Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:19Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2007-07-06Bitstream added on 2014-06-13T19:14:39Z : No. of bitstreams: 1 donofrio_fc_me_arafcf.pdf: 611507 bytes, checksum: 2ca5a08dde5671c30f12d9904897bfcb (MD5) / Universidade Estadual Paulista (UNESP) / A capacidade de Paracoccidioides brasiliensis, agente etiológico da paracoccidioidomicose (PCM), de causar doença com manifestações clínicas variadas, depende de seus fatores de virulência, em particular daqueles envolvidos na interação celular. Neste estudo pretendeu-se isolar e caracterizar adesina(s) de P. brasiliensis ligante(s) de fibronectina relacionadas à interação do fungo com células epiteliais de origem pulmonar, comparando amostras de P. brasiliensis, antes (18a) e depois (18b) da passagem em animal, posteriormente cultivadas em meio de Fava Netto e em meio sólido (ágar base) e líquido (BHI) contendo 5% de sangue de carneiro. Os extratos 18a e 18b obtidos dos diferentes meios apresentaram proteínas variando de 106 a 12 kDa. Os extratos da amostra 18a e 18b cultivados em meios sólido e líquido acrescidos de sangue demonstraram maior expressão de algumas proteínas, quando comparado às amostras 18a e 18b cultivadas apenas em meio de Fava Netto. Aparentemente, o uso de meios de cultura acrescidos de sangue é semelhante ao verificado após a passagem em animal. As proteínas com massas moleculares de 54 kDa e pI de 5,6; 58 kDa e pI de 5,9 e 60 kDa com pI de 6,3 foram caracterizadas como adesinas ligantes de fibronectina. Uma delas, a proteína de 54 kDa foi purificada por cromatografia de afinidade e eluída por eletroeluição. O sobrenadante contendo a proteína purificada foi avaliado por eletroforese bidimensional, confirmando a presença da proteína de 54 kDa e pI de 5,6 e seu papel como adesina. Os extratos cell-free dos isolados 113, 339, 2663-R3, 2681, PB01, 1934 de P. brasiliensis... / The capacity of Paracoccidioides brasiliensis, the etiological agent of paracoccidioidomycosis (PCM), to provoke illnesses with great variety of clinical manifestations depends on its virulence factors, particularly on those involved in the cellular interaction. The present study was designed to isolate and characterize the adhesin fibronectin-binding related to the capacity of this fungus to adhere to the host by comparing P. brasiliensis samples, taken before (18a) and after (18b) animal inoculation and cultured on Fava Netto s medium and on blood base agar solid medium and liquid (BHI) medium with 5% sheep blood. The 18a and 18b extracts, independent of the medium, presented proteins with the molecular weights of 106 and 12 kDa. Extracts from Pb18a and 18b cultured in blood agar solid and liquid (BHI) medium showed higher levels of protein expression than that from samples cultured on Fava Netto. Apparently, the use of the sheep blood in the medium is similar to the animal passage. Ligand affinity binding assays showed that proteins of 54 kDa, pI 5.6; 58 kDa and pI of 5.9 and 60 kDa and pI de 6.3 were evident in all P. brasiliensis cell-free extracts, and all had properties of adhesin fibronectin-binding. A fibronectin-binding protein of 54 kDa was purified by affinity chromatography and by electro elution. The protein purified was evaluated by isoelectric focusing, confirming the presence of protein of 54 kDa and pI of 5.6 and its role as an adhesin. The cell-free extracts from 113, 339, 2663-R3, 2681, PB01, 1934 P. brasiliensis isolates, also showed the expression of 54 kDa protein, and it was more evident in 113 and 339 isolates. Our experiments... (Complete abstract click electronic access below)

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / In the present study, chick embryos, non treated and treated with busulfan during the period from 1 to 6 days of incubation (stages 5 to 30) were used. These embryos were transversally sectioned in different levels, according to migratory pathway of primordial germ cells. The sections were then stained: 1. by Haematoxilin and Eosin for morphological observation; 2. by Periodic Acid Schiff, for the study of interactive glycoproteins and identification of primordial germ cells; sulfated and non sulfated glycosaminoglycans were observed by Alcian Blue (pH 2,5 and pH 1,0, respectively)and collagen was observed by Sirius Red Technique. Migration of primordial germ cells has a continuous flux. The route begins in germinal crescent, passes into the blood vessels and then reaches the interstitium destined to the developing gonads, where primordial germ cells colonize. Along the route, it was noted that interactive glycoproteins reduce right after the beginning of the intersticial migration phase. The same happens with sulfated glycosaminoglycans, that it could be related to a mechanism of compensation on the cell migration. On the other hand, in busulfan treated embryos, the amount of sulfated glycosaminoglycans (supposed to be hialuronic acid) increases, and, also, compensates the migration. Atrophic gonads were seen in busulfan treated embryos. The quantity of collagen was not modified along the route. These results suggest that extracellular matrix compounds participate actively by modulating the migration of primordial germ cells. / O presente estudo constitui a realização de cortes histológicos em embriões de Gallus gallus domesticus L. não tratados e tratados com busulfan, durante o período de 1 a 6 dias (estádios 5 a 30 de HAMBURGER & HAMILTON, 1951) de incubação. Nestes embriões, foram realizados cortes transversais, em diferentes níveis, dependendo da rota migratória das células germinativas primordiais. Tais cortes foram corados pela Hematoxilina e Eosina-floxina para estudos morfológicos; pelo método do ácido periódico-reativo de Schiff para a marcação das células germinativas primordiais e o estudo das glicoproteínas interativas; pelo método do Alcian Blue para observar glicosaminoglicanas sulfatadas e não sulfatadas e pelo Picrosirius para observar o colágeno em embriões tratados e não tratados com busulfan. Observou-se que as células germinativas primordiais seguem um fluxo contínuo na sua rota migratória do estádio 5 a 30 de HAMBURGER & HAMILTON, 1951. A rota inicia-se no crescente germinativo, passa pelos vasos sanguíneos e posteriormente pelo interstício para, por fim, colonizar o esboço gonadal. Ao longo da rota migratória notou-se que as glicoproteínas interativas diminuem logo após o início da fase intersticial de migração, o mesmo acontecendo com as glicosaminoglicanas sulfatadas, o que pôde ser interpretado como um mecanismo compensatório na velocidade de migração das células. Já nos embriões tratados com busulfan, embora as glicoproteínas interativas tenham diminuído em tal etapa, a quantidade suposta de ácido hialurônico aumentada, também compensa a velocidade de migração. As gônadas, frente ao busulfan, mostraram-se atrofiadas. A quantidade de colágeno permaneceu inalterada em toda a rota migratória com ou sem o tratamento com o busulfan. Estes resultados sugerem uma participação ativa de componentes da matriz extracelular como moduladores da migração das células germinativas primordiais ao longo do seu trajeto migratório.

Orientador: Maria José Soares Mendes Giannini / Banca: Gil Benardi / Banca: Cleni Mara Marzocchi Machado / Resumo: A capacidade de Paracoccidioides brasiliensis, agente etiológico da paracoccidioidomicose (PCM), de causar doença com manifestações clínicas variadas, depende de seus fatores de virulência, em particular daqueles envolvidos na interação celular. Neste estudo pretendeu-se isolar e caracterizar adesina(s) de P. brasiliensis ligante(s) de fibronectina relacionadas à interação do fungo com células epiteliais de origem pulmonar, comparando amostras de P. brasiliensis, antes (18a) e depois (18b) da passagem em animal, posteriormente cultivadas em meio de Fava Netto e em meio sólido (ágar base) e líquido (BHI) contendo 5% de sangue de carneiro. Os extratos 18a e 18b obtidos dos diferentes meios apresentaram proteínas variando de 106 a 12 kDa. Os extratos da amostra 18a e 18b cultivados em meios sólido e líquido acrescidos de sangue demonstraram maior expressão de algumas proteínas, quando comparado às amostras 18a e 18b cultivadas apenas em meio de Fava Netto. Aparentemente, o uso de meios de cultura acrescidos de sangue é semelhante ao verificado após a passagem em animal. As proteínas com massas moleculares de 54 kDa e pI de 5,6; 58 kDa e pI de 5,9 e 60 kDa com pI de 6,3 foram caracterizadas como adesinas ligantes de fibronectina. Uma delas, a proteína de 54 kDa foi purificada por cromatografia de afinidade e eluída por eletroeluição. O sobrenadante contendo a proteína purificada foi avaliado por eletroforese bidimensional, confirmando a presença da proteína de 54 kDa e pI de 5,6 e seu papel como adesina. Os extratos cell-free dos isolados 113, 339, 2663-R3, 2681, PB01, 1934 de P. brasiliensis... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The capacity of Paracoccidioides brasiliensis, the etiological agent of paracoccidioidomycosis (PCM), to provoke illnesses with great variety of clinical manifestations depends on its virulence factors, particularly on those involved in the cellular interaction. The present study was designed to isolate and characterize the adhesin fibronectin-binding related to the capacity of this fungus to adhere to the host by comparing P. brasiliensis samples, taken before (18a) and after (18b) animal inoculation and cultured on Fava Netto’s medium and on blood base agar solid medium and liquid (BHI) medium with 5% sheep blood. The 18a and 18b extracts, independent of the medium, presented proteins with the molecular weights of 106 and 12 kDa. Extracts from Pb18a and 18b cultured in blood agar solid and liquid (BHI) medium showed higher levels of protein expression than that from samples cultured on Fava Netto. Apparently, the use of the sheep blood in the medium is similar to the animal passage. Ligand affinity binding assays showed that proteins of 54 kDa, pI 5.6; 58 kDa and pI of 5.9 and 60 kDa and pI de 6.3 were evident in all P. brasiliensis cell-free extracts, and all had properties of adhesin fibronectin-binding. A fibronectin-binding protein of 54 kDa was purified by affinity chromatography and by electro elution. The protein purified was evaluated by isoelectric focusing, confirming the presence of protein of 54 kDa and pI of 5.6 and its role as an adhesin. The cell-free extracts from 113, 339, 2663-R3, 2681, PB01, 1934 P. brasiliensis isolates, also showed the expression of 54 kDa protein, and it was more evident in 113 and 339 isolates. Our experiments... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

As purinas extracelulares ATP e adenosina têm sido extensivamente estudadas em diferentes modelos e tipos celulares na modulação de várias respostas fisiológicas e patológicas. No entanto, a inosina extracelular, produto da degradação da adenosina pela Adenosina Deaminase (ADA), foi considerada por muito tempo um simples metabólito inativo. Recentemente, diversos trabalho têm demonstrado que este nucleosídeo possui importante papel na regulação de inúmeros processos. As células de Sertóli são as células somáticas dos túbulos seminíferos, e possuem fundamental importância na espermatogênese. Estas células, expressam diferentes purinoreceptores, estando estes envolvidos na regulação de diversas funções destas células relacionadas ao controle do desenvolvimento das células germinativas. No testículo, o TNF-α é produzido pelas espermátides redondas e pelos macrófagos ativados presentes no espaço intersticial. As células de Sertóli expressam os dois receptores descritos para TNF-α, TNF-RI (p55) e TNF-RII (p75), e diversos trabalhos tem descrito a modulação de diferentes funções destas células por esta citocina, incluindo a modulação da produção de NO e da fosforilação das MAPKs. Recentemente, foi descrita a modulação purinérgica da sinalização por TNF-α, bem como, a atividade ATPásica do receptor TNF-R1. Assim, nesta dissertação, foi estudado o efeito do TNF-α nos níveis das purinas extracelulares, além da possível participação purinérgica na sinalização desta citocina, em células de Sertóli em cultura. O tratamento destas células com TNF-α leva a um rápido aumento (5minutos) da concentração extracelular da inosina, que se prolonga até seis horas de incubação, sem alterar a concentração dos demais nucleotídeos e seus metabólitos. A inosina modula a produção de NO e a fosforilação das MAPKs ERK½ e p38 em células de Sertóli em cultura, aparentemente, através de diferentes mecanismos, sendo o primeiro efeito independente do receptor para adenosina A1 e o segundo efeito dependente da ativação deste receptor. Além disso, a inosina extracelular está envolvida na modulação da produção de NO e da fosforilação da MAPK ERK½ em células de Sertóli em cultura pelo TNF-α. A inibição do acúmulo de inosina estimulado pelo TNF-α através da incubação com um inibidor da adenosina deaminase cancela o aumento da produção de NO estimulada por esta citocina. Além disso, o bloqueio do receptor para adenosina A1 por antagonistas específicos impede o aumento na fosforilação da ERK½ estimulada por esta citocina. Assim, nesta dissertação, é descrito um papel intermediário da inosina extracelular na sinalização do TNF-α em células de Sertóli em cultura.

Resumo não disponível

Submitted by Natalia de Souza Gonçalves (natalia.goncalves@ufpe.br) on 2015-05-25T14:04:38Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) DISSERTAÇÃO MESTRADO NEUROPSIQUIATRIA _ RENATA VIRGÍNIA CAVA.pdf: 2499221 bytes, checksum: 893550e43aa42375b333efe85a2ed93c (MD5) / Made available in DSpace on 2015-05-25T14:04:38Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) DISSERTAÇÃO MESTRADO NEUROPSIQUIATRIA _ RENATA VIRGÍNIA CAVA.pdf: 2499221 bytes, checksum: 893550e43aa42375b333efe85a2ed93c (MD5) Previous issue date: 2015-02-25 / FACEPE / Os astrócitos desenvolvem atividades essenciais para a sobrevivência e diferenciação dos neurônios. Uma dessas funções é produzir e secretar glicoproteínas que vão compor a matriz extracelular (MEC) e as redes perineuronais (PNNs), as quais têm papel fundamental no crescimento e ramificação dendrítica neuronais durante o desenvolvimento do sistema nervoso. Dados recentes do nosso laboratório demonstram que parâmetros morfo-funcionais dos astrócitos do córtex cerebral de ratos neonatos são alterados por um modelo de desnutrição materna multifatorial induzida pela dieta básica regional (DBR). Neste contexto, o principal objetivo deste trabalho foi testar a hipótese de que este tipo de desnutrição é capaz de alterar a expressão de moléculas da MEC em culturas primárias de astrócitos corticais, bem como o crescimento neurítico e a distribuição das PNNs, respectivamente, em co-culturas e culturas mistas de neurônios e células da glia. Ratas adultas receberam a DBR desde 30 dias antes do acasalamento até o final da gestação, enquanto ratas do grupo controle foram alimentadas com dieta comercial balanceada. A prole de ambos os grupos foi utilizada até o terceiro dia pós-natal para obtenção das culturas astrocitárias e mistas. Para o co-cultivo dos neurônios sobre astrócitos, foram utilizados embriões no 16º dia de gestação. As culturas de astrócitos e co-culturas foram mantidas em meio DMEM-F12 com 10% de soro fetal bovino e a cultura mista foi mantida em uma mistura composta por 50% de DMEM-F12 + 10% de soro fetal bovino e 50% de meio Neurobasal + 1% de soro B27. A análise quantitativa da expressão de fibronectina, importante componente da MEC, foi obtida por western blotting. O crescimento e complexidade das ramificações neuríticas, bem como indicadores moleculares de proliferação de astrócitos foram avaliados por imunocitoquímica para β- tubulina 3 e Ki67, respectivamente. A distribuição morfológica das PNNs foi avaliada através de imunocitoquímica para as lectinas Wisteria floribunda e Vicia villosa, bem como para o proteoglicano sulfato de condroitina-4. Os resultados mostraram que a desnutrição não modificou os níveis proteicos da fibronectina nas culturas de astrócitos mantidos in vitro por 20, 30 e 40 dias. No entanto, reduziu a presença das PNNs e do proteoglicano sulfato de condroitina-4 nas culturas mistas. A complexidade da arborização dos neurônios do grupo desnutrido ou normonutrido foi modificada quando os mesmos foram co-cultivados sobre astrócitos de neonatos com diferente condição nutricional. Porém, respostas adaptativas dos neurônios de animais desnutridos foram observadas quando os mesmos foram cultivados sobre astrócitos de grupo similar. Esses dados sugerem que alterações na reatividade fenotípica de neurônios e astrócitos de neonatos, induzidas pela desnutrição materna, envolvem modificações na expressão de componentes da MEC, principalmente de proteoglicanos e PNNs.

Orientador: Marcelo Rocha Marques / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-19T22:02:59Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Pessoa_JulianaIsabelitaCyrino_M.pdf: 1330572 bytes, checksum: 9bb6bbc1a1159fcdb5025fd37c60de5f (MD5) Previous issue date: 2012 / Resumo: Gelatinases são endopeptidases zinco-dependentes que formam uma das classes das metaloproteinases da matriz (MMPs). O objetivo deste estudo foi localizar, em dentina saudável de molares de ratos, onde há atividade de gelatinases por meio da técnica de zimografia in situ. Para tanto, 10 ratos Wistar com 8 semanas de idade foram sacrificados, suas hemimandíbulas foram removidas, fixadas em paraformaldeído, lavadas em PBS+glicerol e descalcificadas em EDTA+glicerol. E, seguida as peças foram lavadas em PBS+glicerol+sucrose e incluídas em Paraplast. Cortes longitudinais da região de molares foram incubados com Dq Gelatin (Invitrogen) diluído em tampão Tris/HCl/CaCl2. Com os controles, cortes foram incubados com Dq Gelatin (Invitrogen)+inibidor de MMPs ou apenas com tampão Tris/HCl/CaCl2. Após a incubação foi possível observar, por meio de microscopia de fluorescência confocal, atividade gelatinolítica em praticamente toda a dentina, inclusive nos prolongamentos dos odontoblastos. Próximo ao limite amelo-dentinário e também na pré-dentina, observou-se maior atividade gelatinolítica em relação a toda dentina analisada. Pode-se concluir que é possível detectar atividade de gelatinases em dentina de molares de ratos por meio da técnica de zimografia in situ e que tal atividade varia em diferentes regiões da dentina. Portanto, zimografia in situ pode ser útil na investigação do papel das gelatinases de dentina em eventos como :o processo de desmineralização-remineralização da dentina, a cárie dentária e a degradação da camada híbrida, formada em procedimentos restauradores adesivos / Abstract: Objective: The purpose of this study was to evaluate the gelatinases activity in decalcified rat molars crowns by in situ zymography. Methods: Five male Wistar rats were killed and their hemimandibles were fixed in paraformaldehyde, decalcified in EDTA+Glycerol solution and embedded in paraffin. Section from the region of molars teeth were incubated with DQ gelatin (Invitrogen) and observed under confocal microscopy. Results: By using in situ zymography was possible detected gelatinolytc activity in whole crown dentin. High activity of the gelatinases was observed in the odontoblastic process, dentin-enamel junction (DEJ) and predentin. Conclusions: It was possible to evidence gelatinases activity in fixed and decalcified dentin from rat molars, and it activity was not uniformly distributed over different compartments of the dentin. In situ zymography could be a tool in studies investigating the role of the gelatinases in the dentin development and degradation / Mestrado / Histologia e Embriologia / Mestre em Biologia Buco-Dental

Orientadores: Alexandre Leite Rodrigues de Oliveira, Edson Rosa Pimentel / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-03T20:54:28Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Pierucci_Amauri_M.pdf: 5128505 bytes, checksum: a07838aa6b35835acc1f67167d46c9dd (MD5) Previous issue date: 2004 / Resumo: A regeneração nervosa periférica é um fenômeno complexo que envolve diferentes tipos celulares, os quais auxiliam na regeneração axonal e na reorganização dos componentes da matriz extracelular do microambiente do nervo. Nesse, estão presentes as células de Schwann, fibroblastos, macrófagos, fibras de colágeno, laminina, fibronectina e proteoglicanos. Entre os componentes não neurais, as células de Schwann são fundamentais para o processo regenerativo, pois fagocitam os fragmentos de axônios e de bainha de mielina em degeneração no coto distal, guiam os axônios em regeneração através das bandas de Büngner e secretam fatores neurotróficos para a sobrevivência e crescimento neuronal. Entre os componentes da matriz extracelular, os proteoglicanos apresentam a propriedade de reter substâncias hidrossolúveis, interagir com outros componentes da matriz extracelular, e funcionar como receptores para fatores de crescimento. Tendo-se em vista as características estruturais dos proteoglicanos no que diz respeito à sua capacidade de retenção de moléculas hidrossolúveis, bem como a homologia de seus componentes a fatores de crescimento, o presente trabalho teve como objetivo investigar os efeitos do agrecan sobre a regeneração axonal in vivo, empregando-se a técnica da tubulização do nervo ciático. Adicionalmente, seus efeitos sobre o comportamento das células de Schwann serão investigados in vitro, através da cultura de explantes de nervo ciático. O nervo ciático esquerdo dos camundongos C57BL/6J (n=20) foi transeccionado e os cotos proximal e distal foram suturados no interior de um tubo de polietileno, permanecendo uma distância de 4mm entre os cotos. No grupo controle o tubo foi implantado e deixado vazio enquanto que no grupo experimental, esse foi preenchido com agrecam. Após 5 semanas, os animais foram sacrificados e o nervo regenerado foi processado para imunoístoquimica e microscopia eletrônica. Em cultura, nervos ciáticos de ratos Wistar (n=10) foram utilizados para estudo da migração e viabilidade celular. Os resultados in vitro mostraram que a migração e viabilidade celular foram maiores quando utilizada menor concentração de soro fetal bovino (20%) associada ao acréscimo do agrecam. In vivo, houve um aumento do número de fibras quando utilizado o agrecam (2343±370,31) em relação ao grupo controle (1522±424,58). Embora o diâmetro axonal, o diâmetro da fibra e a espessura da bainha de mielina tenham sido menores quando utilizado agrecam (3,01µm±0,10; 3,86µm±1,22; 0,36µm±0,10) em relação ao grupo controle (3,40µm±1,37; 4,53µm±1,56; 0,44µm±011), a razão ¿g¿ indicou que o padrão de mielinização foi proporcional ao diâmetro axonal no grupo com agrecam (0,76±0,06) e no controle (0,74±0,08). Os resultados desse estudo reforçam a hipótese que o agrecam, devido as propriedades biológicas e capacidade trófica, contribui para o processo da regeneração axonal e tem efeitos positivos sobre as células de Schwann / Abstract: Peripheral nerve regeneration is an intricate phenomenon that is dependent on the glial cells, which produce neurotrophic factors and reorganize the environment at the distal stump. It is well known that extracellular matrix components may have positive effects on both glial and neuronal survival and behavior. Among such molecules, collagen, laminin and fibronectin were proven to benefit the process both in vivo and in vitro. More recently, studies have shown that glycosaminoglycans also have, under certain conditions, a positive influence on the peripheral nerve regeneration process. In the present study we evaluated the effects of aggrecan, a high molecular weight proteoglycan, on non neuronal cell migration in vitro. Also, we investigated the properties of such a proteoglycan on axonal regeneration after sciatic nerve transection and tubulization. In vitro, non neuronal cell migration and viability were accessed for up to 2 weeks of culturing. In vivo, five weeks after tubulization, the number of axons, axonal and fiber diameter and myelin thickness were obtained from regenerated fibers found at the tube mid point. In culture, with lower fetal calf serum concentration (20%), aggrecan increased the glial cell number and viability. In vivo, the number of regenerated fibers was statistically greater when aggrecan was used (2343±370.31) compared to the empty tube (1522±424.58). Although the axonal diameter, fiber diameter and myelin thickness in the aggrecan treated group (3.01µm±0.10; 3.86µm±1.22; 0.36µm±0.10; respectively) were smaller than in the empty tube (3.40µm±1.37; 4.53µm±1.56; 0.44µm±0.11; respectively), the ¿g¿ ratio indicated a pattern of myelination that was proportional to the axonal diameter in both groups (0.76±0.06 - aggrecan; 0.74±0.08 - empty). The results of this study reinforce the hypothesis that aggrecan, due to its biological properties and trophic capabilities, contributes to the axonal regeneration process and has particularly positive effects on the Schwann cells / Mestrado / Anatomia / Mestre em Biologia Celular e Estrutural

Orientador: Edson Rosa Pimentel, Benedicto de Campos Vidal / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-03T22:27:23Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Mazon_Josete_M.pdf: 1402219 bytes, checksum: 4312afc51c95b035152e6363715bc138 (MD5) Previous issue date: 2004 / Resumo: As cúspides da valva aórtica são constituídas principalmente de água (cerca de 80%), mas também contém proteínas colagênicas e não colagênicas, elastina, pequenos e grandes proteoglicanos, responsáveis por suas propriedades mecânicas. Estruturalmente são formadas por três camadas distintas, a fibrosa, a esponjosa e a ventricular. As camadas fibrosa e ventricular mantém a integridade estrutural da valva, enquanto a esponjosa tem papel importante na absorção de forças mecânicas de tensão e compressão. As valvas aórticas de porco têm sido utilizadas para a produção de biopróteses, mas sua durabilidade tem sido prejudicada especialmente devido à calcificação, o que justifica a necessidade de um melhor conhecimento sobre seus aspectos organizacionais e composicionais. A montagem total dos folhetos valvares corados com azul de toluidina, mostrou uma estrutura fortemente corada, com componentes fibrosos e material metacromático acompanhando estes componentes. Estes componentes fibrosos emergiam das regiões de inserção da valva na parede da artéria, de ambos os lados do folheto e exibiram um trajeto preferencialmente longitudinal, seguindo o eixo mais longo do folheto. A análise em microscopia de polarização mostrou brilho intenso exibido pelas fibras e fibrilas evidenciando a distribuição altamente orientada dessas estruturas. A metacromasia foi intensa ao longo dos feixes de colágeno e em várias regiões distribuídas de maneira não uniforme no folheto. Análise de cortes histológicos mostrou as três camadas bem distintas do folheto, sendo duas fibrosas e uma intermediária com características de tecido conjuntivo frouxo. Os folhetos apresentaram grande quantidade de células com diferentes morfologias e distribuição, enquanto que, nas faces voltadas para a artéria aorta e para o ventrículo, foi encontrada uma camada endotelial. Na camada fibrosa as células são alongadas, denominadas de fibroblastos, e apareceram dispostas ao longo dos feixes de colágeno. A camada ventricular apresentou células arredondadas, similares aos condrócitos. Na camada esponjosa foram encontrados os dois tipos celulares. O estudo bioquímico mostrou a presença de proteínas não colagênicas que apresentaram massa molecular aparente entre 18 - 170kDa. Uma banda polidispersa em torno de 70kDa e outra na faixa de 80 a 100kDa possivelmente correspondam aos pequenos proteoglicanos fibromodulim e decorim, além da presença de proteoglicano de alto peso molecular. Condroitim sulfato e dermatam sulfato são os principais glicosaminoglicanos presentes nesse folheto. Analizando os dados morfológicos e bioquímicos, podemos concluir que: 1) Pequenos e grandes proteoglicanos estão presentes na matriz extracelular da valva aórtica. 2) Os proteoglicanos estão preferencialmente distribuídos no folheto em certas regiões, devido a presença de intensas forças compressivas nestas regiões. 3) Feixes de colágeno estão distribuídos ao longo do maior eixo do folheto que se fundem formando uma estrutura entrelaçada para fornecer a sustentação da valva durante a sístole e a diástole / Abstract: The cuspids of the aortic valve are constituted mainly by water (approx. 80%), but also by collagen and noncollagenous proteins, elastin and proteoglycans, which are responsible for their mechanical properties. Structurally are formed by fibrous, spongeous, and ventricular layers. Fibrous and ventricular layers maintain the structural integrity of the valve, while the spongeous layer has an important role in absorption of tension and compression mechanical forces. The porcine aortic valves have been utilized for the production of bioprostheses, however its durability is reduced especially due to calcification process. Structural analyses of whole mounts of the valvar leaflets stained with toluidine blue showed strongly stained fibrous components and metachromatic material following the fibrilar components. The fibrous components emerged from the insertion regions of the valve at the aorta wall, from both sides of the leaflet and have exhibited a mainly longitudinal trajectory, according the main axis of the leaflet. Analysis in polarization microscopy showed an intense bright of the fibers and fibrils demonstrating the high molecular order of the collagen molecules in the fibrous components. Along the main axis of the collagen bundles intense metachromasy was observed. Several metachromatic regions were also found in a non-uniform distribution. Analysis of histological sections stained with toluidine blue showed the three well distinct layers of the leaflet. A great amount of cells was observed in the endothelial layer of the aortic and ventricular faces of the leaflet. Cells with different morphologies and distributions were also observed in the different layers. At the fibrous layer elongated cells, named fibroblasts, were found along the collagen bundles. The ventricular layer showed round cells, similar to condhrocytes. At the spongeous layer both types of cells were fond. The biochemical study consisted of extracting the extracellular matrix components using 4 M guanidine-chloride, fractionation in DEAE-Sephacel column and analysis in SDS-PAGE. The collagenic proteins found at the leaflets showed Mr values between 18- 170 kDa. A polydisperse band with 70 kDa and another between 80 and 100 kDa were found and possibly are the small proteoglycans fibromodulin and decorin. The analysis of glycosaminoglycans in agarose-propilenodiamino gel, after digestion with papain, revealed the presence of chondroitin sulfate and dermatan sulfate. The analysis in agarosepolyacrylamide gel of the ultracentrifugation D1 fraction revealed a polydisperse and metachromatic band after toluidine blue staining, indicating the presence of proteoglycans of high molecular weight. Analyzing the biochemical and morphological data, may be concluded that: 1) Small and large proteoglycans are present in the extracellular matrix of the aortic valve. 2) Proteoglycans are distributed preferentially in certain regions of the leaflet probably due a more intense presence of compressive forces in those regions. 3) Collagen bundles are distributed along the main axis of the leaflet but are also found forming an interwoven structure to provide sustentation of the valve during systole and diastole / Mestrado / Anatomia / Mestre em Biologia Celular e Estrutural

Orientador: Jose Pedrazzoli Junior / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-07-24T21:48:13Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Brandao_ClodomirGarcia_M.pdf: 4209082 bytes, checksum: 8e96be5381245e8bb8c9f6f4f60c8fa6 (MD5) Previous issue date: 1999 / Resumo: O desenvolvimento de fibrose é um ponto fundamental na formação da cirrose hepática e sua compreensão é essencial para o entendimento da fisiopatologia da cirrose e da conseqüente hipertensão portal. Assim, o desenvolvimento de um modelo experimental adequado de fibrose hepática é útil para o entendimento das enfermidades que podem evoluir para a cirrose hepática. A colchicina tem sido usada em pacientes com cirrose hepática mas efeitos não são totalmente conhecidos. Este estudo teve como objetivo desenvolvimento da fibrose hepática pela administração de tetracloreto de carbono (CCI4) por via intragástrica e o de avaliar o efeito da administração de colchicina neste modelo. Para este estudo foram utilizados 37 coelhos machos da raça New Zealand .(2,73 :t 0,05 Kg), os quais receberam água e ração ad libitum ao longo go período de experimentação. Estes animais foram divididos em 5 grupos. Catorze dias após o começo do tratamento com fenobarbita,1 os animais começaram a receber semanalmente o CCI4 (dose inicial de 20 mg diluído em-óleo I de milho a 10 %) por via intragástrica. A dose foi ajustada de acordo com controles bioquímicos indicativos de lesão hepática (aspartato aminotransferase [AST] e alanina aminotransferase [AL T], visando-se manter tais níveis plasmáticos entre 400 e 800 UII). Amostras de sangue dos animais foram coletadas 24 h após cada administração de CCI4, para dosagem de aminotransferases (AST e AL T), bilirrubinas (total e indireta), gama glutamil transpeptidase (y-GT), proteínas e albumina. Além dos controles bioquímicos, os animais foram pesados semanalmente. Para avaliar os efeitos do tratamento com fenobarbital e CCI4 sobre o fluxo sangüíneo hepático, foram determinadas as velocidades de depuração do verde de indocianina (ICG) antes e após o final do tratamento (aproximadamente 8 mg/kg em solução salina). A colchicina foi administrada diariamente em 2 grupos de animais (a partir da 11 a semana de tratamento com CCI4 e em outro, desde o início do tratamento com CCI4). Para este trabalho foram feitos 2 grupos controles, onde um dos grupos recebeu doses diárias de fenobarbital durante todo o experimento (controle fenobarbital) e o outro grupo apenas foi tratado com ração e água ad libitum. ' Ao final do período de estudo os animais foram sedados e sacrificados com' uma injeção de ar i. v. e foram retirados 3 fragmentos de cada lobo hepático parR análise histológica. Um número maior de animais que não recebeu colchicina desenvolveu cirrose, comparado com o grupo que recebeu a droga (8/10 vs. 0/10, p<, 0.01), tendo a fibrose sido menor nos animais tratados com colchicina (p<O. 01). Coelhos com 16 - semanas de tratamento com colchicina tiver~m, no final do experimento, ICG, y-GT, bilirrubina e ganho de peso semelhantes aos dos grupos cc 1trole, ao contrário dos animais que não receberam. A baixa letalidade e o elevado número de animais que desenvolveram cirrose hepática (8/10) leva a concluir que este tipo de modelo é eficaz. o peso corporal dos animais não serve como parâmetro para o ajuste da dose de tetracloreto de carbono, pois não houve alteração do mesmo durante o tratamento com CCI4. - Para o controle do desenvolvimento da lesão hepática, apenas a determinação das aminotransferases é suficiente / Abstract: The fibroses development is a fundamental point in the formation of the hepatic cirrhosis, and its comprehension is essential for the understandíng of ~the physiopatology of the cirrhosis and the consequent portal hypertension. The development of an adapted experimental model of hepatic fibroses is useful for the study of the illnesses that may develop the hepatic cirrhosis. The colchicine has been used in patients wíth hepaticcirrhosis, but its effects are not totally known. The aim of this study was to evaluate the colchicine effects in the hepatic cirrhosis chemically deveioped and to evaiuate if the Proctr Chatamra model is suitable to apply in rabbits. Thirty seven male New Zealand rabbtís were used (2.73 :t 0.05 Kg), Group A (n= 10), Group B (n= 10), Group C (n=10) and 7 controls animais. Group A was gíven only carbon tetrachroride (CCI4) and phenobarbitone (FB), Group B received the same treatment as Group A with the addition of colchicine (100 Ilg/daily/five days a week 16 weeks) and Group C received the as Group B ,but had the colchicine treatment for a longer period of time. They were given phenrr¿A dissolved in drinking water (approximately 50 mg/day/animal) and a week j,,-. treatment (10% solution in com oil; 20 mg/animallw,eek) concomítant with PB.The CCI4 dose was adjusted 'weekly in órder to obtain serun AST and AL T levels between 400 U/I and 800 U/I. The indocianine green (lCG) pharmacokinetics were determined after injecting the ICG (8mg/Kg, i.v.) and collecting plasma samples at suitable time points for the ICG quantifcation. At the end of the experiment, animais were sacrificed, and 3 fragments of each liver sent to histology examination. A higher proportion of animais which did not receive colchicine developed cirrhosis compared to those which received the drug (8/10 vs. 0/10, p.0.01), the líver flbrosis was also reduced (p.0.01). Rabbits that had been through the 16 week treatment had at the end of experiment, ICG, y-GT, bilirrubin and weight gain similar to controls. The serum enzymes and the elimination rate of ICG (before and after 16 weeks of treatment) in the CCI4 group were: AL T: 62.6 :t 170.87 UII; AST: 39,40 :t 0.3661 mllmin/kg, respectively. The low mortality and the quantity of the animais wich developed liver cirrhosis conduce to conclude with that model is suitable. The body wight is not suitable to regulate the CCI4 doses. Only the aminotransferases measurement is necessary for control of the liver development. The colchicine reduces the development of liver fibrosis and cirrhosis in a . experimental model of chronic toxic liver damage, supporting its potential therapy of liver díseases / Mestrado / Mestre em Farmacologia