Orientador: José Antonio Dell'Áqua Junior / Banca: Fabiana Ferreira de Souza / Banca: André Maciel Crespilho / Resumo: Muitas biotecnologias estão sendo desenvolvidas visando a conservação do material genético de garanhões de alto valor zootécnico. Dentre estas pode-se destacar a colheita de espermatozoides do epidídimo de animais que sofreram algum trauma ou enfermidade que impossibilitem a colheita do sêmen, óbito ou eutanásia. Porém essas células espermáticas não entram em contato com o plasma seminal, importante por conter proteínas que participam de processos relacionados à proteção e ligação dos espermatozoides aos reservatórios espermáticos na tuba uterina. Neste sentido, sugere-se que haja importantes alterações bioquímicas nas células espermáticas do epidídimo, objetivando-se assim com esta revisão, estudar as principais diferenças morfofuncionais entre os espermatozoides provenientes do epidídimo e do ejaculado / Abstract: Several biotechnologies are being developed aiming genetic material conservation of stallions with high zootechnical value, as we can highlight the harvest epididymis's sperm of animals who suffered trauma or illness that makes impossible the semen collection, death or euthanasia. However these sperm cells do not get in touch with seminal plasma, important whereas it has proteins that participate in processes related to the protection and binding of sperm to the sperm reservoir in the oviduct. In this sense, it suggests that there is significant biochemical changes in epididymal sperm, aiming with this review to study the main morphological and functional differences between the sperm from the epididymis and ejaculated / Mestre

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:30:55Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-03-05Bitstream added on 2014-06-13T20:40:51Z : No. of bitstreams: 1 ortiz_rj_dr_botib.pdf: 1128298 bytes, checksum: a9ab81176a4785a3d69e016af013af18 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Cichlidae é a maior família de peixes não-Ostariophysi de água doce, e uma das maiores famílias de vertebrados. De ampla distribuição mundial, os gêneros neotropicais atualmente foram elevados a status de subfamília, Cichlinae. As hipóteses existentes para as relações de parentesco em Cichlinae, tendo por base características osteológicas e de partes moles e mais recentemente dados moleculares, não são congruentes entre si. Sabe-se que as características espermáticas contem informações filogenéticas e podem ser úteis no estudo do relacionamento entre as espécies. Neste estudo, descreveu-se a espermiogênese e os caracteres ultraestruturais dos espermatozóides de membros da subfamília Cichlinae e da subfamília Pseudocrenilabrinae. Os dados resultantes foram utilizados numa análise filogenética, que comparada as proposta pré-existentes, recupera alguns dos grupos mais proximamente relacionados, caso dos gêneros Retroculus e Cichla. Estes gêneros são reconhecidos como basais dentro da subfamília. Outro grupo que se mantém, é o formado por Andinoacara rivulatus, Cichlasoma portalegrense e Aequidens tetramerus, membros da tribo Cichlasomatini. Além disso, a tribo Cichlasomatini ocupa posição derivada no cladograma, como em hipóteses anteriores / Cichlidae is the largest family of non-Ostariophysi freshwater fish and one of the largest family of vertebrates. With a worldwide distribution, the Neotropical genera have been now elevated to a subfamily status, Cichlinae. The existing hypotheses for the phylogenetic relationships in Cichlinae, based on osteological features and soft tissue and more recently on molecular data, are not congruent. It is known that the spermatics characteristics contains phylogenetic information and can be useful in the studies of the relationship between species. Then, this study described the spermiogenesis and sperm ultrastructural characterics from some members of the Neotropical subfamily Cichlinae and from the African, Pseudocrenilabrinae. The data was used in a phylogenetic analysis, that when compared to pre-existing proposals, recovers some of the most closely related genera, for example, Cichla and Retroculus. These genera are recognized as basal within the subfamily Cichlinae. Another group that remains, it is that formed by Andinoacara rivulatus, Cichlasoma portalegrense and Aequidens tetramerus, members of the tribe Cichlasomatini. The tribe Cichlasomatini occupies a derivative position in the cladograma

Orientador: Marion Burkhardt de Koivisto / Banca: Maricy Apparício Ferreira / Banca: Janaína Torres Carreira / Resumo: A avaliação de espermatozoides em tecnologias de reprodução assistida raramente analisa a integridade do DNA, crucial para o desenvolvimento embrionário. A técnica do azul de toluidina permite identificar alterações da cromatina com avaliação concomitante da morfometria espermática. O método foi descrito em diversas espécies, mas ao conhecimento dos autores, ainda não foi relatado em gatos. O objetivo deste estudo foi verificar a aplicabilidade da técnica de coloração de azul de toluidina em avaliar as anormalidades de DNA de espermatozoides epididimários (cabeça, corpo e cauda) de gatos. Investigar ainda se houve correlação entre as variáveis: condensação do DNA, morfologia e morfometria da cabeça espermática. Para este propósito, os índices de alteração de DNA obtidos pela técnica de azul de toluidina e laranja de acridina foram comparados, observando correlação de 65,38% (p<0,001). A estabilidade da cromatina aumentou significativamente da região da cabeça (92,06%) do epidídimo para a cauda (97,94%, p=0,0023), mas não houve diferença entre as regiões do corpo e da cauda, demonstrando que os espermatozoides provenientes destas regiões já possuem maturidade reprodutiva. Não houve correlação entre a anormalidade do DNA e a morfologia espermática como nas demais espécies, mas sim com a morfometria. Observou-se diminuição significativa do tamanho da cabeça do espermatozoide durante a passagem pelas três regiões epididimárias (p < 0,0001). A porcentagem de espermatozoides com cr... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Sperm selection in assisted reproductive technologies rarely evaluates the DNA integrity, which is crucial to the embryo's development. The toluidine blue technique allows identification of chromatin alterations, simultaneously with evaluation of sperm morphometry. The method has been described in many species, but to the authors' knowledge, it has yet to be described in cats. The objective of this study was to verify the applicability of the toluidine blue technique in analyzing DNA abnormalities of epididymal sperm (caput, corpus and cauda) in cats and further investigating if there was correlation between the variables: DNA condensation, morphology and morphometry of the sperm head. For this purpose, the DNA alteration indexes obtained by both toluidine blue and acridine orange techniques were compared and a 65.38% (p < 0.001) correlation was observed. The chromatin stability increased significantly in the head region of the epididymis (92.06%) in relation to the cauda (97.94%, p = 0.0023), however there was no difference between the caput and cauda regions, which demonstrates that sperm coming from these region are already mature. There was no correlation between the DNA abnormality and the sperm morphology as observed in other species, however there was correlation to morphometry. A significant decrease of the sperm head size was observed during the passage of the three epididymal regions (p < 0.0001). The percentage of sperm with deficient chromatin condensation decre... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

El principal objectiu del treball de recerca d'aquesta tesi fou l'estudi de l'efecte del tractament dels espermatozoides caprins frescs sobre diferents paràmetres seminals i la seva relació amb els resultats de fecundació in vitro (FIV) d'oòcits de cabres prepúbers madurats in vitro.Per tal d'assolir aquest objectiu, es varen fixar els següents objectius concrets: 1) Estudiar l'efecte de diferents sistemes de rentat i selecció dels espermatozoides (swim-up, gradient discontinu de Percoll, rentat per centrifugació i centrifugació mitjançant una solució de Ficoll) sobre els resultats de FIV, 2) Estudiar l'efecte de la inducció in vitro de la capacitació espermàtica mitjançant diferents concentracions (5, 50 i 100 &#956;g/mL) i temps de preincubació (1, 15, 30, 45 i 60 min) amb heparina, 3) Determinar la concentració òptima d'espermatozoides en el medi de fecundació, 4) Valorar la incidència de reacció acrosòmica espontània i la seva relació amb la taxa de penetració dels oòcits de cabra i la seva divisió embrionària i 5) Analitzar l'evolució de la motilitat, viabilitat i integritat de l'acrosoma dels espermatozoides durant las diferents fases de la FIV i la seva relació amb els resultats de fecundació. Els anàlisis seminals realitzats en aquest treball van consistir en l'anàlisi subjectiu de la motilitat individual dels espermatozoides, la viabilitat d'aquests mitjançant la tinció d'eosina-nigrosina, la incidència de reacció acrosòmica verdadera mitjançant la Triple Tinció i la integritat de l'acrosoma mitjançant l'ús de la lectina Pisum Sativum marcada amb fluoresceïna durant tot el procés de la FIV.Els resultats obtinguts permeteren concloure que en les nostres condicions: 1) No és necessari la realització de tècniques de rentat i selecció dels espermatozoides frescs procedents de bocs de provada fertilitat per a l'obtenció d'embrions a partir de oòcits madurats i fecundats in vitro. 2) La utilització d'heparina per a induir la capacitació espermàtica incrementa significativament els resultats de FIV, obtenint els millors resultats de divisió embrionària amb concentracions altes d'heparina (50 i 100 µg/mL) en el medi de pre-incubació dels espermatozoides, no observant diferències significatives en els resultats de FIV antre els diferents temps de pre-incubació. 3) Una concentració de 4x106 de espermatozoides viables/mL a les gotes de FIV proporciona els millors resultats de divisió embrionaria. 4) La incidència de la reacció acrosòmica espontània no està relacionada con la taxa de penetració, encara que es veu afavorida per la presencia dels complexes cumulus-oòcit, observant un increment en el nombre d'espermatozoides vius que pateixen dita reacció entre las 8-12 hores de co-cultiu de les gàmetes i 5) Els paràmetres seminals avaluats (motilitat, viabilitat i integritat de l'acrosoma) durant el procés de preparació dels espermatozoides frescs de boc no influeixen sobre els resultats de FIV de oòcits de cabres prepúbers madurats in vitro. / El principal objetivo del trabajo de investigación de esta tesis fue el estudio del efecto del tratamiento de los espermatozoides caprinos sobre distintos parámetros seminales y su relación con los resultados de fecundación in vitro (FIV) de ovocitos de cabras prepúberes madurados in vitro.Para ello se fijaron los siguientes objetivos concretos: 1) Estudiar el efecto de diferentes sistemas de lavado y selección de los espermatozoides frescos (swim-up, gradiente discontinuo de Percoll, lavado mediante centrifugación y centrifugación mediante una solución de Ficoll) sobre los resultados de FIV, 2) Estudiar el efecto de la inducción in vitro de la capacitación espermática mediante distintas concentraciones (5, 50 y 100 &#956;g/mL) y tiempos de preincubación (1, 15, 30, 45 y 60 min) con heparina, 3) Determinar la concentración óptima de espermatozoides en el medio de fecundación, 4) Valorar la incidencia de reacción acrosómica espontánea y su relación con la tasa de penetración de los ovocitos de cabra y división embrionaria y 5) Analizar la evolución de la motilidad, viabilidad e integridad del acrosoma de los espermatozoides durante las distintas fases de la FIV y su relación con los resultados de fecundación. Los análisis seminales realizados en este trabajo consistieron en el análisis subjetivo de la motilidad individual de los espermatozoides, la viabilidad de éstos mediante la tinción de eosina-nigrosina, la incidencia de reacción acrosómica verdadera mediante la Triple Tinción y la integridad del acrosoma mediante el uso de la lectina Pisum Sativum marcada con fluoresceína a lo largo de todo el proceso de la FIV.Los resultados obtenidos nos permitieron concluir que en nuestras condiciones: 1) No es necesario la realización de técnicas de lavado y selección de los espermatozoides frescos procedentes de machos cabríos de probada fertilidad para la obtención de embriones a partir de ovocitos madurados y fecundados in vitro. 2) La utilización de heparina para inducir la capacitación espermática incrementa significativamente los resultados de FIV, obteniéndose los mejores resultados de división embrionaria con concentraciones altas de heparina (50 y 100 µg/mL) en el medio de pre-incubación de los espermatozoides, sin observarse diferencias significativas en los resultados de FIV al utilizar diferentes tiempos de pre-incubación. 3) Una concentración de 4x106 de espermatozoides viables/mL en las gotas de FIV proporciona los mejores resultados de división embrionaria. 4) La incidencia de la reacción acrosómica espontánea no está relacionada con la tasa de penetración, aunque se ve favorecida por la presencia de los complejos cúmulos-ovocitos, observándose un incremento en el número de espermatozoides vivos que sufren dicha reacción entre las 8-12 horas del co-cultivo de los gametos y 5) Los parámetros seminales evaluados (motilidad, viabilidad e integridad del acrosoma) a lo largo del proceso de preparación de los espermatozoides caprinos frescos no influyen sobre los resultados de FIV de ovocitos de cabras prepúberes madurados in vitro. / The main aim of the research work of this thesis was to study the effect of the treatment of fresh caprine spermatozoa on different sperm parameters and its potential relationship to the in vitro fertilization (IVF) of in vitro matured (IVM) prepubertal goat oocytes. Therefore the following specific aims were fixed: 1) To study the effect of different methods of washing and selection of spermatozoa (swim-up, centrifugation in Percoll gradients, centrifugation and centrifugation in Ficoll medium) on the IVF of IVM oocytes from prepubertal goats. 2) To study the effect of the induction of sperm capacitation after exposure of spermatozoa to different concentrations (5, 50 and 100 &#956;g/mL) and different exposure intervals (1, 15, 30, 45 and 60 min) of heparin. 3) To determine the optimal sperm concentration on the fertilization medium, 4) To assess the spontaneous acrosome reaction and its relationship with IVF results and 5) To analyze the sperm motility, viability and acrosome integrity evolution during the different phases of the IVF and its relation with the results of penetration and embryo cleveage rate.The different sperm parameters analysis were the subjective assessment of the percentage of sperm progressive motility, the viability of the spermatozoa evaluated by eosine-nigrosine stain, the incidence of spontaneous acrosome reaction using the simplified triple stain technique or TST and the evaluation of the acrosome status using Pisum Sativum lectin labelled with FITC along the IVF process.The obtained results allowed to us to conclude that in ours conditions: 1) washing and selection methods of fresh spermatozoa from male of tested fertility are not necessary for obtaining embryos from in vitro matured and fertilized oocytes. 2) Using heparin to induce the in vitro sperm capacitation increase significantly the IVF results, getting the best percentages of cleavage rate with high concentrations of heparin (50 and 100 µg/mL) in the sperm pre-incubation medium, not observing significant differences on IVF percentages among the different exposure intervals of preincubation. 3) A concentration of 4x106 of viable sperm/mL in the IVF microdrop gives the best cleavage rate. 4) The incidence of spontaneous acrosome reaction is not related to the penetration rate, although is facilitated by the presence of cumulus-oocyte complex, observing an increase on the live acrosome reacted sperm between 8-12 hours post-insemination and 5) the evaluated sperm parameters (motility, viability and acrosome integrity) along the sperm treatment don't influence on IVF of goat prepubertal in vitro matured oocytes.

Les tècniques d'hibridació in situ fluorescent aplicades sobre nuclis d'espermatozoides humans prèviament descondensats permeten la seva caracterització citogenètica i, en conseqüència, determinar el risc de transmissió d'una anomalia cromosòmica a la descendència.Hem aplicat aquesta metodologia en espermatozoides procedents d'individus control, per tal de determinar la incidència basal d'anomalies en la població general, així com en individus que per les seves particularitats, sospitem que poden presentar una incidència d'anomalies cromosòmiques superior a la població control.L'anàlisi dels resultats ha posat de manifest que els mecanismes que originen gàmetes amb aneuploïdies afecten preferentment a alguns cromosomes, concretament el cromosoma 21 i els cromosomes sexuals.Els pares d'individus amb la síndrome de Down d'origen patern presenten un increment significatiu d'aneuploïdies pel cromosoma 21.En individus portadors d'anomalies cromosòmiques estructurals, la proporció dels genotips resultants de cada tipus de segregació no s'ajusta a la proporció 1:1 esperada, suggerint l'existència de punts de control al llarg de la meiosi que eliminen selectivament cèl·lules germinals en funció del seu contingut cromosòmic. Per algunes reorganitzacions, el risc de transmissió d'una anomalia cromosòmica a la descendència es pot veure incrementat per la presència d'efectes intercromosòmics.En individus amb la síndrome de Klinefelter, els nostres resultats confirmen la incapacitat de la línia cel·lular 47,XXY d'iniciar la meiosi. L'increment d'espermatozoides portadors d'anomalies numèriques pels cromosomes sexuals es podria explicar pel desenvolupament de la meiosi en un ambient testicular anormal, conduint a un increment de segregacions errònies de les cèl·lules diploides 46,XY presents al teixit testicular.En individus amb cariotip 47,XYY, algunes cèl·lules amb aquesta dotació cromosòmica tenen la capacitat d'iniciar la meiosi. Les dades en aquests individus suggereixen l'existència d'un bloqueig de les cèl·lules aneuploides en l'estadi d'espermatòcit primari, secundari o en l'estadi d'espermàtide, donant lloc a una eliminació continuada de les cèl·lules anormals al llarg de l'espermatogènesi.Les avantatges que presenten les tècniques d'hibridació in situ fluorescent per a l'estudi citogenètic de l'espermatozoide humà ha permès la seva incorporació com a eina de diagnòstic genètic en individus de risc. Tenint en compte que la majoria d'aquests individus presenten problemes de fertilitat, l'anàlisi del contingut cromosòmic dels espermatozoides permet determinar, per a cada cas en particular, el risc potencial de transmissió a la descendència. Aquesta informació pot ser utilitzada per establir el programa de reproducció assistida més adequat a les característiques de cada cas. / Fluorescent in situ hybridization methodology allows analyzing the chromosome content of spermatozoa. With the analysis of the gametes, it is possible to determine the real risk of transmission of a chromosome abnormality to the offspring.We have used this methodology in the cytogenetic study of human spermatozoa obtained from two types of men; control men, in order to determine the basal incidence of chromosome anomalies in the normal population, and high risk men, that is, patients that for different reasons, we suspect the presence of a increased incidence of chromosome anomalies.Our results underline that the biological mechanisms which are behind of the non-disjunction phenomenon affected much more some chromosomes than others.The fathers of Down syndrome children of paternal origin showed a significant increased of 21 aneuploidies, suggesting that these patients had an increase risk of transmission of a chromosomal abnormality to the offspring.In carriers of structural reorganizations, the proportion of the expected genotypes in each type of segregation differs of the 1:1 proportion. This result suggests the presence of meiotic checkpoint along meiosis eliminating selectively those cells with chromosome anomalies. In some types of reorganizations, the risk of transmission to the offspring could also be increased for the presence of interchromosomal effects.In Klinefelter patients, our results underline the inability of the 47,XXY cell line to initiate the meiotic process. The abnormal sex chromosome constitution found in spermatozoa could be attributed to segregation errors in XY cells placed in a compromised testicular environment.In 47,XYY patients, although some aneuploid cells are meiotically competent, it seems that there is a continuous elimination of chromosomal abnormal germ cells along spermatogenesis, parallel to an increase in the percentage of normal cells.Altogether, the data underline the importance of incorporating the screening of aneuploidies in sperm in the genetic screening of affected patients, in order to determine the real risk of transmission of a numerical chromosome abnormality to the offspring.Obviously, the only thing that is obtained after sperm FISH studies is information, but this information could be very useful to the affected couple, to help them and the medical team, to choose among different possibilities of assisted reproduction methodologies

En las zonas alto-andinas del Perú, donde la agricultura y ganadería común no son viables, la crianza de camélidos, como la alpaca, constituye el único medio de subsistencia y principal actividad económica de las familias campesinas. Por tanto, el estudio de la fisiología reproductiva de la alpaca es indispensable para el establecimiento de proyectos de mejoramiento genético y reproducción asistida. Las proteínas que participan en la interacción de los gametos de las alpacas son desconocidas, es por ello que el presente trabajo planteó determinar la expresión proteica y la caracterización de una proteína de Zona Pelúcida (ZP) que induzca espontáneamente la reacción acrosómica (RA) en ovocitos de alpacas. En la mayoría de mamíferos la ZP está conformada por tres glicoproteínas ZP1, ZP2 y ZP3. En el presente trabajo se demostró que en las alpacas existen también 3 glicoproteínas con pesos moleculares de 110 kDa, 75 kDa y 65 kDa correspondientes a ZP1a, ZP2a y ZP3a, respectivamente. La ZP3 es el agonista natural de la RA en espermatozoides de la misma especie, sin embargo, los resultados obtenidos en el presente trabajo demuestran que ZP3a es capaz de inducir la RA tanto en espermatozoides de ratón como en los de su propia especie. De esta manera, este estudio ayuda al mejor entendimiento de la naturaleza de las glicoproteínas de ZP en alpacas. / In areas of high-Andean Peru, where agriculture and livestock are not viable, the breeding of camels, such as alpaca is the only means of livelihood and main economic activity of farm households. Therefore, the study of the reproductive physiology of alpacas is essential to the establishment of projects in assisted reproduction and genetic improvement. The proteins involved in the interaction of the alpaca’s gametes are unknown; therefore the present determined the protein expression and characterization of a zona pellucida (ZP), which induce the spontaneous acrosome reaction (AR) in oocytes of alpacas. In most mammals, the zona pellucida (ZP) is composed by three glycoproteins ZP1, ZP2 and ZP3. In this research demonstrated that in Alpacas there are also 3 glycoproteins with molecular weights of 110 kDa, 75 kDa and 65 kDa corresponding to aZP1, aZP2 and aZP3, respectively. ZP3 is the natural agonist of the acrosome reaction (AR) in spermatozoa of the same species, however, our results obtained in this research showed that aZP3 can also induce RA in mouse sperm and in their own species. Therefore, this study helps to better understand the nature of the zona pellucida glycoproteins in alpacas.

El presente trabajo consta de 3 experimentos y tuvo como objetivo principal evaluar el efecto de 2 antioxidantes análogos de superóxido dismutasa (Tempo y Tempol) durante los procesos de criopreservación y vitrificación de espermatozoides de alpaca sobre parámetros de funcionalidad espermática. En el Experimento 1, 15 muestras espermáticas obtenidas de la cola del epidídimo y 5 muestras de semen de alpaca fueron vitrificadas en medios Tris base y HTF utilizando diferentes azúcares (fructosa, sacarosa y trehalosa) en 3 concentraciones diferentes (0.25, 0.5 y 1.0 M). Se obtuvo menos de 1% de motilidad y menos de 5% de viabilidad utilizando el medio HTF. En el Experimento 2, 6 muestras de espermatozoides frescos de alpaca fueron incubados durante 3 horas a 37 °C en un medio Tris-base junto con polimorfos nucleares (PMN) activados con 100 nM de PMA (Phorbol myristate acetate) para inducir la formación de ROS. Se demostró que la motilidad espermática se reduce significativamente (p< 0.05) en el grupo con polimorfos activados (13.67%) en comparación con el grupo control (22.42%). En el Experimento 3, se evaluó el efecto de 2 antioxidantes análogos de superóxido dismutasa (Tempo y Tempol) durante el proceso de criopreservación en un medio en base a leche descremada y etilenglicol, encontrando que con la adición de Tempo y Tempol se obtiene una mayor (p<0.05) motilidad espermática en comparación al grupo control (19.63% y 22.57% vs. 10.62%), mayores porcentajes (p<0.05) de integridad de membrana (14.31% y 13.08% vs. 10.38%) y se obtiene (p<0.05) mayores porcentajes de espermatozoides con ADN no fragmentado (74.20% y 83.76% vs. 63.68%). La variable espermática de vitalidad/integridad acrosomal no fue afectada significativamente por la adición de los antioxidantes Tempo y Tempol. Se concluye que la incubación de espermatozoides de alpaca incubados con PMN activados con PMA tienen un efecto nocivo en la motilidad espermática, y que durante la criopreservación de semen la pérdida de motilidad espermática, pérdida de integridad funcional de membrana y aumento de la fragmentación de ADN espermático pueden ser prevenidos parcialmente mediante la utilización delos antioxidantes Tempo ó Tempol como parte del dilutor de semen. -- Palabras clave: Espermatozoides, alpaca, criopreservación, ROS, antioxidante, tempo, tempol. / -- The present study had 3 experiments and the main objective were to evaluate the effect of two superoxide dismutase mimics (Tempo and Tempol) during semen sperm cryopreservation and vitrification on alpaca sperm function. In Experiment 1, vitrification of alpaca sperm was evaluated using extenders based on Tris solution and HTF, with different sugars as cryoprotectants (fructose, sucrose, and trehalose) in different concentrations (0.25, 0.5 y 1.0 M). Only few spermatozoa motile (<1%) and viable (<5%) were found in group HTF.In Experimental 2, six samples of fresh alpaca sperm were incubated during 3 hours at 37 °C on a medium based on Tris with polymorphonuclear activated by 100 mM PMA (phorbol myristate acetate) to induce ROS production. Sperm motility was significantly reduced (p< 0.05) when sperm were incubated on a medium con high levels of ROS (13.67%) in comparison with control group (22.42%). In Experiment 3, two superoxide dismutaseanalogues (antioxidants Tempo and Tempol) were evaluated during cryopreservation process on an extender based on skim milk and ethylene glycol. Addition of Tempo or Tempol result in higher (p< 0.05) sperm motility in comparison than control group (19.63% and 22.57% vs. 10.62%). Functional sperm membrane integrity were also higher (p<0.05) in groups Tempo (14.31%) and Tempol (13.08) than control group (10.38%). In the same way, DNA integrity washigher (p< 0.05) in groups Tempo (74.20%) and Tempol (83.76%) than control group (63.68%). Viability and acrosomal integrity were not affected by cryopreservation with superoxide dismutase analogues. We conclude that alpaca sperm incubation on PMN activated by PMA had a detrimental effect on alpaca sperm motility, and that motility, functional sperm membrane integrity and DNA integrity could be partially protected by administration of Tempo or Tempol as components of extender for cryopreservation alpaca semen. -- Key words: Sperm, alpaca, cryopreservation, ROS, antioxidant, tempo, tempol / Tesis

Orientador: Irani Quagio-Grassiotto / Coorientador: Ricardo Cardoso Benine / Banca: Cesar Martins / Banca: Francisco Langeani Neto / Banca: José Lino Neto / Banca: Mary Anne Heidi Dolder / Resumo: Cichlidae é a maior família de peixes não-Ostariophysi de água doce, e uma das maiores famílias de vertebrados. De ampla distribuição mundial, os gêneros neotropicais atualmente foram elevados a status de subfamília, Cichlinae. As hipóteses existentes para as relações de parentesco em Cichlinae, tendo por base características osteológicas e de partes moles e mais recentemente dados moleculares, não são congruentes entre si. Sabe-se que as características espermáticas contem informações filogenéticas e podem ser úteis no estudo do relacionamento entre as espécies. Neste estudo, descreveu-se a espermiogênese e os caracteres ultraestruturais dos espermatozóides de membros da subfamília Cichlinae e da subfamília Pseudocrenilabrinae. Os dados resultantes foram utilizados numa análise filogenética, que comparada as proposta pré-existentes, recupera alguns dos grupos mais proximamente relacionados, caso dos gêneros Retroculus e Cichla. Estes gêneros são reconhecidos como basais dentro da subfamília. Outro grupo que se mantém, é o formado por Andinoacara rivulatus, Cichlasoma portalegrense e Aequidens tetramerus, membros da tribo Cichlasomatini. Além disso, a tribo Cichlasomatini ocupa posição derivada no cladograma, como em hipóteses anteriores / Abstract: Cichlidae is the largest family of non-Ostariophysi freshwater fish and one of the largest family of vertebrates. With a worldwide distribution, the Neotropical genera have been now elevated to a subfamily status, Cichlinae. The existing hypotheses for the phylogenetic relationships in Cichlinae, based on osteological features and soft tissue and more recently on molecular data, are not congruent. It is known that the spermatics characteristics contains phylogenetic information and can be useful in the studies of the relationship between species. Then, this study described the spermiogenesis and sperm ultrastructural characterics from some members of the Neotropical subfamily Cichlinae and from the African, Pseudocrenilabrinae. The data was used in a phylogenetic analysis, that when compared to pre-existing proposals, recovers some of the most closely related genera, for example, Cichla and Retroculus. These genera are recognized as basal within the subfamily Cichlinae. Another group that remains, it is that formed by Andinoacara rivulatus, Cichlasoma portalegrense and Aequidens tetramerus, members of the tribe Cichlasomatini. The tribe Cichlasomatini occupies a derivative position in the cladograma / Doutor

Made available in DSpace on 2015-01-26T13:21:22Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-06-18Bitstream added on 2015-01-26T13:30:36Z : No. of bitstreams: 1 000792285.pdf: 363368 bytes, checksum: bfcb9b7c5a5d2b307fa8df344ff91ccf (MD5) / Muitas biotecnologias estão sendo desenvolvidas visando a conservação do material genético de garanhões de alto valor zootécnico. Dentre estas pode-se destacar a colheita de espermatozoides do epidídimo de animais que sofreram algum trauma ou enfermidade que impossibilitem a colheita do sêmen, óbito ou eutanásia. Porém essas células espermáticas não entram em contato com o plasma seminal, importante por conter proteínas que participam de processos relacionados à proteção e ligação dos espermatozoides aos reservatórios espermáticos na tuba uterina. Neste sentido, sugere-se que haja importantes alterações bioquímicas nas células espermáticas do epidídimo, objetivando-se assim com esta revisão, estudar as principais diferenças morfofuncionais entre os espermatozoides provenientes do epidídimo e do ejaculado / Several biotechnologies are being developed aiming genetic material conservation of stallions with high zootechnical value, as we can highlight the harvest epididymis’s sperm of animals who suffered trauma or illness that makes impossible the semen collection, death or euthanasia. However these sperm cells do not get in touch with seminal plasma, important whereas it has proteins that participate in processes related to the protection and binding of sperm to the sperm reservoir in the oviduct. In this sense, it suggests that there is significant biochemical changes in epididymal sperm, aiming with this review to study the main morphological and functional differences between the sperm from the epididymis and ejaculated

Made available in DSpace on 2016-09-27T13:40:09Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2004-07-15. Added 1 bitstream(s) on 2016-09-27T13:45:22Z : No. of bitstreams: 1 000226861.pdf: 928621 bytes, checksum: 36b3397f0893bf6232865ca39606779e (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Amostras de sêmen e testículo foram coletadas de exemplares machos e adultos de Piracanjuba (Brycon orbignyanus). Jundiá (Rhamdia quelen) e Piraputanga (Brycon hilarii) no Centro de Aqüicultura da UNESP (CAUNESP) - Jaboticabal - SP (Brasil) e no Centro Nacional de Pesquisa em Peixes Tropicais (CEPTA) - Pirassununga SP (Brasil). Análises macroscópicas evidenciaram características relacionadas à cor, aspecto e volume. Microscopicamente foram avaliadas: Motilidade, viabilidade e concentração dos espermatozóides. Bioquimicamente foram analisados os principais componentes do plasma seminal, íons (sódio, potássio, magnésio e cálcio), osmolaridade e concentração de glicose. Para a realização dos estudos ultraestruturais, fragmentos dos testículos foram fixados em glutaraldeído 2,5% e processados segundo rotina de microscopia eletrônica de transmissão. O objetivo deste trabalho foi analisar, comparativamente, os parâmetros seminais e a estrutura dos espermatozóides de 3 espécies de peixes neotropicais (Piracanjuba, Brycon orbignyanus, Piraputanga, Brycon hilarii e Jundiá, Rhamdia quelen). Na piracanjuba, o sêmen apresentou coloração amarelada e aspecto aquoso. Em jundiá a cor do sêmen é branca e o aspecto cremoso. Na piraputanga a coloração do sêmen é esbranquiçada e o aspecto leitoso. Se comparamos estas características com a concentração espermática encontrada em piracanjuba (2,72 x 109 ± 1,92 x 109 sp/mL), jundiá (4,57 x 1010 ± 1,50 x 1010 sp/mL) e piraputanga (6,46 x 109 ± 2,72 x 109 sp/mL) e com os valores do espermatócrito (5,5%, 93,5% e 16,6% respectivamente), podemos concluir que quanto mais cremoso for o sêmen, maior será sua concentração espermática. A piracanjuba apresentou o menor valor de porcentagem de motilidade espermática (77±6,74%). Por outro lado, observou-se que a composição iônica varia entre as espécies e dentro das... / Semen and testes samples were collected of male adults of Piracanjuba (Brycon orbignyanus). Jundiá (Rhamdia quelen) and Piraputanga (Brycon hilarii) in the Aquaculture Center of UNESP (CAUNESP) - Jaboticabal - SP (Brazil) and in the National Center of Research in Tropical Fish (CEPTA) - Pirassununga - SP (Brazil). Macroscopic analyses evidenced characteristics related to the color, aspect and volume. It was microscopically appraised: The motility, viability and cell concentration of the sperm. The main biochemistry components of the seminal plasm, ionic (sodium, potassium, magnesium and calcium), osmolality and glucose concentration were analyzed. For the accomplishment of the ultrastructural studies, fragments of testicular tissue were fixed in glutaraldehyde 2,5% and processed according to transmission electron microscope routine. The aim of this study was analyze comparatively, the seminal parameters and the structure of the spermatozoon of 3 neotropical fish species (Piracanjuba, Brycon orbignyanus, Piraputanga, Brycon hilarii and Jundiá, Rhamdia quelen). In the piracanjuba, the semen is yellowish and with aqueous aspect. In jundiá the color of the semen is white and with creamy aspect. In the piraputanga the coloration of the semen is whitish and milky aspect. Comparing these characteristics with the sperm concentration found in piracanjuba (2,72 x 109 ± 1,92 x 109 sp/mL), jundiá (4,57 x 1010 ± 1,50 x 1010 sp/mL) and piraputanga (6,46 x 109 ± 2,72 x 109 sp/mL) and with the values of the spermatocrit (5,5%, 93,5% and 16,6% respectively), we can observed that the more creamy semen, the bigger the sperm concentration. The piracanjuba presented the smallest value of percentage of sperm motility (77±6,74%). On the other hand, it was observed that the ionic composition varies among the species and inside of the same ones, due to factors as the environment or to the reproduction ...