Orientador: Ricardo de Lima Zollner / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-24T03:38:16Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Pedrosa_Denise_M.pdf: 2680300 bytes, checksum: 4372cb3695e33fb5ec7321200d7d6035 (MD5) Previous issue date: 2013 / Resumo: Empregando a linhagem de camundongos NOD (non-obese diabetic) de desenvolvimento espontâneo do diabetes mellitus tipo 1 (DM-1) e a linhagem NOD.Scid como controle, foi realizada a análise da expressão dos genes de regeneração Reg1 e Reg2 e a sua relação com a expressão dos Receptores Toll-Like (TLRs), além da análise do estresse oxidativo em ilhotas pancreáticas. Foram avaliados animais durante o desenvolvimento do diabetes com 2, 8 e 24 semanas de vida, além de camundongos diabéticos e do controle NOD.Scid. Houve aumento progressivo da insulite e do estresse oxidativo em função do tempo, além da diminuição drástica do número de ilhotas verificado em camundongos diabéticos. Os genes Reg1 e Reg2 apresentaram aumento da expressão em ilhotas pancreáticas de camundongos com 2 semanas de vida e nos animais diabéticos, assim como no controle NOD.Scid. Os receptores TLR2, TLR4, TLR5 e TLR6 foram expressos, com aumento significativo em animais com 8 e 24 semanas de vida, exceto para o TLR2 que apresentou expressão gênica reduzida em camundongos de 24 semanas de vida, sugerindo envolvimento na indução da fase de insulite. O animal diabético apresentou expressão reduzida em todos os TLRs analisados e expressão elevada dos genes Reg1 e Reg2 em ilhotas pancreáticas. Além disso, foi possível verificar o contraste de expressão de Reg1 e Reg2 frente aos TLRs no período pré-diabético, em que Reg1 e Reg2 apresentaram expressão gênica reduzida, enquanto os TLRs apresentaram expressão elevada. Em conjunto, estes dados sugerem possível associação entre a ativação dos TLRs e a redução da expressão dos genes de regeneração Reg1 e Reg2 na fase de indução da insulite, tornando-se necessário avaliar se os fatores inflamatórios afetam o balanço dos sistemas biológicos com consequente controle da capacidade regenerativa celular ou se a falha no sistema biológico age como fator primário de indução ao dano tecidual / Abstract: Employing the lineage of NOD mice (non-obese diabetic) which presents spontaneous development of diabetes mellitus type 1 (T1D) and the lineage NOD.Scid as a control, gene expression of regenerating genes Reg1 and Reg2 and their relation with expression of Toll-Like Receptors (TLRs) was performed, in addition to oxidative stress analysis in pancreatic islets. Animals were assessed during the T1D development at 2, 8 and 24 weeks-old and also in diabetic animals and NOD.Scid control. The insulitis and the oxidative stress process increased progressively with age, beyond the drastically decreased of islets number in diabetic animals. Analysis of oxidative stress in islets has been shown progressive with age and may be related to the development of diabetes. Reg1 and Reg2 genes were high expressed in islets of NOD mice aged 2 weeks-old, diabetic animals and NOD.Scid control. Receptors TLR2, TLR4, TLR5 e TLR6 were expressed in all animals, however mice aged 8 and 24 weeks-old showed a significant increase expression, being TLR2 an exception where there was low expression in mice aged 24 weeks-old which suggests that their expression should be related to the induction phase of insulitis. Diabetic mice showed reduced expression in all TLRs analyzed and high expression of Reg1 and Reg2 in pancreatic islets. Furthermore, Reg1 and Reg2 showed a contrast of expression when related to TLRs at pre-diabetic stage, with low expression of Reg1 and Reg2 and high expression of TLRs. Taken together, these results suggest a possible correlation between the activation of TLRs and the reduced expression of regenerating genes Reg1 and Reg2 in the induction phase of insulitis. Thus, studies are needed to elucidate whether inflammatory factors affect the balance of biological systems with consequent regenerative cell control capacity or if the failure in the biological system acts as a primary factor inducing tissue damage / Mestrado / Clinica Medica / Mestra em Clínica Médica

Orientador: Maria Julia Marques / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-19T19:42:06Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Machado_RafaelVentura_D.pdf: 18399994 bytes, checksum: 2db06c9364e5b215f2cf4f91753c4d19 (MD5) Previous issue date: 2011 / Resumo: Na distrofia muscular de Duchenne e no camundongo mdx a proteína distrofina está ausente ou é expressa de forma não funcional. Com isso, o complexo distrofina-glicoproteínas se desorganiza, a fibra muscular se torna frágil durante os ciclos de contração e relaxamento muscular, as concentrações intracelulares de cálcio e radicais livres se elevam, resultando em necrose da célula. A inflamação mediada por células do sistema imunológico e citocinas pró-inflamatórias, como o TNF-alfa, é um evento importante diretamente relacionado com a progressão da doença. O ácido eicosapentaenóico (EPA) é um ácido graxo poli-insaturado ômega-3 que promove benefícios em doenças inflamatórias em humanos. No presente trabalho analisamos os efeitos do EPA no estágio inicial da distrofinopatia do camundongo mdx. Camundongos mdx com 14 dias de idade receberam 300 mg/kg/dia de EPA por 16 dias. Os grupos controle mdx e C57BL10 receberam óleo mineral. EPA diminuiu a mionecrose, os níveis séricos da enzima creatinoquinase e o TNF-alfa em músculos esqueléticos distróficos. Sugere-se que o EPA tenha utilidade terapêutica nas distrofinopatias / Abstract: In Duchenne muscular dystrophy (DMD) and in the mdx murine model of DMD, lack of dystrophin leads to myonecrosis and cardiorespiratory failure. The intense inflammatory reaction, mediated by immune cells and TNF-alpha, contributes to the progressive myonecrosis. The eicosapentaenoic acid (EPA) is an omega-3 fatty acid that shows beneficial effects in inflammatory diseases. In the present study, we examined the effects of EPA on the early stages of dystrophy in mdx mice. Mdx mice (14 days old) received EPA at 300 mg/kg EPA for 16 days, while the control mdx mice and C57BL10 received vehicle. EPA treatment decreased creatine kinase and TNF-alpha levels and reduced myonecrosis. The present results support further studies with EPA as a potential therapy for dystrophinopathies / Doutorado / Anatomia / Doutor em Biologia Celular e Estrutural

Orientador: Maria Julia Marques / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-20T01:04:16Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Mauricio_AdrianaFogagnolo_M.pdf: 1763243 bytes, checksum: bb94a0eae96254b7325735da6a1f32c7 (MD5) Previous issue date: 2012 / Resumo: Na Distrofia Muscular de Duchenne (DMD) e no camundongo mdx, modelo experimental da DMD, a ausência de distrofina promove instabilidade do sarcolema e degeneração muscular progressiva. O processo inflamatório que se instala contribui de forma significativa para a fisiopatologia da doença, sendo que antiinflamatórios esteroides são amplamente utilizados para a terapia da DMD. Entretanto, em decorrência da sua ação pouco efetiva e dos efeitos colaterais outras drogas são investigadas com o objetivo de substituir o uso dos corticoides. Em estudo prévio, demonstramos que o ácido eicosapentaenoico, em uma forma altamente purificada, atenuou a mionecrose em músculos esqueléticos de camundongos mdx durante os estágios iniciais da doença. No presente trabalho, verificamos se diferentes formas de ácidos graxos disponíveis comercialmente para o consumo humano (cápsulas de ômega-3 e sementes de linhaça) também teriam efeito protetor nos músculos distróficos, principalmente nos estágios tardios da doença, em que há comprometimento do músculo cardíaco. Animais mdx jovens (14 dias de idade) receberam ômega-3 diariamente, durante 16 dias, via gavagem. Animais mdx idosos (8 meses de idade) receberam sementes de linhaça durante 5 meses. Animais controle mdx, jovens e idosos, receberam óleo mineral e nenhum complemento alimentar, respectivamente. Nos animais jovens, o ômega-3 melhorou a distrofinopatia, reduzindo a mionecrose e o processo inflamatório no músculo mais afetado, o diafragma. Nos animais idosos, a linhaça resultou em melhora da distrofinopatia no diafragma. Entretanto, a fibrose cardíaca, que caracteriza morfologicamente a cardiomiopatia dos animais idosos mdx, não foi alterada pela linhaça, provavelmente devido a diferenças de metabolismo de ácidos graxos entre os músculos esquelético e cardíaco. Sugere-se que ácidos graxos ômega-3, em formulações disponibilizadas comercialmente para uso humano, são potencialmente úteis para o tratamento das distrofinopatias dos músculos estriados esqueléticos, nos estágios inicial e tardio da doença / Abstract: In Duchenne muscular dystrophy (DMD) and in the mdx mice model of DMD, absence of dystrophin promotes instability of the sarcolemma and progressive muscle degeneration. The inflammatory process contributes significantly to the pathophysiology of the disease. Anti-inflammatory steroids are widely used for DMD therapy. However, due to its ineffective action and their side effects, other drugs are investigated in order to replace the use of corticosteroids. Previously, we have demonstrated that eicosapentaenoic acid in a highly purified form inhibit myonecrosis in skeletal muscles of mdx mice during the early stages of the disease. In the present study, we have verified whether different forms of commercially available fatty acids for human (capsules of omega-3 and flaxseed) would also have a protective effect in dystrophic muscles, especially in the later stages of the disease, when cardiac muscle is also affected. Young mdx mice (14 days old) received omega-3 daily for 16 days via gavage. Older mdx mice (8 months old) received flaxseed for 5 months. mdx control group, young and old, received mineral oil and no food supplement, respectively. In young mice, omega-3 inhibits the dystrophinopathy, reducing myonecrosis and inflammatory process in the most affected muscle, the diaphragm. In aged animals, flaxseed resulted in improvement of dystrophinopathy only in the diaphragm. In the dystrophic heart, flaxseed did not inhibit fibrosis, which is a feature of cardiomyopathy in older mdx mice. Possibly, differences in fatty acid metabolism between skeletal and cardiac muscles may explain these differential results. It is concluded that omega-3 fatty acids commercially available for human use are potentially useful for the treatment of skeletal muscle dystrophinopathy, during early and late stages of the disease / Mestrado / Anatomia / Mestre em Biologia Celular e Estrutural

Orientador: Maria Julia Marques / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-20T07:19:08Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Moreira_DrielendeOliveira_M.pdf: 2075338 bytes, checksum: 00bb5917e4f176b73c58453340cb3a5e (MD5) Previous issue date: 2012 / Resumo: A Distrofia muscular de Duchenne (DMD) é uma doença caracterizada pela fraqueza muscular progressiva que leva à insuficiência respiratória e cardíaca, resultando em morte por volta dos 30 anos de idade. No camundongo mdx, modelo experimental da DMD, os músculos diafragma e cardíaco são severamente afetados apresentando fibrose semelhante à observada na patologia humana. O objetivo deste trabalho foi investigar os efeitos do tratamento a longo prazo com suramina, uma droga anti-fibrótica, nos músculos diafragma e cardíaco de camundongos mdx idosos. Camundongos mdx (n=20; 8 meses de idade) receberam injeções intraperitoneais de suramina (60 mg/kg), durante 3 meses. Controles mdx (n=20; 8 meses) e C57BL/10 (n=18; 8 meses) foram injetados com solução salina. Os camundongos da linhagem C57BL/10 expressam distrofina e são utilizados como controle da linhagem mdx. A suramina diminuiu os níveis de CK e atenuou a perda da força muscular. No músculo diafragma, a suramina reduziu a área de fibrose e a mionecrose. No músculo cardíaco, houve redução da fibrose, da inflamação e melhora significativa de parâmetros funcionais cardíacos (amplitude das ondas P, Q, R e S do eletrocardiograma). Sugere-se que a suramina possa ser potencialmente útil nas distrofinopatias, atenuando a miopatia nos músculos mais afetados, o coração e o diafragma, nos estágios tardios da doença / Abstract: Duchenne muscular dystrophy (DMD) is a disease characterized by progressive muscle weakness leading to respiratory and cardiac failure, resulting in death around 30 years of age. In the mdx mice model of DMD, diaphragm and cardiac muscles are severely affected in the later stages of the disease, showing intense fibrosis similar to that observed in human pathology. The aim of the present study was to investigate the effects of long-term treatment with suramin, an anti-fibrotic agent, in the diaphragm and cardiac muscles of the mdx mice. Mdx mice (n=20; 8 months of age) received intraperitoneal injections of suramin (60 mg/kg) for 3 months. Mdx controls (n=20; 8 months) and C57BL/10 (n=18; 8 months old) were injected with saline. C57BL/10 mice express dystrophin and are the control strain for the mdx mice. Suramin decreased CK levels and reduced the loss of muscle strength. Suramin reduced fibrosis and myonecrosis in diaphragm. In the cardiac muscle, suramin decreased fibrosis, inflammation and improved cardiac functional parameters (P, Q, R and S waves of the electrocardiogram). It is suggested that suramin may be a potential therapy for distrophinopaties, attenuating the dystrophic phenotype of the most affected cardiac and diaphragm muscles of the mdx mice, during later stages of the disease / Mestrado / Anatomia / Mestre em Biologia Celular e Estrutural

Orientadores: Maria Júlia Marques, Elaine Minatel / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-27T05:58:01Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Perim_VivianePanegassi_M.pdf: 2625016 bytes, checksum: bb4c51a87dbe0dfa88e64cad10dda694 (MD5) Previous issue date: 2015 / Resumo: A Distrofia Muscular de Duchenne (DMD) é uma doença causada pela ausência da proteína distrofina e se caracteriza por degeneração muscular progressiva. A deficiência da distrofina na DMD e nos camundongos mdx, modelo experimental da DMD, promove mionecrose. O processo inflamatório que se instala exacerba a mionecrose e aumenta o estresse oxidativo. O estresse oxidativo tem sido proposto como um fator importante para a progressão da doença. As espécies reativas de oxigênio promovem danos nas fibras distróficas, comprometendo proteínas e lipídios da membrana, gerando grandes quantidades de lipofuscina e 4-HNE, indicadores de estresse oxidativo. Este trabalho tem como objetivo verificar se o ômega-3 diminui o estresse oxidativo em diferentes músculos distróficos (bíceps, diafragma e quadríceps) do camundongo mdx jovem. Observamos que o ômega-3 diminuiu a lipofuscina e o 4-HNE nos músculos estudados. A atividade das enzimas antioxidantes SOD, GPx e GR estava aparentemente diminuída no diafragma distrófico, quando comparado ao diafragma normal. No diafragma, o ômega-3 promoveu aumento discreto da atividade da SOD e da GPx. O músculo quadríceps não apresentou alterações significativas destas enzimas, tanto no mdx controle, quanto no mdx tratado com ômega-3. O ômega-3 promoveu melhora da distrofinopatia (redução da CK, diminuição da inflamação e aumento da regeneração muscular). Concluímos que o ômega-3 diminui o estresse oxidativo (reduz a lipofuscina e o 4-HNE), principalmente no músculo diafragma, provavelmente por este ser mais afetado que o quadríceps. A atividade aparentemente reduzida das enzimas antioxidantes no diafragma do mdx controle pode sugerir menor capacidade de tamponamento das espécies reativas de oxigênio neste músculo. Isto pode contribuir, pelo menos em parte, para o maior estresse oxidativo e maior acometimento do diafragma em relação ao quadríceps. Estes dados sugerem que o ômega-3 possa ter uma ação positiva em melhorar o estresse oxidativo em diferentes músculos distróficos, tornando-o potencialmente útil para a terapia da DMD / Abstract: Duchenne muscle dystrophy (DMD) is a disease caused by the absence of dystrophin characterized by progressive muscle degeneration. In DMD and in the mdx mice model of DMD, the inflammatory process exacerbates myonecrosis and increases oxidative stress. Oxidative stress has been proposed as an important factor in disease progression. Reactive oxygen species promote damage in dystrophic fibers, affecting proteins and lipids of the membrane, generating large amounts of lipofuscin and 4-HNE, markers of oxidative stress. This study aims to determine whether ômega-3 therapy reduces oxidative stress in different dystrophic muscles (biceps, diaphragm and quadriceps) of mdx mouse, at earlier stages of the disease. Ômega-3 decreased lipofuscin and 4-HNE in all the muscles studied. The activity of the antioxidant enzymes SOD, GPx and GR was apparently reduced in mdx diaphragm control as compared to normal mice. In the diaphragm, ômega-3 promoted a slight increase in the activity of SOD and GPx. The quadriceps muscle showed no significant changes in the activity of these enzymes in mdx control, and ômega-3 did not change this profile. Ômega-3 also ammeliorated dystrophinopathy (reduced CK, decreased inflammation and increased muscle regeneration). We conclude that ômega-3 reduces oxidative stress (by decreasing lipofuscin and 4-HNE), mainly in the dystrophic diaphragm, possibly because this muscle is more affected than the quadriceps. The apparent decreased activity of antioxidant enzymes in the mdx diaphragm may suggest a poor capacity of this muscle to buffer the reactive oxygen species. This may contribute, at least in part, to the increased oxidative stress in the diaphragm and to the fact that this muscle will turn out to be the more affected muscle in the mdx. The present results suggest that ômega-3 may have a positive effect in improving oxidative stress in different dystrophic muscles, making it potentially useful for DMD therapy / Mestrado / Biologia Celular / Mestra em Biologia Celular e Estrutural

Made available in DSpace on 2016-01-26T18:55:36Z (GMT). No. of bitstreams: 1 marcos pdf.pdf: 307816 bytes, checksum: fe440a0178e6253cedbe1fc15d052a7f (MD5) Previous issue date: 2013-09-25 / The goal of this project was to verify the effect of the administration of GH associated or not associated to physical activity in the serum biochemistry, body weight and in the weight of Wistar rats organs. In the present research, 40 rats were used, 9 years old, divided in four groups (n=10): CT (control group without physical activity and without administration of GH), GH (group without physical activity and with administration of GH), Ex (group with physical activity and without administration of GH), ExGH (group with physical activity and administration of GH). After 30 days, the serum biochemistry, the animals weight, organs weight, length and abdominal circumference were measured. The variables were submitted to the analysis of variance (ANOVA), followed by the Tukey test. There was no statistical difference in the gain of weight and in the growth of the animals among the different groups. There was a greater gain of abdominal circumference in the ExGH group compared to the GH group, but there was no difference in the retro abdominal fat weight. Renal weight was only different in the GH group, it was greater than Ex and ExGH (p<0.05). Regarding serum biochemistry, the ExGH group presented lower urea rates than the other groups (p<0.05), and the Ex group presented a higher dosage of alkaline phosphatase, statistically differing from the other groups. In conclusion, the use of GH in the 0.2 UI/Kg dosage per month associated or not to the practice of physical activity doesn t alter the body weight or the overall length of the female animals. The use of GH not associated to physical activity leads to an increase of the renal weight. The use of GH combined with physical activity decreases the serum urea, without altering creatinine. Physical activity without the administration of GH increases the alkaline phosphatase. / O objetivo deste trabalho foi verificar o efeito da administração do GH associado ou não à atividade física na bioquímica sérica, peso corporal e no peso dos órgãos de ratas Wistar. Na presente pesquisa foram utilizadas 40 ratas, com 9 semanas de idade, divididas em quatro grupos (n=10): CT (grupo controle sem atividade física e sem administrar GH), GH (grupo sem atividade física e com administração de GH), Ex (grupo com atividade física e sem administração de GH) e ExGH (grupo com atividade física e com administração de GH). Após 30 dias, a bioquímica sérica, o peso dos animais, peso dos órgãos e comprimento e circunferência abdominal foram mensurados. As variáveis foram submetidas ao teste análise de variância (ANOVA), seguida do teste de Tukey. Não houve diferença estatística no ganho de peso e no crescimento dos animais entre os diferentes grupos. Houve um maior ganho de circunferência abdominal no grupo ExGH comparado ao grupo GH, porém não houve diferença no peso da gordura retroabdominal. Somente houve diferença no peso renal do grupo GH que foi maior que Ex e ExGH (p<0.05). Com relação à bioquímica sérica, o grupo ExGH apresentou menor valor de ureia (p<0.05) que os demais grupos e o grupo Ex apresentou maior dosagem de fosfatase alcalina diferindo estatisticamente dos demais grupos. Conclui-se que a utilização de GH na dosagem de 0,2UI/Kg por um mês associado ou não à prática de atividade física não altera o peso corporal, nem o comprimento total dos animais. O uso do GH sem a associação à atividade física leva a um aumento do peso renal. O uso do GH combinado à atividade física diminuiu a ureia sérica, sem alterar a creatinina. A atividade física sem a administração de GH aumenta a fosfatase alcalina.

Made available in DSpace on 2016-07-18T17:53:11Z (GMT). No. of bitstreams: 1 marcos pdf.pdf: 307816 bytes, checksum: fe440a0178e6253cedbe1fc15d052a7f (MD5) Previous issue date: 2013-09-25 / The goal of this project was to verify the effect of the administration of GH associated or not associated to physical activity in the serum biochemistry, body weight and in the weight of Wistar rats organs. In the present research, 40 rats were used, 9 years old, divided in four groups (n=10): CT (control group without physical activity and without administration of GH), GH (group without physical activity and with administration of GH), Ex (group with physical activity and without administration of GH), ExGH (group with physical activity and administration of GH). After 30 days, the serum biochemistry, the animals weight, organs weight, length and abdominal circumference were measured. The variables were submitted to the analysis of variance (ANOVA), followed by the Tukey test. There was no statistical difference in the gain of weight and in the growth of the animals among the different groups. There was a greater gain of abdominal circumference in the ExGH group compared to the GH group, but there was no difference in the retro abdominal fat weight. Renal weight was only different in the GH group, it was greater than Ex and ExGH (p<0.05). Regarding serum biochemistry, the ExGH group presented lower urea rates than the other groups (p<0.05), and the Ex group presented a higher dosage of alkaline phosphatase, statistically differing from the other groups. In conclusion, the use of GH in the 0.2 UI/Kg dosage per month associated or not to the practice of physical activity doesn t alter the body weight or the overall length of the female animals. The use of GH not associated to physical activity leads to an increase of the renal weight. The use of GH combined with physical activity decreases the serum urea, without altering creatinine. Physical activity without the administration of GH increases the alkaline phosphatase. / O objetivo deste trabalho foi verificar o efeito da administração do GH associado ou não à atividade física na bioquímica sérica, peso corporal e no peso dos órgãos de ratas Wistar. Na presente pesquisa foram utilizadas 40 ratas, com 9 semanas de idade, divididas em quatro grupos (n=10): CT (grupo controle sem atividade física e sem administrar GH), GH (grupo sem atividade física e com administração de GH), Ex (grupo com atividade física e sem administração de GH) e ExGH (grupo com atividade física e com administração de GH). Após 30 dias, a bioquímica sérica, o peso dos animais, peso dos órgãos e comprimento e circunferência abdominal foram mensurados. As variáveis foram submetidas ao teste análise de variância (ANOVA), seguida do teste de Tukey. Não houve diferença estatística no ganho de peso e no crescimento dos animais entre os diferentes grupos. Houve um maior ganho de circunferência abdominal no grupo ExGH comparado ao grupo GH, porém não houve diferença no peso da gordura retroabdominal. Somente houve diferença no peso renal do grupo GH que foi maior que Ex e ExGH (p<0.05). Com relação à bioquímica sérica, o grupo ExGH apresentou menor valor de ureia (p<0.05) que os demais grupos e o grupo Ex apresentou maior dosagem de fosfatase alcalina diferindo estatisticamente dos demais grupos. Conclui-se que a utilização de GH na dosagem de 0,2UI/Kg por um mês associado ou não à prática de atividade física não altera o peso corporal, nem o comprimento total dos animais. O uso do GH sem a associação à atividade física leva a um aumento do peso renal. O uso do GH combinado à atividade física diminuiu a ureia sérica, sem alterar a creatinina. A atividade física sem a administração de GH aumenta a fosfatase alcalina.

Dados recentes do nosso laboratório demonstram que somente a co-transdução, não a tradução individual, com vetores adenovirais portadores de Interferon-beta (IFN?) (citocina imuno modulatória) e p19Arf (parceira funcional da proteína supressora de tumor p53) resulta na morte celular massiva do melanoma murino B16F10. A capacidade desse tratamento combinado de induzir uma resposta imune antitumoral ainda não foi avaliada. Dessa maneira, o objetivo do presente trabalho foi investigar se células B16F0 tratadas por essa combinação são capazes de induzir uma resposta imune antitumoral em um modelo de vacinação profilático de melanoma. Para isso, essas células foram co-transduzidas com os vetores AdPGp19 e AdPGIFN? e 48 horas depois, inoculadas como agente vacinal no flanco esquerdo (sítio da vacina) de camundongos C57BL/6 imunocompetentes. Sete dias após a última vacinação, esses animais foram desafiados com células B16F10 naïve no flanco direito (sítio do desafio). A progressão tumoral do desafio foi significativamente reduzida, mesmo quando o desafio tumoral foi feito 73 dias após da vacinação. Porém, como os animais imunizados desenvolveram tumores no sítio da vacina, condições para o uso dessas células tratadas foram avaliadas, revelando que: o número de células e de aplicações usadas durante a vacinação tem influência no aparecimento desse tumores, e que apenas com o tratamento combinado os camundongos permanecem livres de tumor. A influência do sistema imune para este resultado foi revelada após protocolo de imunussupressão. Em seguida, o papel da p19Arf e do IFN? na proteção antitumoral da combinação foi estudado. In vitro, os efeitos antitumorais da combinação parecem ser mais influentes da reposição de p19Arf do que da expressão de IFN?, mas já in vivo, na presença do sistema imune, foram mais dependentes do IFN?. Com a combinação estes efeitos mostraram-se mais pronunciados, induzindo uma proteção antitumoral e maior sobrevida aos animais vacinados. Estes resultados indicam que a combinação p19Arf e IFN? pode ser aplicada como um agente imunoterápico e sugerem que a associação entre morte celular e imuno estimulação pode beneficiar o tratamento contra o câncer / Previously, we have shown in a mouse melanoma model of in situ gene therapy that co-transduction, but not individual application, with adenovirus vectors expressing the Interferon-beta (IFN?) (immune modulatory cytokine) and p19Arf (functional partner of the p53 tumor suppressor) transgenes results in massive cell death and reduced tumor progression. However, the capability of this combined treatment to stimulate an antitumor immune response has not been evaluated. Therefore, the aim of this work was to investigate, trough a prophylactic vaccine model, if B16F10 cells treated by the p19Arf and IFN? combination could induce such immune response. To do so, these cells were co-transduced by the AdPGp19 e AdPGIFN? adenoviral vectors and 48 hours after, inoculated as a vaccine agent in the left flank (vaccine site) of immune competent C57BL/6 mice. Seven days after the last vaccine, a tumor challenge was done with naïve B16F10 cells in the right flank (challenge site). Tumor progression was markedly reduced, even when challenge was done 73 days after the vaccination. However, since these animals developed tumors where the vaccine was applied, more appropriate conditions for the use of these treated cells were pursued, thus revealing that: the number of cells and inoculations can dictate tumor development, and also, that only with the combined treatment was tumor formation abolished. The influence of the immune system for this result was revelead by performing an immune supression protocol. Next, the roles of p19Arf and of IFN? were studied. In vitro, the antitumor effects were stronger upon the introduction of p19Arf than IFN?, but in vivo, in the presence of the immune system, the effects were more IFN? dependent. In fact, these effects were more pronouced with the combined treatment, inducing protection against tumor formation and progression and increasing survival in the vaccinated animals. Taken together, these results demonstrate the application of cells treated by the p19Arf e IFN? combination as an effective vaccine agent and also indicates that the association between cell death and immune stimulation may benefit the treatment of cancer

Para avaliar as repercussões da insuflação prolongada da cavidade peritoneal com gás carbônico sobre a hipertensão arterial essencial, utilizou-se ratos machos espontaneamente hipertensos (SHR) e como normotensos ratos machos Wistar-Kioto (WKY). No total foram utilizados 34 animais, sendo 22 SHRs e 12 WKYs, onde os ratos SHR foram distribuídos aleatoriamente aos grupos G1 e G3. O primeiro grupo (G1) com 12 animais SHRs e o segundo (G2) com 12 animais WKYs foram expostos a pneumoperitônio com dióxido de carbono por 120 minutos, enquanto que o terceiro grupo (G3) com 10 animais SHRs, passou por insuflação da cavidade peritoneal, seguida de punção com trocarte e esvaziamento do pneumoperitônio. Os animais deste grupo permaneceram anestesiados e com o abdome puncionado por 2 horas. Previamente a confecção do pneumoperitônio, a artéria e veia femorais direita foram dissecadas e canuladas. A artéria foi conectada ao transdutor de pressão para o registro contínuo da pressão arterial (PA), após a coleta inicial de 0,2 ml para dosagem da gasometria basal e 0,8 ml para as dosagens de uréia (U) e creatinina (Cr) basais. A veia femoral foi uttilizada para a expansão volêmica lenta com 10 ml de solução fisiológica após a coleta inicial de 1,0 ml de sangue arterial. Feito isto, procedeu-se a insuflação e punção abdominal mantendo ou não o pnemoperitônio, conforme o grupo. Foram feitas medidas da pressão arterial a cada 15 minutos e 5 minutos após o esvaziamento do abdome. Após a última aferição, foi colhido aproximandamente 3 ml de sangue arterial e 1 ml para a gasometria mais dosagem da U e Cr. A análise multivariada para medidas repetidas ao longo do tempo permitiu concluir que: nos cinco minutos após a desinsuflação, houve diferença estatística significante (p<0,0001) nas pressões arteriais sistólica, diastólica e média no G1 com uma curva ascendente em relação ao G2 e G3; O pH diminuiu (p<0,0001) de maneira similar nos três grupos de intervenção, enquanto a pCO2 aumentou (p<0,0001) de maneira similar nos três grupos de intervenção; não houve mudanças significativas na creatinina (p=0,3232); a uréia apresentou um efeito de momento com significância estatística (p<0,0001) e a atividade da renina plasmática foi significativamente maior no G2 em relação aos outros dois grupos / To assess the effects of prolonged peritoneal cavity insufflation with carbon dioxide on the essential hypertension, a experimental study was designed using male spontaneously hypertensive rats (SHR) and male normotensive Wistar-Kyoto (WKY). Thirty-four animals were used, 22 SHRs and 12 WKYs, where SHR rats were randomly assigned to groups G1 and G3. The first group (G1) with 12 animals SHRs and second group (G2) with 12 animals WKYs were exposed to pneumoperitoneum with carbon dioxide for 120 minutes, while the third group (G3) with 10 animals SHRs, had the peritoneal cavity insufflated, followed by puncture with trocarte and released the pneumoperitoneum. The animals of this group remained anesthetized and the abdomen punctured by 2 hours. Before making the pneumoperitoneum, right femoral artery and vein were dissected and cannulated. The artery was connected to the transducer pressure for the continuous recording of blood pressure (BP), after the initials blood samples: 0.2 ml for blood gases measurement and 0.8 ml for urea (U) and creatinine (Cr ). The femoral vein was used to volume expansion with 10 ml of saline solution after the initial sample of 1.0 ml arterial blood. Afterwards, a pnemoperitoneum insufflation and maintaining is done or not, depending on group. Blood pressure was recorded every 15 minutes and 5 minutes after pnemoperitoneum released. After last blood pressure record, a 3.0 ml blood sample was collected to measure plasma renin activity (PRA), and 1.0 ml for blood gases measurement, urea (U) and creatinine (Cr). The multivariate analysis for repeated measurements over time has concluded that: five minutes after pnemoperitoneum released, systolic, diastolic and mean blood pressure has significant statistic differences (p <0.0001) in G1 with an upward curve in relation to G2 and G3; The pH decreased (p <0.0001) in a similar way in the three groups of intervention, while pCO2 increased (p <0.0001) in a similar way in the three groups of intervention, with no significant changes in creatinine (p = 0.3232), but the urea had a moment effect with statistical significance (p <0.0001) and the plasma renin activity (PRA) was significantly higher in G2 compared with the other two groups

Os avanços científicos das últimas décadas permitiram que a compreensão do câncer evoluísse de uma visão simplista, na qual o principal motor seria uma atividade celular hiperploriferativa, para uma visão mais complexa onde o estado fisiológico geral permite a gênese e progressão tumoral. Essa evolução permite o desenvolvimento de novas abordagens terapêuticas e traz novas esperanças para o tratamento de muitos tipos de cânceres ainda extremamente deletérios. Dentro desse novo panorama, terapias que estimulem a imunidade antitumoral têm se mostrado extremamente promissoras. Nesse trabalho, procuramos investigar os efeitos antitumorais desencadeados pela combinação da indução de morte celular e imunoestimulação. Para tanto, visamos à recuperação da via de p53 (pela transferência gênica do próprio p53 ou p19) associada à transferência gênica de IFNbeta. A transferência gênica foi mediada por vetores adenovirais do sorotipo 5. Nossas observações, em um modelo murino de carcinoma pulmonar, permitem concluir que esta linhagem é sensível a morte induzida pela transferência gênica de p19 e não p53. Porém, a transferência gênica intratumoral de IFNbeta se mostrou chave no controle do crescimento do tumor primário. Destacamos, entretanto, que a associação de IFNbeta com p19 produziu efeitos imunoprotetores superiores à transferência de IFNbeta ou p19 sozinhos. Tal efeito parece ser dependente da indução de fatores quimiotáxicos e conseqüente recrutamento de neutrófilos para o sítio tumoral. O efeito da transferência gênica combinada de ambos os genes IFNbeta e p19 se mostrou ainda mais promissor quando associado à cisplatina, induzindo uma notável redução no crescimento tumoral / Scientific advances from the last decades enabled the evolution of our knowledge of cancer from a simplistic vision, in which the main motor was an excessive cell proliferation, to a more complex one, where the general physiologic state enables tumorigenesis and tumor progression. This evolution enabled the development of new therapies and brings new hopes for the treatment of several types of cancers. In this context, therapies that induce an antitumor immunity are very promising. In this work, we are investigating the antitumor effects triggered by the combination of cell death induction and immunostimulation. To this end, we aimed to restore p53 pathway (by p53 or p19 gene transfer) associated with immunostimulation by IFNbeta gene transfer. The gene transfer was mediated by Adenovectors Serotype 5. Our observations in a murine model of lung cancer showed that this cell line is sensitive to cell death induced by p19 gene transfer, but not p53. Nevertheless, intratumoral gene transfer of IFNbeta, was crucial in controlling tumor growth. Moreover, p19 and IFNbeta association induced higher immunoprotecting effects than p19 or IFNbeta alone. This effect seems to be depending on the induction of chemotactic factors, and the recruitment of neutrophils to the tumor site. The effect of combined gene transfer of p19 and IFNbeta was even more promising when associated with Cisplatine, inducing a remarkable reduction in tumor growth