Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:57Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-02-28Bitstream added on 2014-06-13T19:56:58Z : No. of bitstreams: 1 silva_kr_me_jabo.pdf: 746958 bytes, checksum: 651e28fc6f5b0bad0768768aa6ff7a22 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / A nucleoproteina do vírus da doença de Newcastle (VDN) é um dos componentes antigênicos ideais para fazer o imunodiagnóstico da DN, por ser mais conservada e possuir uma elevada imunogenicidade. A sequência completa do gene da nucleoproteína (NP) (1470 pb) da estirpe La Sota do VDN foi amplificada, nesse estudo, por RT-PCR e submetida a clonagem no vetor de expressão em Escherichia coli pETSUMO (Invitrogen). A proteína NP foi expressa sob a forma de uma proteína recombinante de fusão contendo o peptídeo SUMO e a sequência de poli-histidina, em seguida foi purificada em resina de níquel-agarose e caracterizada por SDSPAGE e Western-blotting, apresentando um peso molecular de cerca de 66kDa e reatividade com anticorpos policlonais de galinhas hiperimunizadas com esse mesmo vírus. Foi então desenvolvido um método indireto de ELISA com essa proteína (NPVDN- ELISA) para ser aplicado na detecção de anticorpos anti-virais específicos. O NP-VDN-ELISA revelou ser capaz de diferenciar amostras de soros positivos para o VDN das amostras de soros negativos e, na comparação dos resultados obtidos na análise de 125 soros de campo pelo NP-VDN-ELISA com os do teste de Inibição da Hemaglutinação (HI), foi encontrado um coeficiente de correlação significante entre estes métodos (r = 0,8345), bem como elevadas sensibilidade (89,3%), acurácia (90,4%) e especificidade (95,5%). Concluindo, a proteína NP recombinante expressa pelo sistema pET SUMO – E. coli compartilha os principais epítopos para interagir com anticorpos de galinhas produzidos contra a proteína NP do VDN, tendo, portanto, um bom potencial de ser aplicada de forma bem sucedida e com vantagens no teste de ELISA para realizar de forma mais rápida e prática, o imunodiagnóstico da DN de um maior número de amostras séricas de galinhas / The nucleocapsid protein (NP) of Newcastle Disease Virus (NDV), is a preferred choice to develop a serologic assay on account of highly conserved sequences, and high immunogenicity. The whole open-reading-frame (orf) of NP gene from LaSota strain of NDV was amplified by RT-PCR and cloned in pETSUMO vector (Invitrogen) and Escherichia coli as cellular host. The NP protein was expressed as a fusion recombinant protein containing SUMO peptide and poly-histidine tags. This protein was easily purified in nickel-agarose resin, and characterized by SDS-PAGE and Western-blotting, showing a molecular weight of approximately 66 kDa and reactivity with polyclonal antibodies from NDV hiperimmunized chickens. The recombinant NP protein was used as antigen to develop an indirect ELISA (NP-NDVELISA) for the detection chicken anti-NDV antibodies. The capability of the recombinant NP protein to differentiate positive from normal chicken sera was evident in NP-NDV-ELISA, and by comparing this ELISA with haemagglutination-inhibition test (HI) a high and significant correlation with the haemagglutination-inhibition test (r = 0,8345), as well as high sensitivity (89,3%), specificity (95,5%) and accuracy (90,4%) were obtained. In conclusion the results indicated that the recombinant NP protein shared the main epitopes with the homologous viral protein and has a great potential to be advantageously used in the ELISA for the analysis of large number of samples in the DN immunodiagnosis

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:28:01Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-10-18Bitstream added on 2014-06-13T19:36:26Z : No. of bitstreams: 1 trevisan_prtc_me_rcla.pdf: 1749343 bytes, checksum: c7d29ad42736156323738369dadf49a7 (MD5) / Este estudo, de natureza qualitativa, teve por objetivo investigar como a expressão criativa está sendo inserida no contexto dos processos de ensino e aprendizagem da dança, para além das técnicas específicas, na visão de professores-coreógrafos e participantes de academias de dança, no âmbito do lazer. Para tanto, o estudo foi dividido em duas etapas complementares, sendo a primeira relativa a uma pesquisa bibliográfica e a segunda, uma pesquisa exploratória, para a qual foi utilizado como instrumento para coleta de dados um questionário misto, contendo perguntas abertas e fechadas. O instrumento foi aplicado a uma amostra intencional de 20 sujeitos, composta por professores-coreógrafos e bailarinos, maiores de 18 anos, com experiência de mais de um ano na prática de dança. Os dados foram analisados de maneira descritiva, utilizando-se a técnica de Análise de Conteúdo Temático e os resultados evidenciam que a criatividade é uma capacidade que tem suas características e qualidades amplamente reconhecidas como essenciais ao processo de ensino-aprendizagem na dança pelos sujeitos da pesquisa. Para esses, estas expressões criativas apresentam extensos conceitos e significados, permitem aos sujeitos descobrirem diferentes formas de expressar seus sentimentos e emoções, sendo as características individuais e a personalidade, apontadas como agentes de grande influência. Embora acarretem, para alguns indivíduos, circunstâncias muitas vezes constrangedoras, com o tempo e ações pedagógicas adequadas, acontecem com maior naturalidade e se tornam uma fonte inesgotável de descobertas e conhecimentos, contribuindo, assim, com diversos contextos condizentes com os aspectos subjetivos, bem como, com a percepção de uma maneira mais prazerosa de se compreender os sentidos de dançar. Entretanto, os dados referentes à dimensão curricular para a formação nestes cursos... / This study, of qualitative nature, aimed at investigating how the creative expression has been placed within the context of teaching and learning of dance beyond the specific techniques vision teachers, choreographers and dance academies participants in leisure scope. Thus, the study was divided into two complementary stages, the first relating to a literature review and the second is an exploratory research for which it was used for data collection a mixed questionnaire containing open and closed questions. The instrument was administered to a purposive sample of 20 subjects composed of teachers, choreographers and dancers, over 18 years, with experience of more than a year in the practice of dance. Data were descriptively analyzed, using the Thematic Content Analysis technique and the results show that creativity is a skill that has its own characteristics and qualities widely recognized as essential to the process of teaching and learning in dance for the subjects of this research. For them, these creative expressions have extensive concepts and meanings, and enable individuals to discover different ways of expressing their feelings and emotions, and individual characteristics and personality was identified as agents of great influence. While entailing some individuals embarrassing circumstances with time and appropriate pedagogical actions, this happens more naturally and become an inexhaustible source of discoveries and knowledge, thus contributing to several contents consistent with the subjective aspects as well as the perception of a more pleasant way to understand the meanings of dance. However, data concerning the scale curriculum for training in these technical courses in dance, revealed priority in acquiring knowledge depicting the characteristics and technical qualities as well as developing the skills and physical abilities and motor functions. The creativity was associated... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:28:24Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-08-17Bitstream added on 2014-06-13T20:18:06Z : No. of bitstreams: 1 modanesi_ms_me_botfmvz.pdf: 201295 bytes, checksum: ef772e852ba4f149e62fb93fb8448452 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Universidade Estadual Paulista (UNESP) / Os objetivos do presente trabalho foram verificar o efeito do período (manhã e tarde) e tempo de colheita (30 e 60 minutos) na produção de veneno por abelhas Apis mellifera africanizadas e a influência desse manejo na expressão de genes relacionados ao estresse. Foram utilizadas cinco colméias de abelhas Apis mellifera L. As colheitas de veneno e abelhas ocorreram três vezes por semana (manhã às 09h00 e tarde às 14h00), em dias intercalados, de acordo com os seguintes tratamentos: T1: manhã/30 minutos; T2: manhã/60 minutos; T3: tarde/30 minutos; T4: tarde/60 minutos. O veneno foi colhido por meio de coletores elétricos. O nível de estresse das abelhas foi monitorado pela alteração na expressão do gene defensina (proteína de defesa). Como controle interno foi usado o gene da actina. Os resultados foram avaliados por ANOVA seguida do teste de Tukey-Kramer (P≤0,05). Pode-se concluir que o T2 apresentou produção de veneno significativamente maior e uma menor expressão de gene defensina relacionado ao estresse comparado aos demais tratamentos / The objectives of this study was to investigate the effect of period (morning and afternoon) and harvest time (30 and 60 minutes) in the production of poison in Apis mellifera bees and the influence of management on the expression of genes related to stress. Collection of venom and bee took place three times a week (morning at 9 a.m. and afternoon at 2 p.m.), every other day, according to the following treatments: T1: morning/30 minutes, T2: morning/60 minutes, T3: afternoon / 30 minutes, T4: afternoon/60 minutes. Venom was collected by electric collector. The stress level of the bees was monitored by changes in gene expression of defensin (protein defense). Was used as internal control of the actin gene. The results were evaluated by ANOVA followed by Tukey-Kramer (P ≤ 0.05). It can be concluded that T2 had significantly higher production of poison and a lower defensin gene expression related to stress compared to other treatments

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:23:07Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-01-29Bitstream added on 2014-06-13T20:50:03Z : No. of bitstreams: 1 lombardi_ias_me_botfm.pdf: 529927 bytes, checksum: 6cb4e1254a86d1683806ac3cb6ca21b7 (MD5) / Meningiomas são os tumores intracranianos primários mais comuns e correlacionam-­‐se com câncer de mama, compatilhando características como incidência maior no sexo feminino, receptores para hormônios sexuais e crescimento a exposição a hormônios sexuais. O gene BRCA1 é amplamente estudado no câncer de mama hereditário e esporádico, entretanto, são poucos os trabalhos que correlacionam BRCA1 e meningiomas. O BRCA1 é gene de supressão tumoral, interagindo com outros oncogenes, atuando no reparo do DNA durante a divisão celular e modulando negativamente receptores de estrógeno e progesterona. Avaliar o padrão de metilação de e expressão de BRCA1 em meningiomas e tecidos controles, e a expressão de receptores de estrógeno e progesterona em meningiomas e controles, correlacionando estes dados com dados epidemiológicos da casuística. Casuística e métodos: pacientes com diagnóstico de meningiomas tiveram amostras tumorais colhidas durante cirurgias de rotina pela disciplina de Neurocirurgia da Faculdade de Medicina de Botucatu (FMB) e do Hospital Mário Gatti, em Campinas. Previamente, o projeto foi aprovado pelo Comitê de Ética em Pesquisa e cada paciente concordou em participar ao assinar o Termo de Consentimento Livre e Esclarecido. Amostras controle de aracnóide foram colhidas de cadáveres no serviço de necropsia da disciplina de Patologia da FMB. As amostras tumorais foram avaliadas para metilação de BRCA1 por PCR específica para metilação e os resultados avaliados por eletroforese. A expressão foi avaliada por PCR em tempo real os resultados dados em relação a amostras comtroles. A expressão de receptores de estrógeno (RE) e progesterona (RP) foram analisadas por imuno-histoquímica, conforme rotina da disciplina de Patologia da FMB. Foram avaliados 50 meningiomas entre... / Meningiomas are the most common primary intracranial tumors and correlate with breast cancer, shearing features like higher incidence in female, sexual hormone receptors and growth to exposure to sexual hormones. The gene is widely studied in hereditary and sporadic breast cancer, however, there are few studies that correlate BRCA1 and meningiomas. The BRCA1 is a tumor suppressor gene and interacts with other oncogenes by DNA repairing during cell division and also negative modulating estrogen and progesterone receptors. To assess the pattern of methylation and expression of BRCA1 in meningiomas and control tissues, and the expression of estrogen and progesterone receptors in meningiomas and control tissues, and to correlate these data with patients epidemiological data. Patients diagnosed with meningioma had collected tumors samples during routine surgeries by the discipline of Neurosurgery in Faculty of Medicine of Botucatu (FMB) and Mario Gatti Hospital in Campinas. Previously, the project was approved by the Research Ethics Committee and each patient agreed to participate by signing the Instrument of Consent. Control arachnoid samples were collected from cadavers during routine of necropsy of Pathology departament in FMB. The tumor samples were analyzed for methylation of BRCA1 by methylation specific PCR and the results were evaluated by electrophoresis. The expression was assessed by real-­‐time PCR results given in relation to samples comtroles. The expression of estrogen receptors (ER) and progesterone (PR) were analyzed by immunohistochemistry, as routine in Pathology departament. There were 50 meningiomas between January 2009 to September 2012, 22 male and 28 female. The methylation of BRCA1 in meningiomas was statistically significant compared to control tissues... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2016-06-02T18:57:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 3966.pdf: 1565566 bytes, checksum: c60e9f28a9a2929d932432587bd3f8e0 (MD5) Previous issue date: 2011-11-09 / Universidade Federal de Sao Carlos / Among the problems faced by the plant citrus sector, stands out of Phytophthora gummosis, which affects all stages of plant development. For disease control chemicals are used, but seeking a more sustainable agriculture, alternative control techniques have been adopted, including the use of biofertilizers. Therefore, this work aimed to: (i) to produce a biofertilizer from the anaerobic digestion of cattle manure with crushed sugar cane, (ii) determine the microbial diversity present in compost, (iii) verify the effect of compound on mycelial growth of Phytophthora parasitica, (iv) to observe its effect on plant growth, and finally (v) evaluate its effect on induction of resistance to the pathogen. It was found that in the period between 25 to 35 days of production of biofertilizer met the highest microbial population, specially composed by Bacillus spp. and other bacteria. The biofertilizer at concentrations of 10 and 20% favored the vegetative growth of rootstock Poncirus trifoliata, Rangpur, sunki and sour oranges, and the concentration of 20% in orange plants Caipira favored disease control. The genes encoding β 0.1-3-glucanase (PR-2), chalcone synthase (CHS) and lipoxygenase (LOX) were activated in plants treated with biofertilizer and inoculated into susceptible rootstock, the biofertilizer was able to activate genes encoding chitinase (CHI) and chalcone synthase (CHS), possibly involved with the resistance of citrus plants to P. Parasitica. / Dentre os problemas fitossanitários enfrentados pelo setor citrícola, destaca-se a gomose de Phytophthora, que acomete todos os estágios de desenvolvimento da planta. Para o controle da doença são utilizados produtos quimicos, porém visando uma agricultura mais sustentável, técnicas alternativas de controle têm sido adotadas, dentre elas o uso de biofertilizante. Portanto, com este trabalho pretendeu-se: (i) produzir um biofertilizante a partir da fermentação anaeróbia de esterco bovino com bagaço de cana-de-açúcar; (ii) determinar a diversidade microbiana presente no composto; (iii) verificar o efeito do composto no crescimento micelial de Phytophthora parasitica; (iv) observar seu efeito no desenvolvimento das plantas e, finalmente, (v) avaliar seu efeito na indução de resistência ao patógeno. Verificou-se que, no período entre 25 a 35 dias de produção do biofertilizante encontrou-se a maior população microbiana, composta especialmente por Bacillus spp. e outras bactérias. O biofertilizante nas concentrações de 10 e 20% favoreceu o crescimento vegetativo dos porta-enxertos Poncirus trifoliata, limão Cravo, tangerina Sunki e laranja Azeda; e na concentração de 20%, em plantas de laranja Caipira, favoreceu o controle da doença. Os genes que codificam β,1-3- glucanase (PR-2), chalcona sintase (CHS) e lipoxigenase (LOX) foram ativados nas plantas tratadas com o biofertilizante e inoculadas em porta-enxerto suscetível, o biofertilizante foi capaz de ativar os genes que codificam quitinase (CHI) e chalcona sintase (CHS), possivelmente envolvidos com a resistência de plantas cítricas a P. parasitica.

Made available in DSpace on 2016-06-02T19:10:18Z (GMT). No. of bitstreams: 1 5574.pdf: 8900872 bytes, checksum: 5422cf12edcd8bb4fb8c081fb5dacb77 (MD5) Previous issue date: 2013-07-10 / Financiadora de Estudos e Projetos / The aim of this study was to evaluate the properties of the surfaces of CP-Ti, Ti-6Al-4V, Ti-6Al-7Nb alloys modified via chemical treatments, as well as evaluating the behavior of human osteoblastic cells as function of these changes. For this purpose, samples of the three alloys were etched with hydrochloric acid or phosphoric acid, followed or not by alkaline treatment, and subsequently analyzed their morphology, roughness, effective area and contact angle (wettability). Scanning electron microscopy (SEM) was used to evaluate the morphology of surfaces and EDS for chemical compositions. Roughness and effective area measurements were performed with confocal laser microscope. A goniometer was used for the measurement of contact angle. Osteoblastic responses were evaluated by means of the technique of polymerase chain reaction with reverse transcription real-time (real-time PCR) to determine the gene expression of ALPL, COL1A1, COL3A1, SPP1, RUNX2 and SPARC. The results showed that the treatments significantly change the surface properties and induced the gene expression of human osteoblasts. All treatments caused change in the chemical composition of the sample surface. Acid treatments caused changes in actual topography and area, while alkaline treatments altered the surface morphology and increased hydrophilicity compared to the only abraded samples (controls). The gene expression was regulated differently in accordance with the surface treatment employed in the samples tested. Overall, treatment with alkaline treatment and phosphoric acid are more effective to control cell behavior. The alkali treatment and acid treatments together induce changes in the topography at micro, submicron and in some cases nanometric scales, which may amplify and accelerate the response of the cells on the materials. / O objetivo deste trabalho foi avaliar as propriedades das superfícies de amostras de Ti-CP, Ti-6Al-4V, Ti-6Al-7Nb modificadas via tratamentos químicos, bem como avaliar o comportamento das células osteoblásticas humanas frente a essas modificações. Para tanto, amostras das três ligas foram atacadas com ácido clorídrico ou fosfórico, seguido ou não por tratamento alcalino, e posteriormente analisadas quanto à morfologia, rugosidade, área efetiva e ângulo de contato (molhabilidade). Microscopia eletrônica de varredura (MEV) foi utilizada para avaliar a morfologia das superfícies e EDS para obter as composições químicas. Medidas de rugosidade e área efetiva foram executadas com microscópio confocal a laser. O goniômetro foi o equipamento utilizado para as medidas de ângulo de contato. As respostas osteoblásticas foram avaliadas por meio da técnica de reação de polimerase em cadeia com transcrição reversa em tempo real (real time RT-PCR), para determinação das expressões gênicas de ALPL, COL1A1, COL3A1, SPP1, RUNX2 e SPARC. Os resultados demonstraram que os tratamentos provocaram alterações nas propriedades da superfície e induziram as expressões gênicas dos osteoblastos humanos. Todos os tratamentos provocaram alteração na composição química da superfície da amostra. Os tratamentos ácidos provocaram alterações de topografia e área efetiva, enquanto que os tratamentos alcalinos alteraram a morfologia da superfície e aumentaram a hidrofilicidade, todos em relação às amostras apenas lixadas (controles). As expressões genicas foram diferentemente reguladas de acordo com o tratamento empregado na superfície das amostras testadas. De forma geral, os tratamentos alcalinos e o ataque com ácido fosfórico são mais efetivos para controlar o comportamento celular. Os tratamentos ácidos e o tratamento alcalino induzem alterações de topografia nas escalas micro, submicro e, em alguns casos, nanométricas, fato que pode amplificar e acelerar as respostas das células sobre os materiais.

Made available in DSpace on 2016-06-02T19:22:03Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2031.pdf: 3494334 bytes, checksum: b543f6ce3ac60d6d769a4ea4b78a559e (MD5) Previous issue date: 2008-10-10 / Universidade Federal de Minas Gerais / Sodium intake occurs either as a need-free or a need-induced behavior, which is enhanced by repeated episodes of treatments leading to extracellular dehydration or increased levels in natriorexigenic hormones. This enhancement is likely an adaptation to repeated episodic sodium loss mediated by the long-term effects of hormones on brain circuits subserving sodium appetite. The objective of the present thesis was to investigate three aspects of long-term alterations in sodium intake associated to angiotensin (ANG) II: 1) neuroendocrine: the effect of repeated episodes of FURO/CAP on need-induced and need-free sodium intake, 2) genomic: associate hypothalamic renin-angiotensin system mRNA alterations with sodium intake enhancement induced by repeated episodes of water deprivation followed by partial rehydration with water (WDPR), and 3) comparative: sodium appetite in SHR submitted to a single WDPR. Both protocols, WDPR and FURO/CAP, were effective methodologies to enhance sodium intake, not related to systemic changes, suggesting that its mechanisms are due to neural plasticity and salt addiction. Repeated blockade of Agtr1 receptors by losartan inhibited or abolished the enhancement in the need-free sodium intake produced by a history of FURO/CAP. This result suggests that encephalic ANG II may play a role in the sensitization of spontaneous sodium intake, and perhaps it does not occur in the hypothalamus because it was not correlated to any hypothalamic RAS mRNA alteration in the WDPR protocol. However, hydrated animals with a history of WDPR increased the hypothalamic mRNA encoding of ANG II receptor type-1a (Agtr1a) by 76%. The enhancement in the need-induced sodium intake in the WDPR was related to increased hypothalamic mRNA encoding of angiotensinogen, aminopeptidase N, X Agtr1-associated protein, and ANG receptor like-1 or apelin receptor by 43%, 60%, 36%, and 159% respectively. Thus, the enhancement in the sodium appetite in WDPR was associated with alterations in the hypothalamic gene expression related to RAS. Thus, hypothalamic ANG II and apelin may play a role in the long-term changes of need-induced sodium intake. Moreover, the increased cellular activity that occurred in the subfornical organ, pre-locus coeruleus, and caudal nucleus of the solitary tract is associated with a stronger sodium appetite shown by SHR. These results suggest that increased cellular activity in these areas is correlated with the avid sodium appetite shown by SHR in response to water deprivation. The results suggest that repeated activation of encephalic ANG II receptors, perhaps in different areas, is able to enhance both forms of sodium intake and reinforce encephalic ANG II as a peptide that mediates long-term effects on behavior. / A ingestão de sódio pode ocorrer de forma espontânea ou induzida, a qual é incrementada por repetidos episódios de tratamentos que levam à desidratação extracelular ou aumento dos níveis de hormônios natriorexigênicos. O incremento se deve provavelmente a uma adaptação a repetidos episódios de perda de sódio mediado por alterações de longo prazo dos efeitos hormonais sob os circuitos que controlam o apetite ao sódio. O objetivo da presente tese foi investigar três aspectos das alterações de longo prazo na ingestão de sódio associada a angiotensina (ANG) II: 1) neuroendócrino: efeito de repetidos episódios de FURO/CAP na ingestão induzida e espontânea de sódio, 2) genômico: associar alterações de RNAm do sistema renina-angiotensina (SRA) hipotalâmico com o incremento da ingestão de sódio induzido por repetidos episódios de privação hídrica seguida de rehidratação parcial com água (PHRP), e 3) comparativo: apetite ao sódio em ratos da linhagem SHR, submetidos a um episódio de PHRP. Ambos os protocolos, PHRP e FURO/CAP são metodologias válidas para incrementar a ingestão de sódio, que não está relacionada a alterações sistêmicas, sugerindo que os mecanismos do incremento são devidos à plasticidade neural e dependência ao sal. Repetido bloqueio de receptores de ANG II tipo-1 (Agtr1) pelo losartan inibiu ou aboliu o incremento da ingestão espontânea de sódio produzido pelo histórico de FURO/CAP. Este resultado sugere que a ANG II encefálica pode exercer função na sensibilização da ingestão espontânea de sódio e talvez isto não ocorra no hipotálamo, pois esta sensibilização não está associada a nenhuma alteração hipotalâmica de RNAm relacionados ao SRA no protocolo PHRP. No entanto, animais hidratados submetidos a um prévio episódio de PHRP apresentaram VIII aumento de 76% do RNAm que codifica receptor de ANG II tipo-1a (Agtr1a) no hipotálamo. O incremento da ingestão induzida de sódio está relacionado com aumento de 43%, 60%, 36% e 159% do RNAm hipotalâmico que codifica angiotensinogênio, aminopeptidase N, proteína associada ao receptor Agtr1, e receptor de ANG semelhante ao tipo-1 ou receptor de apelina, respectivamente. Por conseguinte, o incremento do apetite ao sódio induzido pela PHRP está associado com alterações na expressão gênica hipotalâmica relacionada ao SRA. Portanto, ANG II e apelina no hipotálamo podem exercer papel nas alterações de longo prazo da ingestão induzida de sódio. Além disso, aumento da atividade celular no órgão subfornical, pré-locus coeruleus e núcleo do trato solitário caudal está associado com o exacerbado apetite ao sódio exibido pelos animais da linhagem SHR, e este resultado sugere que o aumento da atividade celular nestas áreas está relacionado com o ávido apetite ao sódio demonstrado pelos animais da linhagem SHR em resposta a privação hídrica. Estes resultados sugerem que ativação repetida de receptores encefálicos de ANG II, talvez em áreas diferentes, é capaz de incrementar ambas as formas de ingestão de sódio e reforça a ANG II encefálica como um peptídeo que medeia efeitos de longo prazo no comportamento.

Submitted by Izabel Franco (izabel-franco@ufscar.br) on 2016-09-14T20:00:46Z No. of bitstreams: 1 TesePECO.pdf: 785667 bytes, checksum: ca1e6b1939ab0af5bb1bda173b0faeb7 (MD5) / Approved for entry into archive by Marina Freitas (marinapf@ufscar.br) on 2016-09-16T19:22:43Z (GMT) No. of bitstreams: 1 TesePECO.pdf: 785667 bytes, checksum: ca1e6b1939ab0af5bb1bda173b0faeb7 (MD5) / Approved for entry into archive by Marina Freitas (marinapf@ufscar.br) on 2016-09-16T19:22:50Z (GMT) No. of bitstreams: 1 TesePECO.pdf: 785667 bytes, checksum: ca1e6b1939ab0af5bb1bda173b0faeb7 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-09-16T19:22:57Z (GMT). No. of bitstreams: 1 TesePECO.pdf: 785667 bytes, checksum: ca1e6b1939ab0af5bb1bda173b0faeb7 (MD5) Previous issue date: 2014-12-05 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / This thesis is part of the requirements for obtaining Ph.D. title by Joint Graduate Program in Physiological Sciences, UFSCar/UNESP. The results presented refer to experiments developed in Laboratório de Neuropsicofarmacologia da Faculdade de Ciências Farmacêuticas de Araraquara and Behavioral Neurosciense Branch / National Institute on Drug Abuse - National Institutes of Health, Baltimore, USA. In chapter 1 we made a general introduction on the theories that formed the basis of the current concept of drug addiction. In this chapter, we elaborate a brief history of social organization and human relationship with drugs. We wrote specifically about both substances used in our studies, ethanol and cocaine, as well as their impact on public health and the pharmacological mechanisms of action. In chapter 2 the aim was to evaluate the influence of factors such as early age of onset of ethanol use and the effect of stress on the seeking behavior and consumption of this drug. For this, we used the animal model of ethanol self-administration and two types of social stress (social deprivation and social instability) in rats during adolescence. To verify whether behavioral changes were promoted by molecular neuroadaptations, we quantified gene expression involved in the development of ethanol dependence in amygdala, responsible area for stress-induce behaviors. In chapter 3 we investigated whether daun02 inactivation method is able to inhibit cocaine-induced locomotor sensitization in rats. This method is based on the theory that only a small group of sparsely distributed neurons (neuronal ensembles) are activated during behavior exhibition. For this purpose, we used transgenic rats carrying a c-fos-lacZ promoter which when activated induces the expression of ß-galactosidase enzyme only in activated neurons. The ß-galactosidase converts the prodrug daun02 into a toxic metabolite, driving to cell apoptosis. Thus, we evaluated whether the neuronal ensembles activated during the development of locomotor sensitization are the same as those recruited in the expression of this behavior. In chapter 4 we investigate whether mice express context-specific locomotor sensitization and whether the exhibiton of this behavior is related to synaptic changes in the nucleus accumbens. For this we use male and female transgenic C57BL/6 adult mice expressing Fos-GFP, a protein sensitive to green light, only in activated cells. Thus, using a confocal microscope, we assessed the presence of silent synapses only in activated neurons (neuronal ensembles) related to the expression of locomotor sensitization. Like us, researchers in the field of neurobiology of drug addiction have been studying the factors that can facilitate the initiation and maintenance of drug use and how it may trigger the addiction. Thus, this thesis aimed to investigate the influence of age, sex, stress, memory, associative learning, different types of drugs (cocaine and ethanol) and different types of animal models (self-administration and sensitization) in the development of drug addiction. / A presente tese é parte dos requisitos exigidos para a obtenção do título de doutor pelo Programa Interinstitucional de Pós-Graduação em Ciências Fisiológicas – Associação ampla UFSCar/UNESP. Os resultados apresentados são referentes aos experimentos realizados no Laboratório de Neuropsicofarmacologia da Faculdade de Ciências Farmacêuticas de Araraquara e no Behavioral Neurosciense Branch/National Institute on Drug Abuse - National Institute of Health, Baltimore, EUA. No capítulo 1 fizemos uma introdução geral sobre as teorias que serviram de base para a elaboração do conceito atual de dependência de drogas de abuso1. Nesse mesmo capítulo, nós elaboramos um breve histórico sobre a organização social e a relação do homem com as drogas de abuso. Escrevemos especificamente sobre as duas substâncias utilizadas em nossos estudos, o etanol e a cocaína, bem como o impacto delas na saúde pública e seus mecanismos farmacológicos de ação. No capítulo 2 o objetivo foi avaliar a influência de fatores como a idade precoce do início do uso do etanol e o efeito do estresse sobre o comportamento de busca e consumo dessa droga. Para isso, utilizamos o modelo animal de autoadministração de etanol e dois tipos de estresse social (privação social e instabilidade social) durante a adolescência de ratos. Para verificar se alterações comportamentais foram promovidas por neuroadaptações moleculares, nós quantificamos a expressão de genes envolvidos no desenvolvimento da dependência de etanol na amídala, região responsável pela exibição de comportamentos maladaptados ao estresse. No capítulo 3 nós investigamos se o método de inibição por daun02 é capaz de bloquear a sensibilização locomotora induzida por cocaína em ratos. Esse método baseia-se na teoria que apenas um pequeno grupo de neurônios dispersamente distribuídos (neuronal ensembles) são ativados durante a exibição de um comportamento. Para esse propósito utilizamos ratos transgênicos contendo um promotor c-fos-lacZ que ao ser ativado induz a expressão da enzima ß-galactosidase apenas em neurônios ativados. A ß - galactosidase converte o pró-fármaco daun02 num metabólito tóxico que causa apoptose celular. Dessa maneira, nós avaliamos se os neuronal ensembles ativados durante o desenvolvimento da sensibilização locomotora são os mesmos que são recrutados na expressão desse comportamento. No capítulo 4 investigamos se camundongos expressam sensibilização locomotora contexto-específica e se a exibição desse comportamento está relacionada com alterações sinápticas no núcleo acumbens. Para isso nós utilizamos camundongos C57Bl/6 machos e fêmeas adultos transgênicos Fos- GFP que expressam uma proteína, sensível à luz verde, apenas em células ativadas. Desse modo, com a ajuda de um microscópio confocal, avaliamos a presença de sinapses silenciosas apenas em neurônios ativados (neuronal ensembles) durante a expressão da sensibilização locomotora. Assim como nós, pesquisadores da área da neurobiologia da farmacodependência vêm estudando os fatores que podem facilitar o início e manutenção do uso da droga e como isso pode desencadear a instalação da dependência. Dessa forma, essa tese teve como objetivo investigar a influência da idade, sexo, estresse, memória, aprendizado associativo, diferentes tipos de drogas (etanol e cocaína) e diferentes tipos de modelos animais (autoadministração e sensibilização) no desenvolvimento da dependência.

Submitted by Luciana Sebin (lusebin@ufscar.br) on 2016-09-20T18:39:28Z No. of bitstreams: 1 DissAMN.pdf: 2525250 bytes, checksum: d1ef9cb6cbb03453941fe9349c5da36a (MD5) / Approved for entry into archive by Marina Freitas (marinapf@ufscar.br) on 2016-09-21T12:59:57Z (GMT) No. of bitstreams: 1 DissAMN.pdf: 2525250 bytes, checksum: d1ef9cb6cbb03453941fe9349c5da36a (MD5) / Approved for entry into archive by Marina Freitas (marinapf@ufscar.br) on 2016-09-21T13:00:05Z (GMT) No. of bitstreams: 1 DissAMN.pdf: 2525250 bytes, checksum: d1ef9cb6cbb03453941fe9349c5da36a (MD5) / Made available in DSpace on 2016-09-21T13:00:12Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DissAMN.pdf: 2525250 bytes, checksum: d1ef9cb6cbb03453941fe9349c5da36a (MD5) Previous issue date: 2014-10-31 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / The majority of species in the genus Anastrepha is endemic to the Neotropics and many are of great economic importance because they inflict great damage to several different fruit crops. Brazil has low insertion in international markets because of the demand for quality products with no pesticide residues, which force the improvement of control techniques. Thus, an alternative to insect pests control is the Sterile Insect Technique (SIT), which reduces the pest population by mass release of sterile insects. However, sterilization by radiation has many side effects, reducing the competitiveness of released males relative to wild males. For this reason, different strategies have been used, such as the production of transgenic individuals not only in order to sterility but also increasing the vitality presented by these males compared to wild males. To accomplish that, an important approach could be the study of genes involved in the reproductive process. In this work, we selected nine candidate genes for expression studies of our transcriptome data, which have the potential of being involved in the reproductive process in Anastrepha because they belong to gene families that have already been associated to the reproductive process, and showed differential expression between the contrast of virgin and post-mating of transcriptome data in Anastrepha flies. Since no qPCR study has been done to date in Anastrepha, we tested several reference genes for normalization of expression data. The genes Rpl18, Rps17 and Ef1a were deemed suitable and used here to standardize studies of expression between life stages of A. obliqua. The qPCR gene expression analysis revealed interesting gene expression patterns for AttA, Obp56a and Obp99c, which increases the potential of these genes being involved in the reproductive process. Obp56a showed a higher expression in virgin females in contrast to postmating, whereas AttA and Obp99c showed higher expression in male in contrast to females, which may be interesting for genetic control techniques. We applied the RNAi silencing technique with AttA and Obp99c, aiming to generate information about the participation of these genes in reproduction. Thus, our results pointed for three candidate genes that could be interesting for population control techniques, with potential of being involved in the reproductive process, which stimulates further researches in Anastrepha obliqua. / A maioria das espécies do gênero Anastrepha é endêmica à região neotropical e diversas têm importância econômica por causar grandes prejuízos às culturas de frutos. O Brasil tem baixa inserção no mercado internacional de frutas frescas devido às exigências por produtos de qualidade e sem resíduos de agrotóxicos, o que força o aprimoramento das técnicas de controle de insetospraga. Uma das alternativas é a Técnica do Inseto Estéril (SIT), que visa à redução da população da praga pela liberação em massa de insetos estéreis. Porém, a esterilização por radiação traz muitos efeitos colaterais, diminuindo a competitividade dos machos liberados em relação aos machos selvagens. Por esse motivo, diferentes estratégias têm sido utilizadas como a produção de indivíduos transgênicos visando não só a esterilidade como também o aumento do vigor apresentado por esses machos em relação aos selvagens. Para isso, uma abordagem importante seria o estudo de genes envolvidos no processo reprodutivo. Neste trabalho selecionamos nove genes para estudos de expressão por qPCR candidatos de nossos dados de transcriptomas com potencial de estarem envolvidos no processo reprodutivo em Anastrepha por pertencerem a famílias já relacionadas ao processo reprodutivo, além de apresentarem expressão diferencial entre os transcriptomas de machos virgens e machos pós-cópula. Como nenhum estudo de qPCR havia sido feito ainda em Anastrepha, testamos diversos genes de referência para a normalização dos dados de expressão. Os genes rpl18, rps17 e ef1a foram considerados adequados e padronizados para estudos de expressão entre fases de vida de A. obliqua. As análises de expressão por qPCR revelaram que os genes AttA, Obp56a e Obp99c apresentam padrões de expressão interessantes para investigação e aumentam o potencial desses genes estarem de fato participando do processo reprodutivo. Obp56a apresentou maior expressão em fêmeas virgens em relação às pós-cópula. Já AttA e Obp99c apresentaram maior expressão em machos em relação às fêmeas, fato que pode ser interessante para técnicas de controle genético. Aplicamos a técnica de silenciamento por interferência por RNA nesses genes, com o objetivo de trazer informações sobre a participação desses genes na reprodução. Dessa forma nossos resultados apontam para três genes candidatos que podem ser interessantes para técnicas de controle de populações, com potencial de estar participando do processo reprodutivo o que estimula futuras investigações destes em Anastrepha obliqua.

Submitted by Izabel Franco (izabel-franco@ufscar.br) on 2016-09-27T20:41:15Z No. of bitstreams: 1 DissWJSD.pdf: 2131217 bytes, checksum: 65c3deee90f5da124b4a13c80563af29 (MD5) / Approved for entry into archive by Marina Freitas (marinapf@ufscar.br) on 2016-10-04T18:45:59Z (GMT) No. of bitstreams: 1 DissWJSD.pdf: 2131217 bytes, checksum: 65c3deee90f5da124b4a13c80563af29 (MD5) / Approved for entry into archive by Marina Freitas (marinapf@ufscar.br) on 2016-10-04T18:46:07Z (GMT) No. of bitstreams: 1 DissWJSD.pdf: 2131217 bytes, checksum: 65c3deee90f5da124b4a13c80563af29 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-10-04T18:46:15Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DissWJSD.pdf: 2131217 bytes, checksum: 65c3deee90f5da124b4a13c80563af29 (MD5) Previous issue date: 2015-08-26 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Iron (Fe) is an essential micronutrient for cellular homeostasis. Structural component of proteins or enzyme cofactor, Fe has participation in important metabolic pathways that include oxidative metabolism, oxygen transport, cell proliferation and immune system function. Despite of its essentiality, Fe has a toxic potential to cells when in excess. So, a sophisticated system is needed to coordinate the process of absorption, recycling, use and storage. Mutations in genes related to homeostasis of this mineral may potentially alter the cellular distribution and storage. Furthermore, the Fe levels affect biological pathways such as carbohydrate and lipid metabolism. Iron content in cattle muscle has been associated with many sensory and technological parameters of meat quality. However, to date, studies that evaluate how the iron levels in the muscle can alter gene expression and the consequences for the metabolism in cattle are still absent. Therefore, this study aims to identify differentially expressed genes, metabolic pathways, gene interactions and potential regulatory biological mechanisms of physiological processes related to meat quality parameters. Longissimus dorsi (LD) muscle were collected at slaughter for total RNA extraction and determination of CFe by optical emission spectrometry (ICP OES). Eight Nelore steers, who are representatives of extreme value for Genetic Genomic Estimate (GEBV) for iron content (CFe), were selected from a reference population of 373 animals. The sequencing of the total mRNA of extreme animals was carried out from the next generation Illumina technology, which resulted in average l9.13 million of reads per sample after quality control and trimming. Data analysis carried out by Tuxedo Suite pipeline identified 49 annotated and differentially expressed genes (DE) (FDR <0.05) between groups of extremes for GEBV value for CFe. From the DE genes, 18 genes were up-regulated and 31 down-regulated for animals of low GEBV for CFe. Candidate genes for meat quality traits were identified in this study and they are related to transport and lipid metabolism. Other pathways identified through functional enrichment analysis include cell growth and development, function of the hematological system, among others. Canonical signaling pathways (interferon signaling, thyroid receptor activation (TR/RXR) and complement system) and canonical metabolic pathways (biosynthesis of stearate, fatty acid biosynthesis and palmitate biosynthesis) were also identified. Although this study did not identify genes with direct role in the regulation of Fe content, our results suggest biological pathways influenced by this mineral and contribute with information to the understanding of their participation in processes affecting quality of meat. This information will be useful in developing strategies that contribute to the production of better quality meat, healthy and nutritionally rich. In addition, this information may help in understanding of metabolic disorders in other species, including humans. / O ferro (Fe) é um micronutriente essencial à homeostase celular. Necessário como componente estrutural de proteínas ou cofator enzimático, o Fe participa de vias metabólicas importantes que incluem metabolismo oxidativo, transporte de oxigênio, proliferação celular e funcionamento do sistema imune. Apesar de essencial, apresenta um potencial tóxico às células quando em excesso. Por isso, é necessário um sofisticado sistema que coordene os processos de absorção, reciclagem, uso e armazenamento. Mutações em genes relacionados à homeostase desse mineral podem potencialmente alterar a sua distribuição e armazenamento celular. Ademais, os níveis de Fe afetam vias biológicas, tais como metabolismo de carboidratos e lipídeos. O conteúdo de Fe no músculo em bovinos tem sido associado a diversos parâmetros sensoriais e tecnológicos de qualidade de carne. Entretanto, até a presente data, são escassos estudos que avaliem como os níveis de ferro no músculo podem alterar a expressão gênica e quais as consequências para o metabolismo em bovinos. Portanto, o presente estudo tem como objetivo principal identificar genes diferencialmente expressos, vias metabólicas, interações gênicas e potenciais mecanismos biológicos que participam de processos fisiológicos relacionados à regulação do ferro e de parâmetros de qualidade da carne. Amostras do músculo Longissimus dorsi (LD) foram coletadas no momento do abate para extração de RNA total e determinação do conteúdo de ferro (CFe) por espectrometria de emissão óptica (ICP OES). Oito machos castrados da raça Nelore, representantes dos extremos para Valor Genético Genômico Estimado (GEBV) para CFe foram selecionados a partir de uma população referência de 373 animais. O equenciamento do mRNA total dos animais extremos foi realizado a partir da tecnologia de nova geração Illumina, o qual resultou em média 9,13 milhões de reads por amostra após o controle de qualidade. Por meio da análise de dados realizada pelo Tuxedo Suíte pipeline foram identificados 49 genes anotados diferencialmente expressos (DE) (FDR <0,05) entre os grupos de extremos para o valor de GEBV para CFe. Dentre os genes DE, 18 genes apresentaram-se up-regulated e 31 down-regulated para os animais do grupo de baixo GEBV para CFe. Genes candidatos para características de qualidade de carne foram identificados no presente estudo e estão relacionados ao transporte e metabolismo de lipídeos. Outras vias identificadas por meio das análises de enriquecimento funcional incluem crescimento e desenvolvimento celular, função do sistema hematológico, entre outras. Vias canônicas de sinalização (sinalização do interferon, ativação do receptor da tireóide (TR/RXR) e sistema complemento) e metabólicas (biossíntese do estearato, biossíntese de ácidos graxos e biossíntese do palmitato) foram também identificadas. Embora o presente estudo não tenha identificado genes com papel direto na regulação do conteúdo de Fe, nossos resultados apontam rotas biológicas influenciadas por esse mineral e contribui com informações para o entendimento da sua participação em vias que afetem a qualidade da carne. Essas informações serão úteis no desenvolvimento de estratégias que contribuam para a produção de carne de qualidade, saudável e nutricionalmente rica. Além disso, essas informações poderão auxiliar no entendimento de distúrbios metabólicos em outras espécies, inclusive a humana.