, pelo aumento da sua expressão, em virtude de mutações em sua região promotora. Neste trabalho foi realizada uma avaliação clínico-laboratorial, a análise do SNP rs833061 (- 460) e a pequisa da deleção de 18 pares de bases em -2549, ambas na região promotora do gene VEGF em 114 pacientes com diabetes melito tipo 1, de três centros de referência em diabetes no Brasil ¿ Hospital das Clínicas da Unicamp, Instituto Estadual de Diabetes e Endocrinologia Luiz Capriglione (RJ) e Santa Casa da Misericórdia de São Paulo (SP). Houve associação entre retinopatia diabética proliferativa e nefropatia, porém nenhum paciente apresentou a deleção em -2549, nem o alelo -460 C em homozigose. Tais resultados sugerem que esses polimorfismos na região promotora do gene VEGF não interferem na predisposição à retinopatia diabética na população estudada e que outros agentes ambientais e/ou genéticos devem ser significativos / Abstract: Diabetic retinopathy is a frequent complication of diabetes mellitus type 1 and almost all patients develop it after twenty years of disease. The causes of these complications are not clear, but several environmental factors such as chronic hyperglicaemia may act in this predisposition, however, it is not clearly understood why some individuals develop it in a severe and precocious way. The participation of genetic factors as the vascular endothelial growth factor (VEGF), a potent angiogenic mediator, was already confirmed for some authors. In this study we investigate whether polymorphisms in VEGF gene are associated with proliferative diabetic retinopathy. One hundred-fourteen patients with diabetes mellitus type 1 underwent a clinical and laboratorial study, as well as the analysis of two polymorphisms: rs833061 and the deletion of 18 bp at -2549 both on the promoter region of the VEGF gene. There was an association between nephropathy and retinopathy in our patients but none of the individuals presented the deletion at -2549 or the allele C in rs833061 in homozygous state. These results suggest that such polymorphisms in the promoter region of the VEGF gene do not interfere in the predisposition to diabetic retinopathy in our population and that other environmental and/or genetic factor may be more relevant / Mestrado / Genetica Medica / Mestre em Ciências Médicas

Orientador: Maria Luiza Silveira Mello / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-22T06:29:06Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Ghiraldini_FlaviaGerelli_D.pdf: 75704253 bytes, checksum: 9d1afc3cebcffd05000b5efb25d3996d (MD5) Previous issue date: 2013 / Resumo: O diabetes mellitus do tipo I (DM1) caracteriza-se pela ocorrência de insulite com consequente hiperglicemia e poliuria. Alterações celulares estruturais e metabólicas decorrentes do aumento da glicemia podem provocar fenótipos de envelhecimento precoce. O envelhecimento celular e resultado de fatores intrínsecos e extrínsecos, que alteram a estrutura e a organização da cromatina e que, consequentemente, afetam a expressão gênica. As sirtuinas, deacetilases NAD+-dependentes, estão envolvidas na transcrição gênica, reparo de DNA, transcrição do rDNA, regulação metabólica e remodelação cromatinica. As sirtuinas nucleares, especialmente Sirt1 e Sirt6 estão envolvidas com o envelhecimento precoce, no metabolismo de glicose e na resposta a inflamação. O presente trabalho teve como objetivo geral comparar os processos de remodelação cromatinica em hepatocitos sob o efeito da hiperglicemia e do envelhecimento, usando-se modelo animal (camundongos). Um modelo de cultura celular (HepG2) foi também utilizado para estudo de efeitos da hiperglicemia, utilizando-se como metodologias analisem morfológicas e moleculares. Foi observado um aumento em conteúdo de DNA e em acessibilidade da cromatina a MNase mais acentuado em hepatocitos de animais DM1 do que de idosos. O aumento na abundancia de Sirt1 em animais hiperglicêmicos não refletiu em sua maior atividade, enquanto em idosos houve um decréscimo generalizado nesses parâmetros e aumento da aceptilação de sítios histónicos. Em animais DM1, Sirt6 apresentou abundancia semelhante à de Sirt1, possivelmente devido à alta fragmentação de DNA observada nesses animais, diferente do ocorrido em idosos. Ambos os animais DM1 e idosos apresentaram baixa relação área AgNOR+/área nuclear. Em animais diabéticos isto foi devido ao aumento na área nuclear, enquanto nos idosos, foi devido à diminuição na área AgNOR+ e aumento na área nuclear. O aumento na metilação de rDNA na porção 18S e a baixa abundancia de Sirt7 confirmam diminuição no metabolismo celular no envelhecimento. Em hepatocitos de camundongos DM1 e idosos foi observado genes diferencialmente expressos relacionados à inflamação. Admite-se que no primeiro caso este achado seja devido à natureza auto-imune da doença, enquanto no segundo possa ser um indício de inflamação naturalmente encontrada em processos de envelhecimento. Em animais DM1, a expressão diferenciada de genes envolvidos com metabolismo de lipídios poderia contribuir para com a peroxidação lipídica e produção de ROS levando a esteatose hepática. Nas células HepG2, alterações na expressão dos genes Apoe, Igfbp1 e Foxo1, ocorridas em meio de cultura hiperglicêmicas, tornaram-se revertidas quando as células foram retornadas a normoglicemia. Contudo, as abundancias das marcações epigenéticas nos promotores desses genes decresceram progressivamente, indicação de uma memória hiperglicêmica, dado não observado em modelo animal. A análise do fenótipo nuclear dessas células indicou possível indução da proliferação celular quando retornadas a normoglicemia. A inibição de sirtuinas aumentou o conteúdo Feulgen-DNA e o contraste entre cromatina condensada e não-condensada, indicativo de atuação na proliferação celular e na remodelação cromatinica. DM1 e envelhecimento, portanto, não podem ser considerados fenômenos idênticos, pois enquanto no primeiro ha um mecanismo compensatório que promove alterações genéticas, epigenéticas e remodelação cromatinica, no segundo ha um decréscimo generalizado no metabolismo celular levando a modificações diferentes nos mesmos parâmetros / Abstract: Diabetes mellitus type I (DM1) is characterized by insulitis and consequent hyperglycemia and polyuria. Structural and metabolic changes in the cell caused by hyperglycemia might induce an early-ageing phenotype. Both intrinsic and extrinsic agents might contribute to cellular ageing thus leading to chromatin structural changes and differential gene expression. Sirtuins, NAD+-dependent deacetilases, play a role in cell metabolism, transcription, DNA repair and chromatin remodeling. Sirt1 and Sirt6, especially, are nuclear proteins related to early-ageing, glucose metabolism and inflammatory response. The general purpose of the present work was to compare processes of chromatin remodeling in hepatocytes under the effects of hyperglycemia and aging, using mouse models. A model using cells in culture (HepG2) was also used to study the effects caused by hyperglycemia. The methodology used involved morphological and molecular analysis. An increase in DNA content and chromatin accessibility to MNAse was found more pronounced in hepatocytes from DM1 than from aged mice. Despite the high abundance of Sirt1 in DM1 animals, its activity was not proportionally high, whereas in old animals there was a reduction in these parameters, increasing the acetylation of Sirt1-histonic sites. In DM1 mice, Sirt6 presented similar abundance as Sirt1, possibly due to the high DNA fragmentation, different to what was found in aged animals. Both DM1 and normoglycemic old mice presented a decrease in AgNOR+ area/nuclear area ratio. While in DM1 animals it was a result from the increase in nuclear area, in old animals it was a combination of increased nuclear areas and decreased AgNOR+ areas. The DNA methylation increase in the 18S rDNA region and the decrease in Sirt7 abundance in the hepatocytes from old mice support the hypothesis of diminished cellular metabolism. Differential expression analysis for DM1 and old mouse hepatocytes presented a high number of genes involved in the inflammatory response. While in the former it could be an autoimmune characteristic of the disease, in the latter it might be an evidence of inflammatory state naturally associated with aging. Moreover, DM1 mice also presented differential gene expression related to lipid metabolism, which could contribute to increase lipid peroxidation and ROS production leading to hepatic steatosis. HepG2 cells showed changes in Apoe, Igfbp1 and Foxo1 expression in hyperglycemic medium and they were reverted when the cells returned to normoglycemic medium. The epigenetic marks, however, presented a progressive decrease in abundance, indicative of a hyperglycemic memory, which was not observed in DM1 animals. The nuclear phenotype in HepG2 cells under these same experimental conditions indicated a possible induction in cellular proliferation when the cells were returned to the normoglycemic medium. Inhibition of sirtuins increased the contrast between condensed and non-condensed chromatin and the Feulgen-DNA content, indicating a role in cell division and chromatin remodeling. Therefore, DM1 and ageing cannot be considered as identical processes, because while in DM1 there is a compensatory mechanism that induces changes in epigenetic marks, chromatin remodeling and differential gene expression, there is a general decrease in cell metabolism under aging that leads to different changes in the same parameters / Doutorado / Biologia Celular / Doutor em Biologia Celular e Estrutural

Perdas gestacionais, malformações, restrição de crescimento intrauterino (IUGR) são associadas a gestações diabéticas. Para ampliar o conhecimento nesse tema, nosso grupo desenvolveu um modelo de gestação complicada por diabetes tipo 1 em camundongos que, nessa tese, foi utilizado para analisar o ciclo estral, desenvolvimento fetal e organização placentária. O diabetes foi induzido por aloxana e estudado em dois períodos 30-50D (curto prazo) e 90-110D (longo prazo). Placentas e fetos foram coletados, pesados, e submetidos a técnicas moleculares, bioquímicas e morfológicas. Detectaram-se alterações no perfil temporal do ciclo estral. O grupo 30-50D apresentou altas taxas de perdas embrionárias e IUGR, e o 90-110D malformações, mortes fetais, IUGR e aumento no peso placentário. As placentas diabéticas apresentaram aumento e desorganização da zona juncional, redução do labirinto e vasodilatação. A expressão dos colágenos I e III aumentou e a do V diminuiu em 30-50D, porém, a deposição destes aumentou concomitante com a redução da atividade da MMP9. A deposição dos colágenos III e V e a atividade da MMP2 aumentaram em 90-110D. Nossos resultados reiteram a importância do fator temporal nas complicações do diabetes sobre a gestação. / Gestational loss, malformations and intrauterine growth restriction (IUGR) are often associated with pregnancies. To increase the knowledge about this topic, our group has developed a model of pregnancy complicated by type 1 diabetes in mice. In this study, was analyzed the estrous cycle and the fetal and placental development. For this, diabetes was induced by alloxan and studied in two time-periods 30-50D (short term) and 90-110D (long term). Placentas and fetuses were collected, weighed and analyzed by biochemical, morphological and molecular procedures. We detected changes in the temporal profile of the estrous cycle. The 30-50D group showed high rates of embryonic loss and IUGR whereas malformations, fetal death, IUGR and increased placental weight was detected in 90-110D. Increase and disorganization of junctional zone, reducing labirinth and vasodilation characterize diabetic placentas. The expression of collagen I and III was increased whereas collagen V decreased in the 30-50D. The deposition of this collagen, however increased concomitant with the reduction of MMP9 activity. In 90-110D deposition of collagen III and V and the MMP2 activity was increased. Together, our results reinforce the relevance of the time factor in the complications of diabetes on pregnancy.

Orientador: Robison José Quitério / Resumo: Introdução: O Diabetes Mellitus do tipo 1 (DM1) é uma das principais disfunções metabólicas, que atinge crianças e adolescentes. O Reiki atua reequilibrando os campos de energia e criando condições necessárias para a cura natural do corpo e dos sistemas fisiológicos. Objetivo: Investigar o efeito do Reiki sobre a modulação autonômica da frequência cardíaca de pacientes diabéticos. Métodos: A amostra foi constituída de 15 pacientes com DM1, de ambos os sexos, idade entre 12 a 18 anos. O registro da frequência cardíaca (FC) e dos intervalos RR foi realizado continuamente na posição decúbito dorsal durante a aplicação da terapia Reiki nos pontos básico, sacral, plexo solar, cardíaco, laríngeo, frontal, coronário. Resultados: Os resultados obtidos foram que os índices da variabilidade da frequência cardíaca RMSSD, HF apresentaram diferenças ao comparar os momentos pré e pós intervenção. Conclusão: A aplicação de Reiki nos pontos aumenta a modulação autonômica da frequência cardíaca em pacientes diabéticos do tipo 1. / Abstract: Introduction: Type 1 Diabetes Mellitus (DM1) is one of the major metabolic dysfunctions that affects children and adolescents. Reiki acts by rebalancing the energy fields and creating conditions necessary for the natural healing of the body and physiological systems. Objective: To investigate the effect of Reiki on the autonomic modulation of the heart rate of diabetic patients. Methods: The sample consisted of 15 patients with DM1 of both sexes, aged between 12 and 18 years. Heart rate (HR) and RR intervals were recorded continuously in the dorsal decubitus position during the application of Reiki therapy in the basal, sacral, solar plexus, cardiac, laryngeal, frontal and coronary points. Results: The results obtained were that the indexes of the heart rate variability RMSSD, HF presented differences when comparing the moments before and after intervention. Conclusion: The application of Reiki in points increases the autonomic modulation of heart rate in type 1 diabetic patients. / Mestre

INTRODUÇÃO: A atividade física faz parte do tratamento do portador de diabetes mellitus tipo 1 (DM1), devendo ser encorajada pelas mesmas razões que é em não portadores. Os portadores de DM1, como evidenciam os estudos, apresentam póstreino: redução dos fatores de risco para o desenvolvimento de doenças cardiovasculares, melhora do condicionamento físico, da sensibilidade à ação da insulina e do bem-estar. Mas é fundamental realizar a monitorização glicêmica, adequar alimentação e dose de insulina para a prática de exercícios, a fim de evitar hipo ou hiperglicemias antes, durante ou após as sessões, e consequentemente, obter melhora ou manutenção do controle glicêmico. Além disso, o nível de atividade física relaciona-se inversamente ao aparecimento de complicações do diabetes e risco de mortalidade em portadores de DM1. Porém, poucos estudos demonstram o comportamento da glicemia destes pacientes em diferentes tipos de exercícios. O conhecimento da variação glicêmica durante o exercício é fundamental para a conduta terapêutica do médico, para a prescrição e orientação segura de exercícios pelos professores de educação física. OBJETIVOS: Analisar a variação da glicose de DM1, submetidos às sessões de exercício aeróbio, exercícios resistidos e teste ergoespirométrico, utilizando o Sistema de Monitorização Contínua da Glicose (CGMS) e o glicosímetro portátil para monitorização da glicemia capilar. E como objetivo secundário, analisar a acurácia do CGMS e as respostas agudas e crônicas às sessões de exercícios aeróbio, resistidos e teste ergoespirométrico por portadores de DM 1. CASUÍSTICA E MÉTODOS: Dez portadores de DM1, de ambos os sexos, com idade entre 16 e 45 anos, sem complicações da doença. Os pacientes foram submetidos ao teste ergoespirométrico máximo (TE) e a 40 sessões de exercícios aeróbios (A) ou resistidos (R). As sessões foram realizadas no período pós-prandial do almoço e nestes dias, os pacientes foram orientados pela equipe médica a reduzir: 1U (se dose <20U) ou 2U (se dose >20U) da insulina basal (NPH) da manhã e 50 a 75% da insulina pré-prandial ultra-rápida (UR) do almoço; não houve redução para o TE. Os pacientes mediam a glicemia capilar antes, durante (se, necessário) e após as sessões. RESULTADOS: Os exercícios aeróbios promoveram uma queda maior na GC (67 mg/dL), quando comparada a queda causada pelos exercícios resistidos (37mg/dL) (p=0,047). A correlação entre os dados obtidos pelo CGMS e pelo glicosímetro durante o exercício é significativa (p<0,001), positiva e direta (r=+0,925). A freqüência cardíaca e a pressão arterial sistólica apresentaram aumento durante A (p<0,001), não apresentando diferença para R. A pressão arterial diastólica não mostrou diferença em nenhum dos dois grupos. A freqüência média de consumo [(A=19,8) e (R=16,7)] e a quantidade de gel [(A=28,2) e (R=21,3)] utilizada durante o período de treinamento foram similares em ambos os grupos. A freqüência de hipoglicemias foi igual em ambos os grupos [(A=1,5) e (R=1,5)] durante o treinamento, não apresentando diferenças em relação às reduções de dose de insulina UR ou período de treinamento. As respostas crônicas foram obtidas ao final do período de treinamento (40 sessões): o controle glicêmico (HbA1c), o perfil lipídico (colesterol total, triglicérides, HDL, LDL, VLDL) e os parâmetros antropométricos não foram influenciados pelo treinamento. Os níveis médios de microalbuminúria em repouso não modificaram, mas os níveis médios de microalbuminúria induzida pelo exercício praticamente dobraram. CONCLUSÕES: O grupo A apresentou maior declínio da glicose quando comparado ao grupo R. O CGMS pode ser considerado um método acurado para a sua utilização durante o exercício. O comportamento da freqüência cardíaca e pressão arterial foram similares aos não portadores de diabetes. O protocolo de redução de insulina se mostrou efetivo durante o período de treinamento. Houve mudanças na composição corporal detectadas pelo DEXA / Background and Aims: For type 1 diabetes patients is essential self monitoring of blood glucose and adjustment of carbohydrate intake and insulin dose for exercise practice. The aim of this study was to assess glucose variability during: spiroergometric test (ST) and aerobic (A) and resistance exercises(R). Materials and Methods: 10 DM1 patients performed ST, and 40 A and R bouts and they reduced their insulin dose in A and R exercise days. Results: Glycemia variation groups were: A=67mg/dL and R=37mg/dL. Heart rate and systolic blood pressure increased during A. Diastolic blood pressure was not modified. Glycemic control, lipids and body measurements were not influenced by training. Conclusions: Aerobic and resistance exercise produced glycemia reduction but glycemia fall was higher during aerobic exercise bouts when compared with resistance exercise bouts