Made available in DSpace on 2016-12-08T16:44:49Z (GMT). No. of bitstreams: 1 PGPV15MA176.pdf: 1494826 bytes, checksum: ef728a2a2f60b3d2604505de45449976 (MD5) Previous issue date: 2015-07-10 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / This study was carried out to evaluate the effects of apple orchard protection by different anti-hail nets on yield, and physico-chemical and functional quality of the fruits. Maxi Gala and Fuji Kiku8 apple trees were left uncovered, and covered with white, black and red anti-hail nets during the growing seasons of 2013/2014 and 2014/2015, in Vacaria, RS. Black and red nets reduced the photosynthetically active radiation in comparison to white net. Black net reduced yield in Maxi Gala but not in Fuji Kiku 8 apple trees. Black net in Maxi Gala and red net in Fuji Kiku 8 increased the starch-iodine index of the fruit at harvest in comparison to uncovered plants. Black net reduced the soluble solids content and flesh firmness of the fruit at harvest in Maxi Gala , while the red net reduced flesh firmness of the fruit at harvest in Fuji Kiku 8 . In both cultivars, the shading caused by the black net reduced the red color of the fruit (intensity and surface covered with red color), while black and red nets delayed the loss of green background color of the skin. Black and red nets reduced the contents of anthocyanins and phenolic compounds of the skin in Maxi Gala apples but not in Fuji Kiku 8 apples at harvest. The antioxidant activity assessed by DPPH method in the skin tissue of the fruit in both cultivars was also impaired by protecting the orchard with anti-hail nets. The use of anti-hail nets, regardless of color, reduced the phenolic compounds and antioxidant activity in the pulp tissue of Maxi Gala apples, especially after storage. In Fuji Kiku 8 , the orchard protection with white net provided higher values of total phenolic compounds and antioxidant activity, assessed at harvest and after storage in the skin and pulp tissues of the fruit, compared to black net, red net and control. The white net is more suitable for orchard protection in the region of Vacaria than the other nets, by impairing to a less extend the light supply and, therefore, yield and quality of fruits in both cultivars / Este estudo foi conduzido com objetivo de avaliar a influência do uso de telas antigranizo sobre a produção, qualidade físico-química e qualidade funcional em frutos de macieiras cobertas com diferentes telas antigranizo. Foram utilizadas macieiras Maxi Gala e Fuji Kiku8 sem cobertura e cobertas com telas nas cores branca, preta e vermelha, durante as safras 2013/2014 e 2014/2015, em Vacaria, RS. O uso de tela antigranizo nas cores preta e vermelha ocasionou maior redução na radiação fotossinteticamente ativa em relação a tela branca. A tela preta reduziu a produção em macieiras Maxi Gala , mas não em macieiras Fuji Kiku 8 . O uso da tela preta em macieiras Maxi Gala e de tela vermelha em Fuji Kiku 8 aumentou o índice iodo-amido dos frutos em relação às plantas descobertas. A tela preta reduziu o acúmulo de sólidos solúveis e a firmeza de polpa em Maxi Gala , enquanto a tela vermelha diminuiu a firmeza de polpa em maçãs Fuji Kiku 8 . Em ambas as cultivares, o sombreamento ocasionado pela tela preta reduziu a intensidade e a superfície recoberta com vermelho do fruto, enquanto as telas nas cores preta e a vermelha promoveram manutenção da cor de fundo verde. As telas preta e vermelha reduziram o acúmulo de antocianinas e de compostos fenólicos totais na casca de maçã Maxi Gala na colheita, mas não em maçãs Fuji Kiku 8 . A atividade antioxidante, quantificada pelo método DPPH, na casca de ambas as cultivares, também foi reduzida com a cobertura do pomar. O uso de tela antigranizo, independente da cor, reduziu o acúmulo de compostos fenólicos totais e a atividade antioxidante na polpa de maçãs Maxi Gala , principalmente após o armazenamento. Frutos de plantas cobertas com tela branca apresentaram maiores valores de compostos fenólicos totais e atividade antioxidante na casca e polpa de maçãs Fuji Kiku 8 , em relação aos frutos das telas preta e vermelha e do controle, na colheita e após o armazenamento. A tela branca, em relação as demais, é a mais indicada para a cobertura de pomares de maçã na região de Vacaria, por disponibilizar maior radiação as plantas, afetando em menor grau a produção e a qualidade dos frutos, em ambas as cultivares

Made available in DSpace on 2016-12-08T16:44:50Z (GMT). No. of bitstreams: 1 PGPV14MA170.pdf: 522011 bytes, checksum: 2173494e31fc21edd599369811f768f5 (MD5) Previous issue date: 2014-12-12 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / O aumento na cadeia produtiva da maçã levou-nos a alguns problemas, pois a maturação dos frutos se encontra em um curto período de tempo. Como alternativa, utiliza-se inibidores da síntese (aminoetoxivinilglicina; AVG) e ação (1-metilciclopropeno; 1-MCP) do etileno, que possibilitam o escalonamento da colheita e reduzem a queda pré-colheita de maçãs. Porém, o AVG, segundo alguns estudos, tem ocasionado o aumento da suscetibilidade das folhas a Mancha de Glomerella (MFG). Portanto, este trabalho teve como objetivo verificar se há uma relação direta dos compostos AVG e 1-MCP sobre o desenvolvimento do patógeno causador da MFG; avaliar o efeito do tratamento pré-colheita com AVG e 1-MCP na suscetibilidade de macieiras Gala a MFG; e comparar a resposta da aplicação pré-colheita de AVG e 1-MCP em folhas de macieira Gala , na ocorrência de MFG e de doenças pós-colheita nos frutos. O estudo foi realizado em Vacaria-RS na safra 2013/2014. Nos experimentos in vitro, determinou-se as unidades formadoras de colônia (UFC) e o crescimento micelial com tratamentos de AVG e 1-MCP, ambos nas concentrações 0, 10, 30, 90 e 270 mg i.a L-1. Nos frutos, folhas destacadas e plântulas aplicou-se os compostos de AVG (125 mg i.a L-1) e 1-MCP (150 mg i.a L-1), dois dias antes e dois dias após a inoculação. Os frutos foram armazenados por 15 dias em câmara BOD a 22 ± 2 °C, e avaliados quanto ao número de lesões/fruto. As folhas destacadas e plântulas foram mantidas por 24 horas em câmara úmida após a inoculação, e avaliadas quanto à incidência e severidade da doença no sétimo dia após inoculação. Em mudas de macieira Gala , sobre porta-enxerto EM9, com um ano de idade, os tratamentos foram realizados dois dias antes da inoculação com o patógeno, sendo utilizado os compostos AVG e 1-MCP, ambos nas doses 125 e 250 mg i.a L-1. Avaliou-se a incidência e severidade de MFG aos 7, 9, 12, 14, 16 e 19 dias após inoculação. Para a avaliação do efeito do AVG e 1-MCP no campo, utilizou-se dois pomares, um de três anos de idade e outro de 15 anos de idade, sendo que a aplicação de ambos os compostos se deu em duas concentrações, 125 e 250 mg i.a L-1, realizadas em dois estádios fenológicos, sendo eles aos 28 e 7 dias antes da data prevista para a colheita. Avaliou-se a incidência e severidade da doença quinzenalmente, durante os meses de janeiro a maio de 2014. A utilização dos compostos AVG e 1-MCP não interferiram no desenvolvimento da colônia em condições in vitro. Nos frutos a utilização dos compostos inibidores da síntese/ação do etileno, proporcionou um aumento na incidência da doença, quando a aplicação antecedeu a inoculação. Houve uma maior incidência da MFG, quando a inoculação ocorre após a aplicação do AVG. O 1-MCP apresentou níveis menores de severidade de MFG em relação ao AVG. A utilização no pomar de AVG e 1-MCP na safra de 2013/2014 não provocou um aumento significativo na incidência e severidade de MFG, devido às condições climáticas não favoráveis para a ocorrência da doença

Made available in DSpace on 2016-12-08T16:44:50Z (GMT). No. of bitstreams: 1 PGPV15MA167.pdf: 1943077 bytes, checksum: 8ce4ff65e029760895401dac8b179e50 (MD5) Previous issue date: 2015-05-29 / The quality of apples at the point of consumption varies according to the interaction between the maturity stage at harvest and the proper use of storage technologies. As a result, the ideal harvest and the most appropriate technologies for maximum quality apples at harvest and after storage should be established before the release of new cultivars. Through breeding Agricultural Research and Rural Extension Company of Santa Catarina (EPAGRI) launched several cultivars and others selections are in the final evaluation. The M-15/07 is one of these selections at pre-release and it was used as subject of this study. Two independent experiments were performed. The first was realized looking for to determine the maturation indices at the ideal point of harvest of apples M-15/07 destined for cold storage during long periods under controlled atmosphere (CA). The fruits were harvested weekly at 121 to 153 DAFB (days after full bloom). These fruits were stored for seven months at CA (1,5 kPa O2 and 1,5 kPa CO2, temperature of 0,7±0,5º C and relative humidity of 93±3 %), and the fruit quality characters were evaluated at the day after each collection and at the end of storage, after one and seven days at ambient conditions. The second experiment was realized aiming to determine the method and the storage potential of the apples M-15/07 in different conditions. The fruits were harvested on a single date, and they were or not treated with 1- methylcyclopropene (1-MCP), and then stored in atmosphere of air (AA; temperature of 0,5±0,5º C and relative humidity of 85±5 %) or controlled atmosphere (CA; 1,5 kPa O2 and 1,5 kPa CO2, temperature of 0,7±0,5º C and relative humidity of 93±3 %). The fruits were analyzed after 85, 142, 204 and 270 days of storage, followed by seven days at 20º C. According to the first experiment, the optimal harvesting point of apples M- 15/07 stored for long periods at CA occurred between 121 and 138 DAFB. Maturity indices for this period ranged from 18,3 to 17,2 lb (81,4 to 76,5 N) for firmness, 11,7 to 12,8 % for soluble solids, 0,301 to 0,259 % for titratable acidity (TA), 4,7 to 8,2 for starch content, and 2,2 to 2,7 for the epidermis background color. According to the second experiment, apples M-15/07 , when in cold storage under an atmosphere of air (AA) have presented lower maintenance of quality, since the respiratory and ethylene production rate in this situation was quite high and the fruit quality parameters, such as firmness pulp, titratable acidity, and soluble solids, were lower before the other treatments, associated with the background color more yellowish skin. The fruits of selection M-15/07 were treated with 1-MCP and storage in AA or in cold storage under controlled atmosphere (CA) or storage in CA without 1-MCP treatment, presented lower respiratory ethylene production rates and higher TA and SS content. The use of 1-MCP was beneficial for maintaining the firmness of the apples M- 15/07 . The disorders and diseases, in general, were checked after 270 days of storage, considered the limited period of storage for apples M-15/07 in this study / A qualidade de maçãs no ponto de consumo varia em função da interação entre o estádio de maturação na colheita e o uso adequado de tecnologias de armazenagem. Em função disso, o ponto ideal de colheita e as tecnologias mais adequadas para atingir a máxima qualidade de maçãs na colheita e após a armazenagem devem ser estabelecidos antes do lançamento de novas cultivares. Através do melhoramento genético a Empresa de Pesquisa Agropecuária e Extensão Rural de Santa Catarina (EPAGRI) lançou diversas cultivares e outras estão em fase final de avaliação. A M-15/07 é uma dessas seleções em prélançamento, e foi adotada como objeto dos estudos. Foram realizados dois experimentos independentes. O primeiro objetivou a determinação dos índices de maturação visando o ponto ideal de colheita de maçãs M-15/07 destinadas para a armazenagem refrigerada sob atmosfera controlada (AC) por longos períodos. Os frutos foram colhidos, semanalmente, no período de 121 a 153 DAPF (dias após a plena floração). Os frutos foram armazenados por sete meses em AC (1,5 kPa de O2 e 1,5 kPa de CO2, temperatura 0,7±0,5º C e umidade relativa do ar de 93±3 %), e avaliados no dia seguinte a cada colheita e no final da armazenagem, após um e sete dias em condição ambiente. O segundo experimento teve como objetivo a determinação do método e do potencial de armazenagem dos frutos da seleção M-15/07 em diferentes condições. Os frutos, colhidos em uma única data, foram tratados ou não com 1- metilciclopropeno (1-MCP) e armazenados em atmosfera do ar (AA; temperatura de 0,5±0,5º C e umidade relativa do ar de 85±5 %) ou em atmosfera controlada (AC; 1,5 kPa de O2 e 1,5 kPa de CO2, temperatura de 0,7±0,5º C e umidade relativa do ar de 93±3 %). Os frutos foram analisados após 85, 142, 204 e 270 dias de armazenagem, seguido de sete dias a 20º C. De acordo com o primeiro experimento, o ponto ideal de colheita de maçãs M-15/07 armazenadas por longos períodos em AC ocorreu entre 121 e 138 DAPF. Os índices de maturação para esse período variaram de 18,3 a 17,2 lb (81,4-76,5 N) para firmeza, de 11,7 a 12,8 % para sólidos solúveis, de 0,301 a 0,259 % para acidez titulável, de 4,7 a 8,2 para índice de amido e de 2,2 a 2,7 para cor de fundo da epiderme. De acordo com o segundo experimento, as maçãs M-15/07 , quando em armazenagem refrigerada sob atmosfera do ar (AA) apresentaram menor conservação e menor manutenção da qualidade, uma vez que a taxa respiratória e de produção de etileno nessa situação mostrou-se elevada, e os parâmetros de qualidade de fruto, como a firmeza de polpa, a acidez titulável, e os teores de sólidos solúveis foram menores diante dos demais tratamentos, associado à cor de fundo da epiderme mais amarelada. Os frutos da seleção M-15/07 armazenados em AA ou em armazenagem refrigerada sob atmosfera controlada (AC) tratados com 1-MCP e frutos armazenados em AC não tratados com 1-MCP apresentaram menores taxas respiratória e de produção de etileno, e maiores teores de AT e SS. O uso do 1-MCP foi benéfico para a manutenção da firmeza de polpa dos frutos da seleção de macieira M-15/07 . Os distúrbios e podridões, de maneira geral, foram verificados após 270 dias de armazenagem, sendo esse o limite de tempo recomendado para o armazenamento de maçãs M-15/07

A mosca domestica (Musca domestica) é um dos insetos largamente distribuído e conhecido pelo homem. A larva de M. domestica possui no conteúdo luminal do ventrículo anterior e médio uma atividade proteolítica com pH ótimo entre 3,0 3,5 e propriedades cinéticas similares a catepsina-D. Três cDNAs codificantes para preprocatepsina-D (ppCAD1, ppCAD2 e ppCAD3) foram clonados a partir de uma biblioteca de cDNA ventricular de larvas de M. domestica. As sequências possuem o peptídeo sinal, o propeptídeo e a enzima madura contendo os resíduos catalíticos e todos os resíduos de ligação ao substrato conservados, achados em uma catepsina-D lisossomal bovina. Um cladograma de sequências de aminoácidos de catepsinas-D de insetos e vertebrados depositados no GENBANK formou um grande grupo dividido em duas ramificações monofiléticas: Uma com sequências de vertebrados e a outra com sequências de catepsinas-D lisossomais de insetos incluindo a ppCAD1. A sequência do pepsinogênio humana, ppCAD2, ppCAD3 e uma sequência de D. melanogaster são excluídas desse grande grupo indicando uma função não lisossomal para essas sequências. ppCAD3 deve corresponder a uma catepsina-D digestiva encontrada no conteúdo luminal em larvas do inseto devido: (1) Análise por RT-PCR indicam que os transcritos codificantes para a CAD3 são expressos no ventrículo anterior e porção proximal do ventrículo médio. (2) pCAD3 recombinante após autoativação sob condições ácidas possui um pH ótimo entre 2,5 3,0 que é próximo ao pH luminal do ventrículo médio onde essa enzima atua. (3) Imunoblots das proteínas de diferentes tecidos e marcadas com o anticorpo preparado contra a pCAD3 foi positiva apenas nos tecidos e conteúdo do ventrículo anterior e médio. (4) CAD3 é localizada pela técnica de imuno-ouro no interior de vesículas de secreção e próxima a microvilosidades nas células do ventrículo anterior e médio. Esses dados suportam a idéia que ao se adaptar a um hábito detritivo, a CAD digestiva da mosca (e de outros Diptera Cyclorrhapha) resultou do mesmo gene ancestral da catepsina-D lisossomal intracelular, da mesma forma que se acredita que ocorreu com a pepsina em vertebrados. Uma limitada quantidade de informações de sequências de DNA e aspectos moleculares de M. domestica é disponível até o presente momento. Nós então propusemos gerar sequências de ESTs a partir de uma bibilioteca de cDNA ventricular da larva desse inseto. Um total de 826 ESTs randomicamente selecionados presentes no ventrículos de larvas de M. domestica foram seqüenciados e analisados com programas de bioinformática e separado em 323 clusters. As sequências foram manualmente anotadas e separadas em 3 categorias: (S) produtos provavelmente secretados, (H) produtos de metabolismo em geral (housekeeping) e (U) produtos sem função conhecida. Cento e sessenta clusters (423 ESTs) codificavam para proteínas secretadas tais como: lisozimas, lipases, tripsinas, quimotripsinas, dipeptidades, carboxipeptidase e α-amilases. Cento e trinta e dois clusters (190 ESTs) codificavam para sequências de metabolismo em energético, síntese de proteínas, transdução de sinal e outras funções celulares. Noventa e cinco clusters (231 ESTs) codificaram para proteínas sem similaridades com proteínas conhecidas no banco de dados. Estudos de expressão, localização e imunocitoquímica de sequências alvos deverão no futuro nos fornecer um melhor entendimento da fisiologia digestiva da larva de Musca domestica em detalhes moleculares. Uma enzima lipolítica (LipMD) foi identificada no item anterior. A sequência de aminoácidos obtidas é homóloga a lipases e contém os três bem conservados resíduos de aminoácidos que compõe a tríade catalítica (Ser183, His273 e Asp208) para esse grupo de enzimas. O fragmento de cDNA codificante para a LipMD foi clonado em vetor pAE (Ramos et al., 2004) e expresso em E. coli produzindo uma enzima com massa molecular de 37,3 kDa. A LipMD recombinante foi purificada e é capaz de hidrolizar tributirina e um grande número de substratos (pNP-acetato a pNP-esterato) e possui um pH ótimo próximo de 7,5. Analise por RT-PCR mostrou que os transcritos codificantes para a LipMD são expressos apenas no ventrículo anterior. Western-blots após SDS-PAGE das proteínas de vários tecidos e marcados com o anticorpo produzido contra a LipMD revelou a ocorrência da enzima principalmente no conteúdo luminal do ventrículo anterior. A LipMD é localizada pela técnica de imuno-ouro no interior de vesículas de secreção próximas a microvilosidades no interior das células do ventrículo anterior. Esta enzima pode atuar como uma enzima lipolítica digestiva secretada nessa região do ventrículo de larvas de M. domestica / The house fly, Musca domestica is one the best known and most widely distributed insects known to humans. M. domestica larvae display in anterior and middle midgut contents, a proteolytic activity with pH optimum of 3.0-3.5 and kinetical properties like cathepsin-D. Three cDNAs coding for preprocatepsin D-like proteinases (ppCAD1, ppCAD2, ppCAD3) were cloned from a M. domestica midgut cDNA library. The sequences encoding the signal peptide, propeptide and mature enzyme having all conserved catalytic and substrate binding residues found in bovine lysosomal cathepsin-D. A cladogram of sequences of insect and vertebrate cathepsin-D-like proteinases deposited on GENBANK form a large grouping divided into two monophyletic branches: one with vertebrate and the other with insect lysosomal sequences including ppCAD1. Human pepsinogen, ppCAD2, ppCAD3, and a sequence from Drosophila melanogaster are excluded indicating a nonlysosomal function for them. CAD3 should correspond to the digestive CAD found in enzyme assays because: (1) The mRNA for CAD3 is expressed (RT-PCR) only in the anterior and proximal middle midgut. (2) Recombinant pCAD3, after auto activation has a pH optimum of 2.5-3.0 that is close to the luminal pH of M. domestica midgut. (3) Immunoblots of proteins from different tissues and stained with antiserum prepared against recombinant pCAD3 were positive only for the anterior and middle midgut tissue and contents. (4) CAD3 is localized with immunogold labeling inside secretory vesicles and around microvilli in anterior and middle midgut cells. The data support the view that on adapting to a detritivorous habit M. domestica digestive CAD (and of other Diptera Cyclorrhapha) resulted from the same archetypical gene as the intracellular cathepsin-D, paralleling what happened with vertebrates. A limited amount of data regarding DNA sequences and molecular aspects of Musca domestica species is avaliable. We proposed to generate ESTs sequences from a cDNA library constructed from larval midguts. A total of 826 randomly selected midgut derived cDNAs were sequenced and assembled based on their similarities into 323 clusters. The sequences were classified into three categories: (S) probably secretory products, (H) housekeeping products and (U) products with unknown cell localization and function. One hundred and sixty clusters (423 ESTs) encode putative secreted proteins such as lysozymes, lipases, trypsins, chymotrypsins, dipeptidases, carboxypeptidases A and α-amylases. One hundred and thirty two clusters (190 ESTs) encode housekeeping sequences associated with energy metabolism, protein syntesis, signal transduction and other cellular functions. Ninety five clusters (213 ESTs) encode proteins with no similarity with known proteins. Expression and high-throughput bioassay screening of target sequences must provide us with a better understanding of the digestive physiology of Musca domestica midgut larvae, in molecular detail. A lipolytic enzyme (LipMD) was identified from expressed sequence tags (EST) constructed from midgut larvae cDNA library. The deduced amino acid sequence is homologous to lipases and contained the three well-conserved amino acid residues, Ser183, His273, and Asp208, which form the catalytic triad of the enzyme. The cDNA fragment encoding for LipMD was cloned into a pAE vector (Ramos et al., 2004) and expressed in E. coli producing an enzyme with a molecular mass of 37.3 kDa. The recombinant LipMD was purified and was able to hydrolyse tributyrin and a broad range of substrates, from C2 to C18 p-nitrophenyl-esters and displayed an optimal pH of approximately 7.5. RT-PCR analysis in tissue homogenates (anterior, middle and posterior midguts, hemolymph, fat body and Malpighian tubules) showed that LipMD mRNA transcripts were expressed only in anterior midgut. Western-blots after SDS PAGE of proteins from different tissues and stained with anti-LipMD serum revealed that the enzyme occurs mainly in the anterior midgut lumen. LipMD is localized with immunogold labeling inside secretory vesicles and around microvilli in anterior midgut cells. LipMD is a candidate to be the digestive lipolytic enzyme found in that midgut region

Orientador: Miriam Dupas Hubinger / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-08-19T05:28:02Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Chiumarelli_Marcela_D.pdf: 10154093 bytes, checksum: 4be89909f1529f8962f3865aa403c013 (MD5) Previous issue date: 2011 / Resumo: Este estudo visou formular uma cobertura comestível à base de fécula de mandioca, cera de carnaúba e ácido esteárico ou palmítico, avaliando suas propriedades e seus efeitos quando aplicados em maçãs minimamente processadas. Em uma primeira etapa, foram realizados delineamentos Plackett-Burman para seleção das seguintes variáveis para formulação das coberturas: porcentagem de fécula de mandioca (1 a 3% p/p), porcentagem de glicerol (0 a 2% p/p), razão entre cera de carnaúba e ácido graxo (0,16:0,84 a 0,64:0,36% p/p), velocidade (8000 a 16000 rpm) e tempo de emulsificação (1 a 5 minutos). Destas variáveis, a porcentagem de fécula de mandioca (2 a 4% p/p), porcentagem de glicerol (1 a 3% p/p) e razão cera de carnaúba: ácido graxo (0:0 a 0,40:0,60% p/p) foram selecionadas para compor delineamentos compostos centrais rotacionais (DCCR) 2³, um para cera de carnaúba e ácido esteárico e outro para cera de carnaúba e ácido palmítico, fixando o tempo e a velocidade de emulsificação em 3 minutos e 12.000 rpm, respectivamente. Os delineamentos visaram a seleção de formulações de coberturas através da avaliação da estabilidade à cremeação e tamanho médio das gotas lipídicas das soluções filmogênicas, propriedades mecânicas, cor, solubilidade e umidade dos filmes formados, taxa respiratória de fatias de maçã com coberturas e resistência ao vapor de água das coberturas aplicadas sobre cilindros de maçã. Quatro formulações com ácido esteárico na região otimizada foram selecionadas para a etapa de validação. A formulação composta por 3% (p/p) de fécula de mandioca, 1,5% (p/p) de glicerol, 0,2% (p/p) de cera de carnaúba e 0,8% (p/p) de ácido esteárico foi selecionada para a etapa seguinte, pois apresentou coberturas com boas propriedades de barreira, boa estabilidade e distribuição de lipídios na emulsão, filmes com boas propriedades ópticas, mecânicas, térmicas, físicas e estruturais. No estudo da vida útil de maçãs minimamente processadas, foram aplicados nas amostras os tratamentos: Controle (amostras apenas sanitizadas); ACAA (imersão em 1% de ácido cítrico e 1,5% de ácido ascórbico); FM (imersão em solução de ácidos cítrico e ascórbico e cobertura à base de 3% de fécula de mandioca e 1,5% de glicerol) e FMC (imersão em solução de ácidos cítrico e ascórbico e cobertura selecionada na validação do planejamento experimental). Os efeitos dos tratamentos sobre a taxa respiratória, perda de peso, propriedades mecânicas, cor, sólidos solúveis totais, pH, acidez total titulável, vitamina C, atividade de água, umidade, estrutura celular, crescimento microbiano e aceitação sensorial das fatias de maçã estocadas a 5 °C durante 12 dias, além da determinação composição gasosa das embalagens foram avaliados. A aplicação de ácidos cítrico e ascórbico foi eficiente na redução do escurecimento enzimático, e sua associação com a cobertura à base de fécula de mandioca e lipídios promoveu eficaz diminuição da taxa respiratória e da perda de peso e de vitamina C, manutenção das propriedades mecânicas e da estrutura celular. A adição de lipídios no tratamento FMC não alterou o sabor e aroma das amostras, alcançando uma vida útil de 5 dias atestada sensorialmente. As amostras ACAA e FM não diferiram estatisticamente do controle na maioria das análises, apresentando apenas manutenção da coloração e menores perdas de vitamina C devido ao uso de agentes antioxidantes, obtendo também uma vida útil de 5 dias. O controle apresentou grande escurecimento enzimático e perda de textura, sendo rejeitado sensorialmente após 1 dia de estocagem / Abstract: This study aimed at formulating a cassava starch, carnauba wax and stearic acid or palmitic acid - based edible coating, and evaluating their properties and their effects when applied to minimally processed apples. In a first step, Plackett-Burman designs were performed for the following variables selection of coating formulations: cassava starch concentration (1 - 3% w/w), glycerol percentage (0 - 2% w/w), carnauba wax and fatty acid ratio (0.16:0.84 ¿ 0.64:0.36% w/w), stirring speed (8000 - 16000 rpm) and emulsification time (1-5 minutes). The variables cassava starch concentration (2-4% w/w), glycerol percentage (1- 3% w/w) and carnauba wax: fatty acid ratio (0:0 to 0.40:0.60% w/w) were selected to compose two composite central rotational designs 2³ (CCRD), one for carnauba wax and stearic acid and the other for carnauba wax and palmitic acid, setting the emulsification time and stirring speed in 3 minutes and 12,000 rpm, respectively. The designs aimed at the coating formulations selection by evaluating physical stability and average lipid particle size of filmogenic solutions, mechanical properties, color, solubility and moisture of films, respiration rate of coated apple slices, surface solid density and water vapor resistance of coatings applied to apple cylinders. Four formulations with stearic acid in the optimized region were selected for the validation procedure. The formulation elaborated with 3% (w/w) of cassava starch, 1.5% (w/w) of glycerol, 0.2% (w/w) of carnauba wax and 0.8% (w/w ) of stearic acid was selected for the shelf life study, since it showed coatings with good barrier properties, good stability and distribution of lipids in the emulsion and films with good optical, mechanical, thermal, physical and structural properties. In the shelf life study of minimally processed apples, the following treatments were applied in samples: control (samples only sanitized); ACAA (immersion in 1% citric acid and 1.5% ascorbic acid), FM (immersion in citric and ascorbic acids solution and coating with 3% cassava starch and 1.5% glycerol) and FMC (immersion in citric and ascorbic acid solution and coating selected in the experimental design validation). The treatments effects on respiration rate, weight loss, mechanical properties, color, soluble solids, pH, total acidity, vitamin C, water activity, moisture, cell structure, microbial growth and sensory acceptance of sliced apples stored at 5 °C for 12 days, and the determination of packaging gas composition were evaluated. The citric and ascorbic acid application was effective in reducing enzymatic browning, and its association with the cassava starch and lipids based coating promoted effective decrease in respiration rate, weight and vitamin C loss, maintenance of mechanical properties and cellular structure. The lipids addition to FMC treatment did not affect taste or aroma of samples, achieving a shelf life of 5 days sensory attested. The ACAA and FM samples did not differ statistically from the control in most analysis, except on color maintenance and reduction of vitamin C loss due to the use of antioxidants, also obtaining a shelf life of 5 days. The control showed great enzymatic browning and texture loss, and was sensory rejected after 1 day of storage / Doutorado / Engenharia de Alimentos / Doutor em Engenharia de Alimentos

Made available in DSpace on 2014-08-20T13:59:10Z (GMT). No. of bitstreams: 1 dissertacao_rafael_hansen_madail.pdf: 1935975 bytes, checksum: 906f999870a0ef1b6bd50a13c3473a76 (MD5) Previous issue date: 2008-02-20 / The apple tree is characterized by the different floral structures. Several researches show a relationship between the production and fruit quality and the original fruiting structure. The aim of this study was to evaluate the relationship between the floral structure and the fruit quality in the cultivars Gala, Fuji and Daiane in the mild climatic conditions in the south of Brazil. Six types of fruiting structures were characterized according to their nature and the bud size: spur of weak bud and spur of vigorous bud, short twig of terminal growth of weak bud and short twig of terminal growth of vigorous bud and long twig of terminal growth of weak spur and vigorous spur. For these different structures, were evaluated characteristics related to the phenological development, like the average dates of each phenological state and the percentage of buds that reached the different phenological phases. Patterns related to the productive potential and the fruit quality were evaluated, like the sprout and fruit set index, bud abortion index and percentage of vegetative buds, leaf area, number of flower per cluster and the length / diameter ratio of the fruits. In Gala and Fuji cultivars, the long twigs had the earlier phenological development and in Daiane, the earlier structure to sprout were the spurs. But in the three cultivars the highest percentage of buds in each phenological phase were found in the long twigs. The long twigs showed the highest sprout and fruit set index, as well as the major number of flowers per cluster and leaf area in the three cultivars, while the spurs showed the lowest results. The highest bud abortion index was found in the spurs and the lowest in the long twigs. According to the data found for the fruit shape, no difference was found in the cultivars Gala and Fuji. In the cultivar Daiane, however, the fruits with the highest length / diameter ratio were found in the long twigs. / A macieira é caracterizada por apresentar diferentes estruturas florais. Vários estudos apontam uma relação entre a produção e a qualidade dos frutos com a estrutura frutífera de origem. O objetivo deste estudo foi avaliar a relação existente entre o órgão de frutificação e a qualidade do fruto nas cultivares Gala, Fuji e Daiane nas condições de clima ameno do sul do Brasil. Foram caracterizados seis tipos de estruturas frutíferas de acordo com a natureza e o diâmetro da gema (esporão de gema fraca e esporão de gema vigorosa, brindila curta de gema fraca e brindila curta de gema vigorosa, brindila longa de gema fraca e brindila longa de gema vigorosa). Nestas diferentes estruturas foram avaliados parâmetros ligados ao desenvolvimento fenológico, como as datas médias para cada um dos estádios de desenvolvimento e a percentagem de gemas que atingiram os diferentes estádios. Também foram avaliadas características relacionadas ao potencial de produção e a qualidade dos frutos, como o índice de brotação e frutificação efetiva, índice de abortamento, percentagem de gemas vegetativas, área foliar, número de flores por cacho floral e a razão entre o comprimento e o diâmetro dos frutos. Nas cultivares Gala e Fuji as estruturas que floresceram primeiro foram as brindilas longas, enquanto na cultivar Daiane as estruturas mais precoces foram os esporões. No entanto as três cultivares apresentaram a maior percentagem de gemas por estádio fenológico nas brindilas longas. As brindilas longas também foram as estruturas com maiores taxas de brotação e frutificação efetiva, bem como maior número de flores por cacho floral e maior área foliar nas três cultivares, enquanto os esporões apresentaram os menores resultados. O maior abortamento de gemas foi encontrado nos esporões, e o menor nas brindilas longas. Com relação ao formato dos frutos, não houve diferença entre as estruturas nas cultivares Gala e Fuji. Na cultivar Daiane, no entanto, os frutos com maior razão comprimento / diâmetro foram encontrados nas brindilas longas.

<p>Циљ савременог гајења јабуке је да се у засаду велике густине садње, заснованом са садницама високог квалитета које рађају већ у години садње, и савременим сортиментом који укључује и сорте склоне алтернативној родности, успоставе редовни и високи приноси који ће се кретати од 50-70 t/ha и добар квалитет плодова. Мера која је од највећег значаја за регулисање родности јесте хемијско проређивање цветова и плодова јабуке.<br />Циљ обављених истраживања је да се испита утицај хемијског проређивања цветова и плодова на заметање, квалитет плодова и родност пупољака сорти јабуке као и да се испита интеракција између минералне исхране азотом и хемијског проређивања. Резултати истраживања били би смернице за хемијско проређивање плодова у агроеколошким условима Србије, са тежњом да у скорој будућности постану део законске регулативе и припадајућих правилника за интегралну производњу, као и развој побољшаних формулација препарата за проређивање.<br />На основу испитивања проређивања цветова може се закључити да сорте јабуке бребурн и златни делишес различито реагују на примену ATS и KTS. Примена 3% ATS и 1,5% KTS код сорте бребурн изазива јаке ожеготине на листовима које могу бити узрок смањеној маси плода и слабијем образовању родних пупољака. Код сорте златни делишес ATS концентрације 3% не испољава негативно дејство на крупноћу плодова и родност пупољака, али са друге стране није ефикаснији од ATS нижих концентрација, док KTS има знатно слабије дејство.<br />Ефикасност препарата на бази NAA у смањењу заметања и приноса сорте јабуке бребурн није зависила од примењене концентрације, док је маса плода у свим варијантама била веома велика, те се за практичну примену могу препоручити ниже концентрације, до 10 &mu;l/l NAA. Сви третмани са NAA у распону концентрација од 8 до 12 &mu;l/l били су једнако ефикасни у редуковању заметања и приноса плодова, док је BA испољио слабију ефикасност у проређивању сорте јабуке камспур. Родност пупољака у третманима проређивања плодова сорти бребурн и камспур није сразмерна повећању концентрације препарата, већ у великој мери зависи од године испитивања.<br />Значајна интеракција је утврђена између фактора ђубрење и проређивање за параметре заметања плодова. Интеракција ова два фактора огледа се у томе да се у режиму интензивног ђубрења азотним ђубривима концентрација препарата на бази NAA и BA треба повећати како би се постигао задовољавајући ниво проређивања.<br />Додавање нафтенских киселина нафтилсирћетној киселини и бензиладенину значајно доприноси повећању просечне масе плода сорте јабуке златни делишес у односу на формулације без нафтенских киселина, као последица биолошке активности нафтенских киселина у смеши. Запажено је повећање чврстине плода у варијантама где је примењена формулација BA са нафтенским киселинама у односу на формулације без<br />нафтенских киселина.<br />Датум прихватања теме од стране Сената:<br />ДП<br />30.5.2013.<br />Чланови комисије:</p> / <p>Cilj savremenog gajenja jabuke je da se u zasadu velike gustine sadnje, zasnovanom sa sadnicama visokog kvaliteta koje rađaju već u godini sadnje, i savremenim sortimentom koji uključuje i sorte sklone alternativnoj rodnosti, uspostave redovni i visoki prinosi koji će se kretati od 50-70 t/ha i dobar kvalitet plodova. Mera koja je od najvećeg značaja za regulisanje rodnosti jeste hemijsko proređivanje cvetova i plodova jabuke.<br />Cilj obavljenih istraživanja je da se ispita uticaj hemijskog proređivanja cvetova i plodova na zametanje, kvalitet plodova i rodnost pupoljaka sorti jabuke kao i da se ispita interakcija između mineralne ishrane azotom i hemijskog proređivanja. Rezultati istraživanja bili bi smernice za hemijsko proređivanje plodova u agroekološkim uslovima Srbije, sa težnjom da u skoroj budućnosti postanu deo zakonske regulative i pripadajućih pravilnika za integralnu proizvodnju, kao i razvoj poboljšanih formulacija preparata za proređivanje.<br />Na osnovu ispitivanja proređivanja cvetova može se zaključiti da sorte jabuke breburn i zlatni delišes različito reaguju na primenu ATS i KTS. Primena 3% ATS i 1,5% KTS kod sorte breburn izaziva jake ožegotine na listovima koje mogu biti uzrok smanjenoj masi ploda i slabijem obrazovanju rodnih pupoljaka. Kod sorte zlatni delišes ATS koncentracije 3% ne ispoljava negativno dejstvo na krupnoću plodova i rodnost pupoljaka, ali sa druge strane nije efikasniji od ATS nižih koncentracija, dok KTS ima znatno slabije dejstvo.<br />Efikasnost preparata na bazi NAA u smanjenju zametanja i prinosa sorte jabuke breburn nije zavisila od primenjene koncentracije, dok je masa ploda u svim varijantama bila veoma velika, te se za praktičnu primenu mogu preporučiti niže koncentracije, do 10 &mu;l/l NAA. Svi tretmani sa NAA u rasponu koncentracija od 8 do 12 &mu;l/l bili su jednako efikasni u redukovanju zametanja i prinosa plodova, dok je BA ispoljio slabiju efikasnost u proređivanju sorte jabuke kamspur. Rodnost pupoljaka u tretmanima proređivanja plodova sorti breburn i kamspur nije srazmerna povećanju koncentracije preparata, već u velikoj meri zavisi od godine ispitivanja.<br />Značajna interakcija je utvrđena između faktora đubrenje i proređivanje za parametre zametanja plodova. Interakcija ova dva faktora ogleda se u tome da se u režimu intenzivnog đubrenja azotnim đubrivima koncentracija preparata na bazi NAA i BA treba povećati kako bi se postigao zadovoljavajući nivo proređivanja.<br />Dodavanje naftenskih kiselina naftilsirćetnoj kiselini i benziladeninu značajno doprinosi povećanju prosečne mase ploda sorte jabuke zlatni delišes u odnosu na formulacije bez naftenskih kiselina, kao posledica biološke aktivnosti naftenskih kiselina u smeši. Zapaženo je povećanje čvrstine ploda u varijantama gde je primenjena formulacija BA sa naftenskim kiselinama u odnosu na formulacije bez<br />naftenskih kiselina.<br />Datum prihvatanja teme od strane Senata:<br />DP<br />30.5.2013.<br />Članovi komisije:</p> / <p>The goal of modern apple growing in high density orchards, established with high-quality nursery trees which bear fruits in the year of planting, often including varieties prone to biennial bearing is to achieve high and regular yields that range from 50 to 70 t/ha with good fruit quality. Chemical thinning of flowers and fruits is a technical practice which is of great importance for crop regulation.<br />The aim of the research was to investigate the effect of chemical thinning of apple flowers and fruits on fruit set, fruit quality and bearing potential of apple buds as well as to examine the interaction between the nitrogen supply and chemical thinning treatments. The research will result with guidelines for the chemical thinning in agroecological conditions of Serbia, aiming to become a part of the legislation and associated regulations for integrated production in the near future. Testing of improved formulations of thinning chemicals will be included into expe rimental plan.<br />Considering the results derived from flower thinning experiments, it could be concluded that cv. Braeburn and Golden Delicious react differently to the application of ATS and KTS. Application of 3% ATS and 1.5% of KTS in cv Braeburn causes severe leaf burns that may be causing reduced fruit weight and a decrease in bearing potential. In cv Golden Delicious ATS applied at the concentration of 3% does not exhibit a negative effect on fruit size and bearing potential, but at the other side is not more efficient than ATS at lower concentrations, whereas KTS has a much weaker thinning effect.<br />The efficacy of NAA in reducing fruit set and yield of apple variety Braeburn is not dependent on the concentration applied, while fruit size was very large within the range of NAA concentrations. Therefore, for the practical application, concentrations lower than 10 ml/l NAA would be recommended. All treatments with NAA at concentrations ranging from 8 to 12 ml/l were equally effective in reducing fruit set and yield, while the BA exhibited decreased efficiency in thinning apple variety Camspur. Fertility of buds in Braeburn and Camspur varieties was not proportional to the increase in concentration of chemical, but to a large extent depends on the conditions of the experimental year.<br />An interaction between nitrogen supply and chemical thinning significantly affected fruit set in a way that concentration of NAA and BA for fruit thinning should be increased in order to achieve a satisfactory level of thinning at a higher level of nitrogen supply.<br />Adding of naphthenic acids to NAA and BA significantly contributed to the increase of average fruit weight of apple variety Golden Delicious compared to same chemical formulation without naphthenic acids, as a result of the biological activity of naphthenic acids in the mixture. An increase of fruit firmness was detected in thinning treatments where naphthenic acids were added to BA compared BA applied alone.</p>

O aumento na procura por produtos naturais pelo mercado farmacêutico, cosmético e alimentício demanda pesquisas no desenvolvimento desses produtos. Esses são direcionados à obtenção de substâncias de origem vegetal ou animal, assim como, para produtos biotecnológicos. Investigações quanto à atividade antibacteriana de proteínas e peptídeos são realizadas. Dentre essas substancias, podemos citar as lisozimas, proteínas que hidrolisam as ligações &#946; 1-4 glicosídicas entre o ácido N-acetilmurâmico e N-acetilglicosamina, presentes no peptidoglicano da parede celular bacteriana. Além disso, apresentam atividade de quitinase, ou seja, quebram a ligação glicosídica da quitina presente na parede fúngica. As lisozimas apresentam alta especificidade pela parede microbiana indicando aparente ausência de efeitos tóxicos aos humanos. Assim, tornando-a candidata a agente antimicrobiano em formulações cosméticas e farmacêuticas. A lisozima de ovo de galinha tem atividade antimicrobiana, entretanto não havia estudos relacionados com os micro-organismos contaminantes normalmente encontrados em produtos farmacêuticos e cosméticos. Além disso, a lisozima recombinante de Musca domestica (MdL1) não possui ainda sua atividade antimicrobiana definida. Os objetivos do trabalho foram:1) Obtenção da lisozima recombinante de Musca domestica (MdL1); 2) Avaliação a atividade antimicrobiana da MdL1 e de lisozima de ovo de galinha, Hen Egg White Lysozyme (HEWL), frente à Staphylococcus aureus (ATCC 6538), Micrococcus luteus (ATCC 4698), Pseudomonas aeruginosa (ATCC 9027), Escherichia coli (ATCC 8739), Candida albicans (ATCC 10231) e Aspergillus niger (ATCC 16404); 3) Avaliação da toxicidade da lisozima em cultura de células de fibroblastos (ATCC CCL-92). A MdL1 foi obtida por meio de expressão gênica em Pichia pastoris GS115 (Invitrogen), concentrada utilizando polietilenoglicol 6000 e dialisada contra água deionizada através da membrana com porosidade seletiva de 12kDa. A homogeneidade foi analisada por eletroforese em gel de poliacrilamida em condições desnaturantes; e a atividade catalítica foi avaliada utilizando células liofilizadas de Micrococcus luteus como substrato. A atividade antimicrobiana foi determinada por método específico para cada enzima. A toxicidade in vitro das amostras foi avaliada pela viabilidade celular de fibroblastos ATCC CCL-92. A MdL1 obtida apresentou características de homogeneidade adequadas e atividade de 108,35 U/mg. A HEWL mostrou-se ativa contra S. aureus, M. luteus e C. albicans. A MdL1 apresentou-se ativa contra M. luteus, apenas. Devido a ausência de atividade antimicrobiana a MdL1 não foi submetida a avaliação citotóxica. Em relação à HEWL não demonstrou citotoxicidade na avaliação prévia realizada. / The increase in the search for natural products by pharmaceutical, cosmetic and food markets requires researches in these products development. These are directed to obtaining substances of vegetal or animal origin, as well as biotechnological products. The research in relation to antibacterial activity of proteins and peptides is carried out. Among these substances, it is possible to mention the lysozyme, protein that catalyze the break of 1,4-beta-D glucosidic bond between N-acetylmuramic acid and N-acetilglicosamine which are present in peptidoglicane of the bacterial cell wall. Besides, there is kitinase activity, that is, they break the glicosidic bond of chitin which is present in fungal wall. The lysozymes show high specificity by microbial wall indicating apparent absence of toxicological effects to human beings. Therefore, it becomes the candidate to antimicrobial ingredient in cosmetic and pharmaceutical dosage forms. The hen egg white lysozyme has antimicrobial activity, however there were no studies related to spoiled microorganism usually found in pharmaceutical and cosmetic products. In addition, there were not studies about microbial activity of recombinant Musca domestica lysozyme 1 (MdL1). The aim of this research was: 1) To obtain MdL1; 2) Evaluation of MdL1 and hen egg white lysozyme (HEWL) antimicrobial activity against Staphylococcus aureus (ATCC 6538), Micrococcus luteus (ATCC 4698), Pseudomonas aeruginosa (ATCC 9027), Escherichia coli (ATCC 8739), Candida albicans (ATCC 10231) e Aspergillus niger (ATCC 16404); 3) Evaluation of lysozyme toxicity in fibroblast cells culture (ATCC CCL-92). The MdL1 was expressed as recombinant protein in Pichia pastoris GS115 (Invitrogen), concentrated using polyethylene glycol 6000 and dialyzed against deionized water through the selective porosity of 12kDa membrane. The homogeneity was analyzed by electrophoresis in sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE) and the catalytic activity was evaluated using lyophilized cells of Micrococcus luteus as substract. The antimicrobial activity was evaluated using specific methods for each enzyme. The sample toxicity was evaluated by cell viability using ATCC CCL-92 fibroblasts. The MdL1 obtained presented suitable homogeneity characteristics and activity of 108.35 U/mg. The HEWL has showed activity against S. aureus, M. luteus e C. albicans. MdL1 only showed activity against M. luteus. Due to the absence of antimicrobial activity of MdL1 in the evaluated concentration it was not submitted to the cytotoxicity test. Regarding HEWL, it has not showed citotoxicity in the previous test.

O aumento na procura por produtos naturais pelo mercado farmacêutico, cosmético e alimentício demanda pesquisas no desenvolvimento desses produtos. Esses são direcionados à obtenção de substâncias de origem vegetal ou animal, assim como, para produtos biotecnológicos. Investigações quanto à atividade antibacteriana de proteínas e peptídeos são realizadas. Dentre essas substancias, podemos citar as lisozimas, proteínas que hidrolisam as ligações &#946; 1-4 glicosídicas entre o ácido N-acetilmurâmico e N-acetilglicosamina, presentes no peptidoglicano da parede celular bacteriana. Além disso, apresentam atividade de quitinase, ou seja, quebram a ligação glicosídica da quitina presente na parede fúngica. As lisozimas apresentam alta especificidade pela parede microbiana indicando aparente ausência de efeitos tóxicos aos humanos. Assim, tornando-a candidata a agente antimicrobiano em formulações cosméticas e farmacêuticas. A lisozima de ovo de galinha tem atividade antimicrobiana, entretanto não havia estudos relacionados com os micro-organismos contaminantes normalmente encontrados em produtos farmacêuticos e cosméticos. Além disso, a lisozima recombinante de Musca domestica (MdL1) não possui ainda sua atividade antimicrobiana definida. Os objetivos do trabalho foram:1) Obtenção da lisozima recombinante de Musca domestica (MdL1); 2) Avaliação a atividade antimicrobiana da MdL1 e de lisozima de ovo de galinha, Hen Egg White Lysozyme (HEWL), frente à Staphylococcus aureus (ATCC 6538), Micrococcus luteus (ATCC 4698), Pseudomonas aeruginosa (ATCC 9027), Escherichia coli (ATCC 8739), Candida albicans (ATCC 10231) e Aspergillus niger (ATCC 16404); 3) Avaliação da toxicidade da lisozima em cultura de células de fibroblastos (ATCC CCL-92). A MdL1 foi obtida por meio de expressão gênica em Pichia pastoris GS115 (Invitrogen), concentrada utilizando polietilenoglicol 6000 e dialisada contra água deionizada através da membrana com porosidade seletiva de 12kDa. A homogeneidade foi analisada por eletroforese em gel de poliacrilamida em condições desnaturantes; e a atividade catalítica foi avaliada utilizando células liofilizadas de Micrococcus luteus como substrato. A atividade antimicrobiana foi determinada por método específico para cada enzima. A toxicidade in vitro das amostras foi avaliada pela viabilidade celular de fibroblastos ATCC CCL-92. A MdL1 obtida apresentou características de homogeneidade adequadas e atividade de 108,35 U/mg. A HEWL mostrou-se ativa contra S. aureus, M. luteus e C. albicans. A MdL1 apresentou-se ativa contra M. luteus, apenas. Devido a ausência de atividade antimicrobiana a MdL1 não foi submetida a avaliação citotóxica. Em relação à HEWL não demonstrou citotoxicidade na avaliação prévia realizada. / The increase in the search for natural products by pharmaceutical, cosmetic and food markets requires researches in these products development. These are directed to obtaining substances of vegetal or animal origin, as well as biotechnological products. The research in relation to antibacterial activity of proteins and peptides is carried out. Among these substances, it is possible to mention the lysozyme, protein that catalyze the break of 1,4-beta-D glucosidic bond between N-acetylmuramic acid and N-acetilglicosamine which are present in peptidoglicane of the bacterial cell wall. Besides, there is kitinase activity, that is, they break the glicosidic bond of chitin which is present in fungal wall. The lysozymes show high specificity by microbial wall indicating apparent absence of toxicological effects to human beings. Therefore, it becomes the candidate to antimicrobial ingredient in cosmetic and pharmaceutical dosage forms. The hen egg white lysozyme has antimicrobial activity, however there were no studies related to spoiled microorganism usually found in pharmaceutical and cosmetic products. In addition, there were not studies about microbial activity of recombinant Musca domestica lysozyme 1 (MdL1). The aim of this research was: 1) To obtain MdL1; 2) Evaluation of MdL1 and hen egg white lysozyme (HEWL) antimicrobial activity against Staphylococcus aureus (ATCC 6538), Micrococcus luteus (ATCC 4698), Pseudomonas aeruginosa (ATCC 9027), Escherichia coli (ATCC 8739), Candida albicans (ATCC 10231) e Aspergillus niger (ATCC 16404); 3) Evaluation of lysozyme toxicity in fibroblast cells culture (ATCC CCL-92). The MdL1 was expressed as recombinant protein in Pichia pastoris GS115 (Invitrogen), concentrated using polyethylene glycol 6000 and dialyzed against deionized water through the selective porosity of 12kDa membrane. The homogeneity was analyzed by electrophoresis in sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE) and the catalytic activity was evaluated using lyophilized cells of Micrococcus luteus as substract. The antimicrobial activity was evaluated using specific methods for each enzyme. The sample toxicity was evaluated by cell viability using ATCC CCL-92 fibroblasts. The MdL1 obtained presented suitable homogeneity characteristics and activity of 108.35 U/mg. The HEWL has showed activity against S. aureus, M. luteus e C. albicans. MdL1 only showed activity against M. luteus. Due to the absence of antimicrobial activity of MdL1 in the evaluated concentration it was not submitted to the cytotoxicity test. Regarding HEWL, it has not showed citotoxicity in the previous test.

Orientador: Hélio José Montassier / Banca: Clarice Weins Arns / Banca: Adolorata Aparecida Bianco Carvalho / Resumo: A bronquite infecciosa das galinhas (BIG) é uma doença infecciosa que está amplamente disseminada entre as criações avícolas brasileiras e é uma das enfermidades virais que mais têm causado perdas econômicas na atualidade. Portanto, a rápida detecção e identificação do agente causal são imprescindíveis para que medidas eficazes de controle sejam prontamente tomadas. Para tanto, é necessário que os métodos de diagnóstico empregados sejam sensíveis, específicos, rápidos e também de baixo custo. Nesse contexto, a técnica de RTPCR em tempo real abordada no presente estudo permitiu a amplificação de duas regiões de hipervariabilidade do gene S1 de 17 estirpes diferentes do vírus da BIG (VBI), que foram testadas, mas não foi capaz de amplificar nenhum dos RNAvírus heterólogos analisados (vírus da doença de Newcastle, pneumovírus aviário e vírus da doença de Gumboro). Com essa mesma técnica foi possível fazer a diferenciação em grupos geneticamente distintos, de estirpes do VBI através de análises das curvas de dissociação de fragmentos amplificados a partir das regiões de hipervariabilidade gênica I e II do gene S1. A RT-PCR em tempo real desenvolvida apresentou maior sensibilidade na detecção do VBI em amostras teciduais, quando comparada à técnica padrão de Isolamento Viral em ovos embrionados de galinha... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The avian infectious bronchitis virus (IBV) is an infectious disease widely spread in Brazilian commercial poultries where causes significant economical losses. Rapid and accurate diagnosis of the IBV strain involved in a field outbreak is necessary to establish an effective control of this disease. The real-time RT-PCR performed in this study to amplify two hypervariable regions of S1 gene, was able to detect 17 IBV strains, e.g., nine reference strains (including Massachussets, Connecticut, JMK, SE 17 and Iowa serotypes) and eight Brazilian field isolates, whilst non-related avian viral pathogens such as Newcastle disease virus, Avian Pneumovirus and Gumboro disease virus were not detected. The differentiation between IBV strains was accomplished using the melting curve analysis of the amplified fragments corresponding to the hypervariable regions I and II of S1 gene. The real-time RT-PCR developed here showed a higher rate of IBV detection in tissue samples of experimentally infected chickens, when compared to the goldstandard technique of Viral Isolation in embryonated chicken eggs, and the same rate of detection was found for the conventional RT-PCR... (Complete abstract, click electronic access below) / Mestre