Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Poucos organismos são aptos a suportar o alto estresse provocado pelas variações de temperatura e alta dessecação na faixa superior da região entremarés de costões rochosos, sendo um deles o cirripédio Chthamalus. Apesar da sua resistência, vivem constantemente próximos ao seu limite de tolerância fisiológica, o que pode influenciar suas populações. O objetivo deste estudo foi caracterizar as flutuações das populações de Chthamalus spp. na faixa superior da região entremarés em quatro costões rochosos na Baía da Ilha Grande entre 2002 e 2012, relacionando estas variações com os fatores ambientais temperatura do ar, temperatura superficial marinha e precipitação, verificando o potencial destes organismos como indicadores de variações climáticas. Para isso foram investigadas a temperatura do ar e precipitação a partir de dados da estação meteorológica de Angra dos Reis e temperatura da superfície do mar a partir de imagens de satélite (MODIS/AQUA), além das porcentagens de cobertura de Chthamalus spp. a partir de amostragens sazonais. Em geral o estudo indica que as populações foram influenciadas pelas variáveis biológicas recrutamento e competição intraespecífica. Foram verificadas grandes diferenças entre as populações nos costões rochosos estudados. A estação C1, apresentou altas coberturas de cirripédios jovens e adultos ao longo de praticamente todo o período de estudo. Na estação C2 ocorreram as maiores variações, enquanto nas estações C3 e C4 ocorreram coberturas menores e variações menos proeminentes. Estas diferenças provavelmente estiveram ligadas às características físicas de cada costão rochoso. Os anos de 2003 e 2010 foram caracterizados como de altas temperaturas (temperaturas do mar e do ar) quando comparados com os demais anos de estudo. Estes anos foram ainda caracterizados pela ocorrência do fenômeno El Niño, com altas anomalias térmicas, o que indica que este fenômeno climático influenciou as temperaturas da região. Nestes mesmos anos as coberturas de Chthamalus spp. foram relativamente baixas, o que indica que o estresse térmico afetou as populações deste cirripédio. Pode-se inferir através deste estudo que as populações de Chthamalus spp. sofrem influência direta dos fatores ambientais investigados, sendo com isso um potencial indicador de mudanças climáticas. / Few organisms are able to withstand high stress caused by temperature variations and high desiccation in the upper limit of the intertidal zone of rocky shores, as the barnacle Chthamalus. Despite their resistance, these organisms constantly live near their physiological tolerance limit, which influence their populations. The aim of this study was to characterize the fluctuations of Chthamalus spp. populations in the upper zone of four intertidal rocky shores in Ilha Grande Bay between 2002 and 2012, relating these changes to the environmental factors of air temperature, sea surface temperature and precipitation, verifying the potential of these organisms as indicators of climatic variations. For that the air temperature and precipitation were investigated using data from the meteorological station of Angra dos Reis and sea surface temperature from satellite images (MODIS/AQUA), in addition to the coverage percentages of Chthamalus spp. from seasonal samplings. In general the study indicates that populations were influenced by the biological variables recruitment and intraspecific competition. Large differences were found between the fluctuations on the rocky shores studied. The station C1, showed high coverage of barnacles and young adults throughout almost the entire period of study. At the station C2 occurred the largest variations, while in C3 and C4 stations have ocurred the smaller coverages and less prominent variations. These differences were probably related to the physical characteristics of each rocky shore. The years 2003 and 2010 were characterized as high temperature yeras (temperatures of sea and air) when compared to the other years of study. These years were also characterized by the occurrence of El Niño, with high thermal anomalies, indicating that this climatic phenomenon influenced the temperatures in the region. In these same years the coverage of Chthamalus spp. were relatively low, indicating that heat stress affected the populations of this cirripédio. Is possible infer from this study that the cirripédio Chthamalus spp. is under direct influence of environmental factors investigated, being, with that, a potential indicator of climate change.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:30:16Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2007-10-11Bitstream added on 2014-06-13T19:18:50Z : No. of bitstreams: 1 silva_vk_me_jabo.pdf: 5372703 bytes, checksum: a8a04e03dbbf0715b7d80c672ddce066 (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O objetivo do presente trabalho foi o de determinar a digestibilidade do extrato de leveduras, avaliação do desempenho, rendimento de carcaça, morfometria e ultra-estrutura da mucosa intestinal e resposta imune humoral de frangos de corte criados em diferentes temperaturas e que receberam, na fase pré-inicial, ração contendo ou não extrato de leveduras e/ou prebiótico. Foram utilizados 1440 pintainhos Cobb-500® machos de um dia de idade, criados sob diferentes temperaturas a partir do primeiro dia de vida. As rações acrescidas ou não com extrato de leveduras e/ou prebiótico foram oferecidas somente na fase pré- inicial (1-7 dias) e a partir do 8º dia todas as aves receberam a mesma ração. Conclui-se que o extrato de leveduras apresenta 92,49% de matéria seca, 48,07% de proteína bruta, 4.883 Kcal/kg de energia bruta, e apresenta, em média, um coeficiente de digestibilidade verdadeira dos aminoácidos de 99,42%, sendo rico em ácido glutâmico, leucina, ácido aspártico, serina, glicina. A alta temperatura ambiente prejudicou o desempenho, rendimento de carcaça, morfometria intestinal e resposta imune humoral. A inclusão de prebiótico na ração pré-inicial resultou em maior ganho de peso e melhor conversão alimentar nas aves criadas sob alta temperatura, ao final de 42 dias de idade, além de aumentar a viabilidade criatória até os 21 dias de idade. Observou-se também que a inclusão dos produtos nas temperaturas quente e fria produziu efeito benéfico sobre as vilosidades frente ao estresse ambiental e que os aditivos estudados não produziram efeito sobre a resposta imune humoral para VDN e VDG ao longo do ciclo produtivo do frango de corte. / The aim of this experiment was to determine the digestibility of the yeast extract, estimate the performance, carcass yield, intestinal mucosa structure and ultra structure and humoral immune response of broiler reared in different temperatures and that received in started diet containing or not extract of yeasts or prebiotic. 1440 one-day old male Cobb-500® were reared in different temperatures from first day of life. The diets with or without yeast extract and/or prebiotic were provided only in starter diet (1 to 7 days), forward of 8 days all broiler were fed with same commercial diet. The yeast extract contain 92.49% of dry matter, 48.07% of crude protein, 4,883 kcal/kg of crude energy /kg, and, on average a coefficient of digestibility true of amino acids of 99.42%. The amino acids digestibilities are glutamic acid, leucine, aspartic acid, serine, glycine. The high temperature damages the performance, carcass yield, intestinal mucosa structure, villus densities and antibody titters. The prebiotic inclusion in started diet resulted in increase body weight and improved feed conversion in the birds reared in high temperature to the 42 days of age and besides increase the viability until the 21 days of age. It was also observed that the inclusion of the two products in the hot and cold temperatures produced beneficial effect on the villus front in environmental stress and that the yeast extract and prebiotic did not produce effect on immune humoral response along the productive cycle of broiler.

Submitted by (edna.saturno@ufrpe.br) on 2016-08-11T13:34:44Z No. of bitstreams: 1 Barbara Loureiro.pdf: 705738 bytes, checksum: 42e26d1f40114410bbde6b147c9d19bd (MD5) / Made available in DSpace on 2016-08-11T13:34:44Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Barbara Loureiro.pdf: 705738 bytes, checksum: 42e26d1f40114410bbde6b147c9d19bd (MD5) Previous issue date: 2006-04-24 / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / We tested the hypothesis that heat shock and tumor necrosis factor-α (TNF-α) induce apoptosis in bovine embryos through a caspase-9 dependent mechanism.Experiment 1 determined whether the caspase-9 inhibitor, z-LEHD-fmk, blocks the apoptotic effects of heat shock and TNF-α. Embryos were collected on day 4, 5, and 6 after in vitro insemination and cultured for 24 h in the presence of either 100 μM z-LEHD-fmk reconstituted in 0.5% (v/v) DMSO or vehicle (DMSO) at either 1) 38.5°C for 24 h (control), 2) 41°C for 15 h followed by 38.5°C for 9 h (heat shock), or 3) 38.5°C for 24h with 10 ng/mL murine TNF-α. The proportion of blastomeres undergoing apoptosis was determined using TUNEL labeling. The experiment was replicated 4-5 times/day using 172-248 embryos/day. In control embryos, heat shock and TNF-α increased the proportion of cells that were TUNEL-positive as compared to embryos cultured at 38.5°C for 24 h (P<0.001). For embryos incubated with z-LEHD-fmk, in contrast, neither heat shock nor TNF-α caused an increase in TUNEL labeling (treatment x inhibitor; P<0.05). Experiment 2 tested effects of different concentrations of z-LEHDfmk on apoptotic responses of embryos to TNF-α. Embryos ³16 cells were collected on Day 6 and cultured in the presence of different concentrations of z-LEHD-fmk (0, 1 10, and 100 μM ) ± 10 ng/mL TNF-α.. After 24 h at 38.5°C, embryos were washed, fixed, and analyzed by TUNEL. The experiment was replicated 4 times (176 embryos). Addition of 10 ng/mL TNF-α increased the percentage of cells that were TUNELpositive and this increase was blocked by all concentrations of z-LEHD-fmk (TNF-α x inhibitor; P<0.05). For Exp. 3, we analyzed whether heat shock increases caspase-9 activity and whether z-LEHD-fmk blocks this increase. Embryos at the morula or early blastocyst stage were collected on day 6 and transferred to a new drop with 100 μM z- LEHD-fmk or DMSO vehicle. Embryos were then cultured at either 38.5°C for 24 h or 41°C for 15 h followed by 38.5°C for 9 h. At the end of heat shock, embryos were washed and then incubated in a caspase-9 substrate (5 μM CaspaLux 9-M1D2) at room temperature for 1 h. Caspase-9 activity was then determined by evaluation of fluorescent intensity. Embryos were classified as having low, medium or high caspase activity. The experiment was replicated 5 times using 22-26 embryos/treatment. Heat shock increased the percent of embryos classified as having medium and high caspase-9 activity and z-LEHD-fmk blocked this effect (treatment P<0.05; inhibitor P<0.001). For Exp. 4, effects of TNF-α on caspase-9 activity were evaluated. Embryos at day 6 were cultured at 38.5°C for 3, 6, 9, 12, and 15 h with 10 ng/mL TNF-α or vehicle and then caspase-9 activity was measured as described before. The experiment was replicated 8 times using 37-39 embryos/treatment. The proportion of embryos classified as having medium or high caspase activity was increased by TNF-α at all time points except 3 h (treatment P< 0.05; inhibitor P<0.01). Exp. 5 was performed to analyze the effects of heat shock and TNF-α on mitochondrial membrane integrity. Embryos at Day 3.5 were incubated at 38.5°C for 24 h + TNF-α or were incubated at 41°C for 15 h followed by 9 h at 38.5°C (heat shock). After treatment, embryos were washed and incubated in 20 nM of DiOC6 at 38.5°C for 20 min in the dark. Mitochondrial depolarization was measured by quantifying the fluorescence units/area of each embryo. Heat shock caused loss in mitochondria membrane potential (P< 0.01). However, TNF- α did not show a significant decrease on membrane polarization. The experiment was replicated 5 times (71-78 embryos/treatment). In conclusion, activation of caspase-9 dependent pathways is involved in the induction of apoptosis by heat shock and TNF-α. / Cinco experimentos foram realizados para testar a hipótese de que o estresse térmico e o fator de necrose tumoral-α (TNF-α) induzem apoptose em embriões bovinos através de um mecanismo dependente da caspase-9. O experimento 1 determinou se o inibidor de caspase-9, z-LEHD-fmk, bloqueia os efeitos apoptóticos do estresse térmico e do TNF- α. Embriões foram selecionados nos dia 4, 5 e 6 após a fertilização in vitro e incubados por 24 h ± 100 μM z-LEHD-fmk reconstituído em 0.5% (v/v) DMSO ou veículo (DMSO) à 1) 38.5°C por 24 h (controle), 2) 41°C por 15 h seguido de 38.5°C por 9 h (estresse térmico), ou 3) 38.5°C por 24 h com 10 ng/mL de TNF-α. A proporção de blastômeros apoptóticos foi analisada utilizando-se a técnica de TUNEL. O experimento foi repetido 4-5 vezes utilizando 172-248 embriões por dia. Nos grupos controle o estresse térmico e o TNF-α aumentaram a proporção de células TUNEL-positivas quando comparados aos embriões incubados a 38.5°C for 24 h (P<0.001). Em contraste, embriões incubados com z-LEHD-fmk e submetidos ao estresse térmico e ao TNF-α não apresentaram aumento nas células TUNEL-positivas (tratamento x inibitor; P<0.05). O experimento 2 testou os efeitos de diferentes concentrações de z-LEHD-fmk nas respostas apoptóticas dos embriões ao TNF-α. Embiões ³16 células foram selecionados no dia 6 e incubados na presença de z-LEHD-fmk em 0, 1 10, and 100 μM ± 10 ng/mL TNF-α.. Após 24 h a 38.5°C, os embriões foram lavados, fixados e analisados por TUNEL. O experimento foi repetido 4 vezes (176 embriões). A adição de 10 ng/mL TNF-α aumentou a porcentagem de células TUNEL-positivas e este aumento foi bloqueado por todas as concentrações de z-LEHD-fmk (TNF-α x inibidor; P<0.05). No experimento 3, analisamos se o estresse térmico aumenta a atividade da caspase-9 e se o z-LEHD-fmk bloqueia este efeito. Embriões em estágio de mórula ou blastocisto inicial foram selecionados no dia 6 e transferidos para novas gotas contendo 100 μM z-LEHD-fmk ou DMSO veículo. Os embriões foram incubados a 38.5°C por 24 h ou 41°C por 15 h seguido de 38.5°C por 9 h. Ao final do estresse térmico os embriões eram lavados e incubados no substrato para caspase-9 (5 μM CaspaLux 9- M1D2) a temperatura ambiente por 1 h. A atividade da caspase-9 foi determinada avaliando-se a intensidade da fluorescência. Os embriões foram classificados apresentando baixa, média e alta atividade de caspase. O experimento foi repetido 5 vezes utilizando 22-26 embriões/tratamento. O estresse térmico aumentou a porcentagem de embriões classificados como tendo média e alta atividade de caspase-9 e z-LEHD-fmk bloqueou este efeito (tratamento P<0.05; inibidor P<0.001). Para o experimento 4 foram medidos os efeitos do TNF-α na atividade da caspase-9. Embriões no dia 6 foram incubados a 38.5°C por 3, 6, 9, 12, e 15 h com 10 ng/mL TNF-α ou veículo, analisando-se a atividade da caspase-9 foi como descirto anteriormente. O experimento foi repetido 8 vezes utilizando 37-39 embriões/tratamento. A proporção de embriões classificados como média e alta atividade de caspase aumentaram quando expostos ao TNF-α em todos os períodos de exposição, exceto 3 h (tratamento P<0.05; inibidor P<0.01). O experimento 5 foi realizado para analisar os efeitos do estresse térmico e TNF-α na integridade da membrana mitocondrial. Embriões no dia 3.5 foram incubados com + TNF-α a 38.5°C for 24 h ou a 41°C por 15 h seguido por 9 h a 38.5°C. Após os tratamemtos os embriões foram lavados e incubados em 20 nM de DiOC6 a 38.5°C por 20 min no escuro. A despolarização da mitocôndria foi mensurada por quantificação da fluorescência por unidade/área em cada embrião. O estresse térmico causou uma significativa perda no potencial da membrana mitocondrial (P<0.01). Entretanto, TNF-α não apresentou diminuição significativa. O experimento foi repetido 5 vezes (71-78 embriões/tratamento). Concluindo, o mecanismo de ativação da caspase-9 está envolvido na indução da apoptose pelo estresse térrmico e TNF-α.

Submitted by (edna.saturno@ufrpe.br) on 2016-08-24T15:24:25Z No. of bitstreams: 1 Edivaldo Rosas Santos Junior.pdf: 600124 bytes, checksum: b586f72fa1aa6d9040b988d57db4cab4 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-08-24T15:24:26Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Edivaldo Rosas Santos Junior.pdf: 600124 bytes, checksum: b586f72fa1aa6d9040b988d57db4cab4 (MD5) Previous issue date: 2010-02-24 / This study aimed to determine the Effect of heat stress during maturation of oocytes and in vitro production of embryos in goats and sheep. Ovaries were collected in a slaughterhouse and transported to the Laboratory of Biotechnical Reproduction of UFRPE. The cumulus oophorus complexes (COCs) were collected by the technique of "slicing" of the follicles from 2 to 6 mm in diameter and selected based on morphological classification and placed on the basic stages. In 10 replicates the COCs were submitted to the caloric heat stress at 41 ° C for 0 (the thermoneutral 39° C), 3, 6, 12, 18 and 24 hours of maturation in vitro. The percentage of oocytes was determined in the maturation, fertilization, cleaved (D-3), stage of 8-16 cells (D-4), morale (D-5), blastocyst(D-8) after fertilization and blastocyst positive for apoptosis by TUNEL assay. Significant difference (P < 0.05) in all time periods of heat stress in ripening. In sheeps the fertilization, D-3,D-4, D-5 and D-8 was not significantly different (P > 0.05) between the times of 18 vs 24 hours in blastocyst TUNEL positive at 0 vs 3, 3 vs 6, 12 vs 18 and 18 vs 24 h of heat stress. The results in goats showed on maturation, fertilization, D-3, D-4, D-5. The D-8 was not significantly different (P > 0.05) between the periods of 3 vs 6 to 18 vs 24 h and the blastocyst TUNEL positive at 0 vs 3, 3 vs 6, 12 vs 18 and 18 vs 24 h of heat stress. Under the conditions observed in this study, the results indicate that the time in which the oocyte is exposed to heat stress during maturation in vitro is essential to define the embryonic development and their level of apoptotic cells. / Esse estudo teve como objetivo determinar o efeito do estresse térmico durante a maturação de oócitos e seu reflexo na produção in vitro de embriões nas espécies caprina e ovina. Os ovários foram coletados em abatedouro e transportados ao Laboratório de Biotécnicas da Reprodução da UFRPE. Os complexos cumulus oophorus (CCOs) foram coletados pela técnica de “slicing” dos folículos entre 2 a 6 mm de diâmetro, selecionados com base na morfologia e colocados em meio básico de maturação. Nas 10 repetições, os CCOs foram submetidos aos tratamentos de estresse térmico calórico a 41°C por 0 (termoneutralidade a 39°C), 3, 6, 12, 18 e 24 horas de maturação in vitro. Os dados foram avaliados na maturação, fecundação, clivagem (D-3), estádio de 8-16 células (D-4), mórula (D-5), blastocisto (D-8) após fecundação e blastocistos positivos para apoptose através do ensaio de TUNEL. Foi observada diferença significativa (P < 0,05) em todos os tempos estudados de estresse térmico na maturação em ambas espécies. Em caprinos, houve diferença significativa (P < 0,05) também na fecundação, D-3, D-4, D-5. No D-8 não foi observada diferença significativa (P > 0,05) entre os tempos de 3 vs 6 e 18 vs 24 h e nos blastocistos TUNEL positivos nos tempos de 0 vs 3, 3 vs 6, 12 vs 18 e 18 vs 24 h de estresse térmico. Em ovinos, não foi observada diferença significativa (P > 0,05) na fecundação, D-3, D-4, D-5 e D-8 entre os tempos de 18 vs 24h e nos blastocistos TUNEL positivos nos tempos de 0 vs 3, 3 vs 6, 12 vs 18 e 18 vs 24h de estresse térmico. Nas condições observadas neste estudo, os resultados permitem concluir que o tempo em que o oócito é exposto ao estresse térmico durante a maturação in vitro é fundamental para definir o desenvolvimento embrionário e o nível apoptótico de suas células.

Submitted by (edna.saturno@ufrpe.br) on 2016-11-03T12:32:37Z No. of bitstreams: 1 Ricardo de Macedo Chaves.pdf: 847836 bytes, checksum: d3823ad319704f7a05a04fb624401ca9 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-11-03T12:32:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Ricardo de Macedo Chaves.pdf: 847836 bytes, checksum: d3823ad319704f7a05a04fb624401ca9 (MD5) Previous issue date: 2010-02-22 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / This study was divided in three stages and aimed to determine the cellular changes induced by heat stress on nuclear maturation in vitro and induction of cell death by apoptosis in goat oocytes and embryos. The ovaries of goats in the dry season and rainy season were collected in a slaughterhouse and transported to the Laboratory of Biotechnical Reproduction of UFRPE. The first stage, the cumulus oophorus complexes in goat of 12 repetitions were collected by the technique of "slicing" of the follicles from 2 to 6 mm in diameter and selected based on morphology. Divided into Group-1 (recovered) and Group-2 (in vitro matured), 25 oocytes per drop were placed in basic medium maturity (MBM). After collection of oocytes, it was determined the quality of oocytes, the enzyme activity of group II caspases with reagent PhiPhiLux-G1D2 and DNA fragmentation (TUNEL). Group-2, after maturation, were determined the stage of nuclear maturation, enzymes caspases and DNA fragmentation. In the stages of nuclear maturation stages of germinal vesicle, disruption of the germinal vesicle, metaphase I and II showed no significant difference (P > 0.05). There was no significant difference (P > 0.05) in the activity ofenzymes and caspases in DNA fragmentation of oocytes recovered and matured in vitro. The second stage, the cumulus oophorus complexes in goat were submitted to maturation, fertilization and in vitro. The percentage of cleaved oocytes was determined on day 3 (D-3) and the oocytes that developed to the stages of 8-16 cells (D-4), morulae (D-5) and blastocyst (D-8) after fertilization. The quality of blastocysts was assessed with the pigment DAPI and the determination of blastomeric positive for apoptosis by TUNEL assay. Significant difference (P < 0.05) stages of fertilization, cultivation in D-3 and morulae. No significant difference (P > 0.05) phases of maturation, growing on D-4, blastocyst and the TUNEL test. Based on these results, we concluded that the dry and rainy seasons will notinfluence the nuclear maturation in vitro apoptosis of oocytes and embryos and in vitro production of embryos in goats. / Este estudo foi dividido em duas etapas e teve como objetivo determinar as alterações celulares induzidas pelo estresse térmico na maturação nuclear in vitro e na indução da morte celular por apoptose em oócitos e embriões caprinos. Os ovários de cabras nas estações seca e chuvosa, foram coletados em abatedouro e transportados ao Laboratório de Biotécnicas da Reprodução da UFRPE. Na primeira etapa, os complexos cumulus oophorus caprinos de 12 repetições foram colhidos pela técnica de “slicing” dos folículos entre 2 a 6 mm de diâmetro e selecionados com base na morfologia. Divididos em Grupo-1 (recuperado) e Grupo-2 (maturados in vitro), 25 oócitos foram colocados por gota em meio básico de maturação (MBM). Após a coleta dos oócitos, foi determinado a qualidade dos oócitos, atividade das enzimas Caspases do grupo II com reagente PhiPhiLux-G1D2 e fragmentação de DNA (TUNEL). O Grupo-2, após maturação, foi determinado o estádio de maturação nuclear, enzimas Caspases e fragmentação de DNA. Nos estádios de maturação nuclear as fases de Vesícula Germinativa, Rompimento da Vesícula Germinativa, MetáfaseI e II não apresentaram diferença significativa (P > 0,05). Não foi encontrada diferença significativa (P > 0,05) na atividade das enzimas Caspases e na fragmentação do DNA dos oócitos recuperados e maturados in vitro. Na segunda etapa, os complexos cumulus oophorus caprinos foram submetidos à maturação, fertilização e cultivo in vitro. A porcentagem de oócitos clivados foi determinada no dia 3 (D-3) e os oócitos que se desenvolveram aos estádios de 8-16 células (D-4), mórula (D-5) e blastocisto (D-8) após a fertilização. A qualidade dos blastocistos foi avaliada com o corante DAPI e a determinação de blastômeros positivos para apoptose através do ensaio de TUNEL. Foi encontrada diferença significativa (P < 0,05) nas fases de fertilização, cultivo no D-3 e mórula. Não apresentaram diferença significativa (P > 0,05) às fases de maturação, cultivono D-4, blastocisto e no teste de TUNEL. Com base nos dados obtidos, podemos concluir que as estações seca e chuvosa não exercem influência na maturação nuclear in vitro, na apoptose de oócitos e embriões e na produção in vitro de embriões da espécie caprina..

Made available in DSpace on 2014-06-12T15:02:40Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo1195_1.pdf: 502946 bytes, checksum: 05de27e9cfcaa96d9a0be29bebb8ff1d (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2008 / Cascavéis mantidas em cativeiro sob estresse térmico apresentam redução na velocidade da digestão, alterações quantitativa e qualitativa da peçonha, o que sugere a modulação de genes relacionados à aclimatação a baixas temperaturas. O presente trabalho visou clonar uma fosfolipase e avaliar a expressão de genes relacionados a estresse em glândulas de peçonha de cascavéis da espécie Crotalus durissus cascavella (Cdcasca) submetidas a estresse térmico. Para tanto, a clonagem do cDNA de uma nova PLA2 foi realizada a partir da biblioteca de cDNA da glândula de peçonha de Cdcasca. A seqüência de aminoácidos deduzida dessa PLA2 indica que essa se enquadra no grupo das PLA2s ácidas, da classe II, cujos membros apresentam atividade enzimática. A fim de verificar o padrão de expressão após estresse térmico, os cDNA de glândulas de três cascavéis, provenientes da mesma ninhada, submetidas a extração da peçonha e, posteriormente, a temperaturas de 18°C (frio), 28 °C (controle) e 40° C (calor), por três dias, foram preparados e os transcritos de PLA2 e de proteínas de choque térmico (HSP70, HSP90, e HSF1) quantificados por PCR em tempo real. Os resultados mostraram que os níveis de transcritos de PLA2 foram 5,24 vezes mais altos nas glândulas de peçonha da serpente mantida no frio em relação ao controle, enquanto os transcritos de PLA2 das glândulas da serpente mantida no calor não apresentaram diferenças significativas. Os níveis de transcritos das HSPs e seu fator de transcrição (HSF1) não variaram de maneira apreciável na amostras. Os resultados provaram, pela primeira vez, influência da baixa temperatura na expressão de uma toxina na glândula de peçonha de C. d. cascavella, sugerindo que essas serpentes podem adaptar a composição da peçonha à condição de estresse térmico

No Brasil, assim como em outros países tropicais, a criação de bovinos é feita de maneira extensiva e, portanto é suscetível às intempéries climáticas. Esse tipo de criação pode levar ao estresse térmico, mesmo em animais zebuínos. Sob condições de estresse térmico é possível a ocorrência de degeneração testicular, e por isso, há a procura por animais tolerantes ao calor. Desta maneira, este trabalho objetivou a avaliação da tolerância ao calor de touros da raça Brahman utilizando o teste de tolerância ao calor, e também a análise da qualidade seminal relacionada à disponibilidade de sombra nos pastos. Para tal, foram utilizados 10 touros da raça Brahman com idades entre 24 e 30 meses. Duas semanas antes do início das análises, três amostras de sêmen foram colhidas de cada animal para o nivelamento biológico do sêmen, e então os touros foram separados em dois grupos: 5 touros foram alocados em pasto com disponibilidade de sombra enquanto 5 touros foram alocados em pasto sem qualquer tipo de sombra. O teste de tolerância ao calor foi realizado em três dias consecutivos típicos de verão, e as colheitas de sêmen foram realizadas em 14 dias durante 2 meses, totalizando 4 colheitas. Anteriormente a todas as colheitas foram avaliadas a consistência testicular e o perímetro escrotal. As características seminais avaliadas foram volume, aspecto, turbilhonamento, motilidade, vigor e concentração e morfologia espermáticas. Os dados obtidos foram analisados com o pacote estatístico Statistical Analysis System (SAS Institute Inc., 2004). Não houve diferenças estatísticas entre os dois grupos de animais. O resultado do teste de tolerância ao calor mostrou que os animais testados são tolerantes ao calor e apresentam boa capacidade termolítica. / In Brazil, similarly to others tropical countries, bovines are bred under environmental conditions of extensive system. This breed system type may lead to heat stress even on zebu animals. Under heat stress conditions, testicular degeneration can occur and, therefore, there is a search for animals that are heat tolerant. Therefore, the aim of this work was to evaluate the heat tolerance of Brahman bulls using the heat tolerance test and to verify the occurrence of any possible effect of shadow availability on pasture on semen quality. Ten Brahman bulls aging between 24 and 30 months were used in this work. For biological semen evaluation, three semen samples were collected from each animal two weeks before beginning. The bulls were then separated into two groups: 5 animals were allocated on pasture with shadow availability and 5 bulls were allocated on pasture without any kind of shadow. The heat tolerance test were performed in three consecutive typical summer days and the semen samples were collected each 14 days during 2 months, in a total of 4 semen samples per animal. Testicular consistence and scrotal circumference were measured just before every semen collection. The semen\'s characteristics evaluated were volume, aspect, mass movement, motility, straight movement, sperm concentration and morphological exam. Data obtained from experimental proceedings were analyzed by Statistical Analysis System program (SAS Institute Inc., 2004). No difference was observed (P>0.05) in any of the characteristics analyzed when Brahman bulls were maintained on pastures with or without shadow availability. The performance of tested animals on the heat tolerance test shows that these animals are heat tolerant and present good thermolitic ability.

O objetivo deste trabalho foi analisar a utilização dos minerais orgânicos - Cu, Fe, Mn, Se e Zn - na dieta de frangos de corte visando avaliar o desempenho, rendimento de carcaça e o efeito no poder poluente dos resíduos da avicultura. Foram realizados dois experimentos nas estações do inverno e verão, empregando seis dietas experimentais: T1 - Tratamento controle - suplementação de minerais inorgânicos; T2 - Suplementação de minerais orgânicos; T3 - Redução de 1/3 de T2; T4 - Redução 2/3 de T2; T5 - Aumento de 1/3 de T2 e T6 - Aumento de 2/3 de T2. Para os ensaios de desempenho, 1.080 animais foram alojados em 36 boxes com 30 aves cada, sobre cama de maravalha. Na análise de excreção, utilizou-se 144 animais para coleta total das excretas nos períodos de 19 a 22 e 33 a 36 dias de idade. As características de desempenho avaliadas foram peso corporal, ganho de peso, consumo de ração, conversão alimentar, viabilidade criatória, índice de eficiência produtiva, além de características de carcaça e análises dos microminerais nas excretas e na cama de frango. Para avaliação do efeito da estação do ano, análises ambientais (temperatura e umidade relativa) e fisiológicas (temperaturas retal e superficial - imagem termográfica) foram mensuradas. Além disso, foi realizado estudo da viabilidade econômica do uso dos minerais. Os dados foram avaliados por meio da análise de variância, utilizando o PROC GLM do SAS. A comparação entre tratamentos foi realizada por regressão e a comparação entre as fontes de minerais (orgânico e inorgânico) feita por contraste. Nos estudos do inverno e verão, não houve diferença entre as fontes e níveis de suplementação para desempenho no período total de criação e no rendimento de carcaça. No inverno, entretanto, os resultados de excreção com a fonte orgânica foram superiores. Além disso, os minerais orgânicos apresentaram custo mais elevado e rentabilidade inferior. Ao se comparar as estações do ano, verifica-se um efeito negativo do verão no desempenho, nas variáveis fisiológicas e na análise econômica. Em relação às fontes e níveis de microminerais empregados, os resultados indicam que a suplementação deve estar de acordo com as condições ambientais da criação, proporcionando, assim, melhor efeito produtivo, ambiental e econômico para a atividade avícola. / The purpose of this study was to evaluate the use of organic minerals - Cu, Fe, Mn, Se and Zn - in the diet of broiler chickens on performance, carcass yield and the effect on polluting power of poultry waste. Two experiments were conducted in the winter and summer seasons, employing six experimental treatments: T1 - Control - Inorganic Minerals Cu, Fe, Mn, Se, and Zn according to Rostagno et al. (2011), T2 - Organic Minerals, T3 - Reduction of 1/3 from T2, T4 - Reduction of 2/3 from T2, T5 - Increase of 1/3 from T2, and T6 - Increase of 2/3 from T2. 1.080 animals were housed in 36 boxes with 30 birds each, on a litter of wood shavings. In the analysis of excretion, 144 animals was used for total collection of excrement in the periods from 19 to 22 and 33 A 36 days of age. The performance characteristics evaluated were body weight, weight gain, feed intake, feed conversion, productive efficiency index, and carcass characteristics and analysis of trace minerals in the manure and poultry litter. To evaluate the effect of season, environmental analysis (temperature and humidity) and physiological (rectal and surface temperatures - Thermographic image) were measured. In addition, in this study was conducted economic feasibility of the use of minerals. Data were analyzed by analysis of variance using PROC GLM of SAS. The comparison among treatments was performed by regression and between the sources of minerals (organic and inorganic) was used contrast. In winter and summer studies, there was no difference between the sources and performance for supplementation levels and carcass yield in the total period. In winter, however, the excretion results with organic source were higher. In addition, the organic minerals showed higher cost and lower profitability. When comparing the seasons, there is a negative effect on the performance of the summer on physiological parameters and economic analysis. Regarding the sources and levels of trace minerals employees, the results indicate that supplementation should be in accordance with the environmental conditions of creation, thus providing better productive, environmental and economic effect for the poultry activity.

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Dairy cows subjected to hot environments have considerable production losses. The use of chromium and niacin nutritional options are used with satisfactory effects to improve performance in these situations. However, in the form of chromium yeast and chromium-niacin as protected have not been used together in animals subjected to heat stress, which is the purpose of this study. The production parameters, and metabolic behavior of dairy cows subjected to heat stress were evaluated. We used 46 lactating Holstein cows were kept in breeding system free stall, during the days February 2 to March 11, 2011. The animals were divided into four treatments: protected niacin (GN), yeast rich in chromium (GCr), niacin + chromium (GNCr) and control (GC). Milk production was recorded daily. Blood samples were collected on days zero, 12, 26 and 37 for determination of non-esterified fatty acids (NEFA), β-hydroxybutyrate (BHB), glucose, cholesterol, insulin, cortisol, tetraiodothyronine (T4) and triiodothyronine (T3). Milk samples were collected on days zero, 7, 28 and 35 for somatic cell count (SCC) and determination of milk urea nitrogen (MUN). The ingestive behavior of water consumption, rumination and idleness were seen once a week for 24 hours. The use of more chromium niacin increased milk production compared to isolated use of these supplements. The GCr had the lowest value of BHB, while GN had the highest value. The GN had higher cholesterol levels than the group GNCr. There were also differences in the groups GN and GCr and the values of T3, and GN showed the highest levels. The somatic cell count (SCC) was lower in animals supplemented with niacin (GNCr and NG). The MUN was higher in the groups receiving niacin compared to the group that received only chromium. The animals that received niacin, remained lying down more frequently compared to the control group, between 13 and 18 h. In the interval from 19 to 24 h water intake was higher for animals receiving niacin and higher rumination activity in animals receiving chromium. The use of chromium + niacin has a positive effect on milk production, as well as the reduction of SCC in animals submitted to heat stress. The 7% increase in milk production generated by the administration of niacin + chromium in the production presents an alternative for producers who need to maintain the production of his flock during periods of hot weather. / Vacas leiteiras submetidas à ambientes quentes apresentam consideráveis perdas produtivas. O uso de cromo e niacina são opções nutricionais usadas com efeitos satisfatórios para melhorar o desempenho nessas situações. No entanto, o cromo na forma de cromo-levedura e a niacina na forma protegida ainda não foram utilizados em conjunto em animais submetidos à estresse pelo calor, sendo este o objetivo do presente estudo. Os parâmetros produtivo, comportamental e metabólico de vacas leiteiras submetidas à estresse térmico foram avaliados. Foram utilizadas 46 vacas holandesas em lactação, mantidas em sistema de criação free-stall, durante os dias 2 de fevereiro à 11 de março de 2011. Os animais foram divididos em quatro tratamentos: niacina protegida (GN), levedura rica em cromo (GCr), niacina+cromo (GNCr) e controle (GC). A produção de leite foi anotada diariamente. Amostras de sangue foram coletadas nos dias zero, 12, 26 e 37 para determinação de ácidos graxos não esterificados (AGNE), β- hidroxibutirato (BHB), glicose, colesterol, insulina, cortisol, tetraiodotironina (T4) e triiodotironina (T3). Amostras de leite foram coletadas nos dias zero, 7, 28 e 35 para contagem de células somáticas (CCS) e determinação de nitrogênio uréico do leite (NUL). Os comportamentos ingestivo, de consumo de água, de ruminação e de ócio foram observados uma vez por semana, durante 24h. O uso de cromo mais niacina aumentou a produção de leite em relação ao uso isolado desses suplementos. O GCr apresentou o menor valor de BHB, enquanto o GN apresentou o maior valor. O GN apresentou maiores teores de colesterol que o grupo GNCr. Houve diferença também nos grupos GN e GCr quanto os valores de T3, sendo que o GN apresentou os maiores teores. A contagem de células somáticas (CCS) foi menor nos animais suplementados com niacina (GNCr e GN). O NUL foi maior nos grupos que receberam niacina em comparação ao grupo que recebeu apenas cromo. Os animais que receberam niacina, permaneceram deitados com maior frequência em comparação ao grupo controle, entre às 13 e 18 h. No intervalo das 19 ás 24 h houve maior ingestão de água pelos animais que receberam niacina e maior atividade de ruminação em animais que receberam cromo. O uso de cromo+niacina tem efeito positivo na produção de leite, bem como na redução da CCS em animais submetidos à estresse térmico. O incremento de 7% na produção de leite gerado pela administração da niacina+ cromo na produção apresenta uma alternativa aos produtores que necessitam manter a produção de seu rebanho em períodos de clima quente.

A paracoccidioidomicose (PCM) é uma micose sistêmica endêmica na América Latina, sendo o Brasil o país com maior número de casos. A enfermidade é adquirida por meio da inalação de propágulos de fungos do gênero Paracoccidioides e afeta principalmente os pulmões. Anteriormente, nosso grupo mostrou que o tratamento de camundongos infectados com P. brasiliensis com uma dose da proteína de estresse térmico de 60kDa recombinante de P. brasiliensis (PbHsp60r) induzia um efeito prejudicial na PCM, aumentando carga fúngica e lesão pulmonar, quando comparado a animais infectados e tratados com o veículo. No presente trabalho, buscou-se determinar se outra forma de apresentação da PbHsp60r poderia gerar um efeito benéfico em camundongos infectados com P. brasiliensis. Optou-se pelo plasmídeo pVAX1 subclonado com o gene da PbHsp60 (pVAX1-PB_HSP60). Após subclonagem do gene, foi mostrado, por Western blot, que anticorpos específicos para PbHsp60 eram produzidos por camundongos imunizados com três doses da construção e que a proteína era sintetizada por células HEK293 transfectadas com pVAX1-PB_HSP60. O tratamento dos animais infectados com três doses de pVAX1-PB_HSP60 ou pVAX1 subclonado com Hsp65 de M. leprae (pVAX1-ML_HSP65), que reconhecidamente melhora a PCM experimental, induziu uma diminuição de carga fúngica e da lesão pulmonar quando comparado com animais infectados e tratados com pVAX1 ou PBS. Uma dose de uma dessas construções não induziu melhora significativa na PCM quando comparado aos controles. Como esperado, os animais infectados e tratados com uma dose da PbHsp60r tiveram uma piora dos parâmetros de infecção, o que curiosamente não foi observado com os animais tratados com três doses dessa proteína recombinante, cuja melhora foi muito similar a dos animais infectados e tratados com três doses das construções plasmidiais. Ao pesquisar porque uma dose induz piora da infecção, observouse que PbHsp60r induz morte de linfócitos esplênicos in vitro, em um mecanismo dependente de TLR4, proteína adaptadora TRIF e receptor 1 de TNF. Esses resultados abrem perspectivas de se avaliar a importância da morte de células da resposta imunológica no curso da infecção por P. brasiliensis. / Paracoccidioidomycosis (PCM) is a systemic mycosis endemic in Latin America and Brazil, which holds most of the PCM cases. PCM is acquired through the inhalation of propagules of fungi from genus Paracoccidioides and mainly affects the lungs. We have previously shown that P. brasiliensis-infected mice treated with single dose of recombinant 60-kDa-heat shock protein from P. brasiliensis (rPbHsp60) had a worsening of infection when compared with animals only infected. In this study, we investigate whether the treatment of infected mice with PbHsp60 gene cloned into a plasmid (pVAX1-PB_HSP60) would render an efficient immune response and improvement of the disease. After cloning of the PbHsp60 gene, we first showed that immunization of mice with three doses of pVAX1-PB_HSP60 induced production of specific anti-PbHsp60 antibody and that pVAX1-PB_HSP60-transfected HEK293 cells synthesized the PbHsp60. Interestingly, mice treated with three doses, but not single dose, of pVAX1-PB_HSP60, and pVAX1 subcloned with Hsp65 from Mycobacterium leprae (pVAX1- ML_HSP65), which induces a beneficial effect in experimental PCM, had an improvement in fungal load and lung injury when compared with infected mice treated with pVAX1 or PBS. Unlike animals infected and treated with single dose of rPbHsp60, which had a worsening of infection parameters, treatment with three doses of rPbHsp60 interestingly induced a beneficial effect in the infected animals, as seen with the plasmid constructs. In investigating the causes of this worsening of PCM triggered by injection of a single dose of protein, we showed that rPbHsp60 induced the death of splenic lymphocytes in vitro in a mechanism dependent on Tolllike receptor 4, TRIF adapter protein and TNF receptor 1. These results open perspectives to evaluate the importance of cell death of the immune response in the course of P. brasiliensis infection.