Submitted by Nathália Faria da Silva (nathaliafsilva.ufv@gmail.com) on 2017-06-13T13:11:08Z No. of bitstreams: 1 resumo.pdf: 20042 bytes, checksum: 4c0e17a929ef619a16b7f24b5f37a259 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-06-13T13:11:08Z (GMT). No. of bitstreams: 1 resumo.pdf: 20042 bytes, checksum: 4c0e17a929ef619a16b7f24b5f37a259 (MD5) Previous issue date: 2003-04-15 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Os genes plg1 e plg2, que codificam pectina liase em Penicillium griseoroseum, foram isolados e caracterizados. A região estrutural do gene plg1 possui 1341 pares de bases (pb) e é interrompida por 2 íntrons, de 101 e 115 pb, confirmados pela seqüência do cDNA. A proteína deduzida a partir da seqüência de nucleotídeos possui 374 aa, com massa molecular estimada em 40,1 KDa, um potencial sítio de glicosilação na posição N 112 e pI calculado de 9,46. O gene plg2 possui 1400 pb, sendo interrompido por quatro íntrons contendo 56, 60, 52 e 39 pb. Estes íntrons estão nas mesmas posições dos íntrons do gene pelD de Aspergillus niger, embora as seqüências de nucleotídeos sejam diferentes. A proteína deduzida possui 383 aa, massa molecular estimada de 40,5 KDa e pI de 5,55. Três possíveis sítios de glicosilação foram encontrados nas posições N 38 , N 128 e N 257 . Análise por hibridização do DNA total de P. griseoroseum e dos respectivos plasmídeos que contêm as seqüências genômicas dos genes plg1 e plg2, revelaram que estes genes estão presentes em cópias únicas no genoma do fungo. Esses resultados sugerem que P. griseoroseum possui somente dois genes que codificam pectina liase. A avaliação da regulação da expressão dos genes plg1 e plg2 foi conduzida por hibridização do RNA total e por RT-PCR. Os genes plg1 e plg2 apresentam diferente regulação em nível de transcrição. A expressão do gene plg1 é induzida por pectina cítrica e sacarose/extrato de levedura, sendo expresso ao longo de 96 horas de crescimento de P. griseoroseum. No entanto, o maior acúmulo do transcrito foi detectado com 24 horas de crescimento. A adição de glicose, frutose, galactose ou xilose no meio de cultura, reprimem a transcrição de plg1 substancialmente. O transcrito do gene plg2 foi detectado somente por RT-PCR, demonstrando que a sua expressão, mesmo induzida, é muito menor do que a de plg1. O gene plg2 foi transcrito em nível muito baixo em pectina cítrica e em pectina de maçã, não sendo transcrito em sacarose/extrato de levedura. As regiões 5' terminal dos genes plg1 e plg2 foram sequenciadas, e potenciais cis-elementos para ligação dos fatores de transcrição CreA e PacC foram identificados. Foram também detectados os cis - elementos CAAT box e TATA box. A presença dos dois primeiros cis-elementos explica a regulação de plg1, considerando que este está sujeito à repressão catabólica (CreA) e à influência do pH do meio (PacC). O gene plg1 é induzido na presença de sacarose/extrato de levedura. Análise por RT-PCR mostrou que este não foi expresso em meio contendo sacarose somente, e quantidades pequenas do transcrito foram detectadas quando o fungo foi crescido apenas em meio contendo extrato de levedura. Os resultados evidenciam que a expressão do gene plg1 depende conjuntamente de sacarose e extrato de levedura. Com o objetivo de verificar se o efeito de sacarose e extrato de levedura na expressão de plg1 depende do envolvimento do AMPc, o fungo foi crescido em meios contendo sacarose e extrato de levedura, acrescidos de substâncias que atuam na cascata de transdução de sinais via AMPc. Foi verificado que há expressão diferencial de plg1 nas diferentes substâncias testadas e nos tempos de crescimento analisados, 18 e 24 horas. A presença de cafeína e extrato de levedura provocou aumento na expressão do gene plg1 em relação ao controle contendo sacarose e extrato de levedura, e a combinação de sacarose/cafeína e extrato de levedura levou a um maior aumento. Somente sacarose e dibutiril-AMPc não promoveram o acúmulo do transcrito do gene plg1, como observado em sacarose e extrato de levedura. Este acúmulo só foi detectado na presença de extrato de levedura, o que nos leva a inferir que somente um aumento do AMPc endógeno não seria capaz de induzir a transcrição do gene plg1. / Two pectin lyase-enconding genes from Penicillium griseoroseum were isolated and characterized. The coding region of the plg1 gene consists of 1341 base pairs (bp) and is interrupted by two introns of 101 and 115 bp, confirmed by cDNA sequencing. The deduced amino acid (aa) sequence (374 aa) of PLG1 has an estimated molecular mass of 40.1 KDa and a calculated pI of 9.46. One putative N-glycosylation site was found at N 112 . The plg2 coding sequence (1400 bp) is interrupted by four small introns which sizes vary from 36 to 60 bp. These introns were found at identical positions of those of the pelD gene from A. niger although a detailed comparison revealed sequence divergence. The calculated pI and predicted molecular mass of PLG2 protein are 5.55 and 40.5 KDa, respectively. Three putative glycosylation sites were detected at N 38 , N 128 , and N 257 . Quantitative Southern blot revealed that the plg1 and plg2 genes exist as single copies in the P. griseoroseum genome. Our results indicate that they are the only members of the pectin lyase gene family in this fungus. Northern hybridization analysis and RT-PCR were conducted to study the regulation of plg1 and plg2 expression. Both genes are regulated at the transcription level although they are controlled in different ways. Citric pectin and sucrose/yeast extract induces plg1 expression when P. griseoroseum is xiicultivated during 96 h. However the highest transcript accumulation was detected at 24 h. Transcription of plg1 is substantially repressed when glucose, fructose, galactose and xylose are added to the medium culture. plg2 transcripts were only detected by RT-PCR demonstrating that this gene is expressed at lower levels when compared to plg1. The plg2 transcription was seen in sucrose/yeast extract while transcript levels were low in citric pectin and apple pectin. The 5’-flanking regions of plg1 and plg2 genes were sequenced and putative CAAT and TATA boxe were identified as well a putative consensus binding sites for CreA and PacC. These cis-elements explain the regulation of these genes since both undergo catabolite repression (CreA) and are influenced by the medium pH (PacC). The plg1 gene is induced by sucrose/yeast extract. RT-PCR analysis showed that sucrose alone doesn’t trigger its expression and low amounts of plg1 transcript were detected when the fungus was cultivated only in yeast extract. These results provide strong evidence that plg1 expression relies on both sucrose and yeast extract. P. griseoroseum was grow on medium containing sucrose and yeast extract in order to analyze if plg1 expression also depends on cAMP. Differential expression was seen when different substances were added and at the time points sampled, 18 and 24 h. Caffeine and yeast extract raised the expression of plg1 gene when compared to the control, sucrose and yeast extract. Even higher expression was seen from combination of sucrose/caffeine and yeast extract. No transcript accumulation was detected when the fungus was cultivated on sucrose and dibutyril-cAMP in opposition to cultivation on sucrose and yeast extract. This accumulation was only observed in the presence of yeast extract and provides evidence that a simple raise in the endogen cAMP level would not be able to induce plg1 transcription.

Submitted by Julie_estagiaria Moraes (julie.moraes@fgv.br) on 2012-01-17T16:54:38Z No. of bitstreams: 1 000024638.pdf: 17208735 bytes, checksum: ea006c337d735b0d0d00968b3b75c573 (MD5) / Made available in DSpace on 2012-01-17T16:54:49Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000024638.pdf: 17208735 bytes, checksum: ea006c337d735b0d0d00968b3b75c573 (MD5) Previous issue date: 1980-05 / Didatic literature has of late been the object of analysis made to bring out th e ideological meaning of topics that touch the student public. The present work is an addition to those that developed this idea. Its goal is, speeifically, to outline the ideological contents whieh underly the instruments of personalized teaching (Módulos de Ensino) of the Communications and Expression area which are being used in the ' Centros de Estudos Supletivos ' of the State of Rio de Janeiro. / A literatura didática tem sido, ultimamente, alvo de análise para fazer emergir o significado ideológico das mensagens que atingem seu público estudante. Este trabalho soma-se aos que desenvolveram estudos desse teor. Seu objetivo, mais especificamente, foi o de mapear o conteúdo ideológico que perpassa os instrumentos de ensino personalizado (Módulos de Ensino), da área de Comunicação e Expressão, utilizados como material instrucional nos Centros de Estudos Supletivos em funcionamento no Estado do Rio de Janeiro. A eleição da área de Comunicação e Expressão foi randômica, enquanto a do Ensino Supletivo, não. A escolha de seu campo, visou a iniciar uma atenção sobre esse nível de ensino ainda não abordado em traba lhos da natureza deste. A detecção da ideologia veiculada operou-se pelo exame da linguagem adotada nos referidos instrumentos e, a seguir, pelo levantamento dos valores subsidiários daquela ideologia. Assim, foram registradas as seguintes categorias de valor que se encontraram destacadamente no material examinado: vitais, intelectuais, estéticos, éticos e religiosos. Algumas dessas categorias sofreram um desdobramento em sub-categorias que classificavam com mais exatidão e clareza, aspectos do valor examinado. O procedimento metodológico de apresentaçao de cada uma dessas categorias de valor abordadas, constitui um refrão neste trabalho: após uma breve caracterização do valor em exame, seguem-se os textos analisados e a exposiçao da ideologia neles contida. O capitulo das conc lusões indica que a dominante lança, para garantir sua permanencia, ideologia conceitos que irao contribuir para a formação de seres passivos e inertes, nunca encorajados a crítica, de maneira que jamais seja ameaçada a ordem social estabelecida.

Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2018-01-16T10:48:22Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1156090 bytes, checksum: 53b8d4147afade4207b5e35ad921e94f (MD5) / Made available in DSpace on 2018-01-16T10:48:22Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1156090 bytes, checksum: 53b8d4147afade4207b5e35ad921e94f (MD5) Previous issue date: 2016-02-24 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / O gene SbMATE, que confere tolerância a alumínio em sorgo, é altamente expresso no ápice da radícula e codifica um transportador de membrana pertencente à família MATE (multi drug and toxic compound extrusion family) que é responsável pelo efluxo de citrato ativado por alumínio. A identificação de elementos cis-regulatórios no promotor do gene SbMATE que confere tolerância ao alumínio e de fatores transcricionais que controlam a expressão do referido gene constituem etapas fundamentais para o entendimento do mecanismo de resistência a Al mediado por SbMATE. O objetivo do presente trabalho foi a identificação e caracterização de fatores transcricionais que interagem de uma maneira específica com o promotor para controlar a expressão do gene SbMATE. Entre 22 possíveis fatores transcricionais mapeados em um eQTL que influencia a expressão de SbMATE, quatro deles, NF-YB-Like (Sorbic.009g166200), WRKY-like (Sorbic.009g174300), ZincFinger-like (Sorbic.009g151400) e SORBIDRAFT_09g022540, foram selecionados para análise de atividade de regulação de transcrição específica de promotores. Ensaios de mono-híbrido em leveduras demonstraram que a proteína WRKY41-like, mas não NFY-like, interage com o promotor SbMATE isolado tanto de linhagens tolerantes quanto de susceptíveis. A interação ocorre na região proximal (posição -2102 ao ATG) comum a todos os promotores SbMATE testados. Estes resultados foram confirmados em ensaios de transativação de promotores fusionados a GUS em protoplastos de Arabidopsis. Para isso, Arabidopis thaliana ecotipo Col-0 foi inicialmente transformada com construções de DNA, contendo a região proximal ou de fragmentos truncados do promotor SbMATE fusionados à GUS. As folhas das linhagens transgênicas foram utilizadas para o preparo de protoplastos para expressão transiente dos quatro transfatores selecionados. Tanto WRKY-like quanto ZincFinger-like transativaram especificamente o promotor de SbMATE, enquanto que NF-YB-like e SORBIDRAFT_09g022540 não foram capazes de ativar a expressão do gene repórter. Por meio de ensaios de deleção do promotor, os sítios de interação de WRKY-like e ZincFinger- like foram mapeados em um domínio cis-regulatório de 127 pb, delimitado pelas posições -2102 a -1975 no promotor SbMATE. Coletivamente, estes resultados indicam que os transfatores WRKY-like e ZincFinger-like estão envolvidos no controle da expressão do gene SbMATE. / The SbMATE gene, which confers tolerance aluminum in sorghum, is highly expressed at radicle apex and encodes a membrane transporter belonging to the family MATE (multi drug and toxic compound extrusion family) that is responsible for the efflux of citrate activated by aluminum. The identification of cis-regulatory elements in SbMATE gene promoter that confer tolerance to aluminum and transcription factors that control the expression of such gene are key steps for understanding the SbMATE- mediated resistance mechanism.. The objective of this study was the identification and characterization of transcription factors that interact specifically with the promoter to control the expression of the gene SbMATE. Among 22 transcriptional factors mapped in a eQTL that influences the expression of SbMATE, four of them, NF-YB-Like (Sorbic.009g166200), WRKY-like (Sorbic.009g174300), ZincFinger-like (Sorbic.009g151400) and SORBIDRAFT_09g022540 were selected for analysis of transcriptional regularion activity of specific promoters. Mono-hybrid assays in yeast demonstrated that the WRKY41-like protein, but not NFY-like, interacts with the promoter SbMATE isolated from both tolerant and susceptible varieties. The interaction occured in the proximal region (position -2102 to the ATG) common to all SbMATE promoters tested. These results were confirmed in transactivation assays of GUS-fused promoters in Arabidopsis protoplasts. For this, Arabidopsis thaliana ecotype Col-0 was initially transformed with DNA constructs, containing the proximal region or truncated fragments of the SbMATE promoter fused to GUS. The leaves of transgenic lines were used for the preparation of protoplasts for transient expression of the four selected transfactors. Both WRKY-like and ZincFinger-like transactivated specifically the SbMATE promoter, while NF-YB-like and SORBIDRAFT_09g022540 were unable to activate the expression of the reporter gene. Through promoter deletion assays, WRKY-like interaction and ZincFinger-like sites were mapped in a cis-regulatory domain of 127 bp, delimited by positions -2102 to -1975 in the SbMATE promoter. Collectively, these results indicate that the WRKY-like and ZincFinger- like transfactors are involved in the control of the SbMATE gene expresssion.

COSTA, José Jackson do Nascimento. Expressão de marcadores de células germinativas e de oócitos em fibroblastos bovinos tratados com 5-aza-citidina e em células-tronco adultas cultivadas in vitro na presença de BMP-2, BMP-4 ou fluido folicular. 2016. 207 f. Tese (Doutorado em Biotecnologia)-Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2016. / Submitted by Jairo Viana (jairo@ufc.br) on 2016-08-31T20:28:44Z No. of bitstreams: 1 2016_tese_jjncosta.pdf: 2424368 bytes, checksum: 8fb10f9a05f8f2bc642ce3964eb960d3 (MD5) / Approved for entry into archive by Jairo Viana (jairo@ufc.br) on 2016-08-31T20:29:09Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2016_tese_jjncosta.pdf: 2424368 bytes, checksum: 8fb10f9a05f8f2bc642ce3964eb960d3 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-08-31T20:29:09Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2016_tese_jjncosta.pdf: 2424368 bytes, checksum: 8fb10f9a05f8f2bc642ce3964eb960d3 (MD5) Previous issue date: 2016 / This study aimed to investigate the effect of 5-Aza-cytidine during induction of pluripotency, and evaluate the effects of culture in medium containing BMP-2, BMP-4 or follicular fluid in the differentiation of fibroblasts in primordias germ cells (CGP) and oocytes (stage 1). Furthermore, isolation of stem cells from the bovine ovarian epithelium and evaluate the effects of BMP-2, BMP-4 or follicular fluid on the differentiation of these stem cells into structures similar to oocytes (stage 2). In phase 1, fibroblasts were treated with 0.5, 1.0 or 2.0 μM of 5-Aza for 18, 36 or 72 h. Morphology cell viability and gene expression (OCT-4, NANOG, SOX2 and REX), were assessed, for the selection of the concentration/time more efficient. The fibroblasts were then cultured in medium supplemented with 10 ng/mL BMP-2 or 10 ng/mL BMP-4 or 5% bovine follicular fluid by 7 or 14 days. Subsequently, evaluation of the morphology and cell viability was taken, and gene expression (VASA, DAZL, c-Kit, SCP3, ZPA and GDF-9). For phase 2, the stem cells of ovarian surface were isolated, expanded, grown in differentiation medium containing 50 ng/mL BMP-2 or 50 ng/mL BMP-4, or BMP-2+BMP-4 or 5% bovine follicular fluid for 14 days. Morphological characteristics, cell viability and expression of alkaline phosphatase and gene expression (VASA, DAZL, C-KIT, SCP3, ZPA and GDF-9), were evaluated. The gene expression results were analyzed using ANOVA followed by Kruskal-Wallis test (P <0.05). In stage 1, the culture with 2.0 μM of 5-Aza for 72 h caused changes in morphology and cell proliferation rate, and significantly increased the expression of pluripotency factors. The culture in medium containing BMP-2, BMP-4 or follicular fluid for 7 or 14 days, altered cellular morphology, and expression of specific genes for stem cells and oocytes. In stage 2, the ovarian stem cells expressed pluripotent genes, and after culture, this cells showed morphologic characteristics similar to PGC and oocytes, including the expression of alkaline phosphatase, and the expression of specific genes for PCG and oocytes. In conclusion, the present study describes the possibility of conversion of the skin fibroblasts and stem cells from ovarian surface of the bovine, in oocyte-like cells, similar oocyte cells, through the cell reprogramming process associated with the supplementation of BMP-2, BMP- 4 and follicular fluid. / Este estudo teve como objetivo investigar o efeito da 5-Aza-citidina durante a indução da pluripotência, e avaliar os efeitos do cultivo em meio contendo BMP-2, BMP-4 ou fluido folicular na diferenciação de fibroblastos em células germinativas primordias (CGP) e oócitos (fase 1). Além disso, isolar células-tronco do epitélio ovariano de bovinos e avaliar os efeitos da BMP-2, BMP-4 ou fluido folicular sobre a diferenciação destas células-tronco em estruturas semelhantes a oócitos (fase 2). Na fase 1, os fibroblastos foram tratados com 0.5, 1,0 ou 2.0 μM de 5-Aza por 18, 36 ou 72 h. Foi avaliada a morfologia, viabilidade celular e a expressão gênica (OCT-4, NANOG, REX e SOX2), para a seleção da concentração/tempo mais eficientes. Os fibroblastos foram então cultivados em meio suplementado com 10 ng/mL de BMP-2, ou 10 ng/mL de BMP-4 ou 5% de fluido folicular bovino, por 7 ou 14 dias. Posteriormente, foi feita a avaliação da morfologia e viabilidade celular, e expressão gênica (VASA, DAZL, C-KIT, SCP3, ZPA e GDF-9). Para a fase 2, as células-tronco da superfície ovariana foram isoladas, expandidas, cultivadas em meio de diferenciação contendo as 50 ng/mL de BMP-2, ou 50 ng/mL de BMP-4, ou BMP-2+BMP-4 ou 5% de fluido folicular bovino por 14 dias. Foram avaliadas as características morfológicas, viabilidade celular, e expressão da fosfatase alcalina e expressão gênica (VASA, DAZL, C-KIT, SCP3, ZPA e GDF-9). Os resultados de expressão gênica foram analisados usando ANOVA seguido pelo Teste de Kruskal Wallis (P<0,05). Na fase 1, o cultivo com 2.0 μM de 5-Aza por 72 h provocou mudanças na morfologia e na taxa de proliferação celular, e aumentou significativamente a expressão de fatores de pluripotência. Já o cultivo em meio contendo BMP-2, BMP-4 ou fluido folicular, durante 7 ou 14 dias, alterou a morfologia celular, e a expressão de genes específicos para células germinativas e oócitos. Na fase 2, as células-tronco do ovário expressaram genes de pluripotência e após o cultivo, as células apresentaram características morfológicas que se assemelhavam a CGP e a células semelhantes a oócitos, incluindo a expressão da fosfatase alcalina e a expressão de genes específicos de células germinativas e oócitos. Em conclusão, o presente estudo descreve a possibilidade de converter os fibroblastos da pele de bovinos e células-tronco da superfície ovariana, em células semelhantes a oócitos, através do processo de reprogramação celular, associado à suplementação do meio com BMP-2, BMP-4 e fluido folicular.

TORQUATO, José Pedro Pires. Estudo de mecanismos de regulação do sódio citoplasmático em cultivares de Vigna unguiculata (L.) WALP. submetidas à salinidade. 2014. 139 f. Tese (Doutorado em Bioquímica)-Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2014. / Submitted by Anderson Silva Pereira (anderson.pereiraaa@gmail.com) on 2017-01-23T20:58:55Z No. of bitstreams: 1 2016_dis_jpptorquato.pdf: 3572903 bytes, checksum: be55e53ccae4d0b5e66f15e6780ce1c8 (MD5) / Approved for entry into archive by Jairo Viana (jairo@ufc.br) on 2017-01-23T21:20:32Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2016_dis_jpptorquato.pdf: 3572903 bytes, checksum: be55e53ccae4d0b5e66f15e6780ce1c8 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-01-23T21:20:32Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2016_dis_jpptorquato.pdf: 3572903 bytes, checksum: be55e53ccae4d0b5e66f15e6780ce1c8 (MD5) Previous issue date: 2014 / In the Northeast of Brazil, there are some salinized areas and others in the process of salinization, what drastically reduces plant productivity. Many studies have been done regarding the effect of saline stress on plant growth and development. However, there is little knowledge about the mechanisms of acclimatization to salinity in the different plant organs, particularly in the maintenance mechanisms of sodium ion homeostasis in Vigna unguiculata, involving: enzymes, channels and transporters. For this, two cultivars with different degrees of susceptibility to saline stress were used: Pitiúba (tolerant) and Setentão (sensitive). The objective of the present work was to understand the interrelationships between the H+-ATPases and the SOS1 transporter, as well as the interrelationships between the vacuolar NHX transporter and the vacuolar proton pumps and their roles on regulating the Na+ cytoplasmic concentration in Vigna unguiculata, in response to saline stress. For this, morphological parameters were evaluated: roots, stems and leaves length, root, stems and leaves dry mass, ratio Root/Aerial, and biochemical parameters: proline, malondialdehyde, Na+ and K+ ions and the ratio Na+/K+, at 5 different concentrations (0, 25, 50, 75 and 100 mM) of NaCl. Molecular parameters in the two cultivars Pitiúba and Setentão were also analyzed in plants with 10 days after sowing, submitted to NaCl (100 mM) for 120 hours. SOS1, H+-ATPase type P and type V, pyrophosphatases and NHX encoding genes were identified through searches in Vigna unguiculata databases. The gene expression was evaluated in plants with 10 days after sowing, submitted to 100 mM NaCl, at the times: 0, 6, 12, 24 and 48 hours after stress application, using PCR technique in real-time (qPCR). The entirely evaluation of the data allowed to establish the differences in the form of acclimatization to the saline stress between the two cultivars. The parameters such as visual aspects, dry mass, leaf area and Na+/K+ ratio gave support for Pitiúba to be classified as a salt tolerant cultivar in relation to the Setentão. The parameters, growth and percentage of water were not conclusive. The Pitiúba cultivar, presented a constitutive proline concentration in the leaves greater than the Setentão cultivar and being, therefore, better pre-acclimatized to tolerate saline stress. The highest lipid peroxidation in the leaves was observed in Pitiúba. The database searches revealed that V. unguiculata presents at least 1 SOS1 gene, 13 H+-ATPase type P genes, 7 NHX genes, 2 PPase genes and 1 V-ATPase subA gene. Of these genes, SOS1, H+-ATPase 06 and 48, NHX1, NHX2, PPase1 and V-ATPase subA were induced in response to saline stress in a differentiated way in relation to organ and cultivar analyzed. From these data it was possible to infer that the exclusion of Na+ in Pitiúba occurs mainly in the roots, while in the Setentão it occurs more intensely in the leaves. Vacuolar compartmentalization of Na+ is higher in the roots of both cultivars. However, while Pitiúba increased expression of NHX1, Setentão increased expression of NHX2. NHX induction was accompanied by the mRNA increase of PPase1 in both cultivars and V-ATPase in Pitiúba. In leaves, the SOS1 gene was most expressed in the Setentão, revealing a co-expression with two H+-ATPase genes (H+-ATPase 06 and 48), whereas NHX1 expression increased only in Pitiúba. In general, the data suggest that the cultivars of Vigna unguiculata (Pitiúba and Setentão) used different strategies to minimize the deleterious effects of saline stress. / No Nordeste brasileiro existem algumas áreas salinizadas e outras em processo de salinização, o que reduz drasticamente a produtividade das plantas. Muitos estudos tem sido feitos em relação ao efeito do estresse salino no crescimento e desenvolvimento das plantas. Contudo, pouco se sabe sobre os mecanismos de aclimatação à salinidade nos diferentes órgãos vegetais, particularmente nos mecanismos de manutenção da homeostase iônica do sódio em Vigna unguiculata, envolvendo: enzimas, canais e transportadores. Para tal, foram utilizados dois cultivares com diferentes graus de suscetibilidade ao estresse salino: Pitiúba (tolerante) e Setentão (sensível). O objetivo do presente trabalho foi compreender as inter-relações entre as H+-ATPases e o transportador SOS1, bem como, as inter-relações entre o transportador vacuolar NHX e as bombas de prótons vacuolares e seus papéis na regulação da concentração citoplasmática de Na+ em Vigna unguiculata, em resposta ao estresse salino. Para tal, foram avaliados parâmetros morfológicos: comprimento de raízes, caules e folhas, massa seca de raízes, caules e folhas, razão Raiz/Parte Aérea, e parâmetros bioquímicos: concentrações de prolina, malondialdeído, dos íons Na+ e K+ e a razão Na+/K+, em 5 diferentes concentrações (0, 25, 50, 75 e 100 mM) de NaCl. Também foram analisados parâmetros moleculares nos dois cultivares Pitiúba e Setentão em plantas com 10 dias após a semeadura, submetidas ao NaCl (100 mM) por 120 horas. Genes codificadores da SOS1, H+-ATPase tipo P e tipo V, pirofosfatases e NHX foram identificados através de buscas em bancos de dados de V. unguiculata. A expressão gênica foi avaliada em plantas com 10 dias após a semeadura, submetidas a NaCl 100 mM, nos tempos: 0, 6, 12, 24 e 48 horas após aplicação do estresse, através da técnica PCR em tempo real (qPCR). A avaliação conjunta dos dados possibilitou estabelecer as diferenças na forma de aclimatação ao estresse salino entre os dois cultivares. Os parâmetros tais como: aspectos visuais, massa seca, área foliar e razão Na+/K+ deram suporte para que Pitiúba sejá classificada como um cultivar mais tolerante ao estresse salino em relação a Setentão. Os parâmetros, crescimento e percentual de água não foram conclusivos. O cultivar Pitiúba, apresentou uma concentração constitutiva de prolina maior do que Setentão nas folhas estando, portanto, melhor pré-aclimatado para tolerância ao estresse salino. A maior peroxidação lipídica nas folhas foi observada em Pitiúba. As buscas em bancos de dados revelaram que V. unguiculata apresenta pelo menos 1 gene SOS1, 13 genes H+-ATPase tipo P, 7 genes NHX, 2 genes PPase e 1 gene V-ATPase subA. Desses genes, SOS1, H+-ATPase 06 e 48, NHX1, NHX2, PPase1 e V-ATPase subA foram induzidos em resposta ao estresse salino de maneira diferenciada em relação ao órgão e cultivar analisado. A partir desses dados foi possível inferir que a exclusão de Na+ em Pitiúba ocorre principalmente nas raízes, enquanto que em Setentão ocorre mais intensamente nas folhas. A compartimentalização vacuolar do Na+ é maior nas raízes de ambos os cultivares. Contudo, enquanto Pitiúba aumentou a expressão de NHX1, Setentão aumentou a expressão de NHX2. A indução de NHX foi acompanhada pelo aumento do mRNA da PPase1 em ambos os cultivares e da V-ATPase em Pitiúba. Em folhas, o gene SOS1 foi mais expresso em Setentão revelando uma co-expressão com dois genes da H+-ATPase (H+-ATPase 06 e 48), enquanto a expressão de NHX1 aumentou apenas em Pitiúba. Em geral, os dados sugerem que os cultivares de V. unguiculata (Pitiúba e Setentão) utilizaram diferentes estratégias para minimizar os efeitos deletérios do estresse salino.

ALMEIDA, Thiago Silva de. Identificação, Atividade Antioxidante e Análise Toxicogenômica de Compostos Fenólicos de Sementes de Triplaris gardneriana Wedd. 2016. 214 f. Tese (Doutorado em Bioquímica)- Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2016. / Submitted by Weslayne Nunes de Sales (weslaynesales@ufc.br) on 2017-01-27T17:06:11Z No. of bitstreams: 1 2016_tese_tsandrade.pdf: 5012526 bytes, checksum: ddff547ffaee40b26af1111578a5cf9e (MD5) / Approved for entry into archive by Jairo Viana (jairo@ufc.br) on 2017-01-27T20:24:49Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2016_tese_tsandrade.pdf: 5012526 bytes, checksum: ddff547ffaee40b26af1111578a5cf9e (MD5) / Made available in DSpace on 2017-01-27T20:24:49Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2016_tese_tsandrade.pdf: 5012526 bytes, checksum: ddff547ffaee40b26af1111578a5cf9e (MD5) Previous issue date: 2016 / Antioxidants can act in the treatment of various diseases related to oxidative stress. The Caatinga biome from Northeast, has a vegetation adapted to adverse conditions that can increase the concentration of antioxidants. Triplaris gardneriana Wedd. (Poligonaceae), known as Pajeú is used in the treatment of venereal disease and intestinal inflammation. This work aims to obtain the ethanol extract and fractions of Pajeú seeds and identify the phenolic compounds, and evaluate its antioxidant and toxicity activities. The chemical composition was assessed by quantification of flavonoids, phenolics and tannins and by high-performance liquid chromatography (HPLC). The antioxidant potential was assessed by testing scavenging free radical DPPH (diphenyl-picryl-hydrazyl), inhibition of lipid peroxidation, iron chelator capacity and assessment of the ability to prevent stress and restore the oxidative balance in cells. Toxicity was assessed by hemolytic activity, cytotoxicity using Artemia sp., Cytotoxicity against breast (MCF7) and intestinal (Caco 2) carcinogenic cells, evaluation of the alteration of gene expression in exposed MCF7 cells to samples for 6 h. Were identified 4 phenolic acids and 8 flavonoids by HPLC, many of these are being described for the first time for this specie. The methanol fraction showed the best results for DPPH (NC50 11.45 µg/mL). The acetate fraction showed the best result in the inhibition of lipid peroxidation (IC50 6.14 µg/mL). The ethyl acetate fraction had the best performance in the chelating ability (48% complexation to 1.000 µ/mL). The ethanol extract protected MCF 7 cells against oxidative stress and was able to restore the oxidative balance after stress have already been established. Haemolytic activity was weaker by the extract with maximum values of 40%. Front of Artemia sp the extract showed LC50 67.85 mg / mL. The extract showed low toxicity values against both cell lines and changed in toxicogenomics a small number of genes (14 genes, 0.22% of total), the main act in the interaction with various types of viruses (IFIT1, MX1, OAS1), the same genes were altered in the same way by quercetin, a flavonoid present in the extract. Drugs with similar gene signature submitted by the extract has the antimicrobial function, which is a characteristic of phenolic compounds such as those identified in the extract. Thus, this study contributed to the identification of novel bioactive molecules with antioxidant activity, with low risk of use and which may be useful as potential phytotherapeutic / Antioxidantes podem atuar no tratamento de diversas doenças relacionadas com estresse oxidativo. A Caatinga, bioma da região Nordeste, possui uma vegetação adaptada a condições adversas que influenciam no aumento da concentração de antioxidantes. Triplaris gardneriana Wedd. (Poligonaceae), conhecida como Pajeú, é utilizada no tratamento de doenças venéreas e inflamações intestinais. Este trabalho objetiva obter o extrato etanólico e frações das sementes de pajeú e identificar os compostos fenólicos, e avaliar suas atividades antioxidante e toxicidade. A composição química foi avaliada por quantificação de flavonoides, fenóis e taninos totais e por Cromatografia Líquida de Alta Eficiência (CLAE). O potencial antioxidante foi avaliado através do ensaio de sequestro de radicais livres DPPH (difenil-picril-hidrazil), inibição da peroxidação lipídica, capacidade quelante de ferro e avaliação da capacidade de prevenir o estresse e restaurar o balanço oxidativo em células. A toxicidade foi avaliada através de atividade hemolítica, citotoxicidade frente a nauplios de Artêmia sp., citotoxicidade frente a células carcinogênicas de mama (MCF7) e intestino (Caco 2), avaliação da alteração da expressão gênica em células MCF 7 expostas às amostras por 6 h. Foram identificados 4 ácidos fenólicos e 8 flavonoides através da CLAE, muitos descritos pela primeira vez para a espécie. A fração metanólica apresentou os melhores resultados para o DPPH (CN50 11,45 µg/mL). A fração acetato apresentou o melhor resultado na inibição da peroxidação lipídica (CI50 6,14 µg/mL). A fração acetato teve o melhor desempenho na capacidade quelante (48% de complexação à 1,000 µg/mL). O extrato etanólico protegeu células MCF 7 contra o estresse oxidativo restaurou o equilíbrio oxidativo após o estresse já ter sido estabelecido. A Atividade hemolítica do extrato foi fraca, com valores máximos de 40%. Frente aos nauplios de Artêmia sp o extrato apresentou CL50 de 67,85 µg/mL. O Extrato mostrou valores baixos de toxicidade frente ambas linhagens celulares e alterou na toxicogenômica uma quantidade pequena de genes (14 genes, 0,22% do total), os principais atuam na interação com vários tipos de vírus (IFIT1, MX1, OAS1), os mesmos genes foram alterados pela quercetina, um flavonoide presente no extrato. Drogas com assinatura gênica semelhante ao apresentado pelo extrato, tem função antimicrobiana, que é uma característica de compostos fenólicos como os identificados no extrato. Assim, o presente estudo contribuiu para a identificação de novas moléculas bioativas com potencial antioxidante, com baixo risco de uso e que podem ser úteis como potenciais fitoterápicos

Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2016-04-20T09:37:04Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 451489 bytes, checksum: c4f3febfa6a6f7e679357a7fd09a369d (MD5) / Made available in DSpace on 2016-04-20T09:37:04Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 451489 bytes, checksum: c4f3febfa6a6f7e679357a7fd09a369d (MD5) Previous issue date: 2015-03-27 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / O processo desenvolvimento folicular, formação e regressão do corpo lúteo (CL) são caracterizadas por intensa angiogênese. Fêmeas de três grupos genéticos foram comparadas durante o ciclo estral (Linhagem1-L1, Linhagem2-L2 e raça Piau) quanto às características reprodutivas e a expressão de genes candidatos ligados ao processo de angiogênese, fator de crescimento do endotélio vascular (VEGFA), angiopoetinas 1 e 2 (ANGPT1 e ANGPT2), receptor de tirosina quinase (TIE-2/TEK) e metaloproteinase (MMP2), por meio da técnica de PCR em tempo real. Aos 3, 5, 10 e 14 dias do ciclo as fêmeas foram abatidas para coleta de CL e aos 14 e 18 dias para coleta de células da granulosa (CG) e análise da concentração de estradiol. Registrou-se o número e o diâmetro dos folículos e o número de CL. A L1 apresentou maior comprimento do ciclo estral (P=0,0334), taxa de ovulação (P 0,0001) e diâmetro folicular aos 14 dias (P=0,0002). Já em relação à concentração de estradiol, apenas a L2 e Piau apresentaram pico aos 18 dias do ciclo estral (P=0,002). Em relação à expressão gênica das CG, os genes ANGPT1 e ANGPT2 não apresentaram diferença (P=0,7749 e P=0,6875, respectivamente) e o TEK mostrou apenas tendência à variação da expressão entre os grupos (P=0,0645). O VEGF, MMP2 e TEK apresentaram padrão de expressão gênica do CL semelhante entre grupos de animais (P=0,6739, P=0,5273 e P=0,4288 respectivamente). Em relação ao ANGPT1 e ANGPT2, a L2 e a raça Piau apresentaram maior abundância que a L1 no dia 10 (P 0,05). Entretanto na relação ANGPT2/ANGPT1 apenas a L1 apresentou aumento no dia 14 (P=0,0049). Os resultados obtidos em relação à CG demonstram a necessidade de mais estudos quanto à angiogênese folicular. Em relação ao CL, observou-se padrão diferente na expressão de genes ligados ao processo de regressão em fêmeas de diferentes grupos genéticos. Diante dos resultados obtidos conclui-se vique a linhagem comercial 1 possui maior comprimento do ciclo estral e maior fase folicular, embora apresente menor fase luteal que a raça Piau. / Follicular development process, formation, and regression of the corpus luteum (CL) are characterized by intense angiogenesis. Females from three genetic groups were compared during the estrous cycle (Line1-L1, Line2-L2 and breed Piau), the reproductive traits and the expression of candidate genes, vascular endothelium growth factor (VEGFA), Angiopoietins 1 and 2 (ANGPT1 and ANGPT2), tyrosine kinase receptor (TIE-2 / TEK), and metalloproteinase (MMP2), by PCR in real time were evaluated. Females were slaughtered at 3, 5, 10 and 14 day of the estrous cycle to collect CL and at 14 and 18 days to collect granulosa cells (GC) and to analyze estradiol concentrations. It was recorded the number and diameter of the follicles and the number of CL. The L1 showed longer estrous cycle (P=0.0334), ovulation rate (P 0.0001) and follicular diameter at 14 days (P = 0.0002). Regarding to estradiol concentrations, L2 and Piau reached a peak at 18 days of the estrous cycle (P=0.002). In adition gene expression in the CG, the ANGPT1 and ANGPT2 genes showed no difference (P=0.7749 and P=0.6875, respectively) and the TEK showed only the variation trend of expression among the groups (P=0.0645). VEGF, MMP2 and TEK showed similar pattern of expression between groups in CL (P=0.6739, P=0.5273 and P=0.4288 respectively). The L2 and the Piau breed showed greater expression than the L1 on the 10 day (P 0.05) in relation to ANGPT1 and ANGPT2. However only L1 showed an increase of the relationship ANGPT2 / ANGPT1 at day 14 ( P=0.0049). The results about gene expression in the CG demonstrate that further study on the follicular angiogenesis will be needed. Regarding CL, different pattern was observed in the expression of genes related to the regression process of different genetic groups females. Based on these results it is concluded that the commercial line 1 has a viiigreater length of the estrous cycle and higher follicular phase, although it presents lower luteal phase of that breed Piau.

Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2016-08-18T11:53:27Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 846703 bytes, checksum: 3c42f8564d8a86d839a5d1d19109efad (MD5) / Made available in DSpace on 2016-08-18T11:53:27Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 846703 bytes, checksum: 3c42f8564d8a86d839a5d1d19109efad (MD5) Previous issue date: 2016-03-18 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Jasmonatos (JA) podem atuar como um indutor da expressão de genes contra estresse biótico e abiótico através de um processo denominado “prime state”. Aplicação de JA tem mostrado reduzir o apodrecimento de tecidos e controlar doenças pós-colheita em raízes de beterraba açucareira. Entretanto, os mecanismos envolvidos na indução de defesa na pós-colheita de raízes de beterraba açucareira através da aplicação do JA são desconhecidos. Consequentemente, foi investigado os mecanismos induzidos pelo JA, ao qual protege as raízes durante o armazenamento, identificando e caracterizando genes que são alterados pelo tratamento com JA. O tratamento de raízes de beterraba com 10 μM de JA resultou na alteração significativa da expressão de unigenes. O sequenciamento do mRNA revelou que 30 e 49 genes com potencial de defesa foram upregulated para 2 e 60 dias, respectivamente, após o tratamento com JA. Após 2 dias de tratamento, os níveis de peroxidase, cinamato-4-hidroxilase, quitinase ácida, lacase, proteína de resistência nbs-Irr, proteína relacionada a patogênese da família da taumatina, inibidor de protease e β-glucosidase ( variação de 1.8 a 8.3 vezes) apresentaram maior expressão em raízes de beterraba açucareira tratadas que as do controle. Peroxidase, cinnamato-4- hidroxilase e cc-nbs-Irr resistant protein também foram up-regulated 60 dias após a aplicação de JA. Os unigenes upregulated, em ambos os dias avaliados, são relacionados a rotas de metabólicas de biossíntese de compostos secundários, aumento da resistência da parede celular, assim como proteínas relacionadas à interação planta-patógeno. Assim, o presente trabalho sugere que o tratamento com JA pode induzir o “prime state” em beterraba açucareira, induzido uma série de genes relacionados a defesa de plantas. Incluindo enzimas relacionadas a biossíntese de metabólicos secundários e proteínas relacionas a patogêneses. O JA também aumentou a habilidade de células reconhecer patógenos , qual pode resultar em rápida ativação de respostas imune e reduzir a susceptibilidade das raízes a doenças pós- colheita. Em adição as perdas devido ao apodrecimento no armazenamento das raízes, é de extrema importância evitar as perdas de açúcares durante o crescimento. O ataque por larvas de mosca de raízes de beterraba açucareira é um dos danos que reduz significativamente a produção de raízes e o conteúdo de sacarose, podendo devastar campos de produção. Assim, o estudo de mecanismos de resistência é essencial para prover novas estratégias de controle e reuduzir a aplicação de inseticidas. Neste trabalho foi investigado se a resistência de alguns genótipos é alcançada através da ativação da quitinase, peroxidase e polifenoloxidase. Raízes de nove genótipos de beterraba açucareira, susceptível ou resistente à larva de mosca de raízes de beterraba açucareira, foram feridas quatro semanas após o plantio para mimetizar o ataque por estas larvas. Os resultados mostraram a atividade das enzimas antioxidantes, peroxidase e polifenoloxidase, não está correlacionada a resistência de beterraba açucareira a larva de mosca de raízes de beterraba açucareira. A atividade da quitinase foi signicativamente reduzida em alguns genótipos após o ferimento, entretanto não foi encontrado diferença significativa entre genótipos resistente e susceptível de beterraba açucareira. / Jasmonate (JA) can act as an inducer expression of defense genes against biotic and abiotic stress by process of priming plant. Exogenous application of JA has been shown to reduce rotted tissue and control postharvest pathogen in sugarbeet roots. However, the mechanism involved in the postharvest induction of defense by JA in sugarbeet roots is unknown. Consequently, we investigated the JA-induced mechanisms which protect roots from storage pathogens by identifying and characterizing genes that are altered by JA treatment. JA (10 μM) treatment to sugarbeet roots resulted alteration significant of unigenes expression. RNA-Seq data showed that 30 and 49 putative defense genes were upregulated at 2 and 60 days after JA-treatment, respectively. In sugarbeet roots, peroxidases, cinnamate-4-hydroxilase, chitinase acid, laccases, nbs-Irr resistant, pathogen-related thaumatin family protein, proteinase inhibitor and β- glucosidase were found at higher levels (fold change ranged from 1.8 to 8.3) in treated than control roots at 2 d subsequent to JA-application. At 60 days after JA treatment observed that peroxidase, chitinase, cinnamate-4 hydroxilase and cc-nbs-Irr resistant protein were also up-regulated. These upregulated unigenes are related with biosynthesis of secondary metabolites, cell wall reinforcement, as well as for plant- pathogen interaction. Thus, the present study suggests that JA treatment could prime sugarbeet inducting a series of defense genes, including defense-related proteins and key enzymes related secondary metabolites. JA also increased the ability of sugarbeet cells to recognize pathogen which may result faster activation of immune response and then reduction of infection and susceptibility. In addition to rotted losses in rot storage it is extremely importance to avoid losses during sugarbeet growth. Insect attack by sugarbeet root magoot is one of damage that significantly reduces root yield and sucrose content and can devastate individual fields. Thus, study of resistance mechanism is essential to provide new control strategies and reduce insecticides spray. We investigated if resistance of some genotypes is achieved through activation of chitinase, peroxidase and polyphenoloxidase. Root of nine genotypes sugarbeet, susceptible and resistant to maggot fly, were wounding 4 weeks after planting to mimic maggot attack. The results showed neither peroxidase nor polyphenol oxidase activity is correlated to maggot fly resistant in sugarbeet roots. We observed that chitinase activity was significantly reduced for some genotypes after wounding, although no significance difference was found between resistant and susceptible sugarbeet genotypes.

MARÍLIA,B.C. Análise de expressão dos genes de reparo da lesão de fita simples do DNA de trabalhadores rurais expostos à agrotóxicos. 2017.118 f. Dissertação (Mestrado em Ciências Médicas) - Faculdade de Medicina, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2017. / Submitted by Ivone Sousa (ppgcm.ufc@gmail.com) on 2017-08-22T14:28:14Z No. of bitstreams: 1 2017_dis_mbc.pdf: 2549794 bytes, checksum: 28bfda64f0b63d5f3aff76ae45562b1f (MD5) / Approved for entry into archive by Erika Fernandes (erikaleitefernandes@gmail.com) on 2017-08-22T15:28:50Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2017_dis_mbc.pdf: 2549794 bytes, checksum: 28bfda64f0b63d5f3aff76ae45562b1f (MD5) / Made available in DSpace on 2017-08-22T15:28:50Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2017_dis_mbc.pdf: 2549794 bytes, checksum: 28bfda64f0b63d5f3aff76ae45562b1f (MD5) Previous issue date: 2017-02-15 / Population growth and the arising of the modern chemical industry have culminated in significant changes in agricultural productivity. The need of a increasingly food production has been linked to the use of chemicals to control and improve the development of agricultural products. In Ceará, specifically in region of Baixo Jaguaribe, the arrival of business agriculture has caused a re-ordering of agribusiness. Exposure to pesticides is often considered a major factor underlying increased risk of bone marrow disorders, including leukemia, myelodysplastic syndrome (MDS) and multiple myeloma in agricultural populations. Cumulative genetic damages are important events for the development of carcinogenesis and lack of efficacy in the DNA repair system is considered a major contributing factor.We evaluated the gene expression of targets related to DNA repair mechanisms, namely genes from the classes single strand break (SSB: CSA, CSB, XPA, XPC and XPG), using quantitative real time PCR from bone marrow samples of ninety farmers. Further, we also investigated karyotype of bone marrow cells by G-Band to confirm cytogenetic alterations. The participants were recruited from Limoeiro do Norte, a municipality in the northeastern of Brazil recognized by its intense agriculture activity, and divided into three groups according to their work segments: agriculture industry (AI), family farmers (FF) and organic farming (OF). There were significant differences across the three groups. AI individuals presented significantly lower transcript levels of XPG (p=0.004) and CSA (p=0.000) compared to the OF group. Similarly, FF presented significantly lower XPG (p=0.012) mRNA expression levels than OF. Among the farmers exposed to agrochemicals, we detected that those with more than 12 years of exposure showed an overall decrease in expression of XPC (p=0.001), XPG (p=0.010) and CSB (p=0.05) compared to those who had been exposed to less than 12 years. In addition, we detected significant correlations (p<0.05) between XPC and CSB (r=0.658), XPC and XPG (r=0.641), XPA and CSB (r=0.635), XPA and XPG (r=0.627), XPG and CSA (r=0.536), CSA and CSB (r=0.515), XPA and XPC (r=0.496), XPA and CSA (r=0.327). Whilst these correlations highlights the overall intrinsic relationship between single and double DNA strand breaks genes in bone marrow cells of these individuals, it is certainly notable the fact that the vast majority of the DNA repair genes investigated were downregulated in farmers exposed to pesticides, which vastly increments the risk of developing bone marrow cancers. / O crescimento da população e o surgimento da indústria química moderna culminou em mudanças significativas na produtividade agrícola. A necessidade de uma produção cada vez maior de alimentos tem estado atrelada ao uso de substâncias químicas afim de controlar e melhorar o desenvolvimento dos produtos agrícolas. No Ceará, especificamente na região do Baixo Jaguaribe, foi com a chegada da agricultura empresarial que houve uma reordenação do agronegócio na região. A exposição a pesticidas é muitas vezes considerada um fator importante subjacente ao aumento do risco de distúrbios da medula óssea, incluindo leucemia, síndrome mielodisplásica (MDS) e mieloma múltiplo em populações agrícolas. Os danos genéticos cumulativos são eventos importantes para o desenvolvimento da carcinogênese e a falta de eficácia no sistema de reparo do DNA é considerado um dos principais fatores contribuintes. Avaliamos a expressão gênica de alvos relacionados aos mecanismos de reparo do DNA, nomeadamente os genes de reparo de fita simples do DNA (SSB: CSA, CSB, XPA, XPC e XPG) utilizando PCR quantitativa em tempo real a partir de amostras de medula óssea de noventa agricultores. Além disso, também investigamos Cariótipo das células da medula óssea pela G-Band para confirmar as alterações citogenéticas. Os participantes foram recrutados no Limoeiro do Norte, um município no Nordeste do Brasil reconhecido pela intensa atividade agrícola e dividido em três grupos de acordo com seus segmentos de trabalho: grande produtor (GP), agricultura familiar (AF) e agricultura ecológica (AE). Houve diferenças significativas entre os três grupos. Os indivíduos do grupo GP apresentaram níveis de transcrição significativamente inferiores de XPG (p = 0,004), CSA (p = 0,000), em comparação com o grupo AO. Entre os agricultores expostos aos agroquímicos, descobrimos que aqueles com mais de 12 anos de exposição apresentaram uma diminuição geral da expressão de XPC (p = 0,001), XPG (p = 0,010) e CSB (p = 0,05) em comparação com aqueles que foram expostos a menos de 12 anos. Além disso, detectamos correlações significativas (p <0,05) entre XPC e CSB (r = 0,658), XPC e XPG (r = 0,641), XPA e CSB (r = 0,635), XPA e XPG (r = 0,627), XPG E CSA (r = 0,536), CSA e CSB (r = 0,515), XPA e XPC (r = 0,496), XPA e CSA (r = 0,327). Embora essas correlações mostrem a relação intrínseca global entre os genes de fita simples e fita dupla do DNA nas células da medula óssea desses indivíduos, é certamente notável o fato de que a grande maioria dos genes de reparo de DNA investigados estavam baixo expressos em agricultores expostos à pesticidas, o que muito aumenta o risco de desenvolver câncer de medula

PASSOS, J.R.S. Expressão do sistema interleucina 1 (il-1) em folículos ovarianos bovinos e efeitos in vitro da il-1β na ativação de folículos primordiais. 2015. 95 f. Dissertação (DISSERTAÇÃO EM BIOTECNOLOGIA) - Campus de Sobral, Universidade Federal do Ceará, Sobral, 2015. / Submitted by Djeanne Costa (djeannecosta@gmail.com) on 2017-08-23T13:25:03Z No. of bitstreams: 1 2015_dis_jrdspassos.pdf: 2733592 bytes, checksum: c3aee8f721ab539ee80cb2a9ae2c6aa4 (MD5) / Approved for entry into archive by Djeanne Costa (djeannecosta@gmail.com) on 2017-09-26T16:00:45Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2015_dis_jrdspassos.pdf: 2733592 bytes, checksum: c3aee8f721ab539ee80cb2a9ae2c6aa4 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-09-26T16:00:45Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2015_dis_jrdspassos.pdf: 2733592 bytes, checksum: c3aee8f721ab539ee80cb2a9ae2c6aa4 (MD5) Previous issue date: 2015 / This study aims to investigate the expression of interleukin 1 system (proteins and mRNA of ligands and receptors) and its distribution in ovaries of cyclic cows, as well as to evaluate the effects of IL-1β on the survival and activation of primordial follicles in vitro. The ovaries were processed for localization of interleukin 1 system in preantral and antral follicles by immunohistochemical, qPCR and western blot analysis. For in vitro studies, ovarian fragments were cultured in α-MEM+ supplemented with IL-1β (0, 1, 10, 50 or 100 ng/mL), and aftes 6 days the tissues cultured were processed for histological analysis. Immunohistochemical results showed that the proteins for interleukin 1 system (IL-1β, IL-1RA, IL-1RI and IL-1RII) were detected in the various follicular compartments. Unfortunately, IL-1α antibodies tested did not react in bovine ovaries. All the proteins tested were observed in the cytoplasm of oocytes and granulosa cells from all follicular categories, and theca cells of antral follicles, with the exception that IL-1α has not been found in any analyzed cell. Variable levels of mRNA for the interleukin 1 system in the follicular size and classes analysed. After 6 days of culture, the presence of IL-1β (10 or 50 ng/mL) was effective in maintaining the percentage of normal follicles and in promoting primordial follicle activation. In conclusion, interleukin 1 system is differentially expressed in the ovarian cells according to the stage of follicular development. Moreover, IL-1β promotes the development of primordial follicles. These results suggest an important role of the interleukin 1 system in the regulation of folliculogenesis in bovine species. / O objetivo deste estudo foi investigar a expressão do sistema interleucina 1 (proteínas e RNAm de ligantes e receptores) e sua distribuição nos ovários de vacas cíclicas, bem como avaliar os efeitos da IL-1β na sobrevivência e ativação de folículos primordiais in vitro. Os ovários foram processados para a localização do sistema interleucina 1 em folículos pré-antrais e antrais utilizando as técnicas de imunohistoquímica, qPCR e análise de Western blot. Para os estudos in vitro, fragmentos ovarianos foram cultivados em α-MEM+ suplementado com IL-1β (0, 1, 10, 50 ou 100 ng/mL), e após 6 dias foram processados para análise histológica. Os resultados de imunohistoquímica mostraram que a proteína para os integrantes do sistema interleucina I (IL-1β, IL-1RA, IL-1RI e IL-1RII) foram detectados em diferentes compartimentos foliculares. Infelizmente, o anticorpo testado para localização de IL-1α não reagiu em ovários bovinos. Todas as proteínas testadas foram observados no citoplasma dos oócitos e nas células da granulosa de todas as categorias foliculares, e nas células da teca de folículos antrais, com a exceção da IL-1α, que não foi encontrada em nenhuma das célula analisados. Foram observados níveis variáveis de RNAm para o sistema interleucina 1 nas diferentes categorias foliculares analisadas. Após 6 dias de cultivo, a presença de IL-1β (10 ou 50 ng/mL) foi capaz de manter a percentagem de folículos normais e de promover a ativação dos folículos primordiais. Em conclusão, os componentes do sistema de interleucina 1 são expressos diferencialmente em células ovarianas de acordo com a fase do desenvolvimento folicular. Além disso, a IL-1β promove o desenvolvimento de folículos primordiais in vitro. Estes resultados sugerem um importante papel do sistema interleucina 1 na regulação da foliculogênese em bovinos.